CN107708734B - 用抗cd38抗体和生存素抑制剂联合治疗血红素恶性肿瘤 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用抗CD38抗体和生存素抑制剂联合治疗血红素恶性肿瘤。

Description

用抗CD38抗体和生存素抑制剂联合治疗血红素恶性肿瘤

技术领域

本发明涉及血红素恶性肿瘤的联合治疗。

背景技术

多发性骨髓瘤(MM)是一种B细胞恶性肿瘤，其特征在于分泌性浆细胞在骨髓中潜在积聚，并具有低增殖指数和延长的寿命。该疾病最终侵害骨骼和骨髓，导致整个骨骼系统发生多种肿瘤和病变。所有癌症中大约有1％以及所有恶性血液肿瘤中略多于10％可归因于MM。MM在老年群体中发生率增加，诊断的中值年龄为约61岁。

目前可用的MM治疗方法包括化疗方案、干细胞移植、

(沙利度胺)、

(来那度胺)、

(泊马度胺)、

(硼替佐米)、

(卡非佐米)、

(帕比司他)、

(帕米膦酸)和

(唑来膦酸)。目前的治疗方案(包括化疗剂诸如长春新碱、BCNU、美法仑、环磷酰胺、阿霉素和泼尼松或地塞米松的组合)产生的完全缓解率仅为约5％，并且从诊断时起的中位存活期为大约36-48个月。最新进展使用高剂量化疗然后进行自体骨髓或外周血单核细胞移植，提高了完全缓解率并延长了缓解持续时间。然而，这仅仅是稍微延长了总体存活期，并没有获得治愈的证据。最终，所有MM患者甚至在单独使用α干扰素(IFN-α)或者联合使用α干扰素与类固醇进行维持治疗的情况下也复发。

可用的对MM药物治疗方案的功效受到以下情况的限制：在高达90％患者中，细胞增殖率较低并且产生耐药性。染色体易位、致癌基因突变、信号通路(诸如抗凋亡通路和存活通路)失调以及骨髓微环境被认为与MM中的耐药性有关(参见综述，Abdi等人，Oncotarget 4：2186-2207，2013)。骨髓(BM)微环境涉及恶性浆细胞的增殖、存活、分化、迁移和耐药性(Manier等人，J Biomed Biotechnol 2012；2012年10月3日在线发表，doi：_10.1155/_2012/_157496)。

CD38是一种II型跨膜糖蛋白，对于抗体治疗各种血红素恶性肿瘤(包括多发性骨髓瘤)而言是一种有吸引力的靶标。抗CD38抗体在例如国际专利公布No.WO2008/037257、国际专利公布No.WO2008/047242和国际专利公布No.WO2007/042309中有所描述，并且正在临床环境中对其在多发性骨髓瘤和其他血红素恶性肿瘤中的功效进行评估。

发明内容

本发明提供了一种治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的方法，包括向对其有需要的受治疗者施用抗CD38抗体和生存素抑制剂足以治疗CD38阳性恶性血液肿瘤的时间。

附图说明

图1A.骨髓基质细胞(BMSC)在MM细胞系中介导针对由抗CD38抗体即达雷木单抗诱导的ADCC引起的多发性骨髓瘤(MM)细胞杀伤的保护作用。在存在或不存在健康供体BMSC(HD-BMSC)的情况下，将荧光素酶转导的CD38⁺UM9 MM细胞培养16小时，然后以30∶1的PBMC∶MM细胞比例与连续浓度的达雷木单抗和HD-PBMC一起温育。4小时后通过生物发光成像(BLI)测定MM细胞活力。相对于不含达雷木单抗的细胞活力计算ADCC百分比(％)。误差条表示三次测量的平均值标准误差(SEM)。数据代表3次独立的实验。利用未配对t检验测试含有或不含BMSC的培养物之间的差异(*＝p＜0.05)。

图1B.骨髓基质细胞(BMSC)在MM细胞系中介导针对由抗CD38抗体即达雷木单抗诱导的ADCC引起的多发性骨髓瘤(MM)细胞杀伤的保护作用。在存在或不存在HD-BMSC的情况下，将荧光素酶转导的CD38⁺RPMI8226 MM细胞培养16小时，然后以30∶1的PBMC∶MM细胞比例与连续浓度的达雷木单抗和HD-PBMC一起温育。4小时后通过BLI测定MM细胞活力。相对于不含达雷木单抗的细胞活力计算ADCC％。误差条表示三次测量的SEM。数据代表3次独立的实验。利用未配对t检验测试含有或不含BMSC的培养物之间的差异(*＝p＜0.05)。

图2A.BMSC在原代MM患者样品中介导针对由抗CD38抗体即达雷木单抗诱导的ADCC引起的MM细胞杀伤的保护作用。在存在(白色条)或不存在(黑色条)自体骨髓基质细胞的情况下，培养从MM患者1中获得的全骨髓抽吸物，然后用指定浓度的达雷木单抗进行处理。将存在于抽吸物中的自体细胞用作效应细胞。由于BM-MNC已经含有NK细胞作为效应细胞，因此不再加入效应细胞。24小时后，通过流式细胞术测定培养物中CD138⁺MM细胞的活力。误差条表示三次测量的SEM。利用未配对t检验测试含有或不含BMSC的培养物之间的差异(*＝p＜0.05)。上图：患者#1，下图：患者#2。BMSC：骨髓基质细胞。ADCC：抗体依赖性细胞毒性。

图2B.BMSC在原代MM患者样品中介导针对由抗CD38抗体即达雷木单抗诱导的ADCC引起的MM细胞杀伤的保护作用。在存在(白色条)或不存在(黑色条)自体骨髓基质细胞的情况下，培养从MM患者2中获得的全骨髓抽吸物，然后用指定浓度的达雷木单抗进行处理。将存在于抽吸物中的自体细胞用作效应细胞。由于BM-MNC已经含有NK细胞作为效应细胞，因此不再加入效应细胞。24小时后，通过流式细胞术测定培养物中CD138⁺MM细胞的活力。误差条表示三次测量的SEM。利用未配对t检验测试含有或不含BMSC的培养物之间的差异(*＝p＜0.05)。上图：患者#1，下图：患者#2。BMSC：骨髓基质细胞。ADCC：抗体依赖性细胞毒性。

图3.YM155不诱导NK细胞裂解。将HD-PBMC和患者骨髓单核细胞(BMMNC)与指定浓度的YM155一起温育24小时。通过流式细胞术测定活CD3^-CD56⁺NK细胞的数量，并使用未处理的样品作为阴性对照计算裂解百分比。

图4A.达雷木单抗与YM155组合在存在基质细胞的情况下提供了对ADCC引起的MM细胞杀伤的协同作用。在存在或不存在HD-BMSC的情况下，培养荧光素酶转导的RPMI8226MM细胞。以指定浓度加入达雷木单抗和YM155。以40∶1的PBMC∶MM比例在所有孔中加入HD-PBMC作为NK细胞来源以诱导ADCC。4小时后通过BLI测定RPMI8226细胞存活率。相对于未接受任何处理的RPMI8226细胞的存活率计算裂解％。在YM155和达雷木单抗组合的情况下，假设累积效应是累加的而不是协同的，根据达雷木单抗和YM155单独的处理推导预期的裂解值。在配对t检验中确定预期的和观察到的结果之间的统计学差异(***＝P＜0.005，*＝P＜0.05)。DARA：达雷木单抗。

图4B.达雷木单抗与YM155组合在存在基质细胞的情况下提供了对ADCC引起的原代MM细胞杀伤的协同作用。在存在或不存在自体MM-BMSC的情况下，培养MM患者1的全BM抽吸物。以指定浓度加入达雷木单抗和YM155。由于BM-MNC含有足够的NK细胞(在两种情况下，NK∶MM细胞比例大约为30∶1)，因此不再加入效应细胞。24小时后，通过流式细胞术在每种条件下对活CD138⁺MM细胞进行计数。相对于在相同条件下培养但未接受任何处理的BM-MNC中MM细胞的存活率计算裂解％。在配对t检验中确定预期的和观察到的结果之间的统计学差异(*＝P＜0.05)。

图4C.达雷木单抗与YM155组合在存在基质细胞的情况下提供了对ADCC引起的原代MM细胞杀伤的协同作用。在存在或不存在自体MM-BMSC的情况下，培养MM患者2的全BM抽吸物。以指定浓度加入达雷木单抗和YM155。由于BM-MNC含有足够的NK细胞(在两种情况下，NK∶MM细胞比例大约为30∶1)，因此不再加入效应细胞。24小时后，通过流式细胞术在每种条件下对活CD138⁺MM细胞进行计数。相对于在相同条件下培养但未接受任何处理的BM-MNC中MM细胞的存活率计算裂解％。在配对t检验中确定预期的和观察到的结果之间的统计学差异(*＝P＜0.05)。

图4D.达雷木单抗与YM155组合在存在基质细胞的情况下提供了对ADCC引起的原代MM细胞杀伤的协同作用。在存在或不存在自体MM-BMSC的情况下，培养来自含有CD138⁺MM细胞的4名患者(患者1-4分别为45％、5.5％、10.2％、21.6％)的骨髓单核细胞(BM-MNC)。加入达雷木单抗(1ng/ml)和合适的亚最大浓度的YM155(患者1-4分别为125、62、75和50ng/ml)。由于BM-MNC含有足够的NK细胞(分别为7.9％、7.9％、10.3％和9.5％)，因此不再加入效应细胞。24小时后，通过流式细胞术在每种条件下对活CD138⁺MM细胞进行计数。相对于在相同条件下培养但未接受任何处理的BM-MNC中MM细胞的存活率计算裂解％。在配对t检验中确定预期的和观察到的结果之间的统计学差异(*＝P＜0.05，ns：不显著)。DARA：达雷木单抗。

图5.达雷木单抗和YM155组合疗法的抗肿瘤作用。在植入有UM9细胞的RAG2^-/-γc^-/-小鼠中分析每个治疗组的肿瘤负荷。将包被有人MSC且载有萤光素酶转导的MM细胞系UM9的复合支架皮下植入RAG2^-/-γc^-/-小鼠的背部(每只小鼠4个支架)。植入十天后，通过BLI显现并定量生长的肿瘤。然后按照指定的，用溶媒对照(对照)处理或者用达雷木单抗、YM155或达雷木单抗+YM155处理不同组的小鼠(n＝4)。利用皮下输注泵，将YM155(或其溶媒即PBS)以1mg YM155/kg/天的速率递送10天。每只小鼠(包括对照组中的小鼠)接受去除T细胞的HD-PBMC(5×10⁶个细胞)作为人NK细胞来源以诱导ADCC。每周通过BLI监测小鼠。结果表示为每个支架中的平均肿瘤负荷。误差条表示SEM。使用Mann-Whitney U检验计算用达雷木单抗处理的小鼠与用达雷木单抗+YM155处理的小鼠之间的统计学差异(***P＜0.001)。

具体实施方式

“CD38”是指人CD38蛋白(同义词：ADP-核糖基环化酶1、cADPr水解酶1、环状ADP-核糖水解酶1)。人CD38具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。众所周知，CD38是一种单次跨膜II型膜蛋白，其氨基酸残基1-21代表胞质结构域，氨基酸残基22-42代表跨膜结构域，以及残基43-300代表CD38的胞外结构域。

如本文所用，术语“抗体”是广义的，包括免疫球蛋白分子，其包括单克隆抗体，包括鼠、人、人适应性、人源化和嵌合单克隆抗体；抗体片段；双特异性或多特异性抗体；二聚体、四聚体或多聚体抗体；以及单链抗体。

根据重链恒定结构域氨基酸序列，可将免疫球蛋白指定为五种主要种类，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。将IgA和IgG进一步再分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。基于恒定结构域的氨基酸序列，可将任何脊椎物种的抗体轻链指定为两种完全不同的类型即κ和λ中的一种。

术语“抗体片段”是指免疫球蛋白分子的一部分，其保留重链和/或轻链抗原结合位点，诸如重链互补决定区(HCDR)1、2和3，轻链互补决定区(LCDR)1、2和3，重链可变区(VH)或轻链可变区(VL)。抗体片段包括：Fab片段，其是一种由VL、VH、CL和CHI结构域组成的单价片段；F(ab)₂片段，其是一种包含通过铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；Fd片段，其由VH和CHI结构域组成；Fv片段，其由单臂抗体的VL和VH结构域组成；结构域抗体(dAb)片段(Ward等人，Nature341：544-546，1989)，其由VH结构域组成。VH和VL结构域可被工程化并且可经由合成接头连接在一起以形成各种类型的单链抗体设计，其中在VH结构域和VL结构域由单独的单链抗体构建体表达的情况下，VH/VL结构域在分子内或分子间配对，以形成单价抗原结合位点，诸如单链Fv(scFv)或双体抗体，这在例如在国际专利公布No.WO1998/44001、WO1988/01649、WO1994/13804和WO1992/01047中有所描述。使用本领域的技术人员熟知的技术获得这些抗体片段，并筛选出应用方式与全长抗体相同的片段。

短语“分离抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体或抗体片段(例如，特异性结合CD38的分离抗体基本上不含特异性结合人CD38之外的抗原的抗体)。然而，特异性结合CD38的分离抗体可能对其他抗原具有交叉反应性，诸如人CD38的直系同源抗原，诸如食蟹猕猴(Macaca fascicularis)CD38。此外，分离抗体可基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。

抗体可变区由被三个“抗原结合位点”中断的“框架”区组成。使用不同术语来定义抗原结合位点：(i)三个在VH中(HCDR1、HCDR2、HCDR3)且三个在VL中(LCDR1、LCDR2、LCDR3)的互补决定区(CDR)是基于序列变异性(Wu和Kabat，J Exp Med 132：211-50，1970；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService，NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.，1991)。(ii)三个在VH中(H1、H2、H3)且三个在VL中(L1、L2、L3)的“高变区”、“HVR”或“HV”是指抗体可变结构域的在结构上高变的区域，如Chothia和Lesk所定义(Chothia和Lesk，Mol Biol 196：901-17，1987)。其他术语包括“IMGT-CDR”(Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27：55-77，2003)和“特异性决定残基使用”(SDRU)(Almagro Mol Recognit 17：132-43，2004)。国际免疫遗传学(IMGT)数据库(http://www_imgt_org)提供了抗原结合位点的标准化编号和定义。CDR、HV和IMGT描述之间的对应关系在Lefranc等人，Dev Comparat Immunol 27：55-77，2003中有所描述。

如本文所用，“Chothia残基”是抗体VL和VH残基，其根据Al-Lazikani编号(Al-Lazikani等人，J Mol Biol 273：927-48，1997)。

“框架”或“框架序列”是可变区的除了被定义为抗原结合位点的那些序列之外的其余序列。因为抗原结合位点可以由如上所述的各种术语定义，所以框架的精确氨基酸序列取决于如何定义抗原结合位点。

“人源化抗体”是指其中抗原结合位点来源于非人物种且可变区框架来源于人免疫球蛋白序列的抗体。人源化抗体在框架区中可包含置换，使得该框架可能不是表达的人免疫球蛋白或种系基因序列的精确拷贝。

“人抗体”是指具有重链可变区和轻链可变区的抗体，其中框架和抗原结合位点均来源于人起源的序列。如果抗体包含恒定区，则该恒定区也来源于人起源的序列。

如果抗体的可变区由使用人种系免疫球蛋白或重排免疫球蛋白基因的系统获得，则人抗体包含“来源于”人起源序列的重链可变区或轻链可变区。此类系统包括在噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库，以及转基因非人动物，诸如携带如本文所述的人免疫球蛋白基因座的小鼠。在与人种系免疫球蛋白序列或重排免疫球蛋白序列进行比较时，“人抗体”可包含由于例如天然存在的体细胞突变或者在框架或抗原结合位点中特意引入置换所引起的氨基酸差异。通常，“人抗体”的氨基酸序列与由人种系或重排免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一些情况下，“人抗体”可包含由人框架序列分析得到的共有框架序列(例如Knappik等人，JMol Biol 296：57-86，2000中所描述的)；或掺入到在噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库中的合成HCDR3(例如Shi等人，J Mol Biol 397：385-96，2010和国际专利公布No.WO2009/085462中所描述的)。“人抗体”的定义中不包括抗原结合位点来源于非人物种的抗体。

分离的人源化抗体可以是合成的。虽然人抗体来源于人免疫球蛋白序列，但可使用诸如噬菌体展示的系统结合合成的CDR和/或合成的框架来生成该人抗体，或者可对其进行体外诱变以改善抗体特性，从而得到并非天然存在于体内整套人抗体种系内的抗体。

“重组抗体”包括通过重组方法制备、表达、形成或分离的所有抗体，诸如从动物(例如小鼠)中分离的抗体，即人免疫球蛋白基因的转基因或转染色体，或从其制备的杂交瘤分离的抗体(在下文中进一步描述)；从经转化以表达抗体的宿主细胞分离的抗体；从重组的组合抗体文库分离的抗体；以及通过涉及将人免疫球蛋白基因序列与其他DNA序列剪接在一起的任何其他方法制备、表达、创建或分离的抗体，或者使用Fab臂交换体外产生的抗体。

“单克隆抗体”是指单分子组合物的抗体分子制剂。单克隆抗体组合物表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力，或就双特异性单克隆抗体而言，表现出对两种不同表位的双重结合特异性。因此，“单克隆抗体”是指在每条重链和每条轻链中具有单一氨基酸组成的抗体群，除了可能的熟知改变，诸如从抗体重链中除去C末端赖氨酸之外。单克隆抗体可在抗体群内具有异质糖基化。单克隆抗体可以是单特异性的或多特异性的，或者是单价的、二价的或多价的。术语“单克隆抗体”中包括双特异性抗体。

“表位”是指抗原的与抗体特异性结合的部分。表位通常由部分(诸如氨基酸或多糖侧链)的化学活性(诸如，极性、非极性或疏水性)表面基团构成，并且可具有特定三维结构特征以及特定电荷特征。表位可由形成构象空间单元的连续和/或不连续氨基酸构成。对于不连续表位，来自抗原的线性序列的不同部分的氨基酸因蛋白质分子的折叠而在三维空间上靠近。

“变体”是指因一处或多处修饰(例如，置换、插入或缺失)而不同于参考多肽或参考多核苷酸的多肽或多核苷酸。

“与......联合使用”意指可将两种或更多种治疗剂以混合物一起、作为单一药剂同时或作为单一药剂以任何顺序依次施用给受治疗者。

“治疗”或“处理”是指治疗性处理以及预防性或防御性措施两者，其中目标是防止或减缓(减轻)不期望的生理变化或疾病，诸如肿瘤或肿瘤细胞的发展或扩散。有益或期望的临床结果包括症状的减轻、疾病程度的减弱、疾病的稳定(即，未恶化)状态、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和，以及不论是可检测的还是不可检测的缓解(不论是部分缓解还是完全缓解)，以及与未接受治疗时的预期存活期相比延长的存活期。需要治疗的个体包括已患有病症或疾病的个体以及易患病症或疾病的个体或者要预防病症或疾病的个体。

“治疗有效量”是指在所需剂量和时间段有效实现期望的治疗结果的量。治疗有效量可根据以下因素变化：诸如个体的疾病状态、年龄、性别和重量，以及治疗剂或治疗剂组合在个体中引发期望的应答的能力。可使相关联的抗性下降或减弱的有效治疗剂或治疗剂组合的示例性指标包括例如患者健康状况改善、肿瘤负荷减少、肿瘤生长遏止或减慢和/或癌细胞没有转移到体内的其他位置。

“协同”、“协同作用”或“协同的”意指超过组合的预期加性效应。

“抑制生长”(例如，涉及细胞，诸如肿瘤细胞)是指与本领域技术人员熟知的适当对照条件下生长的相同细胞的生长相比，在与治疗剂或者治疗剂或药物的组合接触时体外或体内细胞生长的可测量下降。体外或体内细胞生长的抑制可为至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。细胞生长的抑制可通过多种机制发生，例如通过ADCC、细胞凋亡、坏死或者通过抑制细胞增殖。

“受治疗者”包括任何人类或非人类动物。“非人类动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人类灵长类、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。术语“受治疗者”和“患者”在本文中可互换使用。

如本文所用，“生存素”是指具有SEQ ID NO：22中所示的氨基酸序列的生存素蛋白。生存素是细胞凋亡抑制剂(IAP)家族的一个成员。生存素是一种作为细胞凋亡抑制剂和细胞周期调节剂的双功能蛋白。在人类恶性肿瘤中观察到生存素的过量表达，其与不良预后、肿瘤复发和治疗抗性呈正相关(Liu等人，Cancer Biol.Ther.，7：1053-1060，2008；Mita等人，ClinCancer Res.，14：5000-5005，2008)。

SEQ ID NO：22

MGAPTLPPAWQPFLKDHRISTFKNWPFLEGCACTPERMAEAGFIHCPTENEPDLAQCFFCFKELEGWEPDDDPIEEHKKHSSGCAFLSVKKQFEELTLGEFLKLDRERAKNKIAKETNNKKKEFEETAEKVRRAIEQLAAMD

“生存素抑制剂”是指抑制、拮抗、降低或压制生存素蛋白活性的分子；例如抑制细胞中生存素的抗细胞凋亡活性的分子。生存素抑制剂可将生存素的抗细胞凋亡活性抑制约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、99％或100％。生存素抑制剂可以是小分子、肽、疫苗、多核苷酸、DNA或RNA分子。

本发明至少部分地基于以下发现：存在于BM微环境中的骨髓基质细胞(BMSC)至少部分地通过上调生存素来保护MM细胞免受抗体诱导的ADCC的影响，以及生存素抑制剂可以改善MM细胞的抗体介导的ADCC并且消除BMSC诱导的ADCC抗性。已经证实BMSC通过细胞粘附介导的免疫抗性来保护MM细胞免受细胞毒性T淋巴细胞(CTL)依赖性细胞裂解的影响，并且已经发现生存素在抗细胞溶解的MM细胞中上调(de Haart等人，Clin Cance Res 19：5591-5601，2013)。

本发明提供了一种治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的方法，包括向对其有需要的受治疗者施用抗CD38抗体和生存素抑制剂足以治疗CD38阳性恶性血液肿瘤的时间。

本发明还提供了一种抑制受治疗者中多发性骨髓瘤细胞的生长或增殖的方法，包括向对其有需要的受治疗者施用抗CD38抗体和生存素抑制剂足以抑制多发性骨髓瘤细胞的生长或增殖的时间。

“CD38阳性恶性血液肿瘤”是指以存在表达CD38的肿瘤细胞为特征的恶性血液肿瘤，包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。示例性此类CD38阳性恶性血液肿瘤是前体B细胞淋巴细胞白血病/淋巴瘤和B细胞非霍奇金淋巴瘤、急性早幼粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病和成熟B细胞肿瘤，诸如B细胞慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞急性淋巴细胞白血病、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)(包括低度恶性、中度恶性和高度恶性FL)、皮肤滤泡中心淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤(MALT型、淋巴结型和脾型)、毛细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、浆细胞瘤、多发性骨髓瘤(MM)、浆细胞白血病、移植后淋巴增生性障碍、华氏巨球蛋白血症、浆细胞白血病和间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。

CD38在多种恶性血液疾病中表达，包括多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤，诸如B细胞慢性淋巴细胞白血病、T细胞和B细胞急性淋巴细胞白血病、华氏巨球蛋白血症、原发性系统性淀粉样变、套细胞淋巴瘤、幼淋巴细胞/髓细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病、NK细胞白血病和浆细胞白血病。CD38在不同起源的上皮/内皮细胞上的表达已有描述，包括前列腺中的腺上皮细胞、胰腺中的胰岛细胞、腺体(包括腮腺)中的导管上皮细胞、支气管上皮细胞、睾丸和卵巢中的细胞，以及结直肠腺癌中的肿瘤上皮细胞。可涉及CD38表达的其他疾病包括例如肺部支气管上皮癌、乳腺癌(由乳腺导管和小叶中的上皮内衬恶性增殖演变而来)、由β细胞演变而来的胰腺肿瘤(胰岛素瘤)、从肠上皮细胞演变而来的肿瘤(例如，腺癌和鳞状细胞癌)、前列腺中的癌，以及睾丸中的精原细胞瘤和卵巢癌。在中枢神经系统中，成神经细胞瘤表达CD38。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是多发性骨髓瘤(MM)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、急性髓性白血病(AML)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是MM。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是ALL。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是NHL。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是DLBCL。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是BL。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是FL。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是MCL。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是AML。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是CLL。

在一些实施方案中，CD38阳性恶性血液肿瘤是浆细胞疾病。

在一些实施方案中，浆细胞疾病是轻链淀粉样变性(AL)、多发性骨髓瘤(MM)或华氏巨球蛋白血症。

在一些实施方案中，浆细胞疾病是AL。

在一些实施方案中，浆细胞疾病是MM。

在一些实施方案中，浆细胞疾病是华氏巨球蛋白血症。

B细胞非霍奇金淋巴瘤的示例是淋巴瘤样肉芽肿病、原发性渗出性淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、重链病(包括下重链病、μ重链病和α重链病)、用免疫抑制剂治疗所诱导的淋巴瘤(诸如环孢菌素诱导的淋巴瘤和氨甲蝶呤诱导的淋巴瘤)。

在一个实施方案中，涉及表达CD38的细胞的疾病是霍奇金淋巴瘤。

涉及表达CD38的细胞的疾病的其他示例包括来源于T细胞和NK细胞的恶性肿瘤，包括：成熟T细胞和NK细胞肿瘤，包括T细胞幼淋巴细胞白血病、T细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T细胞淋巴瘤、鼻型、78肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样真菌病/塞扎里综合征、原发性皮肤CD30阳性T细胞淋巴增生性疾病(原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤C-ALCL、淋巴瘤样丘疹病、交界性病变)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤非特指型和间变性大细胞淋巴瘤。

来源于骨髓细胞的恶性肿瘤的示例包括急性髓性白血病(包括急性早幼粒细胞白血病)和慢性骨髓增殖性疾病(包括慢性髓性白血病)。

任何抗CD38抗体都可用于本发明的方法中。抗CD38抗体的可变区可从现有的抗CD38抗体获得，并且任选地使用标准方法将其克隆为全长抗体。可使用的结合CD38的示例性抗体可变区例如在国际专利公布No.WO05/103083、WO06/125640、WO07/042309、WO08/047242、WO12/092612、WO06/099875和WO11/154453A1中有所描述。

可使用的示例性抗CD38抗体是DARZALEX^TM(达雷木单抗)。DARZALEX^TM(达雷木单抗)包含分别如SEQ ID NO：4和5所示的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)氨基酸序列、分别如SEQ ID NO：6、7和8所示的重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列以及分别如SEQ ID NO：9、10和11所示的轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，并且是IgG1/κ亚型。DARZALEX^TM(达雷木单抗)重链氨基酸序列在SEQ ID NO：12中示出，轻链氨基酸序列在SEQ ID NO：13中示出。

SEQ ID NO：1

MANCEFSPVSGDKPCCRLSRRAQLCLGVSILVLILVVVLAVVVPRWRQQWSGPGTTKRFPETVLARCVKYTEIHPEMRHVDCQSVWDAFKGAFISKHPCNITEEDYQPLMKLGTQTVPCNKILLWSRIKDLAHQFTQVQRDMFTLEDTLLGYLADDLTWCGEFNTSKINYQSCPDWRKDCSNNPVSVFWKTVSRRFAEAACDVVHVMLNGSRSKIFDKNSTFGSVEVHNLQPEKVQTLEAWVIHGGREDSRDLCQDPTIKELESIISKRNIQFSCKNIYRPDKFLQCVKNPEDSSCTSEI

SEQ ID NO：2

SKRNIQFSCKNIYR

SEQ ID NO：3

EKVQTLEAWVIHGG

SEQ ID NO：4

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFNSFAMSWVRQAPGKGLEWVSA

ISGSGGGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKDK

ILWFGEPVFDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO：5

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFGQGTKVEIK

SEQ ID NO：6

SFAMS

SEQ ID NO：7

AISGSGGGTYYADSVKG

SEQ ID NO：8

DKILWFGEPVFDY

SEQ ID NO：9

RASQSVSSYLA

SEQ ID NO：10

DASNRAT

SEQ ID NO：11

QQRSNWPPTF

SEQ ID NO：12

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFNSFAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGGTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKDKILWFGEPVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO：13

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

可使用的另一示例性抗CD38抗体是mAb003，其包含分别为SEQ ID NO：14和15的VH和VL序列，该抗体在美国专利No.7,829,693中有所描述。

SEQ ID NO：14

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAFSWVRQAPGQGLEWMGRVIPFLGIANSAQKFQGRVTITADKSTSTAY

MDLSSLRSEDTAVYYCARDDIAALGPFDYWGQGTLVTVSSAS

SEQ ID NO：15

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQP

EDFATYYCQQYNSYPRTFGQGTKVEIK

可使用的另一示例性抗CD38抗体是mAb024，其包含分别为SEQ ID NO：16和17的VH和VL序列，该抗体在美国专利No.7,829,693中有所描述。

SEQ ID NO：16

EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPHDSDARYSPSFQGQVTFSADKSISTAY

LQWSSLKASDTAMYYCARHVGWGSRYWYFDLWGRGTLVTVSS

SEQ ID NO：17

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP

EDFAVYYCQQRSNWPPTFGQGTKVEIK

可使用的另一示例性抗CD38抗体是MOR-202(MOR-03087)，其包含分别为SEQ IDNO：18和19的VH和VL序列，该抗体在美国专利No.8,088,896中有所描述。

SEQ ID NO：18

QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMNWVRQAPGKGLEWVSGISGDPSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLY

LQMNSLRAEDTAVYYCARDLPLVYTGFAYWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO：19

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLRHYYVYWYQQKPGQAPVLVIYGDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAE

DEADYYCQTYTGGASLVFGGGTKLTVLGQ

可使用的另一示例性抗CD38抗体是isatuximab，其包含分别为SEQ ID NO：20和21的VH和VL序列，该抗体在美国专利No.8,153,765中有所描述。isatuximab的VH和VL可表达为IgG1/κ。

SEQ ID NO：20

QVQLVQSGAEVAKPGTSVKLSCKASGYTFTDYWMQWVKQRPGQGLEWIGT

IYPGDGDTGYAQKFQGKATLTADKSSKTVYMHLSSLASEDSAVYYCARGD

YYGSNSLDYWGQGTSVTVSS

SEQ ID NO：21

DIVMTQSHLSMSTSLGDPVSITCKASQDVSTVVAWYQQKPGQSPRRLIYSASYRYIGVPDRFTGSGAGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSPPYTFGGGTKLEIK

可用于本发明的方法中的抗CD38抗体也可从头选自例如噬菌体展示文库，其中噬菌体被工程化以表达人免疫球蛋白或其部分，诸如Fab、单链抗体(scFv)或者未配对或配对抗体可变区(Knappik等人，J Mol Biol296：57-86，2000；Krebs等人，J Immunol Meth 254：67-84，2001；Vaughan等人，Nature Biotechnology 14：309-314，1996；Sheets等人，PITAS(USA)95：6157-6162，1998；Hoogenboom和Winter，J Mol Biol 227：381，1991；Marks等人，JMol Biol 222：581，1991)。CD38结合可变结构域可分离自例如噬菌体展示文库，该噬菌体展示文库将抗体重链可变区和轻链可变区表达为具有噬菌体pIX外壳蛋白的融合蛋白，如在Shi等人，(2010)J.Mol.Biol.397：385-96和国际专利公布No.WO09/085462中所描述。可从抗体文库中筛选结合到人CD38胞外结构域的抗体，并可进一步表征所获得的阳性克隆，从克隆裂解物中分离Fab，然后将其克隆为全长抗体。此类用于分离人抗体的噬菌体展示方法在本领域是成熟的。参见例如美国专利No.5,223,409、美国专利No.5,403,484、美国专利No.5,571,698、美国专利No.5,427,908、美国专利No.5,580,717、美国专利No.5,969,108、美国专利No.6,172,197、美国专利No.5,885,793、美国专利No.6,521,404、美国专利No.6,544,731、美国专利No.6,555,313、美国专利No.6,582,915和美国专利No.6,593,081。

本发明还提供了一种治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的方法，包括向对其有需要的受治疗者施用与包含SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：5的VL的抗体竞争结合CD38的抗CD38抗体以及生存素抑制剂足以治疗CD38阳性恶性血液肿瘤的时间。

本发明还提供了一种治疗患有多发性骨髓瘤的受治疗者的方法，包括向对其有需要的受治疗者施用与包含SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：5的VL的抗体竞争结合CD38的抗CD38抗体以及生存素抑制剂足以治疗多发性骨髓瘤的时间。

本发明还提供了一种治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的方法，包括向对其有需要的受治疗者施用结合到人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ IDNO：2)和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)的抗CD38抗体以及生存素抑制剂足以治疗CD38阳性恶性血液肿瘤的时间。

本发明还提供了一种治疗患有多发性骨髓瘤的受治疗者的方法，包括向对其有需要的受治疗者施用结合到人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)的抗CD38抗体以及生存素抑制剂足以治疗多发性骨髓瘤的时间。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含分别为SEQ ID NO：6、7和8的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含分别为SEQ ID NO：9、10和11的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含分别为SEQ ID NO：6、7、8、9、10和11的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含含有与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VH，以及含有与SEQ ID NO：5的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的VL。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：5的VL。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含SEQ ID NO：14的VH和SEQ ID NO：15的VL。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含SEQ ID NO：16的VH和SEQ ID NO：17的VL。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含SEQ ID NO：18的VH和SEQ ID NO：19的VL。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含SEQ ID NO：20的VH和SEQ ID NO：21的VL。

可使用熟知的体外方法来评估抗体与参考抗体(例如，DARZALEX^TM，即具有SEQ IDNO：4的VH和SEQ ID NO：5的VL的达雷木单抗)竞争结合到CD38的情况。在示例性方法中，可将重组表达CD38的CHO细胞与未标记的参考抗体一起在4℃下温育15分钟，然后与过量的荧光标记的测试抗体一起在4℃下温育45分钟。在PBS/BSA中洗涤后，可使用标准方法通过流式细胞术测量荧光。在另一示例性方法中，可将人CD38的胞外部分包被在ELISA板的表面上。可在约15分钟内加入过量的未标记的参考抗体，随后可加入生物素酰化测试抗体。在PBS/吐温中洗涤后，可使用辣根过氧化物酶(HRP)缀合的链霉亲和素检测生物素酰化测试抗体的结合，并使用标准方法检测信号。显而易见的是，在竞争测定法中，参考抗体可带有标记，而测试抗体不带标记。当参考抗体抑制测试抗体的结合或测试抗体抑制参考抗体的结合达至少80％、85％、90％、95％或100％时，测试抗体与参考抗体竞争。可使用已知方法，通过例如肽作图或氢/氘保护测定法，或通过晶体结构测定，来进一步限定测试抗体的表位。

当抗CD38抗体结合人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)内的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个残基时，该抗体结合到SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3。在一些实施方案中，抗CD38抗体结合人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)中的至少一个氨基酸和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)中的至少一个氨基酸。在一些实施方案中，抗CD38抗体结合人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)中的至少两个氨基酸和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)中的至少两个氨基酸。在一些实施方案中，抗CD38抗体结合人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)中的至少三个氨基酸和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)中的至少三个氨基酸。

结合到人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)的示例性抗体是DARZALEX^TM(达雷木单抗)。

结合到人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)的抗体可例如通过如下过程产生：使用标准方法并且如本文所述用具有SEQ ID NO：2和3所示的氨基酸序列的肽免疫小鼠，并且使用例如ELISA或诱变研究来表征所获得的抗体与肽的结合。

抗体的Fc部分可介导抗体效应功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)，如下文更详细地描述。此类功能可通过如下方式介导：Fc效应结构域结合到具有吞噬或裂解活性的免疫细胞上的Fc受体，或Fc效应结构域结合到补体系统的成分。通常，Fc结合细胞或补体成分所介导的效应导致靶细胞(例如，表达CD38的细胞)被抑制和/或耗竭。人IgG同种型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4表现出效应功能的差异能力。ADCC可由IgG1和IgG3介导，ADCP可由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4介导，并且CDC可由IgG1和IgG3介导。

在一些实施方案中，抗CD38抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

在一些实施方案中，抗CD38抗体是IgG1同种型。

在一些实施方案中，抗CD38抗体是IgG2同种型。

在一些实施方案中，抗CD38抗体是IgG3同种型。

在一些实施方案中，抗CD38抗体是IgG4同种型。

在一些实施方案中，抗CD38抗体通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、补体依赖性细胞毒性(CDC)或细胞凋亡诱导杀伤表达CD38的细胞。

在一些实施方案中，抗CD38抗体通过ADCC诱导杀伤表达CD38的细胞。

在一些实施方案中，抗CD38抗体通过ADCP诱导杀伤表达CD38的细胞。

在一些实施方案中，抗CD38抗体通过CDC诱导杀伤表达CD38的细胞。

在一些实施方案中，抗CD38抗体通过细胞凋亡诱导杀伤表达CD38的细胞。

“抗体依赖性细胞毒性”、“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是诱导细胞死亡的机制，该机制依赖于抗体包被的靶细胞与具有裂解活性的效应细胞(诸如自然杀伤细胞、单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞)经由效应细胞上表达的Fc γ受体(FcγR)发生的相互作用。例如，NK细胞表达FcγRIIIa，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIIIa。效应细胞通过分泌膜孔形成蛋白和蛋白酶而具有的活性会导致抗体包被的靶细胞诸如表达CD38的MM细胞发生死亡。为评估抗CD38抗体的ADCC活性，可将抗体与免疫效应细胞联合加入到表达CD38的细胞中，该免疫效应细胞可被抗原抗体复合物激活，从而使靶细胞发生细胞裂解。根据从裂解的细胞中释放的标记物(例如放射性底物、荧光染料或天然胞内蛋白)来检测细胞裂解。用于此类测定法的示例性效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和NK细胞。表达CD38的多发性骨髓瘤细胞系或原代MM细胞可用作靶细胞。在示例性测定法中，将被工程化为表达萤光素酶的MM细胞系与抗CD38抗体一起温育。以40∶1的靶细胞∶效应细胞比例加入新鲜分离的PBMC效应细胞。加入PBMC 4小时之后，加入荧光素，使用光度计(SpectraMax，Molecular Devices)在20分钟内测定由存活的MM细胞发出的所得生物发光信号，并且可使用下式计算MM细胞的ADCC百分比：ADCC％＝1-(不存在PBMC时的平均生物发光信号/存在PBMC时的平均生物发光信号)×100％。当ADCC％在体外测定法(诸如，上述一种测定法)为至少约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、80％、90％或100％时，抗CD38抗体“体外诱导ADCC”。

“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指诱导细胞死亡的机制，其中靶结合抗体的Fc效应结构域结合并激活补体成分C1q，C1q继而激活补体级联，从而导致靶细胞死亡。补体的激活也可导致补体成分沉积在靶细胞表面上，这些补体成分通过结合白细胞上的补体受体(例如，CR3)来促进ADCC。在示例性测定法中，可用浓度为0.3-10μg/mL的来源于10％混合人血清的抗CD38抗体和补体将从患有B细胞恶性肿瘤的患者分离的原代BM-MNC细胞处理1小时，并且可使用van der Veer等人，Haematologica 96：284-290，2011、van der Veer等人，Blood Cancer J1(10)：e41，2011中所述的技术通过流式细胞术测定原代CD138⁺MM细胞的存活率。MM细胞裂解百分比可以相对于本文所述的同种型对照进行测定。用于本发明的方法中的抗CD38抗体可诱导CDC达约20％、25％、30％、35％、400％、45％、50％、55％、60％、65％、700％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

“抗体依赖性细胞吞噬作用”(“ADCP”)是指通过吞噬细胞(诸如巨噬细胞或树突细胞)的内化作用消除抗体包被的靶细胞的机制。ADCP可通过如下方式评估：使用单核细胞来源的巨噬细胞作为效应细胞，并使用表达CD38的Daudi细胞(

CCL-213^TM)或者B细胞白血病或淋巴瘤肿瘤细胞作为被工程化为表达GFP或其他标记分子的靶细胞。效应细胞∶靶细胞比例可为例如4∶1。可在含或不含抗CD38抗体的情况下，将效应细胞与靶细胞一起温育4小时。温育之后，可使用细胞消化液分离细胞。可使用偶联至荧光标记物的抗CD11b抗体和抗CD14抗体鉴定巨噬细胞，并且可使用标准方法基于CD11⁺CD14⁺巨噬细胞中的GFP荧光％确定吞噬百分比。用于本发明的方法中的抗CD38抗体可诱导ADCP达约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

抗CD38抗体引发的ADCC可通过在抗体Fc中进行某些置换来增强。示例性置换为例如在氨基酸位置256、290、298、312、356、330、333、334、360、378或430(根据EU索引对残基进行编号)处的置换，如美国专利No.6,737,056中所描述。

在一些实施方案中，抗CD38抗体在抗体Fc中包含氨基酸置换。

在一些实施方案中，抗CD38抗体包含在抗体Fc中的氨基酸位置256、290、298、312、356、330、333、334、360、378或430(根据EU索引对残基进行编号)处的置换。

抗CD38抗体引发的ADCC也可通过工程化抗体低聚糖成分来增强。人IgG1或IgG3在Asn297处被双分枝G0、G0F、G1、G1F、G2或G2F形式的大多数聚糖N-糖基化。未被工程化的CHO细胞所产生的抗体通常具有约至少85％的聚糖岩藻糖含量。从连接到Fc区的双分枝复合物型低聚糖去除核心岩藻糖，可经由改善的FcγRIIIa结合来增强抗体的ADCC，而不会改变抗原结合或CDC活性。此类经修饰的抗体可使用据报道能引起具有双分枝复合物型Fc低聚糖的相对较高去岩藻糖基化抗体的成功表达的不同方法实现，诸如培养物渗透压的控制(Konno等人，Cytotechnology64：249-65，2012)、应用变体CHO细胞系Lec13作为宿主细胞系(Shields等人，J Biol Chem 277：26733-26740，2002)、应用变体CHO细胞系EB66作为宿主细胞系(Olivier等人，MAbs；2(4)，2010；印刷前电子版；PMID：20562582)、应用大鼠杂交瘤细胞系YB2/0作为宿主细胞系(Shinkawa等人，J Biol Chem 278：3466-3473，2003)、引入特异性针对α1，6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的小干扰RNA(Mori等人，BiotechnolBioeng88：901-908，2004)或共表达β-1，4-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶III和高尔基体α-甘露糖苷酶II或强效α-甘露糖苷酶I抑制剂几夫碱(kifunensine)(Ferrara等人，J BiolChem281：5032-5036，2006；Ferrara等人，Biotechnol Bioeng 93：851-861，2006；Xhou等人，Biotechnol Bioeng 99：652-65，2008)。

在一些实施方案中，抗CD38抗体具有岩藻糖含量介于约0％至约15％之间(例如，为15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或0％)的双分枝聚糖结构。

在一些实施方案中，抗CD38抗体具有岩藻糖含量为约50％、40％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或0％的双分枝聚糖结构。

在Fc中进行置换和岩藻糖含量减少可增强抗CD38抗体的ADCC活性。

“岩藻糖含量”意指Asn297处糖链内的岩藻糖单糖的量。岩藻糖的相对量为含岩藻糖的结构相对于所有糖结构的百分比。这些可通过多种方法进行表征和定量，例如：1)使用经N-糖苷酶F处理的样品(例如，复合结构、混合结构及低聚甘露糖结构和高甘露糖结构)的MALDI-TOF，如国际专利公布No.WO2008/0775462中所描述；2)通过酶促释放Asn297聚糖，随后衍生化并通过具有荧光检测的HPLC(UPLC)和/或HPLC-MS(UPLC-MS)进行检测/定量；3)在用或不用Endo S或其他酶处理Asn297聚糖的情况下，对天然或还原后的mAb进行完整蛋白分析，所述其他酶在第一GlcNAc单糖和第二GlcNAc单糖之间进行裂解，留下附接至第一GlcNAc的岩藻糖；4)通过酶消化(例如，胰蛋白酶或内肽酶Lys-C)将抗体消化为成分肽，随后通过HPLC-MS(UPLC-MS)进行分离、检测和定量；5)通过用PNGase F在Asn 297处进行特异性酶促去糖基化将抗体低聚糖与抗体蛋白分离。可通过各种互补技术对由此释放的低聚糖进行荧光团标记、分离并鉴定，这些技术允许：采用基质辅助激光解吸电离(MALDI)质谱法，通过比较实验质量与理论质量来对聚糖结构进行精细表征；通过离子交换HPLC(GlycoSepC)确定唾液酸化程度；通过正相HPLC(GlycoSep N)，根据亲水性标准分离和定量低聚糖形式；以及通过高效毛细管电泳激光诱导荧光(HPCE-LIF)分离和定量低聚糖。

如本申请所用，“低岩藻糖”或“低岩藻糖含量”是指抗体的岩藻糖含量为约0％至约15％。

如本文所用，“正常岩藻糖”或“正常岩藻糖含量”是指抗体的岩藻糖含量大约高于50％，通常大约高于80％或高于85％。

与包含SEQ ID NO：12的重链和SEQ ID NO：13的轻链的抗体基本上相同的抗体可用于本发明的方法中。如本文所用，术语“基本上相同”意指被比较的两个抗体重链氨基酸序列或轻链氨基酸序列是相同的或具有“非显著性差异”。非显著性差异是指抗体重链或轻链中有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸被置换，这些置换不会对抗体的特性造成不利影响。百分比同一性可例如通过使用Vector NTIv.9.0.0(Invitrogen，Carlsbad，CA)的AlignX模块的默认设置进行双序列比对来确定。本发明的蛋白质序列可以周作查询序列以针对公共或专利数据库进行检索，以例如鉴定相关序列。用来进行此类检索的示例性程序是使用默认设置的XBLAST或BLASTP程序(http_//www_ncbi_nlm/nih_gov)或GenomeQuest^TM(GenomeQuest，Westborough，MA)软件包。可对用于本发明方法中的抗CD38抗体进行的示例性置换为例如用具有相似电荷、疏水性或立体化学特性的氨基酸进行的保守置换。还可作出保守置换以改善抗体特性，例如稳定性或亲和力，或改善抗体效应功能。可例如对抗CD38抗体的重链或轻链进行1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸置换。此外，重链或轻链中的任何天然残基还可用丙氨酸来置换，如先前对于丙氨酸扫描诱变所述(MacLennan等人，Acta Physiol Scand Suppl 643：55-67，1998；Sasaki等人，AdvBiophys 35：1-24，1998)。所需的氨基酸置换可以由本领域技术人员在需要此类置换时确定。氨基酸置换可以例如通过PCR诱变来进行(美国专利No.4,683,195)。可使用熟知的方法产生变体文库，例如使用随机(NNK)或非随机密码子(例如DVK密码子，其编码11个氨基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、Lys、Asn、Arg、Ser、Tyr、Trp))，以及从文库中筛选具有所需特性的变体。可使用本文所述的方法来检测所产生的变体对CD38的结合及其诱导ADCC的能力。

“保守修饰”是指不会显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。保守修饰包括氨基酸置换、添加和缺失。保守置换是其中氨基酸被具有相似侧链的氨基酸残基替换的置换。具有相似侧链的氨基酸残基家族是明确定义的，包括具有如下侧链的氨基酸：酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、不带电极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、色氨酸)、芳香族侧链(例如，苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸)、脂肪族侧链(例如，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸)、酰胺(例如，天冬酰胺、谷氨酰胺)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及含硫侧链(半胱氨酸、甲硫氨酸)。此外，多肽中的任何天然残基还可用丙氨酸来置换，如先前对于丙氨酸扫描诱变所述(MacLennan等人，(1988)Acta Physiol Scand Suppl 643：55-67；Sasaki等人，(1988)Adv Biophys 35：1-24)。对本发明的抗体的氨基酸置换可通过已知的方法进行，例如通过PCR诱变(美国专利No.4,683,195)进行。另选地，可例如使用随机(NNK)或非随机密码子(例如DVK密码子，其编码11个氨基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、Lys、Asn、Arg、Ser、Tyr、Trp))来产生变体文库。可使用本文所述的测定法来测试所得抗体变体的特征。

在一些实施方案中，抗CD38抗体可以一系列亲和力(K_D)结合人CD38。在一个实施方案中，抗CD38抗体以等于或小于约1×10^-8M(例如，5×10^-9M、1×10^-9M、5×10^-10M、1×10^{- 10}M、5×10^-11M、1×10^-11M、5×10^-12M、1×10^-12M、5×10^-13M、1×10^-13M、5×10^-14M、1×10^-14M或5×10^-15M)或者其中的任何范围或值的K_D结合到CD38，如本领域技术人员所实践那样通过表面等离子体共振或Kinexa方法所测得。示例性亲和力等于或小于1×10^-8M。另一示例性亲和力等于或小于1×10^-9M。

KinExA仪器、ELISA或竞争结合测定法是本领域技术人员已知的。如果在不同的条件(例如，同渗容摩、pH)下测量，特定抗体/CD38相互作用的测量亲和力可变化。因此，亲和力和其他结合参数(例如，K_D、K_on、K_off)的测量通常用标准化条件和标准化缓冲液(诸如本文所述的缓冲液)进行。本领域技术人员将理解，使用例如Biacore 3000或ProteOn进行亲和力测量的内部误差(测量为标准偏差，SD)通常可在典型检出限内的测量值的5％-33％内。因此，K_D背景下的术语“约”反映测定中的典型标准偏差。例如，1×10^-9M的K_D的典型SD为至多±0.33×10^-9M。

在一些实施方案中，抗CD38抗体是双特异性抗体。可将现有抗CD38抗体的VL和/或VH区或者如本文所述从头鉴定的VL和VH区工程化成双特异性全长抗体。此类双特异性抗体可通过使用诸如以下专利中所述的技术，通过调节抗体Fc中的CH3相互作用以形成双特异性抗体来制备：美国专利No.7,695,936、国际专利公布No.WO04/111233、美国专利公布No.US2010/0015133、美国专利公布No.US2007/0287170、国际专利公布No.WO2008/119353、美国专利公布No.US2009/0182127、美国专利公布No.US2010/0286374、美国专利公布No.US2011/0123532、国际专利公布No.WO2011/131746、国际专利公布No.WO2011/143545、或美国专利公布No.US2012/0149876。

例如，本发明的双特异性抗体可通过如下过程在无细胞环境中体外产生：根据国际专利公布No.WO2011/131746所述的方法，在两个单特异性同源二聚抗体的CH3区域中引入非对称突变，并在允许二硫键异构化的还原条件下由两个亲本单特异性同源二聚抗体形成双特异性异源二聚抗体。在所述方法中，将第一单特异性二价抗体(例如，抗CD38抗体)和第二单特异性二价抗体工程化为在CH3结构域处具有促进异源二聚体稳定性的某些置换；将这些抗体在足以使铰链区中的半胱氨酸发生二硫键异构化的还原条件下一起温育；从而通过Fab臂交换产生双特异性抗体。最佳的是，可将温育条件恢复至非还原条件。可使用的示例性还原剂为2-巯基乙胺(2-MEA)、二硫苏糖醇(DTT)、二硫赤藓糖醇(DTE)、谷胱甘肽、三(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱氨酸和β-巯基乙醇，优选地为选自2-巯基乙胺、二硫苏糖醇和三(2-羧乙基)膦的还原剂。例如，在存在至少25mM 2-MEA的情况下或在存在至少0.5mM二硫苏糖醇的情况下，在5-8的pH例如在pH为7.0或在pH为7.4以及至少20℃的温度下，可温育至少90分钟。

可用于双特异性抗体的第一重链和第二重链的示例性CH3突变是K409R和/或F405L。

本发明的抗体的VL区和/或VH区可结合到其中的另外的双特异性结构是例如双可变域(DVD)免疫球蛋白(国际专利公布No.WO2009/134776)或者包括多种二聚化域以连接具有不同特异性的两个抗体臂的结构，诸如亮氨酸拉链或胶原二聚化域(国际专利公布No.WO2012/022811、美国专利No.5,932,448、美国专利No.6,833,441)。DVD是全长抗体，其包含具有VH1-接头-VH2-CH结构的重链和具有VL1-接头-VL2-CL结构的轻链；接头是任选的。

在一些实施方案中，抗CD38抗体缀合至毒素。缀合方法和合适的毒素是熟知的。

在一些实施方案中，患有MM的受治疗者对于CD16的位置158处的苯丙氨酸是纯合的(FcγRIIIa-158F/F基因型)，或对于CD16的位置158处的缬氨酸和苯丙氨酸是杂合的(FcγRIIIa-158F/V基因型)。CD16也称为Fcγ受体IIIa(FcγRIIIa)或低亲和力免疫球蛋白γFc区受体III-A同种型。已证实FcγRIIIa蛋白残基位置158处的缬氨酸/苯丙氨酸(V/F)多态性会影响FcγRIIIa对人IgG的亲和力。与FcγRIIIa-158V/V相比，具有FcγRIIIa-158F/F或FcγRIIIa-158F/V多态性的受体展示出减弱的Fc接合及因此减轻的ADCC。人N-连接的低聚糖上不含或含少量岩藻糖提高了抗体诱导ADCC的能力，这是由于抗体与人FcγRIIIa(CD16)的结合得以改善(Shields等人，J Biol Chem 277：26733-40，2002)。可使用常规方法分析患者的FcγRIIIa多态性。

在一些实施方案中，生存素抑制剂是小分子。

在一些实施方案中，生存素抑制剂是多核苷酸。

生存素抑制剂可通过任何机制抑制生存素诱导的细胞凋亡，诸如抑制生存素基因转录或蛋白表达、抑制生存素蛋白二聚化、增强去稳定化或诱导其降解等。

示例性生存素小分子抑制剂是YM155。YM155结合到生存素启动子并抑制其转录。其他示例性的生存素小分子抑制剂是例如如美国专利No.6,608,108中所述的去甲二氢愈创木酸衍生物以及美国专利公布No.US2012/0122910中所述的分子。其他生存素多核苷酸抑制剂在例如美国专利No.6,838,283、国际专利公布No.WO01/057059、WO09/114476和WO09/044793中有所描述。多核苷酸抑制剂包括微RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、等位基因特异性寡核苷酸(ASO)以及本领域已知的其他多核苷酸抑制剂。

施用/药物组合物

在本发明的方法中，抗CD38抗体可在包含抗CD38抗体和药学上可接受的载体的合适的药物组合物中提供。载体可为抗CD38抗体与之一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或溶媒。此类溶媒可以是液体，诸如水和油，包括那些来源于石油、动物、植物的油或合成的油，诸如花生油、大豆油、矿物油和芝麻油等。例如，可使用0.4％生理盐溶液和0.3％甘氨酸。这些溶液是无菌的，并且通常不含颗粒物。它们可通过熟知的常规灭菌技术(例如过滤)进行灭菌。该组合物可根据需要含有药学上可接受的辅助物质以接近生理条件，诸如pH调节剂和缓冲剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂等。此类药物制剂中本发明的分子或抗体的浓度可广泛改变，即从小于约0.5重量％，通常到至少约1重量％至多达15重量％或20重量％，并且将根据所选择的具体施用模式，主要基于所需剂量、流体体积、粘度等进行选择。包含其他人蛋白(例如，人血清白蛋白)在内的合适的溶媒和制剂在例如Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，第21版，Troy，D.B.编辑，Lipincott Williams andWilkins，Philadelphia，PA2006，第5部分，Pharmaceutical Manufacturing，第691-1092页(特别参见第958-989页)中有所描述。

本发明的方法中的抗CD38抗体的施用模式可为任何合适的途径，诸如肠胃外施用，例如真皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内或皮下、肺部、粘膜(口腔、鼻内、阴道内、直肠)或如本领域所熟知的技术人员了解的其他方式。

本发明的方法中的抗CD38抗体可通过任何合适的途径施用给患者，例如通过静脉内(IV)输注或推注进行肠胃外施用，肌肉内施用或皮下施用或腹膜内施用。静脉内输注可在例如15、30、60、90、120、180或240分钟内或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小时内给予。

向患有CD38阳性恶性血液肿瘤的患者给予的剂量足以缓解或至少部分地遏止被治疗的疾病(“治疗有效量”)，并且有时可为0.005mg/kg至约100mg/kg，例如约0.05mg/kg至约30mg/kg或约5mg/kg至约25mg/kg，或约4mg/kg、约8mg/kg、约16mg/kg或约24mg/kg，或例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg，但可能甚至更高，例如约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70、80、90或100mg/kg。

也可以给予固定的单位剂量，例如50、100、200、500或1000mg，或者剂量可基于患者的表面积，例如500、400、300、250、200或100mg/m²。通常可施用介于1和8次之间(例如，1、2、3、4、5、6、7或8次)的剂量来治疗MM，但可给予9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多次的剂量。

可在一天、两天、三天、四天、五天、六天、一周、两周、三周、一个月、五周、六周、七周、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月或更长时间之后重复施用本发明的方法中的抗CD38抗体。也可以按照慢性施用那样重复疗程。重复施用可为相同剂量或不同剂量。例如，本发明的方法中的抗CD38抗体可通过静脉内输注以8mg/kg或以16mg/kg按一周的时间间隔施用8周，接着以8mg/kg或以16mg/kg按每两周一次的方式再施用16周，然后以8mg/kg或以16mg/kg按每四周一次的方式施用。

抗CD38抗体在本发明的方法中可通过维持治疗施用，诸如例如一周一次，持续6个月或更长时间。

例如，本发明的方法中的抗CD38抗体可在治疗开始后第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40天中的至少一天，或者另选地，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周中的至少一周，或其任何组合，使用单次剂量或者每24、12、8、6、4或2小时一次的分次剂量或其任何组合，以约0.1-100mg/kg的量作为日剂量提供，诸如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/kg/天。

本发明的方法中的抗CD38抗体也可预防性地施用，以降低罹患癌症的风险、延迟癌症进展中事件的发作和/或在癌症缓解后降低复发的风险。这对于肿瘤难以定位而由于他生物因素已知患有肿瘤的患者可能尤其有用。

本发明的方法中的抗CD38抗体可冻干以便于储存，使用之前可在合适的载体中复原。此项技术已被证实对常规的蛋白制剂有效，并且可采用熟知的冻干和复原技术。

在本发明的方法中，抗CD38抗体与生存素抑制剂联合施用。

在本发明的方法中，抗CD38抗体与生存素抑制剂YM1 55联合施用。

在本发明的方法中使用的YM155根据国际专利公布No.WO01/60803和WO2004/092160所公开的产生过程容易获得。

YM155可以口服施用或肠胃外施用或静脉内施用。就这一点而言，用于静脉内施用的注射制剂包括含有无菌水溶液或非水溶液、悬浮液和乳剂的制剂。水溶剂包括例如用于注射的蒸馏水以及生理盐水。非水溶剂包括例如丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油、醇诸如乙醇、聚山梨酸酯80等。此类组合物可含有其他张力调节剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂和增溶剂。例如，这些组合物可通过细菌过滤器过滤、灭菌器或辐射的共混来进行灭菌。另选地，可以制备无菌固体组合物，并在使用前立即将其溶解或悬浮于用于注射的无菌水或无菌溶剂中。

在静脉内施用中，YM155可例如以0.1-20mg/m²/天(诸如，以1-10mg/m²/天)按照一天一次或分多次剂量或者通过输注连续(连续滴注)施用。YM155可以3-10mg/m²/天连续输注4天至20天，例如4天至14天，或5天、7天、10天或14天和/或7天。当进一步继续施用时，可采用以下药物周期：其包括在上述药物期限结束之后为期1天至2个月、7天至21天或14天的药物假日期限。另选地，YM155可以3-8mg/m²/天的剂量通过输注连续施用7天，然后进入为期14天的药物假日；根据条件重复该周期一个周期。可适当地根据有关抗癌剂种类、患者状态、年龄、性别等个体情况确定施用频率、剂量、输注次数、药物周期等。

在本发明的方法中，抗CD38抗体和生存素抑制剂的组合可在任何方便的时间范围内施用。例如，抗CD38抗体和生存素抑制剂可在同一天施用给患者。然而，抗CD38抗体和生存素抑制剂也可隔天或隔周或隔月等施用。在一些方法中，抗CD38抗体和生存素抑制剂可在足够接近的时间施用，使得它们同时以可检测水平存在于被治疗的患者体内(例如，血清中)。在一些方法中，在一定时间段内由多个剂量组成的抗CD38抗体的整个疗程之后或之前是由多个剂量组成的生存素抑制剂疗程。可在施用抗CD38抗体和生存素抑制剂之间使用1、2或若干天或若干周的恢复期。

抗CD38抗体与生存素抑制剂组合可连同任何形式的放射疗法和/或外科手术一起施用，放射疗法包括外照射、调强放射疗法(IMRT))和/或任何形式的放射外科手术(包括伽玛刀、射波刀、直线加速器和组织间放射(例如，植入放射性粒子、GliaSite球囊)。

包含特异性结合CD38的抗体以及透明质酸酶的药物组合物的皮下施用

抗CD38抗体可作为包含抗CD38抗体和透明质酸酶的药物组合物皮下施用。

抗CD38抗体的浓度在皮下施用的药物组合物中可为约20mg/ml。

皮下施用的药物组合物可包含介于约1200mg至1800mg之间的抗CD38抗体。

皮下施用的药物组合物可包含约1,200mg的抗CD38抗体。

皮下施用的药物组合物可包含约1,600mg的抗CD38抗体。

皮下施用的药物组合物可包含约1,800mg的抗CD38抗体。

皮下施用的药物组合物可包含介于约30,000U至45,000U之间的透明质酸酶。

皮下施用的药物组合物可包含约1,200mg的抗CD38抗体和约30,000U的透明质酸酶。

皮下施用的药物组合物可包含约1,800mg的抗CD38抗体和约45,000U的透明质酸酶。

皮下施用的药物组合物可包含约1,600mg的抗CD38抗体和约30,000U的透明质酸酶。

皮下施用的药物组合物可包含约1,600mg的抗CD38抗体和约45,000U的透明质酸酶。

皮下施用的药物组合物可包含具有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的透明质酸酶rHuPH20。

rHuPH20是一种重组透明质酸酶(

重组体)，在国际专利公布No.WO2004/078140中有所描述。

透明质酸酶是一种降解透明质酸(EC 3.2.1.35)并降低细胞外基质中透明质酸的粘度从而增加组织渗透性的酶。

SEQ ID NO：23

MGVLKFKHIFFRSFVKSSGVSQIVFTFLLIPCCLTLNFRAPPVIPNVPFLWAWNAPSEFCLGKFDEPLDMSLFSFIGSPRINATGQGVTIFYVDRLGYYPYIDSITGVTVNGGIPQKISLQDHLDKAKKDITFYMPVDNLGMAVIDWEEWRPTWARNWKPKDVYKNRSIELVQQQNVQLSLTEATEKAKQEFEKAGKDFLVETIKLGKLLRPNHLWGYYLFPDCYNHHYKKPGYNGSCFNVEIKRNDDLSWLWNESTALYPSIYLNTQQSPVAATLYVRNRVREAIRVSKIPDAKSPLPVFAYTRIVFTDQVLKFLSQDELVYTFGETVALGASGIVIWGTLSIMRSMKSCLLLDNYMETILNPYIINVTLAAKMCSQVLCQEQGVCIRKNWNSSDYLHLNPDNFAIQLEKGGKFTVRGKPTLEDLEQFSEKFYCSCYSTLSCKEKADVKDTDAVDVCIADGVCIDAFLKPPMETEEPQIFYNASPSTLSATMFIVSILFLIISSVASL

可在一天、两天、三天、四天、五天、六天、一周、两周、三周、四周、五周、六周、七周、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月或更长时间之后重复施用包含抗CD38抗体和透明质酸酶的药物组合物。也可以按照慢性施用那样重复疗程。重复施用可为相同剂量或不同剂量。例如，包含抗CD38抗体和透明质酸酶的药物组合物可一周一次施用八周，然后两周一次施用16周，之后四周一次。待施用的药物组合物可包含约1,200mg的抗CD38抗体和约30,000U的透明质酸酶，其中药物组合物中特异性结合CD38的抗体的浓度为约20mg/ml。待施用的药物组合物可包含约1,800mg的抗CD38抗体和约45,000U的透明质酸酶。待施用的药物组合物可包含约1,600mg的抗CD38抗体和约30,000U的透明质酸酶。待施用的药物组合物可包含约1,600mg的抗CD38抗体和约45,000U的透明质酸酶。

包含抗CD38抗体和透明质酸酶的药物组合物可皮下施用到腹部区域。

包含抗CD38抗体和透明质酸酶的药物组合物可以约80ml、90ml、100ml、110ml或120ml的总体积施用。

对于施用，可将25mM乙酸钠、60mM氯化钠、140mM D-甘露糖醇、0.04％聚山梨酸酯20(pH5.5)中的20mg/ml抗CD38抗体与10mM L-组氨酸、130mM NaCl、10mM L-甲硫氨酸、0.02％聚山梨酸酯80(pH6.5)中的1.0mg/mL rHuPH20(75-150kU/mL)混合，然后将混合物施用给受治疗者。

本发明的其他实施方案

1.一种用于与生存素抑制剂联合治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的抗CD38抗体。

2.一种用于与抗CD38抗体联合治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的生存素抑制剂。

3.用于治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的抗CD38抗体和生存素抑制剂的组合。

4.根据实施方案1使用的抗CD38抗体、根据实施方案2使用的生存素抑制剂或根据实施方案3所述的组合，其中CD38阳性恶性血液肿瘤是多发性骨髓瘤(MM)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、急性髓性白血病(AML)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。

5.根据实施方案1或4使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4所述的组合，其中CD38阳性恶性血液肿瘤是浆细胞疾病。

6.根据实施方案1、4或5使用的抗CD38抗体、根据实施方案2、4或5使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3、4或5所述的组合，其中浆细胞疾病是轻链淀粉样变性(AL)、多发性骨髓瘤(MM)或华氏巨球蛋白血症。

7.根据实施方案1或4-6中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-6中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-6中任一项所述的组合，其中浆细胞疾病是MM。

8.根据实施方案1或4-7中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-7中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-7中任一项所述的组合，其中抗CD38抗体通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、补体依赖性细胞毒性(CDC)或细胞凋亡诱导CD38阳性细胞杀伤。

9.根据实施方案1或4-8中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-8中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-8中任一项所述的组合，其中抗CD38抗体是

a.IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型；或者

b.IgG1同种型。

10.根据实施方案1或4-9中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-9中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-9中任一项所述的组合，其中抗CD38抗体

a.与包含SEQ ID NO：4的重链可变区(VH)和SEQ ID NO：5的轻链可变区(VL)的抗体竞争结合CD38；

b.结合到人CD38(SEQ ID NO：1)的区域SKRNIQFSCKNIYR(SEQ ID NO：2)和区域EKVQTLEAWVIHGG(SEQ ID NO：3)；

c.包含分别为SEQ ID NO：6、7和8的重链互补决定区(HCDR)1(HCDR1)、2(HCDR2)和3(HCDR3)序列；

d.包含分别为SEQ ID NO：9、10和11的轻链互补决定区

(LCDR)1(LCDR1)、2(LCDR2)和3(LCDR3)序列；

e.包含分别为SEQ ID NO：6、7、8、9、10和11的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；

f.包含含有与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的重链可变区(VH)，以及含有与SEQ ID NO：5的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(VL)；

g.包含SEQ ID NO：4的重链可变区(VH)和SEQ ID NO：5的轻链可变区(VL)；

h.包含以下情况的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3：

i.SEQ ID NO：14的VH和SEQ ID NO：15的VL；

ii.SEQ ID NO：16的VH和SEQ ID NO：17的VL；

iii.SEQ ID NO：18的VH和SEQ ID NO：19的VL；或者

iv.SEQ ID NO：20的VH和SEQ ID NO：21的VL；或者

i.包含：

i.SEQ ID NO：14的VH和SEQ ID NO：15的VL；

ii.SEQ ID NO：16的VH和SEQ ID NO：17的VL；

iii.SEQ ID NO：18的VH和SEQ ID NO：19的VL；或者

iv.SEQ ID NO：20的VH和SEQ ID NO：21的VL。

11.根据实施方案1或4-10中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-10中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-10中任一项所述的组合，其中抗CD38抗体包含SEQ ID NO：4的重链可变区(VH)和SEQ ID NO：5的轻链可变区(VL)。

12.根据实施方案1或4-11中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-11中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-11中任一项所述的组合，其中生存素抑制剂是小分子或多核苷酸或疫苗。

13.根据实施方案1或4-12中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-12中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-12中任一项所述的组合，其中生存素抑制剂是YM155。

14.根据实施方案1或4-13中任一项使用的抗CD38抗体、根据实施方案2或4-13中任一项使用的生存素抑制剂、或根据实施方案3或4-13中任一项所述的组合，其中抗CD38抗体和生存素抑制剂同时、依序或分开施用。

15.一种用于与生存素抑制剂联合治疗患有CD38阳性恶性血液肿瘤的受治疗者的抗CD38抗体，其中抗CD38抗体包含分别为SEQ ID NO：6、7、8、9、10和11的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。

16.根据实施方案15使用的抗CD38抗体，其中抗CD38抗体包含SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：5的VL。

17.根据实施方案15或16使用的抗CD38抗体，其中抗CD38抗体是IgG1同种型。

18.根据实施方案15-17中任一项使用的抗CD38抗体，其中抗CD38抗体包含SEQ IDNO：12的重链和SEQ ID NO：13的轻链。

19.根据实施方案15-18中任一项使用的抗CD38抗体，其中抗CD38抗体和生存素抑制剂同时、依序或分开施用。

20.根据实施方案15-19中任一项使用的抗CD38抗体，其中抗CD38抗体静脉内施用。

21.根据实施方案15-19中任一项使用的抗CD38抗体，其中抗CD38抗体在包含抗CD38抗体和透明质酸酶的药物组合物中皮下施用。

22.根据实施方案21使用的抗CD38抗体，其中透明质酸酶是SEQ ID NO：23的rHuPH20。

23.根据实施方案15-22中任一项使用的抗CD38抗体，其中CD38阳性恶性血液肿瘤是多发性骨髓瘤。

虽然已经概括地描述了本发明，但是本发明的实施方案还将在以下实施例中进一步公开，以下实施例不应理解为限制权利要求的范围。

材料和方法

细胞和细胞培养

骨髓单核细胞(BM-MNC)和外周血单核细胞(PBMC)

根据赫尔辛基宣言，使用由机构医学伦理委员会批准的方案和程序从MM患者或健康个体中收集骨髓(BM)抽吸物以及从健康个体中收集外周血(PB)。通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分别从PB样品或BM抽吸物中分离健康供体(HD)-PBMC和BM-MNC。将PBMC直接用作ADCC实验中的效应细胞；将BM-MNC冷冻保存直至使用。

多发性骨髓瘤(MM)细胞系

在37℃下以及含有5％CO₂的潮湿气氛中，将荧光素酶(Luc)转导的人MM细胞系RPMI-8226和UM9维持在补充有10％胎牛血清(FBS，Invitrogen)和抗生素(青霉素/链霉素，Life Technologies)的RPMI1640(Invitrogen)中。

骨髓基质细胞(BMSC)

通过塑料粘附从健康个体(hBMSC)或MM患者(pBMSC)的BM-MNC中分离并培养粘附基质细胞。细胞在含有5％血小板裂解物、肝素和抗生素的Optimem(Invitrogen)中培养。实验中使用hBMSC至第6代，而pBMSC在第1代或第2代之后使用。

试剂

将YM155(Sepantronium Bromide，4，9-二氢-1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4，9-二氧代-3-(2-吡嗪基甲基)-1H-萘基[2，3-d]咪唑鎓溴化物，CAS 781661-94-7)(SelleckChemicals)以1mM的浓度溶于二甲基亚砜(DMSO)中，并且等分储存直至使用。将YM155在培养基中稀释为每个实验中指定的浓度。

YM1 55；式I：

针对多发性骨髓瘤细胞系的基于区室特异性生物发光的抗体依赖性细胞介导的 细胞毒性(ADCC)(“基于区室特异性BLI的细胞毒性测定”)

将hBMSC以1×10⁴个细胞/孔的密度接种在含有100μl培养基的白色不透明平底96孔板(Costar)中。在进行六个小时的粘附之后，将luc转导的MM细胞系以1×10⁴个细胞/孔的密度加入BMSC包被或未包被的孔中。在测试YM155的实验中，将YM155与MM细胞一起以指定浓度加入。16至20小时后，以指定浓度加入达雷木单抗，并在室温下放置15分钟。然后将从健康个体中新鲜分离的PBMC作为效应细胞以指定效应靶标比例加入。加入PBMC 4小时后，加入125μg/ml甲虫荧光素(Promega)，并使用光度计(SpectraMax，Molecular Devices)在20分钟内测定由存活的MM细胞发出的生物发光信号。使用下式计算MM细胞的存活百分比：存活率％＝(不存在PBMC时的平均生物发光信号/存在PBMC时的平均生物发光信号)×100％。在这些测定中，MM细胞的存活率是ADCC介导的裂解的直接反映并且与经典铬释放测定相关，如McMillin等人，Nat Med 16：483-489，2010中所描述。

多发性骨髓瘤BM-MNC中基于FACS的ADCC测定

在基于FACS的ADCC测定中使用来自CD138⁺MM细胞为15％-35％的MM患者的冷冻BM-MNC。将细胞解冻并在含10％HS的RPMI中培养。16至20小时后，通过台盼蓝拒染法对BM-MNC进行计数，并以4×10⁴个细胞/孔的密度接种在96孔圆底培养板中。按照每个实验所指定的，将达雷木单抗和/或YM155加入孔中。24小时后，细胞用荧光缀合的抗CD138、抗CD38、抗CD56和抗CD3抗体染色，并且通过如前所述的FACS测定BM-MNC中原代CD138⁺MM细胞的存活率(Groen等人，Blood 120：e9-e16，2012)。使用下式推导MM细胞的裂解百分比：裂解细胞％＝1-(处理孔中存活的CD138⁺细胞计数/对照孔中存活的CD138⁺细胞计数)×100％。

流式细胞术

为了确定MM细胞上的CD38表达水平，将MM细胞单独或与BMSC一起培养，并与CD38荧光素缀合的抗体一起温育。另外，细胞用作为BMSC的标记物的CD105染色。通过所述的FACS测定CD105阴性细胞上的CD38表达(de Haart等人，Clin Cancer Res 19：5591-601，2013)。

体内肿瘤靶向实验

在体外用载有Luc⁺MM细胞系UM9(1×10⁶个细胞/支架)的HD-BMSC包被由三个2至3mm双相磷酸钙颗粒组成的复合支架，然后如前所述将其植入RAG2^-/-γc^-/-小鼠体内(Groen等人，Blood 120：e9-e16，2012)。植入十天后，用溶媒对照、达雷木单抗+PBS或达雷木单抗+YM155处理肿瘤在支架中生长的小鼠。另外，每只小鼠(包括对照组)还接受去除T细胞的HD-PBMC(5×10⁶个细胞)作为人NK细胞来源以诱导ADCC。使用连续递送1mg/kg/d的药物的皮下输注泵(Alzet 1007D)施用PBS和在PBS中稀释的YM155。10天后移除泵。如前所述进行BLI(Spaapen等人，C1in Cancer Res 16：5481-88，2010；Rozemuller等人，Haematologica 93：1049-57，2008)。

颗粒酶B酶联免疫吸附测定(ELISA)

根据制造商的说明书，使用商业ELISA试剂盒(Pelipair，Sanquin，Amsterdam，NL)测定无细胞上清液的颗粒酶B(GzB)含量。

实施例1.骨髓基质细胞赋予针对多发性骨髓瘤细胞的抗体依赖性细胞毒性的保 护作用

由于骨髓(BM)微环境的基质细胞可保护MM细胞免受CTL和NK介导的细胞毒性，因此评估了是否对由达雷木单抗诱导的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)发生类似的保护作用。

在存在或不存在HD-PBMC作为基于区室特异性BLI的细胞毒性测定中的效应细胞的情况下，利用连续浓度的达雷木单抗测试了健康供体BMSC对两种CD38⁺萤光素酶转导的MM细胞系(即UM9和RPMI)的ADCC诱导。在不存在BMSC的情况下，达雷木单抗以剂量依赖性方式在两种MM细胞系中介导ADCC。在存在BMSC的情况下，两种细胞系对达雷木单抗诱导的ADCC不太敏感。图1A示出了BMSC在UM9细胞中对达雷木单抗诱导的ADCC的效果，图1B示出了BMSC在RPMI-8226细胞中对达雷木单抗诱导的ADCC的效果。

还使用上述方法在基于FACS的ADCC测定中，评估了BMSC保护原代MM细胞免受达雷木单抗诱导的ADCC的能力。在测定中，将含有至少15％CD138⁺恶性浆细胞的BM-MNC和足够数量的自体效应NK细胞与达雷木单抗一起温育以诱导ADCC。单独或与自体BMSC共培养测试BM-MNC，以评估BMSC的效果。在培养24小时后进行基于FACS的活力测定，以确定CD138⁺存活细胞并计算裂解率。在所测试的两种供体中，存在自体MM-BMSC时原代MM细胞的ADCC的诱导效率较低(图2A和图2B)，表明肿瘤微环境的基质细胞诱导了对达雷木单抗疗法的抗性。

实施例2.BMSC诱导的ADCC抑制并非由CD38下调或NK细胞抑制引起。

评估了CD38表面表达和NK细胞活化的可能变化，以理解BMSC介导的针对ADCC的保护机制。

在存在或不存在健康供体BMSC的情况下培养MM细胞系UM9和RPMI-8226。MM细胞与BMSC的共培养不会下调任一MM细胞系上的CD38表达水平(数据未示出)。

由于已知BMSC会产生多种免疫抑制因子诸如IDO、TGF-β或PGE-2，因此BMSC针对ADCC的保护作用可能是由于抑制了NK细胞活化，进而降低了它们脱粒和释放颗粒酶B以及免疫突触中的穿孔素的能力，从而杀死它们靶标。为此，使用达雷木单抗介导的颗粒酶B分泌物作为NK细胞活性的标记物来测定由达雷木单抗引起的BMSC对NK细胞活化的影响。在存在BMSC的情况下，上清液中的颗粒酶B水平一般较高(数据未示出)。因此，BMSC介导的针对ADCC的保护作用可能不是由于NK细胞抑制。

实施例3.生存素抑制剂消除了BMSC介导的针对ADCC的保护作用，并且与达雷木单 抗一起提供了协同的ADCC介导的杀伤多发性骨髓瘤细胞

已证实BMSC通过上调MM细胞中的生存素来保护MM细胞免受CTL裂解。使用YM155(一种生存素的小分子抑制剂)，按照BMSC介导的针对由达雷木单抗诱导的ADCC的保护作用的可能机制，对生存素的调节进行了评估。

首先评估了YM155对NK细胞活力的影响。在存在不同剂量的YM155的情况下，将MM患者的BM-MNC培养24小时。通过FACS测定MM细胞(CD138⁺细胞)和NK细胞(CD3^-CD138^-CD56⁺细胞)的活力。在已经对MM细胞表现出一些毒性的YM155剂量下，NK细胞并不受影响(图3)。

使用表现出对NK细胞无毒性的YM155浓度，在RPMI-8226细胞和两个MM患者样品中评估了达雷木单抗、YM155或达雷木单抗和YM155的组合的效果。

在测定中，对于RPMI-8226细胞，分别以0.3μg/ml和1nM的浓度使用达雷木单抗和YM155；对于MM患者样品，分别以1μg/ml和120nM的浓度使用达雷木单抗和YM155。对于RPMI-8226细胞，以40∶1的效应细胞∶靶细胞比例将健康供体PBMC周作效应细胞，对于MM患者样品，以30∶1的效应细胞∶靶细胞比例将健康供体PBMC用作效应细胞。

在RPMI-8226细胞中，在不存在BMSC的情况下，单独的达雷木单抗或单独的YM155诱导了约20％的细胞裂解。在存在BMSC的情况下，达雷木单抗诱导了约10％的细胞裂解，而YM155没有效果。达雷木单抗和YM155的组合提供了协同作用，在不存在BMSC的情况下诱导了约50％的细胞裂解，在存在BMSC的情况下诱导了约45％的细胞裂解(图4A)。达雷木单抗和YM155的组合在BMSC中的协同作用是约5倍。类似地，达雷木单抗和YM155的组合在使用120nM YM155的MM患者样品1中(图4B)提供了协同作用，在使用较低量的YM155(64nM)的MM患者样品2中(图4C)以及在来源于4名患者的MM细胞的组合样品中(图4D)提供了中等协同作用。因此，YM155消除了BMSC对MM细胞和细胞系中达雷木单抗介导的ADCC的保护作用。

因此，生存素上调可能是抑制ADCC介导的MM细胞杀伤的重要机制，这可通过药物调节生存素来预防。

实施例4.达雷木单抗和YM155组合疗法的体内抗肿瘤作用

在RAG2^-/-gc^-/-小鼠的临床前异种移植模型中测试了达雷木单抗与YM155的组合的体内相关性，其中MM肿瘤在通过皮下植入包被有人BMSC的陶瓷支架而形成的人源化BM样微环境中生长。将包被有人MSC且载有萤光素酶转导的MM细胞系UM9的复合支架皮下植入RAG2^-/-γc^-/-小鼠的背部(每只小鼠4个支架)。植入十天后，通过BLI显现并定量生长的肿瘤。然后用溶媒对照(对照)处理或者用达雷木单抗、YM155或达雷木单抗+YM155处理不同组的小鼠(n＝4)。利用皮下输注泵，将YM155或其溶媒即PBS以1mg YM155/kg/天的速率递送10天。每只小鼠(包括对照组)接受去除T细胞的HD-PBMC(5×10⁶个细胞)作为人NK细胞来源以诱导ADCC。每周通过BLI监测小鼠。图5示出了每组的相对肿瘤生长。使用Mann-Whitney U检验计算用达雷木单抗处理的小鼠与用达雷木单抗+YM155处理的小鼠之间的统计学差异。达雷木单抗对肿瘤生长具有边缘效果。YM155的抗MM效果更明显，此外还与达雷木单抗表现出较强的协同作用，可显著改善抗MM效果。这些结果表明，可根据达雷木单抗与生存素抑制剂YM155的组合预期临床益处。

所呈现的结果表明，用小分子YM155抑制生存素水平不仅在不存在BMSC的情况下改善了达雷木单抗介导的ADCC，而且更重要的是消除了由BMSC诱导的ADCC抗性。在不存在BMSC的情况下，将YM155加入达雷木单抗中也表现出增强的抗肿瘤效果，这表明YM155-达雷木单抗组合疗法具有潜在益处，即使MM细胞不与BMSC直接接触，诸如在浆细胞白血病中。此外，在存在BMSC的情况下，ADCC的显著改善(MM细胞裂解达到多至四倍改善)表明，对于存在于BM中的MM细胞，可实现将达雷木单抗治疗与YM155组合的更大益处。还表明，YM155治疗不会负面干扰NK细胞功能或活力，这是考虑临床应用该组合疗法的先决条件。

虽然在多发性骨髓瘤中证明了达雷木单抗与YM155组合的功效，但是可以推断该组合疗法对于表达CD38的其他血液肿瘤、尤其是主要存在于BM的血液肿瘤也是有益的。在这方面，AML是杰出的候选者，因为AML细胞不仅表达高水平的CD38，而且表达高水平的生存素，而高水平的生存素是不良临床结果的预测因素。另一个用于组合疗法的潜在候选者可为CLL，因为CLL细胞在BM中具有高生存素表达，并且在一些患者中表达CD38。在约50％的非霍奇金淋巴瘤中具有高CD38和生存素表达，使得这种疾病也与YM155-达雷木单抗组合的功效评估有关。总而言之，达雷木单抗和YM155的组合可广泛适用于各种血液肿瘤。

Claims (15)

1.抗CD38抗体和生存素抑制剂在制备用于治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受治疗者的药物中的用途，其中所述抗CD38抗体包含分别为SEQ ID NO: 6、7和8的重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列以及分别为SEQ ID NO: 9、10和11的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列，并且属于IgG1同种型，并且其中所述生存素抑制剂是YM155。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗CD38抗体与包含SEQ ID NO: 4的重链可变区(VH)和SEQ ID NO: 5的轻链可变区(VL)的抗体竞争结合CD38。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗CD38抗体结合到SEQ ID NO: 1的人CD38的区域SKRNIQFSCKNIYR和区域EKVQTLEAWVIHGG。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗CD38抗体包含SEQ ID NO: 4的VH和SEQ IDNO: 5的VL。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗CD38抗体包含SEQ ID NO: 12的重链氨基酸序列和SEQ ID NO: 13的轻链氨基酸序列。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述抗CD38抗体通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、补体依赖性细胞毒性(CDC)或细胞凋亡诱导CD38阳性细胞杀伤。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述抗CD38抗体和所述生存素抑制剂待同时施用。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述抗CD38抗体待静脉内施用。

9.根据权利要求7所述的用途，其中所述抗CD38抗体待皮下施用并且其中所述药物还包含透明质酸酶。

10.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述抗CD38抗体和所述生存素抑制剂待分开施用。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述抗CD38抗体和所述生存素抑制剂待依序施用。

12.根据权利要求10所述的用途，其中所述抗CD38抗体待静脉内施用。

13.根据权利要求10所述的用途，其中所述抗CD38抗体待皮下施用并且其中所述药物还包含透明质酸酶。

14.根据权利要求11所述的用途，其中所述抗CD38抗体待静脉内施用。

15.根据权利要求11所述的用途，其中所述抗CD38抗体待皮下施用并且其中所述药物还包含透明质酸酶。

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