CN113826614A - 一种器官保存液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10‑12g/L；乳糖酸25‑30g/L；谷氨酸2‑3g/L；氢氧化钠3‑5g/L；氯化钙0.02‑0.05g/L；氯化钾1‑2g/L；氯化镁2‑3g/L；组氨酸4‑5g/L；谷胱甘肽0.5‑1g/L；缺氧模拟剂0.39‑1000μmol/mL。该器官保存液能有效延长对细胞、组织或器官的静态冷藏时间。

Description

一种器官保存液
技术领域
本发明属于器官移植技术领域，特别涉及一种器官保存液。
背景技术
器官移植是一种挽救生命的治疗方法，常用于终末期疾病、原发性和暴发性器官功能衰竭等。然而，器官短缺仍然是目前阻碍器官移植技术广泛推广及临床应用的主要问题，我国器官等待者和捐献者之间的比例大约为30：1。且这些器官供体存在遭受缺血性损伤和再灌注损伤的风险，扩大了对高级保存的需求。静态冷保存是移植领域最常用的临床保存器官的技术,目的是限制腺苷三磷酸(ATP)消耗并抑制细胞酶活性，减少细胞通过磷脂水解降解，但现有的器官保存液静态冷藏细胞、组织或器官的时间较短，不利于细胞、组织和器官的保存。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种器官保存液，能有效延长对细胞、组织或器官的静态冷藏时间。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10-12g/L；乳糖酸25-30g/L；谷氨酸2-3g/L；氢氧化钠3-5g/L；氯化钙0.02-0.05g/L；氯化钾1-2g/L；氯化镁2-3g/L；组氨酸4-5g/L；谷胱甘肽0.5-1g/L；缺氧模拟剂0.39-1000μmol/mL。
优选的，所述缺氧模拟剂为二甲基草酰甘氨酸，所述缺氧模拟剂在所述器官保存液中的浓度为1.95-1000μmol/mL。
优选的，所述缺氧模拟剂为可溶性钴盐，所述缺氧模拟剂在所述器官保存液中的浓度为0.39-200μmol/mL。
优选的，所述缺氧模拟剂为水合氯化钴。
优选的，所述器官保存液的pH为7.0-7.5。
优选的，所述器官保存液的渗透压为300-350mOsmol/kg。
上述器官保存液在细胞、组织和器官移植中的应用。
本发明的有益效果是：
(1)本发明的器官保存液体系能有效延长对细胞、组织或器官的静态冷藏时间，最高能达到72小时；
(2)本发明的器官保存液体系中含有缺氧模拟剂，其能稳定缺氧诱导因子-1α，减缓缺氧诱导因子-1α的分解，从而能减轻移植细胞、组织和器官的冷缺血再灌注损伤,从而在不利的环境中提高细胞、组织和器官存活率，提高移植效果质量。
附图说明
图1为将HepG2细胞在实施例1-10及对比例1中的器官保存液中冷藏24后再进行复温培养7天的测试结果，其中A为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞代谢活动量，B为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞培养液中DNA的含量；
图2为将HepG2细胞在实施例11-20及对比例1中的器官保存液中冷藏24后再进行复温培养7天的测试结果，其中A为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞代谢活动量，B为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞培养液中DNA的含量；
图3为将HepG2细胞在实施例1-10及对比例1中的器官保存液中冷藏48后再进行复温培养7天的测试结果，其中A为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞代谢活动量，B为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞培养液中DNA的含量；
图4为将HepG2细胞在实施例11-20及对比例1中的器官保存液中冷藏48后再进行复温培养7天的测试结果，其中A为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞代谢活动量，B为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞培养液中DNA的含量；
图5为将HepG2细胞在实施例1-10及对比例1中的器官保存液中冷藏72后再进行复温培养7天的测试结果，其中A为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞代谢活动量，B为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞培养液中DNA的含量；
图6为将HepG2细胞在实施例11-20及对比例1中的器官保存液中冷藏72后再进行复温培养7天的测试结果，其中A为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞代谢活动量，B为HepG2细胞在培养1天、3天及7天后细胞培养液中DNA的含量；
图7为将老鼠肝组织在实施例3-9及对比例1中的器官保存液中冷藏24或48小时后再进行复温培养3天的测试结果，示出了组织的代谢活性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴0.39mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例2：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴0.78mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例3：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴1.56mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例4：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴3.13mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例5：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴6.25mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例6：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴12.5mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例7：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴25mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例8：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴50mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例9：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴100mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例10：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；水合氯化钴200mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例11：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸1.95mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例12：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸3.91mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例13：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸7.81mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例14：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸15.6mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例15：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸31.25mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例16：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸62.5mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例17：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸125mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例18：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸250mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例19：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸500mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例20：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10.93g/L；乳糖酸28.664g/L；谷氨酸2.942g/L；氢氧化钠4g/L；氯化钙0.037g/L；氯化钾1.118g/L；氯化镁2.642g/L；组氨酸4.65g/L；谷胱甘肽0.921L；二甲基草酰甘氨酸1000mol/mL，器官保存液的pH为7.3，器官保存液的渗透压为320mOsmol/kg。
实施例21：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇10g/L；乳糖酸25g/L；谷氨酸2g/L；氢氧化钠3g/L；氯化钙0.05g/L；氯化钾1g/L；氯化镁2g/L；组氨酸4g/L；谷胱甘肽0.5L；水合氯化钴50mol/mL，器官保存液的pH为7.0，器官保存液的渗透压为300mOsmol/kg。
实施例22：
一种器官保存液，包括以下浓度的组分：甘露醇12g/L；乳糖酸30g/L；谷氨酸3g/L；氢氧化钠5g/L；氯化钙0.02g/L；氯化钾2g/L；氯化镁3g/L；组氨酸5g/L；谷胱甘肽1L；二甲基草酰甘氨酸500mol/mL，器官保存液的pH为7.5，器官保存液的渗透压为350mOsmol/kg。
对比例1：
一种器官保存液，与实施例1相比唯一的不同之处在于该器官保存液中不含缺氧模拟剂，其余配方及配方浓度与实施例1完全相同。
试验例1：
HepG2细胞(人肝细胞)保存研究方案，按照以下步骤进行试验：
(1)分别将HepG2细胞以8000细胞/平方厘米的密度接种到96孔板中，并在常氧培养箱中培养24小时；
(2)将培养后的细胞分别在实施例1-20及对比例1中的器官保存液中冷藏24、48或72小时，冷藏温度为4℃；
(3)将细胞放回到新鲜培养基中，慢慢变暖至37℃，并培养3天或7天，进行细胞存活，复苏和恢复。
分析细胞的代谢活性、并通过DNA含量分析细胞的增殖情况。
测试结果如图1-图6所示。
由图1-图6可知，当采用本发明的器官保存液对HepG2细胞进行保存处理后，HepG2细胞在冷藏24、48或者72小时后进行复温培养时，HepG2细胞仍然具有较强的复苏和恢复能力，从而表明本申请的器官保存液能显著提高HepG2细胞的保藏时间，保藏时间能长达72小时。
试验例2：
老鼠肝组织保存研究方案，按照以下步骤进行试验：
(1)老鼠肝组织从老鼠体内取出后，以0.5cm x 0.5cm种在24孔板中；
(2)将老鼠肝组织分别在实施例3-9及对比例1中的器官保存液中冷藏24或48小时，冷藏温度为4℃；
(3)将老鼠肝组织放回到新鲜培养基中，慢慢变暖至37℃，并培养3天进行组织存活，复苏和恢复。
分析组织的代谢活性(PretroBlue分析)。
测试结果如图7所示。
由图7可知，当采用本发明的器官保存液对老鼠肝组织进行保存处理后，老鼠肝组织在冷藏24或48小时进行复温培养时，老鼠肝组织仍然具有较强的代谢活性，从而表明本申请的器官保存液能显著提高老鼠肝组织的保藏时间，保藏时间能长达48小时。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种器官保存液，其特征在于：包括以下浓度的组分：
甘露醇10-12g/L；
乳糖酸25-30g/L；
谷氨酸2-3g/L；
氢氧化钠3-5g/L；
氯化钙0.02-0.05g/L；
氯化钾1-2g/L；
氯化镁2-3g/L；
组氨酸4-5g/L；
谷胱甘肽0.5-1g/L；
缺氧模拟剂0.39-1000μmol/mL。
2.根据权利要求1所述的一种器官保存液，其特征在于：所述缺氧模拟剂为二甲基草酰甘氨酸，所述缺氧模拟剂在所述器官保存液中的浓度为1.95-1000μmol/mL。
3.根据权利要求1所述的一种器官保存液，其特征在于：所述缺氧模拟剂为可溶性钴盐，所述缺氧模拟剂在所述器官保存液中的浓度为0.39-200μmol/mL。
4.根据权利要求3所述的一种器官保存液，其特征在于：所述缺氧模拟剂为水合氯化钴。
5.根据权利要求1所述的一种器官保存液，其特征在于：所述器官保存液的pH为7.0-7.5。
6.根据权利要求1所述的一种器官保存液，其特征在于：所述器官保存液的渗透压为300-350mOsmol/kg。
7.权利要求1-6任一项所述的器官保存液在细胞、组织和器官移植中的应用。
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