CN102342973A - 土贝母总皂苷的提取富集方法 - Google Patents

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韩立炜
胡凯文
刘勇
王常灵
刘永刚
倪胜楼
安超
胡明昕
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Abstract

本发明涉及一种土贝母总皂苷的提取富集方法,包括:第一步骤,将土贝母粉碎,以体积分数为60~80%的乙醇溶液作为提取溶剂提取,收集提取液后去除提取液中的溶剂,并使所得提取物干燥,得总皂苷粗提物;第二步骤,将所述总皂苷粗提物溶解于水并过滤去除不溶物质,将滤液作为上样液,将所述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱后,水洗至多糖检测反应为阴性,继续以体积分数为90~95%的乙醇溶液作为洗脱溶剂,洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性,收集乙醇洗脱液,去除其中的溶剂,并使所得物干燥,得总皂苷提取物。本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法所得土贝母总皂苷在保证提取物中总皂苷含量达到50%的同时,还能够提高土贝母总皂苷的转移率。

Description

土贝母总皂苷的提取富集方法
技术领域
本发明涉及一种皂苷的提取富集方法,特别涉及一种土贝母总皂苷的提取富集方法。
背景技术
土贝母Rhizoma Bolbostematis为葫芦科植物土贝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.)Franquet的干燥块茎,味苦,性微寒,归肺、脾经,具有散结、消肿、解毒之功效,中医用于治疗乳痈、瘰疬、乳腺炎、颈淋巴结结核、慢性淋巴炎、肥厚性鼻炎等。土贝母中含有皂苷、生物碱、甾醇等。现代药理学研究表明,土贝母皂苷成分具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎等药理作用,目前已分离出的皂苷成分有土贝母苷I、土贝母苷II、土贝母苷III、土贝母苷VI、土贝母苷IV、7β,18,20,26-四羟基-20(S)-24E-达玛甾烯-3-0-α-L(3’-乙酰基)吡喃阿拉伯糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、7β,18,20,26-四羟基-20(S)-24E-达玛甾烯-3-0-α-L(4’-乙酰基)吡喃阿拉伯糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、7β,18,20,26-四羟基-20(S)-24E-达玛甾烯-3-0-α-L吡喃阿拉伯糖-(1→2)-β-D-(6’-乙酰基)吡喃葡萄糖苷等。
目前,对土贝母总皂苷的提取富集方法的研究文献研究不多。
中国专利93110381.9记载了一种土贝母总皂苷的制备方法,包括:将土贝母药材粉碎至5~20目,用60~80%乙醇或甲醇于≤80℃浸提2~4次,蒸去溶剂,余液浓缩至浸膏,用2~4倍量水稀释后,用水饱和的C4~C5脂肪醇萃取2~4次,萃取液减压蒸去有机溶剂,真空干燥得土贝母总皂苷。
朱海鸥等(中成药,2011年1月,第33卷第1期,第49~53页,“土贝母总皂苷的提取及大孔树脂纯化工艺研究”)公开了一种土贝母的总皂苷的提取纯化工艺,包括:将土贝母药材用60%的乙醇20倍体积(8∶6∶6)提取3次,每次1.5h,药液浓缩后以0.2g·mL-1的浓度上样于处理好的NKA-9树脂(药材量与树脂量之比为0.6g∶1mL),以7BV水洗脱除杂后,再用3BV的95%乙醇洗脱即得到土贝母总皂苷,以高氯酸-香草醛溶液比色法测定其平均总皂苷含量为90.66%,平均收率为3.34%。
马挺军等(中国中药杂志,2005年5月,第30卷第10期,第744~746页,“大孔吸附树脂分离富集土贝母总皂苷的研究”)公开了一种土贝母总皂苷的提取分离富集方法,包括:称取粉碎的土贝母药材,加入70%乙醇,加热回流提取3次,每次2h,减压蒸干得浸膏,将浸膏用适量水溶解后制成上样液,上NKA大孔吸附树脂柱,80%乙醇洗脱,洗脱液浓缩干燥后得总皂苷。
然而用上述文献方法提取土贝母总皂苷时,有的使用有机溶剂,易造成溶剂残留,影响药品的安全性;有的纯度虽超过50%,但总皂苷的转移率低,损失严重,造成生产成本提高和资源浪费。
因此,本发明要解决的技术问题在于,提供一种土贝母总皂苷的提取富集方法,该方法在保证提取物中总皂苷含量达到《药品注册管理办法》规定的有效部位的含量应大于50%的同时,还能够提高土贝母总皂苷的转移率。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种土贝母总皂苷的提取富集方法,该方法在保证提取物中总皂苷含量达到《药品注册管理办法》规定的有效部位的含量应大于50%的同时,还能够提高土贝母总皂苷的转移率。
为实现上述目的,本发明采取了如下技术方案:
一种土贝母总皂苷的提取富集方法,包括:第一步骤,将土贝母粉碎,以体积分数为60~80%的乙醇溶液作为提取溶剂提取,收集提取液后去除提取液中的溶剂,并使所得提取物干燥,得总皂苷粗提物;第二步骤,将所述总皂苷粗提物溶解于水并过滤去除不溶物质,将滤液作为上样液,将所述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱后,水洗至多糖检测反应为阴性,继续以体积分数为90~95%的乙醇溶液作为洗脱溶剂,洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性,收集乙醇洗脱液,去除其中的溶剂,并使所得物干燥,得总皂苷提取物。
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第一步骤中,以体积分数为70%的乙醇溶液作为所述提取溶剂。
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第一步骤中,所述提取溶剂的用量为每1g土贝母使用4~6mL的提取溶剂,用提取溶剂提取的次数为不低于2次,提取时间为每次2~3小时。
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第一步骤中,所述提取溶剂的用量为每1g土贝母使用4mL的提取溶剂,用提取溶剂提取的次数为3次,提取时间为每次2小时。
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第二步骤中,以体积分数为95%的乙醇溶液作为所述洗脱溶剂。
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第二步骤中,所述上样液的浓度为每1mL相当于1.4~1.8g土贝母,上样体积为0.5~1BV,上样流速为0.5~1mL·min-1
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第二步骤中,所述上样液的浓度为每1mL相当于1.6g土贝母,上样体积为1BV,上样流速为1mL·min-1
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第二步骤中,所述HPD750型大孔树脂柱的径高比为1∶5~1∶6。
进一步地,在本发明的土贝母总皂苷的提取富集方法中,在第二步骤中,所述HPD750型大孔树脂柱的径高比为1∶5。
本发明土贝母总皂苷的提取富集方法采取了乙醇提取、HPD750型大孔树脂富集的工艺对土贝母中的总皂苷进行提取富集,该方法能够使土贝母总皂苷提取物中总皂苷含量大于50%,同时可使土贝母药材鲜品的总皂苷转移率大于32%。
具体实施方式
以下通过具体实施例,对本发明作进一步的详细描述。
实施例1:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,4倍量(即每1g土贝母使用4mL乙醇,以下所述4倍量与此相同)体积分数为60%的乙醇溶液提取2次,每次2h,收集60%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物4925.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.8g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为1BV,上样流速为1mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为90%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1015.0mg。
实施例2:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,6倍量(即每1g土贝母使用6mL乙醇,以下所述6倍量与此相同)体积分数为60%的乙醇溶液提取3次,每次2h,收集60%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物5250.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.6g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶6的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为1BV,上样流速为1mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为90%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1093.7mg。
实施例3:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,5倍量(即每1g土贝母使用5mL乙醇,以下所述5倍量与此相同)体积分数为60%的乙醇溶液提取2次,每次3h,收集60%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物5100.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.4g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为0.5BV,上样流速为0.5mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为95%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1126.4mg。
实施例4:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,4倍量体积分数为70%的乙醇溶液提取3次,每次2h,收集70%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物4880.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.6g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为1BV,上样流速为1mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为95%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1036.0mg。
实施例5:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,5倍量体积分数为70%的乙醇溶液提取2次,每次2h,收集70%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物4700.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.4g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为1BV,上样流速为0.5mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为90%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1099.0mg。
实施例6:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,6倍量体积分数为70%的乙醇溶液提取2次,每次3h,收集70%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物4750.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.8g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶6的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为0.5BV,上样流速为0.5mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为95%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1089.7mg。
实施例7:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,6倍量体积分数为80%的乙醇溶液提取3次,每次3h,收集80%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物4725.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.4g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶6的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为0.5BV,上样流速为0.5mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为95%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1088.0mg。
实施例8:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,5倍量体积分数为80%的乙醇溶液提取3次,每次2h,收集80%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物4625.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.6g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶5的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为1BV,上样流速为1mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为95%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1021.6mg。
实施例9:
取土贝母药材鲜品50g捣碎,4倍量体积分数为80%的乙醇溶液提取2次,每次3h,收集80%乙醇提取液,浓缩并使所得提取物干燥,得到总皂苷粗提物4575.0mg。
将上述所得的总皂苷粗提物用蒸馏水溶解,过滤取上清液得相当于原药材1.8g·mL-1的上样液。将HPD750型大孔树脂以1∶6的径高比装入直径为1.5cm的层析柱中,水洗至无醇味,将上述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱,上样体积为0.5BV,上样流速为0.5mL·min-1,上样完成后,用水冲洗大孔树脂柱至多糖检测反应为阴性,再用体积分数为90%的乙醇洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性。收集乙醇洗脱液,浓缩,蒸干,得总皂苷提取物1047.0mg。
实施例10
取土贝母药材鲜品50g,放入烘箱中55℃干燥70h后,取出称重,计算含水量为72.87%。取上述已干燥土贝母粉碎,过60目筛,精密称取0.3g干燥土贝母,置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇50mL,称定重量,超声处理30min,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,水浴蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中,摇匀即得土贝母药材鲜品中总皂苷含量测定用的供试品溶液。
实施例11:
土贝母总皂苷提取物中总皂苷含量测定用的供试品溶液的制备:精密称取上述实施例1~9所得的总皂苷提取物12mg,用甲醇定容至25mL作为土贝母总皂苷提取物中总皂苷含量测定用的供试品溶液。
对照品溶液的制备:精密称取土贝母苷甲对照品2.6mg用甲醇定容至25mL作为对照品溶液。
总皂苷含量测定方法:
分别量取对照品溶液1mL、土贝母总皂苷提取物中总皂苷含量测定用的供试品溶液0.5mL、土贝母药材鲜品中总皂苷含量测定用的供试品溶液0.5mL置于10mL具塞试管中,蒸干溶剂,另取空试管作空白对照,分别加入5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2mL振摇溶解后,加入脱水浓硫酸0.6mL,摇匀后放入90℃水浴中加热20min,然后在冰水冷却1min,再加入冰醋酸4mL,冰水冷却10min后,于531nm处测定吸光度值,计算各供试品溶液中的总皂苷质量,并计算实施例1~9所得总皂苷提取物中总皂苷含量、实施例1~9中的50g土贝母药材鲜品所得洗脱物中总皂苷质量、实施例10中的50g土贝母药材鲜品中总皂苷质量及实施例1~9的土贝母药材鲜品的总皂苷转移率。
土贝母总皂苷提取物中总皂苷含量计算公式如下:
Figure BDA0000097716160000071
总皂苷转移率计算公式如下:
Figure BDA0000097716160000072
实施例1~9所得总皂苷提取物中总皂苷含量测定结果及土贝母药材鲜品的总皂苷转移率如下表所示。
  实施例   总皂苷含量(质量百分比)   总皂苷转移率(质量百分比)
  实施例1   54.5%   32.2%
  实施例2   52.3%   33.4%
  实施例3   52.0%   34.1%
  实施例4   60.5%   36.5%
  实施例5   56.0%   35.9%
  实施例6   55.0%   34.9%
  实施例7   56.0%   35.5%
  实施例8   58.0%   34.6%
  实施例9   57.0%   34.8%
上述实施例1~9中使用的原药材均为土贝母药材鲜品,但显而易见地,本发明方法同样适用于土贝母药材干燥品中总皂苷的提取富集。

Claims (9)

1.一种土贝母总皂苷的提取富集方法,其特征在于,所述方法包括:
第一步骤,将土贝母粉碎,以体积分数为60~80%的乙醇溶液作为提取溶剂提取,收集提取液后去除提取液中的溶剂,并使所得提取物干燥,得总皂苷粗提物;
第二步骤,将所述总皂苷粗提物溶解于水并过滤去除不溶物质,将滤液作为上样液,将所述上样液上样于HPD750型大孔树脂柱后,水洗至多糖检测反应为阴性,继续以体积分数为90~95%的乙醇溶液作为洗脱溶剂,洗脱至洗脱液皂苷检测反应呈阴性,收集乙醇洗脱液,去除其中的溶剂,并使所得物干燥,得总皂苷提取物。
2.根据权利要求1所述的提取富集方法,其特征在于,在第一步骤中,以体积分数为70%的乙醇溶液作为所述提取溶剂。
3.根据权利要求1或2所述的提取富集方法,其特征在于,在第一步骤中,所述提取溶剂的用量为每1g土贝母使用4~6mL的提取溶剂,用提取溶剂提取的次数为不低于2次,提取时间为每次2~3小时。
4.根据权利要求3所述的提取富集方法,其特征在于,在第一步骤中,所述提取溶剂的用量为每1g土贝母使用4mL的提取溶剂,用提取溶剂提取的次数为3次,提取时间为每次2小时。
5.根据权利要求1或2所述的提取富集方法,其特征在于,在第二步骤中,以体积分数为95%的乙醇溶液作为所述洗脱溶剂。
6.根据权利要求1或2所述的提取富集方法,其特征在于,在第二步骤中,所述上样液的浓度为每1mL相当于1.4~1.8g土贝母,上样体积为0.5~1BV,上样流速为0.5~1mL·min-1
7.根据权利要求6所述的提取富集方法,其特征在于,在第二步骤中,所述上样液的浓度为每1mL相当于1.6g土贝母,上样体积为1BV,上样流速为1mL·min-1
8.根据权利要求1或2所述的提取富集方法,其特征在于,在第二步骤中,所述HPD750型大孔树脂柱的径高比为1∶5~1∶6。
9.根据权利要求8所述的提取富集方法,其特征在于,在第二步骤中,所述HPD750型大孔树脂柱的径高比为1∶5。
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