CN107668024A - 一种骨髓干细胞保护液及其制备方法 - Google Patents

一种骨髓干细胞保护液及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107668024A
CN107668024A CN201610622368.0A CN201610622368A CN107668024A CN 107668024 A CN107668024 A CN 107668024A CN 201610622368 A CN201610622368 A CN 201610622368A CN 107668024 A CN107668024 A CN 107668024A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dmem
stem cell
aqueous solution
liquid
sodium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610622368.0A
Other languages
English (en)
Inventor
李霞云
曹毓琳
白志惠
刘世红
卢承前
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Century Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Beijing Century Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Century Biotechnology Co Ltd filed Critical Beijing Century Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201610622368.0A priority Critical patent/CN107668024A/zh
Publication of CN107668024A publication Critical patent/CN107668024A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供一种骨髓干细胞保护液，所述保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠和氨基糖苷类抗生素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂5‑10mg、所述肝素钠0.01‑0.05U、所述氨基糖苷类抗生素50‑200U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为30‑40mg/mL。本发明提供的骨髓干细胞保护液性能稳定、安全无毒，可以起到有效保护骨髓干细胞的作用，使骨髓干细胞可以在体外长期保存并保持细胞活性，维持其原有的多向分化能力，扩大了骨髓干细胞临床应用的范围，利用现有交通工具，即可运输到国内大多数城市及周边国家。

Description

一种骨髓干细胞保护液及其制备方法
技术领域
本发明属于骨髓干细胞保存的技术领域，尤其涉及一种骨髓干细胞保护液及其制备方法。
背景技术
骨髓干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，具有自我复制、自我更新、多方向分化潜能、造血支持以及免疫调控等特性，在造血重建、组织修复、免疫治疗等方面具有广阔的临床应用前景；并且骨髓干细胞在体外经过连续传代培养和冻存复苏后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复，是细胞治疗技术中最有希望的来源细胞之一。因此研究一种有效的骨髓干细胞的保存方法，使骨髓干细胞能在体外长期保存并保持细胞活性、维持原有的多向分化能力，显得尤为重要。
目前常用的的骨髓干细胞保存技术一般是采用生理盐水或者细胞培养基作为骨髓干细胞的保存介质，如果单纯用生理盐水保存骨髓干细胞，由于骨髓干细胞在生理盐水中活力下降的速度非常快，两小时后骨髓干细胞活力就会降低10％左右，因此生理盐水只适用于骨髓干细胞的即时使用；而细胞培养基中含有骨髓干细胞生长代谢所需的糖类、氨基酸、无机盐、维生素等物质，对于维持骨髓干细胞渗透压及活力有较好的作用，可以在较长时间内保持骨髓干细胞活性，但如果单独使用细菌培养基来保存骨髓干细胞，其安全性及可靠性还不够理想。现有技术中也公开了许多骨髓干细胞保存液，例如CN201510601214.9公布了一种骨髓间充质干细胞保存液，由含有肝素、透明质酸、海藻糖、L-谷氨酰胺、HEPES、丙酮酸钠和硫酸庆大霉素的水溶液组成；CN201510695324.6公布了一种骨髓间充质干细胞的保存试剂，由葡萄糖、甘露醇、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、腺嘌呤、肌苷、枸橼酸钾、氯化铵、氯化钠和细胞抗氧化剂组成。现有技术中公开的骨髓干细胞保护液一般都存在细胞存活率较低、安全性较差、使用条件较为苛刻等问题，在临床应用上存在一定困难。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种骨髓干细胞保护液，所述保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠和氨基糖苷类抗生素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂5-10mg、所述肝素钠0.01-0.05U、所述氨基糖苷类抗生素50-200U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为30-40mg/mL。
DMEM/F12培养基由DMEM培养基和F12培养基按照重量份数为1:1的比例结合，其成分丰富、营养浓度高、含有多种微量元素，可作为无血清或血清含量较低条件下的哺乳动物细胞培养的基础培养基。
每升DMEM/F12培养基中含有下列成分：
在浓度为30-40mg/mL的DMEM/F12培养基水溶液中加入低氧保护剂、肝素钠和氨基糖苷类抗生素，制得的骨髓干细胞保护液可以长时间保持骨髓间充质干细胞活性，提高骨髓间充质干细胞的存活率。
进一步的，所述氨基糖苷类抗生素由庆大霉素、链霉素、妥布霉素中的一种或多种组成。
优选的，所述氨基糖苷类抗生素由庆大霉素、链霉素、妥布霉素按照3:1:1的重量份数比组成，比单用一种氨基糖苷类抗生素、采用其他几种氨基糖苷类抗生素或采用其它重量配比的抗细菌效果更好。
进一步的，所述保护液中还含有苯甲酸钠和氢化可的松，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述苯甲酸钠50-200μg、所述氢化可的松20-50μg。在保护液中加入苯甲酸钠和氢化可的松起到防止骨髓干细胞保护液中产生真菌和病毒感染作用，保障所保存的骨髓干细胞的质量安全，可应用于人体疾病的治疗。
进一步的，所述低氧保护剂包括如下重量份数的各成分：
超氧化物歧化酶8-12山梨醇2-5抗坏血酸钠0.5-2。
在骨髓干细胞保护液中采用超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠作为低氧保护剂可以显著降低骨髓间充质干细胞内活性氧水平，调节骨髓间充质干细胞抗氧化能力、减少低氧引起的骨髓间充质干细胞凋亡，有效提高低氧条件下的骨髓间充质干细胞存活率。
进一步的，所述低氧保护剂还包括如下重量份数的各成分：
甘草黄酮5-8淫羊藿提取物2-5。
在低氧保护剂中加入甘草黄酮和淫羊藿提取物与超氧化物歧化酶、山梨醇和抗坏血酸钠配合使用，可以使低氧条件下的骨髓间充质干细胞存活率的更高。
进一步的，所述保护液中还含有硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述硫酸软骨素5-10mg、所述阿拉伯糖50-100μg、所述甲基环糊精50-100μg。
在保护液中加入硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精，可以有效提高骨髓间充质干细胞的存活率。
进一步的，所述保护液中还含有甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述甘氨酸钠1-5mg、所述蔗糖脂肪酸酯0.5-1mg、所述三甲铵乙酸盐10-50μg。
在保护液中加入甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐，可以起到提高骨髓间充质干细胞增殖能力和增殖速度的效果。
进一步的，所述保护液中还含有月桂酰胺、羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述月桂酰胺1-5mg、所述羧甲基纤维素钠1-5mg、所述淀粉甘醇酸钠20-100μg。
在保护液中加入月桂酰胺、羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠，可以有效改善骨髓干细胞保护液的稳定性，延长骨髓干细胞保护液的保存期限。
本发明还提供一种骨髓干细胞保护液的制备方法，所述方法包括：
(1)将NaHCO3水溶液逐滴加入DMEM/F12培养基水溶液中，直至DMEM/F12培养基溶液的PH值为6.2-6.6；
(2)将其他原料加入步骤(1)得到的DMEM/F12培养基溶液中，混合均匀获得混合液；
(3)在温度为130-150℃，压力为0.1-0.2MPa的条件下，对步骤(2)所得的混合液进行灭菌20-30min；
(4)将步骤(3)得到的混合液在冰水浴中降温至0-10℃即可获得骨髓干细胞保护液。
进一步的，所述步骤(2)中的混合是采用超声波混合机混合20-30min。采用超声波混合机进行混合可以提高混合效果。
本发明提供的骨髓干细胞保护液性能稳定、安全无毒，可以起到有效保护骨髓干细胞的作用，使骨髓干细胞可以在体外长期保存并保持细胞活性，维持其原有的多向分化能力，扩大了骨髓干细胞临床应用的范围，利用现有交通工具，即可运输到国内大多数城市及周边国家。
附图说明
图1为本发明实施例4、实施例19、对照例13和对照例14的骨髓间充质干细胞生长曲线图。
具体实施方式
实施例1
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠和庆大霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素100U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例2
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠和庆大霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂5mg、所述肝素钠0.01U、所述庆大霉素50U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为30mg/mL。
实施例3
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠和庆大霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂10mg、所述肝素钠0.05U、所述庆大霉素200U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为40mg/mL。
实施例4
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例5
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂5mg、所述肝素钠0.01U、所述庆大霉素30U、所述链霉素10U、所述妥布霉素10U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为30mg/mL；
所述骨髓干细胞保护液的制备方法包括：
(1)将NaHCO3水溶液逐滴加入DMEM/F12培养基水溶液中，直至DMEM/F12培养基溶液的PH值为6.2；
(2)将其他原料加入步骤(1)得到的DMEM/F12培养基溶液中，混合均匀获得混合液；
(3)在温度为130℃，压力为0.1MPa的条件下，对步骤(2)所得的混合液进行灭菌20min；
(4)将步骤(3)得到的混合液在冰水浴中降温至0℃即可获得骨髓干细胞保护液。
实施例6
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂10mg、所述肝素钠0.05U、所述庆大霉素120U、所述链霉素40U、所述妥布霉素40U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为40mg/mL。
实施例7
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例8
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠50μg、所述氢化可的松20μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL；
所述骨髓干细胞保护液的制备方法包括：
(1)将NaHCO3水溶液逐滴加入DMEM/F12培养基水溶液中，直至DMEM/F12培养基溶液的PH值为6.6；
(2)将其他原料加入步骤(1)得到的DMEM/F12培养基溶液中，混合均匀获得混合液；
(3)在温度为150℃，压力为0.2MPa的条件下，对步骤(2)所得的混合液进行灭菌30min；
(4)将步骤(3)得到的混合液在冰水浴中降温至10℃即可获得骨髓干细胞保护液。
实施例9
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠200μg、所述氢化可的松50μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例10
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶5.5mg、所述山梨醇2mg、所述抗坏血酸钠0.5mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例11
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶6.1mg、所述山梨醇1.5mg、所述抗坏血酸钠0.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL；
所述骨髓干细胞保护液的制备方法包括：
(1)将NaHCO3水溶液逐滴加入DMEM/F12培养基水溶液中，直至DMEM/F12培养基溶液的PH值为6.4；
(2)将其他原料加入步骤(1)得到的DMEM/F12培养基溶液中，混合均匀获得混合液；
(3)在温度为140℃，压力为0.15MPa的条件下，对步骤(2)所得的混合液进行灭菌25min；
(4)将步骤(3)得到的混合液在冰水浴中降温至5℃即可获得骨髓干细胞保护液。
实施例12
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶5mg、所述山梨醇2.1mg、所述抗坏血酸钠0.9mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例13
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例14
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.7mg、所述山梨醇0.9mg、所述抗坏血酸钠0.2mg、所述甘草黄酮2.3mg、所述淫羊藿提取物0.9mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL；
所述骨髓干细胞保护液的制备方法包括：
(1)将NaHCO3水溶液逐滴加入DMEM/F12培养基水溶液中，直至DMEM/F12培养基溶液的PH值为6.4；
(2)将其他原料加入步骤(1)得到的DMEM/F12培养基溶液中，采用超声波混合机混合20min获得混合液；
(3)在温度为140℃，压力为0.15MPa的条件下，对步骤(2)所得的混合液进行灭菌25min；
(4)将步骤(3)得到的混合液在冰水浴中降温至5℃即可获得骨髓干细胞保护液。
实施例15
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3mg、所述山梨醇1.3mg、所述抗坏血酸钠0.4mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.3mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例16
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述硫酸软骨素7mg、所述阿拉伯糖80μg、所述甲基环糊精80μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例17
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松、硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg、所述硫酸软骨素5mg、所述阿拉伯糖50μg、所述甲基环糊精50μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL；
所述骨髓干细胞保护液的制备方法包括：
(1)将NaHCO3水溶液逐滴加入DMEM/F12培养基水溶液中，直至DMEM/F12培养基溶液的PH值为6.4；
(2)将其他原料加入步骤(1)得到的DMEM/F12培养基溶液中，采用超声波混合机混合25min获得混合液；
(3)在温度为140℃，压力为0.15MPa的条件下，对步骤(2)所得的混合液进行灭菌25min；
(4)将步骤(3)得到的混合液在冰水浴中降温至5℃即可获得骨髓干细胞保护液。
实施例18
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松、硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg、所述硫酸软骨素10mg、所述阿拉伯糖100μg、所述甲基环糊精100μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例19
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述甘氨酸钠3mg、所述蔗糖脂肪酸酯0.6mg、所述三甲铵乙酸盐40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例20
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松、硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精、甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg、所述硫酸软骨素7mg、所述阿拉伯糖80μg、所述甲基环糊精80μg、所述甘氨酸钠1mg、所述蔗糖脂肪酸酯0.5mg、所述三甲铵乙酸盐10μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例21
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松、硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精、甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg、所述硫酸软骨素7mg、所述阿拉伯糖80μg、所述甲基环糊精80μg、所述甘氨酸钠5mg、所述蔗糖脂肪酸酯1mg、所述三甲铵乙酸盐50μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例22
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、月桂酰胺、羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述月桂酰胺2mg、所述羧甲基纤维素钠2mg、所述淀粉甘醇酸钠50μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例23
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松、硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精、甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐、月桂酰胺、羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg、所述硫酸软骨素7mg、所述阿拉伯糖80μg、所述甲基环糊精80μg、所述甘氨酸钠3mg、所述蔗糖脂肪酸酯0.6mg、所述三甲铵乙酸盐40μg、所述月桂酰胺1mg、所述羧甲基纤维素钠1mg、所述淀粉甘醇酸钠20μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
实施例24
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、淫羊藿提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、氢化可的松、硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精、甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐、月桂酰胺、羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述淫羊藿提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述氢化可的松40μg、所述硫酸软骨素7mg、所述阿拉伯糖80μg、所述甲基环糊精80μg、所述甘氨酸钠3mg、所述蔗糖脂肪酸酯0.6mg、所述三甲铵乙酸盐40μg、所述月桂酰胺5mg、所述羧甲基纤维素钠5mg、所述淀粉甘醇酸钠100μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例1
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂和庆大霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述庆大霉素100U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例2
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、胱氨酸和庆大霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述胱氨酸2mg、所述庆大霉素100U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例3
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、红霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述红霉素100U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例4
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素30U、所述链霉素10U、所述妥布霉素60U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例5
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、氢化可的松用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述氢化可的松40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例6
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、苯甲酸钠、苯扎氯铵用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述苯甲酸钠100μg、所述苯扎氯铵40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例7
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例8
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、麦角硫因、抗坏血酸钠、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶5.5mg、所述麦角硫因2mg、所述抗坏血酸钠0.5mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例9
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮3.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例10
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将超氧化物歧化酶、山梨醇、抗坏血酸钠、甘草黄酮、甘草提取物、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述超氧化物歧化酶3.3mg、所述山梨醇1mg、所述抗坏血酸钠0.3mg、所述甘草黄酮2mg、所述甘草提取物1.4mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例11
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、硫酸软骨素、甲基环糊精用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述硫酸软骨素7mg、所述甲基环糊精80μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例12
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、透明质酸、阿拉伯糖、甲基环糊精用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述透明质酸7mg、所述阿拉伯糖80μg、所述甲基环糊精80μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例13
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、甘氨酸钠、三甲铵乙酸盐用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述甘氨酸钠3mg、所述三甲铵乙酸盐40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例14
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、羟丙基环糊精、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述羟丙基环糊精3mg、所述蔗糖脂肪酸酯0.6mg、所述三甲铵乙酸盐40μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例15
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、月桂酰胺、羧甲基纤维素钠用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述月桂酰胺2mg、所述羧甲基纤维素钠2mg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
对照例16
一种骨髓干细胞保护液，该保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠、庆大霉素、链霉素、妥布霉素、月桂酰胺、海藻酸铵、淀粉甘醇酸钠用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂8mg、所述肝素钠0.02U、所述庆大霉素60U、所述链霉素20U、所述妥布霉素20U、所述月桂酰胺2mg、所述海藻酸铵2mg、所述淀粉甘醇酸钠50μg，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为33.7mg/mL。
骨髓干细胞保护液安全性分析：
取实施例1、实施例4、实施例7、对照例3-6的骨髓干细胞保护液，均在温度40℃±2℃下，相对湿度为75％±5％的条件下放置12个月，在试验期间1个月、3个月、6个月、9个月、12个月末分别取样一次，检测骨髓干细胞保护液中细菌、真菌和病毒的感染情况，检验结果见表1。
表1骨髓干细胞保护液安全性分析
其中：“-”表示“没有”，“√”表示“有”。
比较实施例4与实施例1、对照例3-4的骨髓干细胞保护液的细菌感染状况可知，在骨髓干细胞保护液中添加重量份数为3:1:1的庆大霉素、链霉素、妥布霉素可以提高骨髓干细胞保护液防止细菌感染的能力，减少抗生素种类、变化抗生素种类、或调整不同种类抗生素间的重量份数比，都会导致骨髓干细胞保护液的抗细菌感染能力减弱。
比较实施例7与实施例4、对照例5-6的骨髓干细胞保护液的真菌和病毒感染状况可知，在骨髓干细胞保护液中添加苯甲酸钠和氢化可的松可以有效防止骨髓干细胞保护液感染真菌和病毒，减少其中一个成分，或变化其中一个成分，骨髓干细胞保护液防止真菌和病毒感染的效果会减弱。
低氧保护剂对骨髓间充质干细胞在低氧条件下存活率的影响分析：
将相同数量的骨髓干细胞分别放入实施例10、实施例13以及对照例7-10的骨髓干细胞保护液中，置于灭菌的西林瓶中，在4℃的低氧培养箱(1％的O2、5％的CO2和94％的N2)中保存24小时后用台盼兰染色计数骨髓间充质干细胞存活率，结果见表2。
表2低氧条件下骨髓间充质干细胞的存活率
实施例10 实施例13 对照例7 对照例8 对照例9 对照例10
细胞成活率(％) 80.4 93.1 40.5 63.7 82.2 83.7
由上述结果可知：选用超氧化物歧化酶、山梨醇和抗坏血酸钠作为低氧保护剂可以提高低氧条件下骨髓间充质干细胞的存活率；加入甘草黄酮和淫羊藿提取物与超氧化物歧化酶、山梨醇和抗坏血酸钠配合使用，对于提高低氧条件下的骨髓间充质干细胞存活率效果更佳。
不同细胞保护液对骨髓间充质干细胞存活率的影响分析：
设置试验1-4和对比试验1-6，将相同数量的骨髓间充质干细胞分别放入不同的细胞保护液中，置于灭菌的西林瓶中，在4℃下保存240小时，期间分别于第12h、24h、48h、96h、240h时观察骨髓间充质干细胞形态，并用台盼兰染色计数骨髓间充质干细胞存活率。
其中试验1-4分别采用实施例1、实施例4、实施例16、实施例18的骨髓干细胞保护液作为骨髓间充质干细胞的保护液；对比试验1采用生理盐水作为骨髓间充质干细胞的保护液；对比试验2采用DMEM/F12培养基作为骨髓间充质干细胞的保护液，对比试验5-6采用对照例1、对照例2、对照例11、对照例12的骨髓干细胞保护液作为骨髓间充质干细胞的保护液，试验结果见表3。
表3不同种类细胞保护液对骨髓间充质干细胞存活率的影响
其中：A表示细胞分散度好、大小均匀、形态不变、轮廓清晰；
B表示细胞体积变大、大小不等、轮廓模糊、出现椭圆或不规则等异常形态。
上述试验结果表明，试验1-4与对比试验1-4相比，其骨髓间充质干细胞存活率明显较高，且骨髓间充质干细胞的形态也保持得更好，由此可知本发明提供的的骨髓干细胞保护液可以有效保持骨髓间充质干细胞活性、提高骨髓间充质干细胞存活率。
试验3-4的骨髓间充质干细胞存活率明显高于试验1-2和对比实验5-6，说明在骨髓干细胞保护液中加入硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精有利于提高骨髓间充质干细胞存活率，减少其中一个成分，或改变其中一个成分，提高骨髓间充质干细胞存活率的效果会变差。
骨髓干细胞保护液对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响分析
分别采用实施例4、实施例19、对照例13和对照例14的骨髓干细胞保护液保存骨髓间充质干细胞1h，并将上述骨髓间充质干细胞均以每cm2接种25个骨髓间充质干细胞的标准在培养板上接种后培养7天，每天计算骨髓间充质干细胞数量，绘制其生长曲线，其生长曲线如图1所示。
从图1中可知，经过实施例19的骨髓干细胞保护液保存的骨髓间充质干细胞的增殖速度明显高于经过实施例4、对照例13和对照例14的骨髓干细胞保护液保存的骨髓间充质干细胞，上述结果表明在骨髓干细胞保护液中添加甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐可以有效提高骨髓间充质干细胞的增殖速度，减少其中一个成分，或变化其中一个成分，提高骨髓间充质干细胞的增殖速度的效果会减弱。
骨髓干细胞保护液稳定性分析
取实施例4、实施例22、对照例15-16的骨髓干细胞保护液，均在温度40℃±2℃下，相对湿度为75％±5％的条件下放置12个月，在试验期间1个月、3个月、6个月、9个月、12个月末分别取样一次，检测骨髓干细胞保护液的性状和色泽，试验结果见表4。
表4骨髓干细胞保护液稳定性试验结果
其中：“-”表示没有，“√”表示有。
比较实施例22与实施例4和对照例15-16的骨髓干细胞保护液的稳定性状况可知，在骨髓干细胞保护液中添加月桂酰胺、羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠可以有效提高骨髓干细胞保护液的稳定性，避免骨髓干细胞保护液产生沉淀、分层和变色等问题，减少其中一个成分，或变化其中一个成分，骨髓干细胞保护液的稳定性会减弱。
最后应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述保护液主要是将低氧保护剂、肝素钠和氨基糖苷类抗生素用DMEM/F12培养基水溶液溶解而成，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述低氧保护剂5-10mg、所述肝素钠0.01-0.05U、所述氨基糖苷类抗生素50-200U，所述DMEM/F12培养基水溶液的浓度为30-40mg/mL。
2.根据权利要求1所述的骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素由庆大霉素、链霉素、妥布霉素中的一种或多种组成。
3.根据权利要求2所述的骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述保护液中还含有苯甲酸钠和氢化可的松，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述苯甲酸钠50-200μg、所述氢化可的松20-50μg。
4.根据权利要求1所述的骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述低氧保护剂包括如下重量份数的各成分：
超氧化物歧化酶8-12 山梨醇2-5 抗坏血酸钠0.5-2。
5.根据权利要求4所述的骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述低氧保护剂还包括如下重量份数的各成分：
甘草黄酮5-8 淫羊藿提取物2-5。
6.根据权利要求1所述的骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述保护液中还含有硫酸软骨素、阿拉伯糖、甲基环糊精，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述硫酸软骨素5-10mg、所述阿拉伯糖50-100μg、所述甲基环糊精50-100μg。
7.根据权利要求1所述的骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述保护液中还含有甘氨酸钠、蔗糖脂肪酸酯、三甲铵乙酸盐，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述甘氨酸钠1-5mg、所述蔗糖脂肪酸酯0.5-1mg、所述三甲铵乙酸盐10-50μg。
8.根据权利要求1所述的骨髓干细胞保护液，其特征在于：所述保护液中还含有月桂酰胺、羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠，每mL所述DMEM/F12培养基水溶液分别溶解所述月桂酰胺1-5mg、所述羧甲基纤维素钠1-5mg、所述淀粉甘醇酸钠20-100μg。
9.一种根据权利要求1所述的骨髓干细胞保护液的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)将NaHCO3水溶液逐滴加入DMEM/F12培养基水溶液中，直至DMEM/F12培养基溶液的PH值为6.2-6.6；
(2)将其他原料加入步骤(1)得到的DMEM/F12培养基溶液中，混合均匀获得混合液；
(3)在温度为130-150℃，压力为0.1-0.2MPa的条件下，对步骤(2)所得的混合液进行灭菌20-30min；
(4)将步骤(3)得到的混合液在冰水浴中降温至0-10℃即可获得骨髓干细胞保护液。
10.根据权利要求9所述的骨髓干细胞保护液的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的混合是采用超声波混合机混合20-30min。
CN201610622368.0A 2016-08-01 2016-08-01 一种骨髓干细胞保护液及其制备方法 Pending CN107668024A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610622368.0A CN107668024A (zh) 2016-08-01 2016-08-01 一种骨髓干细胞保护液及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610622368.0A CN107668024A (zh) 2016-08-01 2016-08-01 一种骨髓干细胞保护液及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107668024A true CN107668024A (zh) 2018-02-09

Family

ID=61133320

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610622368.0A Pending CN107668024A (zh) 2016-08-01 2016-08-01 一种骨髓干细胞保护液及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107668024A (zh)

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108670946A (zh) * 2018-07-04 2018-10-19 天津昂赛细胞基因工程有限公司 治疗关节软骨损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液
CN108849857A (zh) * 2018-07-20 2018-11-23 吉林济惠生物科技有限公司 一种脐带间充质干细胞的运输保护液
CN109566597A (zh) * 2018-11-05 2019-04-05 北京世纪劲得生物技术有限公司 一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法
WO2019199230A1 (en) * 2018-04-09 2019-10-17 Cellresearch Corporation Pte. Ltd. A method of transporting mesenchymal stem cells by means of a cell culture medium and a method of administering stem cells to wounds
CN110810399A (zh) * 2019-11-21 2020-02-21 康妍葆(北京)干细胞科技有限公司 细胞运输保护液及制备方法和应用
EP3622959A1 (en) * 2018-09-17 2020-03-18 Roquette America, Inc. Cyclodextrin for protecting cells upon cryopreservation
CN111602648A (zh) * 2020-04-26 2020-09-01 河南侨创生命科技有限公司 一种免疫细胞无血清冻存液及冻存方法
CN113812397A (zh) * 2021-09-30 2021-12-21 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种灌注保存液
CN113826614A (zh) * 2021-09-30 2021-12-24 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种器官保存液
CN113841688A (zh) * 2021-11-06 2021-12-28 马高辉 一种构建骨髓间充质干细胞库用保存液及细胞库的构建方法
CN114097768A (zh) * 2021-11-24 2022-03-01 李敬 一种骨髓干细胞用保护液及其制备方法和应用
CN114585255A (zh) * 2019-11-08 2022-06-03 博傲沃德株式会社 干细胞用冷藏保存液

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6949335B2 (en) * 1999-11-30 2005-09-27 21St Century Medicine, Inc. Polyglycerol and lactose compositions for the protection of living systems from states of reduced metabolism
CN104396940A (zh) * 2014-10-11 2015-03-11 张炳强 一种组织样本保存液及其制备方法
CN105284787A (zh) * 2015-10-23 2016-02-03 深圳爱生再生医学科技有限公司 骨髓间充质干细胞的保存试剂及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6949335B2 (en) * 1999-11-30 2005-09-27 21St Century Medicine, Inc. Polyglycerol and lactose compositions for the protection of living systems from states of reduced metabolism
CN104396940A (zh) * 2014-10-11 2015-03-11 张炳强 一种组织样本保存液及其制备方法
CN105284787A (zh) * 2015-10-23 2016-02-03 深圳爱生再生医学科技有限公司 骨髓间充质干细胞的保存试剂及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙庆伟等: "《临床生理学》", 30 November 1998, 江西高校出版社 *
迟玉杰: "《保健食品学》", 31 May 2016, 中国轻工业出版社 *
魏长志等: "《中药对血管内皮细胞的作用》", 31 October 2010, 吉林人民出版社 *

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019199230A1 (en) * 2018-04-09 2019-10-17 Cellresearch Corporation Pte. Ltd. A method of transporting mesenchymal stem cells by means of a cell culture medium and a method of administering stem cells to wounds
CN108670946A (zh) * 2018-07-04 2018-10-19 天津昂赛细胞基因工程有限公司 治疗关节软骨损伤的细胞凝胶制剂及其用途和所用的保持冻存细胞活性的凝胶溶液
CN108849857A (zh) * 2018-07-20 2018-11-23 吉林济惠生物科技有限公司 一种脐带间充质干细胞的运输保护液
EP3622959A1 (en) * 2018-09-17 2020-03-18 Roquette America, Inc. Cyclodextrin for protecting cells upon cryopreservation
WO2020060898A1 (en) * 2018-09-17 2020-03-26 Roquette America, Inc. Cyclodextrin for protecting cells upon cryopreservation
CN109566597A (zh) * 2018-11-05 2019-04-05 北京世纪劲得生物技术有限公司 一种宫内膜干细胞保护液及其制备方法
CN114585255A (zh) * 2019-11-08 2022-06-03 博傲沃德株式会社 干细胞用冷藏保存液
CN110810399A (zh) * 2019-11-21 2020-02-21 康妍葆(北京)干细胞科技有限公司 细胞运输保护液及制备方法和应用
CN111602648B (zh) * 2020-04-26 2021-04-06 河南侨创生命科技有限公司 一种免疫细胞无血清冻存液及冻存方法
CN111602648A (zh) * 2020-04-26 2020-09-01 河南侨创生命科技有限公司 一种免疫细胞无血清冻存液及冻存方法
CN113812397A (zh) * 2021-09-30 2021-12-21 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种灌注保存液
CN113826614A (zh) * 2021-09-30 2021-12-24 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种器官保存液
CN113812397B (zh) * 2021-09-30 2023-03-14 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种灌注保存液
CN113826614B (zh) * 2021-09-30 2023-03-14 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种器官保存液
CN113841688A (zh) * 2021-11-06 2021-12-28 马高辉 一种构建骨髓间充质干细胞库用保存液及细胞库的构建方法
CN114097768A (zh) * 2021-11-24 2022-03-01 李敬 一种骨髓干细胞用保护液及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107668024A (zh) 一种骨髓干细胞保护液及其制备方法
CN107114355A (zh) 一种脂肪细胞保护液及其制备方法
CN107027743B (zh) 细胞冻存液及细胞冻存方法
CN102792947B (zh) 一种间充质干细胞冻存液及注射液
EP3447137B1 (en) Liquid enzyme preparation and preparation method thereof
CN106520633B (zh) 一种植物乳杆菌冻干粉的制备方法
CN107114356A (zh) 一种胎盘及脐带细胞保护液
CN108651442A (zh) 一种间充质干细胞4℃储存液
CN106520679B (zh) 一种用于培养胰腺干细胞的试剂盒
EP0259739A1 (en) Improved stability of freeze-dried cultures
CN108184817A (zh) 一种脐带血造血干细胞冻存液及冻存方法
CN105076114A (zh) 脐带间充质干细胞无血清保存液及其应用
CN106237339A (zh) 一种冻干疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用
CN106520677A (zh) 一种冻存表皮干细胞的复苏液及其复苏方法
EP3486310A2 (en) Leuconostoc mesenteroides
CN111418580A (zh) 干细胞冻存液及冻存方法
CN107125240A (zh) 一种皮肤精原细胞保护液及其制备方法
CN108207934A (zh) 一种细胞冻存液
CN112195103B (zh) 冻干保护剂、粪菌冷冻干燥产物及其制备方法
CN108967417B (zh) 一种肿瘤组织高活性储存运输液及其制备方法
CN114107104B (zh) 一种保加利亚乳杆菌冻干粉及其制备方法
EP3486312B1 (en) Leuconostoc mesenteroides cjlm627 strain producing reduced amount of gas, and kimchi production method using same
CN107668023A (zh) 一种皮肤精原细胞保护液
CN111956546B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的去屑洗发水及其制备方法
CN106754671A (zh) 一种用于培养心肌祖细胞的试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180209