TWI500624B - 具有增進之抗體依賴型細胞毒性之第ii型抗－ｃｄ２０抗體之組合療法 - Google Patents

具有增進之抗體依賴型細胞毒性之第ii型抗－ｃｄ２０抗體之組合療法 Download PDF

Info

Publication number
TWI500624B
TWI500624B TW098109412A TW98109412A TWI500624B TW I500624 B TWI500624 B TW I500624B TW 098109412 A TW098109412 A TW 098109412A TW 98109412 A TW98109412 A TW 98109412A TW I500624 B TWI500624 B TW I500624B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
type
cancer
cell
adcc
Prior art date
Application number
TW098109412A
Other languages
English (en)
Other versions
TW200951141A (en
Inventor
Charles Dumontet
Thomas Friess
Frank Herting
Christian Klein
Pablo Umana
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Roche Glycart Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=40872445&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TWI500624(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche, Roche Glycart Ag filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of TW200951141A publication Critical patent/TW200951141A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI500624B publication Critical patent/TWI500624B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/475—Quinolines; Isoquinolines having an indole ring, e.g. yohimbine, reserpine, strychnine, vinblastine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/664—Amides of phosphorus acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

具有增進之抗體依賴型細胞毒性之第II型抗-CD20抗體之組合療法
本發明係關於具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體用以製造藥劑之用途，該藥劑與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之化學治療劑組合用於治療癌症，尤其是表現CD20之癌症。
CD20分子(亦稱為人類B-淋巴細胞限制分化抗原或Bp35)係位於前B淋巴細胞及成熟B淋巴細胞上之分子量約為35kD的疏水性跨膜蛋白(Valentine等人，J. Biol. Chem. 264(19)(1989)11282-11287；及Einfield等人，EMBO J. 7(3)(1988)711-717)。在大於90%的來自外周血或淋巴器官之B細胞表面上發現CD20且其在早期前B細胞發育期間表現並保留直至漿細胞分化。CD20存在於正常B細胞以及惡性B細胞二者上。具體而言，CD20在大於90%的B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(B cell non-Hodgkin's lymphomas)(NHL)上表現(Anderson等人，Blood 63(6)(1984)1424-1433)，但在造血幹細胞、祖B細胞、正常漿細胞、或其他正常組織上未發現CD20(Tedder等人，J,Immunol. 135(2)(1985)973-979)。
CD20蛋白之85胺基酸羧基-末端區域位於細胞質內。該區域之長度與其他B細胞特異性表面結構之長度截然不同，該等其他B細胞特異性表面結構係例如IgM、IgD、及IgG重鏈或組織相容性抗原第I1類a或β鏈，其分別具有3、3、28、15、及16個胺基酸之相對較短的細胞質內區域(Komaromy,M.等人，NAR 11(1983)6775-6785)。在最後61個羧基-末端胺基酸中，有21個酸性殘基，而僅有2個鹼性殘基，表明該區域具有強烈的淨負電荷。GenBank登記號為NP-690605。吾人認為CD20可能參與調節B細胞激活及分化過程之早期步驟(Tedder,T.F.等人，Eur. J. Immunol. 25 16(1986)881-887)且可能起鈣離子通道作用(Tedder,T.F.等人，J. Cell. Biochem. 14D(1990)195)。
存在兩種CD20結合模式及生物活性顯著不同之不同類型的抗-CD20抗體(Cragg,M.S.等人，Blood 103(2004)2738-2743；及Cragg,M.S.等人，Blood，101(2003)1045-1051)。第I型抗體(例如利妥昔單抗(rituximab))在補體調介之細胞毒性中具有強效，而第II型抗體(例如托西莫單抗(Tositumomab)(B1)、11B8、AT80或人類化B-Ly1抗體)可經由半胱天冬酶非依賴性細胞凋亡同時磷脂醯絲胺酸暴露有效引發靶細胞死亡。
第I型及第II型抗-CD20抗體之共有特徵概述於表1中。
本發明包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體用以製造藥劑之用途，該藥劑與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑組合用於治療表現CD20之癌症。
本發明進一步包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體用以製造藥劑之用途，該藥劑與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑組合用於治療患有表現CD20之癌症的患者。
本發明進一步包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體，其與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑組合用於治療表現CD20之癌症。
本發明進一步包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體，其與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑組合用於治療患有表現CD20之癌症的患者。
較佳地，使用具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體之治療係與環磷醯胺及長春新鹼組合。
本發明提供一種醫藥組合物，其包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑二者，其用於表現CD20之癌症，尤其是B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。
較佳地，該第II型抗-CD20抗體係經糖改造之人類化B-Ly1抗體。
術語「抗體」涵蓋保留本發明特徵性特性之各種形式抗體，包括但不限於全抗體、人類抗體、人類化抗體及諸如單株抗體、嵌合抗體或重組抗體等基因改造抗體以及該等抗體之片段。本文所用之術語「單株抗體」或「單株抗體組合物」係指具有單一胺基酸組成之抗體分子製品。因此，術語「人類單株抗體」係指具有衍生自人類種系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區之展示單一結合特異性的抗體。在一個實施例中，人類單株抗體係藉由雜交瘤產生，該雜交瘤包括與無限增殖化細胞融合之自轉基因非人類動物(例如轉基因小鼠)獲得之B細胞，該轉基因非人類動物具有包含人類重鏈轉基因及人類輕鏈轉基因之基因組。
較佳地，該第II型抗-CD20抗體係單株抗體。
術語「嵌合抗體」係指包含來自一種來源或物種之可變區(即，結合區)及衍生自不同來源或物種之恆定區之至少一部分的單株抗體，其通常藉由重組DNA技術來製備。包含鼠科動物可變區及人類恆定區之嵌合抗體尤其佳。此等鼠科動物/人類嵌合抗體係免疫球蛋白基因之表現產物，該等免疫球蛋白基因包含編碼鼠科動物免疫球蛋白可變區之DNA片段及編碼人類免疫球蛋白恆定區之DNA片段。本發明所涵蓋之其他形式「嵌合抗體」係彼等源自原始抗體者之經修飾或改變之類別或亞類。該等「嵌合」抗體亦被稱為「經類別轉換之抗體」。產生嵌合抗體之方法包括已為熟習此項技術者所熟知之習用重組DNA及基因轉染技術。參見，例如，Morrison,S.L.等人，Proc. Natl. Acad Sci. USA 81(1984)6851-6855；美國專利第5,202,238號及美國專利第5,204,244號。
術語「人類化抗體」係指框架或「互補決定區」(CDR)已修飾成包含與親本免疫球蛋白相比具有不同特異性之免疫球蛋白之CDR的抗體。在一較佳實施例中，將鼠科動物CDR移植入人類抗體之框架區中以製備「人類化抗體」。參見，例如，Riechmann,L.等人，Nature 332(1988)323-327；及Neuberger,M.S.等人，Nature 314(1985)268-270。尤佳CDR對應於彼等可識別嵌合及雙功能抗體之上述抗原之代表序列。
本文所用之術語「人類抗體」意欲包括具有衍生自人類種系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區之抗體。人類抗體已為當前技術領域所熟知(van Dijk,M.A.及van de Winkel,J.G.，Curr. Opin. Pharmacol. 5(2001)368-374)。基於該技術，可製備對抗多種靶標之人類抗體。人類抗體之實例闡述於(例如)Kellermann,S. A.等人，Curr Opin Biotechnol.13(2002)593-597中。
本文所用之術語「重組人類抗體」意欲包括所有可藉由重組手段製備、表現、產生或分離之人類抗體，例如分離自諸如NS0或CHO細胞等宿主細胞或分離自人類免疫球蛋白基因之轉基因動物(例如小鼠)的抗體、或使用轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體。該等重組人類抗體具有衍生自人類種系免疫球蛋白序列之呈重排形式的可變區及恆定區。本發明之重組人類抗體已經受活體內體細胞超突變。因此，重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列係雖然衍生自人類種系VH及VL序列且與之相關但非天然存在於人類抗體種系譜活體內中之序列。
本文所用之「特異性結合(specifically binding或binds specifically to)」係指抗體與CD20抗原特異性結合。較佳地，結合親和力具有10-9 mol/l或更低(例如10-10 mol/l)之KD值，較佳具有10-10 mol/l或更低(例如10-12 mol/l)之KD值。利用在表現CD20之細胞上實施諸如Scatchard作圖分析等標準結合分析來測定結合親和力。
本文所用之術語「核酸分子」意欲包括DNA分子及RNA分子。核酸分子可為單鏈或雙鏈，但較佳係雙鏈DNA。
「恆定結構域」並不直接參與抗體與抗原之結合，而是參與效應子功能(ADCC、補體結合、及CDC)。
本文所用之「可變區」(輕鏈之可變區(VL)、重鏈之可變區(VH))代表每一對直接參與抗體與抗原結合之輕鏈及重鏈。可變人類輕鏈及重鏈結構域具有相同之通用結構，且每一結構域包含四個序列高度保守之框架(FR)區，該等FR區經由三個「超變區」(或互補決定區，CDR)連接。框架區採用b-折疊構象且CDR可形成連接b-折疊結構之環。每一鏈中之CDR係藉由框架區來保持其三維結構，並與另一鏈中之CDR一起形成抗原結合位點。抗體重鏈及輕鏈之CDR3區在本發明抗體之結合特異性/親和力方面發揮特別重要之作用，且藉此可提供本發明之又一目的。
本文所用之術語「超變區」或「抗體之抗原結合部分」係指抗體中負責與抗原結合之胺基酸殘基。超變區包含來自「互補決定區」或「CDR」之胺基酸殘基。「框架」或「FR」區係彼等除本文所定義的超變區殘基以外之可變結構域區。因此，抗體之輕鏈及重鏈從N-端至C-端包含結構域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。尤其而言，重鏈之CDR3係對抗原結合貢獻最大之區域。CDR及FR區係根據Kabat等人之標準定義(Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))及/或彼等來自「超變環」之殘基來確定。
術語「CD20」與「CD20抗原」在本文中可互換使用，且包括由細胞天然表現或在經CD20基因轉染之細胞中表現之人類CD20的任何變體、異型體及物種同系物。本發明抗體與CD20抗原之結合藉由使CD20失活來調介殺死表現CD20之細胞(例如，腫瘤細胞)。殺死表現CD20之細胞可藉由一或多種以下機制發生：細胞死亡/細胞凋亡誘導、ADCC及CDC。
業內認定，CD20之同義詞包括B-淋巴細胞抗原CD20、B-淋巴細胞表面抗原B1、Leu-16、Bp35、BM5、及LF5。
本發明之術語「抗-CD20抗體」係與CD20抗原特異性結合之抗體。端視抗-CD20抗體與CD20抗原之結合特性及生物活性，根據Cragg,M.S.等人，Blood 103(2004)2738-2743；及Cragg,M.S.等人，Blood 101(2003)1045-1051，可分成兩種抗-CD20抗體類型(第I型及第II型抗-CD20抗體)，參見表2。
第I型及第II型抗-CD20抗體之一個基本特性係其結合模式。因此，第I型及第II型抗-CD20抗體可藉由該抗-CD20抗體與利妥昔單抗相比與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比來分類。
對於第II型抗-CD20抗體而言，該抗-CD20抗體與利妥昔單抗相比與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比為0.3至0.6，較佳為0.35至0.55，更佳為0.4至0.5。該等第II型抗-CD20抗體之實例包括(例如)托西莫單抗(tositumomab)(B1 IgG2a)、人類化B-Ly1抗體IgG1(WO2005/044859中揭示之嵌合人類化IgG1抗體)、11B8 IgG1(揭示於WO 2004/035607中)、及AT80 IgG1。較佳地，該第II型抗-CD20抗體係與人類化B-Ly1抗體(揭示於WO 2005/044859中)結合相同抗原決定部位之單株抗體。
與第II型抗體相比，對於第I型抗-CD20抗體而言，該抗-CD20抗體與利妥昔單抗相比與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比為0.8至1.2，較佳為0.9至1.1。該等第I型抗-CD20抗體之實例包括(例如)利妥昔單抗、1F5 IgG2a(ECACC，雜交瘤；Press等人，Blood 69/2(1987)584-591)、HI47 IgG3(ECACC，雜交瘤)、2C6 IgG1(揭示於WO 2005/103081中)、2F2 IgG1(揭示於WO 2004/035607及WO 2005/103081中)及2H7 IgG1(揭示於WO 2004/056312中)。
「抗-CD20抗體與利妥昔單抗相比與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比」係如實例號2中所述在FACSArray(Becton Dickinson)中使用與Cy5偶聯之該抗-CD20抗體及與Cy5偶聯之利妥昔單抗使用Raji細胞(ATCC編號CCL-86)藉由直接免疫螢光量測來測定(量測平均螢光強度(MFI))，且如下進行計算：
與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比=
MFI係平均螢光強度。本文所用之「Cy5-標記比」意指每分子抗體之Cy5-標記分子的數量。
一般而言，對於該第II型抗-CD20抗體而言，該第II型抗-CD20抗體與利妥昔單抗相比與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比為0.3至0.6，較佳為0.35至0.55，更佳為0.4至0.5。
本發明之該第II型抗-CD20抗體具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)。
所謂「抗體具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)(antibody having increased antibody dependent cellular cytotoxicity(ADCC)或antibody with increased antibody dependent cellular cytotoxicity(ADCC))」意指藉由彼等熟習此項技術者所習知之任何適宜方法測定抗體(該術語如本文中所定義)具有增進之ADCC。一種普遍使用之活體外ADCC分析如下：
1)該分析使用已知表現藉由抗體之抗原結合區識別之靶抗原的靶細胞；
2)該分析使用自隨機選擇之健康供體血液分離之人類外周血單核細胞(PBMC)作為效應細胞；
3)按照以下方案來實施該分析：
i)使用標準密度離心程序分離出PBMC並以5×106 個細胞/ml懸浮於RPMI細胞培養基中；
ii)靶細胞係藉由標準組織培養方法生長，在生存能力高於90%之指數生長期收穫，在RPMI細胞培養基中洗滌，用100微居裏(micro-Curies)51 Cr標記，用細胞培養基洗滌兩次，並以105 個細胞/ml密度再懸浮於細胞培養基中；
iii)將100微升上文最終靶細胞懸浮液轉移至96-孔微量滴定板之每一孔中；
iv)將抗體自4000ng/ml至0.04ng/ml連續稀釋於細胞培養基中並將50微升所得抗體溶液添加至96-孔微量滴定板中之靶細胞中，一式三份測試涵蓋上文整個濃度範圍之多個抗體濃度；
v)對於最大釋放(MR)對照，板中含有經標記靶細胞之另外3個孔接受50微升非離子清潔劑(Nonidet,Sigma,St. Louis)之2%(VN)水溶液而非抗體溶液(上文第iv條)；
vi)對於自發釋放(SR)對照，板中含有經標記靶細胞之另外3個孔接受50微升RPMI細胞培養基而非抗體溶液(上文第iv條)；
vii)隨後將該96-孔微量滴定板在50×g下離心1分鐘並在4℃下培育1小時；
viii)將50微升PBMC懸浮液(上文第i條)添加至每一孔中以使效應子：靶細胞比為25:1並將板在培育箱中於5% CO2 氣氛及37℃下放置4小時；
ix)收穫每一孔之無細胞上清液，並使用γ計數器定量實驗釋放之放射性(ER)；
x)根據式(ER-MR)/(MR-SR)×100計算每一抗體濃度之特異性溶解百分比，其中ER係該抗體濃度所定量(參見上文第ix條)之平均放射性，MR係MR對照(參見上文第V條)所定量(參見上文第ix條)之平均放射性，且SR係SR對照(參見上文第vi條)所定量(參見上文第ix條)之平均放射性；
4)「增進之ADCC」定義為在上文所測試之抗體濃度範圍內觀察到特異性溶解之最大百分比增進及/或達成在上文所測試之抗體濃度範圍內觀察到之特異性溶解之最大百分比的一半所需要之抗體濃度降低。ADCC增進係相對於用上文分析量測、藉由相同抗體調介、藉由相同類型宿主細胞產生、使用彼等熟習此項技術者所習知之相同標準產生、純化、調配及儲存方法但未藉由經改造以過表現GnTIII之宿主細胞產生之ADCC而言的。
該「ADCC增進」可藉由對該等抗體實施糖改造而獲得，即意指如Umana,P.等人，Nature Biotechnol. 17(1999)176-180及美國專利第6,602,684號中所述藉由對單株抗體之寡糖組份實施改造來增強該等單株抗體之該天然、細胞調介之效應子功能。
術語「補體依賴型細胞毒性(CDC)」係指在補體存在下本發明抗體對人類腫瘤靶細胞之溶解。較佳藉由在補體存在下用本發明抗-CD20抗體處理表現CD20之細胞製品來量測CDC。若於4小時後在100nM濃度下抗體誘導20%或更多之腫瘤細胞溶解(細胞死亡)，則認為存在CDC。該分析較佳用經51 Cr或Eu標記之腫瘤細胞並量測所釋放之51 Cr或Eu來實施。對照包括將靶腫瘤細胞與補體但不與抗體一起培育。
一般而言，IgG1同種型之第II型抗-CD20抗體顯示特徵性CDC特性。與IgG1同種型之第I型抗體相比，第II型抗-CD20抗體之CDC降低(若IgG1同種型)。較佳地，第II型抗-CD20抗體係IgG1同種型抗體。
「利妥昔單抗」抗體(參考抗體；第I型抗-CD20抗體之實例)係含有經基因改造之嵌合人類γ1鼠科動物恆定結構域之針對人類CD20抗原的單株抗體。該嵌合抗體含有人類γ1恆定結構域且在於1998年4月17日頒佈之授予IDEC Pharmaceuticals公司之美國專利第5,736,137號(Andersen等人)中稱為「C2B8」。利妥昔單抗已經批准用於治療患有復發性或難治性低級或濾泡狀且呈CD20陽性之B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤的患者。作用研究之活體外機制顯示利妥昔單抗呈現人類補體依賴型細胞毒性(CDC)(Reff,M.E.等人，Blood 83(2)(1994)435-445)。另外，其在量測抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之分析中呈現顯著活性。
術語「人類化B-Ly1抗體」係指揭示於WO 2005/044859及WO 2007/031875中之人類化B-Ly1抗體，其藉由與來自IgG1之人類恆定結構域嵌合及隨後人類化(參見WO 2005/044859及WO 2007/031875)自鼠科動物單株抗-CD20抗體B-Ly1(鼠科動物重鏈可變區(VH)：SEQ ID NO:1；鼠科動物輕鏈可變區(VL)：SEQ ID NO:2-參見Poppema,S.及Visser,L.，Biotest Bulletin 3(1987)131-139)獲得。該等「人類化B-Ly1抗體」詳細揭示於WO 2005/044859及WO 2007/031875中。
較佳地，「人類化B-Ly1抗體」具有選自SEQ ID No.3至SEQ ID No.20之群之重鏈可變區(VH)(WO 2005/044859及WO 2007/031875之B-HH2至B-HH9及B-HL8至B-HL17)。尤佳者係Seq. ID No. 3、4、7、9、11、13及15(WO 2005/044859及WO 2007/031875之B-HH2、BHH-3、B-HH6、B-HH8、B-HL8、B-HL11及B-HL13)。較佳地，「人類化B-Ly1抗體」具有SEQ ID No. 20之輕鏈可變區(VL)(WO 2005/044859及WO 2007/031875之B-KV1)。而且，人類化B-Ly1抗體較佳為IgG1抗體。本發明之該等人類化B-Ly1抗體之Fc區按照闡述於WO 2005/044859、WO 2004/065540、WO 2007/031875、Umana,P.等人，Nature Biotechnol. 17(1999)176-180及WO 99/154342中之程序實施糖改造(GE)。該等「經糖改造之人類化B-Ly1抗體」之Fc區中之糖基化模式已經改變，較佳岩藻糖殘基含量降低。較佳地，Fc區之寡糖的至少40%或更多(在一個實施例中介於40%與60%之間，在另一實施例中至少50%，且在又一實施例中至少70%或更多)未經岩藻糖基化。而且，Fc區之寡糖較佳係平分型寡糖。
寡糖組份能顯著影響與治療性糖蛋白之功效有關之特性，包括物理穩定性、蛋白酶攻擊抗性、與免疫系統之相互作用、藥物代謝動力學、及特異性生物活性。該等特性不僅取決於存在或不存在寡糖，且亦取決於寡糖之特定結構。在寡糖結構與糖蛋白功能之間可得到一些結論。例如，某些寡糖結構通過與特定碳水化合物結合蛋白之相互作用來調介快速清除血流中之糖蛋白，而另一些則與抗體結合並引發不期望之免疫反應。(Jenkins,N.等人，Nature Biotechnol. 14(1996)975-981)。
由於哺乳動物細胞能夠以對於人類應用最相容之形式使蛋白質糖基化，故其係用於產生治療性糖蛋白之較佳宿主。(Cumming,D.A.等人，Glycobiology 1(1991)115-30；Jenkins,N.等人，Nature Biotechnol. 14(1996)975-81)。細菌很少使蛋白質糖基化，且與諸如酵母、絲狀真菌、昆蟲及植物細胞等其他類型一般宿主一樣，所產生之糖基化模式與自血流中快速清除、不期望之免疫相互作用、及在一些特定情形下生物活性降低有關。在哺乳動物細胞中，在過去二十年中中國倉鼠卵巢(CHO)細胞使用最為普遍。除給出適宜糖基化模式外，該等細胞亦容許一致產生遺傳學上穩定的高產純系細胞系。可在簡單生物反應器中使用無血清培養基將其培養至較高密度，且容許實施安全且可重現之生物過程。其他常用動物細胞包括幼倉鼠腎(BHK)細胞、NSO-及SP2/0-小鼠骨髓瘤細胞。最近，亦對自轉基因動物之產生進行測試。(Jenkins,N.等人，Nature Biotechnol. 14(1996)975-981)。
所有抗體皆在重鏈恆定區中之保守位置上含有碳水化合物結構，且每一同種型具有不同的N-連接碳水化合物結構陣列，其不同地影響蛋白質組裝、分泌或功能活性。(Wright,A.及Monison,S. L.，Trends Biotech. 15(1997)26-32)。端視處理程度而定，附接之N-連接碳水化合物的結構差異相當大，且可包括高甘露糖、多具支鏈以及雙觸角複雜寡糖。(Wright,A.及Morrison,S. L.，Trends Biotech. 15(1997)26-32)。一般而言，在特定糖基化位點上附接之核心寡糖結構的處理不同，因此即使單株抗體亦以多種糖形存在。同樣，已顯示抗體糖基化之主要差異發生在細胞系之間，且甚至對於在不同培養條件下生長之給定細胞系亦可發現微小差異。(Lifely,M. R.等人，Glycobiology 5(8)(1995)813-22)。
一種獲得效能之較大增加同時保持簡單產生過程且潛在地避免顯著不期望副作用之方式係如Umana,P.等人，Nature Biotechnol. 17(1999)176-180及美國專利第6,602,684號中所述藉由對單株抗體之寡糖組份實施改造來增強該等單株抗體之天然、細胞調介之效應子功能。IgG1型抗體在癌症免疫療法中最為常用，其係在每一CH2結構域中之Asn297上具有保守N-連接糖基化位點之糖蛋白。與Asn297附接之兩種複雜雙觸角寡糖隱藏於CH2結構域之間，與多肽骨架形成廣泛接觸，且其存在為抗體調介諸如抗體依賴型細胞毒性(ADCC)等效應子功能所必需(Lifely,M. R.等人，Glycobiology 5(1995)813-822；Jefferis,R.等人，Immunol. Rev. 163(1998)59-76；Wright,A.及Morrison,S. L.，Trends Biotechnol. 15(1997)26-32)。
先前已顯示，β(1,4)-N-乙醯基葡糖胺轉移酶I11("GnTII17y)在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中過表現會顯著增加由經改造CHO細胞所產生之抗神經母細胞瘤嵌合單株抗體(chCE7)之活體外ADCC活性，該β(1,4)-N-乙醯基葡糖胺轉移酶I11("GnTII17y)係催化形成平分型寡糖之糖基轉移酶。(參見Umana,P.等人，Nature Biotechnol.17(1999)176-180；及WO 99/154342，其全部內容以引用方式併入本文中)。抗體chCE7屬於非偶聯單株抗體大類，其具有高腫瘤親和性及特異性，但當在缺少GnTIII酶之標準工業細胞系中產生時其效能太低以致無法臨床使用(Umana, P.等人，Nature Biotechnol. 17(1999)176-180)。該研究最早顯示ADCC活性之較大增加可藉由對產生抗體之細胞實施改造以表現GnTIII來達成，此亦導致與恆定區(Fc)有關之平分型寡糖部分(包括平分型非岩藻糖基化寡糖)增加至超過天然存在抗體中所發現之含量。
術語「表現CD20」抗原意欲表示CD20抗原在細胞中以顯著程度表現，較佳在分別來自腫瘤或癌症(較佳為非實體腫瘤)之T-或B-細胞、更佳B-細胞之表面上。患有「表現CD20之癌症」之患者可藉由熟習此項技術者所習知之標準分析來確定。例如CD20抗原表現係使用免疫組織化學(IHC)檢測、FACS或經由對應mRNA之基於PCR的檢測來量測。
本文所用之術語「表現CD20之癌症」係指癌細胞顯示CD20抗原表現之所有癌症。該表現CD20之癌症可為(例如)淋巴瘤、淋巴細胞性白血病、肺癌、非小細胞肺(NSCL)癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、表皮或眼內黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛區癌、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、陰戶癌、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌症、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細胞癌、膽管癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、脊椎腫瘤、腦幹膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、髓母細胞瘤、腦脊膜瘤、扁平細胞癌、垂體腺瘤，包括任一上述癌症之難治性病種、或一或多種上述癌症之組合。
較佳地，本文所用之表現CD20之癌症係指淋巴瘤(較佳為B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL))及淋巴細胞性白血病。該等淋巴瘤及淋巴細胞性白血病包括：例如，a)濾泡淋巴瘤；b)小無裂細胞淋巴瘤/伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)(包括地方性伯基特氏淋巴瘤、偶發性伯基特氏淋巴瘤及非伯基特氏淋巴瘤)；c)邊緣帶淋巴瘤(包括結節外邊緣帶B細胞淋巴瘤(黏膜相關淋巴樣組織淋巴瘤，MALT)、結節邊緣帶B細胞淋巴瘤及脾臟邊緣帶淋巴瘤)；d)外套細胞淋巴瘤(MCL)；e)大細胞淋巴瘤(包括B-細胞彌漫性大細胞淋巴瘤(DLCL)、彌漫性混合細胞淋巴瘤、免疫母細胞性淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤-肺B-細胞淋巴瘤)；f)多毛細胞白血病；g)淋巴細胞性淋巴瘤、沃爾登斯特倫巨球蛋白血症(waldenstrom's macroglobulinemia)；h)急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)/小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、B-細胞早幼淋巴細胞性白血病；i)漿細胞贅瘤、漿細胞性骨髓瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞瘤；j)霍奇金氏病。
更佳地，表現CD20之癌症係B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。表現CD20之癌症尤其係外套細胞淋巴瘤(MCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、B-細胞彌漫性大細胞淋巴瘤(DLCL)、伯基特氏淋巴瘤、多毛細胞白血病、濾泡淋巴瘤、多發性骨髓瘤、邊緣帶淋巴瘤、移植後淋巴增殖性病症(PTLD)、人類免疫缺陷病毒伴發之淋巴瘤、沃爾登斯特倫巨球蛋白血症、或原發性中樞神經系統淋巴瘤。
當應用至(例如)癌症時，術語「治療方法」或其等效物係指作用程序或過程，其經設計以減少或消除患者中癌細胞之數量或減輕癌症之症狀。癌症或另一增殖性病症之「治療方法」並不一定指實際上消除癌細胞或其他病症、實際上減少細胞數量或病症、或實際上減輕癌症或其他病症之症狀。通常，實施之癌症治療方法雖然成功之可能性較低，但考慮到患者之病史及估算之預測生存期，仍然認為該方法誘導總體有益的作用過程。
在一個實施例中，使用具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體之治療係與環磷醯胺及長春新鹼組合。
在另一實施例中，使用具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體之治療係與多柔比星組合。
在另一實施例中，使用具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體之治療係與環磷醯胺組合。
在另一實施例中，使用具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體之治療係與環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組合。
本文所用之術語「共投與(co-administration或co-administering)」或「組合(in combination)」具有相同含義，其係指以一種單一調配物或以兩種單獨調配物形式投與該第二型抗-CD20抗體及該等化學治療劑。共投與可同時或以任意順序依序實施，其中儘管兩種(或所有)活性劑同時發揮其生物活性，但較佳者係間隔一段時間投與。該第II型抗-CD20抗體及該等化學治療劑可同時或依序共投與(例如經由靜脈內(i.v.)通過連續輸注(一次用於抗體且最終一次用於化學治療劑)；或經口投與化學治療劑)。當兩種治療劑係依序共投與時，劑量可在同一天以兩次單獨投與形式投與，或在第1天投與一種藥劑且在第2天至第7天、較佳第2天至第4天共投與第二種藥劑。因此，術語「依序」意指在第一抗體劑量後7天內、較佳在第一抗體劑量後4天內；且術語「同時」意指在相同時間。就第II型抗-CD20抗體及化學治療劑之維持劑量而言，術語「共投與」意指若治療週期適於兩種藥物則可同時共投與維持劑量，例如每週。或例如，每第一至第三天投與化學治療劑且每週投與第II型抗-CD20抗體。或在一天或數天內依序共投與維持劑量。
不言而喻，抗體係以「治療有效量」(或簡言之「有效量」)投與給患者，治療有效量係引起研究者、獸醫、醫師或其他臨床醫師所尋求之組織、系統、動物或人類之生物學或醫學應答的各化合物或組合的量。
該第II型抗-CD20抗體及該等化學治療劑之共投與的量及共投與時間將端視所治療患者之類型(物種、性別、年齡、體重等)及病狀以及所治療疾病或病狀之嚴重程度而定。該第II型抗-CD20抗體及該等化學治療劑適宜同時或經一系列治療共投與給患者。端視疾病類型及嚴重程度而定，對於將兩種藥物共投與給患者而言，約1μg/kg至50mg/kg(例如0.1-20mg/kg)該第II型抗-CD20抗體及1μg/kg至50mg/kg(例如0.1-20mg/kg)該等化學治療劑係初始候選劑量。若實施靜脈內投與，則該第II型抗-CD20抗體或該等化學治療劑之初始輸注時間可長於隨後輸注時間，例如初始輸注為約90分鐘，且隨後輸注為約30分鐘(若初始輸注具有良好耐受性)。
該第II型抗-CD20抗體之較佳劑量將在約0.05mg/kg至約30mg/kg範圍內。因此，可將約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg、10mg/kg或30mg/kg(或其任何組合)之一或多種劑量共投與給患者。該等化學治療劑之較佳劑量將在0.01mg/kg至約30mg/kg範圍內，例如對於硼替佐米(bortezomib)為0.1mg/kg至10.0mg/kg。端視患者之類型(物種、性別、年齡、體重等)及病狀以及抗-CD20抗體及化學治療劑之類型而定，該抗-CD20抗體之劑量及投與時間表可與化學治療劑之劑量有所不同。例如，該抗-CD20抗體可(例如)每一至三週投與一次且該等化學治療劑可每天或每2至10天投與一次。亦可先投與較高負荷劑量，隨後投與一或多個較低劑量。
在一較佳實施例中，該藥劑可用於在患有表現CD20之癌症之患者中預防或減少轉移或進一步擴散。該藥劑可用於延長該患者之存活持續時間、延長該患者之無進展存活期、延長應答持續時間、使所治療患者獲得統計學上顯著且臨床上有意義之改善，如藉由存活持續時間、無進展存活期、應答率或應答持續時間所量測。在一較佳實施例中，該藥劑可用於提高患者群體之應答率。
可在第II型抗-CD20抗體與化學治療劑組合治療表現CD20之癌症中使用。該等分子適合以對欲達成目的有效之量以組合形式存在。因此，在一個實施例中，在使用具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之一或多種化學治療劑之組合治療中，投與一種額外皮質類固醇，較佳為潑尼松(prednisone)。
在一個實施例中，在無該等額外皮質類固醇下使用該第II型抗-CD20抗體與化學治療劑組合治療。
癌症治療領域中之特點通常係於化學治療方案中使用上述皮質類固醇，且其在本文中之使用係出於監測耐受性及效力以及用於控制投與途徑及劑量之相同考慮因素，其中會實施一定調整。舉例而言，化學治療劑及皮質類固醇之實際劑量可端視藉由使用組織培養方法確定之患者培養細胞應答而變化。通常，與不存在額外其他藥劑時所使用之量相比，該劑量將降低。
有效化學治療劑及/或皮質類固醇之典型劑量可在由製造商推薦之範圍內，並且在由活體外應答或動物模型中之應答指明之情形下，可降低高達約一個數量級之濃度或量。因此，實際劑量將取決於醫師之判斷、患者之病狀，以及基於初始培養惡性細胞或組織培養組織試樣之活體外應答或在適宜動物模型中觀察到之應答之治療方法的效力。
在本發明上下文中，除具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體與化學治療劑組合治療表現CD20之癌症外，亦可實施有效量之離子化放射及/或可使用放射性藥物。放射源可在所治療患者體外或體內。當放射源位於患者體外時，該療法稱為外部放射線療法(EBRT)。當放射源位於患者體內時，該治療稱為近距放射療法(BT)。在本發明上下文中使用之放射性原子可選自包括但不限於以下之群：鐳、銫-137、銥-192、鋂-241、金-198、鈷-57、銅-67、鍀-99、碘-123、碘-131及銦-111。亦可用該等放射性同位素來標記抗體。較佳地，在無該離子化放射下使用具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體與化學治療劑之組合治療。
放射療法係用於控制不可切除或不能施行手術之腫瘤及/或腫瘤轉移之標準治療方法。當放射療法與化學療法組合時會得到改良之結果。放射療法所基於之原理係遞送至靶區域之高劑量放射將導致腫瘤及正常組織二者中之生殖細胞死亡。放射劑量方案通常以放射吸收劑量(Gy)、時間及分割來確定，且必須由腫瘤學家謹慎確定。患者所接受之放射量將端視多個考慮因素而定，但最重要的兩個考慮因素為腫瘤相對於身體其他重要結構或器官之位置及腫瘤擴散之程度。經受放射療法之患者之典型治療過程將為持續1至6週之治療時間表，其中向患者投與10至80Gy之總劑量，以約1.8至2.0Gy之單一每日部分投與，每週五天。在本發明之一較佳實施例中，當用本發明組合療法及放射治療人類患者中之腫瘤時，存在協同作用。換言之，當與放射、視情況與另外的化學治療劑或抗癌劑組合時，包含本發明組合之藥劑對腫瘤生長之抑制作用會增強。輔助放射療法之參數包含於(例如)WO 99/60023中。
該等第II型抗-CD20抗體係按照習知方法藉由下列途徑投與給患者：作為濃注藥物靜脈內投與或於一段時間內連續輸注、藉由肌內、腹膜內、腦室脊柱內、皮下、關節內、滑膜內或鞘內途徑。該等抗體之靜脈內或皮下投與較佳。
該等化學治療劑係按照習知方法藉由下列途徑投與給患者：例如，作為濃注藥物靜脈內投與或於一段時間內連續輸注、藉由肌內、腹膜內、腦室脊柱內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內或經口途徑。該等化學治療劑之靜脈內、皮下或經口投與較佳。
本發明進一步包含一種套組，其包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體及選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之一或多種化學治療劑以組合治療患有表現CD20之癌症的患者。在較佳實施例中，該套組容器可進一步包括醫藥上可接受之載劑。該套組可進一步包括無菌稀釋劑，其較佳儲存於分開的另外容器中。該套組可進一步包括包裝插頁，該包裝插頁包含指導使用該組合療法作為用於表現CD20之癌症疾病、較佳B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)之方法的印刷說明書。
術語「包裝插頁」係指通常包括於治療產品之商業包裝內的說明，其可包括有關適應症、用法、劑量、投與、禁忌症及/或涉及此等治療產品使用之警告的資訊。
在一較佳實施例中，該容器製品可進一步包括醫藥上可接受之載劑。該製品可進一步包括無菌稀釋劑，其較佳儲存於分開的另外容器中。
本文所用之「醫藥上可接受之載劑」意欲包括與醫藥投與相容之任何及所有物質，包括溶劑、分散介質、塗佈劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑、及與醫藥投與相容之其他物質及化合物。除非任何習用介質或藥劑與活性化合物不相容，否則本發明涵蓋其於本發明組合物中之使用。該等組合物中亦可納入附加活性化合物。
醫藥組合物：
醫藥組合物可藉由用醫藥上可接受之無機或有機載劑處理具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體及/或選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之化學治療劑來獲得。乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其鹽及諸如此類皆可用作(例如)錠劑、糖衣錠劑、糖衣藥丸及硬質明膠膠囊之載劑。舉例而言，軟質明膠膠囊之適宜載劑可為植物油、蠟、脂肪、半固態及液態多元醇及諸如此類。然而，端視活性物質之性質而定，軟質明膠膠囊通常不需要載劑。舉例而言，用於生產溶液及糖漿之適宜載劑可為水、多元醇、甘油、植物油及諸如此類。舉例而言，栓劑之適宜載劑可為天然或硬化油、蠟、脂肪、半液態或液態多元醇及諸如此類。
此外，該等醫藥組合物可含有防腐劑、增溶劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、矯味劑、用於改變滲透壓之鹽、緩衝劑、掩蔽劑或抗氧化劑。其亦可含有治療上頗具價值之其他物質。
本發明之一個實施例係醫藥組合物，其包含該具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體及選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之一或多種化學治療劑二者，其尤其可用於表現CD20之癌症。該醫藥組合物可進一步包含一或多種醫藥上可接受之載劑。
本發明進一步提供尤其可用於癌症之醫藥組合物，其包含(i)第一有效量之具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體；及(ii)第二有效量之選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之一或多種化學治療劑。該組合物視情況包含醫藥上可接受之載劑及/或賦形劑。
藉由將具有期望純度之抗體與任選醫藥上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.編輯(1980))混合來製備便於儲存之根據本發明使用之單獨具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體的醫藥組合物，該等醫藥組合物呈凍乾調配物或水性溶液形式。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒性，且包括緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯紮氯銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，例如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖、及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；鼇合劑，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；鹽形成抗衡離子，例如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型表面活性劑，例如TWEENTM 、PLURONICSTM 或聚乙二醇(PEG)。
選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之化學治療劑之醫藥組合物端視其醫藥特性而定；例如，對於諸如硼替佐米等小化學化合物，可為(例如)如下一種調配物：
a)錠劑調配物(濕法製粒)：
製造程序：
1.將第1、2、3及4項混合並用純水製粒。
2.在50℃下乾燥顆粒。
3.使該等顆粒通過適宜碾磨設備。
4.添加第5項並混合三分鐘；於適宜壓製機上擠壓。
b)膠囊調配物：
製造程序：
1.在適宜混合器中將第1、2及3項混合30分鐘。
2.添加第4及第5項並混合3分鐘。
3.裝入適宜膠囊中。
在本發明之又一實施例中，對於該具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體及選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之化學治療劑，本發明之醫藥組合物較佳為兩種單獨調配物。亦可將此等活性成份裝入分別(例如)藉由凝聚技術或藉由介面聚合製備之微膠囊中，例如，羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊，此等活性成份呈膠質藥物遞送系統(例如，脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)或巨乳液形式。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences ，第16版，A. Osol編輯(1980)中。
也可製備成緩釋製劑。緩釋製劑之適宜實例包括含有抗體之固態疏水性聚合物之半滲透性基質，該等基質係呈成形物件形式，例如薄膜或微膠囊。緩釋基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(甲基丙烯酸-2-羥基乙基酯)、或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利第3,773,919號)、L-麩胺酸與L-麩胺酸γ-乙酯之共聚物、不可降解之乙烯-乙酸乙烯酯、可降解之乳酸-乙醇酸共聚物，例如LUPRON DEPOTTM (由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)組成的可注射微球體)、及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
擬用於活體內投與之調配物必須為無菌的。此可容易地藉由通過無菌過濾膜進行過濾而達成。
本發明進一步提供治療癌症之方法，其包含向需要該治療之患者投與(i)第一有效量之具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體；及(ii)第二有效量之選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群之一或多種化學治療劑。
本文所用之術語「患者」較佳係指出於任何目的需要用第II型抗-CD20抗體治療之人類(例如患有表現CD20之癌症之患者)，且更佳係需要用該治療來治療癌症或癌變前病狀或損傷之人類。然而，術語「患者」亦可指非人類動物，較佳為哺乳動物，尤其例如狗、貓、馬、牛、豬、羊及非人類靈長類動物。
本發明進一步包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體，其與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑組合用於治療表現CD20之癌症。
本發明進一步包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體，其與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑組合用於治療患有表現CD20之癌症的患者。
本發明進一步包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑，其係用於治療表現CD20之癌症。
本發明進一步包含具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體與選自由環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星組成之群的一或多種化學治療劑，其係用於治療患有表現CD20之癌症的患者。
較佳地，該具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體係經糖改造之人類化B-Ly1抗體。
較佳地，該表現CD20之癌症係B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。
提供以下實例、序列表及圖以幫助理解本發明，本發明之實際範圍陳述於隨附申請專利範圍中。應瞭解，可對所列程序實施多種修改，此並不偏離本發明之精神。
序列表說明：
SEQ ID NO:1 　鼠科動物單株抗-CD20抗體B-Ly1之重鏈可變區(VH)的胺基酸序列。
SEQ ID NO:2 　鼠科動物單株抗-CD20抗體B-Ly1之輕鏈可變區(VL)的胺基酸序列。
SEQ ID NO:3-19 　人類化B-Ly1抗體之重鏈可變區(VH)的胺基酸序列(B-HH2至B-HH9、B-HL8、及B-HL10至B-HL17)。
SEQ ID NO:20 　人類化B-Ly1抗體之輕鏈可變區(VL)的胺基酸序列B-KV1。
實驗程序 實例1具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20 抗體(B-HH6-B-KV1 GE)與環磷醯胺及長春新鹼之組合療法的抗腫瘤活性。 測試藥劑：
第II型抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE(=人類化B-Ly1，經糖改造之B-HH6-B-KV1，參見WO 2005/044859及WO 2007/031875)以來自GlycArt，Schlieren，Switzerland之原液(c=9.4mg/ml)提供。抗體緩衝劑包括組胺酸、海藻糖及聚山梨酯20。在注射之前將來自原液之抗體溶液適當稀釋於PBS中。
利妥昔單抗係由Hoffmann La Roche,Basel提供。
環磷醯胺及長春新鹼係以臨床調配物形式分別購自Baxter Oncology GmbH,Halle，Germany或medac,GesellschaftklinischembH,Hamburg,Germany。自重構原液調節稀釋液。
細胞系及培養條件：
WSU-DLCL2人類非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)細胞係由Hoffmann-La Roche,Inc.,Nutley,NJ,USA友情提供。在5% CO2 下於水飽和氣氛中在37℃下在補充有10%胎牛血清(PAA Laboratories，Austria)及2mM L-麩胺醯胺之RPMI培養基(PAA，Laboratories，Austria)中以常規方式培養腫瘤細胞系。使用第4代細胞系進行移植。共注射細胞與基質膠(Matrigel)。
動物：
雌性SCID灰棕色小鼠；運抵時7-8週齡(購自Charles River,Sulzfeld,Germany)，將其根據既定導則(GV-Solas；Felasa；TierschG)供養於無特定病原體條件下，且每天12h光照/12h黑暗循環。實驗研究方案已經地方政府檢查且批准。運抵後，將動物於隔離動物設施部件中供養一週以適應新環境並進行觀察。定期實施連續健康監測。隨意提供規定的食物(Provimi Kliba 3337)及水(酸化，pH 2.5-3)。
監測：
每天檢查動物之臨床症狀並檢測不良反應。為了全程監測實驗，每週記錄兩次動物體重，並於階段後藉由測徑器量測腫瘤體積。
動物治療：
在隨機一天開始動物治療，細胞移植後9天。在研究第9、15、23、30、37、44、51及58天以單一藥劑以30mg/kg指示劑量每7天一次(q7d)經靜脈內(i.v.)投與經糖改造之人類化第II型抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE或利妥昔單抗。在相同天投與對應媒劑。環磷醯胺及長春新鹼係在第9、15、23、30、37、44、51及58天分別以25mg/kg或0.25mg/kg經靜脈內每週給與一次。在組合療法組中，兩種抗體均係在第10、16、24、31、38、45、52及59天在化學治療劑後24小時投與。
活體內腫瘤生長抑制研究：
在細胞移植後第35天，與對照組相比，在給與利妥昔單抗、抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE、化學療法、化學療法與抗-CD20抗體組合療法或化學療法與利妥昔單抗組合療法之動物中分別產生73%、85%、66%、94%或90%之顯著腫瘤生長抑制。在實驗結束時，與化學療法/利妥昔單抗組合組相比，在化學療法/抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE組合組中觀察到顯著較佳之腫瘤生長抑制。
直至研究結束在細胞移植後第64天藉由腫瘤生長延遲值(Tumor Growth Delay value)來展示不同治療方法之效果(T-C，其中T係對於治療組而言腫瘤達到預定大小1500mm3 所需要之中值時間天數且C係對於對照組而言腫瘤達到相同大小所需要之中值時間天數)。結果顯示於下表中：
實例2 測定第II型抗-CD20抗體與利妥昔單抗相比與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比
在含有10% FCS(Gibco，目錄號：10500-064)之RPMI-1640培養基(PanBiotech GmbH，目錄號：PO4-18500)中維持培養Raji細胞(ATCC編號CCL-86)。使用Cy5 Mono NHS酯(Amersham GE Healthcare，目錄號：PA15101)按照製造商說明書來標記第II型抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE(經糖改造之人類化B-Ly1抗體)及利妥昔單抗。偶聯Cy5之利妥昔單抗之標記比為2.0個Cy5分子/每個抗體。偶聯Cy5之B-HH6-B-KV1之標記比為2.2個Cy5分子/每個抗體。為測定並比較兩種抗體之結合能力及結合模式，藉由直接免疫螢光法使用伯基特氏淋巴瘤細胞系Raji(ATCC編號CCL-86)產生結合曲線(藉由滴定偶聯Cy5之利妥昔單抗及偶聯Cy5之B-HH6-B-KV1 GE來實施)。分別以EC50值(最大強度之50%)來分析偶聯Cy5之利妥昔單抗及偶聯Cy5之B-HH6-B-KV1 GE的平均螢光強度(MFI)。將5*105 個細胞/試樣在4℃下染色30min。然後，在培養基中洗滌細胞。利用碘化丙錠(PI)染色來排除死細胞。利用FACSArray(Becton Dickinson)來實施量測，在紅外A(Far Red A)量測碘化丙錠(PI)且在紅-A(Red-A)量測Cy5。圖2顯示結合之平均螢光強度(MFI)，以經Cy5標記之B-HH6-B-KV1 GE(黑色條帶)及經Cy5標記之利妥昔單抗(白色條帶)的EC50值(最大強度之50%)表示。
隨後根據下式計算與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比：
與Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之CD20的結合能力比=
因此，B-HH6-B-KV1 GE作為典型的第II型抗-CD20抗體顯示與利妥昔單抗相比較低之結合能力。
實例3具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體(B-HH6-B-KV1 GE)與多柔比星之組合療法的抗腫瘤活性。 測試藥劑：
第II型抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE(=人類化B-Ly1，經糖改造之B-HH6-B-KV1，參見WO 2005/044859及WO 2007/031875)以來自GlycArt，Schlieren，Switzerland之原液(c=9.4mg/ml)提供。抗體緩衝劑包括組胺酸、海藻糖及聚山梨酯20。在注射之前將來自原液之抗體溶液適當稀釋於PBS中。
利妥昔單抗係由Hoffmann La Roche,Basel提供。
多柔比星係以臨床調配物形式購自Hexal,Holzkirchen,Germany。自重構原液調節稀釋液。
細胞系及培養條件：
RL人類濾泡非霍奇金氏淋巴瘤細胞係由Dr. Charles Dumontet,INSERM 590,Lyon,France友情提供。在5% CO2 下於水飽和氣氛中在37℃下在補充有10%胎牛血清(PAA Laboratories，Austria)及2mM L-麩胺醯胺之RPMI培養基(PAA，Laboratories，Austria)中以常規方式培養腫瘤細胞系。使用第2代細胞系進行移植。
動物：
雌性SCID灰棕色小鼠；運抵時7-8週齡(購自Charles River,Sulzfeld,Germany)，將其根據既定導則(GV-Solas；Felasa；TierschG)供養於無特定病原體條件下，且每天12h光照/12h黑暗循環。實驗研究方案已經地方政府檢查且批准。運抵後，將動物於隔離動物設施部件中供養一週以適應新環境並進行觀察。定期實施連續健康監測。隨意提供規定的食物(Provimi Kliba 3337)及水(酸化，pH 2.5-3)。
監測：
每天檢查動物之臨床症狀並檢測不良反應。為了全程監測實驗，每週記錄兩次動物體重，並於階段後藉由測徑器量測腫瘤體積。
動物治療：
在隨機一天開始動物治療，細胞移植後14天。在研究第14、21、28、36及42天以單一藥劑以30mg/kg或60mg/kg指示劑量每7天一次(q7d)經靜脈內投與經糖改造之人類化第II型抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE或利妥昔單抗。在相同天投與對應媒劑以及多柔比星，其經靜脈內以3mg/kg每週給與一次。在組合療法組中，在第15、22、29、37及43天經靜脈內以3mg/kg每週投與一次多柔比星且在組合療法組中於相同天經靜脈內以30mg/kg每週投與一次利妥昔單抗。
實例4第II型抗-CD20抗體(B-HH6-B-KV1 GE)與環磷醯胺之組合療法在RL細胞系中之抗腫瘤活性。 測試藥劑：
第II型抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE(=人類化B-Ly1，經糖改造之B-HH6-B-KV1，參見WO 2005/044859及WO 2007/031875)以來自GlycArt，Schlieren，Switzerland之原液(c=9.4mg/ml)提供。抗體緩衝劑包括組胺酸、海藻糖及聚山梨酯20。在注射之前將來自原液之抗體溶液適當稀釋於PBS中。
第I型抗-CD20抗體利妥昔單抗係以原液形式(c=10mg/ml)由Hoffmann La Roche,Basel,Switzerland提供。緩衝劑含有聚山梨酯80、氯化鈉及檸檬酸鈉。
環磷醯胺係以臨床調配物形式分別購自Baxter Oncology GmbH,Halle,Germany或medac,GesellschaftklinischembH,Hamburg,Germany。自重構原液調節稀釋液。
細胞系及培養條件：
在補充有10%胎牛血清及抗生素之RPMI 1640培養基中常規培養RL人類濾泡非霍奇金氏淋巴瘤細胞系。RL細胞在懸浮液中生長並形成團簇。將指數生長細胞經皮下注射於SCID小鼠中。
動物：
所用動物係6週齡雌性SCID小鼠，其由Charles River(L'Arbresle,France)以IPSOS狀態提供。將動物圈養至少一週，然後注射RL細胞。各籠子含有5只動物。
監測：
每天檢查動物之臨床症狀並檢測不良反應。為了全程監測實驗，每週記錄兩次動物體重，並於階段後藉由測徑器量測腫瘤體積。闡述動物之研究排除標準並經當地實驗動物委員會(Experimental Animal Committee)批准。
動物治療：
在細胞移植後31天隨機開始治療。人類化第II型抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE、媒劑或利妥昔單抗係以30mg/kg劑量經靜脈內每週給與動物一次(第31、38、45及52天)。在相同天以50mg/kg劑量注射環磷醯胺。使用前自原液製備新鮮抗體稀釋液。
活體內腫瘤生長抑制研究：
在細胞移植後第66天，在給與利妥昔單抗與環磷醯胺、抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE與利妥昔單抗或抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE與環磷醯胺組合之動物中產生54%、85%或91%之顯著腫瘤生長抑制。因此，與單獨環磷醯胺治療相比，抗-CD20抗體B-HH6-B-KV1 GE與環磷醯胺組合療法產生最佳抗腫瘤活性。
圖1　a)具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體(B-HH6-B-KV1 GE)與環磷醯胺及長春新鹼之組合療法的協同抗腫瘤活性及b)與第I型抗-CD20抗體(利妥昔單抗)與環磷醯胺及長春新鹼之組合療法進行比較，此係作用於WSU-DLCL2人類B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。腫瘤體積之中值[mm3 ]+/-IQR繪示於y軸上，腫瘤細胞之注射後天數繪示於x軸上。圖例符號：A)媒劑(圓圈)、B)每週一次環磷醯胺(25mg/kg)及長春新鹼(0.25mg/kg)(十字形)、C)每週一次利妥昔單抗(30mg/kg)(三角形)、D)每週一次經糖改造之人類化B-ly1(B-HH6-B-KV1 GE)(30mg/kg)(正方形)、E)每週一次利妥昔單抗(30mg/kg)與環磷醯胺(25mg/kg)及長春新鹼(0.25mg/kg)(菱形)及F)每週一次經糖改造之人類化B-ly1(B-HH6-B-KV1 GE)(30mg/kg)與環磷醯胺(25mg/kg)及長春新鹼(0.25mg/kg)(加號)。
圖2　第I型抗-CD20抗體(Cy5-利妥昔單抗=白色條帶)與第II型抗-CD20抗體(Cy5-經糖改造之人類化B-Ly1 B-HH6-B-KV1 GE=黑色條帶)在Raji細胞(ATCC編號CCL-86)上之平均螢光強度(MFI，左側y軸)；第I型抗-CD20抗體(利妥昔單抗)及第II型抗-CD20抗體(B-HH6-B-KV1 GE)與利妥昔單抗相比與CD20的結合能力比(按比例繪示於右側y軸上)。
圖3　a)具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體(B-HH6-B-KV1 GE)與多柔比星之組合療法的協同抗腫瘤活性及b)與第I型抗-CD20抗體(利妥昔單抗)與多柔比星之組合療法進行比較，此係作用於RL人類濾泡非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。腫瘤體積之中值[mm3 ]+/-IQR繪示於y軸上，腫瘤細胞之注射後天數繪示於x軸上。圖例符號：A)媒劑(加號)、B)每週一次多柔比星(3mg/kg)(十字形)、C)每週一次利妥昔單抗(30mg/kg)(三角形)、D)每週一次經糖改造之人類化B-ly1(B-HH6-B-KV1 GE)(30mg/kg)(正方形)、E)每週一次利妥昔單抗(30mg/kg)與多柔比星(3mg/kg)(菱形)及F)每週一次經糖改造之人類化B-ly1(B-HH6-B-KV1 GE)(30mg/kg)與多柔比星(3mg/kg)(圓圈)。
圖4　a)具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體(B-HH6-B-KV1 GE)與環磷醯胺之組合療法的協同抗腫瘤活性及b)與第I型抗-CD20抗體(利妥昔單抗)與環磷醯胺之組合療法進行比較，此係作用於RL人類濾泡非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。腫瘤體積之中值[mm3 ]+/-IQR繪示於y軸上，腫瘤細胞之注射後天數繪示於x軸上。圖例符號：A)媒劑(圓圈)、B)每週一次環磷醯胺(50mg/kg)(十字形)、C)每週一次利妥昔單抗(30mg/kg)(三角形)、D)每週一次經糖改造之人類化B-ly1(B-HH6-B-KV1 GE)(30mg/kg)(正方形)、E)每週一次利妥昔單抗(30mg/kg)與環磷醯胺(50mg/kg)(菱形)及F)每週一次經糖改造之人類化B-ly1(B-HH6-B-KV1 GE)(30mg/kg)與環磷醯胺(50mg/kg)(加號)。
(無元件符號說明)

Claims (4)

  1. 一種具有增進之抗體依賴型細胞毒性(ADCC)之第II型抗-CD20抗體用以製造藥劑之用途，該藥劑與選自由環磷醯胺(cyclophosphamide)、長春新鹼(vincristine)及多柔比星(doxorubicine)組成之群的一或多種化學治療劑組合用於治療表現CD20之癌症，其特徵在於該第II型抗-CD20抗體係經糖改造之人類化B-Ly1抗體，且該第II型抗-CD20抗體之治療係與下列組合：a)環磷醯胺及長春新鹼，或b)環磷醯胺、長春新鹼及多柔比星；其中該人類化B-Ly1抗體包含SEQ ID NO：7之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO：20之輕鏈可變區(VH)。
  2. 如請求項1之用途，其特徵在於該表現CD20之癌症係B-細胞非霍奇金氏淋巴瘤(B-Cell Non-Hodgkin's lymphoma)(NHL)。
  3. 如請求項1或2之用途，其特徵在於投與一種額外皮質類固醇。
  4. 如請求項3之用途，其特徵在於該皮質類固醇為潑尼松(prednisone)。
TW098109412A 2008-03-25 2009-03-23 具有增進之抗體依賴型細胞毒性之第ii型抗－ｃｄ２０抗體之組合療法 TWI500624B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08005554 2008-03-25
EP08007172 2008-04-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW200951141A TW200951141A (en) 2009-12-16
TWI500624B true TWI500624B (zh) 2015-09-21

Family

ID=40872445

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW098109412A TWI500624B (zh) 2008-03-25 2009-03-23 具有增進之抗體依賴型細胞毒性之第ii型抗－ｃｄ２０抗體之組合療法

Country Status (31)

Country Link
US (6) US20090246197A1 (zh)
EP (1) EP2268310B1 (zh)
JP (3) JP5547709B2 (zh)
KR (1) KR101280716B1 (zh)
CN (2) CN101983071A (zh)
AR (1) AR072947A1 (zh)
AU (1) AU2009228616B2 (zh)
BR (1) BRPI0909227B8 (zh)
CA (1) CA2716884C (zh)
CL (1) CL2009000713A1 (zh)
CR (1) CR11687A (zh)
CY (1) CY1117984T1 (zh)
DK (1) DK2268310T3 (zh)
ES (1) ES2592312T3 (zh)
HR (1) HRP20161301T1 (zh)
HU (1) HUE028828T2 (zh)
IL (1) IL208018A (zh)
LT (1) LT2268310T (zh)
MA (1) MA32140B1 (zh)
MX (1) MX2010009647A (zh)
MY (1) MY163544A (zh)
NZ (1) NZ587284A (zh)
PE (1) PE20091821A1 (zh)
PL (1) PL2268310T3 (zh)
PT (1) PT2268310T (zh)
RS (1) RS55258B1 (zh)
RU (1) RU2589704C2 (zh)
SI (1) SI2268310T1 (zh)
TW (1) TWI500624B (zh)
WO (1) WO2009118142A1 (zh)
ZA (1) ZA201006190B (zh)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
LT2380911T (lt) 2003-11-05 2018-07-10 Roche Glycart Ag Antigeną surišančios molekulės, pasižyminčios padidintu fc receptoriaus surišimo afiniškumu ir efektoriaus funkcija
EP2268310B1 (en) * 2008-03-25 2016-07-20 Roche Glycart AG Use of a type ii anti-cd20 antibody with increased antibody dependent cellular cytotoxicity (adcc) in combination with cyclophosphamide, vincristine and doxorubicine for treating non-hodgkin' s lymphomas
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
NZ789041A (en) 2010-06-03 2023-09-29 Pharmacyclics Llc The use of inhibitors of bruton’s tyrosine kinase (btk)
MX2013006739A (es) * 2010-12-16 2013-07-17 Roche Glycart Ag Terapia combinada de anticuerpo cd20 afucosilado con inhibidor de mdm2.
US20130302274A1 (en) * 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
EP2877598A1 (en) 2012-07-24 2015-06-03 Pharmacyclics, Inc. Mutations associated with resistance to inhibitors of bruton's tyrosine kinase (btk)
CA2933881A1 (en) * 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
US9603927B2 (en) * 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
JP6707531B2 (ja) 2014-09-09 2020-06-10 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｄ３８抗体による併用療法
JP6802791B2 (ja) 2014-12-04 2020-12-23 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 急性骨髄性白血病の治療のための抗ｃｄ３８抗体
CR20170526A (es) 2015-05-20 2018-04-03 Janssen Biotech Inc ANTICUERPOS ANTI-CD38 PARA EL TRATAMIENTO DE AMILOIDOSIS DE CADENA LIGERA y OTRAS ENFERMEDADES MALIGNAS HEMATOLÓGICAS POSITIVAS PARA CD38
CA2990406A1 (en) 2015-06-22 2016-12-29 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies for heme malignancies with anti-cd38 antibodies and survivin inhibitors
US20170044265A1 (en) 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
US10781261B2 (en) 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
MD3827845T2 (ro) 2015-11-03 2022-09-30 Janssen Biotech Inc Formulări subcutanate de anticorpi anti-CD38 și utilizări ale acestora
CN108603037B (zh) * 2015-12-10 2020-11-17 希望之城 细胞穿透花青偶联抗体
TW202340473A (zh) 2016-10-07 2023-10-16 瑞士商諾華公司 利用嵌合抗原受體之癌症治療
US20180206726A1 (en) 2016-12-07 2018-07-26 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
WO2018183929A1 (en) 2017-03-30 2018-10-04 Progenity Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device
KR20200079293A (ko) 2017-10-31 2020-07-02 얀센 바이오테크 인코포레이티드 고위험 다발성 골수종을 치료하는 방법
WO2019246312A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator
WO2019246317A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease or condition in a tissue originating from the endoderm
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US20240050562A1 (en) * 2019-10-04 2024-02-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Inhibitor of cell proliferation in obinutuzumab resistant cd20-positive cancer, and medicinal composition, medicine, production, method for inhibiting cell proliferation, therapeutic method, type ii anti-cd20 antibody, compounds, combination of same, enhancer and inducer, each relating thereto
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035607A2 (en) * 2002-10-17 2004-04-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
WO2005044859A2 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2007031875A2 (en) * 2005-08-26 2007-03-22 Glycart Biotechnology Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
DK2180007T4 (da) * 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
RU2306952C2 (ru) * 2001-01-31 2007-09-27 Байоджен Айдек Инк. Лечение в-клеточных злокачественных опухолей с использованием комбинации применений, связанных с антителами, уменьшающими количество b-клеток, и с иммуномодулирующими антителами
SI2289936T1 (sl) * 2002-12-16 2017-10-30 Genentech, Inc. Imunoglobulinske variante in njihove uporabe
DOP2006000029A (es) * 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
JP2008541758A (ja) * 2005-06-02 2008-11-27 アストラゼネカ エービー Ｃｄ２０に対する抗体およびその使用
AU2008295140A1 (en) * 2007-09-05 2009-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with type I and type II anti-CD20 antibodies
EP2268310B1 (en) * 2008-03-25 2016-07-20 Roche Glycart AG Use of a type ii anti-cd20 antibody with increased antibody dependent cellular cytotoxicity (adcc) in combination with cyclophosphamide, vincristine and doxorubicine for treating non-hodgkin' s lymphomas

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035607A2 (en) * 2002-10-17 2004-04-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
WO2005044859A2 (en) * 2003-11-05 2005-05-19 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2007031875A2 (en) * 2005-08-26 2007-03-22 Glycart Biotechnology Ag Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Umana P et al., Novel 3rd generation humanized type IICD20 antibody with glycoengineered Fc and modified elbow hinge for enhanced ADCC and superior apoptosis induction. BLOOD, vol. 108, no. 11, PART 1, 11 December 2006, page 72A. *

Also Published As

Publication number Publication date
US20140065134A1 (en) 2014-03-06
PE20091821A1 (es) 2009-11-25
RU2010143454A (ru) 2012-05-10
US20100310581A1 (en) 2010-12-09
US20160000911A1 (en) 2016-01-07
IL208018A0 (en) 2010-12-30
US20110177067A1 (en) 2011-07-21
DK2268310T3 (en) 2016-08-15
TW200951141A (en) 2009-12-16
CY1117984T1 (el) 2017-05-17
US20090246197A1 (en) 2009-10-01
JP6154039B2 (ja) 2017-06-28
JP2014101370A (ja) 2014-06-05
CL2009000713A1 (es) 2010-04-09
NZ587284A (en) 2012-05-25
RS55258B1 (sr) 2017-02-28
CA2716884C (en) 2017-10-03
PL2268310T3 (pl) 2017-08-31
JP2011515428A (ja) 2011-05-19
RU2589704C2 (ru) 2016-07-10
JP5547709B2 (ja) 2014-07-16
ES2592312T3 (es) 2016-11-29
AU2009228616A1 (en) 2009-10-01
CN107198772A (zh) 2017-09-26
KR20100121525A (ko) 2010-11-17
SI2268310T1 (sl) 2016-11-30
MY163544A (en) 2017-09-29
AU2009228616B2 (en) 2014-07-24
EP2268310B1 (en) 2016-07-20
BRPI0909227B1 (pt) 2020-11-24
LT2268310T (lt) 2016-09-26
BRPI0909227B8 (pt) 2021-05-25
MA32140B1 (fr) 2011-03-01
JP2016121183A (ja) 2016-07-07
HUE028828T2 (en) 2017-01-30
EP2268310A1 (en) 2011-01-05
HRP20161301T1 (hr) 2016-11-18
WO2009118142A1 (en) 2009-10-01
JP5912142B2 (ja) 2016-04-27
KR101280716B1 (ko) 2013-07-01
AR072947A1 (es) 2010-10-06
BRPI0909227A2 (pt) 2015-12-01
PT2268310T (pt) 2016-08-23
CR11687A (es) 2011-01-10
CN101983071A (zh) 2011-03-02
MX2010009647A (es) 2010-09-28
CA2716884A1 (en) 2009-10-01
US20120301459A1 (en) 2012-11-29
ZA201006190B (en) 2018-11-28
IL208018A (en) 2017-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI500624B (zh) 具有增進之抗體依賴型細胞毒性之第ii型抗－ｃｄ２０抗體之組合療法
US10993942B2 (en) Combination therapy of a type II anti-CD20 antibody with a selective BCL-2 inhibitor
TWI409079B (zh) 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
TWI478724B (zh) 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與氟達拉濱（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）及／或米托因蒽醌（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）之組合療法
US20120134990A1 (en) Combination therapy with type i and type ii anti-cd20 antibodies
US20090110688A1 (en) Combination therapy of type ii anti-cd20 antibody with a proteasome inhibitor
RU2575820C2 (ru) Комбинированная терапия нефукозилированным анти-cd20 антителом с бендамустином