CN101278912A - 汉防己甲素纳米乳注射剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种汉防己甲素纳米乳注射剂及其制备方法，由汉防己甲素、表面活性剂、助表面活性剂、油相和水相组成。本发明纳米乳制备方法简单，其外观透明，粒径在10－100nm；本发明纳米乳稳定性好；能显著提高汉防己甲素的溶解度，从而提高药物的生物利用度；并且改变药物的体内过程，增加对肝脏的靶向性，降低毒副作用，提高疗效。

Description

汉防己甲素纳米乳注射剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种汉防己甲素注射液及其制备方法，更具体地说是一种汉防己甲素纳米乳注射剂及其制备方法。

背景技术

纳米乳是一种透明、热力学稳定且各向同性的油水混合系统，一般由油相，水相、表面活性剂与助表面活性剂组成。纳米乳可自发形成，制备工艺简单，其分散相质点多为球形，大小均匀，粒径通常在10～100nm。作为新型给药系统它具有稳定，缓释，可提高药物生物利用度及发挥靶向等作用。静脉注射给药后，被体内网状内皮系统吞噬而被动进入肝脾，达到肝靶向作用。

汉防己甲素(tetrandrine，TET)，又称粉防己碱，是从防己科千金藤属植物粉防己的块根中提取的双苄基异喹啉类生物碱。实验研究证明，TET有抗肝纤维化，降低门静脉高压，防治肿瘤等作用，临床可用于慢性肝炎、肝硬化的治疗。但TET不溶于水，且安全性较低，治疗窗窄，有效治疗量约为中毒致死量的66％。现有普通片剂和其盐的注射液，规格分别为20mg/片和30mg/支，2m1/支。普通制剂生物利用度不高，且无组织靶向性，既影响了该药的治疗效果，又容易产生毒副作用。

中国专利CN1813737A公开了一种汉防己甲素固体脂质纳米粒及其制备方法。该专利为提高汉防己甲素生物利用度、降低毒副作用及提高肝靶向性，采用脂质材料、乳化，剂制成汉防己甲素固体脂质纳米粒。但固体脂质纳米粒载药能力有限，而且脂质材料往往具有多晶型，影响药物释放效果。

中国专利CN1813736A公开了一种汉防己甲素注射乳剂及其制备方法。该专利为提高汉防己甲素生物利用度、降低毒副作用及延缓药效，采用高压乳匀方法制备乳剂。该法采用的配方和制法制得的乳剂一般粒径超过100mn，不是透明溶液，稳定性不理想，进而影响药物释放效果。

发明内容

本发明是为避免上述现有技术所存在的不足之处，提供一种外观透明、粒径在10～100mm的汉防己甲素纳米乳注射剂及其制备方法，以提高汉防己甲素的溶解度，进而提高其生物利用度，增加肝靶向性，降低用药剂量和毒副作用，提高疗效和安全性。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：

本发明的汉防己甲素纳米乳注射剂，其特征在于按重量百分含量计，其构成为：

    汉防己甲素        0.5％-2.0％

    表面活性剂        10.0％-30.0％

    助表面活性剂      0.0％-10.0％

    油                3.0％-15.0％

    等张剂            1.5％-3.0％

    稳定剂            0.5％-2.5％

    水                50.％-75.0％。

所述的表面活性剂是吐温类、泊洛沙姆188、聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯、聚氧乙烯蓖麻油中一种或一种以上，优选为吐温80和/或聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯；

所述的助表面活性剂是司盘80、卵磷脂、无水乙醇、甘油、聚乙二醇400、丙二醇中的一种或一种以上；优选为聚乙二醇400和/或丙二醇；

所述的油是中链甘油三酯、大豆油、橄榄油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E中的一种或一种以上；优选为大豆油和/或油酸乙酯；

所述的等张剂是甘油；

所述的稳定剂是油酸；

所述的水是注射用水。

本发明的汉防己甲素纳米乳注射剂，其特征在于所述的纳米乳的粒径在10～100nm之间。

本发明的汉防己甲素纳米乳注射剂的制备方法，其特征是在常温常压下按如下步骤操作：

a、按所需用量取汉防己甲素、表面活性剂、助表面活性剂、油、等张剂、稳定剂和注射用水，备用；

b、首先将汉防己甲素溶于表面活性剂和助表面活性剂的混合液中，再加入油、等张剂和稳定剂，混匀为混合料备用；

c、将步骤b所得的混合料搅拌，同时滴加水直至体系形成澄明的液体，即得粒径为10～100nm的汉防己甲素纳米乳。

本发明的汉防己甲素纳米乳注射剂的制备方法，其特征是在常温常压下按如下步骤操作：

a、按所需用量取汉防己甲素、表面活性剂、助表面活性剂、油、等张剂、稳定剂和注射用水，备用；

b、将表面活性剂、助表面活性剂、油、等张剂和稳定剂混匀，搅拌，同时滴加水直至体系形成澄明的液体；

c、加入汉防己甲素，搅拌溶解，即得粒径为10～100nm的汉防己甲素纳米乳。

一、稳定性试验：

1、高速离心对汉防己甲素纳米乳稳定性的影响

将纳米乳放入高速离心机中，以10000r/min速度离心20min，观察，未见分层、沉淀、浑浊等现象，纳米乳溶液均保持澄清透明。

2、光照加速实验

将汉防己甲素纳米乳注射剂，置于光照4000lx(普通日光下，室温)下留样10天，分别于放置5，10d时取样，测定纳米乳性质参数，结果均未发现分层、沉淀、浑浊等现象，纳米乳溶液均保持澄清透明。纳米乳的电导率、粘度、载药量无明显变化。

3、温度对汉防己甲素纳米乳稳定性的影响

制备纳米乳分别置于4℃、25℃、37℃条件下留样3个月观察，分别在0，1，2，3月时对样品进行外观形态观察、电导率、粘度及载药量等一系列纳米乳性质测定，均未发现分层、沉淀、浑浊等现象，纳米乳溶液均保持澄清透明。纳米乳的电导率、粘度、载药量无明显变化。

二、汉防己甲素纳米乳及其注射液在小鼠体内的分布

取昆明种小鼠，雌雄各半，100只，体重25-30g，随机分为20组，每组5只，给药前12h禁食不禁水，其中10组尾静脉注射汉防己甲素纳米乳(含量为10mg/ml，按10mg/kg小鼠体重剂量给药)，作为实验组；另外10组注射汉防己甲素注射液(给药剂量相同)，作为对照组。实验组和对照组于给药后5、15、30min、1、2、5、12、24、36、48h分别摘眼球取血，取血后立即处死动物，迅速解剖取出心、肝、脾、肺、肾等组织器官。各器官分别称重，处理生物样品后采用高效液相色谱法测定各样品的汉防己甲素含量，计算各脏器中药物含量。结果见表1、2。

表1 注射液组小鼠血液与各组织中药物浓度(n＝5)

表2 纳米乳组血液与各组织中药物浓度(n＝5)

由表中数据可以看出，纳米乳延缓了药物在血浆中的释放，当给药12h后，注射液组中汉防己甲素仅有0.31μg/ml，而纳米乳组中仍达到1μg/ml以上；而且注射液在5min-10min出现明显突释效应，而纳米乳在血浆中的释放比注射液组呈现更平滑的趋势。在肝脏中，纳米乳组药物浓度明显高于注射液组，脾脏的药物浓度也有所升高，这可能与纳米乳粒径一般为10-100nm，粒子容易被网状内皮系统(RES)吞噬有关。而肾脏中纳米乳组的药物浓度相比注射液组有较为显著下降，提示纳米乳具有降低汉防己甲素在肾脏蓄积的趋势。

为了进一步分析小鼠体内药动学参数，应用DAS2.0药动学程序对小鼠血液的体内药时数据进行处理，以静脉给药模型进行拟和，具体参数见表3。

表3 汉防己甲素在小鼠血浆中的药动学参数(n＝5.x±s)

^*P＜0.05与纳米乳组相比。

从药动学参数来看，纳米乳组血浆AUC大于注射液组，且纳米乳组血浆滞留时间明显延长，MRT分别为95h和42h。显示纳米乳可以延缓药物释放。

为进一步分析评价纳米乳的靶向性，本研究计算了靶向指数TI，公式如下：TI＝(AUC_0-∞)_纳米乳/(AUC_0-∞)_注射液，应用DAS2.0药动学程序对小鼠各脏器的体内药时数据进行处理，以静脉给药模型进行拟合，得纳米乳组与注射液组各脏器AUC，按照靶向指数公式计算，具体结果见表4。

表4 纳米乳组与注射液组靶向参数比较(n＝5.x±s)

从表中可知，静脉注射纳米乳与普通注射剂相比在主要脏器组织的分布具明显的选择性；汉防己甲素纳米乳肝脏的靶向指数达到2.934，表明其具有一定的肝脏趋向性，而在其他脏器中心脏、肾脏中TI分别为0.493、0.398。表明纳米乳组较注射液有降低汉防己甲素在肾及心脏中分布的趋势。

结果表明：本发明制备的汉防己甲素纳米乳性质稳定，具有缓释性和肝脏靶向性，能提高药物的生物利用度，降低毒副作用。

本发明的给药途径主要采用肌肉注射或静脉注射方式。本发明对镇痛、肝纤维化、肝硬化、肝癌等治疗有积极作用。

与已有技术相比，本发明的有益效果体现在：

1、本发明通过增大表面活性剂的用量至处方量的10％以上或使用助表面活性剂，轻微搅拌即可制成粒径在10～100nm的纳米乳剂，大大增加了汉防己甲素的分散性，提高了药物生物利用度低，并具有缓释性和肝靶向性。

2、本发明制得的汉防己甲素纳米乳为油/水纳米乳，稀释实验表明，其可以进一步加入注射用水、生理盐水、葡萄糖溶液等稀释，形成澄清透明的纳米乳。

3、本发明具有纳米乳热力学稳定的共性，可热压灭菌或滤过除菌。

4、本发明制备方法简单，搅拌均匀即可实现乳化，便于工业化生产。

附图说明

图1为本发明方法所制备的汉防己甲素纳米乳的粒径分布图。

图2为本发明方法所制备的汉防己甲素纳米乳透射电镜图。

以下通过具体实施方式，对本发明作进一步说明。

具体实施方式

实施例1：

a、取汉防己甲素 0.6g、吐温-80 15.5g、聚乙二醇400 7.8g、油酸乙酯 5g、甘油 1.5g、油酸 0.5g和注射用水 70g，备用；

b、将汉防己甲素溶于吐温-80和聚乙二醇400的混合液中，加入油酸乙酯、甘油及油酸，混匀，备用；

c、在常温常压下搅拌，同时缓慢滴加所述量的注射用水，直至体系形成澄明的液体，即得外观透明的汉防己甲素纳米乳。

d、将汉防己甲素纳米乳进行灌装、灭菌，制得汉防己甲素纳米乳注射剂。

经检测，该汉防己甲素纳米乳的平均粒径为16.8nm。

实施例2：

a、取汉防己甲素1.2g、聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯15.0g、丙二醇8.0g、注射用大豆油10.0g、甘油2.0g、油酸2.0g和注射用水62g，备用；

b、将汉防己甲素溶于聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯和丙二醇的混合液中，加入注射用大豆油、甘油及油酸，混匀，备用；

c、在常温常压下搅拌，同时缓慢滴加所述量的注射用水，直至体系形成澄明的液体，即得粒径在10～100nm，外观透明的汉防己甲素纳米乳。

d、将汉防己甲素纳米乳进行灌装、灭菌，制得汉防己甲素纳米乳注射剂。

经检测，该汉防己甲素纳米乳的平均粒径为21.5nm。

实施例3：

a、取汉防己甲素1.8g、聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯19.5g、丙二醇7.0g、大豆油15.0g、甘油1.2g、油酸2.5g和注射用水50.5g，备用；

b、将聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯、丙二醇、油酸乙酯、甘油、油酸混匀，在常温常压下搅拌，同时缓慢滴加注射用水直至体系形成澄明的液体；

c、加入汉防己甲素，搅拌溶解，即得粒径在10～100nm，外观透明的汉防己甲素纳米乳。

d、将汉防己甲素纳米乳进行灌装、灭菌，制得汉防己甲素纳米乳注射剂。

经检测，该汉防己甲素纳米乳的平均粒径为18.3nm。

实施例4：

a、取汉防己甲素1.2g、吐温-8022.0g、聚乙二醇4005.0g、油酸乙酯8.0g、甘油2.3g、油酸2.5g和注射用水59.0g，备用；

b、将吐温-80、聚乙二醇400、油酸乙酯、甘油、油酸混匀，在常温常压下搅拌，同时缓慢滴加注射用水直至体系形成澄明的液体；

c、加入汉防己甲素，搅拌溶解，即得粒径在10～100nm，外观透明的汉防己甲素纳米乳。

d、将汉防己甲素纳米乳进行灌装、灭菌，制得汉防己甲素纳米乳注射剂。

经检测，该汉防己甲素纳米乳的平均粒径为24.0nm。

实施例5：

a、取汉防己甲素 1.0g、吐温-80 29.0g、油酸乙酯 7.5g、甘油 2.5g、油酸 2.5g和注射用水 57.5g，备用；

b、将吐温-80、油酸乙酯、甘油、油酸混匀，在常温常压下搅拌，同时缓慢滴加注射用水直至体系形成澄明的液体；

c、加入汉防己甲素，搅拌溶解，即得粒径在10～100nm，外观透明的汉防己甲素纳米乳。

d、将汉防己甲素纳米乳进行灌装、灭菌，制得汉防己甲素纳米乳注射剂。

经检测，该汉防己甲素纳米乳的平均粒径为32.5nm。

图1为实施例1所制备的汉防己甲素纳米乳粒径图。

图2为实施例1所制备的汉防己甲素纳米乳电镜照片(×50000倍)。

Claims (6)

1、一种汉防己甲素纳米乳注射剂，其特征在于按重量百分含量计，其构成为：

    汉防己甲素          0.5％-2.0％

    表面活性剂          10.0％-30.0％

    助表面活性剂        0.0％-10.0％

    油                  3.0％-15.0％

    等张剂              1.5％-3.0％

    稳定剂              0.5％-2.5％

    水                  50.％-75.0％。

2、根据权利要求1所述的汉防己甲素纳米乳注射剂，其特征在于：

所述表面活性剂是吐温类、泊洛沙姆188、聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯、聚氧乙烯蓖麻油中一种或一种以上；

所述的助表面活性剂是司盘80、卵磷脂、无水乙醇、甘油、聚乙二醇400、丙二醇中的一种或一种以上；

所述的油是中链甘油三酯、大豆油、橄榄油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E中的一种或一种以上；

所述的等张剂是甘油；

所述的稳定剂是油酸；

所述的水是注射用水。

3、根据权利要求2所述的汉防己甲素纳米乳注射剂，其特征在于：

所述表面活性剂为吐温80和/或聚乙二醇-维生素E琥珀酸酯；

所述的助表面活性剂为聚乙二醇400和/或丙二醇；

所述的油为大豆油和/或油酸乙酯。

4、根据权利要求1所述的汉防己甲素纳米乳注射剂，其特征在于所述的纳米乳的粒径在10～100nm之间。

5、一种权利要求1所述汉防己甲素纳米乳注射剂的制备方法，其特征是在常温常压下按如下步骤操作：

a、按所需用量取汉防己甲素、表面活性剂、助表面活性剂、油、等张剂、稳定剂和注射用水，备用；

b、首先将汉防己甲素溶于表面活性剂和助表面活性剂的混合液中，再加入油、等张剂和稳定剂，混匀为混合料备用；

c、将步骤b所得的混合料搅拌，同时滴加水直至体系形成澄明的液体，即得粒径为10～100nm的汉防己甲素纳米乳。

6、一种权利要求1所述汉防己甲素纳米乳注射剂的制备方法，其特征是在常温常压下按如下步骤操作：

a、按所需用量取汉防己甲素、表面活性剂、助表面活性剂、油、等张剂、稳定剂和注射用水，备用；

b、将表面活性剂、助表面活性剂、油、等张剂和稳定剂混匀，搅拌，同时滴加水直至体系形成澄明的液体；

c、加入汉防己甲素，搅拌溶解，即得粒径为10～100nm的汉防己甲素纳米乳。

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