CN107648350A - 一种西柚的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物提取技术领域，尤其涉及一种西柚的提取方法。本发明提供了一种西柚的提取方法，包括以下步骤：a)将西柚全果进行粉碎，得到匀浆液；b)将所述匀浆液进行微射流提取，得到提取物。该提取方法提取效率高，对西柚的有效成分总黄酮破坏少，保持了西柚的功效成分，并且提取方法节能环保。该提取方法获得的西柚提取物总黄酮的质量分数可达50％，有效成分总黄酮含量高，有助于西柚作用的发挥，实验表明该西柚提取物抗敏作用强，尤其在对抗迟发型变态反应和降低毛细血管通透性方面，显示出明显的抗炎和抑菌作用。本发明还提供了该提取方法获得的西柚提取物在制备抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的应用。

Description

一种西柚的提取方法

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，尤其涉及一种西柚的提取方法。

背景技术

皮肤过敏是目前常见的皮肤疾病，严重影响人们的身心健康。过敏反应分为即时型和迟延型。目前，针对过敏主要采取药物治疗，抗过敏药物有抗组胺剂、类固醇等，但这些药物往往存在较大的副作用。随着人们生活水平的提高，无毒、无害的具有抗过敏作用的天然植物越来越受到人们的青睐。中国实验方剂学杂志报道(2013年2月第19卷第4期)防风和地肤子的组合方剂对皮肤过敏和瘙痒具有治疗作用，桃仁水提物对小鼠血清中的皮肤过敏抗体的产生有抑制作用。

目前，西柚(又名葡萄柚)在抗过敏方面仅有少量的应用报道。如申请号为201510875346.0的专利，以葡萄柚提取物为主要原料，配伍羟肟酸和芳香醇，通过增强抑菌消炎作用达到抗过敏效果。申请号201611162789.6的专利，通过脂质体包裹技术，将尿囊素、葡萄柚提取物和大蒜提取物组合，能减缓婴幼儿皮肤过敏发红。将一种原料转变为一种活性物，与提取方法息息相关，而目前尚未见关于西柚活性物提取分离方面的报道。因此，以西柚为原料，寻求一种使西柚提取物中活性成分含量高的提取方法很有必要。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种西柚的提取方法，用于解决目前没有一种使西柚提取物中活性成分含量高的提取方法的问题。

本发明的具体技术方案如下：

一种西柚提取物的提取方法，包括以下步骤：

a)将西柚全果进行粉碎，得到匀浆液；

b)将所述匀浆液进行微射流提取，得到提取液。

优选的，所述微射流提取的提取溶剂为水和/或低级醇；

所述提取溶剂与所述西柚的质量比为2～30：1。

优选的，所述微射流提取的冷媒温度为0～100℃；

所述微射流提取的进料速度为10～20L/min。

优选的，将所述匀浆液进行微射流提取之后，得到提取物之前还包括：

将微射流提取得到的提取液进行后处理。

优选的，所述后处理具体为固液分离、纯化和浓缩。

优选的，所述固液分离具体为采用离心进行固液分离；

所述纯化具体为采用陶瓷膜分离进行纯化；

所述浓缩具体为采用反渗透膜进行浓缩。

优选的，所述离心的离心速度为2000～6000rpm，所述离心的离心时间为5～40min，所述离心的次数为1～2次；

所述陶瓷膜的孔径为400～800nm。

优选的，所述微射流提取为采用微射流提取器进行提取；

所述微射流提取器包括：微射流提取单元；

所述微射流提取单元包括：壳体、内齿环和微射流环；

所述壳体为具有中空结构的圆柱体；

所述内齿环和所述微射流环径向贴附于所述壳体的内壁；

所述内齿环无间隙地设置于所述微射流环的工作前端；

所述微射流环将所述壳体隔成微射流提取腔室；

所述微射流环开有微射流孔。

本发明还提供了上述技术方案所述的提取方法获得的西柚提取物。

本发明还提供了上述技术方案所述西柚提取物在制备抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的应用。

综上所述，本发明提供了一种西柚的提取方法，包括以下步骤：a)将西柚全果进行粉碎，得到匀浆液；b)将所述匀浆液进行微射流提取，得到提取物。该提取方法提取效率高，对西柚的有效成分总黄酮破坏少，保持了西柚的功效成分，并且提取方法节能环保。该提取方法获得的西柚提取物总黄酮的质量分数可达50％，有效成分总黄酮含量高，有助于西柚作用的发挥，实验表明该西柚提取物抗敏作用强，尤其在对抗迟发型变态反应和降低毛细血管通透性方面，显示出明显的抗炎和抑菌作用。另外，本发明还提供了该提取方法获得的西柚提取物在制备抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为本发明中的一种微射流提取器的结构示意图；

图2为本发明中的一种微射流提取单元中的引导环、内齿环、内外齿环和微射流环的局部主视图；

图3为本发明中提供的一种微射流环的示意图；

图4为本发明中西柚提取物的液相图谱图；

图5为本发明中平板打孔法研究西柚提取物对金黄葡萄球菌的影响；

图6为本发明中西柚提取物对金黄葡萄球菌相对渗透率的影响；

图示说明，1.驱动单元；2.吊拉环状物；3.电源接口；4.联轴器；5.第二冷媒出口；6.进料口；7.一级微射流提取腔室；8.螺旋推进叶片；9.二级微射流提取腔室；10.第一冷媒出口；11.出料口；12.三级微射流提取腔室；13.转轴；14.清洗排污出口；15.支架；16.引导环；17.第一冷却环；18.壳体；19.第一冷媒进口；20.第二冷媒进口；21.第二冷却环；22.底座；23.减震片；711.内齿环；712.微射流孔；713.微射流环；714.内外齿环。

具体实施方式

本发明提供了一种西柚提取物，用于解决目前没有一种使西柚提取物中活性成分含量高的提取方法的问题。

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种西柚提取物的提取方法，包括以下步骤：

a)将西柚全果进行粉碎，得到匀浆液；

b)将匀浆液进行微射流提取，得到提取物。

本发明中，微射流提取的提取溶剂为水和/或低级醇，微射流提取的提取溶剂更优选为水，能够降低成本、节约能源；

提取溶剂与西柚的质量比为2～30：1，提取溶剂与西柚的质量比更优选为5～30：1。

本发明中，微射流提取的冷媒温度为0～100℃，微射流提取的冷媒温度更优选为0～20℃，微射流提取的冷媒温度进一步优选为10～20℃；

微射流提取的进料速度为10～20L/min。

需要说明的是，粉碎还可为将西柚全果添加提取溶剂后进行粉碎。

本发明中，将所述匀浆液进行微射流提取之后，得到提取物之前还包括：

将微射流提取得到的提取液进行后处理。

本发明中，后处理具体为固液分离、纯化和浓缩。

本发明中，后处理为依次进行固液分离、纯化和浓缩过滤。

本发明中，固液分离具体为采用离心进行固液分离；

纯化具体为采用陶瓷膜分离进行纯化；

浓缩具体为采用反渗透膜进行浓缩。

本发明中，离心的离心速度为2000～6000rpm，离心的离心时间为5～40min，离心的次数为1～2次；

陶瓷膜的孔径为400～800nm，可提高分离效率，同时可以反复利用，节约成本。

本发明中，微射流提取为采用微射流提取器进行提取。

微射流提取器包括：微射流提取为采用微射流提取器进行提取；

请参阅图1至图3，图1为本发明中的一种微射流提取器的结构示意图，图2为本发明中的一种微射流提取单元中的引导环、内齿环、内外齿环和微射流环的局部主视图，图3为本发明中提供的一种微射流环的示意图。

微射流提取器包括：微射流提取单元；

微射流提取单元包括：壳体18、内齿环711和微射流环713；

壳体18为具有中空结构的圆柱体；

内齿环711和微射流环713径向贴附于壳体18的内壁；

内齿环711无间隙地设置于微射流环713的工作前端；

微射流环713将壳体18隔成微射流提取腔室；

微射流环713开有微射流孔712。

本发明中，微射流提取单元还包括：内外齿环714、引导环16、螺旋推进叶片8、转轴13、密封环和第一冷却环17；

内外齿环714设置于内齿环711内并与内齿环711同轴，内外齿环714固定于微射流环713的工作前端；

引导环16径向贴附于壳体18的内壁并无间隙地位于内齿环711的工作前端；

引导环16的内径由引导环16的第一端到引导环16的第二端逐渐减小；

引导环16的第二端与内齿环711相接；

螺旋推进叶片8和转轴13设置于壳体18内，螺旋推进叶片8固定于转轴13的外壁；

转轴13位于微射流环713的中空部并通过密封环与微射流环713连接；

引导环16设置于螺旋推进叶片8的推进方向端；

第一冷却环17套于壳体18的外壁。

需要说明的是，内齿环711为可拆卸式径向贴附于壳体18的内壁，内外齿环714为可拆卸式固定于微射流环713的工作前端。

引导环16能够将螺旋推送叶片8传递的中药物料进行引流、避免死角；内齿环711、内外齿环714和微射流环713对中药物料也具有引流作用；第一冷却环17设置于壳体18的外壁并包括第一冷媒进口19和第一冷媒出口10，用于控制微射流提取过程中中药物料的温度。

本发明中，微射流提取器还包括：传动单元和驱动单元1；

传动单元包括联轴器4和第二冷却环21；

联轴器4的第一端与转轴13连接。

第二冷却环21套于联轴器4的外壁；

第二冷却环21上设置第二冷媒进口20和第二冷媒出口5，用于引入冷媒给转轴13降温；

驱动单元1的输出轴与联轴器4的第二端连接。

本发明中，微射流孔712的直径为0.1～1.0cm；

微射流孔712的孔壁设有不规则突起；

内齿环711的内齿为不规则齿；

内外齿环714的内齿和外齿为不规则齿。

微射流孔712的0.1～1.0cm直径适合于粉碎成最粗粉及以下粒径的中药材的提取加工，微射流孔712孔壁的不规则突起，对中药物、料有絮流、切割等作用。

微射流提取腔室的数量为两个或两个以上。

本发明中，壳体18具体为抗压金属材料制成的中空筒状容器，壳体18在西柚进行提取后的流通方向端设置有清洗排污出口14。

西柚提取时，在驱动单元1的带动下，通过螺旋推进叶片8，使西柚物料形成了巨大的离心力，西柚物料瞬间通过狭小的微射流孔712，进行了二次加速，形成高频的微射流，西柚物料在纯物理状态下经高速射流撞击、挤压，强烈涡流混合和强力振动扩散的作用，导致西柚物料组织细胞破碎，从而实现低温、快速、全成分提取，保持了西柚的色、香、味，且效率极高。

本发明中，微射流提取腔室的数量为三个，包括一级微射流提取腔室7、二级微射流提取腔室9和三级微射流提取腔室12。

进一步的，还包括：减震片23；

驱动单元1设置于减震片23上，减震片23用于减少驱动单元1的震动和噪音。

本发明中，还包括：支架15和底座22，壳体18通过支架15安装于底座22上，驱动单元1垫有减震片23后设置于底座22上。

本发明中，驱动单元1包括旋转电机，在旋转电机上设置有吊拉环状物2以便于安装，并在旋转电机上设置有电源接口3。

本发明中，壳体18上设置有进料口6和出料口11，用于微射流提取器中西柚物料的进出。

本发明还提供了上述技术方案所述的提取方法获得的西柚提取物。西柚提取物中总黄酮的质量分数为0.10～50.0％。

本发明制得的西柚提取物总黄酮的质量分数可达50.0％，含有丰富的黄酮类物质，有助于西柚作用的发挥，该西柚提取物抗敏作用强，尤其在对抗IV型变态反应和降低毛细血管通透性方面，显示出具有明显抗炎和抑菌作用。本发明西柚的提取方法的提取效率高，对西柚的黄酮类化合物破坏少，保持了西柚的全部功效成分，并且提取方法节能环保。

本发明还提供了西柚提取物在制备化妆品、抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的应用。

本发明中，西柚提取物在抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的添加量为0.1～100％，西柚提取物在抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的添加量更优选为0.5～20％；含西柚提取物的化妆品的剂型为液体、乳液、膏霜类、粉类、块状、喷雾、凝胶类或膏体，西柚提取物可以便捷添加在化妆品中，节约时间。

本发明提供了一种西柚的提取方法，包括以下步骤：a)将西柚全果进行粉碎，得到匀浆液；b)将所述匀浆液进行微射流提取，得到提取物。该提取方法提取效率高，在低温条件下用天然新鲜的西柚提取，对西柚的有效成分总黄酮破坏少，提高了西柚活性成分的浸出并保持了西柚的活性成分，并且提取过程采用的低温提取及膜分离纯化，整个过程无需加热，非常节能环保。该提取方法获得的西柚提取物总黄酮的质量分数可达50％，有效成分总黄酮含量高，有效成分含量明确，有助于西柚作用的发挥，实验表明本发明西柚提取物具有多靶点的天然活性成分，抗敏作用强，尤其在对抗迟发型变态反应和降低毛细血管通透性方面，有显著的抑菌活性和抗炎作用。本发明还提供了该提取方法获得的西柚提取物在制备抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的应用，有助于无毒、无害的化妆品、抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品的开发。

实施例1

将10kg西柚全果粉碎成40目的匀浆液后向其加入重量250kg的纯化水，搅拌均匀，置于微射流提取器中，在冷媒温度10℃、进料速度20L/min条件下提取，得到提取液。将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离，并将分离液用孔径为500nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，用反渗透膜进行浓缩，浓缩至原料与浓缩液比为1：3，即得西柚提取物。

实施例2

将20kg西柚全果加100kg纯化水后粉碎成40目的匀浆液，向匀浆液中加入重量300kg的纯化水，搅拌均匀，置于微射流提取器中，在冷媒温度15℃、进料速度20L/min条件下提取，得到提取液。将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离，并将分离液用孔径为500nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，用反渗透膜进行浓缩，浓缩至原料与浓缩液比为1：3，即得西柚提取物。

实施例3

将10kg西柚全果粉碎成40目的匀浆液后加入重量250kg的30％乙醇溶液，搅拌均匀，置于微射流提取器中，在冷媒温度20℃、进料速度15L/min条件下提取，得到提取液。将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离，并将分离液用孔径为500nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，用反渗透膜进行浓缩，浓缩至原料与浓缩液比为1：3，即得西柚提取物。

实施例4

将10kg西柚全果粉碎成40目的匀浆液后加入重量300kg的80％乙醇溶液，搅拌均匀，置于微射流提取器中，在冷媒温度15℃、进料速度10L/min条件下提取，得到提取液。将提取液通过离心机进行固液分离，转速为8000rpm，收集分离，并将分离液用孔径为500nm陶瓷膜分离进行纯化，收集滤液，用反渗透膜进行浓缩，浓缩至原料与浓缩液比为1：3，即得西柚提取物。

实施例5

本实施例提供了一种含西柚活性成分的抗敏感霜，以质量分数计，配方如下：

本实施例提供了的含西柚活性成分的抗敏感霜的制备方法如下：

(1)将蔗糖多硬脂酸酯(及)氢化聚异癸烯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和鲸蜡硬脂醇加热至70～80℃并混合均匀，得到混合物；

(2)将卡波姆、防腐剂、甘油和水加热至70～80℃并在搅拌下加入到步骤(1)混合物中，得到乳液，慢速搅拌下令乳液冷却；

(3)45℃下搅拌下在乳液中加入实施例1的西柚提取物，搅拌冷却至室温即得含西柚活性成分的抗敏感霜。

实施例6

本实施例提供了一种含西柚活性成分的肌肤调理乳液，以质量分数计，配方如下：

本实施例提供了的含西柚活性成分的肌肤调理乳液的制备方法如下：

(1)将PEG-30-二聚羟基硬脂酸酯、聚二甲基硅烷醇酯、生育酚乙酸酯、肉豆蔻酸异丙酯和霍霍巴油加热至70～80℃并混合均匀，得到混合物1；

(2)将卡波姆940在60℃搅拌搅拌均匀，加入甘油，搅拌，得到混合物2；

(3)将混合物1在搅拌状态下加入混合物2，温度冷却至45℃时，加入防腐剂，混合均匀后加入实施例2的西柚提取物搅拌均匀，用氢氧化钠中和至pH 6.0，混合均匀即得含西柚活性成分的肌肤调理乳液。

实施例7

本实施例测试了西柚提取物对2,4-硝基氯苯诱导小鼠迟发型变态反应的影响。

取体重为20～25g的昆明小鼠60只，雌雄各半，随机分6组，即空白对照组、模型对照组、10％实施例1西柚提取物组、5％实施例1西柚提取物组、1％实施例1西柚提取物组和阳性对照组(地塞米松片2.5mg/kg)，每组10只；各给药组分别给予相应浓度的相应药物，空白对照组与模型对照组给予0.015mL/g 80％吐温20-生理盐水溶液，灌胃给药，每日1次，连续给药3d后，除空白对照组外，去除小鼠腹部绒毛，每只鼠的腹部用5％2,4-硝基氯苯溶液均匀涂抹进行致敏，第4d强化一次，于给药后第9d，将5％2,4-硝基氯苯溶液均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击，空白对照组同样涂耳但未致敏，左耳涂抹生理盐水，攻击24h后，剪下小鼠左右耳，用直径6mm打孔器打孔，称重，测定耳肿胀度，公式如下：

耳肿胀度＝右耳重量(mg)-左耳重量(mg)

实验结果如表1所示，与模型对照组相比，实施例1西柚活性成分和阳性对照组具有极显著性差异，1％实施例1西柚提取物也具有抑制作用，有显著性差异，说明实施例1西柚提取物可对抗昆明小鼠的迟发型变态反应，而且具有剂量依赖关系。

表1西柚提取物对2,4-硝基氯苯诱导小鼠迟发型变态反应耳肿胀的影响

实施例8

本实施例测试了西柚提取物对腹腔毛细血管通透性增加小鼠模型的影响。

取体重为20～25g的昆明小鼠70只，雌雄各半，随机分7组，即空白对照组、模型对照组、10％实施例3西柚提取物组、5％实施例3西柚提取物组、1％实施例3西柚提取物组、10％柚皮苷水溶液组和阳性对照组(阿司匹林水溶液20mL/kg)，每组10只。

各给药组小鼠分别给予相应浓度的相应药物，空白对照组与模型对照组给予生理盐水溶液，药后1h，空白组给予生理盐水，模型对照组、10％实施例3西柚提取物组、5％实施例3西柚提取物组、1％实施例3西柚提取物组和阳性对照组给予1％醋酸0.2ml/只。20min后处死动物，用2ml生理盐水灌洗腹腔，吸出灌洗液，4000rpm离心10min，取上清液，加生理盐水将上清液稀释10倍，取0.1ml稀释后溶液加入5ml蛋白试剂(取考马斯亮蓝G-250100mg溶于50ml 95％乙醇，加入100ml 85％磷酸，用水稀释到1000ml备用)充分振荡混合，2min后以0.1ml双蒸水加5ml蛋白试剂调零，于595nm波长处测光密度值。

以灌洗液中蛋白的多少反映炎症时小鼠腹腔毛细血管通透性的变化。实验结果如表2所示，实施例3西柚提取物能够降低醋酸致小鼠腹腔渗液中蛋白浓度增高，10％实施例3西柚活性成分的抑制效果与阿司匹林相当，抑制率为49.34％，表明实施例3西柚提取物具有降低炎症时毛细血管通透性增加的作用。在相同添加量时，实施例3西柚提取物的抑制率比柚皮苷高一倍，实施例3西柚提取物对毛细血管通透性的抑制效果优于柚皮苷。

表2西柚提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响

实施例9总黄酮检测

芦丁标准曲线的制备：精密称取芦丁对照品5mg，加无水甲醇适量溶解、定容至25mL；精密吸取对照品溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL，分别置于25mL容量瓶中，各加水至6.0mL，摇匀。然后加5％亚硝酸钠1mL，摇匀，放置6min。再加10％硝酸铝1mL，摇匀，放置6min。加1％氢氧化钠10mL，加水定容至刻度，摇匀，放置15min。使用紫外分光光度计在510nm波长处测定吸光值，绘制标准曲线回归方程。

样品测定：将样品稀释至适宜浓度，精密吸取样品适量(V1)，置于25mL(V2)容量瓶中，按上述“芦丁标准曲线的制备”项下自“加水至6mL”起，依法测定样品的吸光值，再由标准曲线回归方程计算总黄酮含量。

药材测定：将西柚全果粉碎成40目的匀浆液，加入20倍80％乙醇加热回流提取1小时，过滤，药渣加10倍80％乙醇加热回流提取1小时，过滤，合并2次提取液，定容，按上述样品测定法测定总黄酮含量。

提取率计算为按上述测得结果换算成药材相当量后样品与药材总黄酮比值为提取率，结果如表3所示。.

总黄酮质量分数计算为把上述液体样品参照《中华人民共和国药典》2015版四部3010固体总量测定法第一法测定其固含量，样品中总黄酮总量与固含量比值为总黄酮的质量分数，结果如表3所示。

表3西柚提取物总黄酮检测结果

实施例10

本实施例提供了西柚提取物中柚皮苷HPLC的检查方法，步骤如下；

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：水(20：80)(用磷酸调节pH值至3)为流动相；检测波长为283nm。

对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含柚皮苷80μg的溶液，即得。

供试品的处理，需使用甲醇稀释100倍，过滤，即可。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。检测西柚提取物中柚皮苷的HPLC图如图4所示，西柚提取物中柚皮苷的含量结果如表4所示。

表4 HPLC检测西柚提取物中柚皮苷的含量

实施例11

本实施例采用平板打孔法研究西柚提取物的抑菌性，根据抑菌圈的大小直观的反应出待测物的抑菌效果，具体操作方法如下：

将配置好的琼脂经溶解后，130℃高压灭菌之后，均匀地倒入培养皿中(约1～4mm高)，平板琼脂冷却凝固后，吸取80μL菌液加入培养基中，用无菌涂布棒将菌液均匀涂布，制成带菌的平板。

在带菌平板上用打孔器打4个间距相同的孔(打孔直径为6mm)。分别吸取等量的实施例2西柚提取物，加入其中的2个孔中，另外2个孔分别加入空白溶剂和15％二甲基亚砜溶液作对照。

放入37℃的恒温培养箱中培养24h，培养结束后，观察菌落生长情况，使用游标卡尺测量各个抑菌圈直径，抑菌圈直径越大，则抑菌活性越强。

图5为平板打孔法研究西柚提取物对金黄葡萄球菌的影响，从表5及图5可见，实施例2西柚提取物具有抑制金黄葡萄球菌生长的作用，效果与15％二甲基亚砜溶液相当。经过试验，发现其它实施例西柚提取物也具有抑制金黄葡萄球菌生长的作用。皮肤表面的细菌容易引起感染和过敏，严重时可导致化脓性病变，故本发明西柚提取物能够通过抑菌作用可以达到预防过敏，降低过敏时受感染的几率。

表5平板打孔法测定西柚提取物的抑菌效果

注：表中数据为抑菌圈直径平均值，其中打孔直径为6mm。

实施例12

本实施例测定了西柚提取物对金黄葡萄球菌细胞膜通透性的影响。

根据金黄葡萄球菌的相对渗透率的大小来表示对金黄葡萄球菌细胞膜的通透性的影响，从而判断抑菌效果。金黄葡萄球菌的相对渗透率越大，表示金黄葡萄球菌细胞膜的通透性高，抑菌效果明显，反之，抑菌效果低。测定西柚提取物对金黄葡萄球菌细胞膜通透性的影响的具体操作方法如下：

将金黄色葡萄球菌活化至对数期，分别取15mL菌悬液到150mL无菌水中，并向其中分别加入实施例2西柚提取物、10％柚皮苷水溶液，充分摇匀，置于37℃恒温震荡箱中培养。

每隔1h、2h、3h、4h、5h、6h取出菌体悬浮液20mL，离心(10000rpm，3min)，上清液用于电导率的测定。其中取10mL菌悬液煮沸20min，冷却后离心(10000rpm，3min)，测定上清液电导率。其中，0h的电导率为A0，某时间电导率为Aa，对应时间取10mL菌悬液煮沸20min，测定上清液电导率为Ab。计算金黄葡萄球菌的电解质相对渗透率公式如下：

相对渗透率％＝(Aa-A0)/(Ab-A0)×100％

实验结果请参阅图6，为本发明中西柚提取物对金黄葡萄球菌相对渗透率的影响。实施例2西柚提取物金黄葡萄球菌的相对渗透率明显高于空白组和10％柚皮苷水溶液。在测试6h后，实施例2西柚提取物的相对渗透率比10％柚皮苷水溶液高20％，说明本发明西柚提取物经过低温微射流提取后，有效提高了西柚的抑菌作用，且对金黄葡萄球菌有明显的抑制作用。

实施例13

本实施例测定了西柚提取物的抗炎作用。

取昆明种雄性小白鼠50只，随机分成5组，即空白对照组、阳性对照组、1％实施例1西柚提取物组、3％实施例1西柚提取物组、5％实施例1西柚提取物组，每组10只，各组依次空腹灌入2mL/100g生理盐水、阿司匹林0.6mg/mL、1％实施例1西柚提取物、3％实施例1西柚提取物、5％实施例1西柚提取物，每天2次，连续5d。

给药1.5h后，在小鼠左耳的前后两面涂布100％二甲苯致炎，每只小鼠0.03mL；在小鼠右耳的前后两面涂生理盐水做对照，每只小鼠0.03mL。

致炎20min后，脱颈处死小鼠，沿耳廓剪下双耳，用6mm直径打孔器分别在同一部位打下耳片，用电子天平称重，计算肿胀度的公式如下：

肿胀度＝左耳片重－右耳片重

二甲苯是非特异性致炎因子，可引起以血管通透性、白细胞游走为主要变化的急性炎症。实验结果如表6所示，本发明西柚提取物可显著抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀，1％实施例1西柚提取物的2抑制率为3.45％，并且实施例1西柚提取物的抑制效果呈剂量依赖关系，表明本发明西柚提取物具有抗急性炎症的作用。

表6西柚提取物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

注：表中数据均为平均值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种西柚提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)将西柚全果进行粉碎，得到匀浆液；

b)将所述匀浆液进行微射流提取，得到提取物。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述微射流提取的提取溶剂为水和/或低级醇；

所述提取溶剂与所述西柚的质量比为2～30：1。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述微射流提取的冷媒温度为0～100℃；

所述微射流提取的进料速度为10～20L/min。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，将所述匀浆液进行微射流提取之后，得到提取物之前还包括：

将微射流提取得到的提取液进行后处理。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述后处理具体为固液分离、纯化和浓缩。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述固液分离具体为采用离心进行固液分离；

所述纯化具体为采用陶瓷膜分离进行纯化；

所述浓缩具体为采用反渗透膜进行浓缩。

7.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述离心的离心速度为2000～6000rpm，所述离心的离心时间为5～40min，所述离心的次数为1～2次；

所述陶瓷膜的孔径为400～800nm。

8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述微射流提取为采用微射流提取器进行提取；

所述微射流提取器包括：微射流提取单元；

所述微射流提取单元包括：壳体、内齿环和微射流环；

所述壳体为具有中空结构的圆柱体；

所述内齿环和所述微射流环径向贴附于所述壳体的内壁；

所述内齿环无间隙地设置于所述微射流环的工作前端；

所述微射流环将所述壳体隔成微射流提取腔室；

所述微射流环开有微射流孔。

9.根据权利要求1至8任意一项所述的提取方法获得的西柚提取物。

10.根据权利要求9所述的西柚提取物在制备抗过敏产品、抗炎产品和/或抑菌产品中的应用。