CN107677805A - 一种测定尿碘的试剂盒及其制备使用方法 - Google Patents

一种测定尿碘的试剂盒及其制备使用方法 Download PDF

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丁先骏
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Abstract

本发明公开了一种测定尿碘的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液20‑180mmol/L、NaCl 10‑30g/L、Sb2O32‑30g/L、H2SO42.0‑3.0mol/L，溶剂为纯化水；试剂R2：Tris缓冲液20‑180mmol/L、硫酸铈铵20‑40g/L、H2SO42.0‑3.0mol/L，溶剂为纯化水。本发明还公开了一种测定尿碘的试剂盒的制备使用方法。本发明的优点在于：(1)尿液不需要进行消化处理，简化了实验步骤；(2)检测仅需10min，大大压缩了反应时间；(3)适合全自动测试。

Description

一种测定尿碘的试剂盒及其制备使用方法
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，尤其涉及一种适用于全自动生化分析的测定尿碘的试剂盒及其制备使用方法。
背景技术
人类脑发育的临界期，一是胎龄10-18周，这是神经母细胞增殖、发育、形成脑组织的时期；二是生前3个月至生后2岁，即脑发育成熟的主要阶段，这个时期，碘和甲状腺激素对脑细胞的发育和增生起着决定性的作用，是一生中补碘的最有效时期。缺碘对绝大部分人而言，会造成智力发育达不到最佳水平，智商(IQ)将处于正常范围的边缘、中下、或中等水平。
世界上大范围调查显示，补碘后出生的儿童，智商明显高于未补碘的儿童；因此，补碘可明显改善儿童的智力发育。同时，根据最新的医学研究，孕妇补碘过度，会造成孕妇碘致甲状腺肿和甲亢；高碘则会造成胎儿脑重量减轻，大脑记忆力下降，同时可能会影响孩子今后的身高。
由于胎宝宝需要的碘来自准妈妈，一旦缺碘，准妈妈的甲状腺与胎宝宝竞争碘的能力增强，使胎宝宝缺碘加重，造成脑发育出现障碍，严重时更会导致全身脏器及骨骼系统的发育停滞，造成死胎、流产、早产以及先天性畸形。
我国是严重缺碘和碘分布不均的国家，每年有80-100万儿童因在母体中或出生后未进行科学补碘，造成脑损伤，而导致智能发育不良；但是，长期过量摄入碘会使胎儿出现高碘性甲亢，严重时会出现甲状腺癌的隐患。以尿碘水平为指标，人体最适宜的碘含量水平是100-400μg/L，人体对碘的安全耐受量则是1000μg/L。因此，科学的测碘和补碘对国人的意义十分的重大。
目前，测定尿碘主要采用卫生部的WS/T107-2006尿中碘的砷铈催化分光光度测定法进行测定，其检测原理为：利用过硫酸铵在100℃条件下消化尿液，利用碘对砷铈氧化还原反应的催化作用，反应中黄色的Ce4+被还原成无色的Ce3+，碘含量越高，反应越快所剩的Ce4+就越少；控制反应温度和时间，在420nm测定剩余的Ce4+，从而计算出尿液中碘的含量。然而，此方法却具备多个弊端：反应时间约为90min，无法适用于全自动生化分析仪，需手工操作，测试缓慢，操作人员的熟练程度对结果影响较大，无法大规模的开展和推广。
据此，目前急需一种检测速度快、效率高，适用于全自动生化分析仪的测定尿碘的试剂盒及其制备使用方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种检测速度快、效率高，适用于全自动生化分析仪的测定尿碘的试剂盒及其制备使用方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种测定尿碘的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 20-180mmol/L
硫酸铈铵 20-40g/L
H2SO4 2.0-3.0mol/L
其溶剂为纯化水。
作为本发明的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 100mmol/L
硫酸铈铵 30g/L
H2SO4 2.5mol/L
其溶剂为纯化水。
作为本发明的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 120mmol/L
硫酸铈铵 35g/L
H2SO4 2.8mol/L
其溶剂为纯化水。
一种测定尿碘的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
a.按照试剂R1的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R1的Tris缓冲液；
b.按照试剂R1的组分含量，将H2SO4溶于R1的Tris缓冲液中，搅拌均匀冷却后，再将NaCl和Sb2O3溶于其中，即制得试剂R1；
(2)配制试剂R2
a.按照试剂R2的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R2的Tris缓冲液；
b.按照试剂R2的组分含量，将H2SO4溶于R2的Tris缓冲液中，搅拌均匀冷却后，再将硫酸铈铵溶于其中，混合液搅拌均匀，即制得试剂R2。
一种测定尿碘的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；
(2)再与试剂R2混合，使其充分反应；
(3)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度；
(4)根据吸光度变化值计算出样本中的尿碘的含量。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)和步骤(2)中，试剂R1和试剂R2按照体积比3:1混合。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(3)中，在主波长405nm、副波长520nm处测定吸光度A1，300s后测定吸光度A2。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(4)中，吸光度变化值具体为A1和A2的变化值，即ΔA。
检测原理：酸性条件下，利用碘对锑铈氧化还原反应的催化作用，反应中黄色的Ce4+被还原成无色的Ce3+，碘含量越高，反应越快所剩的Ce4+就越少，在405nm测定剩余的Ce4 +，从而计算出尿液中碘的含量；发生显色反应进行比色测定，从而计算出样本中碘(I)的含量；
式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中I的浓度。
本发明相比现有技术的优点在于：
(1)现有技术的尿液样品多需要消化处理，会导致实验室高温，气味难闻；本发明的尿液不需要进行消化处理，不仅不会产生难闻气味，还大大简化了实验步骤；
(2)现有技术的检测反应时间为90min，本发明则仅需10min，大大的压缩了反应时间；
(3)现有技术无法用在全自动生化分析仪上，本发明则可应用于全自动生化分析仪上，适合全自动测试，可大规模的开展和推广。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种测定尿碘的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 20mmol/L
硫酸铈铵 20g/L
H2SO4 2.0mol/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本实施例的一种测定尿碘的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 180mmol/L
硫酸铈铵 40g/L
H2SO4 3.0mol/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
本实施例的一种测定尿碘的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 100mmol/L
硫酸铈铵 30g/L
H2SO4 2.5mol/L
其溶剂为纯化水。
实施例4
本实施例的一种测定尿碘的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
试剂R2：
Tris缓冲液 120mmol/L
硫酸铈铵 35g/L
H2SO4 2.8mol/L
其溶剂为纯化水。
实施例5
本实施例的一种测定尿碘的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
a.按照试剂R1的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R1的Tris缓冲液；
b.按照试剂R1的组分含量，将H2SO4溶于R1的Tris缓冲液中，搅拌均匀冷却后，再将NaCl和Sb2O3溶于其中，即制得试剂R1；
(2)配制试剂R2
a.按照试剂R2的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R2的Tris缓冲液；
b.按照试剂R2的组分含量，将H2SO4溶于R2的Tris缓冲液中，搅拌均匀冷却后，再将硫酸铈铵溶于其中，混合液搅拌均匀，即制得试剂R2。
实施例6
本实施例的一种测定尿碘的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)设置空白管组和样品管组，各组处理方式如下：
样品管组：
a.将8uL待测样品与225uL上述实施例得到的试剂R1混合，37℃孵育5min；
b.再与75uL上述实施例得到的试剂R2混合，充分反应；
空白管组：用蒸馏水代替待测样品，其他同样品管组；
(2)采用全自动生化分析仪，在主波长405nm、副波长520nm处测定吸光度A1，300s后测定吸光度A2，ΔA＝A2-A1；
(3)根据吸光度变化值ΔA计算出样本中的尿碘的含量。
其检测原理为：酸性条件下，利用碘对锑铈氧化还原反应的催化作用，反应中黄色的Ce4+被还原成无色的Ce3+，碘含量越高，反应越快所剩的Ce4+就越少，在405nm测定剩余的Ce4+，从而计算出尿液中碘的含量；发生显色反应进行比色测定，从而计算出样本中碘(I)的含量；
式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值
ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值
CS校准液中I的浓度。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种测定尿碘的试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
Tris缓冲液 20-180mmol/L
硫酸铈铵 20-40g/L
H2SO4 2.0-3.0mol/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的测定尿碘的试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
Tris缓冲液 100mmol/L
硫酸铈铵 30g/L
H2SO4 2.5mol/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1所述的测定尿碘的试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
试剂R2：
Tris缓冲液 120mmol/L
硫酸铈铵 35g/L
H2SO4 2.8mol/L
其溶剂为纯化水。
4.一种制备如权利要求1-3任一项所述的测定尿碘的试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
a.按照试剂R1的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R1的Tris缓冲液；
b.按照试剂R1的组分含量，将H2SO4溶于R1的Tris缓冲液中，搅拌均匀冷却后，再将NaCl和Sb2O3溶于其中，即制得试剂R1；
(2)配制试剂R2
a.按照试剂R2的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R2的Tris缓冲液；
b.按照试剂R2的组分含量，将H2SO4溶于R2的Tris缓冲液中，搅拌均匀冷却后，再将硫酸铈铵溶于其中，混合液搅拌均匀，即制得试剂R2。
5.一种使用如权利要求1-3任一项所述的测定尿碘的试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；
(2)再与试剂R2混合，使其充分反应；
(3)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度；
(4)根据吸光度变化值计算出样本中的尿碘的含量。
6.根据权利要求5所述的测定尿碘的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)中，试剂R1和试剂R2按照体积比3:1混合。
7.根据权利要求5所述的测定尿碘的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(3)中，在主波长405nm、副波长520nm处测定吸光度A1，300s后测定吸光度A2。
8.根据权利要求7所述的测定尿碘的试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(4)中，吸光度变化值具体为A1和A2的变化值，即ΔA。
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