CN107655813B - 基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法及其应用，包括以下步骤：1)制备生物相容性的反蛋白石结构水凝胶；2)基于反蛋白石结构水凝胶心肌细胞的培养；3)心肌细胞的检测；4)数据的分析。本发明中的反蛋白石结构色水凝胶具备良好的生物相容性，细胞在其表面生长保持高活性和表型，反蛋白石结构水凝胶不仅为心肌细胞的生长提供载体，更重要的是为心肌细胞收缩力和跳动频率的检测提供稳定的光学传感信号，该检测方法不需要复杂的检测系统，具备直观性、高灵敏行、高效、不受外界条件影响的优势；该方法可应用于心脏药物的筛选、评估，通过加入药物后心肌细胞收缩力和跳动频率的改变进行筛选。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法及其应用，属于生物医药材料研究技术领域。
背景技术
目前，在心肌细胞的检测过程中，我们主要依赖体外细胞培养技术和体内动物模型的构建。在新药研发过程中，由于缺乏机体的复杂性，简单的二维细胞培养存在不能真实模拟体内微环境以及各组织和器官之间的复杂生理过程等问题；此外，由于构建动物模型的不确定性及其本身的复杂性、加上一些人道主义因素，在药物研发中动物模型的构建也面临了一定的挑战。为了真实模拟体内的微环境，在细胞或器官水平上实现体内器官的真实模拟，研究学者们结合仿生学、精密加工和微流体等优势学科，研究并开发了多种用于心肌细胞的检测技术，而基于这些技术所构建的大多数检测方法中，往往需要复杂的检测系统，这些复杂的检测系统中需要消耗大量的时间和精力，并且缺乏直观性。在心脏及心肌细胞的研究中，心肌细胞的收缩力和跳动频率作为其中的两项主要的参数，是评判心脏功能和心肌细胞活性的重要指标。因此，研究并开发具备高灵敏性检测心肌细胞的收缩力和跳动频率的传感材料、构建稳定的心肌细胞收缩力和跳动频率的检测技术，仍然面临着严峻的挑战。
发明内容
技术问题：本发明的目的在于提供一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法及其应用，该方法中反蛋白石结构水凝胶不仅为心肌细胞的生长提供载体，更重要的是为心肌细胞收缩力和跳动频率的检测提供稳定的光学传感信号，该检测方法不需要复杂的检测系统，具备直观性、高灵敏度、高效、不受外界条件影响的优势，且该检测体系还具有制备方法简单、材料易得、成本低廉、易于规模化生产等特点，该方法应用于心脏药物的筛选评估。
技术方案：本发明提供了一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法，该方法包括以下步骤：
1)反蛋白石水凝胶的制备：采用模板牺牲法，利用胶体粒子和生物相容性水凝胶前聚体，制备反蛋白石结构水凝胶；
2)基于反蛋白石结构水凝胶心肌细胞的培养：在步骤1)得到的反蛋白石结构水凝胶表面种植心肌细胞，经培养后在反蛋白石结构水凝胶上形成具有心肌细胞片层的心肌组织结构；
3)心肌细胞的检测：反蛋白石结构水凝胶上心肌细胞的收缩和舒张引起反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化，采集反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化数据；
4)数据的分析：对步骤3)采集的反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化数据进行分析，得到心肌细胞的收缩力和跳动频率情况。
其中：
步骤1)所述的模板牺牲法的具体制备步骤为：
①利用胶体粒子自组装制备光子晶体模板；
②将生物相容性水凝胶前聚体渗透到光子晶体模板中，固化后形成光子晶体-水凝胶杂交体；
③去除光子晶体-水凝胶杂交体中的光子晶体模板，得到反蛋白石结构水凝胶。
所述的胶体粒子为二氧化硅、四氧化三铁、二氧化钛、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸乙酯或聚乙烯中的一种，且其粒径为100～300nm。
所述的生物相容性水凝胶前聚体为胶原蛋白、明胶、甲基丙烯酸甲酯修饰的明胶、牛血清白蛋白、丝素蛋白、醋酸丁酸纤维素、海藻酸钙、硅氧烷甲基丙烯酸酯、琼脂糖、聚乙烯醇、甲基丙烯酸缩水甘油酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一种或多种的混合物。
步骤①所述的利用胶体粒子自组装制备光子晶体模板的具体过程为：将单分散的胶体粒子分散在溶剂中，得到浓度为1～20wt％的单分散的胶体粒子溶液，之后利用胶体粒子溶液在基底上自组装形成光子晶体模板，其中所述的溶剂为乙醇或者水溶液，所述的基底为玻璃、硅片、聚二甲基硅氧烷或者聚苯乙烯中的一种。
步骤③中所述的去除光子晶体-水凝胶杂交体中的光子晶体模板采用的方法为化学腐蚀法、物理溶解法或者高温煅烧法。
步骤2)所述的培养是指在二氧化碳细胞培养箱中，在36～40℃、2～10wt％CO2培养环境中培养2～10天。
所述的采集反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化数据是指用光谱仪对反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰进行检测。
所述的反蛋白石结构水凝胶为平面的水凝胶或者图案化的水凝胶。
所述的心肌细胞为不同种属及诱导分化得到的各类心肌细胞。
所述的心肌细胞为SD乳大鼠细胞、人源多功能干细胞诱导的心肌细胞。
所述的反蛋白石结构水凝胶的结构色覆盖可见光范围，其特征反射峰的波长在300nm～800nm之间，并通过光子晶体模板中胶体粒子的粒径大小进行调节。
所述的心肌细胞的收缩力根据反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰偏移量Δλ的大小来确定，在相同培养条件情况下，对心肌细胞施加不同的刺激，Δλ偏移量越大，表明心肌细胞的收缩力越大。
所述的心肌跳动频率的推算公式为f＝1/t，其中f为心肌跳动频率，t为特征反射峰单次周期变化时间。
所述的心肌细胞检测是指在不同的刺激条件下，对心肌细胞收缩力和跳动频率的检测。
本发明还提供了一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法的应用，该方法应用于心脏药物的筛选评估，当心脏药物加入后，通过检测生长有心肌细胞的反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰的变化，分析心肌细胞的收缩力和跳动频率变化，从而实现对药物进行筛选评估。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下优势：
1)本发明提供的心肌细胞的检测方法中，反蛋白石结构水凝胶不仅为心肌细胞的生长提供良好生物相容性的载体，其独特且稳定的光学传感信号为心肌细胞收缩力和跳动频率检测提供了稳定光学传感信号；
2)相比其他检测方法，本发明不需要复杂的检测系统，具备直观性，对被检测系统无生理药理等方面的影响，更重要的是检测方法不受外界环境和化学试剂等因素的影响；
3)本发明提供的心肌细胞的检测方法表现出灵敏、高效、且不受外界条件影响的独特内在优势；
4)本发明所提供心肌细胞的检测方法具有简单、材料易得、成本低廉、易于规模化生产等特点，在心脏药物筛选等生物医用材料领域亦有广阔应用前景。
附图说明
图1为反蛋白石结构水凝胶制备示意图；
其中：a为平面反蛋白石结构水凝胶膜的制备示意图；b为条纹图案化反蛋白石结构水凝胶膜的制备示意图；
图2为心肌细胞在反蛋白石结构水凝胶薄膜表面的生长示意图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。
反蛋白结构水凝胶由于其独特的编码元素和简单易识别性，在生物医学领域具有极大的关注，而在心肌细胞的培养过程中，反蛋白石结构水凝胶可利用光子晶体独特的光学传感属性和特征反射峰进行心肌细胞收缩力和跳动频率的检测，其存在许多内在优势：较窄的光谱宽度、稳定光学编码元素、及不受背景荧光干扰和可控的结构色和反射峰等；因此，反蛋白石结构水凝胶材料在心脏收缩力跳动频率的研究中有着非常重要的引用前景。本发明提供了一种适合心肌细胞收缩力和跳动频率的反蛋白结构水凝胶检测技术，实验结果表明该检测技术在心肌细胞收缩力和跳动频率的检测中具备高效、灵敏、不受其他信号干扰和可观性等内在优势。
实施例1一种基于甲基丙烯酸酯明胶(GelMA)反蛋白石结构水凝胶心肌细胞检测及其应用
1、GelMA反蛋白石结构水凝胶的制备：
1)将纯化好的单分散在粒径为300nm的二氧化硅粒子分散在乙醇溶液中，得到二氧化硅粒子浓度为20wt％的二氧化硅乙醇分散液；
2)将二氧化硅乙醇分散液在玻璃片上沉积形成二氧化硅光子晶体模板，最后对所得光子晶体模板进行高温煅烧(500℃)，获得到机械强度较好的光子晶体模板；
3)将机械强度较好的光子晶体模板浸泡在GelMA水凝胶前聚液(0.3g/ml)中2h，经过紫外固化得到光子晶体-水凝胶杂交体系；
4)最后利用HF(2wt％)腐蚀光子晶体水凝胶杂交体系中的二氧化硅胶体粒子，得到GelMA反蛋白石结构水凝胶材料。
2、GelMA反蛋白石结构水凝胶用于心肌细胞的培养
将提取好的SD乳大鼠的心肌细胞种植在GelMA反蛋白石结构色水凝胶表面，细胞种植密度为5*104/cm2，之后置于二氧化碳细胞培养箱，在37℃、5wt％CO2培养环境中培养10天，得到生长有SD乳大鼠的心肌细胞的反蛋白石结构水凝胶膜。
3、基于GelMA反蛋白石结构水凝胶膜对心肌细胞收缩力和跳动频率的检测
当心肌细胞在反蛋白石水凝胶表面生长并产生周期性的收缩时，反蛋白石结构水凝胶内部晶格会随着心肌细胞的收缩和舒张产生体积和角度的变化，根据布拉格衍射公式λ＝1.633D(naverage 2-cos2θ)1/2(D值为衍射平面间的距离，θ布拉格掠射角)，当反蛋白石水凝胶膜的体积和角度发生变化时，D值和θ也会发生变化，因此，光子晶体的特征反射峰也会发生变化；在37℃条件下，把培养有心肌细胞的GelMA反蛋白石水凝胶置于光谱仪的显微镜下面，通过光纤光谱仪检测出反蛋白石水凝胶膜的特征反射峰周期性变化数据进行分析，得到心肌细胞的收缩力和跳动频率情况，从而间接进行心肌细胞的检测：
所述的心肌细胞的收缩力根据反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰偏移量Δλ的大小来确定，在相同培养条件情况下，对心肌细胞施加不同的刺激，Δλ偏移量越大，表明心肌细胞的收缩力越大。
所述的心肌跳动频率的推算公式为f＝1/t，其中f为心肌跳动频率，t为特征反射峰单次周期变化时间。
4、对心脏药物筛选评估
将生长有SD乳大鼠的心肌细胞的GelMA反蛋白石水凝胶膜置于不同浓度的心肌药物异丙肾上腺素环境中，心肌细胞收缩力和跳动频率的变化引起反蛋白石GelMA水凝胶膜颜色和波谱的变化，通过对反蛋白石GelMA水凝胶膜颜色和波谱变化的检测，实现对心肌药物异丙肾上腺素的筛选评估。
实例2一种基于牛血清白蛋白(BSA)反蛋白石水凝胶膜的心肌细胞检测及其应用
1、BSA反蛋白石结构水凝胶膜的制备：
1)将纯化好的单分散在100nm的聚苯乙烯粒子分散在水溶液中，得到浓度为1wt％的聚苯乙烯水溶液；
2)将聚苯乙烯水溶液在硅片上沉积，自组装形成聚苯乙烯光子晶体模板；
3)将聚苯乙烯光子晶体模板浸泡在BSA水凝胶前聚液(0.2g/ml)中3h，经戊二醛交联得到光子晶体-水凝胶杂交体系；
4)最后利用无水乙醇溶解光子晶体水凝胶杂交体系中的聚苯乙烯粒子，获得BSA反蛋白石结构水凝胶。
2、BSA反蛋白石结构水凝胶用于心肌细胞的培养
将提取好的SD乳大鼠的心肌细胞种植在BSA反蛋白石结构水凝胶表面，细胞种植密度为1*105/cm2，之后置于二氧化碳细胞培养箱，在36℃、10wt％CO2培养环境中培养8天，得到生长有SD乳大鼠的心肌细胞的BSA反蛋白石结构水凝胶膜。
3、基于BSA反蛋白石结构水凝胶对心肌细胞收缩力和跳动频率的检测
当心肌细胞在反蛋白石结构水凝胶表面生长并产生周期性的收缩时，反蛋白石结构水凝胶的内部晶格会随着心肌细胞的收缩和舒张产生体积和角度的变化，根据布拉格衍射公式：λ＝1.633D(naverage 2-cos2θ)1/2(D值为衍射平面间的距离，θ布拉格掠射角)，当反蛋白石结构水凝胶的体积和角度发生变化时，D值和θ也会发生变化，因此，反蛋白石结构水凝胶特征反射峰也会发生变化。在37℃条件下，把培养有心肌细胞的BSA反蛋白石结构水凝胶置于光谱仪的显微镜下面，通过光纤光谱仪检测出反蛋白石水凝胶膜的特征反射峰周期性变化数据进行分析，得到心肌细胞的收缩力和跳动频率情况，从而间接进行心肌细胞的检测：
所述的心肌细胞的收缩力根据反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰偏移量(Δλ)的大小来确定，在相同培养条件情况下，对心肌细胞施加不同的刺激，Δλ偏移量越大，表明心肌细胞的收缩力越大。
所述的心肌跳动频率的推算公式为f＝1/t，其中f为心肌跳动频率，t为特征反射峰单次周期变化时间。
4、对钙离子浓度刺激评估
将生长有SD乳大鼠的心肌细胞的BSA反蛋白石结构水凝胶置于不同钙离子环境中，心肌细胞收缩力和跳动频率的变化引起光子晶体BSA反蛋白石结构水凝胶颜色和波谱的变化，通过对光子晶体BSA反蛋白石结构水凝胶的颜色和波谱的变化检测实现钙离子对心肌细胞影响评估。
实例3一种基于明胶反蛋白石结构水凝胶膜的心肌细胞检测及其应用
1、明胶条纹反蛋白石结构水凝胶的制备：
1)将纯化好的单分散在200nm的二氧化硅粒子分散在乙醇溶液中，得到二氧化硅粒子浓度为15wt％的二氧化硅乙醇分散液；
2)将二氧化硅乙醇分散液在条纹硅片(凹面40μm，凸面30μm)上沉积形成条纹二氧化硅光子晶体模板，最后对所得条纹光子晶体模板进行高温煅烧(600℃)，获得到机械强度较好的条纹光子晶体模板；
3)将机械强度较好的条纹光子晶体模板在明胶水凝胶前聚液(0.25g/ml)中浸泡5h，经过戊二醛(3wt％)交联得光子晶体水凝胶杂交体系；
4)最后利用NaOH(30wt％)腐蚀掉光子晶体水凝胶杂交体系中的二氧化硅粒子，获得条纹明胶反蛋白石水凝胶膜。
2、条纹明胶反蛋白石水凝胶膜用于心肌细胞的培养
将提取好的SD乳大鼠的心肌细胞种植在条纹明胶反蛋白石水凝胶膜表面，细胞种植密度为2*104/cm2，之后置于二氧化碳细胞培养箱，在40℃、2wt％CO2培养环境中培养5天，得到生长有SD乳大鼠的心肌细胞的条纹明胶反蛋白石水凝胶膜。当心肌细胞在条纹明胶反蛋白石结构水凝胶膜表面生长时，水凝胶表面的微米级别的条纹可诱导细胞的定向生成，形成一定取向生成的心肌片层结构反蛋白石水凝胶。
3、基于明胶反蛋白石水凝胶膜对心肌细胞收缩力和跳动频率的检测
当心肌细胞在条纹反蛋白石水凝胶膜生长并产生周期性的收缩时，反蛋白石水凝胶膜的内部晶格会随着心肌细胞的收缩和舒张产生体积和角度的变化。根据布拉格衍射公式：λ＝1.633D(naverage 2-cos2θ)1/2(D值为衍射平面间的距离，θ布拉格掠射角)，当条纹反蛋白石水凝胶膜体积和角度发生变化时，D值和θ也会发生变化，因此，反蛋白石水凝胶膜的特征反射峰也会发生变化。在37℃条件下，把培养有心肌细胞的条纹明胶反蛋白石水凝胶膜置于光谱仪的显微镜下面，通过光纤光谱仪检测出反蛋白石水凝胶膜的特征反射峰周期性变化数据进行分析，得到心肌细胞的收缩力和跳动频率情况，从而间接进行心肌细胞的检测：
所述的心肌细胞的收缩力根据反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰偏移量(Δλ)的大小来确定，在相同培养条件情况下，对心肌细胞施加不同的刺激，Δλ偏移量越大，表明心肌细胞的收缩力越大。
所述的心肌跳动频率的推算公式为f＝1/t，其中f为心肌跳动频率，t为特征反射峰单次周期变化时间。
4、对电刺激的筛选评估
将生长有SD乳大鼠的心肌细胞的条纹反蛋白石水凝胶膜用于生理电位对心肌细胞的影响研究，当施加不同的电位时，心肌细胞收缩力和跳动频率的变化引起反蛋白石水凝胶膜颜色和波谱的变化，通过对条纹明胶反蛋白石水凝胶膜的颜色和波谱的变化检测实现生理电位对心肌细胞的影响评估。
实例4一种基于丝素蛋白反蛋白石结构水凝胶膜的心肌细胞检测及其应用
1、丝素蛋白反蛋白石结构水凝胶的制备：
1)将纯化好的单分散在250nm的聚苯乙烯粒子分散在水溶液中，得到浓度为18wt％的聚苯乙烯水溶液；
2)将聚苯乙烯水溶液在条纹硅片(凹面50μm，凸面40μm)上沉积形成条纹聚苯乙烯光子晶体模板；
3)将聚苯乙烯光子晶体模板在丝素蛋白前聚液(0.5g/ml)中浸泡3h，冷冻干燥固化得光子晶体-水凝胶杂交体系；
4)最后利用无水乙醇溶解光子晶体-水凝胶杂交体系中的聚苯乙烯，获得条纹丝素蛋白反蛋白石水凝胶膜。
2、条纹丝素蛋白反蛋白石水凝胶膜用于心肌细胞的培养
将提取好的SD乳大鼠的心肌细胞种植在条纹丝素蛋白反蛋白石水凝胶膜表面，细胞种植密度为1*105/cm2，之后置于二氧化碳细胞培养箱，在38℃、7wt％CO2培养环境中培养2天，得到生长有SD乳大鼠的心肌细胞的条纹丝素蛋白反蛋白石水凝胶膜。当心肌细胞在条纹丝素蛋白反蛋白石结构水凝胶膜表面生长时，水凝胶表面的微米级别的条纹可诱导细胞的定向生成，形成一定取向生成的心肌片层结构反蛋白石水凝胶。
3、基于丝素蛋白反蛋白石水凝胶膜对心肌细胞收缩力和跳动频率的检测
当心肌细胞在反蛋白石水凝胶膜表面生长并产生周期性的收缩时，反蛋白石水凝胶膜的内部晶格会随着心肌细胞的收缩和舒张产生体积和角度的变化。根据布拉格衍射公式：λ＝1.633D(naverage 2-cos2θ)1/2(D值为衍射平面间的距离，θ布拉格掠射角)，当反蛋白石水凝胶膜的体积和角度发生变化时，D值和θ也会发生变化，因此，反蛋白石水凝胶膜的特征反射峰也会发生变化。在37℃条件下，把培养有心肌细胞的条纹明胶反蛋白石水凝胶膜置于光谱仪的显微镜下面，通过光纤光谱仪检测出反蛋白石水凝胶膜的特征反射峰周期性变化数据进行分析，得到心肌细胞的收缩力和跳动频率情况，从而间接进行心肌细胞的检测：
所述的心肌细胞的收缩力根据反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰偏移量(Δλ)的大小来确定，在相同培养条件情况下，对心肌细胞施加不同的刺激，Δλ偏移量越大，表明心肌细胞的收缩力越大。
所述的心肌跳动频率的推算公式为f＝1/t，其中f为心肌跳动频率，t为特征反射峰单次周期变化时间。
4、对心脏药物美托洛尔的筛选评估
将生长有SD乳大鼠的心肌细胞的光子晶体丝素蛋白水凝胶纤维置于不同浓度的美托洛尔环境中，心肌细胞收缩力和跳动频率的变化引起丝素蛋白反蛋白石水凝胶膜颜色和波谱的变化，通过对丝素蛋白反蛋白石水凝胶的颜色和波谱的变化检测实现美托洛尔药物对心肌细胞影响评估。
Claims (7)
1.一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)反蛋白石水凝胶的制备：采用模板牺牲法，利用胶体粒子和生物相容性水凝胶前聚体，制备反蛋白石结构水凝胶；
2)基于反蛋白石结构水凝胶心肌细胞的培养：在步骤1)得到的反蛋白石结构水凝胶表面种植心肌细胞，经培养后在反蛋白石结构水凝胶上形成具有心肌细胞片层的心肌组织结构；
3)心肌细胞的检测：反蛋白石结构水凝胶上心肌细胞的收缩和舒张引起反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化，采集反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化数据；
4)数据的分析：对步骤3)采集的反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化数据进行分析，得到心肌细胞的收缩力和跳动频率情况；
其中所述的胶体粒子为二氧化硅、四氧化三铁、二氧化钛、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸乙酯或聚乙烯中的一种，且其粒径为100～300nm；
所述的生物相容性水凝胶前聚体为胶原蛋白、明胶、甲基丙烯酸甲酯修饰的明胶、牛血清白蛋白、丝素蛋白、醋酸丁酸纤维素、海藻酸钙、硅氧烷甲基丙烯酸酯、琼脂糖、聚乙烯醇、甲基丙烯酸缩水甘油酯或二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一种或多种的混合物。
2.根据权利要求1所述的一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法，其特征在于：步骤1)所述的模板牺牲法的具体制备步骤为：
①利用胶体粒子自组装制备光子晶体模板；
②将生物相容性水凝胶前聚体渗透到光子晶体模板中，固化后形成光子晶体-水凝胶杂交体；
③去除光子晶体-水凝胶杂交体中的光子晶体模板，得到反蛋白石结构水凝胶。
3.根据权利要求1所述的一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法，其特征在于：步骤2)所述的培养是指在二氧化碳细胞培养箱中，在36～40℃、2～10wt％CO2培养环境中培养2～10天。
4.根据权利要求1所述的一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法，其特征在于：步骤3)所述的采集反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰周期性变化数据是指用光谱仪对反蛋白石结构水凝胶的特征反射峰进行检测。
5.根据权利要求1所述的一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法，其特征在于：所述的反蛋白石结构水凝胶为平面的水凝胶或者图案化的水凝胶。
6.根据权利要求1所述的一种基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法，其特征在于：所述的心肌细胞为不同种属及诱导分化得到的各类心肌细胞。
7.一种如权利要求1所述的基于反蛋白石结构水凝胶的心肌细胞检测方法的应用，其特征在于：该方法应用于心脏药物的筛选评估。
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