CN107708703A - 鱼类寄生虫病防除剂和饲料 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于，提供特征在于在鱼类的养殖中含有β‑1,4‑甘露二糖的防除鱼类寄生虫所致的疾病的添加剂、饲料。本发明的鱼类寄生虫用防除剂和饲料的特征在于，其含有β‑1,4‑甘露二糖。本发明的鱼类寄生虫用防除剂通过被添加至饲料中，或者直接用作饲料，能够减少寄生虫的包囊数且改善寄生虫所致的疾病，能够实现寄生虫的防除，而不伴有低盐水浴、药浴之类的转移复杂性、对鱼造成的负担。

Description

鱼类寄生虫病防除剂和饲料

技术领域

本发明涉及用于防除鱼类养殖时的寄生虫的防除剂和饲料。

背景技术

对于海水养殖业而言，寄生虫病是导致养殖鱼大量死亡的原因，成为海水养殖业的显著问题之一。其中，例如属于原生动物的纤毛虫纲的海水白点虫等的宿主范围也非常广，其寄生于多种海产鱼类。据称其原本在海洋馆、陆地水箱等封闭的饲养环境中产生，但近年来在养鱼场也变得频发，成为海水养殖业的阻碍要素。

作为寄生虫的代表例，已知有寄生于真鲷、比目鱼等的海水白点虫(Cryptocaryonirritans)；寄生于鰤鱼类、真鲷等的本尼登虫(Benedenia seriolae)等。

例如，海水白点虫(Cryptocaryon irritans)的感染周期重复下述步骤：寄生于鱼体而致宿主死亡的成虫(トロホント)，其若生长则自行离开鱼，在水中沉降而形成包囊(分裂前体(トモント))，白点虫在包囊中反复进行不对称分裂，在分裂后从包囊中游出而形成蠕虫索兰托(虫体セロント)，其感染鱼体。

作为这些寄生虫病的防除对策，海水白点虫比较不耐受低盐分，每3天进行4次3小时的低盐水浴(1％)是有效的。此外，单纯地转移至没有白点虫的海水水箱也是有效的(非专利文献1)。

此外，还有基于过氧化氢的药浴法，但它们均对鱼产生胁迫、药剂会对鱼自身造成不良影响、进而养殖业者的作业繁杂，这样的问题较多。此外，药浴法还存在食用鱼中的药物残留、对环境造成不良影响等问题。

此外，作为除了寄生虫之外的感染病的防除对策，关于包含甘露二糖的原材料已知的是：棕榈仁粗粉、椰子粗粉、咖啡渣、瓜尔豆粗粉等富含以甘露糖作为构成糖的甘露聚糖，已知的是：添加有包含以甘露二糖作为主要成分的低聚甘露糖类的组合物的饲料具有抑制属于有害细菌的沙门氏菌扎根在动物肠道内，并将其排出体外的排菌效果(抑制沙门氏菌扎根的效果)，所述甘露二糖是使酶作用于这些天然原料而制备的(非专利文献2)。

专利文献1记载了：特征在于含有β-1,4-甘露二糖的水产养殖用饲料能够改善生长性，能够得到它们的残留不会对人体造成影响的饲料。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2010-57518号公报

非专利文献

非专利文献1：鱼贝类的感染病/寄生虫病(若林久嗣、室贺清邦编纂)、恒星社厚生阁，p.295-303,2004

非专利文献2：Poultry Science,687,p.1357-1360,1989

发明内容

发明要解决的问题

本发明的课题在于，提供特征在于在鱼类的养殖中含有β-1,4-甘露二糖的防除鱼类寄生虫所致疾病的添加剂、饲料。

用于解决问题的方法

作为现有技术的专利文献1提及了特征在于含有β-1,4-甘露二糖的水产养殖用饲料会改善生长性，但完全没有明确感染寄生虫时的包囊(シスト)的防除、发生感染时减少死亡数的效果。

本发明人为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现：通过使用含有β-1,4-甘露二糖但不伴有对鱼造成的胁迫、药剂对鱼造成的不良影响或残留问题、以及养殖业者的繁杂作业的防除剂，抑制感染寄生虫时产生包囊的效果以及寄生虫所致的死亡得以飞跃性地改善，从而完成了本发明。

即，本发明为：

(1)一种鱼类寄生虫病的防除剂，其特征在于，其含有β-1,4-甘露二糖；

(2)根据(1)所述的鱼类寄生虫病的防除剂，其中，β-1,4-甘露二糖源自椰子粗粉、棕榈仁粗粉或咖啡渣；

(3)根据(1)所述的鱼类寄生虫病的防除剂，其中，β-1,4-甘露二糖是使甘露聚糖分解酶作用于含甘露聚糖的天然物而生成的；

(4)根据(1)～(3)中任一项所述的鱼类寄生虫病的防除剂，其中，β-1,4-甘露二糖的含量为3重量％以上；

(5)一种鱼类寄生虫病防除用饲料，其特征在于，其含有β-1,4-甘露二糖；

(6)一种寄生虫病的防除方法，其特征在于，对鱼类施与含有β-1,4-甘露二糖的组合物。

发明的效果

本发明的鱼类寄生虫用防除剂和饲料通过被添加至饲料中、或者直接用作饲料，能够改善寄生虫包囊数的减少以及寄生虫所致的疾病，能够实现寄生虫的防除而不伴有对鱼造成的胁迫、药剂对鱼造成的不良影响或残留问题、以及养殖业者的低盐水浴或药浴之类的转移之类的繁杂作业。

附图说明

图1是使用了真鲷鱼苗的饲养试验的存活率的示意图。在饲养开始后的7～11天后，对照区的水箱中的39尾全部死亡，存活率为0％，与此相对，试验4％区的水箱中仅死亡1尾，此外，试验2％区的水箱中没有死亡例，存活率达到100％。

具体实施方式

本发明的鱼类寄生虫用防除剂和饲料的特征在于，其含有β-1,4-甘露二糖。

(β-1,4-甘露二糖)

本发明的鱼类寄生虫用防除剂和饲料中，β-1,4-甘露二糖(以下也简称为甘露二糖)是2分子甘露糖借助β-1,4-糖苷键而成的。本发明中使用的β-1,4-甘露二糖可通过例如合成甘露糖的方法、分解β-1,4-甘露聚糖(以下也简称为甘露聚糖)的方法来获得。

(β-1,4-甘露二糖的制造方法)

分解β-1,4-甘露聚糖的方法从原料资源性和反应效率的观点出发是优选的，能够更简便地获得β-1,4-甘露二糖。该方法中，使甘露聚糖分解酶作用于例如富含甘露聚糖的棕榈仁粗粉、椰子粗粉、咖啡豆渣、瓜尔胶、刺槐豆胶等含甘露聚糖的天然物或者从这些天然物中提取的甘露聚糖，能够得到β-1,4-甘露二糖。

此外，作为该方法中使用的甘露聚糖分解酶，只要是甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、半纤维素酶等具有分解甘露聚糖而生成甘露二糖的活性的酶，则可以是任意酶，可优选使用源自黑曲霉(Aspergillus niger)且已经上市销售的酶(例如，半纤维素酶GM“AMANO”(天野制药株式会社制)、Sumizyme ACH(新日本化学工业株式会社制)、Cellulosin GM5(阪急バイオインダストリー公司)等。此外，除此这些之外，也可以使用作为木聚糖酶、纤维素酶而上市销售、且具有该水解活性的酶，可以使用例如Cellulase Y-NC(养乐多药品工业公司制)。尤其是，从抑制甘露糖生成、能够大量生成甘露二糖的观点出发，优选为甘露糖苷酶(exo型)活性低、甘露聚糖酶(endo型)活性高的半纤维素酶GM“AMANO”(天野制药株式会社制)、Sumizyme ACH(新日本化学工业株式会社制)。

进而，该方法中，甘露聚糖分解酶以溶解或分散至水中的酶液的形式作用于含甘露聚糖的天然物或者从其中提取的甘露聚糖。并且，使用含甘露聚糖的天然物时为了进行有效的反应，重要的是，调整包含含甘露聚糖的天然物、甘露聚糖分解酶和水的反应体系中的水分。通过添加水，能够使甘露聚糖类的纤维质充分溶胀，从而容易与酶液接触。作为用于调整水分的水添加量，相对于甘露聚糖100重量份，优选为50～10000重量份、更优选为50～1500重量份、进一步优选为50～500重量份。如果水分量少，则存在酶反应不易进行的倾向，水分量多时，存在酶反应效率降低的倾向。

此外，作为酶量、反应时间，可以尽可能大量生成甘露二糖的方式选择酶，并调整反应时间。但是，甘露聚糖酶(endo型)活性高的酶通常也具有甘露糖苷酶(exo型)活性，因此，如果酶反应的时间过长，则甘露二糖被分解而导致甘露糖量增加，因此，反应时间优选不延长至必要时间以上。它们的酶反应条件以甘露二糖产量尽可能增多的方式适当设定。此时，优选以β-1,4-甘露二糖的含量大于甘露糖的方式进行设定。例如，甘露糖相对于β-1,4-甘露二糖的比例优选为60重量％以下、更优选为20重量％以下。如上操作，例如使用椰子粗粉(甘露聚糖含量约为30％)作为原料并使其反应3～36小时时，甘露二糖量还因所用酶的种类或量、时间而异，但相对于原料100重量份，能够生成至5～15重量份左右为止。

(β-1,4-甘露二糖的含量)

这样生成的含有甘露二糖的酶处理物(含有β-1,4-甘露二糖的组合物)可以去除不溶物等来提高甘露二糖浓度，从而作为鱼类寄生虫用防除剂，由于浓缩需要耗费成本，因此，不如不去除不溶物等，可以直接或根据需要进行干燥后作为防除剂。此时，防除剂中优选含有3重量％以上的甘露二糖。更优选为5重量％以上、进一步优选为7重量％以上、进一步优选为9重量％以上。该防除剂可以配合在饲料中使用。另一方面，也可以将从酶处理物中水提取甘露二糖等而得到的产物直接添加至饲料中来用作防除剂。此时，该水提取物除了含有甘露二糖之外，还含有甘露糖、低聚甘露糖类等，但不需要特别地仅对甘露二糖进行提取、提纯，反而优选包含它们。

本发明的鱼类寄生虫用防除剂在添加至饲料时，在配合饲料中的含量优选以甘露二糖达到0.001～2.00重量％的方式进行混合。进一步优选以达到0.005～1.00％、最优选以达到0.01～0.50％的方式进行添加。这样的饲料通过对鱼类以固态状(DP)或含水丸子状(MP)进行喂饵，能够防除寄生虫。此外，可以将水溶液直接混合至进行养殖的海域的海水中。混合至海水时，可以将与根据鱼的养殖饲育数、摄饵量添加至饲料时为同等的甘露二糖量作为指标。

(鱼类)

鱼类是在水中生存，主要用鳃进行呼吸并具有鳍的脊椎动物，用无颌纲、软骨鱼纲、硬骨鱼纲等进行统称，本发明的鱼类防除剂和饲料可以用于这些所有的鱼类。即，作为能够使用本发明的鱼类寄生虫用防除剂和饲料的鱼类，可例示出真鲷、鰤鱼类、河豚、比目鱼、白鳝、泥鳅、鳗鱼、金枪鱼、科鱼、鲑鱼、鳟鱼、香鱼、黄尾鱼、鲈鱼类、鲤鱼类等。作为施予本发明的防除剂和饲料的阶段，可以对孵化后的鱼苗施饵一定期间，也可以在其后长成成鱼为止的整个养殖阶段中使用。

(寄生虫)

本发明的鱼类寄生虫用防除剂和饲料以因在养殖现场产生的鱼类寄生虫而发病，期望对其进行适当防除的所有寄生虫病作为对象。可例示出例如属于纤毛虫的白点虫(Cryptocaryon irritans、Ichthyophthirius multifiliis)、车轮虫(Trichodina spp.等)、Chilodonella piscicola等；属于单生虫的本尼登虫(Benedenia seriolae、Neobenedenia girellae等)、鳃吸虫(Heteraxine heterocerca、Bivagina tai、Heterobothrium okamotoi、Neoheterobothrium hirame等)；属于甲壳虫的鱼虱(Caligusspinosus等)；属于吸虫的鱼类血吸虫(Paradeontacylix spp.、Cardicola spp.等)等。尤其是，针对在养殖业界成为问题的白点虫，对于海水白点虫(Cryptocaryon irritans)、淡水白点虫(Ichthyophthirius multifiliis)均是有效的。

(作为饲料的使用)

将本发明的防除剂混合至饲料中使用时，也可以与其它通常的作为饲料原料而使用的材料进行自由配合。可列举出例如鱼粉、肉粗粉、脱脂奶粉、干燥蛋清、磷虾粗粉、酪朊、明胶等动物性材料、酵母类、玉米淀粉、糊精等糖类、大豆蛋白、小麦谷蛋白、玉米蛋白等植物性蛋白质、玉米、芦粟、小麦、大麦、米、黑麦、燕麦、羽扇豆、甘薯、木薯等谷物类、大豆、豆腐渣、脱脂大豆等豆类、菜籽渣、向日葵渣、红花渣等植物性油渣类、米糠、麸子、麦糠等糟糠类、玉米谷蛋白料、甜菜渣、啤酒糟、酒糟、魔芋飞粉等制造副产物类、棉籽油、菜籽油、玉米油、大豆油、葵花油、红花油、橄榄油、椰子油、棕榈油等油脂类等。它们可以单独使用，或者以两种以上的混合物的形式使用。作为饲料的施饵形态，有不含水分的固态饲料(DP)和包含水分的丸子状饲料(MP)的形态等，可以以任意形态来施饵。

除此之外，为了防止饲料品质降低、补充饲料的营养成分及其它有效成分、促进饲料中含有的营养成分的有效利用，可以使用各种添加物。例如，可以在不损害本防除剂效果的范围内，自由地配合氨基酸类、维生素类、矿物质类、脂肪酸类等营养成分、酶类、活菌剂、防霉剂、抗氧化剂、乳化剂等。

实施例

以下示出本发明的实施例，详细地说明本发明，但本发明不限定于下述实施例。实施例中的“份”、“％”在没有特别说明的情况下分别表示“重量份”、“重量％”。

(实施例1)

使溶解有酶半纤维素酶GM“AMANO”(天野制药株式会社制)0.25份的酶液150份以60℃对椰子粗粉(甘露聚糖含量为30％、水分为4.4％)100部作用12小时后，利用流动层干燥装置(大河原制作所制)干燥至水分为9.3％为止，得到干燥粉体106份。利用离子交换色谱法测定该干燥粉体的甘露二糖含量和甘露糖含量时，生成β-1,4-甘露二糖12.7份、甘露糖1.41份。

(实施例2：使用了真鲷鱼苗的寄生虫防除试验1、基于人工寄生的包囊数抑制进行评价)

将120尾真鲷鱼苗(平均体重为6.8g)在6个200L水箱中统一体重地各容纳20尾。翌日，在所有的水箱中，以每1个水箱为4420条虫的方式投入在密封状态下冷藏保存的白点病包囊中浮出的幼生虫，并进行饲育(攻击)。自其翌日起，向3个水箱中施予包含4％的实施例1中制造的β-1,4-甘露二糖作为防除剂的饲料，向剩余的3个水箱中施予对照饲料作为对照区，并继续饲育。攻击后，在3星期内每天进行观察，观察有无死亡、其它异常。自明确观察到白点虫寄生的翌日起，每2天回收包囊并计数。将供试鱼移动至预备水箱后，排掉所有的饲育水，使用刮刀将附着于水箱底面的包囊回收而不使其残留。回收的包囊用70％乙醇进行固定，以后用实体显微镜进行计数。

关于实施例2的防除试验中使用的饲料，试验4％区的饲料中，相对于基础饲料(日清丸红公司制、真鲷EP超级2号)100份，添加包含实施例1中制造的β-1,4-甘露二糖的防除剂4份并混合后，作为扩散剂而混合1份羧甲基纤维素，向其中添加10份水并混合。对照区的饲料中，相对于基础饲料100份，不添加防除剂，作为扩散剂而混合1份羧甲基纤维素，向其中添加10份水并混合。

将实施例2的防除试验的结果示于表1。在人为感染的7～8天后，第一次确认体表的寄生，自第9天起每隔2天进行包囊的回收/计数。关于感染3星期后为止的总包囊数，对照区的3个水箱的合计达到184个，与此相对，试验4％区的3个水箱的合计达到117个。此外，关于每个水箱的包囊数，对照区的3个水箱的平均数为61.3±13.3个，试验4％区的3个水箱的平均数达到39.0±5.2个，观察到显著的防除效果。

(实施例3：使用了真鲷鱼苗的寄生虫防除试验2、基于海产寄生虫的感染防除的评价)

将120尾真鲷鱼苗(平均体重为20.5g)在3个300L水箱中统一体重地各容纳40尾。向其中的1个水箱中施饵包含4％的实施例1中制造的β-1,4-甘露二糖作为防除剂饲料，向另1个水箱中施饵包含2％防除剂的饲料，向剩余的1个水箱中施饵作为对照的对照饲料，并继续饲育。海水使用泵从海上进行采取，但上述3个水箱使用了从同一场所采取的海水，因此，所有水箱中存在大致相同数量的寄生虫。自开始饲养起的3星期内每天观察，确认有无死亡、其它异常。

关于实施例3的防除试验中使用的饲料，试验4％区的饲料中，相对于基础饲料(真鲷EP超级2号)100份，添加包含实施例1中制造的β-1,4-甘露二糖的防除剂4份并混合后，作为扩散剂而混合1份羧甲基纤维素，向其中添加10份水并混合。试验2％区的饲料中，相对于基础饲料100份，添加包含实施例1中制造的β-1,4-甘露二糖的防除剂2份并混合后，作为扩散剂而混合1份羧甲基纤维素，向其中添加10份水并混合。对照区的饲料中，相对于基础饲料100份，不添加防除剂，作为扩散剂而混合1份羧甲基纤维素，向其中添加10份水并混合。

将实施例3的饲养试验的存活率示于图1。在开始饲养后第6天以后，在所有的水箱中开始观察到白点病的寄生感染，因此，约在9天后，在对照区的水箱中基本所有例子均观察到白点，在试验4％区和试验2％区的水箱中，6、7成左右可观察到白点。在开始饲养后7～11天后，在对照区的水箱中的39尾全部死亡，与此相对，试验4％区的水箱中，仅死亡1尾，此外，在试验2％区的水箱中没有死亡例。这些死亡例所有均罹患了重度的白点病。其后也继续饲育，但试验4％区和2％区的水箱中的白点病的病状也趋向好转，在开始后15天左右变得观察不到白点病罹患个体，其后，继续饲育至开始后第20天为止，但试验4％区和试验2％区均观察不到新的死亡例。以上可确认：通过使用含有该防除剂的饲料，能够显著地防除外部寄生虫。

(表1)使用了真鲷鱼苗的寄生虫抑制试验结果

产业上的可利用性

综上发现：通过使用本发明的含有β-1,4-甘露二糖的防除剂和饲料，感染寄生虫时的包囊的防除效果以及基于寄生虫的症状和死亡率得以飞跃地改善。能够提供对于鱼类寄生虫病含有有效天然生理活性物质的鱼类饲料。通过使用其，能够安全地防止鱼类寄生虫病所致的体重减少、死亡，而不伴有对鱼造成的胁迫、药剂对鱼造成的不良影响或残留问题、养殖业者的繁杂作业，还能够提高鱼类养殖中的经济性。

Claims (6)

1.一种鱼类寄生虫病的防除剂，其特征在于，其含有β-1,4-甘露二糖。

2.根据权利要求1所述的鱼类寄生虫病的防除剂，其中，β-1,4-甘露二糖源自椰子粗粉、棕榈仁粗粉或咖啡渣。

3.根据权利要求1所述的鱼类寄生虫病的防除剂，其中，β-1,4-甘露二糖是使甘露聚糖分解酶作用于含甘露聚糖的天然物而生成的。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的鱼类寄生虫病的防除剂，其中，β-1,4-甘露二糖的含量为3重量％以上。

5.一种鱼类寄生虫病防除用饲料，其特征在于，其含有β-1,4-甘露二糖。

6.一种寄生虫病的防除方法，其特征在于，对鱼类施与含有β-1,4-甘露二糖的组合物。