CN1717494A - 含有β－1,4－甘露二糖的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了能够抑制动物体内沙门氏菌的附着、将沙门氏菌高效地排出体外的含有β－1，4－甘露二糖的组合物以及它的制造方法，还提供了包含含有β－1，4－甘露二糖的组合物的饲料用添加剂、配有含有β－1，4－甘露二糖的组合物的饲料。即：含有β－1，4－甘露二糖的组合物的制造方法，其特征为，将甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，使之生成相对于分解前的甘露聚糖而言至少10重量％以上的β－1，4－甘露二糖；含有β－1，4－甘露二糖的组合物，其特征为，由甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物所得到，含有用干重换算至少10重量％以上的β－1，4－甘露二糖；包含含有β－1，4－甘露二糖的组合物的饲料用添加剂；配有含有β－1，4－甘露二糖的组合物的饲料。
Description
技术领域
本发明涉及含有β-1，4-甘露二糖(β-1，4-mannobiose)的组合物及其制造方法、含有β-1，4-甘露二糖组合物的饲料用添加剂、以及配合有含有β-1，4-甘露二糖的组合物的饲料，特别是可以抑制沙门氏菌在家畜或家禽的肠内附着(定着)的饲料。
背景技术
既往已知，在棕榈仁粉、椰子粉、瓜尔豆(guar)粉等中，大量地存在着以甘露糖为构成糖的甘露聚糖，在将酶作用于这些天然原料时，可以生成甘露糖、甘露寡糖和甘露多糖类物质，很多这样的方法被开发出来。另外，也知道在饲料中添加这些甘露糖类物质，可以抑制有害的沙门氏菌在肠内的附着，有使其排出体外的排菌效果(抑制沙门氏菌附着的效果)，很多利用这一效果的技术也被提出来。(Poultry Science，68，p.1357，1989)。
例如有报告指出，用酶分解瓜尔豆粉、椰子粉等含有甘露聚糖的材料，得到配合有以甘露二糖、甘露三糖为主要成分并混有单糖类物质的甘露寡糖类物质而成的饲料，该饲料可以提高鸡蛋的品质；同时，报道认为，甘露寡糖类物质很可能对于防止沙门氏菌在家畜肠内的附着是有效的(特开平7-236429号公报)。另外，有报告认为，用甘露糖、甲基-α-甘露糖苷、甘露寡糖、瓜尔豆胶、刺槐豆胶或是由酵母得到的甘露聚糖经酶解和/或经酸水解得到的甘露糖类物质而配制的饲料，对于预防沙门氏菌等有害菌的感染是有效的(特开平8-38064号公报)。此外，还有报告认为，由以甘露糖的重复单元在40-100的多糖为中心(30～80％)并混合有寡糖(5～30％)的甘露糖系的多糖体所配制的家畜用饲料，对于防止沙门氏菌在家畜肠内的附着是有效的(特开平8-173055号公报)。另外，还有报道分别是关于：由棕榈仁粉、瓜尔豆粉等含甘露聚糖丰富的原料在酶的作用下分解成的甘露寡糖所配制的饲料；将酶作用于椰子粉而得到的含有甘露糖的饲料；利用棕榈仁粉制造甘露糖和/或甘露寡糖的方法(国际公开第95/17103号文本，国际公开第99/08544号文本，特开2001-231591号公报)。
虽然有以上的种种报告出来，现实是它们对防止沙门氏菌在肠内附着的效果并不理想，需要进一步的改善。比如，虽然甘露糖具有抑制沙门氏菌附着的作用，但其自身为单纯的糖类，即使作为饲料提供给家畜，大部分也被肠内的菌群容易地利用了；另外也可考虑是被家畜自身消化、吸收、排泄掉了。另外，由本发明者的实验结果可知，当向家畜使用为强化免疫而用的生菌剂的时候，会进一步增强甘露糖的分解活性，为了排除沙门氏菌而给予的甘露糖大部分会消失。因此，实际上为了充分地获得抑制沙门氏菌附着的效果，必须要给予非常大量的甘露糖。另外，通过做酵母的凝集试验，得知比甘露二糖分子量大的甘露寡糖及甘露糖系的多糖体对沙门氏菌附着的抑制效果小。本发明是在缜密思考众多现实状况后做出的，本发明提供能有效地抑制动物体内沙门氏菌的附着并将其排出体外的、含有β-1，4-甘露二糖的组合物及其制造方法、含有含β-1，4-甘露二糖的组合物的饲料用添加剂，配合有含β-1，4-甘露二糖的组合物的饲料。
经过努力的研究，本发明者得出以下的结果，β-1，4-甘露二糖具有沙门氏菌的识别活性，其识别能力虽然比甘露糖略低，但难以被家畜肠内的细菌利用，因而对于抑制沙门氏菌的附着，有比甘露糖更有效的作用。因此，本发明确立了高效地制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法，发现所得到的含有β-1，4-甘露二糖的组合物里有高含量的β-1，4-甘露二糖，从而完成了本发明。
发明内容
也就是说，本发明提供了制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法，其特征为，将甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，使之生成相对于分解反应前的甘露聚糖而言至少是10重量％以上的β-1，4-甘露二糖(权利要求1)；制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法，其特征为，将甘露聚糖分解酶作用于由含甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖，使之生成相对于分解反应前的甘露聚糖而言至少是10重量％以上的β-1，4-甘露二糖(权利要求2)；如权利要求1或2所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法，其特征为，相对于100重量份的甘露聚糖，添加50-100重量份的水，用甘露聚糖分解酶进行作用(权利要求3)；如权利要求1-3中任一项所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法，其特征为，甘露聚糖酶作用时的温度为40℃～55℃(权利要求4)；如权利要求1-4中任一项所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法，其特征为，生成相对于分解反应前的甘露聚糖而言为20-80重量％的β-1，4-甘露二糖(权利要求5)；如权利要求1-5中任一项所述的制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法，其特征为，含有甘露聚糖的天然物为棕榈仁粉和/或椰子粉(权利要求6)。
另外，本发明提供了，含有用上述权利要求1-6中任一项的制造方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的饲料用添加剂(权利要求7)；饲料，其特征在于，配合有用上述权利要求1-7中任一项的制造方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，可以抑制沙门氏菌在家畜或家禽肠内的附着(权利要求8)；如权利要求8所述的饲料，其特征为，含有0.001-1重量％的β-1，4-甘露二糖(权利要求9)；含有β-1，4-甘露二糖的组合物，其特征为，通过将甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物而得到，用干重换算，至少含有3重量％以上的β-1，4-甘露二糖(权利要求10)；含有β-1，4-甘露二糖的组合物，其特征为，通过将甘露聚糖酶作用于由含有甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖而得到，用干重换算，至少含有10重量％以上的β-1，4-甘露二糖(权利要求11)；如权利要求10或11所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，其特征为，含有甘露聚糖的天然物为棕榈仁粉和/或瓜尔豆粉(权利要求12)；饲料用添加剂，其特征为，含有如权利要求10-12中任一项所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物(权利要求13)；饲料，其特征为，配合有权利要求10-12中任一项所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，可以抑制沙门氏菌在家畜或家禽肠内的附着(权利要求14)；如权利要求14所述的饲料，其特征为，含有0.001-1重量％的β-1，4-甘露二糖(权利要求15)。
附图说明
图1是表示对施用了本发明的饲料、比较例1的饲料、市售的饲料的产蛋鸡新生雄雏接种沙门氏菌后，随着天数的推移，其盲肠内沙门氏菌量的统计图表。
图2是表示对施用了本发明的饲料、比较例2的饲料、市售的饲料的焙烤用鸡新生雏接种沙门氏菌后，随着天数的推移，其盲肠内沙门氏菌量的统计图表。
图3是表示对施用了本发明的饲料、比较例2的饲料、市售的饲料的7周龄产蛋鸡中雏接种沙门氏菌后，随着天数的推移，其盲肠内沙门氏菌量的统计图表。
具体实施方式
本发明的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法，只要是将甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，通过含有甘露聚糖的天然物中的甘露聚糖的水解等，生成相对于分解前的甘露聚糖而言至少为10重量％以上(10-100重量％)的β-1，4-甘露二糖的制造方法或者只要是将甘露聚糖分解酶作用于由含有甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖，生成相对于分解前的甘露聚糖而言至少为10重量％以上(10-100重量％)的β-1，4-甘露二糖的制造方法即可，没有特别的限制，但相对于分解前的甘露聚糖而言，生成20-80重量％的β-1，4-甘露二糖为优选，生成30-80重量％的β-1，4-甘露二糖为更优选。
本发明的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，只要是通过将甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物而得到的、用干重换算至少含有3重量％以上的β-1，4-甘露二糖的组合物或者通过将甘露聚糖分解酶作用于由含有甘露聚糖的天然物提取的甘露聚糖而得到的、用干重换算至少含有10重量％以上的β-1，4-甘露二糖的组合物即可，没有特别的限制，所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，例如可以根据上述含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法制造。
本发明的饲料用添加剂，只要是含有用上述本发明的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法制成的含有β-1，4-甘露二糖的组合物或者含有上述本发明的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的饲料用添加剂即可，没有特别的限制，所述的饲料用添加剂，可以例举为由这些含有β-1，4-甘露二糖的组合物构成的物质，也可例举为将这些含有β-1，4-甘露二糖的组合物与保存剂等其他添加剂成分配合使用的物质。
另外，上述含有β-1，4-甘露二糖的组合物或饲料用添加剂的使用方式，可以是酶处理物本身或它的干燥物、也可以是在酶处理后用水等提取出甘露二糖而得的抽取物或它的干燥物等，没有特别的限制。
上述含有甘露聚糖的天然物，只要含有以β-1，4结合的甘露糖即可，没有特别的限定，可举例如，从椰子粉、棕榈仁粉、瓜尔豆粉等高等植物得来的甘露聚糖。从容易获得且甘露聚糖丰富等角度讲，椰子粉、棕榈仁粉是优选的。另外，从含有甘露聚糖的天然物中提取不溶于水的成胶状的甘露聚糖的方法，可示例为用碱性溶液来提取的方法，比如用5％的冷氢氧化钠溶液或10％的氢氧化钠溶液来提取。
所用的甘露聚糖分解酶，只要是甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、半纤维素酶等具有将甘露聚糖分解生成β-1，4-甘露二糖活性的酶或是具有将由甘露聚糖生成的甘露糖合成β-1，4-甘露二糖活性的酶即可，并没有特别的限定，但推荐使用来自Aspergillus niger的酶或是市售的酶，如半纤维素酶GM”アマノ”(天野制药株式会社制)、スミチ一ムACH及スミチ一ムACH-L(新日本化学工业株式会社制)、セルロシンGM5(阪急バイオインダストリ一株式会社制)等，除了这些之外，可以使用作为木聚糖酶、纤维素酶市售的、具有相应的水解活性的酶，如纤维素酶Y·NC(ヤクルト药品工业株式会社制)等也可使用。在这些酶当中，甘露糖苷酶(exo型)活性低及甘露聚糖酶(endo型)活性高的酶为宜，具体地说，半纤维素酶GM”アマノ”(天野制药株式会社制)、スミチ一ムACH及スミチ一ムACH-L(新日本化学工业株式会社制)，可以在抑制甘露糖生成的同时生成大量的甘露二糖，因此很适宜。总之，β-1，4-甘露二糖既可由分解β-1，4-甘露聚糖(β-1，4-Mannan)的方法获得，也可以用由甘露糖合成的方法获得，但从原料的资源性及反应效率的角度看，分解β-1，4-甘露聚糖的方法更简便易行。
本发明的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法中，将甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物或是由含有甘露聚糖的天然物中提取的甘露聚糖，所用的甘露聚糖分解酶，使其溶解或者分散在水中做成酶溶液的方式使用为佳。为了进行高效的反应，在含有甘露聚糖的天然物或甘露聚糖、甘露聚糖分解酶及水所形成的反应系中，调整水分的比率是重要的。用于水分调整的水的添加量，每100重量份的甘露聚糖兑50-10000重量份的水为优选，100-1500重量份为更优选。当水的添加量在上述范围时，反应系存在充分的水分，甘露聚糖类的纤维质可以充分地浸润膨胀，可以容易地与酶溶液接触，高效地生成β-1，4-甘露二糖。另外，水分在上述范围内时，可以抑制因水分过多而导致的与酶浓度稀释相伴的反应效率的低下，同时，可以抑制在干燥过程中其消费的增加。另外，对酶的量和反应时间来说，只要生成甘露二糖的量相对于分解前的甘露聚糖而言至少达到10重量％即可，并没有特别的限定。但在使用甘露聚糖酶(endo型)活性高的酶的情况下，通常具有甘露糖苷酶(exo型)活性的甘露二糖会被分解，因此反应时间优选不要超过必要的时间。另外，反应温度在40℃-65℃比较好，但过高的温度会使甘露糖苷酶的活性增高，增加了甘露糖的生成量，因此，若要抑制甘露糖的生成并且期望生成大量的甘露二糖的时候，在40℃-55℃、更优选在45℃-53℃反应为好。
例如，将棕榈仁粉(甘露聚糖的含量大约为36重量％)作为原料，使它反应3-36个小时，生成β-1，4-甘露二糖的量，虽然与使用的酶的种类和量及反应时间相关，但若把原料设为100重量份，总可得到6-17重量份左右的产物。由本发明的制备含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的组合物中，用干重换算含有至少3重量％以上、优选10重量％以上的β-1，4-甘露二糖的祖合物优选可以用于饲料用添加剂或是饲料。
本发明的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，可以作为饲料用添加剂，用来抑制家畜或家禽肠内的沙门氏菌的附着，在为增强家畜的免疫而与成鸡盲肠内容菌等的生菌剂一起使用时，它很难被菌利用，这是它特别有意义的地方。例如，可将含有β-1，4-甘露二糖的组合物直接用作饲料，也可将其添加于饲料中使用。该含有β-1，4-甘露二糖的组合物，除了甘露二糖外还含有甘露糖、甘露寡糖类物质，但没有必要特别地只将甘露二糖提取、精制出来，含有这些物质反而更有利。在将含有β-1，4-甘露二糖的组合物添加到饲料中的时候，优选通过添加使饲料中含有0.001-1重量％的β-1，4-甘露二糖，更优选含有0.005-0.1重量％。甘露二糖的含量在上述范围内时，本发明的效果会更奏效。另外，例如将含有β-1，4-甘露二糖的组合物作为饲料添加的用途来原样流通、使用的时候，为了防止霉、菌类等的产生，优选用流动层干燥、真空干燥等方法进行干燥，使水分保持在10重量％以下。
本发明的可以抑制沙门氏菌附着的饲料，只要是配合有由上述本发明的制备含有β-1，4-甘露二糖的组合物的方法得到的含有β-1，4-甘露二糖的组合物或者上述含有β-1，4-甘露二糖的组合物的饲料即可，并没有特别的限定。本发明所用的饲料以固体状或液体状施用于家畜或家禽后，可以有效地抑制动物体内沙门氏菌的附着，将沙门氏菌有效地排出体外。β-1，4-甘露二糖，虽然比甘露糖对沙门氏菌的识别力略低，但由于它难以被家畜肠内的细菌类利用，在对沙门氏菌的附着抑制作用方面，比甘露糖更有效，可以有效地将沙门氏菌排出体外，使饲料中甘露糖的含量减少成为可能，使经济负担可以大幅度地减轻。
以下，是本发明的实施例，及本发明的详细说明，但本发明并不仅限于以下实施例的范围。实施例中的“份”，“％”，只要不做特别说明，分别表示为“重量份”，“重量％”。
实施例1(由棕榈仁粉制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物)
将甘露聚糖含量为36％、水分为8.2％的棕榈仁粉(不二制油株式会社)100份，用溶解有0.25份半纤维素酶GM“アマノ”(天野制药株式会社)的酶溶液150份，在60℃下作用12小时后，用流动层干燥装置(大河原制造所制)将水分干燥到9.8％，得到102份的干燥粉体。这种干燥粉体中甘露糖的含量及β-1，4-甘露二糖的含量用离子交换色谱分析法测定的结果为，生成1.44份的甘露糖、10.58份的β-1，4-甘露二糖(相对于甘露聚糖为29.4％；干重换算为11.5％)。
实施例2(由椰子粉制造含有β-1，4-甘露二糖的组合物)
将椰子粉(甘露聚糖含量30％、水分4.2％)100份，用溶解有0.25份半纤维素酶GM“アマノ”(天野制药株式会社)的酶溶液150份，在60℃下作用12小时后，用流动层干燥装置将水分干燥到9.3％，得到106份的干燥粉体。这种干燥粉体中甘露糖的含量及β-1，4-甘露二糖的含量的测定结果为，生成1.36份的甘露糖、12.35份的β-1，4-甘露二糖(相对于甘露聚糖为41.2％；干重换算为12.9％)。
比较例1
将棕榈仁粉(甘露聚糖含量36％、水分8.2％)100份，用溶解有0.3份セルロシンGM5酶(エイチビイアイ株式会社)的酶溶液100份，在60℃下作用72小时后，用流动层干燥装置将水分干燥到7.8％，得到100份的干燥粉体。这种干燥粉体中甘露糖的含量及β-1，4-甘露二糖的含量的测定结果为，生成11.52份的甘露糖、2.57份的β-1，4-甘露二糖(相对于甘露聚糖为7.14％；干重换算为2.79％)。
实施例3(沙门氏菌·酵母凝集抑制实验)
各种糖类的沙门氏菌的凝集抑制实验，按以下的方式进行。将含肠炎沙门氏菌(由伊藤忠饲料株式会社分离的Salmonella enteritidis KTE-61株菌数1×108cfu/ml)的悬浊液0.1ml及蒸馏水0.1ml充分混合，在其中加入酵母キヤンデイダ·アルビカンス(由社团法人动物用生物学的制剂协会购入的Candida albicans KI-102001)悬浊液0.1ml混合。进行预备实验，即这个混合液中发生的凝集反应用实体显微镜得到证实。
由实施例1得到的干燥粉体0.5g与5ml水混合成悬浊液后，以10000rpm离心分离5分钟，将它的离心上清用高速液体色谱分析(日本分光社制)法，分取出约10mg的β-1，4-甘露二糖。然后，用上述预备实验同样的方法，将上述分取出的β-1，4-甘露二糖及使用甘露糖药品的糖水溶液(和光纯药社制；D-Mannose)，分别变化其浓度，得到阻止混合液凝集的最低浓度(凝集抑制最低浓度)。表1中，表示了阻止混合液凝集的实际的凝集抑制最低浓度，以及将甘露糖的凝集抑制最低浓度设为1时的相对浓度(浓度比)。由表1可表明，为阻止沙门氏菌引起的凝集，β-1，4-甘露二糖需要甘露糖的2倍多的量。
(表1)
| 实际的浓度(μg/ml) | 相对浓度(相对于甘露糖) | |
| 甘露糖(D-mannose) | 594 | 1.000 |
| 甘露二糖 | 1290 | 2.173 |
实施例4(代谢实验)
在由实施例1、实施例2及比较例1得来的干燥粉体里，加入水形成10倍量的悬浊液。另外，准备甘露糖药品的1％的水溶液。在以上4种悬浊液或水溶液中，接种鸡盲肠内容构成菌的培养物インテクリ一ン(伊藤忠饲料株式会社)，调查了在37℃温度下甘露糖、β-1，4-甘露二糖的代谢。对培养开始时及20小时培养后的悬浊液或溶液进行取样，以10000rpm离心分离10分钟后，将它们的上清用离子交换色谱分析法，分别测出它们的含有量(mg/g)。其结果在表2中示出。如表2所表明的，比较例1的甘露糖减少了66％，甘露糖药品也减少了69％，可知甘露糖非常容易被肠内细菌代谢掉。与此相对，实施例1中的β-1，4-甘露二糖的减少量为16％，实施例2中的β-1，4-甘露二糖的减少量为17％，可知与甘露糖相比其代谢率明显为低。
(表2)
| 培养开始时(mg/g) | 20小时厌氧培养后(mg/g) | |||
| 甘露糖 | 甘露二糖 | 甘露糖 | 甘露二糖 | |
| 实施例1 | 1.88 | 10.91 | 0.03 | 9.15 |
| 实施例2 | 1.76 | 12.15 | 0 | 10.03 |
| 比较例1 | 10.45 | 2.53 | 3.57 | 2.12 |
| 甘露糖1％ | 9.45 | 0 | 2.93 | 0 |
由上述凝集实验及代谢实验的结果可知，与甘露糖相比，β-1，4-甘露二糖对沙门氏菌的识别能力虽然略低，但因为难于被家畜肠内的细菌所利用，对于抑制沙门氏菌的附着，比甘露糖更有效，可有效地将沙门氏菌排出体外。另外，由代谢实验的结果可知，由于β-1，4-甘露二糖难以被利用，为了增强家畜的免疫，在并用成鸡盲肠内容菌等的生菌剂的时候，特别有用。
实施例5(动物实验)
将150只商业市售的产蛋鸡新生雄鸡雏分三份，其中，给50只喂商业市售的嫩鸡用饲料(商品名：アマタケS，无药剂添加/伊藤忠饲料株式会社制)做对照组，在相同的配合饲料中添加实施例2中得到的干燥粉体0.1％，用此得到的饲料喂50只鸡为一组，以及添加由比较例1中得到的干燥粉体0.1％，用此得到的饲料喂50只鸡为一组，如此共设置三组，不断给食，自由饮水地进行喂养。在3日龄时，经口接种沙门氏菌(Salmonella enteritidis KTE-61株)，在沙门氏菌接种后5日、10日、17日时，对各组盲肠内容物中沙门氏菌数(对数)进行了检测。其结果在表3中示出，其用图表示的为第1图。
(表3)
| SE接种后5日(log cfu/g) | SE接种后10日(log cfu/g) | SE接种后17日(log cfu/g) | |
| 对照组(无添加) | 6.37 | 4.97 | 3.53 |
| 比较例1(酶处理棕榈仁粉，甘露糖型) | 6.31 | 4.67 | 2.64 |
| 实施例2(酶处理椰子粉，β甘露二糖型) | 6.07 | 4.09 | 2.42 |
如表3及图1所表明的，喂以添加由实施例2得来的干燥粉体的饲料的组，及喂以添加由比较例1得来的干燥粉体的饲料的组，两者在实验的全程中，都比对照组的菌数要少，可知能有效地减少沙门氏菌，特别是可表明，喂以添加由实施例2得来的干燥粉体的饲料的组，比喂以添加由比较例1得来的干燥粉体的饲料的组，显示更少的菌数，有更显著的效果。
实施例6(制造由椰子粉得来的含有β-1，4-甘露二糖的组合物)
用溶解有0.25份スミチ一ムACH(新日本化学工业株式会社制)的酶溶液125份，将椰子粉100份在50℃下作用22小时后，用流动层干燥装置将水分干燥到7.1％，得到103份的干燥粉体。可生成1.17份的甘露糖，14.18份的甘露二糖(对于甘露聚糖为47.3％)。
比较例2
将椰子粉100份，用溶解有0.3份セルロシンGM5酶(エイチビイアイ株式会社制)的酶溶液150份，在60℃下作用72小时后，用流动层干燥装置将水分干燥到6.4％，得到100份的干燥粉体。在这种干燥粉体中，生成13.72份的甘露糖，0.64份的甘露二糖(相对于甘露聚糖为2.13％)
实施例7(动物实验2，在焙烤用雏鸡中的效果)
将45只商业市售的焙烤用新生鸡雏分三份，给15只施用商业市售的焙烤用鸡用饲料(商品名：アマタケS，无药剂添加/伊藤忠饲料株式会社制)做对照组，在相同的配合饲料中添加实施例6中得到的干燥粉体0.1％，被施用以如此得到的饲料的15只鸡为一组，以及添加由比较例2中得到的干燥粉体0.1％，被施用以如此得到的饲料喂的15只鸡为一组，如此共设置三组，不断给食，自由饮水地进行一周预备喂养。在一周龄时，经口接种沙门氏菌(Salmonella enteritidis HY-1株)2.27×107cfu/只，在沙门氏菌接种后1周、2周、3周后，分别将各组中的5只解剖，对各组盲肠内容物中沙门氏菌数(对数)进行了检测。
其结果在表4中示出，其用图表示的为第2图。
(表4)
| SE接种后1周(log cfu/g) | SE接种后2周(log cfu/g) | SE接种后3周(log cfu/g) | |
| 对照组(无添加) | 1.84 | 2.00 | 4.34 |
| 比较例2(酶处理椰子粉，甘露糖型) | 1.84 | 2.22 | 2.47 |
| 实施例6(酶处理椰子粉，β甘露二糖型) | 2.74 | 1.60 | 0.80 |
被施用以添加有由实施例6得来的干燥粉体的饲料的组，及被施用以添加有由比较例2得来的干燥粉体的饲料的组，两者在SE接种后第3周时，都比对照组的菌数要少，可知能减少沙门氏菌，特别是可表明，与被施用以添加有由比较例2得来的干燥粉体的饲料的组相比，被施用以添加有由实施例6得来的干燥粉体的饲料的组显示更少的菌数，有更显著的效果。
实施例8(动物实验3，在产蛋鸡中雏鸡中的效果)
将30只7周龄的产蛋鸡中雏鸡分三份，给10只施用商业市售的焙烤用鸡用配合饲料(商品名：アマタケS，无药剂添加/伊藤忠饲料株式会社制)做对照组，在相同的配合饲料中添加实施例6中得到的干燥粉体0.1％，被施用以如此得到的饲料的10只鸡为一组，以及添加由比较例2中得到的干燥粉体0.1％，被施用以如此得到的饲料的10只鸡为一组，如此共设置三组，不断给食，自由饮水地进行一周预备喂养。然后，经口接种沙门氏菌(Salmonella enteritidis HY-1株)1.13×108cfu/只，在沙门氏菌接种后1周、2周、3周、4周后，采集盲肠便，对各组盲肠中沙门氏菌数(对数)进行了检测。
其结果在表5中示出，其用图表示的为第3图。
(表5)
| SE接种后1周(log cfu/g) | SE接种后2周(log cfu/g) | SE接种后3周(log cfu/g) | SE接种后4周(log cfu/g) | |
| 对照组(无添加) | 3.63 | 2.74 | 0.96 | 0.60 |
| 比较例2(酶处理椰子粉，甘露糖型) | 2.19 | 1.78 | 1.06 | 0.80 |
| 实施例6(酶处理椰子粉，β甘露二糖型) | 2.39 | 1.26 | 0.70 | 0.40 |
被施用以添加有由实施例6得来的干燥粉体的饲料的组，及被施用以添加有由比较例2得来的干燥粉体的饲料的组，两者在SE接种后第1周第2周时，都比对照组的菌数要少，可知能减少沙门氏菌，特别是可表明，与被施用以添加有由比较例2得来的干燥粉体的饲料的组相比，被施用以添加有由实施例6得来的干燥粉体的饲料的组在实验全程显示更少的菌数，有更显著的效果。
产业上的应用性
通过本发明，可以提供能够抑制动物体内沙门氏菌附着并将沙门氏菌有效地排出体外的含有β-1，4-甘露二糖的组合物及它的制造方法，还提供包含含有β-1，4-甘露二糖的组合物的饲料用添加剂、配有含有β-1，4-甘露二糖组合物的饲料。
Claims (15)
1.含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法，其特征为，将甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物，使之生成相对于分解前的甘露聚糖而言至少为10重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
2.含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法，其特征为，将甘露聚糖分解酶作用于由含有甘露聚糖的天然物中提取出来的甘露聚糖，使之生成相对于分解前的甘露聚糖而言至少为10重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
3.如权利要求1或2所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法，其特征为，相对于100重量份的甘露聚糖，添加50～10000重量份的水，用甘露聚糖分解酶作用于它。
4.如权利要求1～3中任一项所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法，其特征为，甘露聚糖分解酶的作用温度为，40℃～55℃。
5.如权利要求1～4中任一项所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法，其特征为，使之生成相对于分解前的甘露聚糖而言为20％～80重量％的β-1，4-甘露二糖。
6.如权利要求1～5中任一项所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物的制造方法，其特征为，含有甘露聚糖的天然物为棕榈仁粉和/或椰子粉。
7.饲料用添加剂，其特征在于，含有由权利要求1～6中任一项所述的制造方法得来的含有β-1，4-甘露二糖的组合物。
8.饲料，其特征为，配合有由权利要求1～7中任一项所述的制造方法得来的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，可以抑制家畜或家禽肠内沙门氏菌的附着。
9.如权利要求8所述的饲料，其特征为，β-1，4-甘露二糖的含量为0.001～1重量％。
10.含有β-1，4-甘露二糖的组合物，其是由甘露聚糖分解酶作用于含有甘露聚糖的天然物得到的，其特征为，以干重换算，至少含有3重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
11.含有β-1，4-甘露二糖的组合物，其是由甘露聚糖分解酶作用于从含有甘露聚糖的天然物中提取的甘露聚糖得到的，其特征为，以干重换算，至少含有10重量％以上的β-1，4-甘露二糖。
12.如权利要求10或11所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，其特征为，含有甘露聚糖的天然物为棕榈仁粉和/或椰子粉。
13.饲料用添加剂，其特征为，含有如权利要求10～12中任一项所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物。
14.饲料，其特征为，配合有权利要求10～12中任一项所述的含有β-1，4-甘露二糖的组合物，可以抑制家畜或家禽肠内沙门氏菌的附着。
15.如权利要求14所述的饲料，其特征为，β-1，4-甘露二糖的含量为0.001～1重量％。
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