CN107686856B - 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法 - Google Patents

一种火龙果花蛋白多肽的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107686856B
CN107686856B CN201710892746.1A CN201710892746A CN107686856B CN 107686856 B CN107686856 B CN 107686856B CN 201710892746 A CN201710892746 A CN 201710892746A CN 107686856 B CN107686856 B CN 107686856B
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein
pitaya
dragon fruit
polypeptide
conical flask
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710892746.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107686856A (zh
Inventor
李丽
孙健
李昌宝
何雪梅
盛金凤
零东宁
郑凤锦
辛明
李杰民
刘国明
李志春
周主贵
唐雅园
易萍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Agro Products Processing Science and Technology of Guangxi Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Institute of Agro Products Processing Science and Technology of Guangxi Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Agro Products Processing Science and Technology of Guangxi Academy of Agricultural Sciences filed Critical Institute of Agro Products Processing Science and Technology of Guangxi Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN201710892746.1A priority Critical patent/CN107686856B/zh
Publication of CN107686856A publication Critical patent/CN107686856A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107686856B publication Critical patent/CN107686856B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/10—Process efficiency
    • Y02P20/129—Energy recovery, e.g. by cogeneration, H2recovery or pressure recovery turbines

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，属于植物提取领域，包括以下步骤：首先选取火龙果花作为原料，将其烘干、粉碎制成火龙果花粉，将所得火龙果花粉于超声波‑微波组合反应系统中配合碱溶酸沉法进行提取，随后，结合等电点沉淀和有机溶剂沉淀的方法将火龙果花蛋白提出出来，然后采用活性炭将蛋白质脱色，再结合碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶将蛋白质水解，提取出多肽成分。本发明提供的火龙果花蛋白多肽的制备方法可提高蛋白多肽的提取率，且其在食品工业、保健食品和医药等领域具有广阔的开发应用前景。

Description

一种火龙果花蛋白多肽的制备方法
【技术领域】
本发明涉及植物提取领域，尤其是一种火龙果花蛋白多肽的制备方法。
【技术背景】
火龙果花是一种美丽的花卉，花极香，含有芳香油，其干花可以食用，用于泡茶饮、凉拌、清炒、煲汤均可，香味浓郁，营养价值高，是一种药食兼用的保健佳品。火龙果花中富含多种维生素、花青素、植物蛋白、低聚糖和水溶性膳食纤维，可以排除体内的重金属元素，避免重金属对人体的危害；增加粪便的湿润度，能有效地防治便秘，预防肠癌，具有抗氧化、抗衰老、软化血管、保护心脑血管的作用，对口腔溃疡、眼干眼涩、前列腺炎、皮肤斑点增生等有很好的食疗作用。火龙果花的花粉中花青素含量丰富，并具有高营养、低热量、低脂肪，富含维生素和氨基酸等特点。
肽是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物，通常由10-100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽，蛋白多肽可抑制细胞变性，增强人体免疫能力，清除人体有害的自由基和重金属化合物，进行有效地排毒，促进和维持细胞正常的新陈代谢，常食用其加工品对人体非常有益；目前，由火龙果花中提取蛋白多肽成分的研究较少，且现有的提取方法难以去除其中的各类杂质，从而导致其提取率和纯化率较低，不能满足当今消费人群的需求，因此，为了充分利用资源，采用合适的生产工艺将其有效利用有重要意义。
【发明内容】
鉴于以上提出的问题，本发明提供了一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，可以较为完全的保持其中的营养成分，提高多肽的提取率，且其在食品工业、保健食品和医药等领域具有广阔的开发应用前景。
本发明的技术方案如下：
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎12-15min，得到火龙果花粉；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9-10的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值调至9-10后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取60-80min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9000-9500r/min的条件下离心8-10min，将所得上清液a保留备用；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.5-5.0，然后通过离心机于转速为9000-9500r/min的条件下离心7-9min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶3-4加入体积浓度为70-72％的乙醇溶液，4-6℃搅拌提取3-5h，再按料水比1∶12-15加入蒸馏水充分搅拌1h，于9000-9500r/min离心10-20min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:10-12的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.0-4.5，向其中加入0.8-1.2％的活性炭进行脱色35-40min，除去活性炭得到蛋白水解液；
(5)将蛋白水解液中按0.8-1.2g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为55-60℃、pH值为7.2-7.6的条件下水解2-3h，再向其中按0.4-0.6g/100mL加入复合风味蛋白酶水解2-3h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽。
进一步地，在步骤(1)中，火龙果花粉过80-100目筛。
进一步地，在步骤(2)中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为60-70℃，所述提取超声波的功率为150-200W，微波功率为300-350W。
进一步地，在步骤(3)中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液。
进一步地，在步骤(4)中，所述活性炭过60-80目筛。
进一步地，在步骤(5)中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在28-32℃下培养52-55h，然后把培养好的菌株孢子放于距离紫外灯25cm处照射50-60s，再将菌株孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为28-30℃、振荡速度为120-140r/min的条件下振荡15-20h，然后稀释成浓度为107-9个/mL的菌悬液即可。
进一步地，所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照15-18:0.1-0.2:0.002-0.004:0.3-0.5:0.06-0.08:0.01-0.02:1000的质量比混合制成。
本发明提供了一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，与现有技术相比，其具有以下有益效果：
本发明首先选取火龙果花作为原料，将其放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，然后于超微粉碎机中粉碎制成火龙果花粉，这种方法粉碎得到的火龙果花粉具有良好的溶解性、分散性、吸附性、化学反应活性，其粒径细，且粉碎均匀，有利于后续的蛋白提取步骤；再将所得火龙果花粉放于水中，并调节pH值至9-10，再结合超声波-微波组合反应系统进行提取，这种提取方法能通过特定范围频率的超声波振动和强烈的空化作用，迫使火龙果花的细胞破裂，同时结合高频微波能的作用，高速速度变换其正、负极，产生偶极涡流、离子传导和高频率摩擦，从而在短时间内产生大量的热量，偶极分子旋转导致的弱氢键破裂、离子迁移等加速了溶剂分子对样品基体的渗透，在较短时间内将植物的组织细胞壁破坏，形成微小的孔洞和裂纹，这样细胞外的萃取介质便非常容易进入细胞内，溶解并释放细胞内的物质，使细胞内的多种极性成分加速提取到水中，从而缩短了提取时间，并且有利于保护营养成分的活性，随后，将所提取物质进行离心分离得到上清液，将上清液的pH值为4.5-5.0，再经离心得到粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b经乙醇沉淀得到粗蛋白沉淀b，本发明结合等电点沉淀和有机溶剂沉淀的方法将火龙果花蛋白提出出来，有快速、提取高效的优点，然后采用活性炭将蛋白质脱色，再结合碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶将蛋白质水解，过滤所得滤液即为多肽成分，可以较为完全的保持其营养成分，提高水解效率。本发明所采用的每一技术手段都是相互配合、相互促进的，且步步为营、环环相扣的，所产生的总的技术效果远远高于单个技术手段所产生的技术手段的简单加和。
本发明所用复合风味蛋白酶包括内切蛋白酶、外切蛋白酶和羧肽酶酶等活性物质，其制作工艺能够为本发明的酶解过程提供充足的活性酶，还可消除苦味；本发明以米曲霉作为菌种，经过紫外灯诱导后，于自制营养液中进行培养，其中，所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照特定的比例制作而成，在营养液的作用下能够为米曲诱变提供能量，各无机离子为产生的酶活性提供了促进作用，本发明中所采用的技术手段相互配合、相互促进，从不同方面和角度促进活性液的制备，大幅提升提高制备效率。
总之，本发明提供的火龙果花蛋白多肽的制备方法，可以较为完全的保持其中的营养成分，提高多肽的提取率，且其在食品工业、保健食品和医药等领域具有广阔的开发应用前景。
【具体实施方式】
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎12min，得到火龙果花粉；其中，所述火龙果花粉过80目筛；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值至9后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取60min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9000r/min的条件下离心8min，将所得上清液a保留备用；
其中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为60℃，所述提取超声波的功率为150W，微波功率为300W；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.5，然后通过离心机于转速为9000r/min的条件下离心7min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶3加入体积浓度为70％的乙醇溶液，4℃搅拌提取3h，再按料水比1∶12加入蒸馏水充分搅拌1h，于9000r/min离心10min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；其中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:10-12的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.0，向其中加入0.8wt％总质量的活性炭进行脱色35min，除去活性炭得到蛋白水解液；其中，所述活性炭过60目筛；
(5)将蛋白水解液中按0.8g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为55℃、pH值为7.2的条件下水解2h，再向其中按0.4g/100mL加入复合风味蛋白酶水解2h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽；其中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在28℃下培养52h，然后把培养好的菌株孢子放于距离紫外灯25cm处照射50s，再将菌株孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为28℃、振荡速度为120r/min的条件下振荡15h，然后稀释成浓度为107个/mL的菌悬液即可；所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照15:0.1:0.002:0.3:0.06:0.01:1000的质量比混合制成。
实施例2
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎15min，得到火龙果花粉；其中，所述火龙果花粉过100目筛；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:10的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值至10后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取80min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9500r/min的条件下离心10min，将所得上清液a保留备用；
其中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为70℃，所述提取超声波的功率为200W，微波功率为350W；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为5.0，然后通过离心机于转速为9500r/min的条件下离心9min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶4加入体积浓度为72％的乙醇溶液，6℃搅拌提取5h，再按料水比1∶15加入蒸馏水充分搅拌1h，于9500r/min离心20min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；其中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:12的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.5，向其中加入1.2wt％总质量的活性炭进行脱色40min，除去活性炭得到蛋白水解液；其中，所述活性炭过80目筛；
(5)将蛋白水解液中按1.2g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为60℃、pH值为7.6的条件下水解3h，再向其中按0.6g/100mL加入复合风味蛋白酶水解3h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽；其中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在32℃下培养55h，然后把培养好的菌株孢子放于距离紫外灯25cm处照射60s，再将菌株孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为30℃、振荡速度为140r/min的条件下振荡20h，然后稀释成浓度为109个/mL的菌悬液即可；所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照18:0.2:0.004:0.5:0.08:0.02:1000的质量比混合制成。
实施例3
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎14min，得到火龙果花粉；其中，所述火龙果花粉过90目筛；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9.5的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值至9.5后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取70min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心9min，将所得上清液a保留备用；
其中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为65℃，所述提取超声波的功率为180W，微波功率为320W；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.7，然后通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心8min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶3.5加入体积浓度为71％的乙醇溶液，5℃搅拌提取4h，再按料水比1∶13加入蒸馏水充分搅拌1h，于9200r/min离心12min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；其中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:11的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.2，向其中加入0.9wt％总质量的活性炭进行脱色38min，除去活性炭得到蛋白水解液；其中，所述活性炭过70目筛；
(5)将蛋白水解液中按0.9g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为58℃、pH值为7.4的条件下水解2.5h，再向其中按0.5g/100mL加入复合风味蛋白酶水解2.5h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽；其中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养53h，然后把培养好的菌株孢子放于距离紫外灯25cm处照射52s，再将菌株孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为29℃、振荡速度为130r/min的条件下振荡18h，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液即可；所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照16:0.15:0.003:0.4:0.07:0.015:1000的质量比混合制成。
对比例1
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花研磨粉碎，得到火龙果花粉；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9.5的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值至9.5提取70min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心9min，将所得上清液a保留备用；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.7，然后通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心8min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶3.5加入体积浓度为71％的乙醇溶液，5℃搅拌提取4h，再按料水比1∶13加入蒸馏水充分搅拌1h，于9200r/min离心12min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；其中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:11的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.2，向其中加入0.9wt％总质量的活性炭进行脱色38min，除去活性炭得到蛋白水解液；其中，所述活性炭过70目筛；
(5)将蛋白水解液中按0.9g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为58℃、pH值为7.4的条件下水解2.5h，再向其中按0.5g/100mL加入复合风味蛋白酶水解2.5h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽；其中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养53h，然后把培养好的菌株孢子放于距离紫外灯25cm处照射52s，再将菌株孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为29℃、振荡速度为130r/min的条件下振荡18h，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液即可；所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照16:0.15:0.003:0.4:0.07:0.015:1000的质量比混合制成。
对比例2
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎14min，得到火龙果花粉；其中，所述火龙果花粉过90目筛；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9.5的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值至9.5后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取70min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心9min，将所得上清液a保留备用；
其中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为65℃，所述提取超声波的功率为180W，微波功率为320W；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.7，然后通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心8min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b；其中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a混合均匀，像其中按照料液比为1:11的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.2，向其中加入0.9wt％总质量的活性炭进行脱色38min，除去活性炭得到蛋白水解液；其中，所述活性炭过70目筛；
(5)将蛋白水解液中按0.9g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为58℃、pH值为7.4的条件下水解2.5h，再向其中按0.5g/100mL加入复合风味蛋白酶水解2.5h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽；其中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养53h，然后把培养好的菌株孢子放于距离紫外灯25cm处照射52s，再将菌株孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为29℃、振荡速度为130r/min的条件下振荡18h，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液即可；所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照16:0.15:0.003:0.4:0.07:0.015:1000的质量比混合制成。
对比例3
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎14min，得到火龙果花粉；其中，所述火龙果花粉过90目筛；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9.5的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值至9.5后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取70min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心9min，将所得上清液a保留备用；
其中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为65℃，所述提取超声波的功率为180W，微波功率为320W；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.7，然后通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心8min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶3.5加入体积浓度为71％的乙醇溶液，5℃搅拌提取4h，再按料水比1∶13加入蒸馏水充分搅拌1h，于9200r/min离心12min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；其中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:11的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.2，向其中加入0.9wt％总质量的活性炭进行脱色38min，除去活性炭得到蛋白水解液；其中，所述活性炭过70目筛；
(5)将蛋白水解液中按0.9g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为58℃、pH值为7.4的条件下水解2.5h，再向其中按0.5g/100mL加入复合风味蛋白酶水解2.5h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽；其中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在29℃下培养53h，再将菌株孢子稀释成浓度为108个/mL的菌悬液即可。
对比例4
一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎14min，得到火龙果花粉；其中，所述火龙果花粉过90目筛；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9.5的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值至9.5后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取70min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心9min，将所得上清液a保留备用；
其中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为65℃，所述提取超声波的功率为180W，微波功率为320W；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.7，然后通过离心机于转速为9200r/min的条件下离心8min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶3.5加入体积浓度为71％的乙醇溶液，5℃搅拌提取4h，再按料水比1∶13加入蒸馏水充分搅拌1h，于9200r/min离心12min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；其中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:11的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.2，向其中加入0.9wt％总质量的活性炭进行脱色38min，除去活性炭得到蛋白水解液；其中，所述活性炭过70目筛；
(5)将蛋白水解液中按0.9g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为58℃、pH值为7.4的条件下水解2.5h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽。
实验例
实验分为7组，每组各分别按照实施例1-3和对比例1-4的提取方法提取火龙果花蛋白多肽，记录所得提取率，具体结果见表1。
表1火龙果花蛋白多肽的提取率
Figure BDA0001421556760000101
表1的结果表明：实施例1-3的火龙果花蛋白多肽的提取率较高，说明采用本发明的提取方法可提高火龙果花蛋白多肽提取率。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取火龙果花作为原料，将火龙果花放入太阳能-热泵联合系统中进行烘干，将干燥后的火龙果花放入超微粉碎机中粉碎12-15min，得到火龙果花粉；
(2)将步骤(1)所得火龙果花粉放于锥形瓶中，按照料液比为1:9-10的比例加入蒸馏水混合均匀，将锥形瓶内混合物的pH值调至9-10后，将锥形瓶放于超声波-微波组合反应系统中提取60-80min，取出后，将锥形瓶内物质通过离心机于转速为9000-9500r/min的条件下离心8-10min，将所得上清液a保留备用；
(3)将步骤(2)所述上清液a用酸碱调节剂调节至pH值为4.5-5.0，然后通过离心机于转速为9000-9500r/min的条件下离心7-9min，得到为粗蛋白沉淀a和上清液b，将上清液b按料液比1∶3-4加入体积浓度为70-72％的乙醇溶液，4-6℃搅拌提取3-5h，再按料水比1∶12-15加入蒸馏水充分搅拌1h，于9000-9500r/min离心10-20min后，收集沉淀，得到粗蛋白沉淀b；
(4)脱色：将粗蛋白沉淀a和粗蛋白沉淀b混合均匀，像其中按照料液比为1:10-12的比例加入蒸馏水混合均匀，用酸碱调节剂调节pH值至4.0-4.5，向其中加入0.8-1.2％的活性炭进行脱色35-40min，除去活性炭得到蛋白水解液；
(5)将蛋白水解液中按0.8-1.2g/100mL加入碱性蛋白酶，于温度为55-60℃、pH值为7.2-7.6的条件下水解2-3h，再向其中按0.4-0.6g/100mL加入复合风味蛋白酶水解2-3h，将处理后的液体经过板框过滤机过滤，所得滤液即为多肽溶液，将多肽溶液于-40℃温度下真空干燥，得到成品多肽；
在步骤(2)中，所述超声波-微波组合反应系统的提取温度为60-70℃，所述提取超声波的功率为150-200W，微波功率为300-350W；
在步骤(5)中，所述复合风味蛋白酶是由下述方法制备：将米曲霉菌株转接至查式斜面培养基中，在28-32℃下培养52-55h，然后把培养好的菌株孢子放于距离紫外灯25cm处照射50-60s，再将菌株孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为28-30℃、振荡速度为120-140r/min的条件下振荡15-20h，然后稀释成浓度为107-9个/mL的菌悬液即可；
所述营养液是由葡萄糖、硫酸铵、氯化钙、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸锌、水按照15-18:0.1-0.2:0.002-0.004:0.3-0.5:0.06-0.08:0.01-0.02:1000的质量比混合制成。
2.根据权利要求1所述的一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，火龙果花粉过80-100目筛。
3.根据权利要求1所述的一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述酸碱调节剂为0.1mol/L的醋酸溶液或0.1mol/L的碳酸钠溶液。
4.根据权利要求1所述的一种火龙果花蛋白多肽的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述活性炭过60-80目筛。
CN201710892746.1A 2017-09-27 2017-09-27 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法 Active CN107686856B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710892746.1A CN107686856B (zh) 2017-09-27 2017-09-27 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710892746.1A CN107686856B (zh) 2017-09-27 2017-09-27 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107686856A CN107686856A (zh) 2018-02-13
CN107686856B true CN107686856B (zh) 2021-04-27

Family

ID=61156790

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710892746.1A Active CN107686856B (zh) 2017-09-27 2017-09-27 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107686856B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109006362A (zh) * 2018-07-20 2018-12-18 博白县百家水果专业合作社 一种培育沃柑幼苗的营养土
CN109620746A (zh) * 2018-12-06 2019-04-16 澳宝化妆品（惠州）有限公司 一种玫瑰茄花萼提取物及其在面部护理组合物中的应用
CN114058665A (zh) * 2021-12-02 2022-02-18 浙江宜格企业管理集团有限公司 一种复合花肽的制备方法及其在制备化妆品中的应用
CN116035218A (zh) * 2023-02-03 2023-05-02 海南华研胶原科技股份有限公司 一种豌豆低聚肽的保健品及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1896265A (zh) * 2005-07-16 2007-01-17 靖林 一种酶法生产蚕丝营养素和丝多肽的工艺
WO2010000858A1 (en) * 2008-07-03 2010-01-07 Novozymes A/S A personal wash bar
CN102845585A (zh) * 2012-09-20 2013-01-02 陕西师范大学 聚乙二醇-微波辅助提取杏仁蛋白的方法
CN104961805A (zh) * 2015-07-28 2015-10-07 苏州普罗达生物科技有限公司 一种蚕丝蛋白多肽及其制备和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1896265A (zh) * 2005-07-16 2007-01-17 靖林 一种酶法生产蚕丝营养素和丝多肽的工艺
WO2010000858A1 (en) * 2008-07-03 2010-01-07 Novozymes A/S A personal wash bar
CN102845585A (zh) * 2012-09-20 2013-01-02 陕西师范大学 聚乙二醇-微波辅助提取杏仁蛋白的方法
CN104961805A (zh) * 2015-07-28 2015-10-07 苏州普罗达生物科技有限公司 一种蚕丝蛋白多肽及其制备和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
玉米花生复合蛋白酶解产物生物活性及加工性能的研究;周玲玲 等;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技1辑》;20120515;第20页章节2.1.4、第27页章节2.2.3.4、第32页章节3.1.3.4、第41-42页章节3.3 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107686856A (zh) 2018-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107686856B (zh) 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法
CN104004813B (zh) 一种香菇生物活性肽的制备
CN103392902B (zh) 利用花生粕制备强抗氧化肽的方法
CN102224879B (zh) 香菇多肽的制备方法和用途
CN103394071B (zh) 一种生产大鲵多肽粉保肝胶囊的方法
CN101160327A (zh) 获得果胶的方法
CN104313099B (zh) 一种高抗氧化活性鸡蛋清蛋白肽的制备方法
CN109608559A (zh) 一种从海藻中提取活性多糖的方法
CN110734948A (zh) 一种从大豆中提取硒多肽的提取装置及工艺
CN101096697B (zh) 从禽卵中酶法制取卵蛋白多肽的工业生产方法
CN111642666A (zh) 一种人参提取物大豆肽粉固体饮料的制备方法
CN104829734A (zh) 一种利用干香菇生产色素、蛋白、多糖及膳食纤维的方法
CN106832027A (zh) 秋葵多糖的提取方法
CN105779542A (zh) 一种酶法制备有机菜籽多肽的方法
CN109134691A (zh) 一种高效提取杏鲍菇多糖的方法
CN109757600B (zh) 一种紫苏肽的制备方法
CN107435060B (zh) 一种龙眼核蛋白多肽的制备方法
CN109055462A (zh) 一种核桃多肽的提取和制备工艺
CN112760349A (zh) 一种酶解法提取大豆肽的方法
CN107232572A (zh) 一种利用金针菇菇脚生产食品级鲜味剂的方法
CN104761655A (zh) 一种从海鲜菇下脚料中提取海鲜菇多糖的方法
CN106498015A (zh) 一种菲律宾蛤仔降血压肽的制备方法及应用
CN111202246A (zh) 一种大豆低聚肽粉剂及其制备方法
CN103772482B (zh) 一种螺旋藻营养蛋白粉的生产工艺及制备方法
CN110897059A (zh) 一种利用小麦胚芽制备植物水解蛋白饮料的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant