CN107723285A - 一种通用于常规生物样本的总dna提取方法及提取试剂盒 - Google Patents

一种通用于常规生物样本的总dna提取方法及提取试剂盒 Download PDF

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CN107723285A CN201710971682.4A CN201710971682A CN107723285A CN 107723285 A CN107723285 A CN 107723285A CN 201710971682 A CN201710971682 A CN 201710971682A CN 107723285 A CN107723285 A CN 107723285A
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曹素梅
陈晓霞
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Abstract

本发明公开了一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法及提取试剂盒。向经过预处理的生物样本中加入CPS‑Buffer 1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS‑Buffer 2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS‑Buffer 3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS‑Buffer 4将核酸从吸附柱上洗脱下来。本发明对预处理的生物样本进行消化处理，再将细胞消化液经过核酸吸附硅胶柱，经过洗涤、洗脱步骤就可以获得高质量的DNA。所述方法具有样本通用性强、操作简单快捷、可批量样本处理、成本低廉，核酸得率高、纯度高，可直接用于大规模的分子生物学科研及生产的检测。

Description

一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法及提取试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法及提取试剂盒。
背景技术
现有商业DNA提取试剂盒类型多、试剂盒性成熟稳定，知名度高，个别产家还具备临床认证资格，能满足基本下游分子诊断试剂的要求。但是现有的商业DNA提取试剂盒同时也存在着以下缺陷和不足：
（1）现有的商业DNA提取试剂盒多为进口试剂，成本昂贵，只比较适合少数的科研样本分析，对于做大样本量的项目及生产普及应用是不切实际的；
（2）现有的商业DNA提取试剂盒分类过于细化，通用性低，一种DNA提取试剂盒只针对一种样本的DNA提取；
（3）现有的商业DNA提取试剂盒多数为进口试剂盒，采购周期比较长，不利用新项目的开发进度的把控；
（4）现有研究方法对于杂质较多、目标细胞较少及极其不稳定的样本（如粪便样本）不但提取的流程复杂，而且对如粪便类样本取样要求苛刻、样本保存要求高、对耗材和设备要求高、操作流程繁琐而耗时等的缺陷，另外市面上已有一些粪便DNA提取试剂盒不但不能完全解决这些难题，而且最终提取DNA的实际质量并不能达到官方公开的指标。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有商业DNA提取试剂盒通用性低，提取步骤繁琐，成本高等问题，提供一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，所述方法适用于人类常规生物样本如血液（外周血或白细胞）、唾液、鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子、新鲜组织、尿液脱落细胞及粪便脱落细胞等基因组DNA快速抽提，具有样本通用性强、操作简单快捷、可批量样本处理、成本低廉，核酸得率高、纯度高，可直接用于大规模的分子生物学科研及生产的检测。
本发明的目的是提供一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法。
本发明的另一目的是提供一种通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，所述方法为：向经过预处理的生物样本中加入CPS-Buffer 1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS-Buffer 2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS-Buffer 3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS-Buffer 4将核酸从吸附柱上洗脱下来；
其中，所述CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L二硫苏糖醇，1.5～8%TritonX-100，10～50mmol/LTris-HCl，pH 5.5～6.0；
所述CPS-Buffer 2为95～100%乙醇溶液；
所述CPS-Buffer 3为70%～80%乙醇；
所述CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：10～20 mmol/LTris-HCl，1～5 mmol/LEDTA。
本发明通过将预处理的生物样本进行消化处理，再将处理后的细胞消化液经过简单离心过柱的方式将脱落细胞中的核酸富集到核酸吸附硅胶柱上，再经过简单的洗涤、洗脱步骤就可以获得高质量的DNA，且所用的提取试剂成分简单，成本低。
优选地，所述生物样本与CPS-Buffer 1体积比为1：1，或质量体积比为2～4mg：5 µL。
优选地，所述常规生物样本为血液、唾液、鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子、新鲜组织、尿液或粪便。以上所述生物样本的预处理方式如下所示：
血液：取EDTA抗凝剂外周血500µL或非抗凝外周血经低速离心后得到的白细胞液500µL于2mL灭菌离心管中，待用。
唾液：将唾液收集在添加有唾液保存液的唾液收集管中，均匀取500µL于2mL灭菌离心管中，待用。
鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子：将拭子放置于2mL灭菌离心管中，加入700µL保存液，彻底震荡均匀，取500µL样本投入量于2mL灭菌离心管中，待用。
新鲜组织：一般称0.2g彻底研磨或机械粉碎的新鲜组织于2mL灭菌离心管中，待用；所述新鲜组织为术后、活体取样、器官等新鲜组织。
尿液：一般取40～50mL新鲜晨尿（不新鲜的，最好添加对应比例尿液保存液）通过高速离心捕获尿液中脱落细胞于2mL灭菌离心管中。
粪便：一般取4.5g左右粪便样本于15mL离心管中，然后再加入9mL粪便保存液，彻底振动溶解均匀，高速离心后取500µL上清样本液于2mL灭菌离心管中，待用。
具体地，所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法包括如下步骤：
S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；
S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µL CPS-Buffer 1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；
S3.往S2孵化液中加入1000µL CPS-Buffer 2，混匀后的混合液；
S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；
S5.向S4吸附柱中加入700µL CPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；
S6.向S5的吸附柱中加入100µL CPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。
同时，上述方法在制备通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒中的应用亦在本发明保护范围内。
一种通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒，所述试剂盒中包含以下四种提取试剂：CPS-Buffer 1、CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3和CPS-Buffer 4；
所述CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L 异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L 二硫苏糖醇，1.5%～8% TritonX-100，10～50 mmol/L Tris-HCl，pH5.5～6.0；
所述CPS-Buffer 2为95%～100%乙醇溶液；
所述CPS-Buffer 3为70%～80%乙醇；
所述CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：10～20 mmol/L Tris-HCl，1～5 mmol/LEDTA。
优选地，所述试剂盒还包含DNA提取所需耗材，如核酸离心吸附柱、收集管、离心管等。
一种利用上述试剂盒提取生物样本总DNA的方法，所述方法为向经过预处理的生物样本中加入CPS-Buffer 1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS-Buffer 2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS-Buffer 3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS-Buffer 4将核酸从吸附柱上洗脱下来。
具体地，所述试剂盒提取生物样本总DNA的方法包括如下步骤：
S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；
S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µL CPS-Buffer 1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；
S3.往S2孵化液中加入1000µL CPS-Buffer 2，混匀后的混合液；
S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；
S5.向S4吸附柱中加入700µL CPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；
S6.向S5的吸附柱中加入100µL CPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，首先根据不同生物样本的特性进行合理的预处理，获得细胞消化液后经过简单离心过柱的方式将脱落细胞中的核酸富集到核酸吸附硅胶柱上，再经过洗涤、洗脱等步骤，提取常规生物样本中总的核酸。使用本发明提供的方法具有样本通用性强、操作简单快捷、可批量样本处理、成本低廉，核酸得率高、纯度高，可直接用于大规模的分子生物学科研及生产的检测。
附图说明
图1为外周血样本利用本发明的DNA提取方法提取DNA后，用人内参基因ß-actin做荧光定性分析的结果。
图2为外周血样本利用本发明的DNA提取方法提取DNA后，用目标基因Kras做荧光定量分析的结果。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1外周血样本总DNA提取
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：3 mol/L 异硫氰酸胍，25 mmol/L EDTA，40mmol/L 二硫苏糖醇，5% TritonX-100，30mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
CPS-Buffer 2为100%无水乙醇溶液；
CPS-Buffer 3为75%乙醇；
CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：15mmol/L Tris-HCl，3mmol/L EDTA。
2、总DNA提取
S1.取非抗凝外周血经低速离心后得到的白细胞液500µL于2mL灭菌离心管中，待用；
S2.向S1经过预处理的白细胞液中加入500µL CPS-Buffer 1，高速旋涡混合均匀15s，再置于60℃恒温震荡加热器中，转速1000rpm，孵育15min；
S3.往S2孵化液中加入1000µL CPS-Buffer 2，混匀得混合液；
S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；
S5.向S4吸附柱中加入700µL CPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，空管离心5min除去残留液；
S6.向S5的吸附柱中加入100µL CPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。
3、结果
上述方法提取的外周血样本总DNA平均浓度为100 ng/µL左右，纯度260/280为1.8左右，260/230为1.8左右，电泳结果显示，DNA条带清晰，无杂带。将所述DNA用人内参基因ß-actin和目标基因Kras做荧光定量分析，结果分别如图1和图2所示，稳定性和重复性较好；可见，利用上述方法提取的DNA适用于普通PCR技术、分子杂交技术、凝胶电泳技术、荧光定量PCR、飞行质谱、sanger测序、二代测序等下游相关分子诊断的要求。
实施例2唾液样本总DNA提取
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：2 mol/L 异硫氰酸胍，40 mmol/L EDTA，15mmol/L 二硫苏糖醇，8% TritonX-100，10 mmol/L Tris-HCl，pH 5.5；
CPS-Buffer 2为95%无水乙醇溶液；
CPS-Buffer 3为80%乙醇；
CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：20mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA。
2、提取方法
S1.将唾液收集在添加有唾液保存液的唾液收集管中，均匀取500µL于2mL灭菌离心管中，待用；
S2～S6与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的唾液样本总DNA平均浓度为200 ng/µL左右，纯度260/280为1.8左右，260/230为1.8左右，电泳结果显示：DNA条带清晰，无杂带。将所述DNA用人内参基因ß-actin和目前基因Kras做荧光定量分析，结果显示，稳定性和重复性较好；可见，利用上述方法提取的DNA适用于普通PCR技术、分子杂交技术、凝胶电泳技术、荧光定量PCR、飞行质谱、sanger测序、二代测序等下游相关分子诊断的要求。
实施例3 鼻咽拭子样本总DNA提取
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：4 mol/L 异硫氰酸胍，10 mmol/L EDTA，60mmol/L 二硫苏糖醇，1.5% TritonX-100，50mmol/L Tris-HCl，pH 6.0；
CPS-Buffer 2为98%无水乙醇溶液；
CPS-Buffer 3为70%乙醇；
CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：10mmol/L Tris-HCl，5mmol/L EDTA。
2、提取方法
S1.将拭子放置于2mL灭菌离心管中，加入700µL保存液，彻底震荡均匀，取500µL样本投入量于2mL灭菌离心管中，待用；
S2～S6与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的鼻咽拭子样本总DNA平均浓度为100 ng/µL左右，纯度260/280为1.8左右，260/230为1.8左右，电泳结果显示：DNA条带清晰，无杂带。将所述DNA用人内参基因ß-actin和目前基因Kras做荧光定量分析，结果显示，稳定性和重复性较好；可见，利用上述方法提取的DNA适用于普通PCR技术、分子杂交技术、凝胶电泳技术、荧光定量PCR、飞行质谱、sanger测序、二代测序等下游相关分子诊断的要求。
实施例4新鲜肝脏组织样本
1、配置四种DNA提取试剂
与实施例1相同。
2、提取方法
S1.将新鲜肝脏组织彻底研磨或机械粉碎，取0.2g样本于2mL灭菌离心管中；
S2～S6与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的新鲜组织样本总DNA平均浓度为500 ng/µL左右，电泳结果显示：DNA条带清晰，无杂带。将所述DNA用人内参基因ß-actin和目前基因Kras做荧光定量分析，结果显示，稳定性和重复性较好；可见，利用上述方法提取的DNA适用于普通PCR技术、分子杂交技术、凝胶电泳技术、荧光定量PCR、飞行质谱、sanger测序、二代测序等下游相关分子诊断的要求。
实施例5 尿液样本中总DNA提取
1、配置四种DNA提取试剂
与实施例1相同。
2、提取方法
S1.取50mL新鲜晨尿通过高速离心捕获尿液中脱落细胞于2mL灭菌离心管中，待用；
S2～S6与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的尿液样本总DNA平均浓度为80 ng/µL左右，电泳结果显示：DNA条带清晰，无杂带。将所述DNA用人内参基因ß-actin和目前基因Kras做荧光定量分析，结果显示，稳定性和重复性较好；可见，利用上述方法提取的DNA适用于普通PCR技术、分子杂交技术、凝胶电泳技术、荧光定量PCR、飞行质谱、sanger测序、二代测序等下游相关分子诊断的要求。
实施例6 粪便样本中总DNA提取
1、配置四种DNA提取试剂
与实施例1相同。
2、提取方法
S1.取4.5g粪便样本于15mL离心管中，然后再加入9mL粪便保存液，彻底振动溶解均匀，高速离心后取500µL上清样本液于2mL灭菌离心管中，待用。
S2～S6与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的粪便样本总DNA平均浓度为200 ng/µL左右，电泳结果显示：DNA条带清晰，无杂带。将所述DNA用人内参基因ß-actin和目前基因Kras做荧光定量分析，结果显示，稳定性和重复性较好；可见，利用上述方法提取的DNA适用于普通PCR技术、分子杂交技术、凝胶电泳技术、荧光定量PCR、飞行质谱、sanger测序、二代测序等下游相关分子诊断的要求。
对比例1
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：3 mol/L SDS（十二烷基硫酸钠），25 mmol/LEDTA，40mmol/L 二硫苏糖醇，5% TritonX-100，30mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3、CPS-Buffer 4与实施例1相同。
2、提取方法
与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的尿液样本总DNA平均浓度仅为20ng/µL，纯度260/280仅为1.3左右、260/230仅为0.9左右，电泳结果显示，DNA条带微弱，且有略微降解。
对比例2
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：3 mol/L CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），25mmol/L EDTA，40mmol/L 二硫苏糖醇，5% TritonX-100，30mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3、CPS-Buffer 4与实施例1相同。
2、提取方法
与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的尿液样本总DNA平均浓度仅为25ng/µL，纯度260/280仅为1.4左右、260/230仅为0.8左右，电泳结果显示，DNA条带微弱，且有略微降解。
对比例3
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：3 mol/L 异硫氰酸胍，25 mmol/L EDTA，5%TritonX-100，30mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3、CPS-Buffer 4与实施例1相同。
2、提取方法
与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的尿液样本总DNA平均浓度仅为30ng/µL，纯度260/280仅为1.6左右、260/230仅为1.2左右，电泳结果显示，DNA条带微弱，且有略微降解。
对比例4
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：3 mol/L 异硫氰酸胍，25 mmol/L EDTA，40mmol/L 二硫苏糖醇，30mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3、CPS-Buffer 4与实施例1相同。
2、提取方法
与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的尿液样本总DNA平均浓度仅为20ng/µL，纯度260/280仅为1.4左右、260/230仅为0.9左右，电泳结果显示，DNA条带微弱，且有略微降解。
对比例5
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：6mol/L 异硫氰酸胍，25 mmol/L EDTA，40mmol/L 二硫苏糖醇，1% TritonX-100，10mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3、CPS-Buffer 4与实施例1相同。
2、提取方法
与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的尿液样本总DNA平均浓度仅为50ng/µL，纯度260/280仅为1.5左右、260/230仅为1.2左右，电泳结果显示，DNA条带微弱，且有略微降解。
对比例6
1、配置四种DNA提取试剂
CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：1mol/L 异硫氰酸胍，25 mmol/L EDTA，40mmol/L 二硫苏糖醇，10% TritonX-100，60mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3、CPS-Buffer 4与实施例1相同。
2、提取方法
与实施例1相同；
3、结果
上述方法提取的尿液样本总DNA平均浓度仅为35ng/µL，纯度260/280仅为1.3左右、260/230仅为0.9左右，电泳结果显示，DNA条带微弱，且有略微降解。
实施例7 一种通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒
1、一种通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒，所述试剂盒中包含以下四种提取试剂：CPS-Buffer 1、CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3和CPS-Buffer 4；
所述CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：3 mol/L 异硫氰酸胍，25 mmol/L EDTA，40mmol/L 二硫苏糖醇，5% TritonX-100，30mmol/L Tris-HCl，pH 5.7；
所述CPS-Buffer 2为100%无水乙醇溶液；
所述CPS-Buffer 3为75%乙醇；
所述CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：15mmol/L Tris-HCl，3mmol/L EDTA。
2、使用方法
利用所述试剂盒提取生物样本总DNA的方法包括如下步骤：
S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；
S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µL CPS-Buffer 1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；
S3.往S2孵化液中加入1000µL CPS-Buffer 2，混匀后的混合液；
S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；
S5.向S4吸附柱中加入700µL CPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；
S6.向S5的吸附柱中加入100µL CPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。
其中，所述常规生物样本为血液、唾液、鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子、新鲜组织、尿液或粪便。其预处理方式如下所示：
血液：取EDTA抗凝剂外周血500µL或非抗凝外周血经低速离心后得到的白细胞液500µL于2mL灭菌离心管中，待用。
唾液：将唾液收集在添加有唾液保存液的唾液收集管中，均匀取500µL于2mL灭菌离心管中，待用。
鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子：将拭子放置于2mL灭菌离心管中，加入700µL保存液，彻底震荡均匀，取500µL样本投入量于2mL灭菌离心管中，待用。
新鲜组织：一般称0.2g新鲜组织彻底研磨或机械粉碎而获得提取样本于2mL灭菌离心管中，待用。
尿液：一般取40～50mL新鲜晨尿（不新鲜的，最好添加对应比例尿液保存液）通过高速离心捕获尿液中脱落细胞于2mL灭菌离心管中。
粪便：一般取4.5g左右粪便样本于15mL离心管中，然后再加入9mL粪便保存液，彻底振动溶解均匀，高速离心后取500µL上清样本液于2mL灭菌离心管中，待用。

Claims (9)

1.一种通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，向经过预处理的生物样本中加入CPS-Buffer 1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS-Buffer 2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS-Buffer 3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS-Buffer4将核酸从吸附柱上洗脱下来；
其中，所述CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L二硫苏糖醇，1.5～8%TritonX-100，10～50mmol/LTris-HCl，pH 5.5～6.0；
所述CPS-Buffer 2为95～100%乙醇溶液；
所述CPS-Buffer 3为70%～80%乙醇；
所述CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：10～20 mmol/LTris-HCl，1～5 mmol/LEDTA。
2. 根据权利要求1所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，所述生物样本与CPS-Buffer 1的体积比为1：1，或质量体积比为2～4mg：5 µL。
3.根据权利要求1所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，所述常规生物样本为血液、唾液、鼻咽拭子、口腔或宫颈拭子、新鲜组织、尿液或粪便。
4.根据权利要求1所述的通用于常规生物样本的总DNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；
S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µLCPS-Buffer 1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；
S3.往S2孵化液中加入1000µL CPS-Buffer 2，混匀后的混合液；
S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；
S5.向S4吸附柱中加入700µLCPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；
S6.向S5的吸附柱中加入100µL CPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。
5.权利要求1～4任一项所述方法在制备通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒中的应用。
6. 一种通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含以下四种提取试剂：CPS-Buffer 1、CPS-Buffer 2、CPS-Buffer 3和CPS-Buffer 4；
所述CPS-Buffer 1由以下终浓度各组分组成：2～4mol/L 异硫氰酸胍，10～40mmol/LEDTA，15～60mmol/L 二硫苏糖醇，1.5%～8% TritonX-100，10～50 mmol/L Tris-HCl，pH5.5～6.0；
所述CPS-Buffer 2为95%～100%乙醇溶液；
所述CPS-Buffer 3为70%～80%乙醇；
所述CPS-Buffer 4由以下终浓度各组分组成：10～20 mmol/L Tris-HCl，1～5 mmol/LEDTA。
7.根据权利要求6所述的通用于常规生物样本的总DNA提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含DNA提取所需耗材。
8. 一种利用权利要求5所述试剂盒提取生物样本总DNA的方法，其特征在于，向经过预处理的生物样本中加入CPS-Buffer 1，混匀溶解后50～60℃孵育5～15min，再加入CPS-Buffer 2，混匀后转至核酸离心吸附柱中，离心，然后用CPS-Buffer 3洗涤吸附柱，再离心，最后用CPS-Buffer 4将核酸从吸附柱上洗脱下来。
9.根据权利要求8所述的利用权利要求5所述试剂盒提取生物样本总DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.根据具体的生物样本特性进行常规预处理；
S2.向S1经过预处理的生物样本中加入500µL CPS-Buffer 1，高速旋涡混匀，再60℃，1000rpm，孵育15min；
S3.往S2孵化液中加入1000µL CPS-Buffer 2，混匀得混合液；
S4.将S3的混合液转至核酸离心吸附柱中，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱；
S5.向S4吸附柱中加入700µL CPS-Buffer3，14000rpm，离心1min，去滤液，保留吸附柱，重复2～3次；再14000rpm，离心5min除去残留液；
S6.向S5的吸附柱中加入100µL CPS-Buffer4，室温静置3～5min，再8000rpm，离心3min，获得DNA。
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