CN107641601A - 一种液体发酵菌种驯化方法 - Google Patents

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张金霞
黄晨阳
肖俊培
汪建党
侯艳平
闫训友
侯晓强
韩美玲
王晶
乔杰
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Abstract

本发明涉及一种香菇液体发酵菌种驯化方法，将香菇实体进行组织分离培养，生产出固体菌种，再将固体菌种转接到一级液体菌种瓶内，一级液体菌种瓶内为斜面培养基，在斜面培养基中加入木块，木块浮于斜面培养基上，固体菌种在18‑28℃培养10‑24天，待木块上长满菌丝后，将菌丝取下放入水培养基中，菌丝在18‑28℃水培养基中摇床培养2‑4天，经检查无竞争性菌类感染，静置培养长到菌丝断裂，菌丝断裂后继续在水培养基中静置培养2‑4天，即培养出驯化后的香菇液体发酵菌种。本发明提供一种环节少，操作简单，无竞争性菌类，周期短成功率高。

Description

一种液体发酵菌种驯化方法
技术领域
本发明涉及食用菌技术领域，具体涉及一种香菇液体发酵菌种驯化方法。
背景技术
液体菌种应用于食用菌的生产，对于食用菌行业从传统生产上的繁琐复杂、周期长、成本高、凭经验、拼劳力、手工作坊式向自动化、标准化、规模化升级具有重大意义。
液体菌种接入菌包时，又具有流动性、易分散、萌发快、发菌点多等特点，较好的解决了接种过程中萌发慢、易污染的问题，菌种可进行工业化生产。常规制备液体菌种多采用“母种—一级摇瓶种—二级摇瓶种—培养（发酵）器”的生产工艺，环节多，操作复杂，周期长。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种环节少，操作简单，无竞争性菌类，周期短成功率高的香菇液体发酵菌种驯化方法。
本发明的技术方案：
一种香菇液体发酵菌种驯化方法，将香菇固体的试管菌种转接到一级液体菌种瓶内，一级液体菌种瓶内为斜面培养基，在斜面培养基中加入木块，木块浮于斜面培养基上，固体菌种在斜面培养基中培养，待木块上长满菌丝后，将菌丝取下放入水培养基中，菌丝在18-28℃水培养基中摇床培养2-4天，经检查无竞争性菌类感染，静置培养长到菌丝断裂，菌丝断裂后继续在水培养基中静置培养2-4天，即培养出驯化后的香菇液体发酵菌种。
优选的，所述斜面培养基为以下重量份的组成：马铃薯150-300份，麸皮10-30份，玉米粉8-12份，葡萄糖15-25份，蛋白胨1-3份，磷酸二氢钾1-1.5份，硫酸镁0.5-1.5份，维生素B1 0.05-0.8份，琼脂18-20份，水1000份。
优选的，水培养基为以下重量份的组成：马铃薯100-105份，白糖20-22份，麸皮40-45份，磷酸二氢钾1-1.3份，硫酸镁0.5-0.8份，蛋白胨2-3份，维生素B1 0.7-0.8份，水1000份。
优选的，所述木块和斜面培养基的体积比为1:（15-20），所述木块的大小为0.5-1cm3。
优选的，固体菌种在斜面培养基中培养，培养温度为18-28℃，培养时间为10-24天。
优选的，菌丝和水培养基的体积比为1:（200-300）。
本发明所述马铃薯为马铃薯块，所述马铃薯块的大小为0.5-1cm3。
本发明的有益效果：
本发明提供一种环节少，操作简单，无竞争性菌类，周期短成功率高。斜面菌种接种并采用摇瓶进行水中二次培养相对于常规的液体发酵菌种的驯化方法的成活率高：常规30-60%，本方法99.9%以上；常规的液体发酵菌种的驯化方法摇瓶培养周期为15天，本方法6天，大大缩短了培养周期。
本发明的液体菌种接种于发酵罐的培养周期常规10天，本发明6天；液体菌种接种于菌包后的成活率常规80-90%，本发明99%以上。
（1）成本低：制种成本是固体的三十分之一；
（2）时间短：制种时间一个月；
（3）萌芽快：接种后6小时萌发，24小时菌丝布满接种面；
（4）生长快：栽培养菌时间比固体缩短1/2；
（5）纯度高：菌种纯度高、活力强；
（6）污染少：菌种萌发速度快，竞争性菌类几乎没有侵染机会；
（7）菌龄短：菌包上下菌龄一致，出菇齐、产量高。
具体实施方式
实施例1
一种香菇液体发酵菌种驯化方法，将香菇实体进行组织分离培养，生产出固体菌种，再将固体菌种转接到一级液体菌种瓶内，一级液体菌种瓶内为斜面培养基，在斜面培养基中加入木块，木块浮于斜面培养基上，固体菌种在斜面培养基中培养，待木块上长满菌丝后，将菌丝取下放入水培养基中，菌丝在18-28℃水培养基中摇床培养2-4天，经检查无竞争性菌类感染，静置培养长到菌丝断裂，菌丝断裂后继续在水培养基中静置培养2-4天，即培养出驯化后的香菇液体发酵菌种。
所述斜面培养基为以下重量份的组成：马铃薯150-300份，麸皮10-30份，玉米粉8-12份，葡萄糖15-25份，蛋白胨1-3份，磷酸二氢钾1-1.5份，硫酸镁0.5-1.5份，维生素B10.05-0.8份，琼脂18-20份，水1000份。
水培养基为以下重量份的组成：马铃薯100-105份，白糖20-22份，麸皮40-45份，磷酸二氢钾1-1.3份，硫酸镁0.5-0.8份，蛋白胨2-3份，维生素B1 0.7-0.8份，水1000份。
所述木块和斜面培养基的体积比为1:15，所述木块的大小为0.5cm3。
优选的，固体菌种在斜面培养基中培养，培养温度为18℃，培养时间为10天。
菌丝和水培养基的体积比为1:200。
实施例2
一种香菇液体发酵菌种驯化方法，将香菇实体进行组织分离培养，生产出固体菌种，再将固体菌种转接到一级液体菌种瓶内，一级液体菌种瓶内为斜面培养基，在斜面培养基中加入木块，木块浮于斜面培养基上，固体菌种在斜面培养基中培养，待木块上长满菌丝后，将菌丝取下放入水培养基中，菌丝在18-28℃水培养基中摇床培养2-4天，经检查无竞争性菌类感染，静置培养长到菌丝断裂，菌丝断裂后继续在水培养基中静置培养2-4天，即培养出驯化后的香菇液体发酵菌种。
所述斜面培养基为以下重量份的组成：马铃薯150-300份，麸皮10-30份，玉米粉8-12份，葡萄糖15-25份，蛋白胨1-3份，磷酸二氢钾1-1.5份，硫酸镁0.5-1.5份，维生素B10.05-0.8份，琼脂18-20份，水1000份。
水培养基为以下重量份的组成：马铃薯100-105份，白糖20-22份，麸皮40-45份，磷酸二氢钾1-1.3份，硫酸镁0.5-0.8份，蛋白胨2-3份，维生素B1 0.7-0.8份，水1000份。
所述木块和斜面培养基的体积比为1: 20，所述木块的大小为1cm3。
优选的，固体菌种在斜面培养基中培养，培养温度为28℃，培养时间为24天。
菌丝和水培养基的体积比为1: 300。
实施例3
一种香菇液体发酵菌种驯化方法，将香菇实体进行组织分离培养，生产出固体菌种，再将固体菌种转接到一级液体菌种瓶内，一级液体菌种瓶内为斜面培养基，在斜面培养基中加入木块，木块浮于斜面培养基上，固体菌种在斜面培养基中培养，待木块上长满菌丝后，将菌丝取下放入水培养基中，菌丝在18-28℃水培养基中摇床培养2-4天，经检查无竞争性菌类感染，静置培养长到菌丝断裂，菌丝断裂后继续在水培养基中静置培养2-4天，即培养出驯化后的香菇液体发酵菌种。
所述斜面培养基为以下重量份的组成：马铃薯150-300份，麸皮10-30份，玉米粉8-12份，葡萄糖15-25份，蛋白胨1-3份，磷酸二氢钾1-1.5份，硫酸镁0.5-1.5份，维生素B10.05-0.8份，琼脂18-20份，水1000份。
水培养基为以下重量份的组成：马铃薯100-105份，白糖20-22份，麸皮40-45份，磷酸二氢钾1-1.3份，硫酸镁0.5-0.8份，蛋白胨2-3份，维生素B1 0.7-0.8份，水1000份。
所述木块和斜面培养基的体积比为1:18，所述木块的大小为0.7cm3。
固体菌种在斜面培养基中培养，培养温度为20℃，培养时间为15天。
菌丝和水培养基的体积比为1:250。
本发明提供一种环节少，操作简单，无竞争性菌类，周期短成功率高。斜面菌种接种并采用摇瓶进行水中二次培养相对于常规的液体发酵菌种的驯化方法的成活率高：常规30-60%，本方法99.9%以上；常规的液体发酵菌种的驯化方法摇瓶培养周期为15天，本方法6天，大大缩短了培养周期。
本发明的液体菌种接种于发酵罐的培养周期常规10天，本发明6天；液体菌种接种于菌包后的成活率常规80-90%，本发明99%以上。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (6)

1.一种香菇液体发酵菌种驯化方法，其特征在于，将香菇固体菌种转接到一级液体菌种瓶内，一级液体菌种瓶内为斜面培养基，在斜面培养基中加入木块，木块浮于斜面培养基上，固体菌种在18-28℃培养10-24天，待木块上长满菌丝后，将菌丝取下放入水培养基中，菌丝在18-28℃水培养基中摇床培养2-4天，经检查无竞争性菌类感染，静置培养长到菌丝断裂，菌丝断裂后继续在水培养基中静置培养2-4天，即培养出驯化后的香菇液体发酵菌种。
2.根据权利要求1所述的一种液体发酵菌种驯化方法，其特征在于，所述斜面培养基为以下重量份的组成：马铃薯150-300份，麸皮10-30份，玉米粉8-12份，葡萄糖15-25份，蛋白胨1-3份，磷酸二氢钾1-1.5份，硫酸镁0.5-1.5份，维生素B1 0.05-0.8份，琼脂18-20份，水1000份。
3.根据权利要求1所述的一种液体发酵菌种驯化方法，其特征在于，水培养基为以下重量份的组成：马铃薯100-105份，白糖20-22份，麸皮40-45份，磷酸二氢钾1-1.3份，硫酸镁0.5-0.8份，蛋白胨2-3份，维生素B1 0.7-0.8份，水1000份。
4.根据权利要求1所述的一种液体发酵菌种驯化方法，其特征在于，所述木块和斜面培养基的体积比为1:（15-20），所述木块的大小为0.5-1cm3。
5.根据权利要求1所述的一种液体发酵菌种驯化方法，其特征在于，固体菌种在斜面培养基中培养，培养温度为18-28℃，培养时间为10-24天。
6.根据权利要求1所说的一种液体发酵菌种驯方法，其特征在于，菌丝和水培养基的体积比为1:（200-300）。
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