CN107652290B - 一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法 - Google Patents
一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107652290B CN107652290B CN201711056815.1A CN201711056815A CN107652290B CN 107652290 B CN107652290 B CN 107652290B CN 201711056815 A CN201711056815 A CN 201711056815A CN 107652290 B CN107652290 B CN 107652290B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extraction
- biogas slurry
- zeatin
- extraction preparation
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
- C07D473/32—Nitrogen atom
- C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及沼液浓缩液成分分离制备领域，具体地说，是一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法。具体包括步骤：用甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质，得到浸提液；用乙酸乙酯萃取浸提液的烘干物，得到滤渣；用正丁醇萃取滤渣若干次后，得到正丁醇萃取液；将萃取液上样过硅胶柱，用二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂，按体积比10:1；8:1；6:1；4:1；2:1进行梯度洗脱，设定等体积为一个馏分收集，检测并合并相同斑点的馏分后，分离纯化得到玉米素。本发明的纯化方法操作简单，从而使得操作成本低，因此具有可观的经济实用价值和广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及沼液浓缩液成分分离制备领域，具体地说，是一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法。
背景技术
目前，关于沼液和沼渣的有机质成分报道很少，且从沼液中分离得到的化合物，主要是植物激素、游离氨基酸、Vitamin B、抗生素、2-喹啉酮及17β-雌二醇，他们表现出促进作物生长发育，抗微生物等活性。目前对沼液已有的研究主要是直接将沼液做简单的处理(如玻璃纤维等)后直接做高效液相测量，但沼液中成分特别复杂，直接做高效液相会有许多杂峰的影响，会降低沼液成分研究的精确性。运用本方法对沼液进行处理，去除了沼液中大量水分，挥发性胺类和固体杂质，将沼液中有效活性成分提取出来。后面运用的玉米素洗脱方法将玉米素最大程度洗脱出来，对沼液中玉米素的含量有更精确认识。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的内容在于提供一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法，包括以下步骤：
一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质，得到浸提液；
其中，所述步骤(1)的沼液干燥的方法为烘干。
其中，所述步骤(1)的甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质的方法中，提取时间为1～2h，提取2次,料液质量/体积比为0.8-1.5g/mL。
其中，所述步骤(1)的甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质的方法中，提取时间为1～2h，提取2次,料液质量/体积比为0.8-1.5g/mL。
具体可以为，取沼液200g，烘箱烘干称重。称取适量干燥物，置于圆底烧瓶中,加入200ml甲醇，加热回流2h，2次，得到浸提液。
(2)用乙酸乙酯萃取步骤(1)中的浸提液的烘干物，得到滤渣；
优选的，所述步骤(2)的萃取的次数为3次。
具体可以为，将浸提液浓缩烘干后，用适量的乙酸乙酯萃取3次，得到滤渣。
(3)用正丁醇萃取步骤(2)的滤渣若干次后，将若干次的正丁醇萃取液混合得到萃取液；
优选的，所述步骤(3)的若干次为3次。
(4)将步骤(3)的萃取液上样过硅胶柱，用二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂，按体积比10:1；8:1；6:1；4:1；2:1进行梯度洗脱，设定等体积为一个馏分收集(可以为每20mL为一个馏分收集)，检测并合并相同斑点的馏分后，分离纯化得到玉米素。尝试用石油醚-丙酮；石油醚-乙酸乙酯；氯仿-甲醇洗脱剂系统，收集馏分后点板发现几乎没有或者只有微弱荧光点，说明洗脱效果并不好。当尝试用二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂，按体积比20:1；10:1；5:1进行梯度洗脱时，意外的发现点板时荧光点比较明显且比较集中。而且该洗脱方法使洗脱液的极性逐渐增大，能将沼液中极性不同的成分充分洗脱下来，不会造成回收率的损失。
具体可以为，称取适量200-300目细硅胶装入到玻璃柱中，使硅胶自由沉降，将步骤(3)的萃取液上样到粗硅胶柱中，充分搅拌使溶剂挥发，静置，均匀散布于细硅胶中，使样品充分沉落，然后依次用二氯甲烷：乙酸乙酯＝10:1；8:1；6:1；4:1；2:1；纯甲醇进行梯度洗脱，每20mL为一个馏分收集，并采用薄层层析色谱(TLC)检测，合并具有相同斑点的馏分，回收有机溶剂。将二氯甲烷：乙酸乙酯(6:1-2:1)段经TLC检测后分为A、B、C三个组分。将这三个组分去除溶剂后用色谱级甲醇溶解，用HPLC技术检测。
其中，所述步骤(4)的斑点为采用薄层层析色谱检测后得到的斑点。
其中，所述HPLC方法对得到的三个组分检测，得到三个组分的液相色谱图，采用保留时间法对沼液中制备出的组分定性。玉米素标准物质的液相出峰时间为24.051min,在相同条件下，某一组分出峰时间为24.951min,和玉米素标准品出峰保留时间相近，于是判断该组分为玉米素。
其中，所述HPLC技术的具体参数如下：
色谱柱：Agilent SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm,上海安捷伦科技有限公司)
流动相A：超纯水流动相B：(色谱纯)
紫外检测波长：245nm
流速：0.3mL/min
柱温：35℃
流动相洗脱梯度见表1
表1液相色谱线性梯度洗脱程序
本发明的纯化方法操作简单，从而使得操作成本低。此外，本发明的纯化方法中的玉米素收率高，从而适合于大规模产业化生产，并且经纯化得到的玉米素纯度高，因此具有可观的经济实用价值和广泛的应用前景。本方法处理得到的沼液萃取物去除了沼液中大量的水分，挥发胺类和固体杂质等，使沼液中的有效成分最大程度的被提取出来。本发明中的洗脱方法得到的玉米素纯度为96％，通过含量的计算，沼液中玉米素的含量为7％，以后通过对沼液中玉米素的提取对沼液最大最大程度的利用，提高沼液的利用效率，减少沼液对环境的污染，对农业和环境保护都有重要的作用。
附图说明
图1为玉米素标准品液相色谱图。DAD1C,Sig＝265,4Ref＝off(089-0101.D)
图2为使用本发明所制备得到的玉米素液相色谱图。DAD1C,Sig＝265,4Ref＝off(089-0101.D)
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步说明：
本实施例中的沼液浓缩液为申请号为201410284656.0沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法
实施例
(1)样品处理
取沼液200g，烘箱烘干称重。称取适量干燥物，置于圆底烧瓶中,加入200ml甲醇，加热回流2h，2次。将浸提液浓缩烘干后，用适量的乙酸乙酯萃取3次，将乙酸乙酯萃取后的滤渣继续用适量的正丁醇萃取3次，得正丁醇萃取液。
(2)沼液中玉米素的制备
将适量正丁醇萃取液，称取适量100-200目粗硅胶与溶解的正丁醇萃取液进行拌样，不停的进行搅拌，待正丁醇挥干后备用。称取适量200-300目细硅胶装入到玻璃柱中，使硅胶自由沉降，将拌样后的样品采用干法上样撒入到装好的硅胶柱中，静置，使样品充分沉落。于是依次用二氯甲烷：乙酸乙酯＝10:1；8:1；6:1；4:1；2:1；纯甲醇进行梯度洗脱，每20mL为一个馏分收集，并采用薄层层析色谱(TLC)检测，合并具有相同斑点的馏分，回收有机溶剂。将氯仿:乙酸乙酯(6:1-2:1)段经TLC检测后分为A、B、C三个组分。将这三个组分去除溶剂后用色谱级甲醇溶解，用HPLC技术检测。
(3)HPLC色谱条件
色谱柱：Agilent SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm,上海安捷伦科技有限公司)
流动相A：超纯水流动相B：(色谱纯)
紫外检测波长：245nm
流速：0.3mL/min
柱温：35℃
流动相洗脱梯度见表1
表1液相色谱线性梯度洗脱程序
(4)按照步骤(3)所述HPLC方法对步骤(2)得到的三个组分分别用同样的HPLC方法检测，得到三个组分的液相色谱图，采用保留时间法对沼液中制备出的组分定性。玉米素标准物质的液相出峰时间为24.051min,在相同条件下，某一组分出峰时间为24.951min,和玉米素标准品出峰保留时间相近，于是判断该组分为玉米素。
经测试玉米素含量为96％。
以上所述为本发明的较佳实施例而已，但本发明不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本发明保护的范围。
Claims (8)
1.一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质，得到浸提液；
(2)用乙酸乙酯萃取步骤(1)中的浸提液的烘干物，得到滤渣；
(3)用正丁醇萃取步骤(2)的滤渣若干次后，得到正丁醇萃取液；
(4)将步骤(3)的萃取液上样过硅胶柱，用二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂，按体积比10:1；8:1；6:1；4:1；2:1进行梯度洗脱，设定等体积为一个馏分收集，检测并合并相同斑点的馏分后，分离纯化得到玉米素。
2.根据权利要求1所述的提取制备方法，其特征在于：所述步骤(1)的沼液干燥的方法为烘干。
3.根据权利要求1所述的提取制备方法，其特征在于：所述步骤(1)的甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质的方法中，提取时间为1～2h，提取2次,料液质量/体积比为0.8-1.5g/mL。
4.根据权利要求1所述的提取制备方法，其特征在于：所述步骤(2)的萃取的次数为3次。
5.根据权利要求1所述的提取制备方法，其特征在于：所述步骤(3)的若干次为3次。
6.根据权利要求1所述的提取制备方法，其特征在于：所述步骤(4)的萃取液上样过硅胶柱为称取适量200-300目细硅胶装入到玻璃柱中，使硅胶自由沉降，将步骤(3)的正丁醇萃取液上样到粗硅胶柱中，充分搅拌使溶剂挥发，静置，均匀散布于细硅胶中。
7.根据权利要求1所述的提取制备方法，其特征在于：所述步骤(4)的设定20ml为一个馏分收集。
8.根据权利要求1所述的提取制备方法，其特征在于：所述步骤(4)的斑点为采用薄层层析色谱检测后得到的斑点。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711056815.1A CN107652290B (zh) | 2017-10-27 | 2017-10-27 | 一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711056815.1A CN107652290B (zh) | 2017-10-27 | 2017-10-27 | 一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107652290A CN107652290A (zh) | 2018-02-02 |
| CN107652290B true CN107652290B (zh) | 2019-11-29 |
Family
ID=61096809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711056815.1A Active CN107652290B (zh) | 2017-10-27 | 2017-10-27 | 一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107652290B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109832288B (zh) * | 2019-03-21 | 2021-06-22 | 周口师范学院 | 一种细胞分裂素的制备方法 |
-
2017
- 2017-10-27 CN CN201711056815.1A patent/CN107652290B/zh active Active
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Simple and rapid determination of N6-(△2-isopentenyl)adenine, zeatin, and dihydrozeatin in plants using on-line cleanup liquid chromatography coupled with hybrid quadrupole-Orbitrap high-resolution mass spectrometry;Lian-Feng Ai et al.;《J. Sep. Sci.》;20151231;第38卷;第1858–1865页 * |
| 猪粪发酵沼液成分测定与分析;沈其林等;《中国沼气》;20141231;第32卷(第3期);第83-86页 * |
| 畜禽养殖废弃物沼液的浓缩及其成分;宋成芳等;《农业工程学报》;20111231;第27卷(第12期);第256-259页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107652290A (zh) | 2018-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103145677B (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离白木香叶片中活性成分的方法 | |
| CN105111255A (zh) | 一种肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的提取分离方法 | |
| CN101891750A (zh) | 千金藤碱及其盐的制备方法 | |
| CN107843664A (zh) | 茶叶中草铵膦、草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方法 | |
| CN101695518A (zh) | 一种提取黄藤总生物碱、分离黄藤素、药根碱的方法 | |
| CN102631414B (zh) | 地不容总生物碱提取纯化工艺 | |
| CN102210803A (zh) | 贝母总生物碱的提取富集方法 | |
| CN106706826A (zh) | 一种毫克级植物中植物激素的分析方法 | |
| CN107652290B (zh) | 一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法 | |
| CN104725450A (zh) | 一种从素馨花中提取高纯度橄榄苦苷的方法 | |
| CN101096378A (zh) | 白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物单体的提取、分离方法 | |
| CN105566414A (zh) | 从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法 | |
| CN104997840A (zh) | 一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法及其应用 | |
| CN101357147B (zh) | 一种有指纹图谱的罗布麻叶提取物及其制备和分析方法 | |
| CN102759590A (zh) | 一种卷烟烟气中苯并[a]芘的提取净化方法 | |
| CN102342973A (zh) | 土贝母总皂苷的提取富集方法 | |
| Zhang et al. | Selectively preparative purification of aristolochic acids and aristololactams from Aristolochia plants | |
| CN105541944A (zh) | 瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途 | |
| CN104262076B (zh) | 一种利用硝酸银硅胶色谱法提纯植物来源角鲨烯的方法 | |
| CN102924545B (zh) | 一种木通皂苷d的富集和纯化方法 | |
| CN103145775A (zh) | 高纯度棒柄花苷a的制备及其质量控制方法 | |
| CN104892620B (zh) | 一种高纯度水黄皮素的制备方法 | |
| CN107857762B (zh) | 一种沼液浓缩液中6-苄氨基嘌呤的提取制备方法 | |
| CN111420428A (zh) | 一种拟南芥中抗性代谢物Arabidopsides的纯化方法 | |
| CN105116060A (zh) | 一种油菜素内酯的快速高效检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |