CN107635396A - 杀昆虫蛋白及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

提供了用于控制有害生物的组合物和方法。这些方法涉及用编码杀昆虫蛋白的核酸序列转化生物体。具体地，这些核酸序列可用于制备具有杀昆虫活性的植物和微生物。因此，提供了经转化的细菌、植物、植物细胞、植物组织以及种子。组合物是细菌物种的杀昆虫核酸和蛋白。这些序列在随后转化到包括植物在内的感兴趣的生物体中的构建表达载体中具有用途，充当用于分离其他同源(或部分同源的)基因的探针。这些杀有害生物蛋白可用于控制、抑制生长或杀灭鳞翅目、鞘翅目、双翅目、真菌、半翅目和线虫有害生物群体并且可用于生产具有杀昆虫活性的组合物。

Description

杀昆虫蛋白及其使用方法
以电子方式提交的序列表的引用
文件名为“5914-PCT_seq_list.txt”的序列表创建于2015年11月19日，大小为542千字节，以计算机可读形式，同时与本说明书一起提交。该序列表是本说明书的一部分并且以其全文通过引用结合在此。
政府支持
根据协议号LB09005376，政府享有本发明的一定的权利。
发明领域
本披露涉及分子生物学领域。提供了编码杀有害生物蛋白的新颖基因。这些杀有害生物蛋白和编码它们的核酸序列可用于制备杀有害生物配制品并且可用于生产转基因抗有害生物植物。
发明背景
使用微生物剂(如真菌、细菌或其他昆虫物种)对具有农业意义的昆虫有害生物进行生物防治，为合成型化学杀有害生物剂提供了环境友好且有商业吸引力的替代方案。一般来说，使用生物杀有害生物剂造成污染和环境危害的风险较低，并且生物杀有害生物剂提供比传统广谱化学杀昆虫剂所特有的靶特异性更强。此外，生物杀有害生物剂往往生产成本较低，并且因此能提高各种作物的经济产量。
已知芽孢杆菌属微生物的某些物种对一系列昆虫有害生物具有杀有害生物活性，该一系列昆虫有害生物包括鳞翅目、双翅目、鞘翅目、半翅目等。苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)和日本金龟子芽孢杆菌(Bacillus popilliae)是迄今发现的最成功的生物防治剂之一。昆虫致病性还归因于幼虫芽孢杆菌(B.larvae)、缓病芽孢杆菌(B.lentimorbus)、球形芽孢杆菌(B.sphaericus)和蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的菌株。微生物杀昆虫剂，特别是从芽孢杆菌属菌株获得的那些微生物杀昆虫剂，在农业上作为有害生物化学防治的替代方案起着重要作用。
通过将作物植物进行遗传工程改造以生产来自芽孢杆菌属的杀有害生物蛋白，已经开发出昆虫抗性增强的作物植物。例如，已经对玉米和棉花植物进行遗传工程改造以产生从Bt株分离的杀有害生物蛋白。现在，这些遗传工程化作物广泛应用于农业中，并且为农民提供了取代传统昆虫防治方法的环境友好型替代方案。虽然它们已被证明在商业上非常成功，但是这些遗传工程化抗昆虫作物植物仅针对窄范围的经济上重要的昆虫有害生物提供抗性。在某些情况下，昆虫可以对不同杀昆虫化合物产生抗性，这就导致需要鉴别用于有害生物防治的替代性生物防治剂。
因此，仍然需要对昆虫有害生物具有不同范围的杀昆虫活性的新型杀有害生物蛋白，例如，针对鳞翅目和鞘翅目的各种昆虫具有活性的杀昆虫蛋白，这些昆虫包括但不限于对现有杀昆虫剂已产生抗性的昆虫有害生物。
概述
提供了用于对细菌、植物、植物细胞、组织以及种子赋予杀有害生物活性的组合物和方法。组合物包含杀有害生物和杀昆虫多肽的核酸分子编码序列、包含那些核酸分子的载体、以及包含这些载体的宿主细胞。组合物还包括这些杀有害生物多肽序列以及针对那些多肽的抗体。这些核酸序列可以在DNA构建体或表达盒中使用，以用于在多种生物体(包括微生物和植物)中进行转化和表达。这些核苷酸或氨基酸序列可以是合成序列，这些合成序列已经被设计用于在生物体中表达，该生物体包括但不限于：微生物或植物。组合物还包含转化的细菌、植物、植物细胞、组织、以及种子。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-45-1(PIP-45-1)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-45-1多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：1的PIP-45-1多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：1的分离或重组的PIP-45-1多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-45-2(PIP-45-2)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-45-2多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：2的PIP-45-2多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：2的分离或重组的PIP-45-2多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-64-1(PIP-64-1)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-64-1多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：53的PIP-64-1多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：53的分离或重组的PIP-64-1多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-64-2(PIP-64-2)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-64-2多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：54的PIP-64-2多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：54的分离或重组的PIP-64-2多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-74-1(PIP-74-1)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-74-1多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：73的PIP-74-1多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：73的分离或重组的PIP-74-1多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-74-2(PIP-74-2)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-74-2多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：74的PIP-74-2多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：74的分离或重组的PIP-74-2多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-75(PIP-75)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-75多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：79的PIP-75多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：79的分离或重组的PIP-75多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
特别地，提供了编码假单孢菌属杀昆虫蛋白-77(PIP-77)多肽的分离的或重组的核酸分子，这些多肽包括氨基酸取代、缺失、插入、及其片段、及其组合。此外，涵盖了与这些PIP-77多肽相应的氨基酸序列。提供了能够编码SEQ ID NO：88的PIP-77多肽的分离或重组的核酸分子以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。还涵盖了与实施例的核酸序列互补或与实施例的序列杂交的核酸序列。还提供了SEQ ID NO：88的分离或重组的PIP-77多肽以及氨基酸取代、缺失、插入、其片段及其组合。
提供了用于产生杀昆虫多肽，以及使用这些多肽来控制或杀灭鳞翅目、鞘翅目、线虫、真菌、和/或双翅目有害生物的方法。实施例的转基因植物表达在此披露的一种或多种杀有害生物序列。在不同的实施例中，该转基因植物进一步包含一种或多种另外的昆虫抗性基因，例如，用于控制鞘翅目、鳞翅目、半翅目或线虫有害生物的一种或多种另外的基因。本领域的技术人员将会理解的是，该转基因植物可以包含赋予感兴趣的农艺性状的任何基因。
还包括用于检测在样品中的实施例的这些核酸和多肽的方法。提供了用于在样品中检测本披露的杀昆虫多肽的存在或检测编码本披露的杀昆虫多肽的核苷酸序列的存在的试剂盒。该试剂盒可以与执行检测预期试剂的方法所必需的所有试剂和对照样品，以及使用说明书一起提供。
实施例的这些组合物和方法可用于产生具有增强的有害生物抗性或耐受性的生物体。这些生物体以及包含这些生物体的组合物对于农业目的是所希望的。实施例的组合物还可用于产生改变或改进的具有杀有害生物活性的蛋白质，或可用于在产物或生物体中检测本披露的杀昆虫多肽或编码其的核酸的存在。
附图简要说明
图1a-1m示出了以下各项的氨基酸序列比对：PIP-45Aa-1(SEQ ID NO：1)、PIP-45Ab-1(SEQ ID NO：3)、PIP-45Ac-1(SEQ ID NO：5)、PIP-45Ad-1(SEQ ID NO：7)、PIP-45Ae-1(SEQ ID NO：9)、PIP-45Af-1(SEQ ID NO：11)、PIP-45Ba-1(SEQ ID NO：13)、PIP-45Bb-1(SEQ ID NO：15)、PIP-45Bc-1(SEQ ID NO：17)、PIP-45Bd-1(SEQ ID NO：19)、PIP-45Be-1(SEQ ID NO：21)、PIP-45Bf-1(SEQ ID NO：23)、PIP-45Bg-1(SEQ ID NO：25)、PIP-45Bh-1(SEQ ID NO：27)、PIP-45Bi-1(SEQ ID NO：29)、PIP-45Bj-1(SEQ ID NO：31)、PIP-45Bk-1(SEQ ID NO：33)、PIP-45Bl-1(SEQ ID NO：232)、PIP-45Bm-1(SEQ ID NO：234)、PIP-45Ca-1(SEQ ID NO：35)、PIP-45Cb-1(SEQ ID NO：37)、PIP-45Cc-1(SEQ ID NO：39)、PIP-45Cd-1(SEQ ID NO：41)、PIP-45Ce-1(SEQ ID NO：43)、PIP-45Cf-1(SEQ ID NO：236)、PIP-45Da-1(SEQ ID NO：45)、PIP-45Db-1(SEQ ID NO：47)、PIP-45Ea-1(SEQ ID NO：49)、和PIP-45Ga-1(SEQ ID NO：51)。PIP-45-1多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
图2a-2l示出了以下各项的氨基酸序列的比对：PIP-45Aa-2(SEQ ID NO：2)、PIP-45Ab-2(SEQ ID NO：4)、PIP-45Ac-2(SEQ ID NO：6)、PIP-45Ad-2(SEQ ID NO：8)、PIP-45Ae-2(SEQ ID NO：10)、PIP-45Af-2(SEQ ID NO：12)、PIP-45Ba-2(SEQ ID NO：14)、PIP-45Bb-2(SEQ ID NO：16)、PIP-45Bc-2(SEQ ID NO：18)、PIP-45Bd-2(SEQ ID NO：20)、PIP-45Be-2(SEQ ID NO：22)、PIP-45Bf-2(SEQ ID NO：24)、PIP-45Bg-2(SEQ ID NO：26)、PIP-45Bh-2(SEQ ID NO：28)、PIP-45Bi-2(SEQ ID NO：30)、PIP-45Bj-2(SEQ ID NO：32)、PIP-45Bk-2(SEQ ID NO：34)、PIP-45Bl-2(SEQ ID NO：233)、PIP-45Bm-2(SEQ ID NO：235)、PIP-45Ca-2(SEQ ID NO：36)、PIP-45Cb-2(SEQ ID NO：38)、PIP-45Cc-2(SEQ ID NO：40)、PIP-45Cd-2(SEQ ID NO：42)、PIP-45Ce-2(SEQ ID NO：44)、PIP-45Cf-2(SEQ ID NO：237)、PIP-45Da-2(SEQ ID NO：46)、PIP-45Db-2(SEQ ID NO：48)、PIP-45Ea-2(SEQ ID NO：50)、和PIP-45Ga-2(SEQ ID NO：52)。PIP-45-2多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
图3a-3b示出了以下各项的氨基酸序列的比对：PIP-64Aa-1(SEQ ID NO：53)、PIP-64Ba-1(SEQ ID NO：238)、PIP-64Ca-1(SEQ ID NO：56)、PIP-64Ea-1(SEQ ID NO：58)、PIP-64Eb-1(SEQ ID NO：60)、PIP-64Ec-1(SEQ ID NO：62)、PIP-64Ga-1(SEQ ID NO：64)、PIP-64Ha-1(SEQ ID NO：65)、PIP-64Hb-1(SEQ ID NO：67)、PIP-64Hc-1(SEQ ID NO：69)、和PIP-64Hd-1(SEQ ID NO：71)。PIP-64-1多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
图4a-4b示出了以下各项的氨基酸序列的比对：PIP-64Aa-2(SEQ ID NO：54)、PIP-64Ab-2(SEQ ID NO：55)、PIP-64Ba-2(SEQ ID NO：239)、PIP-64Ca-2(SEQ ID NO：57)、PIP-64Ea-2(SEQ ID NO：59)、PIP-64Eb-2(SEQ ID NO：61)、PIP-64Ec-2(SEQ ID NO：63)、PIP-64Ha-2(SEQ ID NO：66)、PIP-64Hb-2(SEQ ID NO：68)、PIP-64Hc-2(SEQ ID NO：70)、和PIP-64Hd-2(SEQ ID NO：72)。PIP-64-2多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
图5a-5b示出了以下各项的氨基酸序列的比对：PIP-74Aa-1(SEQ ID NO：73)、PIP-74Ab-1(SEQ ID NO：75)、和PIP-74Ca-1(SEQ ID NO：77)。PIP-74-1多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
图6示出了以下各项的氨基酸序列的比对：PIP-74Aa-2(SEQ ID NO：74)、PIP-74Ab-2(SEQ ID NO：76)、和PIP-74Ca-2(SEQ ID NO：78)。PIP-74-2多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
图7示出了以下各项的氨基酸序列的比对：PIP-75Aa(SEQ ID NO：79)、PIP-75Ba(SEQ ID NO：80)、PIP-75Da(SEQ ID NO：81)、PIP-75Ea(SEQ ID NO：82)、PIP-75Ga(SEQ IDNO：83)、PIP-75Gb(SEQ ID NO：84)、PIP-75Gc(SEQ ID NO：85)、PIP-75Gd(SEQ ID NO：86)、PIP-75Ge(SEQ ID NO：87)。PIP-75多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
图8a-8b示出了以下各项的氨基酸序列的比对：PIP-77Aa(SEQ ID NO：88)、PIP-77Ab(SEQ ID NO：89)、PIP-77Ac(SEQ ID NO：90)、PIP-77Ad(SEQ ID NO：91)、PIP-77Ae(SEQID NO：92)、PIP-77Af(SEQ ID NO：240)、PIP-77Ba(SEQ ID NO：93)、PIP-77Bb(SEQ ID NO：94)、PIP-77Bc(SEQ ID NO：95)、PIP-77Bd(SEQ ID NO：96)、PIP-77Be(SEQ ID NO：97)、PIP-77Bf(SEQ ID NO：98)、PIP-77Bg(SEQ ID NO：99)、PIP-77Bh(SEQ ID NO：241)、PIP-77Bi(SEQ ID NO：242)、PIP-77Ca(SEQ ID NO：100)、PIP-77Ea(SEQ ID NO：101)、PIP-77Eb(SEQID NO：102)、PIP-77Ec(SEQ ID NO：103)、PIP-77Ed(SEQ ID NO：104)、PIP-77Ee(SEQ IDNO：105)、PIP-77Ef(SEQ ID NO：106)、PIP-77Eg(SEQ ID NO：107)、PIP-77Eh(SEQ ID NO：243)、PIP-77Ei(SEQ ID NO：244)、和PIP-77Ej(SEQ ID NO：245)。PIP-77多肽同源物之间的氨基酸多样性用阴影表示。
发明详细说明
应理解，本披露不局限于所描述的特定方法、方案、细胞系、属、以及试剂，因此可以变化。还应当理解的是在此使用的术语是仅为了描述具体实施例的目的，并且不旨在限制本披露的范围。
如在此使用的，单数形式“一种(a)”、“一种(an)”以及“该”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。因此，例如，提及“细胞”包括多个这样的细胞，并且提及“蛋白质”包括本领域技术人员已知的一种或多种蛋白质及其等效物等。在此所使用的所有技术和科学术语具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义，除非另有明确说明。
本披露涉及用于控制有害生物的组合物和方法。这些方法涉及用编码本披露的杀昆虫多肽的核酸序列转化生物体。特别地，实施例的核酸序列可用于制备具有杀有害生物活性的植物和微生物。因此，提供了转化的细菌、植物、植物细胞、植物组织以及种子。组合物是细菌物种的杀有害生物核酸和蛋白。这些核酸序列可用于构建表达载体，用于随后转化到感兴趣的生物体中，作为用于分离其他同源(或部分同源)基因的探针，并且通过本领域已知的方法(如定位诱变、结构域交换或DNA改组)用于生产改变的杀昆虫多肽。本披露的杀昆虫多肽可用于控制或杀灭鳞翅目、鞘翅目、双翅目、真菌、半翅目和线虫有害生物群体并且可用于生产具有杀有害生物活性的组合物。感兴趣的昆虫有害生物包括但不限于：鳞翅目物种，这些鳞翅目物种包括但不限于：小菜蛾，例如，玉米穗虫(Helicoverpa zeaBoddie)；大豆夜蛾，例如，大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens Walker)；和黎豆夜蛾(velvet bean caterpillar)，例如，梨豆夜蛾(Anticarsia gemmatalis Hübner)和鞘翅目物种，这些鞘翅目物种包括但不限于西方玉米根虫(玉米根萤叶甲(Diabroticavirgifera))-WCRW、南方玉米根虫(斑点黄瓜甲虫(Diabrotica undecimpunctatahowardi))-SCRW和北方玉米根虫(北方玉米根虫(Diabrotica barberi))-NCRW。
“杀有害生物毒素”或“杀有害生物蛋白”在此用于是指毒素或与这种蛋白质具有同源性的蛋白质，该毒素具有针对以下一种或多种有害生物的毒性活性，这些有害生物包括但不局限于：鳞翅目、双翅目、半翅目以及鞘翅目或线虫门的成员。已经从生物体中分离出杀有害生物蛋白，这些生物体包括例如，芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)、假单孢菌属物种(Pseudomonas sp.)、发光杆菌属物种(Photorhabdus sp.)、致病杆菌属物种(Xenorhabdus sp.)、双酶梭菌(Clostridium bifermentans)以及鲍比氏类芽孢杆菌(Paenibacillus popilliae)。杀有害生物蛋白包括但不限于：来自以下各项的杀昆虫蛋白：假单孢菌属物种，如PSEEN3174(Monalysin；(2011)PLoS Pathogens 7：1-13[Monalysin；(2011)，PLoS病原体，7：1-13])；假单胞菌(Pseudomonas protegens)菌株CHA0和Pf-5(之前为荧光假单孢菌(fluorescens))(Pechy-Tarr，(2008)EnvironmentalMicrobiology 10：2368-2386；GenBank Accession No.EU400157[Pechy-Tarr，(2008)，环境微生物学，10：2368-2386；GenBank登录号EU400157])；台湾假单孢菌(PseudomonasTaiwanensis)(Liu，et al.，(2010)J.Agric.Food Chem.，58：12343-12349[Liu等人，(2010)，农业与食品化学杂志，58：12343-12349])和假产碱假单孢菌(Pseudomonaspsendoalcligenes)(Zhang，et al.，(2009)Annals of Microbiology 59：45-50 and Li，et al.，(2007)Plant Cell Tiss.Organ Cult.89：159-168[Zhang等人，(2009)，微生物学年鉴，59：45-50和Li等人，(2007)，植物细胞、组织和器官培养，89：159-168])；来自发光杆菌属物种(Photorhabdus sp.)和致病杆菌属物种(Xenorhabdus sp.)的杀昆虫蛋白(Hinchliffe，et al.，(2010)The Open Toxicology Journal，3：101-118and Morgan，etal.，(2001)Appliedand Envir.Micro.67：2062-2069[Hinchliffe等人，(2010)，开放的毒理学杂志，3：101-118和Morgan等人，(2001)，应用与环境微生物学，67：2062-2069])；美国专利号6,048,838和美国专利号6,379,946；美国专利号US 2014-0007292 A1的PIP-1多肽；美国专利公开号US 2014-0033361的AfIP-1A和/或AfIP-1B多肽；美国序列号13/839702的PHI-4多肽；PCT序列号PCT/US 14/51063的PIP-47多肽；美国专利公开US 20140274885或PCT专利公开WO 2014/150914的PHI-4多肽；PCT序列号PCT/US 14/55128的PIP-72多肽；美国序列号61/863761和61/863763的杀昆虫蛋白；以及δ-内毒素，包括但不限于：Cry1、Cry2、Cry3、Cry4、Cry5、Cry6、Cry7、Cry8、Cry9、Cry10、Cry11、Cry12、Cry13、Cry14、Cry15、Cry16、Cry17、Cry18、Cry19、Cry20、Cry21、Cry22、Cry23、Cry24、Cry25、Cry26、Cry27、Cry28、Cry29、Cry30、Cry31、Cry32、Cry33、Cry34、Cry35、Cry36、Cry37、Cry38、Cry39、Cry40、Cry41、Cry42、Cry43、Cry44、Cry45、Cry46、Cry47、Cry49、Cry51、Cry52、Cry53、Cry54、Cry55、Cry56、Cry57、Cry58、Cry59、Cry60、Cry61、Cry62、Cry63、Cry64、Cry65、Cry66、Cry67、Cry68、Cry69、Cry70、Cry71和Cry72类的δ-内毒素基因和苏云金芽孢杆菌细胞溶解性cyt1和cyt2基因。苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白的这些类别的成员包括但不限于Cry1Aa1(登录号AAA22353)；Cry1Aa2(登录号AAA22552)；Cry1Aa3(登录号BAA00257)；Cry1Aa4(登录号CAA31886)；Cry1Aa5(登录号BAA04468)；Cry1Aa6(登录号AAA86265)；Cry1Aa7(登录号AAD46139)；Cry1Aa8(登录号I26149)；Cry1Aa9(登录号BAA77213)；Cry1Aa10(登录号AAD55382)；Cry1Aa11(登录号CAA70856)；Cry1Aa12(登录号AAP80146)；Cry1Aa13(登录号AAM44305)；Cry1Aa14(登录号AAP40639)；Cry1Aa15(登录号AAY66993)；Cry1Aa16(登录号HQ439776)；Cry1Aa17(登录号HQ439788)；Cry1Aa18(登录号HQ439790)；Cry1Aa19(登录号HQ685121)；Cry1Aa20(登录号JF340156)；Cry1Aa21(登录号JN651496)；Cry1Aa22(登录号KC158223)；Cry1Ab1(登录号AAA22330)；Cry1Ab2(登录号AAA22613)；Cry1Ab3(登录号AAA22561)；Cry1Ab4(登录号BAA00071)；Cry1Ab5(登录号CAA28405)；Cry1Ab6(登录号AAA22420)；Cry1Ab7(登录号CAA31620)；Cry1Ab8(登录号AAA22551)；Cry1Ab9(登录号CAA38701)；Cry1Ab10(登录号A29125)；Cry1Ab11(登录号I12419)；Cry1Ab12(登录号AAC64003)；Cry1Ab13(登录号AAN76494)；Cry1Ab14(登录号AAG16877)；Cry1Ab15(登录号AAO13302)；Cry1Ab16(登录号AAK55546)；Cry1Ab17(登录号AAT46415)；Cry1Ab18(登录号AAQ88259)；Cry1Ab19(登录号AAW31761)；Cry1Ab20(登录号ABB72460)；Cry1Ab21(登录号ABS18384)；Cry1Ab22(登录号ABW87320)；Cry1Ab23(登录号HQ439777)；Cry1Ab24(登录号HQ439778)；Cry1Ab25(登录号HQ685122)；Cry1Ab26(登录号HQ847729)；Cry1Ab27(登录号JN135249)；Cry1Ab28(登录号JN135250)；Cry1Ab29(登录号JN135251)；Cry1Ab30(登录号JN135252)；Cry1Ab31(登录号JN135253)；Cry1Ab32(登录号JN135254)；Cry1Ab33(登录号AAS93798)；Cry1Ab34(登录号KC156668)；Cry1Ab样(登录号AAK14336)；Cry1Ab样(登录号AAK14337)；Cry1Ab样(登录号AAK14338)；Cry1Ab样(登录号ABG88858)；Cry1Ac1(登录号AAA22331)；Cry1Ac2(登录号AAA22338)；Cry1Ac3(登录号CAA38098)；Cry1Ac4(登录号AAA73077)；Cry1Ac5(登录号AAA22339)；Cry1Ac6(登录号AAA86266)；Cry1Ac7(登录号AAB46989)；Cry1Ac8(登录号AAC44841)；Cry1Ac9(登录号AAB49768)；Cry1Ac10(登录号CAA05505)；Cry1Ac11(登录号CAA10270)；Cry1Ac12(登录号I12418)；Cry1Ac13(登录号AAD38701)；Cry1Ac14(登录号AAQ06607)；Cry1Ac15(登录号AAN07788)；Cry1Ac16(登录号AAU87037)；Cry1Ac17(登录号AAX18704)；Cry1Ac18(登录号AAY88347)；Cry1Ac19(登录号ABD37053)；Cry1Ac20(登录号ABB89046)；Cry1Ac21(登录号AAY66992)；Cry1Ac22(登录号ABZ01836)；Cry1Ac23(登录号CAQ30431)；Cry1Ac24(登录号ABL01535)；Cry1Ac25(登录号FJ513324)；Cry1Ac26(登录号FJ617446)；Cry1Ac27(登录号FJ617447)；Cry1Ac28(登录号ACM90319)；Cry1Ac29(登录号DQ438941)；Cry1Ac30(登录号GQ227507)；Cry1Ac31(登录号GU446674)；Cry1Ac32(登录号HM061081)；Cry1Ac33(登录号GQ866913)；Cry1Ac34(登录号HQ230364)；Cry1Ac35(登录号JF340157)；Cry1Ac36(登录号JN387137)；Cry1Ac37(登录号JQ317685)；Cry1Ad1(登录号AAA22340)；Cry1Ad2(登录号CAA01880)；Cry1Ae1(登录号AAA22410)；Cry1Af1(登录号AAB82749)；Cry1Ag1(登录号AAD46137)；Cry1Ah1(登录号AAQ14326)；Cry1Ah2(登录号ABB76664)；Cry1Ah3(登录号HQ439779)；Cry1Ai1(登录号AAO39719)；Cry1Ai2(登录号HQ439780)；Cry1A样(登录号AAK14339)；Cry1Ba1(登录号CAA29898)；Cry1Ba2(登录号CAA65003)；Cry1Ba3(登录号AAK63251)；Cry1Ba4(登录号AAK51084)；Cry1Ba5(登录号ABO20894)；Cry1Ba6(登录号ABL60921)；Cry1Ba7(登录号HQ439781)；Cry1Bb1(登录号AAA22344)；Cry1Bb2(登录号HQ439782)；Cry1Bc1(登录号CAA86568)；Cry1Bd1(登录号AAD10292)；Cry1Bd2(登录号AAM93496)；Cry1Be1(登录号AAC32850)；Cry1Be2(登录号AAQ52387)；Cry1Be3(登录号ACV96720)；Cry1Be4(登录号HM070026)；Cry1Bf1(登录号CAC50778)；Cry1Bf2(登录号AAQ52380)；Cry1Bg1(登录号AAO39720)；Cry1Bh1(登录号HQ589331)；Cry1Bi1(登录号KC156700)；Cry1Ca1(登录号CAA30396)；Cry1Ca2(登录号CAA31951)；Cry1Ca3(登录号AAA22343)；Cry1Ca4(登录号CAA01886)；Cry1Ca5(登录号CAA65457)；Cry1Ca6[1](登录号AAF37224)；Cry1Ca7(登录号AAG50438)；Cry1Ca8(登录号AAM00264)；Cry1Ca9(登录号AAL79362)；Cry1Ca10(登录号AAN16462)；Cry1Ca11(登录号AAX53094)；Cry1Ca12(登录号HM070027)；Cry1Ca13(登录号HQ412621)；Cry1Ca14(登录号JN651493)；Cry1Cb1(登录号M97880)；Cry1Cb2(登录号AAG35409)；Cry1Cb3(登录号ACD50894)；Cry1Cb样(登录号AAX63901)；Cry1Da1(登录号CAA38099)；Cry1Da2(登录号I76415)；Cry1Da3(登录号HQ439784)；Cry1Db1(登录号CAA80234)；Cry1Db2(登录号AAK48937)；Cry1Dc1(登录号ABK35074)；Cry1Ea1(登录号CAA37933)；Cry1Ea2(登录号CAA39609)；Cry1Ea3(登录号AAA22345)；Cry1Ea4(登录号AAD04732)；Cry1Ea5(登录号A15535)；Cry1Ea6(登录号AAL50330)；Cry1Ea7(登录号AAW72936)；Cry1Ea8(登录号ABX11258)；Cry1Ea9(登录号HQ439785)；Cry1Ea10(登录号ADR00398)；Cry1Ea11(登录号JQ652456)；Cry1Eb1(登录号AAA22346)；Cry1Fa1(登录号AAA22348)；Cry1Fa2(登录号AAA22347)；Cry1Fa3(登录号HM070028)；Cry1Fa4(登录号HM439638)；Cry1Fb1(登录号CAA80235)；Cry1Fb2(登录号BAA25298)；Cry1Fb3(登录号AAF21767)；Cry1Fb4(登录号AAC10641)；Cry1Fb5(登录号AAO13295)；Cry1Fb6(登录号ACD50892)；Cry1Fb7(登录号ACD50893)；Cry1Ga1(登录号CAA80233)；Cry1Ga2(登录号CAA70506)；Cry1Gb1(登录号AAD10291)；Cry1Gb2(登录号AAO13756)；Cry1Gc1(登录号AAQ52381)；Cry1Ha1(登录号CAA80236)；Cry1Hb1(登录号AAA79694)；Cry1Hb2(登录号HQ439786)；Cry1H样(登录号AAF01213)；Cry1Ia1(登录号CAA44633)；Cry1Ia2(登录号AAA22354)；Cry1Ia3(登录号AAC36999)；Cry1Ia4(登录号AAB00958)；Cry1Ia5(登录号CAA70124)；Cry1Ia6(登录号AAC26910)；Cry1Ia7(登录号AAM73516)；Cry1Ia8(登录号AAK66742)；Cry1Ia9(登录号AAQ08616)；Cry1Ia10(登录号AAP86782)；Cry1Ia11(登录号CAC85964)；Cry1Ia12(登录号AAV53390)；Cry1Ia13(登录号ABF83202)；Cry1Ia14(登录号ACG63871)；Cry1Ia15(登录号FJ617445)；Cry1Ia16(登录号FJ617448)；Cry1Ia17(登录号GU989199)；Cry1Ia18(登录号ADK23801)；Cry1Ia19(登录号HQ439787)；Cry1Ia20(登录号JQ228426)；Cry1Ia21(登录号JQ228424)；Cry1Ia22(登录号JQ228427)；Cry1Ia23(登录号JQ228428)；Cry1Ia24(登录号JQ228429)；Cr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δ-内毒素的实例还包括但不限于：美国专利号5,880,275和7,858,849的Cry1A蛋白；美国专利号8,304,604、8,304,605和8,476,226的DIG-3或DIG-11毒素(cry蛋白(如Cry1A、Cry3A)的α螺旋1和/或α螺旋2变体的N末端缺失)；美国专利申请序列号10/525,318的Cry1B；美国专利号6,033,874的Cry1C；美国专利号5,188,960和6,218,188的Cry1F；美国专利号7,070,982、6,962,705和6,713,063的Cry1A/F嵌合体；美国专利号7,064,249的Cry2蛋白如Cry2Ab蛋白；Cry3A蛋白，包括但不限于：通过融合至少两种不同Cry蛋白的可变区和保守区的独特组合产生的工程化杂合杀昆虫蛋白(eHIP)(美国专利申请公开号2010/0017914)；Cry4蛋白；Cry5蛋白；Cry6蛋白；美国专利号7,329,736、7,449,552、7,803,943、7,476,781、7,105,332、7,378,499和7,462,760的Cry8蛋白；Cry9蛋白如Cry9A、Cry9B、Cry9C、Cry9D、Cry9E和Cry9F家族的成员；Naimov，et al.，(2008)Applied andEnvironmental Microbiology，74：7145-7151[Naimov等人，(2008)，应用与环境微生物学，74：7145-7151]的Cry15蛋白；美国专利号6,127,180、6,624,145和6,340,593的Cry22、Cry34Ab1蛋白；美国专利号6,248,535、6,326,351、6,399,330、6,949,626、7,385,107和7,504,229的CryET33和cryET34蛋白；美国专利公开号2006/0191034、2012/0278954，和PCT公开号WO 2012/139004的CryET33和CryET34同源物；美国专利号6,083,499、6,548,291和6,340,593的Cry35Ab1蛋白；Cry46蛋白、Cry51蛋白、Cry二元毒素；TIC901或相关毒素；美国专利申请公开号2008/0295207的TIC807；PCT US 2006/033867的ET29、ET37、TIC809、TIC810、TIC812、TIC127、TIC128；美国专利8,513,494的TIC853毒素，美国专利号8,236,757的AXMI-027、AXMI-036、和AXMI-038；美国专利号7,923,602的AXMI-031、AXMI-039、AXMI-040、AXMI-049；WO 2006/083891的AXMI-018、AXMI-020和AXMI-021；WO 2005/038032的AXMI-010；WO2005/021585的AXMI-003；美国专利申请公开号2004/0250311的AXMI-008；美国专利申请公开号2004/0216186的AXMI-006；美国专利申请公开号2004/0210965的AXMI-007；美国专利申请号2004/0210964的AXMI-009；美国专利申请公开号2004/0197917的AXMI-014；美国专利申请公开号2004/0197916的AXMI-004；WO 2006/119457的AXMI-028和AXMI-029；WO2004/074462的AXMI-007、AXMI-008、AXMI-0080rf2、AXMI-009、AXMI-014和AXMI-004；美国专利号8,084,416的AXMI-150；美国专利申请公开号2011/0023184的AXMI-205；美国专利申请公开号2011/0263488的AXMI-011、AXMI-012、AXMI-013、AXMI-015、AXMI-019、AXMI-044、AXMI-037、AXMI-043、AXMI-033、AXMI-034、AXMI-022、AXMI-023、AXMI-041、AXMI-063和AXMI-064；美国专利申请公开号2010/0197592的AXMI-R1和相关蛋白；WO 2011/103248的AXMI221Z、AXMI222z、AXMI223z、AXMI224z和AXMI225z；WO 2011/103247的AXMI218、AXMI219、AXMI220、AXMI226、AXMI227、AXMI228、AXMI229、AXMI230和AXMI231；美国专利号8,334,431的AXMI-115、AXMI-113、AXMI-005、AXMI-163和AXMI-184；美国专利申请公开号2010/0298211的AXMI-001、AXMI-002、AXMI-030、AXMI-035和AXMI-045；美国专利申请公开号2009/0144852的AXMI-066和AXMI-076；美国专利号8，318，900的AXMI128、AXMI130、AXMI131、AXMI133、AXMI140、AXMI141、AXMI142、AXMI143、AXMI144、AXMI146、AXMI148、AXMI149、AXMI152、AXMI153、AXMI154、AXMI155、AXMI156、AXMI157、AXMI158、AXMI162、AXMI165、AXMI166、AXMI167、AXMI168、AXMI169、AXMI170、AXMI171、AXMI172、AXMI173、AXMI174、AXMI175、AXMI176、AXMI177、AXMI178、AXMI179、AXMI180、AXMI181、AXMI182、AXMI185、AXMI186、AXMI187、AXMI188、AXMI189；美国专利申请公开号2010/0005543的AXMI079、AXMI080、AXMI081、AXMI082、AXMI091、AXMI092、AXMI096、AXMI097、AXMI098、AXMI099、AXMI100、AXMI101、AXMI102、AXMI103、AXMI104、AXMI107、AXMI108、AXMI109、AXMI110、AXMI111、AXMI112、AXMI114、AXMI116、AXMI117、AXMI118、AXMI119、AXMI120、AXMI121、AXMI122、AXMI123、AXMI124、AXMI1257、AXMI1268、AXMI127、AXMI129、AXMI164、AXMI151、AXMI161、AXMI183、AXMI132、AXMI138、AXMI137，具有美国专利号8,319,019的修饰的蛋白水解位点的Cry蛋白如Cry1A和Cry3A；美国专利申请公开号2011/0064710的来自苏芸金芽孢杆菌菌株VBTS 2528的Cry1Ac、Cry2Aa和Cry1Ca毒素蛋白。其他Cry蛋白是本领域技术人员熟知的(参见，Crickmore，et al.，“Bacillus thuringiensis toxinnomenclature”(2011)[Crickmore等人，“苏云金芽孢杆菌毒素命名法”(2011)]在lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/上，其可以使用“www”前缀在万维网上访问)。Cry蛋白的杀昆虫活性是本领域技术人员熟知的(综述参见，van Frannkenhuyzen，(2009)J.Invert.Path.101：1-16[van Frannkenhuyzen，(2009)，无脊椎动物病理学杂志，101：1-16])。使用Cry蛋白作为转基因植物性状是本领域技术人员熟知的，并且Cry转基因植物(包括但不限于表达以下各项的植物：Cry1Ac、Cry1Ac+Cry2Ab、Cry1Ab、Cry1A.105、Cry1F、Cry1Fa2、Cry1F+Cry1Ac、Cry2Ab、Cry3A、mCry3A、Cry3Bb1、Cry34Ab1、Cry35Ab1、Vip3A、mCry3A、Cry9c和CBI-Bt)已获得法规性审批(参见，Sanahuja，(2011)Plant BiotechJournal9：283-300and the CERA(2010)GM Crop Database Center for EnvironmentalRisk Assessment(CERA)，ILSI Research Foundation，Washington D.C.[Sanahuja，(2011)，植物生物技术杂志，9：283-300和CERA，(2010)，环境风险评估的转基因作物数据库中心(CERA)，ILSI研究基金会，华盛顿])。本领域技术人员熟知的多于一种杀有害生物蛋白也可以在植物如Vip3Ab和Cry1Fa(US 2012/0317682)；Cry1BE和Cry1F(US 2012/0311746)；Cry1CA和Cry1AB(US 2012/0311745)；Cry1F和CryCa(US 2012/0317681)；Cry1DA和Cry1BE(US 2012/0331590)；Cry1DA和Cry1Fa(US 2012/0331589)；Cry1AB和Cry1BE(US 2012/0324606)；Cry1Fa和Cry2Aa以及Cry1I和Cry1E(US 2012/0324605)；Cry34Ab/35Ab以及Cry6Aa(US 20130167269)；Cry34Ab/VCry35Ab和Cry3Aa(US 20130167268)；以及Cry3A和Cry1Ab或Vip3Aa(US20130116170)中表达。杀有害生物蛋白还包括杀昆虫脂肪酶，这些杀昆虫脂肪酶包括美国专利号7,491,869的脂质酰基水解酶，和胆固醇氧化酶，如来自链霉菌属(Streptomyces)(Purcell et al.(1993)Biochem Biophys Res Commun 15：1406-1413[Purcell等人，(1993)，生物化学与生物物理学研究通讯15：1406-1413])。杀有害生物蛋白还包括美国专利号5,877,012、6,107,2796,137,033、7,244,820、7,615,686、和8,237,020等的VIP(营养期杀昆虫蛋白)毒素。其他VIP蛋白质是本领域技术人员熟知的(参见，lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html，其可以使用“www”前缀在万维网上访问)。杀有害生物蛋白还包括可从如下生物体获得的毒素复合物(TC)蛋白质：致病杆菌、发光杆菌和类芽孢杆菌(参见，美国专利号7,491,698和8,084,418)。一些TC蛋白具有“独立”杀昆虫活性并且其他TC蛋白增强由相同给定生物体产生的独立毒素的活性。可以通过源自不同属的来源生物体的一种或多种TC蛋白“增效剂”来增强“独立”TC蛋白(例如来自发光杆菌属、致病杆菌属或类芽孢杆菌属)的毒性。有三种主要类型的TC蛋白。如在此所述，A类蛋白(“蛋白A”)是独立的毒素。B类蛋白(“蛋白B”)和C类蛋白(“蛋白C”)提高了A类蛋白的毒性。A类蛋白的实例是TcbA、TcdA、XptA1和XptA2。B类蛋白的实例是TcaC、TcdB、XptB1Xb和XptC1Wi。C类蛋白的实例是TccC、XptC1Xb和XptB1Wi。杀有害生物蛋白还包括蜘蛛、蛇和蝎毒蛋白。蜘蛛肽的实例包括但不限于莱科毒素-1肽及其突变体(美国专利号8,334,366)。
在一些实施例中，本披露的杀昆虫多肽包括从在此披露的全长核酸序列推导出的氨基酸序列和短于全长序列的氨基酸序列，这是由于使用替代的下游起始位点或由于产生具有杀有害生物活性的较短蛋白质的加工。加工可以在表达该蛋白的生物体内或在摄取蛋白后的有害生物中发生。
因此，在此提供了新颖的分离的或重组的核苷酸序列，这些序列赋予了杀有害生物活性。还提供了本披露的杀有害生物多肽的氨基酸序列。由这些杀昆虫多肽基因的翻译而产生的蛋白质允许细胞控制或杀灭摄取了该蛋白质的有害生物。
核酸分子、及其变体和片段
本披露的一方面涉及了分离的或重组的核酸分子，这些核酸分子包含编码本披露的杀昆虫多肽或其生物活性部分的核酸序列；连同足以用作杂交探针来鉴定编码了具有序列同源性的区域的蛋白质的核酸分子的核酸分子。如在此使用的，术语“核酸分子”是指DNA分子(例如，重组DNA、cDNA、基因组DNA、质粒DNA、线粒体DNA)和RNA分子(例如，mRNA)以及使用核苷酸类似物而产生的DNA或RNA的类似物。该核酸分子可以是单链的或双链的，但优选地是双链的DNA。
“分离的”核酸分子(或DNA)在此用于是指不再在其自然环境中的核酸序列(或DNA)，例如体外的。“重组”核酸分子(或DNA)在此用于是指在重组细菌或植物宿主细胞中的核酸序列(或DNA)。在一些实施例中，“分离的”或“重组的”核酸不含有天然地位于在衍生出该核酸的生物体的基因组DNA中的该核酸侧翼的序列(即，位于该核酸的5’和3’末端的序列)(优选蛋白质编码序列)。出于本披露的目的，“分离的”或“重组的”当用于指核酸分子时不包括分离的染色体。例如，在各种实施例中，编码杀昆虫多肽的重组核酸分子可以包含小于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核酸序列，这些核酸序天然地位于衍生出该核酸的细胞的基因组DNA中的核酸分子的侧翼。
在一些实施例中，编码本披露的杀昆虫多肽的分离核酸分子与天然或基因组核酸序列相比具有核酸序列的一个或多个变化。在一些实施例中，天然或基因组核酸序列的变化包括但不限于：由于遗传密码的简并性造成的核酸序列的变化；与天然或基因组序列相比，由于氨基酸取代、插入、缺失和/或添加造成的核酸序列的变化；一个或多个内含子的去除；一个或多个上游或下游调节区域的缺失；和与基因组核酸序列相关的5’和/或3’非翻译区域的缺失。在一些实施例中，编码杀昆虫多肽的核酸分子是非基因组序列。
本披露涵盖了编码PIP-45-1多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-45-1多肽的多种多核苷酸。编码PIP-45-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234和SEQ ID NO：236的PIP-45-1多肽的SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：134、SEQID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：220或SEQ ID NO：222的多核苷酸。编码PIP-45-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属、Thalassuspira、副球菌属或纤维弧菌属菌株。编码PIP-45-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌(Pseudomonas brenneri)、蒙氏假单孢菌(Pseudomonas monteilii)、盖氏假单孢菌(Pseudomonas gessardii)、变形假单孢菌(Pseudomonas plecoglossicida)、恶臭假单孢菌(Pseudomonas putida)、草假单孢菌(Pseudomonas poae)、平凡假单孢菌(Pseudomonas trivialis)、黎巴嫩假单孢菌(Pseudomonas libanensis)、荧光假单孢菌(Pseudomonas fluoreseens)和铁角蕨假单孢菌(Pseudomonas asplenii)。
在一些实施例中，编码PIP-45-1多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。如在此使用的，“非基因组核酸序列”或“非基因组核酸分子”或“非基因组多核苷酸”是指与天然或基因组核酸序列相比，具有核酸序列的一个或多个变化的核酸分子。在一些实施例中，天然或基因组核酸分子的变化包括但不限于：由于遗传密码的简并性造成的核酸序列的变化；用于在植物中表达的核酸序列的密码子优化；与天然或基因组序列相比，将至少一个氨基酸取代、插入、缺失和/或添加引入的核酸序列的变化；与基因组核酸序列相关的一个或多个内含子的去除；一个或多个异源内含子的插入；与基因组核酸序列相关的一个或多个上游或下游调节区域的去除；一个或多个异源上游或下游调节区域的插入；与基因组核酸序列相关的5’和/或3’非翻译区域的缺失；异源5’和/或3’非翻译区域的插入；和聚腺苷酸化位点的修饰。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ IDNO：236的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。如在此使用的，术语“约”，当与序列同一性一起使用时，意指±0.5％。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-1多肽的全长序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ IDNO：236相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：1相比具有至少99.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：17相比具有至少99.4％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：19相比具有至少99.6％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：21相比具有至少87％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：23相比具有至少88％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：27相比具有至少99.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：29相比具有至少99.8％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：31相比具有至少92.3％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：33相比具有至少91.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：35相比具有至少95.4％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：39相比具有至少93％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：43相比具有至少97.5％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：45相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：234相比具有至少94％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：236相比具有至少96％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽。
本披露涵盖了编码PIP-45-2多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-45-2多肽的多种多核苷酸。编码PIP-45-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235和SEQ ID NO：237的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：135、SEQID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：221或SEQ ID NO：223的多核苷酸。编码PIP-45-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属、Thalassuspira、副球菌属或纤维弧菌属菌株。编码PIP-45-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌、蒙氏假单孢菌、盖氏假单孢菌、变形假单孢菌、恶臭假单孢菌、草假单孢菌、平凡假单孢菌、黎巴嫩假单孢菌、荧光假单孢菌和铁角蕨假单孢菌。
在一些实施例中，编码PIP-45-2多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235或SEQ IDNO：237的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ IDNO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：46、SEQ ID NO：235或SEQ ID NO：237相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：2相比具有至少99.2％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：18相比具有至少98.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：20相比具有至少96％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：22相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：24相比具有至少81％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：28相比具有至少99.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：30相比具有至少98.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：32相比具有至少92％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：34相比具有至少91.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：36相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：40相比具有至少90％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：44相比具有至少94％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：46相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：235相比具有至少91％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：237相比具有至少93.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽。
本披露涵盖了编码PIP-64-1多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-64-1多肽的多种多核苷酸。编码PIP-64-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含编码SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：238的PIP-64-1多肽的SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：165或SEQ ID NO：224的多核苷酸。编码PIP-64-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或产碱菌属菌株。编码PIP-64-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属或产碱菌属菌株，该假单孢菌属或产碱菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌、盖氏假单孢菌、荧光假单孢菌、芸苔假单孢菌(Pseudomonasbrassicacearum)、虫媒假单孢菌、和粪产碱菌。
在一些实施例中，编码PIP-64-1多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-1多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：53相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：58相比具有至少99.7％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：238相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽。
本披露涵盖了编码PIP-64-2多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-64-2多肽的多种多核苷酸。编码PIP-64-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：239的PIP-64-2多肽的SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：166或SEQ ID NO：225的多核苷酸。编码PIP-64-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或产碱菌属菌株。编码PIP-64-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属或产碱菌属菌株，该假单孢菌属或产碱菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌、盖氏假单孢菌、荧光假单孢菌、芸苔假单孢菌、虫媒假单孢菌、和粪产碱菌。
在一些实施例中，编码PIP-64-2多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-64-2多肽与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：54相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：55相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：59相比具有至少91％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：239相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽。
本披露涵盖了编码PIP-74-1多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-74-1多肽的多种多核苷酸。编码PIP-74-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75和SEQ ID NO：77的PIP-74-1多肽的SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：184的多核苷酸。编码PIP-74-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属菌株。编码PIP-74-1多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：罗氏假单孢菌(Pseudomonasrhodesiae)和东方假单孢菌(Pseudomonas orientalis)。
在一些实施例中，编码PIP-74-1多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：77的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-74-1多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：73、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：77相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：73相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：75相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：77相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽。
本披露涵盖了编码PIP-74-2多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-74-2多肽的多种多核苷酸。编码PIP-74-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：78的PIP-74-2多肽的SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：185的多核苷酸。编码PIP-74-2多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属菌株。PIP-74-2多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：罗氏假单孢菌和东方假单孢菌。
在一些实施例中，编码PIP-74-2多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQ ID NO：78的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-74-2多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：74、SEQ ID NO：76或SEQ ID NO：78相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：74相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：76相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：78相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽。
本披露涵盖了编码PIP-75多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-75多肽的多种多核苷酸。编码PIP-75多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含编码SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87的PIP-75多肽的SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ IDNO：191、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：194的多核苷酸。编码PIP-75多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或沙雷氏菌属菌株。PIP-75多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或沙雷氏菌属菌株，该菌株选自但不限于：南极假单孢菌、东方假单孢菌、阿氏肠杆菌、普城沙雷氏菌、和液化沙雷氏菌。
在一些实施例中，编码PIP-75多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-75多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-75多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-75多肽。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：79相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：80相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：81相比具有至少86％或更高序列同一性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：84相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：85相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：86相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：87相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽。
本披露涵盖了编码PIP-77多肽的多核苷酸。考虑了编码PIP-77多肽的多种多核苷酸。编码PIP-77多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ IDNO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQID NO：241、SEQ ID NO：242和SEQ ID NO：245的PIP-77多肽的SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228或SEQ ID NO：231的多核苷酸。编码PIP-77多肽或相关蛋白的多核苷酸的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属、希瓦氏菌属、嗜血杆菌属或气单孢菌属菌株。PIP-77多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：绿针假单孢菌(Pseudomonas chlororaphis)、芸苔假单孢菌、荧光假单孢菌和罗氏假单孢菌。
在一些实施例中，编码PIP-77多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。在一些实施例中，非基因组核酸分子是合成的核酸序列。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-77多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ IDNO：242或SEQ ID NO：245相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-77多肽。
在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：88相比具有至少93％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：89相比具有至少97％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：90相比具有至少99％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：92相比具有至少97％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：93相比具有至少87％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：94相比具有至少86％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：95相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：96相比具有至少84％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：97相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ IDNO：98相比具有至少83％或更高序列同一性的PIP-77多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：100相比具有至少79％或更高序列同一性的PIP-77多肽。
这些多核苷酸序列从假单孢菌属或其他细菌宿主中分离出来，并且因此适用于在其他细菌宿主中表达编码的杀昆虫多肽，这些其他细菌宿主包括但不限于：农杆菌属、芽孢杆菌属、埃希氏杆菌属、沙门氏菌属、假单孢菌属和根瘤菌属细菌宿主细胞。多核苷酸还可用作用于分离编码本披露的杀昆虫多肽或相关蛋白的同源或基本上同源的多核苷酸的探针。这样的探针可用于鉴定源自假单孢菌属或其他相关细菌的同源或基本上同源的多核苷酸。
编码杀昆虫多肽的多核苷酸也可以从多肽序列中重新合成。多核苷酸基因的序列可以通过使用遗传密码从多肽序列推导出来。计算机程序如“BackTranslate”(GCGTM包，Acclerys公司，圣迭哥，加利福尼亚州)可用于将肽序列转换成编码该肽的相应核苷酸序列。此外，本披露的合成的多核苷酸序列可以被设计成使得它们在植物中表达。美国专利号5,500,365描述了用于合成植物基因以改进由所合成的基因编码的蛋白质的表达水平的方法。该方法涉及对外源转基因的结构基因序列的修饰，使其更有效地由植物转录、加工、翻译和表达。在植物中表达良好的基因的特征包括消除可能在基因转录物的编码区域中引起不希望的内含子剪接或聚腺苷酸化的序列，同时基本上保留杀昆虫蛋白的有毒部分的氨基酸序列。美国专利号5,689,052中披露了用于获得单子叶植物中转基因表达增强的相似方法。
“互补序列”在此用于是指与给定核酸序列足够互补的核酸序列，使得其可以与给定的核酸序列杂交从而形成稳定的双链体。“多核苷酸序列变体”在此用于是指除了编码相同多肽的遗传密码的简并性之外的核酸序列。
在一些实施例中，编码本披露的杀昆虫多肽的核酸分子是非基因组核酸序列。如在此使用的，“非基因组核酸序列”或“非基因组核酸分子”是指与天然或基因组核酸序列相比，具有核酸序列的一个或多个变化的核酸分子。在一些实施例中，天然或基因组核酸分子的变化包括但不限于：由于遗传密码的简并性造成的核酸序列的变化；用于在植物中表达的核酸序列的密码子优化；与天然或基因组序列相比，将至少一个氨基酸取代、插入、缺失和/或添加引入的核酸序列的变化；与基因组核酸序列相关的一个或多个内含子的去除；一个或多个异源内含子的插入；与基因组核酸序列相关的一个或多个上游或下游调节区域的去除；一个或多个异源上游或下游调节区域的插入；与基因组核酸序列相关的5’和/或3’非翻译区域的缺失；异源5’和/或3’非翻译区域的插入；和聚腺苷酸化位点的修饰。在一些实施例中，非基因组核酸分子是cDNA。
还提供了编码随后被剪接以最终产生功能性杀昆虫多肽的转录和/或翻译产物的核酸分子。剪接可以在体外或体内完成，并且可以涉及顺式或反式剪接。用于剪接的底物可以是多核苷酸(例如，RNA转录物)或多肽。多核苷酸的顺式剪接的实例是其中插入到编码序列中的内含子被去除并且两个侧翼的外显子区域被剪接以产生本披露的杀昆虫多肽编码序列。反式剪接的实例是其中通过将编码序列分离成两个或更多个片段对多核苷酸进行编码，这些片段可以单独转录，并且然后剪接形成全长杀有害生物编码序列。可以引入到构建体中的剪接增强子序列的使用可以促进多肽的顺式或反式剪接中的剪接(美国专利号6,365,377和6,531,316)。因此，在一些实施例中，多核苷酸不直接编码本披露的全长杀昆虫多肽，而是编码本披露的杀昆虫多肽的一个或多个片段。这些多核苷酸可用于通过涉及剪接的机制来表达本披露的功能性杀昆虫多肽，其中剪接可以在多核苷酸(例如，内含子/外显子)和/或多肽(例如，内含肽/外显子)的水平上发生。这可以用于，例如，控制杀有害生物活性的表达，因为如果在允许剪接过程以产生功能性产物的环境中表达所有必需的片段，则仅表达功能性杀有害生物多肽。在另一个实例中，将一个或多个插入序列引入多核苷酸可促进与低同源多核苷酸的重组；使用插入序列的内含子或内含肽促进去除间插序列，从而恢复所编码变体的功能。
这些实施例还涵盖了作为编码杀昆虫多肽的这些核酸序列的片段的核酸分子。如在此使用的“片段”是指编码本披露的杀昆虫多肽的核酸序列的部分。核酸序列的片段可以编码本披露的杀昆虫多肽的生物活性部分，或者它可以是可以用作使用以下披露的方法的杂交探针或PCR引物的片段。作为编码本披露的杀昆虫多肽的核酸序列的片段的核酸分子包含至少约130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250或260个连续核苷酸或高达编码在此所披露的本披露的杀昆虫多肽的全长核酸序列中存在的数量的核苷酸，这取决于所预期的用途。“连续核苷酸”在此用于时指彼此紧邻的核苷酸残基。实施例的核酸序列的片段将编码保留本披露的杀昆虫多肽的生物活性并因此保留杀昆虫活性的蛋白片段。“保留杀昆虫活性”在此用于是指具有全长天然多肽的至少约10％、至少约30％、至少约50％、至少约70％、80％、90％、95％或更高的杀昆虫活性。在一个实施例中，该杀昆虫活性是鳞翅目活性。在一个实施例中，该杀昆虫活性针对鞘翅目物种。在一个实施例中，该杀昆虫活性针对叶甲属物种。在一个实施例中，该杀昆虫活性针对玉米根虫复合物的一种或多种昆虫有害生物：西方玉米根虫，玉米根萤叶甲(Diabrotica virgifera virgifera)；北方玉米根虫(northern corn rootworm，D.barberi)；南方玉米根虫或斑点黄瓜甲虫；斑点黄瓜甲虫，和墨西哥玉米根虫(Mexican corn rootworm，D.virgifera zeae)。在一个实施例中，杀昆虫活性针对西方玉米根虫，玉米根萤叶甲。
在一些实施例中，编码本披露的杀昆虫多肽或编码蛋白的生物学活性部分的核酸序列的片段将编码至少约15、20、30、40、50、60、70、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84或85个连续氨基酸或高达这些实施例的全长杀昆虫多肽中存在的总数量的氨基酸。在一些实施例中，该片段是通过以下各项来自N末端和/或C末端的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多氨基酸的N末端和/或C末端截短：蛋白水解、起始密码子的插入、编码缺失的氨基酸的密码子的缺失并伴随终止密码子插入，或在编码序列中插入终止密码子。
本披露提供编码在此披露的任何杀昆虫多肽的分离或重组多核苷酸。本领域普通技术人员将容易理解，由于遗传密码的简并性，存在编码本披露的杀昆虫多肽的许多核苷酸序列。表1是提供每个氨基酸的同义密码子的密码子表。例如，密码子AGA、AGG、CGA、CGC、CGG和CGU都编码氨基酸精氨酸。因此，在本披露的核酸的每个位置处，其中精氨酸由密码子指定，密码子可以改变为任何上述相应的密码子而不改变所编码的多肽。应当理解，RNA序列中的U对应于DNA序列中的T。
表1
技术人员将进一步了解，可以通过核酸序列的突变引入变化，从而导致编码的杀昆虫多肽的氨基酸序列的变化，而不改变蛋白质的生物活性。因此，变体核酸分子可以通过以下方式产生：将一个或多个核苷酸取代、添加和/或缺失引入到在此所披露的相应的核酸序列中，这样使得将一个或多个氨基酸取代、添加或缺失引入到所编码的蛋白质中。通过标准技术可以引入突变，如定向诱变和PCR介导的诱变。本披露还涵盖了这样的变体核酸序列。
可替代地，可以通过沿着该编码序列的全部或部分随机地引入突变(如通过饱和诱变)来制备变体核酸序列，并且可以针对赋予杀有害生物活性的能力来筛选得到的突变体以鉴定保留活性的突变体。在诱变之后，这种经编码的蛋白质可以进行重组地表达，并且这种蛋白质的活性可以使用标准的测定技术来确定。
本披露的多核苷酸及其片段任选用作各种重组和递归重组反应的底物，除了例如Ausubel、Berger和Sambrook所述的标准克隆方法之外，即，以产生具有所需性质的另外的杀有害生物多肽同源物及其片段。各种这样的反应是已知的，包括由诸位发明人及其同事开发的那些反应。用于生产在此列出的任何核酸的变体的方法(这些方法包括将此多核苷酸与第二(或更多)多核苷酸递归重组，从而形成变体多核苷酸文库)也是本披露的实施例，所产生的文库、包括这些文库的细胞和通过这些方法产生的任何重组多核苷酸也是如此。另外，这样的方法任选地包括基于杀有害生物活性从这些文库中选择变体多核苷酸，正如其中这样的递归重组在体外或体内进行。
各种多样性产生方案，包括核酸递归重组方案是可获得的并且在本领域中被充分描述。该程序可以单独和/或组合使用以产生核酸或核酸组的一种或多种变体，以及所编码蛋白质的变体。单独地或整体地，这些程序提供了产生多样化核酸和核酸集合(包括例如核酸文库)的稳健且广泛适用的方式，这些方式可用于，例如，具有新的和/或改进的特征的核酸、蛋白质、途径、细胞和/或生物体的工程化或快速进化。
虽然在随后的讨论过程中作出明确的区分和分类，但是应当理解，这些技术通常不是相互排斥的。实际上，各种方法可以单独使用或组合、平行或串联使用，以便取得不同的序列变体。
在此描述的任何多样性产生程序的结果可以是一种或多种核酸的产生，其可以选择或筛选具有或赋予所需性质的核酸或编码具有或者赋予所需性质的蛋白的核酸。通过本领域技术人员可以在此或以其他方式获得的一种或多种方法进行多样化之后，可以针对所需活性或性质，例如，杀有害生物活性或，在所需pH下的这种活性等选择所产生的任何核酸。这可以包括通过本领域任何测定来鉴定可以例如以自动化或可自动化形式检测的任何活性，参见例如以下的杀昆虫活性筛选的讨论。各种相关(或甚至不相关)的性质可以由执业者酌情串联或平行评估。
用于产生修饰的核酸序列的各种多样性产生程序的描述，例如编码具有杀有害生物活性的多肽或其片段的那些可以在以下出版物和其中引用的参考文献中找到：Soong，etal.，(2000)Nat Genet 25(4)：436-439[Soong等人，(2000)，自然遗传学，25(4)：436-439]；Stemmer，et al.，(1999)Tumor Targeting 4：1-4[Stemmer等人，(1999)，肿瘤靶向，4：1-4]；Ness，et al.，(1999)Nat Biotechnol 17：893-896[Ness等人，(1999)，自然生物技术，17：893-896]；Chang，et al.，(1999)Nat Biotechnol 17：793-797[Chang等人，(1999)，自然生物技术，17：793-797]；Minshull and Stemmer，(1999)Curr Opin Chem Biol 3：284-290[Minshull和Stemmer，(1999)，生物化学当代观点，3：284-290]；Christians，et al.，(1999)Nat Biotechnol 17：259-264[Christians等人，(1999)，自然生物技术，17：259-264]；Crameri，et al.，(1998)Nature 391：288-291[Crameri等人，(1998)，自然，391：288-291]；Crameri，et al.，(1997)Nat Biotechnol 15：436-438[Crameri等人，(1997)，自然生物技术，15：436-438]；Zhang，et al.，(1997)PNAS USA 94：4504-4509[Zhang等人，(1997)，美国国家科学院院刊，94：4504-4509]；Patten，et al.，(1997)Curr Opin Biotechnol 8：724-733[Patten等人，(1997)，当前生物技术的观点，8：724-733]；Crameri，et al.，(1996)Nat Med 2：100-103[Crameri等人，(1996)，自然医学，2：100-103]；Crameri，et al.，(1996)Nat Biotechnol 14：315-319[Crameri等人，(1996)，自然生物技术，14：315-319]；Gates，et al.，(1996)J Mol Biol 255：373-386[Gates等人，(1996)，分子生物学杂志，255：373-386]；Stemmer，(1996)“Sexual PCR and Assembly PCR”In：7he Encyclopediaof Molecular Biology.VCH Publishers，New York.pp.447-457[Stemmer，(1996)，“有性PCR和装配PCR”，在：分子生物百科全书，VCH出版社，纽约，第447-457页]；Crameri andStemmer，(1995)BioTechniques 18：194-195[Crameri和Stemmer，(1995)，生物技术，18：194-195]；Stemmer，et al.，(1995)Gene，164：49-53[Stemmer等人，(1995)，基因，164：49-53]；Stemmer，(1995)Science 270：1510[Stemmer，(1995)，科学，270：1510]；Stemmer，(1995)Bio/Technology 13：549-553[Stemmer，(1995)，生物/技术，13：549-553]；Stemmer，(1994)Nature 370：389-391 and Stemmer，(1994)PNAS USA 91：10747-10751[Stemmer，(1994)，自然，370：389-391和Stemmer，(1994)，美国国家科学院院刊，91：10747-10751]。
产生多样性的突变方法包括例如定点诱变(Ling，et al.，(1997)AnalBiochem254(2)：157-178[Ling等人，(1997)，分析生物化学，254(2)：157-178]；Dale，etal.，(1996)Methods Mol Biol 57：369-374[Dale等人，(1996)，分子生物学方法，57：369-374]；Smith，(1985)Ann Rev Genet 19：423-462[Smith，(1985)，遗传学年评，19：423-462]；Botstein and Shortle，(1985)Science 229：1193-1201[Botstein和Shortle，(1985)，科学，229：1193-1201]；Carter，(1986)Biochem J 237：1-7 and Kunkel，(1987)“The efficiency of oligonucleotide directed mutagenesis”in Nucleic Acids&Molecular Biology(Eckstein and Lilley，eds.，Springer Verlag，Berlin)[Carter，(1986)，生物化学杂志，237：1-7和Kunkel，(1987)，“寡核苷酸定向诱变的效率”，在：核酸与分子生物学(Eckstein和Lilley主编，施普林格出版公司，柏林]))；使用包含模板的尿嘧啶的诱变(Kunkel，(1985)PNAS USA 82：488-492；Kunkel，et al.，(1987)Methods Enzymol154：367-382 and Bass，et al.，(1988)Science 242：240-245[Kunkel，(1985)，美国国家科学院院刊，82：488-492；Kunkel等人，(1987)酶学方法，154：367-382和Bass等人，(1988)，科学，242：240-245])；寡核苷酸定向诱变(Zoller and Smith，(1983)Methods Enzymol100：468-500；Zoller and Smith，(1987)Methods .Enzymol 154：329-350(1987)；Zollerand Smith，(1982)Nucleic Acids Res 10：6487-6500[Zoller和Smith，(1983)，酶学方法，100：468-500；Zoller和Smith，(1987)，酶学方法，154：329-350(1987)；Zoller和Smith，(1982)，核酸研究，10：6487-6500])；硫代磷酸酯修饰的DNA诱变(Taylor，et al.，(1985)Nucl Acids Res 13：8749-8764；Taylor，et al.，(1985)Nucl Acids Res 13：8765-8787(1985)；Nakamaye and Eckstein，(1986)Nucl Acids Res 14：9679-9698；Sayers，et al.，(1988)Nucl Acids Res 16：791-802 and Sayers，et al.，(1988)Nucl Acids Res 16：803-814[Taylor等人，(1985)，核酸研究，13：8749-8764；Taylor等人，(1985)，核酸研究，13：8765-8787(1985)；Nakamaye和Eckstein，(1986)，核酸研究，14：9679-9698；Sayers等人，(1988)，核酸研究，16：791-802和Sayers等人，(1988)，核酸研究，16：803-814])；使用有空位的双链DNA的诱变(Kramer，et al.，(1984)Nucl Acids Res 12：9441-9456；Kramerand Fritz，(1987)Methods Enzymol 154：350-367；Kramer，et al.，(1988)Nucl AcidsRes 16：7207 and Fritz，et al.，(1988)Nucl Acids Res 16：6987-6999[Kramer等人，(1984)，核酸研究，12：9441-9456；Kramer和Fritz，(1987)，酶学方法，154：350-367；Kramer等人，(1988)，核酸研究，16：7207和Fritz等人，(1988)，核酸研究，16：6987-6999])。
另外合适的方法包括点错配修复(Kramer，et al.，(1984)Cell 38：879-887[Kramer等人，(1984)，细胞，38：879-887])、使用修复缺陷宿主菌株的诱变(Carter，etal.，(1985)Nucl Acids Res 13：4431-4443 and Carter，(1987)Methods in Enzymol154：382-403[Carter等人，(1985)，核酸研究，13：4431-4443和Carter，(1987)，酶学方法，154：382-403])、缺失诱变(Eghtedarzadeh and Henikoff，(1986)Nucl Acids Res 14：5115[Eghtedarzadeh和Henikoff，(1986)，核酸研究，14：5115])、限制性选择和限制性纯化(Wells，et al.，(1986)Phil Trans R Soc Lond A 317：415-423[Wells等人，(1986)，伦敦皇家学会哲学学报A，317：415-423])、通过全基因合成的诱变(Nambiar，et al.，(1984)Science 223：1299-1301；Sakamar and Khorana，(1988)Nucl Acids Res l4：6361-6372；Wells，et al.，(1985)Gene 34：315-323andet al.，(1985)Nucl Acids Res13：3305-3316[Nambiar等人，(1984)，科学，223：1299-1301；Sakamar和Khorana，(1988)，核酸研究，14：6361-6372；Wells等人，(1985)，基因，34：315-323和等人，(1985)，核酸研究，13：3305-3316])、双链断裂修复(Mandecki，(1986)PNAS USA，83：7177-7181 andArnold，(1993)Curr Opin Biotech 4：450-455[Mandecki，(1986)，美国国家科学院院刊，83：7177-7181和Arnold，(1993)，当前生物技术的观点，4：450-455])。许多上述方法的另外的细节可以在酶学方法第154卷中找到，其还描述了用各种诱变方法故障查找问题的有用对照。
关于各种多样性产生方法的另外的细节可以在以下美国专利、PCT公开物和申请和EPO公开物中找到：美国专利号5,723,323、美国专利号5,763,192、美国专利号5,814,476、美国专利号5,817,483、美国专利号5,824,514、美国专利号5,976,862、美国专利号5,605,793、美国专利号5,811,238、美国专利号5,830,721、美国专利号5,834,252、美国专利号5,837,458、WO 1995/22625、WO 1996/33207、WO 1997/20078、WO 1997/35966、WO 1999/41402、WO 1999/41383、WO 1999/41369、WO 1999/41368、EP 752008、EP 0932670、WO 1999/23107、WO 1999/21979、WO 1998/31837、WO 1998/27230、WO 1998/27230、WO 2000/00632、WO 2000/09679、WO 1998/42832、WO 1999/29902、WO 1998/41653、WO 1998/41622、WO1998/42727、WO 2000/18906、WO 2000/04190、WO 2000/42561、WO 2000/42559、WO 2000/42560、WO 2001/23401和PCT/US 01/06775。
实施例的核苷酸序列也可用于从其他生物体分离相应序列，特别是其他细菌，特别是假单孢菌属物种并且更特别是恶臭假单孢菌、黄褐假单孢菌或绿针假单孢菌菌株。以这种方式，可以使用如PCR、杂交等方法来鉴定这样的序列(基于其与本文所述序列的序列同源性)。实施例涵盖基于与在此阐明的全部序列或其片段的序列同一性选择的序列。这些序列包含作为披露序列的直向同源物的序列。术语“直向同源物”是指衍生自共同祖先基因并且由于物种形成而在不同物种中发现的基因。当其核苷酸序列和/或其编码的蛋白质序列共有如本文其他地方所定义的实质同一性时，在不同物种中发现的基因被认为是直向同源物。直向同源物的功能通常在物种间是高度保守的。
在PCR方法中，可以设计寡核苷酸引物用于PCR反应，以从由感兴趣的任何生物体提取的cDNA或基因组DNA扩增相应的DNA序列。用于设计PCR引物以及PCR克隆的方法是本领域通常已知的并且披露于Sambrook，et al.，(1989)Molecular Cloning：A LaboratoryManual[Sambrook等人，(1989)分子克隆：实验室手册](第2版，冷泉港实验室出版社，普莱恩维尤，纽约州))中，以下为“Sambrook”。还参见，Innis，et al.，eds.(1990)PCRProtocols：A Guide to Methods and Applications[Innis等人编辑，(1990)，PCR方案：方法和应用指南](学术出版社，纽约州)：Innis and Gelfand，eds.(1995)PCR Strategies[Innis和Gelfand编辑，(1995)PCR策略](学术出版社，纽约州)；和Innis and Gelfand，eds.(1999)PCRMethods Manual[Innis和Gelfand编辑，(1999)，PCR方法手册](学术出版社，纽约州)。已知的PCR方法包括但不限于：使用成对引物、巢式引物、单特异性引物、简并引物、基因特异性引物、载体特异性引物、部分错配引物等的方法。
为了从细菌收集中鉴定潜在的杀昆虫多肽，可以使用蛋白质印迹和/或ELISA方法用针对本披露的杀昆虫多肽产生的抗体筛选细菌细胞裂解物。这种类型的测定可以以高通量方式进行。可以通过各种技术如基于抗体的蛋白质纯化和鉴定进一步分析阳性样品。产生抗体的方法是本领域熟知的，如下文所述。
可替代地，基于质谱的蛋白质鉴定方法可以使用文献中的方案用于杀昆虫多肽的同源物(Scott Patterson，(1998)，10.22，1-24，Current Protocol in MolecularBiology published by John Wiley&Son Inc[Scott Patterson，(1998)，10.22，1-24，由约翰&威利父子公司出版的当前分子生物学方案])。具体来说，使用基于LC-MS/MS的蛋白质鉴定方法将给定细胞裂解物或所需分子量富集样品(从相关分子量带的SDS-PAGE凝胶切除的)的MS数据与本披露的杀昆虫多肽的序列信息结合。肽序列中的任何匹配表明在样品中具有同源物的可能性。可以使用另外技术(蛋白质纯化和分子生物学)来分离蛋白质并鉴定同源物的序列。
在杂交方法中，全部或部分杀有害生物核酸序列可用于筛选cDNA或基因组文库。用于构建此类cDNA和基因组文库的方法是本领域通常已知的，并且披露于Sambrook和Russell，(2001)，同上。所谓的杂交探针可以是基因组DNA片段、cDNA片段、RNA片段或其他寡核苷酸，并且可以用一个可检测基团(如32P或任何其他可检测的标志物，如其他放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子)进行标记。用于杂交的探针可以通过标记基于在此披露的编码杀昆虫多肽的核酸序列的合成的寡核苷酸来制备。可以另外使用简并引物，这些简并引物是基于在该核酸序列或所编码的氨基酸序列中的保守性核苷酸或氨基酸残基而设计的。这种探针典型地包含以下核酸序列的区域，该核酸序列区域在严格条件下与编码本披露的杀昆虫多肽的核酸序列或其片段或变体的至少约12个、至少约25个、至少约50、75、100、125、150、175或200个连续核酸进行杂交。用于制备用于杂交的探针的方法是本领域通常已知的，并且披露于Sambrook和Russell，(2001)，同上，其通过引用结合在此。
例如，编码本披露的杀昆虫多肽的在此披露的完整的核酸序列或其一个或多个部分可以用作能够与编码杀昆虫多肽样序列的相应的核酸序列和信使RNA特异性杂交的探针。为了实现在不同的条件下的特异性杂交，这样的探针包括以下序列，这些序列是独特的并且长度优选为至少约10个核苷酸、或长度为至少约20个核苷酸。此类探针可以用于通过PCR对来自所选生物体的相应杀有害生物序列进行扩增。可以使用这种技术从所希望的生物体中分离另外的编码序列，或作为用于确定生物体中存在编码序列的诊断试验。杂交技术包括杂交筛选电镀DNA文库(斑块或菌落)；参见例如Sambrook，et al.，(1989)MolecularCloning：A Laboratory Manual[Sambrook等人，(1989)分子克隆：实验室手册](第2版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约州)。
这样的序列的杂交可以在严格条件下进行。“严格条件”或“严格杂交条件”在此用于是指探针与其靶序列杂交的程度将比它与其他序列杂交的程度可检测地更高(例如，比背景高至少2倍)的条件。严格条件是序列依赖性的，并且在不同情况下将有所不同。通过控制杂交和/或洗涤条件的严格性，可以鉴定与该探针100％互补的靶序列(同源探测)。可替代地，也能够调整严格条件以允许序列中的某些错配，以便检测到更低程度的相似性(异源探测)。通常，探针的长度为小于约1000个核苷酸，优选地长度小于500个核苷酸。
典型地，严格条件将是以下条件，在这些条件下该盐浓度在pH 7.0至8.3下是小于约1.5M Na离子、典型地约0.01至1.0M Na离子浓度(或其他盐类)，并且温度对于短探针(例如，10至50个核苷酸)为至少约30℃，而对于长探针(例如，超过50个核苷酸)为至少约60℃。通过添加去稳定试剂(例如，甲酰胺)也可以实现严格的条件。示例性低严格性条件包括在37℃下使用30％至35％甲酰胺、1M NaCl、1％SDS(十二烷基硫酸钠)的缓冲溶液进行杂交，并且在50℃至55℃下在1×至2×SSC(20×SSC＝3.0M NaCl/0.3M柠檬酸三钠)中洗涤。示例性中严格条件包括在37℃下在40％至45％甲酰胺、1.0M NaCl、1％SDS中进行杂交，并且在55℃至60℃下在0.5×至1×SSC中洗涤。示例性高严格条件包括在37℃下在50％甲酰胺、1MNaCl、1％SDS中杂交，并且在60℃至65℃下在0.1×SSC中洗涤。可任选的是，洗涤缓冲液可以包含约0.1％至大约1％SDS。杂交持续时间通常小于约24小时，通常为约4至约12小时。
特异性典型地取决于杂交后洗涤的功能，关键因素是最终洗涤溶液的离子强度以及温度。对于DNA-DNA杂交物，Tm可以从Meinkoth and Wahl，(1984)Anal.Biochem.138：267-284[Meinkoth和Wahl，(1984)，分析生物化学，138：267-284]的等式中进行估计：Tm＝81.5℃.+16.6(log M)+0.41(％GC)-0.61(％form)-500/L；其中M是一价阳离子的摩尔浓度，％GC是在DNA中鸟苷和胞嘧啶核苷酸的百分比，％form是在杂交溶液中甲酰胺的百分比，并且L是以碱基对计的杂交体的长度。Tm是温度(在定义的离子强度以及pH下)，在该温度下50％的互补靶序列杂交到完全配对的探针上。对于每1％的错配，Tm降低约1℃；因此，可调整Tm、杂交和/或洗涤条件以与所期需同一性的序列杂交。例如，如果查找具有≥90％同一性的序列，该Tm可以降低10℃。通常选择严格条件为在限定离子强度和pH下低于特定序列及其互补序列的热熔点Tm约5℃。然而，极严格条件能够在比热熔点(Tm)低1℃、2℃、3℃或4℃下杂交和/或洗涤；中严格条件能够在比热熔点(Tm)低6℃、7℃、8℃、9℃或10℃下杂交和/或洗涤；低严格条件能够在比热熔点(Tm)低11℃、12℃、13℃、14℃、15℃或20℃下杂交和/或洗涤。使用方程式、杂交和洗涤组合物以及所需的Tm，本领域普通技术人员将理解，本质上描述了杂交和/或洗涤溶液的严格性的变化。如果所希望的错配程度导致Tm小于45℃(水溶液)或32℃(甲酰胺溶液)，则优选增加SSC浓度以使得可使用较高温度。对核酸杂交的全面指导见于以下文献：Tijssen，(1993)Laboratory Techniques in Biochemistryand Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes，Part I，Chapter 2(Elsevier，N.Y.)[Tijssen，(1993)，生物化学与分子生物学技术，与核酸探针的杂交，第2章第1部分，(Elsevier，纽约)]；以及Ausubel，et al.，eds.(1995)Current Protocols inMolecular Biology，Chapter 2[Ausubel等人编辑，(1995)，分子生物学当前方案，第2章](格林出版和韦利科学公司，纽约)。参见Sambrook，et al.，(1989)Molecular Cloning：ALaboratory Manual[Sambrook等人，(1989)，分子克隆：实验室手册](第2版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约)。
蛋白质及其变体和片段
本披露的一方面是分离的杀昆虫多肽。
本披露涵盖了PIP-45-1多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-45-1”、“PIP-45-1多肽”或“PIP-45-1蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：1的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-45-1多肽。PIP-45-1多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQID NO：45、SEQ ID NO：234和SEQ ID NO：236的PIP-45-1多肽的SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：220或SEQ ID NO：222的多核苷酸。PIP-45-1多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、Thalassuspira、副球菌属或纤维弧菌属菌株。PIP-45-1多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌、蒙氏假单孢菌、盖氏假单孢菌、变形假单孢菌、恶臭假单孢菌、草假单孢菌、平凡假单孢菌、黎巴嫩假单孢菌、荧光假单孢菌和铁角蕨假单孢菌。
在一些实施例中，PIP-45-1多肽是与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ IDNO：236的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-1多肽的全长序列。
在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ IDNO：236相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：1相比具有至少99.1％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：17相比具有至少99.4％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：19相比具有至少99.6％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：21相比具有至少87％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：23相比具有至少88％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：27相比具有至少99.1％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：29相比具有至少99.8％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：31相比具有至少92.3％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：33相比具有至少91.1％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：35相比具有至少95.4％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：39相比具有至少93％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：43相比具有至少97.5％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-1多肽与SEQ ID NO：45相比具有至少70％或更高序列同一性。
本披露涵盖了PIP-45-2多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-45-2”、“PIP-45-2多肽”或“PIP-45-2蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：2的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-45-2多肽。PIP-45-2多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQID NO：46、SEQ ID NO：235和SEQ ID NO：237的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：221或SEQ ID NO：223的多核苷酸。PIP-45-2多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、Thalassuspira、副球菌属或纤维弧菌属菌株。PIP-45-2多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌、蒙氏假单孢菌、盖氏假单孢菌、变形假单孢菌、恶臭假单孢菌、草假单孢菌、平凡假单孢菌、黎巴嫩假单孢菌、荧光假单孢菌和铁角蕨假单孢菌。
在一些实施例中，PIP-45-2多肽是与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235或SEQ IDNO：237的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ IDNO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ IDNO：235或SEQ ID NO：237相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：2相比具有至少99.2％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：18相比具有至少98.5％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：20相比具有至少96％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：22相比具有至少80％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：24相比具有至少81％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：28相比具有至少99.5％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：30相比具有至少98.5％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：32相比具有至少92％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：34相比具有至少91.5％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：36相比具有至少70％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：40相比具有至少90％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：44相比具有至少94％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-45-2多肽与SEQ ID NO：46相比具有至少70％或更高序列同一性。
本披露涵盖了PIP-64-1多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-64-1”、“PIP-64-1多肽”或“PIP-64-1蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：53的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-64-1多肽。PIP-64-1多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含编码SEQ IDNO：53、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：238的PIP-64-1多肽的SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：165或SEQ ID NO：224的多核苷酸。PIP-64-1多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或产碱菌属菌株。PIP-64-1多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属或产碱菌属菌株，该假单孢菌属或产碱菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌、盖氏假单孢菌、荧光假单孢菌、芸苔假单孢菌、虫媒假单孢菌、和粪产碱菌。
在一些实施例中，PIP-64-1多肽与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-64-1多肽与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-64-1多肽与SEQ ID NO：53相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-64-1多肽与SEQ ID NO：58相比具有至少99.7％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-64-1多肽与SEQ ID NO：238相比具有至少75％或更高序列同一性。
本披露涵盖了PIP-64-2多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-64-2”、“PIP-64-2多肽”或“PIP-64-2蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：54的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-64-2多肽。PIP-64-2多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：239的PIP-64-2多肽的SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：166或SEQ ID NO：225的多核苷酸。PIP-64-2多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或产碱菌属菌株。PIP-64-2多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属或产碱菌属菌株，该假单孢菌属或产碱菌属菌株选自但不限于：布式假单孢菌、盖氏假单孢菌、荧光假单孢菌、芸苔假单孢菌、虫媒假单孢菌、和粪产碱菌。
在一些实施例中，PIP-64-2多肽与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-64-2多肽与SEQ IDNO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-64-2多肽与SEQ ID NO：54相比具有至少70％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-64-2多肽与SEQ ID NO：55相比具有至少70％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-64-2多肽与SEQ ID NO：59相比具有至少91％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-64-2多肽与SEQ ID NO：239相比具有至少70％或更高序列同一性。
本披露涵盖了PIP-74-1多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-74-1”、“PIP-74-1多肽”或“PIP-74-1蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：73的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-74-1多肽。PIP-74-1多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQID NO：73、SEQ ID NO：75和SEQ ID NO：77的PIP-74-1多肽的SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：184的多核苷酸。PIP-74-1多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株。PIP-74-1多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：罗氏假单孢菌和东方假单孢菌。
在一些实施例中，PIP-74-1多肽与SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：77的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-74-1多肽与SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：77相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-74-1多肽与SEQ ID NO：73相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-74-1多肽与SEQ ID NO：75相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-74-1多肽与SEQ ID NO：77相比具有至少75％或更高序列同一性。
本披露涵盖了PIP-74-2多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-74-2”、“PIP-74-2多肽”或“PIP-74-2蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：74的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-74-2多肽。PIP-74-2多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQID NO：74、SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：78的PIP-74-2多肽的SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：185的多核苷酸。PIP-74-2多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株。PIP-74-2多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：罗氏假单孢菌和东方假单孢菌。
在一些实施例中，PIP-74-2多肽与SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQ ID NO：78的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-74-2多肽与SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQ ID NO：78相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-74-2多肽与SEQ ID NO：74相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-74-2多肽与SEQ ID NO：76相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-74-2多肽与SEQ ID NO：78相比具有至少75％或更高序列同一性。
本披露涵盖了PIP-75多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-75”、“PIP-75多肽”或“PIP-75蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：79的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-75多肽。PIP-75多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：79、SEQID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87的PIP-75多肽的SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：191、SEQ IDNO：192、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：194的多核苷酸。PIP-75多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或沙雷氏菌属菌株。PIP-75多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属或沙雷氏菌属菌株，该菌株选自但不限于：南极假单孢菌、东方假单孢菌、阿氏肠杆菌、普城沙雷氏菌、和液化沙雷氏菌。
在一些实施例中，PIP-75多肽与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-75多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ IDNO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：79相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：80相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：81相比具有至少86％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：84相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：85相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：86相比具有至少75％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-75多肽与SEQ ID NO：87相比具有至少75％或更高序列同一性。
本披露涵盖了PIP-77多肽。如在此使用的“假单孢菌属杀昆虫蛋白-77”、“PIP-77多肽”或“PIP-77蛋白”互换地是指对鳞翅目和/或鞘翅目的一种或多种昆虫有害生物具有杀昆虫活性的多肽，并且与SEQ ID NO：88的蛋白质足够同源。考虑了多种PIP-77多肽。PIP-77多肽或相关蛋白的一种来源是细菌菌株，该细菌菌株包含分别编码SEQ ID NO：88、SEQID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242和SEQ ID NO：245的PIP-77多肽的SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ IDNO：198、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228或SEQ IDNO：231的多核苷酸。PIP-77多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属、肠杆菌属、希瓦氏菌属、嗜血杆菌属或气单孢菌属菌株。PIP-77多肽或相关蛋白的一种来源来自假单孢菌属菌株，该假单孢菌属菌株选自但不限于：绿针假单孢菌、芸苔假单孢菌、荧光假单孢菌和罗氏假单孢菌。
在一些实施例中，PIP-77多肽是与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-77多肽的全长序列。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：88相比具有至少93％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：89相比具有至少97％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：90相比具有至少99％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：92相比具有至少97％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：93相比具有至少87％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：94相比具有至少86％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：95相比具有至少85％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：96相比具有至少84％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：97相比具有至少85％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：98相比具有至少83％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：100相比具有至少80％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：241相比具有至少85％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：242相比具有至少83％或更高序列同一性。在一些实施例中，该PIP-77多肽与SEQ ID NO：245相比具有至少96％或更高序列同一性。
如在此使用的，术语“蛋白质”、“肽分子”、或“多肽”包括包含五个或更多个氨基酸的任何分子。本领域熟知蛋白质、肽或多肽分子可以进行修饰，该修饰包括翻译后修饰，如但不限于二硫键形成、糖基化、磷酸化或寡聚化。因此，如在此使用的，术语“蛋白质”、“肽分子”或“多肽”包括通过任何生物或非生物过程修饰的任何蛋白质。术语“氨基酸”是指所有天然存在的L-氨基酸。
在一些实施例中，PIP-45-1多肽具有在约40kDa和约80kDa之间、在约50kDa和约70kDa之间、在约60kDa和约65kDa之间、在约61kDa和约64kDa之间、在约62kDa和约63kDa之间、以及在约62.25kDa和约62.75kDa之间的所计算的分子量。如在此使用的，在杀昆虫多肽的分子量的上下文中所使用的术语“约”意指±0.25千道尔顿。
在一些实施例中，PIP-45-2多肽具有在约40kDa和约80kDa之间、在约50kDa和约64kDa之间、在约55kDa和约60kDa之间、在约56.5kDa和约59kDa之间、以及在约57.25kDa和约58kDa之间的所计算的分子量。
在一些实施例中，PIP-64-1多肽具有在约20kDa和约40kDa之间、在约25kDa和约32kDa之间、在约26kDa和约31kDa之间、在约27kDa和约30kDa之间、在约28kDa和约29kDa之间、以及在约28.1kDa和约28.7kDa之间的所计算的分子量。
在一些实施例中，PIP-64-2多肽具有在约20kDa和约40kDa之间、在约25kDa和约32kDa之间、在约26kkDa和约31kkDa之间、在约27kDa和约30kDa之间、以及在约28.25kDa和约29kDa之间的所计算的分子量。
在一些实施例中，PIP-74-1多肽具有在约40kDa和约80kDa之间、在约50kDa和约70kDa之间、在约55kDa和约73kDa之间、在约57kDa和约61kDa之间、在约58kDa和约60kDa之间、以及在约58.75kDa和约59.25kDa之间的所计算的分子量。如在此使用的，在杀昆虫多肽的分子量的上下文中所使用的术语“约”意指±0.25千道尔顿。
在一些实施例中，PIP-74-2多肽具有在约35kDa和约65kDa之间、在约45kDa和约51.5kDa之间、在约47.5kDa和约49.5kDa之间、以及在约48.25kDa和约48.75kDa之间的所计算的分子量。
在一些实施例中，PIP-75多肽具有在约6kDa和约14kDa之间、在约8kDa和约13.5kDa之间、在约9kDa和约12kDa之间、在约9.5kDa和约11.5kDa之间、以及在约10.4kDa和约10.8kDa之间的所计算的分子量。
在一些实施例中，PIP-77多肽具有在约7kDa和约13kDa之间、在约8kDa和约12kDa之间、在约9kDa和约11kDa之间、在约9.5kDa和约10.3kDa之间、以及在约9.75kDa和约10.25kDa之间的所计算的分子量。
在一些实施例中，本披露的杀昆虫多肽具有改性的物理性质。如在此使用的，术语“物理性质”是指适于描述蛋白质的物理化学特征的任何参数。如在此使用的，“感兴趣的物理性质”和“感兴趣的性质”可互换使用，以指正在研究和/或修饰的蛋白质的物理性质。物理性质的实例包括但不限于：蛋白质表面上的净表面电荷和电荷分布、蛋白质表面上的净疏水性和疏水残基分布、表面电荷密度、表面疏水密度、表面电离基团的总计数、表面张力、蛋白质大小及其在溶液中的分布、熔融温度、热容量、和第二维里系数。物理性质的实例还包括但不限于：溶解度、折叠、稳定性、和消化性。在一些实施例中，本披露的杀昆虫多肽增加了昆虫肠中的蛋白水解片段的消化性。通过模拟胃液消化的模型是本领域技术人员已知的(Fuchs，R.L.and J.D.Astwood.Food Technology 50：83-88，1996；Astwood，J.D.，et alNature Biotechnology 14：1269-1273，1996；Fu TJ et al J.Agric Food Chem.50：7154-7160，2002[Fuchs，R.L.和J.D.Astwood，食品科技，50：83-88，1996；Astwood，J.D.等人，自然生物技术，14：1269-1273，1996；Fu TJ等人，农业与食品化学杂志，50：7154-7160，2002])。
在一些实施例中，变体包括由于诱变而在氨基酸序列方面不同的多肽。本披露所涵盖的变体蛋白质具有生物学活性，即它们仍然具有天然蛋白质所需的生物学活性(即杀有害生物活性)。在一些实施例中，该变体将具有至少约10％、至少约30％、至少约50％、至少约70％、至少约80％或更高的天然蛋白质的杀昆虫活性。在一些实施例中，变体可以具有比天然蛋白质改进的活性。
细菌基因通常在开放阅读框的起始附近具有多个甲硫氨酸起始密码子。经常，在这些起始密码子中的一个或多个处的翻译起始将导致一种功能蛋白质的产生。这些起始密码子可以包括ATG密码子。然而，细菌(如，芽孢杆菌属物种)还将该密码子GTG识别为起始密码子，并且在GTG密码子处起始翻译的蛋白质在第一个氨基酸处包含甲硫氨酸。在少数情况下，细菌系统中的翻译可以在TTG密码子处启动，尽管在此事件中TTG编码甲硫氨酸。此外，常常不首先确定这些密码子中的哪一些在细菌中自然地使用。因此，应当理解，使用这些可替代的甲硫氨酸密码子之一也可能导致杀虫蛋白的产生。这些杀有害生物蛋白涵盖于本披露之中，并且可以在本披露的这些方法中使用。应当理解的是当在植物中表达时将有必要将替代起始密码子改变为ATG以用于正确的翻译。
在另一方面，本披露的杀昆虫多肽可以表达为具有催化多步翻译后蛋白质剪接的间插序列的前体蛋白。蛋白质剪接涉及从多肽切除间插序列，并伴随连接侧翼序列以产生新的多肽(Chong，et al.，(1996)J.Biol.Chem.，271：22159-22168[Chong等人，(1996)，生物化学杂志，271：22159-22168])。这种被称为内含肽的间插序列或蛋白质剪接元件，通过在N末端和C末端剪接点处的以下三个协调反应催化其自身的切除：N末端半胱氨酸或丝氨酸的酰基重排；两个末端之间形成支链酯或硫酯中间体的酯交换反应，和与内含肽C末端天冬酰胺的环化相偶联释放内含肽的肽键切割(Evans，et al.，(2000)J.Biol.Chem.，275：9091-9094[Evans等人，(2000)，生物化学杂志，275：9091-9094])。阐明蛋白质剪接的机制导致了许多基于内含肽的应用(Comb，et al.，US Patent Number 5，496，714；Comb，etal.，US Patent Number 5,834,247；Camarero and Muir，(1999)J.Amer.Chem.Soc.121：5597-5598；Chong，et al.，(1997)Gene 192：271-281，Chong，et al.，(1998)NucleicAcids Res.26：5109-5115；Chong，et al.，(1998)J.Biol.Chem.273：10567-10577；Cotton，et al.，(1999)J.Am.Chem.Soc.121：1100-1101；Evans，et al.，(1999)J.Biol.Chem.274：18359-18363；Evans，et al.，(1999)J.Biol.Chem.274：3923-3926；Evans，et al.，(1998)Protein Sci.7：2256-2264；Evans，et al.，(2000)J.Biol.Chem.275：9091-9094；Iwai andPluckthun，(1999)FEBS Lett.459：166-172；Mathys，et al.，(1999)Gene 231：1-13；Mills，et al.，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：3543-3548；Muir，et al.，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：6705-6710；Otomo，et al.，(1999)Biochemistry 38：16040-16044；Otomo，et al.，(1999)J.Biolmol.NMR 14：105-114；Scott，et al.，(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：13638-13643；Severinov and Muir，(1998)J.Biol.Chem.273：16205-16209；Shingledecker，et al.，(1998)Gene 207：187-195；Southworth，et al.，(1998)EMBO J. 17：918-926；Southworth，et al.，(1999)Biotechniques 27：110-120；Wood，et al.，(1999)Nat.Biotechnol.17：889-892；Wu，etal.，(1998a)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95：9226-9231；Wu，et al.，(1998b)BiochimBiophys Acta 1387：422-432；Xu，et al.，(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：388-393；Yamazaki，et al.，(1998)J.Am.Chem.Soc.，120：5591-5592[Comb等人，美国专利号5,496,714；Comb等人，美国专利号5,834,247；Camarero和Muir，(1999)，美国化学学会学报，121：5597-5598；Chong等人，(1997)，基因，192：271-281，Chong等人，(1998)，核酸研究，26：5109-5115；Chong等人，(1998)，生物化学杂志，273：10567-10577；Cotton等人，(1999)，美国化学会志，121：1100-1101；Evans等人，(1999)，生物化学杂志，274：18359-18363；Evans等人，(1999)，生物化学杂志，274：3923-3926；Evans等人，(1998)，蛋白质科学，7：2256-2264；Evans等人，(2000)，生物化学杂志，275：9091-9094；Iwai和Pluckthun，(1999)，欧洲生化学会联盟通讯，459：166-172；Mathys等人，(1999)，基因，231：1-13；Mills等人，(1998)，美国国家科学院院刊，95：3543-3548；Muir等人，(1998)，美国国家科学院院刊，95：6705-6710；Otomo等人，(1999)，生物化学，38：16040-16044；Otomo等人，(1999)，生物分子核磁共振杂志，14：105-114；Scott等人，(1999)，美国国家科学院院刊，96：13638-13643；Severinov和Muir，(1998)，生物化学杂志，273：16205-16209；Shingledecker等人，(1998)，基因，207：187-195；Southworth等人，(1998)，欧洲分子生物学杂志，17：918-926；Southworth等人，(1999)，生物技术，27：110-120；Wood等人，(1999)，自然生物技术，17：889-892；Wu等人，(1998a)，美国国家科学院院刊，95：9226-9231；Wu等人，(1998b)，生物化学与生物物理学报，1387：422-432；Xu等人，(1999)，美国国家科学院院刊，96：388-393；Yamazaki等人，(1998)，美国化学会志，120：5591-5592])。针对在植物转基因中应用内含肽，参见，Yang，et al.，(Transgene Res 15：583-593(2006))and Evans，et al.，(Annu.Rev.Plant Biol.56：375-392(2005))[Yang等人，(转基因研究，15：583-593(2006))和Evans等人，(植物生物学年评，56：375-392(2005))]。
在另一方面，本披露的杀昆虫多肽可以由两个单独的基因编码，其中前体蛋白的内含肽来自两个称为分裂内含肽的基因，并且前体的两部分通过肽键形成连接。该肽键的形成通过内含肽介导的反式剪接实现。为此目的，包含两个单独基因的第一和第二表达盒进一步编码能够介导蛋白质反式剪接的内含肽。通过反式剪接，由第一和第二片段编码的蛋白质和多肽可以通过肽键形成连接。反式剪接内含肽可以选自包括真核生物、古细菌和真细菌在内的不同生物体的核仁和细胞器基因组。可以使用的内含肽列在neb.com/neb/inteins.html上，其可以使用“www”前缀在万维网上访问。编码内含肽的核苷酸序列可以分裂成5′和3′部分，该5′和3′部分分别编码内含肽的5′和3′部分。可能使内含肽剪接不需要的序列部分(例如归巢内切核酸酶结构域)缺失。将内蛋白编码序列分裂，使得5′和3′部分能够进行反式剪接。为了选择内含肽编码序列的合适的分裂位点，可以遵循由Southworth，et al.，(1998)EMBO J.17：918-926[Southworth等人，(1998)，欧洲分子生物学杂志，17：918-926]公开的注意事项。在构建第一和第二表达盒中，5′内含肽编码序列连接到编码本披露的杀昆虫多肽的N末端部分的第一片段的3′末端，并且3′内含肽编码序列连接到编码本披露的杀昆虫多肽的C末端部分的第二片段的5′末端。
通常，可以使用任何分裂内含肽来设计反式剪接配偶体，包括任何天然存在或人工分裂的分裂内含肽。已知若干种天然存在的分裂内含肽，例如：集胞藻属物种PCC6803的DnaE基因的分裂内含肽(参见，Wu，et al.，(1998)Proc Natl Acad Sci USA.95(16)：9226-31 and Evans，et al.，(2000)J Biol Chem.275(13)：9091-4[Wu等人，(1998)，美国国家科学院院刊，95(16)：9226-31和Evans等人，(2000)，生物化学杂志，275(13)：9091-4])和来自点状念珠藻的DnaE基因的分裂内含肽(参见，Iwai，et al.，(2006)FEBS Lett.580(7)：1853-8[Iwai等人，(2006)，欧洲生化学会联盟通讯，580(7)：1853-8])。非分裂内含肽在实验室中人为分裂以产生新的分裂内含肽，例如：人工分裂Ssp DnaB内含肽(参见，Wu，etal.，(1998)Biochim Biophys Acta.1387：422-32[Wu等人，(1998)，生物化学与生物物理学报，1387：422-32])和分裂Sce VMA内含肽(参见，Brenzel，et al.，(2006)Biochemistry.45(6)：1571-8[Brenzel等人，(2006)，生物化学，45(6)：1571-8])和人工分裂的真菌微型内含肽(参见，Elleuche，et al.，(2007)Biochem Biophys Res Commun.355(3)：830-4[Elleuche等人，(2007)，生物化学与生物物理学研究通讯，355(3)：830-4])。还有把已知的内含肽编入目录的内含肽数据库(参见，例如，可以在bioinformatics.weizmann.ac.il/～pietro/inteins/Inteinstable.html处获得的在线数据库，其可以使用“www”前缀在万维网上访问)。
天然存在的非分裂内含肽可能具有内切核酸酶活性或其他酶活性，这些活性通常可以在设计人工分裂的分裂内含肽时被去除。这样的迷你内含肽或最小化的分裂内含肽是本领域熟知的，并且通常小于200个氨基酸残基长(参见，Wu，et al.，(1998)BiochimBiophys Acta.1387：422-32[Wu等人，(1998)，生物化学与生物物理学报，1387：422-32])。合适的分裂内含肽可以向其结构添加使其他纯化可行的多肽元件，条件是这些元件不会抑制分裂内含肽的剪接，或以允许它们在拼接之前被去除的方式添加。已经报道了使用包含以下各项的蛋白质的蛋白质剪接：细菌内含肽样(BIL)结构域(参见，Amitai，et al.，(2003)Mol Microbiol.47：61-73[Amitai，et al.，(2003)Mol Microbiol.47：61-73])和刺猬(Hog)自动加工结构域(当称为Hog/内含肽超家族或HINT家族时，后者与内含肽组合；参见，Dassa，et al.，(2004)J Biol Chem.279：32001-7[Dassa等人，(2004)，生物化学杂志，279：32001-7]))以及结构域如还可用于制备人工分裂的内含肽的这些。特别地，可以通过分子生物学方法来修饰这些家族的非剪接成员，以引入或恢复在这些相关物种中的剪接活性。最近的研究表明，当允许N末端分裂内含肽组分与自然界中未发现的C末端裂解内含肽组分反应作为其“配偶体”时，可以观察到剪接；例如，已经观察到使用与“自然”剪接配偶体具有少至30％至50％同源性的配偶体进行剪接(参见，Dassa，et al.，(2007)Biochemistry.46(1)：322-30[Dassa等人，(2007)，生物化学，46(1)：322-30])。不同分裂内含肽的其他这种混合物已被证明与另一个不反应的混合物(参见，Brenzel，et al.，(2006)Biochemistry.45(6)：1571-8[Brenzel等人，(2006)，生物化学，45(6)：1571-8])。然而，使用常规方法并且酶有运用创造性技能是情况下确定特定的一对多肽是否能够彼此结合以提供功能性内含肽，在相关领域的技术人员的能力范围内。
在另一方面，本披露的杀昆虫多肽是环形排列的变体。重组DNA方法的发展使得有可能研究序列转座对蛋白质折叠、结构和功能的影响。用于创建新序列的方法类似于通过其氨基酸序列的线性重组相关的天然存在的蛋白质对的方法(Cunningham，et al.，(1979)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.76：3218-3222；Teather and Erfle，(1990)J.Bacteriol.172：3837-3841；Schimming，et al.，(1992)Eur.J.Biochem.204：13-19；Yamiuchi and Minamikawa，(1991)FEBSLett.260：127-130；MacGregor，et al.，(1996)FEBS Lett.378：263-266[Cunningham等人，(1979)，美国国家科学院院刊，76：3218-3222；Teather和Erfle，(1990)，细菌学杂志，172：3837-3841；Schimming等人，(1992)，欧洲生物化学杂志，204：13-19；Yamiuchi和Minamikawa，(1991)，欧洲生化学会联盟通讯，260：127-130；MacGregor等人，(1996)，欧洲生物化学杂志，378：263-266])。Goldenberg和Creighton描述了这种类型的重排对蛋白质的第一次体外应用(J.Mol.Biol.165：407-413，1983[分子生物学杂志，165：407-413，1983])。在创建环形排列的变体中，在原始序列的内部位点(断点)处选择新的N末端，该新序列从断点与原始序列具有氨基酸相同的次序，直到其达到原始C末端或其附近的氨基酸。在这一点上，新序列直接或通过序列(接头)的另外部分连接到原始N末端或其附近的氨基酸，并且新序列以原始序列相同的序列继续，直到其达到原始序列的断点位点的N末端的氨基酸处于或附近的点，该残基形成链的新C末端。接头的氨基酸序列的长度可以凭经验或以结构信息的指导或通过使用两种方法的组合来选择。当没有结构信息可用时，可以使用设计和采取必要的确认，而不会破坏杀有害生物多肽的构型的能力(构象灵活；Karplus and Schulz，(1985)Naturwissenschaften 72：212-213[Karplus和Schulz，(1985)，自然科学，72：212-213])制备小系列接头用于测试，该设计的长度为了跨越从0至的范围而变化并且选择该设计的序列以与表面暴露一致(亲水性，Hopp andWoods，(1983)Mol.Immunol.20：483-489；Kyte and Doolittle，(1982)J.Mol.Biol.157：105-132；solvent exposed surface area，Lee and Richards，(1971)J.Mol.Biol.55：379-400[Hopp和Woods，(1983)，分子免疫学，20：483-489；Kyte和Doolittle，(1982)，分子生物学杂志，157：105-132；溶剂暴露表面积，Lee和Richards，(1971)，分子生物学杂志，55：379-400])。假设每个残基平均翻译为2.0至这意味着要测试的长度在0至30个残基之间，其中0至15个残基为优选范围。这种经验性系列的实例将是使用重复n次的盒序列如Gly-Gly-Gly-Ser构建接头，其中n为1、2、3或4。本领域技术人员将认识到，存在许多长度或组成不同的这样的序列，其可以用作接头，其中主要注意事项是它们是既不过长也不过短的(cf.，Sandhu，(1992)Critical Rev.Biotech.12：437-462[cf.，Sandhu，(1992)，生物技术评论，12：437-462])；如果它们太长，熵效应可能会使三维折叠不稳定，并且也可能使得折叠在动力学上是不切实际的，并且如果它们太短，则它们可能由于扭转或空间应变使分子不稳定。蛋白质结构信息分析的技术人员将认识到，使用定义为c-α碳之间距离的链末端之间的距离可用于定义待使用的序列的长度，或至少限制在接头的经验选择中必须测试的可能性的数量。他们还将认识到，在有时多肽链末端的位置在源自X射线衍射或核磁共振光谱数据的结构模型中是不明确的情况下，并且在当真实时的情况下，因此，需要考虑这种情况，以便正确估计所需接头的长度。从其位置定义明确的那些残基选择两个与链末端顺序接近的残基，并且使用它们的c-α碳之间的距离来计算它们之间的接头的近似长度。使用计算出的长度作为指导，然后选择具有一定范围数量的残基(每个残基使用2至计算)的接头。这些接头可以由原始序列组成，必要时缩短或延长，并且当延长时，可以如上所述选择灵活的和亲水性的另外的残基；或任选地，原始序列可以用一系列接头取代，一个实例是以上提及的Gly-Gly-Gly-Ser盒方法；或任选地，可以使用具有适当总长度的原始序列和新序列的组合。能够折叠到生物活性状态的杀有害生物多肽的序列可以通过从原始多肽链中开始(氨基末端)和末端(羧基末端)位置的适当选择，同时使用如上所述的接头序列来制备。氨基和羧基末端使用下面所述的方法从称为断点区域的序列的常见延伸中选出。因此，通过从同一断点区域内选择氨基和羧基末端来产生新颖的氨基酸序列。在许多情况下，新末端的选择将使得羧基末端的原始位置紧邻氨基末端的位置。然而，本领域技术人员将认识到，区域内任何地方的末端的选择可能起作用，并且这些将有效地导致新序列的氨基或羧基部分的缺失或添加。蛋白质的主要氨基酸序列决定了折叠至表达其生物功能所必需的三维结构是分子生物学的核心原则。本领域技术人员已知使用单一蛋白晶体的x射线衍射或蛋白质溶液的核磁共振光谱来获得和解释三维结构信息的方法。与断点区域的识别有关的结构信息的实例包括蛋白质二级结构的位置和类型(α和3-10个螺旋，平行和反平行β折叠，链反转和链回转，以及环；Kabsch and Sander，(1983)Biopolymers 22：2577-2637[Kabsch和Sander，(1983)，生物聚合体，22：2577-2637]氨基酸残基的溶剂暴露程度，残基相互作用的程度和类型(Chothia，(1984)，生物化学年鉴，53：537-572)和沿着多肽链的构象的静态和动态分布(Alber and Mathews，(1987)Methods Enzymol.154：511-533[Alber和Mathews，(1987)，酶学方法，154：511-533])。在某些情况下，已知关于残基溶剂暴露的另外的信息；一个实例是碳水化合物的翻译后附着位点，该位点必然在蛋白质的表面上。当实验结构信息不可获得或不可能获得时，也可以使用方法来分析初级氨基酸序列，以便预测蛋白质三级和二级结构，溶剂可及性以及回转和环的存在。当直接结构方法不可行时，生物化学方法有时也适用于经验确定表面暴露；例如，使用有限蛋白水解后的链裂解位点的鉴定以便推测表面暴露(Gentile and Salvatore，(1993)Eur.J.Biochem.218：603-621[Gentile和Salvatore，(1993)，欧洲生物化学杂志，218：603-621])。因此，使用实验衍生的结构信息或预测方法(例如，Srinivisan and Rose，(1995)Proteins：Struct.，Funct.&Genetics 22：81-99[Srinivisan和Rose，(1995)，蛋白质：结构，功能和遗传学，22：81-99])，检查亲本氨基酸序列根据它们是否对维持二级和三级结构是必不可少的对区域进行分类。已知涉及周期性二级结构(α和3-10个螺旋，平行和反平行β折叠)的区域内的序列的存在是应该避免的区域。相似地，观察或预测具有低溶剂暴露程度的氨基酸序列的区域更可能是蛋白质的所谓疏水核心的一部分，并且也应避免选择氨基和羧基末端。相比之下，已知或预测为表面回转或循环的那些区域，并且特别是已知生物活性所不需要的那些区域，是用于定位多肽链极端的优选位点。基于上述标准优选的氨基酸序列的连续延伸被称为断点区域。可以基本上遵循Mullins，et al.，(1994)J.Am.Chem.Soc.116：5529-5533[Mullins等人，(1994)，美国化学会志，116：5529-5533]中所描述的方法制备编码具有新N末端/C末端的本披露的环形排列的杀昆虫多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含将原C末端与N末端分隔开的连接区。聚合酶链反应(PCR)扩增的多个步骤用于重排编码蛋白质的一级氨基酸序列的DNA序列。可以基于Horlick，et al.，(1992)Protein Eng.5：427-431[Horlick等人，(1992)，蛋白质工程，5：427-431]中所描述的串联重复方法制备编码具有新N末端/C末端的本披露的环形排列的杀昆虫多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含将原C末端与N末端分隔开的连接区。使用串联重复的模板DNA进行新的N末端/C末端基因的聚合酶链反应(PCR)扩增。
在另一方面，提供了在其氨基酸序列中包含氨基酸序列的融合蛋白，该氨基酸序列包含本披露的杀昆虫多肽。用于设计和构建融合蛋白(以及编码它们的多核苷酸)的方法是本领域技术人员已知的。编码本披露的杀昆虫多肽的多核苷酸可以融合到信号序列，这些信号序列将指导本披露的杀昆虫多肽定位于来自原核或真核细胞的实施例的杀昆虫多肽。例如，在大肠杆菌中，人们可能希望指导蛋白质表达至周质空间。本披露的杀昆虫多肽可以融合以便指导多肽表达至细菌周质空间的信号序列或蛋白质(或其片段)的实例包括但不限于：pelB信号序列、麦芽糖结合蛋白(MBP)信号序列、MBP、ompA信号序列，周质性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基的信号序列和碱性磷酸酶的信号序列。用于构建将指导蛋白质定位的融合蛋白的若干种载体是可商购的，如可从New England(240县道，伊普斯威奇，马萨诸塞，01938-2723)获得的pMAL系列的载体(特别是pMAL-p系列)。在具体实施例中，本披露的杀昆虫多肽可以与pelB果胶酸裂解酶信号序列融合，以增加革兰氏阴性菌中这些多肽的表达和纯化的效率(参见，美国专利号5,576,195和5,846,818)。植物质体转运肽/多肽融合是本领域熟知的(参见，美国专利号7,193,133)。质外体转运肽如水稻或大麦α-淀粉酶分泌信号也是本领域熟知的。质体转运肽通常与待靶向的多肽(例如，融合配偶体)进行N末端融合。在一个实施例中，融合蛋白基本上由待靶向的本披露的质体转运肽和杀昆虫多肽组成。在另一个实施例中，融合蛋白包含待靶向的质体转运肽和多肽。在这样的实施例中，质体转运肽优选位于融合蛋白的N末端。然而，另外的氨基酸残基可以是在质体转运肽的N末端，条件是该融合蛋白质至少部分地靶向质体。在具体实施例中，质体转运肽在融合蛋白的N末端一半处，N末端三分之一处或N末端四分之一处。当插入质体时，大部分或全部质体转运肽通常从融合蛋白上切割。由于特定的细胞间条件或所使用的转运肽/融合配偶体的具体组合，在不同植物发育阶段，切割位置可能在植物物种之间略有变化。在一个实施例中，质体转运肽切割是均相的，使得切割位点在融合蛋白群体中是相同的。在另一个实施例中，质体转运肽不是均匀的，使得融合蛋白群体中切割位点相差1-10个氨基酸。质体转运肽可以以若干种方式之一重组融合到第二种蛋白质。例如，可以将限制性内切核酸酶识别位点引入到其C末端的相应位置的转运肽的核苷酸序列中，并且可以将相同或相容的位点工程化为在其N末端待靶向的蛋白质的核苷酸序列。必须注意设计这些位点，以确保转运肽和第二个蛋白质的编码序列保持“框架”，以允许合成所需的融合蛋白。在一些情况下，当引入新的限制性位点时，优选除去第二种蛋白质的引发剂甲硫氨酸密码子。在两个亲本分子上引入限制性内切核酸酶识别位点，以及它们随后通过重组DNA技术连接可导致在转运肽和第二蛋白质之间添加一个或多个额外的氨基酸。这通常不影响靶向活性，只要转运肽切割位点保持可及，并且通过在其N末端添加这些额外的氨基酸而不改变第二蛋白质的功能。可替代地，本领域技术人员可以使用基因合成(Stemmer，et al.，(1995)Gene 164：49-53[Stemmer等人，(1995)，基因，164：49-53])或相似的方法在转运肽和第二蛋白质之间产生精确的切割位点(有或没有其引发剂甲硫氨酸)。此外，转运肽融合可以有意地包括切割位点下游的氨基酸。成熟蛋白质N末端的氨基酸可影响转运肽将蛋白质靶向质体的能力和/或蛋白质进入后的切割效率。这可能取决于待靶向的蛋白质。参见，例如，Comai，etal.，(1988)J.Biol.Chem.263(29)：15104-9[Comai等人，(1988)，生物化学杂志，263(29)：15104-9]。
在一些实施例中，提供包含本披露的杀昆虫多肽的融合蛋白，以及通过氨基酸接头连接的杀昆虫多肽。
在一些实施例中，提供了由选自下组的化学式所示的融合蛋白，该组由以下各项组成：
R1-L-R2、R2-L-R1、R1-R2或R2-R1
其中R1是本披露的杀昆虫多肽。该R1多肽直接或通过接头(L)区段融合至R2多肽。术语“直接”定义在没有肽接头的情况下多肽连接的融合。因此，“L”表示R1和R2在框架中融合的化学结合或多肽区段，最常见的是，L是R1和R2通过酰胺键将R1的羧基末端连接到L的氨基末端并且将L的羧基末端连接到R2的氨基末端的线性肽。“在框内融合”意指R1和R2的阅读框之间没有翻译终止或中断。连接基团(L)通常是长度在1至500个氨基酸之间的多肽。连接两个分子的接头优选设计成(1)允许两个分子彼此独立第折叠并且起作用，(2)不具有发展可能干扰两种蛋白质的功能结构域的有序二级结构的倾向，(3)具有可与功能性蛋白质结构域相互作用的最小的疏水或带电特征，并且(4)提供R1和R2的空间分离，使得R1和R2可以与单个细胞上的相应受体同时相互作用。通常，在柔性蛋白质区域中的表面氨基酸包括Gly、Asn和Ser。期望包含Gly、Asn和Ser的氨基酸序列的几乎任何排列满足上述接头序列的标准。其他中性的氨基酸，如Thr和Ala也可以用于接头序列中。由于在接头序列中添加了独特的限制性位点以便于构建融合体，另外的氨基酸也可以包括在接头中。
在一些实施例中，接头包含选自以下组的化学式的序列：(Gly3Ser)n、(Gly4Ser)n、(Gly5Ser)n、(GlynSer)n或(AlaGlySer)n，其中n是整数。高度柔性接头的一个实例是存在于丝状噬菌体(例如，噬菌体M13或fd)的pIII蛋白质内的富含(GlySer)的间隔子(Schaller等人，1975)。该区域在pIII表面蛋白质的两个结构域之间提供长、柔性的间隔子区域。还包括接头，在接头中包括内肽酶识别序列。这样的切割位点对于分离融合物的各个组分以确定它们在体外是否适当折叠和是否具有活性可能是有价值的。各种内肽酶的实例包括但不限于：纤溶酶、肠激酶、激肽释放酶、尿激酶、组织纤溶酶原激活剂、梭菌蛋白酶、凝乳酶、胶原酶、鲁塞尔氏蝰蛇毒蛋白酶、后脯氨酸切割酶、V8蛋白酶、凝血酶和因子Xa。在一些实施例中，接头包含来自多基因表达载体(MGEV)的氨基酸EEKKN(SEQ ID NO：215)，其如美国专利申请公开号US 2007/0277263中所披露的被液泡蛋白酶切割。在其他实施例中，来自重链免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的铰链区域的肽接头区段在附着的多肽之间提供角度关系。特别有用的是那些半胱氨酸被丝氨酸替换的铰链区域。本披露的接头包括源自鼠IgGγ2b铰链区域的序列，其中半胱氨酸已经被变为丝氨酸。融合蛋白不受所使用的接头序列的形式、大小或数目的限制，并且接头的唯一要求是功能上不会与融合的各个分子的折叠和功能产生不利的干扰。
在另一方面，提供了嵌合杀昆虫多肽，该嵌合杀昆虫多肽通过连接本披露的杀昆虫多肽基因的两个或更多个部分产生，该杀昆虫多肽基因最初编码分离的杀昆虫蛋白以产生嵌合基因。嵌合基因的翻译导致具有源自每个原始多肽的区域、基序或结构域的单个嵌合杀昆虫多肽。
应当认识到，可以通过各种方法改变DNA序列，并且这些改变可能导致编码具有与野生型(或天然)杀有害生物蛋白编码的氨基酸序列不同的氨基酸序列的蛋白质的DNA序列。在一些实施例中，本披露的杀昆虫多肽可以以各种方式改变，这些方式包括与SEQ IDNO：1-SEQ ID NO：107、和SEQ ID NO：232-SEQ ID NO：245中任一项相比，一个或多个氨基酸的氨基酸取代、缺失、截短和插入，包括高达2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45或更多氨基酸取代、缺失和/或插入或其组合。在一些实施例中，本披露的杀昆虫多肽包含从本披露的杀昆虫多肽的N末端和/或C末端的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多个氨基酸的缺失。
这种操作的方法是本领域通常已知的。例如，本披露的杀昆虫多肽的氨基酸序列变体可以通过DNA突变来制备。这还可以通过几种诱变形式之一和/或在定向进化中来完成。在一些方面，在该氨基酸序列中所编码的变化将基本上不影响该蛋白质的功能。这样的变体将具有所希望的杀有害生物活性。然而，应当理解，可以通过在本披露的组合物上使用这些技术改进本披露的杀昆虫多肽赋予杀有害生物活性的能力。
例如，可以在一个或多个、预测的、非必需氨基酸残基处做出保守性氨基酸取代。“非必需”氨基酸残基是可以从本披露的杀昆虫多肽的野生型序列改变而不改变生物活性的残基。“保守的氨基酸取代”是其中用具有相似侧链的氨基酸残基替换该氨基酸残基的取代。在本领域中已经限定了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括：具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)；具有极性的、带负电荷的残基及其酰胺的氨基酸(例如，天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺)；具有不带电极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)；具有小脂肪族、非极性或微小极性的残基的氨基酸(例如，丙胺酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、甘胺酸)；具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙胺酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)；具有大脂肪族、非极性残基的氨基酸(例如，甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、半胱氨酸)；具有β-支链侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)；具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)；具有大芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)。
氨基酸取代可以在保留功能的非保守性区域中进行。总体上，此类取代并非针对保守的氨基酸残基、或针对在一个保守基序内的氨基酸残基而进行，其中此类残基是蛋白质活性所必要的。保守的并且对于蛋白质活性可能是必需的残基的实例包括例如，在与实施例的序列相相似或相关的毒素的比对中所包含的全部蛋白质之间是相同的残基(例如，在同源物比对中相同残基)。保守的但可能允许保守的氨基酸取代、并且仍保留活性的残基的实例包括例如，在与实施例的序列相相似或相关的毒素的比对中所包含的全部蛋白质之间仅具有保守性取代的残基(例如，在同源物比对中所包含的全部蛋白质之间仅具有保守性取代的残基)。然而，本领域的技术人员应当理解，功能性变体在保守的残基中可以具有少量的保守的或非保守的改变。关于不影响感兴趣的蛋白质的生物活性的适当的氨基酸取代的指导可以发现于Dayhoff，et al.，(1978)Atlas of Protein Sequence andStructure(Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，D.C.)[Dayhoff等人，(1978)，蛋白质序列和结构图谱(国家生物医学研究基金会，华盛顿)的模型中，其通过引用结合在此。
在进行这种变化时，可考虑氨基酸的亲水指数。亲水氨基酸指数在赋予蛋白质以交互性生物功能中的重要性在本领域中通常是被理解的(Kyte and Doolittle，(1982)JMol Biol.157(1)：105-32[Kyte和Doolittle，(1982)，分子生物学杂志，157(1)：105-32])。接受的是该氨基酸的相对亲水特征有助于所得蛋白的次级结构，该次级结构进而定义该蛋白与其他分子(例如酶、基质、受体、DNA、抗体、抗原等等)的相互作用。
本领域已知某些氨基酸可以被具有相似亲水指数或评分的其他氨基酸取代，并且仍然产生具有相似生物学活性的蛋白质，即仍然获得生物功能等同的蛋白质。每个氨基酸基于其疏水性和电荷特征被指定亲水指数(Kyte和Doolittle，同上)。这些是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘胺酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。在进行这种变化时，优选亲水性指数在+2以内的氨基酸取代，特别优选在+1以内的氨基酸取代，并且甚至更特别优选+0.5以内的氨基酸取代。
在本领域中也可以理解，可以基于亲水性有效地进行类似氨基酸的取代。美国专利号4,554,101说明蛋白的最大局部平均亲水性(如由其相邻氨基酸的亲水性支配的)与该蛋白的生物特性相关。
如美国专利号4,554,101中所详述的，以下亲水性值已被分配到氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0.+0.1)；谷氨酸(+3.0.+0.1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘胺酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5.+0.1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。
可替代地，可以在氨基或羧基的末端上对多种蛋白质的蛋白质序列进行改变，而基本上不影响活性。这可以包括由现代分子方法所引入的插入、缺失或改变，这些方法如PCR，包括PCR扩增，这些PCR扩增借助于将氨基酸编码序列包括到在PCR扩增中所使用的寡核苷酸之中而改变或延长了这种蛋白质编码序列。可替代地，所添加的蛋白质序列可以包括完整的蛋白质编码序列，如在本领域内通常用于产生蛋白质融合物的那些序列。此类融合蛋白常常用于(1)增加感兴趣的蛋白质的表达；(2)引入结合结构域、酶活性或表位以促进蛋白质纯化、蛋白检测或本领域已知的其他实验用途；(3)将蛋白质的分泌或翻译靶向亚细胞器，如革兰氏阴性菌的周质空间，植物的线粒体或叶绿体或真核细胞的内质网，这些中的后者常常导致蛋白质的糖基化。
本披露的变体核苷酸和氨基酸序列还涵盖了由诱变和引起重组的程序(如DNA改组)所衍生的序列。在这样的方法的情况下，可以使用本披露编码区域的一种或多种不同的杀昆虫多肽来产生具有所需性质的本披露的新的杀昆虫多肽。以此方式，由一群相关的序列多核苷酸产生重组多核苷酸文库，这些多核苷酸包含具有基本序列同一性并且能够在体外或体内同源重组的序列区域。例如，使用这种方法，可以将编码感兴趣的结构域的序列基序在杀有害生物基因与其他已知的杀有害生物基因之间进行改组，以获得编码具有改进的感兴趣的性质(如增加的杀昆虫活性)的新基因。这种DNA改组的策略是本领域已知的。参见，例如，Stemmer，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：10747-10751；Stemmer，(1994)Nature 370：389-391；Crameri，et al.，(1997)Nature Biotech.15：436-438；Moore，etal.，(1997)J.Mol.Biol.272：336-347；Zhang，et al.，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA94：4504-4509；Crameri，et al.，(1998)Nature 391：288-291[Stemmer，(1994)，美国国家科学院院刊，91：10747-10751；Stemmer，(1994)，自然，370：389-391；Crameri等人，(1997)，自然生物技术，15：436-438；Moore等人，(1997)，分子生物学杂志，272：336-347；Zhang等人，(1997)，美国国家科学院院刊，94：4504-4509；Crameri等人，(1998)，自然，391：288-291]；以及美国专利号5,605,793和5,837,458。
结构域交换或改组是用于产生本披露的改变的杀昆虫多肽的另一种机制。可以在本披露的杀昆虫多肽之间交换结构域，导致具有改进的杀昆虫活性或靶谱的杂交或嵌合毒素。用于产生重组蛋白质并测试其杀有害生物活性的方法是本领域熟知的(参见，例如，Naimov，et al.，(2001)Appl.Environ.Mcrobiol.67：5328-5330；de Maagd，et al.，(1996)Appl.Environ.Microbiol.62：1537-1543；Ge，et al.，(1991)J.Biol.Chem.266：17954-17958；Schnepf，et al.，(1990)J.Biol.Chem.265：20923-20930；Rang，et al.，91999)Appl.Environ.Microbiol.65：2918-2925[Naimov等人，(2001)，应用与环境微生物学，67：5328-5330；de Maagd等人，(1996)，应用与环境微生物学，62：1537-1543；，Ge等人，(1991)，生物化学杂志，266：17954-17958；Schnepf等人，(1990)，生物化学杂志，265：20923-20930；Rang等人，(1999)，应用与环境微生物学，65：2918-2925])。
杀昆虫多肽的同源物的比对(图1、2、3、4、5、6、7和8)允许鉴定这些家族的同源物中高度保守的残基。
组合物
也可以设想包含本披露的杀昆虫多肽的组合物。考虑了包含本披露的PIP-45-1多肽和本披露的PIP-45-2多肽的组合物。在一些实施例中，该组合物包含杀昆虫有效浓度的本披露PIP-45-1多肽和本披露的PIP-45-2多肽。考虑了包含本披露的PIP-64-1多肽和本披露的PIP-64-2多肽的组合物。在一些实施例中，该组合物包含杀昆虫有效浓度的本披露PIP-64-1多肽和本披露的PIP-64-2多肽。考虑了包含本披露的PIP-74-1多肽和本披露的PIP-74-2多肽的组合物。在一些实施例中，该组合物包含杀昆虫有效浓度的本披露PIP-74-1多肽和本披露的PIP-74-2多肽。考虑了包含本披露的PIP-75多肽的组合物。在一些实施例中，该组合物包含杀昆虫有效浓度的本披露PIP-75多肽。考虑了包含本披露的PIP-77多肽的组合物。在一些实施例中，该组合物包含杀昆虫有效浓度的本披露PIP-77多肽。在一些实施例中，该组合物进一步包含一种农业上可接受的载体。
抗体
还涵盖了针对实施例的本披露的杀昆虫多肽或针对其变体或片段的抗体。本披露的抗体包括保留其结合昆虫肠道中发现的杀昆虫蛋白的能力的多克隆和单克隆抗体及其片段。据说抗体、单克隆抗体或其片段如果其能够与分子特异性反应从而将分子与抗体、单克隆抗体或其片段结合，则能够结合分子。术语“抗体”(Ab)或“单克隆抗体”(Mab)意指包括够结合半抗原的完整分子以及其片段或结合区域或结构域(例如像，Fab和F(ab).sub.2片段)。这种片段通常通过蛋白水解切割产生，如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶。可替代地，可以通过应用重组DNA技术或通过合成化学生产半抗原结合片段。用于制备本披露的抗体的方法是本领域通常已知的。例如，参见Antibodies，A Laboratory Manual，Ed Harlow and DavidLane(eds.)Cold Spring Harbor Laboratory，N.Y.(1988)[抗体，实验室手册，Ed Harlow和David Lane(编辑)，冷泉港实验室，纽约州，(1988)]，以及其中引用的参考文献。阐述免疫学的一般原则的标准参考文献包括：Klein，J.Immunology：The Science of Cell-Noncell Discrimination，John Wiley&Sons，N.Y.(1982)；Dennett，et al.，MonoclonalAntibodies，Hybridoma：A New Dimension in Biological Analyses，Plenum Press，N.Y.(1980)and Campbell，″Monoclonal Antibody Technology，″In Laboratory Techniquesin Biochemistry and Molecular Biology，Vol.13，Burdon，et al.，(eds.)，Elsevier，Amsterdam(1984)[Klein，免疫学杂志：细胞-非细胞鉴别科学，约翰&威利父子公司，纽约，(1982)；Dennett等人，单克隆抗体，杂交瘤：生物分析的新维度，普莱纽姆出版社，纽约，(1980)和Campbell，“单克隆抗体技术”，在：生物化学与分子生物学实验室技术，第13卷，Burdon等人，(编辑)，爱思唯尔，阿姆斯特丹，(1984)]。还参见，美国专利号4,196,265、4,609,893、4,713,325、4,714,681、4,716,111、4,716,117和4,720,459。本披露的杀昆虫多肽或其抗原结合部分的抗体可以通过多种技术产生，包括常规单克隆抗体方法，例如Kohlerand Milstein，(1975)Nature 256：495[Kohler和Milstein，(1975)，自然，256：495]的标准体细胞杂交技术。还可以使用产生单克隆抗体的其他技术，如B淋巴细胞的病毒或致癌性转化。用于制备杂交瘤的动物系统是小鼠系统。分离用于融合的免疫的脾细胞的免疫方案和技术是本领域已知的。融合配偶体(例如，小鼠骨髓瘤细胞)和融合方法也是已知的。本披露的抗体和单克隆抗体可以通过使用本披露的杀昆虫多肽作为抗原来制备。
提供了用于在样品中检测本披露的杀昆虫多肽的存在或检测编码本披露的杀昆虫多肽的核苷酸序列的存在的试剂盒。在一个实施例中，试剂盒提供基于抗体的试剂，用于检测组织样品中本披露的杀昆虫多肽的存在。在另一个实施例中，试剂盒提供用于检测编码本披露的杀昆虫多肽的一种或多种多核苷酸的存在的标记的核酸探针。将试剂盒与用于进行检测方法的适当的试剂和对照物，以及试剂盒的使用说明书一起提供。
受体鉴别和分离
还涵盖了针对实施例的杀昆虫多肽或其变体或片段的受体。用于鉴定受体的方法是本领域熟知的(参见，Hofmann，et.al.，(1988)Eur.J.Biochem.173：85-91；Gill，et al.，(1995)J.Biol.Chem.27277-27282[Hofmann等人，(1988)，欧洲生物化学杂志，173：85-91；Gill等人，(1995)，生物化学杂志，27277-27282)可以使用来自易感昆虫的刷状缘膜囊泡用于鉴定和分离识别本披露的杀昆虫多肽的受体。除了引用文献中列出的放射性标记方法之外，可以将杀昆虫多肽用荧光染料和其他常见标记如链霉亲和素进行标记。可以根据参考文献中列出的方案制备易感昆虫(如大豆夜蛾和椿象)的刷状缘膜囊泡(BBMV)，并在SDS-PAGE凝胶上分离，并在合适的膜上印迹。本披露的标记的杀昆虫多肽可以与BBMV的印迹膜一起孵育，并标记的本披露的杀昆虫多肽可以用标记的报道基因鉴定。与本披露的杀昆虫多肽相互作用的蛋白质带的鉴定可以通过基于N末端氨基酸气相测序或基于质谱的蛋白质鉴定方法进行检测(Patterson，(1998)10.22，1-24，Current Protocol in MolecularBiology published by John Wiley&Son Inc[Patterson，(1998)，10.22，1-24，由约翰&威利父子公司出版的当前分子生物学方案])。一旦鉴定出蛋白质，可以从易感昆虫的基因组DNA或cDNA文库中克隆相应的基因，并且可以直接用本披露的杀昆虫多肽测量结合亲和力。通过本披露的杀昆虫多肽的杀昆虫活性的受体功能可以通过RNAi型的基因敲除法完成验证(Rajagopal，et al.，(2002)J.Biol.Chem.277：46849-46851[Rajagopal等人，(2002)，生物化学杂志，277：46849-46851])。
核苷酸构建体、表达盒和载体
在此使用术语“核苷酸构建体”并不旨在将实施例限制为包含DNA的核苷酸构建体。本领域普通技术人员将认识到，核苷酸构建体特别是由核糖核苷酸以及核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸的组合组成的多核苷酸和寡核苷酸也可用于在此披露的方法中。实施例的核苷酸构建体、核酸和核苷酸序列另外涵盖这种构建体、分子和序列的所有互补形式。此外，实施例的核苷酸构建体、核苷酸分子和核苷酸序列涵盖能用于实施例的转化植物方法的所有核苷酸构建体、分子和序列，包括但不限于由脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸及其组合所构成的那些。所述脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸包括天然存在的分子和合成类似物二者。实施例的核苷酸构建体、核酸和核苷酸序列还涵盖核苷酸构建体的所有形式，这些形式包括但不限于单链形式、双链形式、发夹、茎环结构等。
另一实施例涉及转化的生物体，如选自以下各项的生物体：植物和昆虫细胞、细菌、酵母、杆状病毒、原生动物、线虫和藻的生物体。转化的生物体包含实施例的DNA分子、包含DNA分子的表达盒或包含表达盒的载体，它可以稳定地并入所转化生物体的基因组。
在DNA构建体中提供实施例的序列，用于在感兴趣的生物体中表达。该构建体将包括有效地连接至实施例的序列的5′和3′的调节序列。如在此使用的术语“有效地连接”是指启动子和第二序列之间的功能性连接，其中启动子序列启动并介导相应于第二序列的DNA序列的转录。通常，有效地连接意味着所连接的核酸序列是连续的，并且在必要时在相同阅读框中连接两个蛋白质编码区域。该构建体可以另外包含待共转化进生物体的至少一个另外的基因。可替代地，可以在多DNA构建体上提供另外的基因。
这种DNA构建体具有多个用于插入杀昆虫多肽基因序列的限制性位点，该杀昆虫多肽基因序列将位于调节性区域的转录调节之下。该DNA构建体可以另外包含可选标记基因。
按5′到3′的转录方向，DNA构建体将通常包括：转录和翻译起始区域(即，启动子)、实施例的DNA序列以及在用作宿主的生物体内具有功能的转录和翻译终止区域(即，终止区域)。转录起始区域(即，启动子)对于实施例的宿主生物体和/或序列，可以是天然的、类似的、外源的或异源的。此外，该启动子可以是自然序列或者，可替代地，是合成序列。如在此使用的术语“外源”表示在引入启动子的天然生物体中没有发现启动子。在启动子对于实施例的序列而言是“外源的”或“异源的”的情况下，它是指该启动子对于实施例的有效地连接的序列而言不是天然的或天然存在的启动子。如在此使用的，嵌合基因包含有效地连接至与编码序列异源的转录起始区域的编码序列。当启动子是天然或自然的序列时，有效地连接的序列的表达改造自野生型表达，这导致表型的改变。
在一些实施例中，DNA构建体还可以包括转录增强子序列。如在此使用的，术语“增强子”是指可以刺激启动子活性的DNA序列，并且可以是插入以增强启动子的水平或组织特异性的启动子的先天元件或异源元件。各种增强子是本领域已知的，包括例如，在植物中具有基因表达增强特性的内含子(美国专利申请公开号2009/0144863)、泛素内含子(即，玉蜀黍泛素内含子1(参见，例如，NCBI序列S94464；Christensen and Quail(1996)TransgenicRes.5：213-218；Christensen et al.(1992)Plant Molecular Biology 18：675-689[Christensen和Quail，(1996)，转基因研究，5：213-218；Christensen等人，(1992)，植物分子生物学，18：675-689]))、ω增强子或ω主要增强子(Gallie，et al.，(1989)MolecularBiology of RNA ed.Cech(Liss，New York)237-256 and Gallie，et al.，(1987)Gene 60：217-25[Gallie等人，(1989)，RNA的分子生物学，编辑：Cech(丽丝，纽约)237-256和Gallie等人，(1987)，基因，60：217-25])、CaMV 35S增强子(参见，例如，Benfey，et al.，(1990)EMBO J.9：1685-96[Benfey等人，(1990)，欧洲分子生物学杂志，9：1685-96])、玉蜀黍AdhI内含子(Kyozuka et al.(1991)Mol.Gen.Genet.228：40-48；Kyozuka et al.(1990)Maydica 35：353-357[Kyozuka等人，(1991)，分子遗传和基因组学，228：40-48；Kyozuka等人，(1990)，Maydica，35：353-357])和也可以使用的美国专利号7,803,992的增强子，其中每一个通过引用并入。以上转录增强子的列表并不意指是限制性的。任何合适的转录增强子都可用于实施例中。
该终止区域与该转录起始区域在一起可以是天然的、与感兴趣的有效地连接的DNA序列在一起可以是天然的、与该植物宿主在一起可以是天然的、或者可以源自另一种来源(即，对于该启动子、该感兴趣的序列、该植物宿主或其任何组合是外源的或异源的)。
方便的终止区域可从根瘤土壤杆菌的Ti-质粒获得，如章鱼碱合酶和胭脂氨酸合酶终止区域。还参见，Guerineau，et al.，(1991)Mol.Gen.Genet.262：141-144；Proudfoot，(1991)Cell 64：671-674；Sanfacon，et al.，(1991)Genes Dev.5：141-149；Mogen，et al.，(1990)Plant Cell 2：1261-1272；Munroe，et al.，(1990)Gene 91：151-158；Ballas，etal.，(1989)Nucleic Acids Res.17：7891-7903 and Joshi，et al.，(1987)Nucleic AcidRes.15：9627-9639[Guerineau等人，(1991)，分子遗传和基因组学，262：141-144；Proudfoot，(1991)，细胞，64：671-674；Sanfacon等人，(1991)，基因与发育，5：141-149；Mogen等人，(1990)，植物细胞，2：1261-1272；Munroe等人，(1990)，基因，91：151-158；Ballas等人，(1989)，核酸研究，17：7891-7903和Joshi等人，(1987)，核酸研究，15：9627-9639]。
适当时可以优化核酸以增加在宿主生物体中的表达。因此，当宿主生物体是植物时，合成核酸可以使用植物优先的密码子合成以改进表达。对于宿主优先的密码子使用的讨论，参见，例如，Campbell and Gowri，(1990)Plant Physiol.92：1-11[Campbell和Gowri，(1990)，植物生理学，92：1-11]。例如，虽然在单子叶和双子叶植物物种中均可以表达实施例的核酸序列，但是可以修饰序列，以解决单子叶或双子叶植物特异的密码子偏好和GC含量偏好，这是因为这些偏好已经表现出了差异(Murray et al.(1989)NucleicAcids Res.17：477-498[Murray等人，(1989)，核酸研究，17：477-498])。因而，特定氨基酸的玉蜀黍优先的密码子可以源自玉蜀黍的已知基因序列。来自玉蜀黍植物的28种基因的玉蜀黍密码子使用在Murray等人(同上)的表4中列出。本领域中可获得用于合成植物优先的基因的方法。参见，例如，美国专利号5,380,831和5,436,391，和Murray，et al.，(1989)Nucleic Acids Res.17：477-498，and Liu H et al.Mol Bio Rep 37：677-684，2010[Murray等人，(1989)，核酸研究，17：477-498，和Liu H等人，分子生物学报告，37：677-684，2010]，其通过引用结合在此。玉蜀黍密码子使用表也可以在kazusa.or．jp/codon/cgi-bin/showcodon.cgi？species＝4577上找到，其可以使用www前缀进行访问。表2显示玉蜀黍最佳密码子分析(改编自Liu H et al.Mol Bio Rep 37：677-684，2010[Liu H等人，分子生物学报告，37：677-684，2010])。
表2
使用卡方列联测试(Chi squared contingency test)比较密码子使用，以鉴定最佳密码子。出现明显更频繁的密码子(P\0.01)用星号表示。
大豆密码子使用表如表3所示，并且也可以在kazusa.or.jp/codon/cgi-bin/showcodon.cgi？species＝3847&aa＝1&style＝N上找到，其可以使用www前缀进行访问。
表3
TTT F 21.2 (10493) TCT S 18.4 (9107)
TTC F 21.2 (10487) TCC S 12.9 (6409)
TTA L 9.2 (4545) TCA S 15.6 (7712)
TTG L 22.9 (11340) TCG S 4.8 (2397)
CTT L 23.9 (11829) CCT P 18.9 (9358)
CTC L 17.1 (8479) CCC P 10.1 (5010)
CTA L 8.5 (4216) CCA P 19.1 (9461)
CTG L 12.7 (6304) CCG P 4.7 (2312)
ATT I 25.1 (12411) ACT T 17.1 (8490)
ATC I 16.3 (8071) ACC T 14.3 (7100)
ATA I 12.9 (6386) ACA T 14.9 (7391)
ATG M 22.7 (11218) ACG T 4.3 (2147)
GTT V 26.1 (12911) GCT A 26.7 (13201)
GTC V 11.9 (5894) GCC A 16.2 (8026)
GTA V 7.7 (3803) GCA A 21.4 (10577)
GTG V 21.4 (10610) GCG A 6.3 (3123)
TAT Y 15.7 (7779) TGT C 8.1 (3995)
TAC Y 14.9 (7367) TGC C 8.0 (3980)
TAA * 0.9 (463) TGA * 1.0 (480)
TAG * 0.5 (263) TGG W 13.0 (6412)
CAT H 14.0 (6930) CGT R 6.6 (3291)
CAC H 11.6 (5759) CGC R 6.2 (3093)
CAA Q 20.5 (10162) CGA R 4.1 (2018)
CAG Q 16.2 (8038) CGG R 3.1 (1510)
AAT N 22.4 (11088) AGT S 12.6 (6237)
AAC N 22.8 (11284) AGC S 11.3 (5594)
AAA K 26.9 (13334) AGA R 14.8 (7337)
AAG K 35.9 (17797) AGG R 13.3 (6574)
GAT D 32.4 (16040) GGT G 20.9 (10353)
GAC D 20.4 (10097) GGC G 13.4 (6650)
GAA E 33.2 (16438) GGA G 22.3 (11022)
GAG E 33.2 (16426) GGG G 13.0 (6431)
在一些实施例中，编码本披露的杀昆虫多肽的重组核酸分子具有玉蜀黍优化的密码子。
已知另外的序列修饰增强细胞宿主中的基因表达。这些包括清除序列，这些序列编码假的聚腺苷化信号、外显子-内含子剪接位点信号、转座子样重复和可能不利于基因表达的其他良好表征的序列。可以将序列的GC含量调整至给定细胞宿主的平均水平，如参考在该宿主细胞中表达的已知基因而计算的。如在此使用的术语“宿主细胞”是指包含载体并支持表达载体的复制和/或表达的细胞。宿主细胞可以是原核细胞如大肠杆菌，或真核细胞如酵母、昆虫、两栖类或哺乳动物细胞、或单子叶或双子叶植物细胞。单子叶宿主细胞的实例是玉蜀黍宿主细胞。当可能时，修饰序列以避免出现预测的发夹二级mRNA结构。
表达盒可以另外包含5′前导序列。这些前导序列可以起到增强翻译的作用。翻译前导序列是本领域已知的并且包括：小核糖核酸病毒前导序列，例如，EMCV前导序列(脑心肌炎5’非编码区域)(Elroy-Stein，et al.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：6126-6130[Elroy-Stein等人，(1989)，美国国家科学院院刊，86：6126-6130])；马铃薯Y病毒组前导序列，例如，TEV前导序列(烟草蚀纹病毒)(Gallie，et al.，(1995)Gene 165(2)：233-238[Gallie等人，(1995)，基因，165(2)：233-238])；MDMV前导序列(玉蜀黍矮花叶病毒)、人类免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)(Macejak，et al.，(1991)Nature 353：90-94[Macejak等人，(1991)，自然，353：90-94])；来自苜蓿花叶病病毒的外壳蛋白mRNA的非翻译前导序列(AMV RNA 4)(Jobling，et al.，(1987)Nature 325：622-625[Jobling等人，(1987)，自然，325：622-625])；烟草花叶病毒前导序列(TMV)(Gallie，et al.，(1989)in MolecularBiology of RNA，ed.Cech(Liss，New York)，pp.237-256[Gallie等人，(1989)，在：RNA的分子生物学，编辑：Cech(丽丝，纽约)，第237-256页])；和玉蜀黍褪绿斑驳病毒前导序列(MCMV)(Lommel，et al.，(1991)Virology 81：382-385[Lommel等人，(1991)，病毒学，81：382-385])。还参见，Della-Cioppa，et al.，(1987)Plant Physiol.84：965-968[Della-Cioppa等人，(1987)，植物生理学，84：965-968]。此类构建体还可以包含“信号序列”或“前导序列”，以促进该肽的共翻译成或翻译后运输至某些细胞内结构，如叶绿体(或其他质体)、内质网或高尔基体。
如在此使用的“信号序列”是指已知或怀疑导致跨细胞膜的共翻译或翻译后肽运输。在真核生物中，这典型地涉及分泌到高尔基体内，其中具有某些产生的糖基化。细菌的杀昆虫毒素经常被合成为原毒素，它们是在该靶有害生物的肠中经蛋白水解激活(Chang，(1987)Methods Enzymol.153：507-516[Chang，(1987)，酶学方法，153：507-516])。在一些实施例中，该信号序列位于该天然的序列中，或可以源自实施例的序列。如在此使用的术语“前导序列”是指当翻译时产生足以引发肽链与亚细胞器的共翻译转运的氨基酸序列的任何序列。因此，这包括通过进入内质网内、进入液泡、质体(包括叶绿体、线粒体)等中来对运输和/或糖基化进行靶向的前导序列。靶向叶绿体类囊体腔室的核编码蛋白具有由基质靶向信号肽和腔靶向信号肽组成的特征二分转运肽。基质靶向信息位于转运肽的氨基-近端部分。腔靶向信号肽位于转运肽的羧基近端部分，并且包含用于靶向腔的所有信息。最近对高等植物叶绿体的蛋白质组学的研究已经在许多核编码的腔蛋白质的鉴定中实现(Kieselbach et al.FEBS LETT 480：271-276，2000；Peltier et al.Plant Cell 12：319-341，2000；Bricker et al.Biochim.Biophys Acta 1503：350-356，2001[Kieselbach等人，欧洲生化学会联盟通讯，480：271-276，2000；Peltier等人，植物细胞，12：319-341，2000；Bricker等人，生物化学与生物物理学报，1503：350-356，2001])，根据本披露可能使用该核编码的腔蛋白质的腔靶向信号肽。Kieselbach et al.，Photosynthesis Research，78：249-264，2003[Kieselbach等人，“光合作用研究”，78：249-264，2003]报道了来自拟南芥属约80种蛋白质以及来自菠菜和豌豆的同源蛋白质。特别地，该出版物的表2(其通过引用并入本说明书中)披露了通过其登录号鉴别的来自叶绿体腔的85种蛋白质(还参见美国专利申请公开2009/09044298)。此外，最近公开的水稻基因组草拟版本(Goff et al，Science296：92-100，2002[Goff等人，科学，296：92-100，2002])是可以根据本披露使用的用于腔靶向信号肽的合适来源。
本领域技术人员熟知的合适的叶绿体转运肽(CTP)还包含嵌合CTP，这些嵌合CTP包括但不限于：来自以下各项的CTP的N末端结构域、中心结构域或C末端结构域：水稻1-脱氧-D木酮糖-5-磷酸合酶、水稻-超氧化物歧化酶、水稻-可溶性淀粉合酶、水稻-NADP-依赖性苹果酸酶、水稻-磷酸2-脱氢-3-脱氧庚酸醛缩酶2、水稻-L-抗坏血酸过氧化物酶5、水稻-磷酸葡聚糖水二激酶、玉蜀黍ssRUBISCO、玉蜀黍-β-葡糖苷酶、玉蜀黍-苹果酸脱氢酶、玉蜀黍硫氧还蛋白M-型(美国专利申请公开2012/0304336)。美国专利公开物US 20130205440A1、US 20130205441 A1和US 20130210114 A1的叶绿体转运肽。
可以针对在叶绿体中的表达来优化待靶向该叶绿体的杀昆虫基因，以解决植物核与该细胞器之间密码子使用的差异。以此方式，感兴趣的核酸可使用叶绿体优先的密码子进行合成。参见，例如，美国专利号5,380,831，其通过引用结合在此。
在制备表达盒时，可以操作各种DNA片段，以提供处于适当方向以及合适时，处于适当阅读框中的DNA序列。为此，可使用衔接子(adapter)或接头以连接DNA片段，或可以涉及其他操纵以提供方便的限制位点、去除多余的DNA、去除限制位点等。出于这个目的，可以涉及体外诱变、引物修复、限制性酶切(restriction)、退火、再取代(例如转换和颠换)。
许多启动子可用于实施这些实施例。可基于所需结果，选择启动子。核酸可与组成性、组织优先的、可诱导的或其他启动子组合用于在宿主生物体中的表达。用于植物宿主细胞的适合的组成型启动子包括例如Rsyn7启动子的核心启动子以及披露于WO 1999/43838和美国专利号6,072,050中的其他组成型启动子；核心CaMV35S启动子(Odell，et al.，(1985)Nature 313：810-812[Odell等人，(1985)，自然，313：810-812])；水稻肌动蛋白(McElroy，et al.，(1990)Plant Cell 2：163-171[McElroy等人，(1990)，植物细胞，2：163-171])；泛素(Christensen，et al.，(1989)Plant Mol.Biol.12：619-632 andChristensen，et al.，(1992)Plant Mol.Biol.18：675-689[Christensen等人，(1989)，植物分子生物学，12：619-632和Christensen等人，(1992)，植物分子生物学，18：675-689])；pEMU(Last，et al.，(1991)Theor.Appl.Genet.81：581-588[Last等人，(1991)，理论与应用遗传学，81：581-588])；MAS(Velten，et al.，(1984)EMBO J.3：2723-2730[Velten等人，(1984)，欧洲分子生物学杂志，3：2723-2730])；ALS启动子(美国专利号5,659,026)等。其他组成型启动子包括例如美国专利号5,608,149、5,608,144、5,604,121、5,569,597、5,466,785、5,399,680、5,268,463、5,608,142和6,177,611中所讨论的那些。合适的组成型启动子还包括在几乎所有组织中具有强表达但在花粉中具有低表达的启动子，这些启动子包括但不限于：美国专利US 8,338,662中所披露的香蕉条斑病毒(Acuminata Yunnan)启动子(BSV(AY))、美国专利US 8,350,121中所披露的香蕉条斑病毒(Acuminata Vietnam)启动子(BSV(AV))、和美国专利US 8,395,022中所披露的香蕉条斑病毒(Mysore)启动子(BSV(MYS))。
根据期望的结果，从诱导型启动子表达基因可能是有益的。用于调节植物中实施例的核苷酸序列表达的特别感兴趣的是伤口诱导型启动子。这种伤口诱导型启动子可能对昆虫摄食引起的损害作出反应，并且包括马铃薯蛋白酶抑制剂(pin II)基因(Ryan，(1990)Ann.Rev.Phytopath.28：425-449；Duan，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14：494-498[Ryan，(1990)，植物病理学年评，28：425-449；Duan等人，(1996)，自然生物技术，14：494-498])；wun1和wun2(美国专利号5，428，148)；win1和win2(Stanford，et al.，(1989)Mol.Gen.Genet.215：200-208[Stanford等人，(1989)，分子遗传和基因组学，215：200-208])；系统素(McGurl，et al.，(1992)Science 225：1570-1573[McGurl等人，(1992)，科学，225：1570-1573])；WIP1(Rohmeier，et al.，(1993)Plant Mol.Biol.22：783-792；Eckelkamp，et al.，(1993)FEBS Letters 323：73-76[Rohmeier等人，(1993)，植物分子生物学，22：783-792；Eckelkamp等人，(1993)，欧洲生化学会联盟通讯，323：73-76])；MPI基因(Corderok，et al.，(1994)Plant J.6(2)：141-150[Corderok等人，(1994)，植物杂志，6(2)：141-150])等，其通过引用结合在此。
此外，可以在实施例的方法和核苷酸构建体中使用病原体诱导型启动子。此类病原体诱导型启动子包括来自病程相关蛋白(PR蛋白)的那些，这些病程相关蛋白在由病原体侵染后被诱导；例如PR蛋白、SAR蛋白、β-1，3-葡聚糖酶、几丁质酶等。参见，例如，Redolfi，et al.，(1983)Neth.J.Plant Pathol.89：245-254；Uknes，et al.，(1992)Plant Cell 4：645-656and Van Loon，(1985)Plant Mol.Virol.4：111-116[Redolfi等人，(1983)，荷兰植物病理学杂志，89：245-254；Uknes等人，(1992)，植物细胞，4：645-656；以及Van Loon，(1985)，植物分子病毒学，4：111-116]。还参见，WO 1999/43819，其通过引用结合在此。
感兴趣的是在病原体侵染部位处或附近局部表达的启动子。参见，例如，Marineau，et al.，(1987)Plant Mol.Biol.9：335-342；Matton，et al.，(1989)MolecularPlant-Microbe Interactions 2：325-331；Somsisch，et al.，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：2427-2430；Somsisch，et al.，(1988)Mol.Gen.Genet.2：93-98 and Yang，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA93：14972-14977[Marineau等人，(1987)，植物分子生物学，9：335-342；Matton等人，(1989)，分子植物-微生物相互作用，2：325-331；Somsisch等人，(1986)，美国国家科学院院刊，83：2427-2430；Somsisch等人，(1988)，分子遗传和基因组学，2：93-98和Yang，(1996)，美国国家科学院院刊，93：14972-14977]。还参见，Chen，et al.，(1996)Plant J.10：955-966；Zhang，et al.，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA91：2507-2511；Warner，et al.，(1993)Plant J.3：191-201；Siebertz，et al.，(1989)Plant Cell 1：961-968[Chen等人，(1996)，植物杂志，10：955-966；Zhang等人，(1994)，美国国家科学院院刊，91：2507-2511；Wamer等人，(1993)，植物杂志，3：191-201；Siebertz等人，(1989)，植物细胞，1：961-968]；美国专利号5,750,386(线虫诱导的)，以及在其中引用的参考文献。特别感兴趣的是玉蜀黍PRms基因的诱导型启动子，该基因的表达是由病原体串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)诱导(参见，例如，Cordero，et al.，(1992)Physiol.Mol.Plant Path.41：189-200[Cordero等人，(1992)，生理与分子植物病理学，41：189-200])。
可以使用化学调节型启动子以通过应用外源化学调节剂来调节植物中的基因表达。根据目标，启动子可以是化学诱导型启动子，其中施用化学品来诱导基因表达，或化学抑制型启动子，其中施用化学品来抑制基因表达。化学品诱导型启动子在本领域中是已知的，并且包括但不限于：玉蜀黍In2-2启动子(其由苯磺酰胺除草剂安全剂激活)、玉蜀黍GST启动子(其由用作发芽前除草剂的疏水亲电子化合物激活)、以及烟草PR-1a启动子(其由水杨酸激活)。其他感兴趣的化学品调节型启动子包括类固醇应答启动子(参见，例如，Schena，et al.，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：10421-10425 and McNellis，etal.，(1998)Plant J.14(2)：247-257[Schena等人，(1991)，美国国家科学院院刊，88：10421-10425和McNellis等人，(1998)，植物杂志，14(2)：247-257]中的糖皮质激素诱导型启动子)以及四环素诱导型和四环素抑制型启动子(参见，例如，Gatz，et al.，(1991)Mol.Gen.Genet.227：229-237[Gatz等人，(1991)，分子遗传学和基因组学，227：229-237]，以及美国专利号5,814,618和5,789,156)，其通过引用结合在此。
组织优先的启动子可以用于靶向特定植物组织内的增强的杀昆虫多肽表达。组织优先的启动子包括以下各项中讨论的那些：Yamamoto，et al.，(1997)Plant J.12(2)255-265；Kawamata，et al.，(1997)Plant Cell Physiol.38(7)：792-803；Hansen，et al.，(1997)Mol.Gen Genet.254(3)：337-343；Russell，et al.，(1997)Transgenic Res.6(2)：157-168；Rinehart，et al.，(1996)Plant Physiol.112(3)：1331-1341；Van Camp，et al.，(1996)Plant Physiol.112(2)：525-535；Canevascini，et al.，(1996)Plant Physiol.112(2)：513-524；Yamamoto，et al.，(1994)Plant Cell Physiol.35(5)：773-778；Lam，(1994)Results Probl.Cell Differ.20：181-196；Orozco，et al.，(1993)Plant Mol Biol.23(6)：1129-1138；Matsuoka，et al.，(1993)Proc Natl.Acad.Sci.USA 90(20)：9586-9590and Guevara-Garcia，et al.，(1993)Plant J.4(3)：495-505[Yamamoto等人，(1997)，植物杂志，12(2)255-265；Kawamata等人，(1997)，植物细胞生理学，38(7)：792-803；Hansen等人，(1997)，分子遗传和基因组学，254(3)：337-343；Russell等人，(1997)，转基因研究，6(2)：157-168；Rinehart等人，(1996)，植物生理学，112(3)：1331-1341；Van Camp等人，(1996)，植物生理学，112(2)：525-535；Canevascini等人，(1996)，植物生理学，112(2)：513-524；Yamamoto等人，(1994)，植物细胞生理学，35(5)：773-778；Lam，(1994)，细胞分化中的结果和问题，20：181-196；Orozco等人，(1993)，植物分子生物学，23(6)：1129-1138；Matsuoka等人，(1993)，美国国家科学院院刊，90(20)：9586-9590和Guevara-Garcia等人，(1993)，植物杂志，4(3)：495-505]。必要的话，此类启动子可经修饰用于弱表达。
叶子优先的启动子在本领域中是已知的。参见，例如，Yamamoto，et al.，(1997)Plant J.12(2)：255-265；Kwon，et al.，(1994)Plant Physiol.105：357-67；Yamamoto，etal.，(1994)Plant Cell Physiol.35(5)：773-778；Gotor，et al.，(1993)Plant J.3：509-18；Orozco，et al.，(1993)Plant Mol.Biol.23(6)：1129-1138 and Matsuoka，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(20)：9586-9590[Yamamoto等人，(1997)，植物杂志，12(2)：255-265；Kwon等人，(1994)，织物生理学，105：357-67；Yamamoto等人，(1994)，植物细胞生理学，35(5)：773-778；Gotor等人，(1993)，植物细胞，3：509-18；Orozco等人，(1993)，植物分子生物学，23(6)：1129-1138和Matsuoka等人，(1993)，美国国家科学院院刊，90(20)：9586-9590]。
根优先的或根特异性的启动子是已知的，并且可以从来自文献中的许多可获得的来选择，或者从不同的相容物种重新分离。参见，例如，Hire，et al.，(1992)PlantMol.Biol.20(2)：207-218[Hire等人，(1992)，植物分子生物学，20(2)：207-218](大豆根特异性谷氨酰胺合成酶基因)；Keller and Baumgartner，(1991)Plant Cell 3(10)：1051-1061[Keller和Baumgartner，(1991)，植物细胞，3(10)：1051-1061](法国菜豆的GRP 1.8基因中的根特异性控制元件)；Sanger，et al.，(1990)Plant Mol.Biol.14(3)：433-443[Sanger等人，(1990)，植物分子生物学，14(3)：433-443](根癌土壤杆菌的甘露碱合酶(MAS)基因的根特异性启动子)和Miao，et al.，(1991)Plant Cell 3(1)：11-22[Miao等人，(1991)，植物细胞，3(1)：11-22](编码细胞溶质谷氨酰胺合成酶(GS)的全长cDNA克隆，其在大豆的根和根结节中表达)。还参见，Bogusz，et al.，(1990)Plant Cell2(7)：633-641[Bogusz等人，(1990)，植物细胞，2(7)：633-641]，其中描述了从来自固氮的非豆科植物榆科山黄麻(Parasponia andersonii)以及相关的非固氮的非豆科植物山黄麻(Trematomentosa)的血红蛋白基因分离的两个根特异性启动子。这些基因的启动子被连接至β-葡萄糖醛酸酶报道基因并且被引入非豆科植物烟草(Nicotiana tabacum)以及豆科植物百脉根(Lotus corniculatus)两者中，并且在两个实例中根特异性启动子活性被保留。Leach和Aoyagi(1991)描述了他们对发根土壤杆菌的高表达的roIC和roID根诱导基因的启动子的分析(参见，Plant Science(Limerick)79(1)：69-76[植物科学(利默里克)79(1)：69-76])。他们推断在那些启动子中增强子和组织优先的DNA决定簇不相关联。Teeri等人(1989)使用与lacZ的基因融合以显示编码章鱼碱合酶的农杆菌属T-DNA基因尤其是在根尖的表皮中有活性，并且TR2′基因在完整植物中具有根特异性并且被叶组织中的创伤刺激，这是与杀昆虫的或杀幼虫的基因一起使用的特征的特别所希望的组合(参见，EMBO J.8(2)：343-350[欧洲分子生物学杂志，8(2)：343-350])。与nptII(新霉素磷酸转移酶II)融合的TR1′基因显示相似的特征。另外的根优先的启动子包括VfENOD-GRP3基因启动子(Kuster，et al.，(1995)Plant Mol.Biol.29(4)：759-772[Kuster等人，(1995)，植物分子生物学，29(4)：759-772])；和rolB启动子(Capana，et al.，(1994)Plant Mol.Biol.25(4)：681-691[Capana等人，(1994)，植物分子生物学，25(4)：681-691])。还参见，美国专利号5,837,876、5,750,386、5,633,363、5,459,252、5,401,836、5,110,732和5,023,179。美国专利申请US20130117883中披露了拟南芥根优先的调节序列。美国专利申请US 20120210463中披露了根优先的高粱属(双色高粱)RCc3启动子。
“种子优先的”启动子包括“种子特异性”启动子(在种子发育期间有活性的那些启动子如种子贮藏蛋白的启动子)以及“种子发芽性”启动子(在种子发芽期间有活性的那些启动子)。参见，Thompson，et al.，(1989)BioEssays 10：108[Thompson等人，(1989)，生物测定，10：108]，其通过引用结合在此。这样的种子优选的启动子包括但不限于Cim1(细胞分裂素诱导的信息)；cZ1981(玉蜀黍19kDa玉蜀黍蛋白)；和milps(肌醇-1-磷酸合酶)(参见，美国专利号6,225,529，其通过引用结合在此)。γ-玉蜀黍蛋白和Glb-1是胚乳特异性启动子。对于双子叶植物，种子特异性启动子包括但不限于：库尼兹(Kunitz)胰蛋白酶抑制剂3(KTi3)(Jofuku and Goldberg，(1989)Plant Cell 1：1079-1093[Jofuku和Goldberg，(1989)，植物细胞，1：1079-1093])、豆β-菜豆素、油菜籽蛋白、β-伴大豆球蛋白、大豆球蛋白1、大豆凝集素、十字花科蛋白等。对于单子叶植物，种子特异性启动子包括但不限于：玉蜀黍15kDa玉蜀黍蛋白、22kDa玉蜀黍蛋白、27kDa玉蜀黍蛋白、g-玉蜀黍蛋白、蜡质、收缩素1、收缩素2、球蛋白1等。还参见，WO 2000/12733，其中披露了来自end1和end2基因的种子优先的启动子；其通过引用结合在此。在双子叶植物中，种子特异性启动子包括但不限于：来自拟南芥属的种皮启动子，pBAN；和来自拟南芥属的早期种子启动子，p26、p63、和p63tr(美国专利号7,294,760和7,847,153)。在特定组织中具有“优选”表达的启动子在该组织中比在至少一种其他植物组织中更大程度地表达。一些组织优先的启动子几乎专门在特定组织中表达。
当希望低水平表达时，可使用弱启动子。通常，如在此使用的术语“弱启动子”是指以低水平驱动编码序列的表达的启动子。低水平表达旨在约1/1000转录物至约1/100,000转录物至约1/500,000转录物的水平。可替代地，应当认识到，术语“弱启动子”还涵盖仅在少数细胞中驱动表达但不在其他细胞中表达以给出完全低表达水平的启动子。当启动子以不可接受的高水平驱动表达时，可以删除或修饰部分启动子序列以降低表达水平。
这样弱组成型启动子包括，例如，Rsyn7启动子的核心启动子(WO 1999/43838和美国专利号6,072,050)，核心35S CaMV启动子等。其他组成型启动子包括例如美国专利号5,608,149、5,608,144、5,604,121、5,569,597、5,466,785、5,399,680、5,268,463、5,608,142和6,177,611中所讨论的那些，其通过引用结合在此。
以上启动子的列表并不意指是限制性的。任何合适的启动子都可用于实施例中。
通常，表达盒将包括可选标记基因，用于选择转化的细胞。可选标记基因被利用于选择转化的细胞或组织。标志物基因包括编码抗生素抗性的基因，如编码新霉素磷酸转移酶II(NEO)和潮霉素磷酸转移酶(HPT)的基因，以及赋予对除草剂化合物(如草胺磷、溴苯腈、咪唑啉酮和2，4-二氯苯氧基乙酸(2，4-D))的抗性的基因。合适的可选标记基因的另外的实例包括但不限于编码对以下各项具有抗性的基因：氯霉素(Herrera Estrella，etal.，(1983)EMBO J.2：987-992[Herrera Estrella等人，(1983)，欧洲分子生物学杂志，2：987-992])；甲氨蝶呤(Herrera Estrella，et al.，(1983)Nature 303：209-213 andMeijer，et al.，(1991)Plant Mol.Biol.16：807-820[Herrera Estrella等人，(1983)，自然，303：209-213和Meijer等人，(1991)，植物分子生物学，16：807-820])；链霉素(Jones，etal.，(1987)Mol.Gen.Genet.210：86-91[Jones等人，(1987)，分子遗传学和基因组学，210：86-91])；链霉素(Bretagne-Sagnard，et al.，(1996)Transgenic Res.5：131-137[Bretagne-Sagnard等人，(1996)，转基因研究，5：131-137])；博莱霉素(Hille，et al.，(1990)Plant Mol.Biol.7：171-176[Hille等人，(1990)，植物分子生物学，7：171-176])；磺酰胺(Guerineau，et al.，(1990)Plant Mol.Biol.15：127-136[Guerineau等人，(1990)，植物分子生物学，15：127-136])；溴苯腈(Stalker，et al.，(1988)Science 242：419-423[Stalker等人，(1988)，科学，242：419-423])；草甘膦(Shaw，et al.，(1986)Science 233：478-481[Shaw等人，(1986)，科学，233：478-481]和美国专利申请序列号10/004,357和10/427,692)；草丁膦(DeBlock，et al.，(1987)EMBO J.6：2513-2518[DeBlock等人，(1987)，欧洲分子生物学杂志，6：2513-2518])。通常参见，Yarranton，(1992)Curr.Opin.Biotech.3：506-511；Christopherson，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：6314-6318；Yao，etal.，(1992)Cell 71：63-72；Reznikoff，(1992)Mol.Microbiol.6：2419-2422；Barkley，etal.，(1980)in The Operon，pp.177-220；Hu，et al.，(1987)Cell 48：555-566；Brown，etal.，(1987)Cell 49：603-612；Figge，et al.，(1988)Cell 52：713-722；Deuschle，et al.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86：5400-5404；Fuerst，et al.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：2549-2553；Deuschle，et al.，(1990)Science 248：480-483；Gossen，(1993)Ph.D.Thesis，University of Heidelberg；Reines，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：1917-1921；Labow，et al.，(1990)Mol.Cell.Biol.10：3343-3356；Zambretti，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：3952-3956；Baim，et al.，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：5072-5076；Wyborski，et al.，(1991)Nucleic AcidsRes.19：4647-4653；Hillenand-Wissman，(1989)Topics Mol.Struc.Biol.10：143-162；Degenkolb，et al.，(1991)Antimicrob.Agents Chemother.35：1591-1595；Kleinschnidt，et al.，(1988)Biochemistry 27：1094-1104；Bonin，(1993)Ph.D.Thesis，University ofHeidelberg；Gossen，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5547-5551；Oliva，etal.，(1992)Antimicrob.Agents Chemother.36：913-919；Hlavka，et al.，(1985)Handbookof Experimental Pharmacology，Vol.78(Springer-Verlag，Berlin)and Gill，et al.，(1988)Nature334：721-724[Yarranton，(1992)，当前对生物技术的意见，3：506-511；Christopherson等人，(1992)，美国国家科学院院刊，89：6314-6318；Yao等人，(1992)，细胞，71：63-72；Reznikoff，(1992)，分子微生物学，6：2419-2422；Barkley等人，(1980)，在：操纵子，第177-220页；Hu等人，(1987)，细胞，48：555-566；Brown等人，(1987)，细胞，49：603-612；Figge等人，(1988)，细胞，52：713-722；Deuschle等人，(1989)，美国国家科学院院刊，86：5400-5404；Fuerst等人，(1989)，美国国家科学院院刊，86：2549-2553；Deuschle等人，(1990)，科学，248：480-483；Gossen，(1993)，博士论文，海德堡大学；Reines等人，(1993)，美国国家科学院院刊，90：1917-1921；Labow等人，(1990)，分子与细胞生物学，10：3343-3356；Zambretti等人，(1992)，美国国家科学院院刊，89：3952-3956；Baim等人，(1991)，美国国家科学院院刊，88：5072-5076；Wyborski等人，(1991)，核酸研究，19：4647-4653；Hillenand-Wissman，(1989)，热点分子结构生物学，10：143-162；Degenkolb等人，(1991)，抗微生物剂化学疗法，35：1591-1595；Kleinschnidt等人，(1988)，生物化学，27：1094-1104；Bonin，(1993)，博士论文，海德堡大学；Gossen等人，(1992)，美国国家科学院院刊，89：5547-5551；Oliva等人，(1992)，抗微生物剂化学疗法，36：913-919；Hlavka等人，(1985)，实验药理学手册，第78页，(施普林格出版社，柏林)和Gill等人，(1988)，自然，334：721-724]。此类披露通过引用结合在此。
以上可选标记基因的列表并不意指是限制性的。在实施例中可以使用任何可选标记基因。
DNA构建体
涵盖编码本公开的杀昆虫多肽的多核苷酸的DNA构建体。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与异源调节元件有效地连接的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234和SEQ ID NO：236的PIP-45-1多肽的SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112、SEQ IDNO：114、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ IDNO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156、SEQ IDNO：158、SEQ ID NO：218、SEQ ID NO：220或SEQ ID NO：222的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234和SEQ ID NO：236的PIP-45-1多肽的SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：220或SEQ ID NO：222的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码PIP-45-1多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ IDNO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234或SEQID NO：236的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ IDNO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ ID NO：236的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-1多肽的全长序列。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ IDNO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ IDNO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ IDNO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ IDNO：232、SEQ ID NO：234或SEQ ID NO：236相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ ID NO：236相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：1相比具有至少99.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQID NO：17相比具有至少99.4％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：19相比具有至少99.6％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：21相比具有至少87％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：23相比具有至少88％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：27相比具有至少99.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：29相比具有至少99.8％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：31相比具有至少92.3％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：33相比具有至少91.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：35相比具有至少95.4％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：39相比具有至少93％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：43相比具有至少97.5％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：45相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-45-2多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：235和SEQ ID NO：237的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：155、SEQID NO：157、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：219、SEQ ID NO：221或SEQ ID NO：223的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235和SEQ IDNO：237的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQID NO：143、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：221或SEQ ID NO：223的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码PIP-45-2多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ IDNO：233、SEQ ID NO：235和SEQ ID NO：237的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ IDNO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ IDNO：235或SEQ ID NO：237的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-2多肽的全长序列。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ IDNO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ IDNO：233、SEQ ID NO：235或SEQ ID NO：237相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235或SEQ ID NO：237相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：2相比具有至少99.2％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQID NO：18相比具有至少98.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：20相比具有至少96％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：22相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：24相比具有至少81％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：28相比具有至少99.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：30相比具有至少98.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：32相比具有至少92％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：34相比具有至少91.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：36相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：40相比具有至少90％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：44相比具有至少94％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：46相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-64-1多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71和SEQ ID NO：238的PIP-64-1多肽的SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：163、SEQID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178或SEQ ID NO：224的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：238的PIP-64-1多肽的SEQ IDNO：160、SEQ ID NO：165或SEQ ID NO：224的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码PIP-64-1多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：53、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ IDNO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71或SEQ ID NO：238的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：56、SEQID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQID NO：69、SEQ ID NO：71或SEQ ID NO：238相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：53相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQID NO：58相比具有至少99.7％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：238相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-64-2多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72和SEQ ID NO：239的PIP-64-2多肽的SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQID NO：164、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：179或SEQ ID NO：225的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：239的PIP-64-2多肽的SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：166或SEQ ID NO：225的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码PIP-64-2多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：239的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：239相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：54相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQID NO：55相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：59相比具有至少91％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：239相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-74-1多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75和SEQ ID NO：77的PIP-74-1多肽的SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：184的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码PIP-74-1多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：77的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：77相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：73相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQID NO：75相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：77相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-74-2多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：78的PIP-74-2多肽的SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：185的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码PIP-74-2多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQ ID NO：78的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-74-2多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQ ID NO：78相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：74相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQID NO：76相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：78相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-75多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87的PIP-75多肽的SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：189、SEQ IDNO：190、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：194的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87的PIP-75多肽的SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：194的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码PIP-75多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87的氨基酸序列足够同源的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-75多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-75多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-75多肽。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：79相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：80相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：81相比具有至少86％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：84相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：85相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：86相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：87相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-77多肽的多核苷酸的DNA构建体。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ IDNO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244和SEQ ID NO：245的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQID NO：205、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：208、SEQ ID NO：209、SEQ ID NO：210、SEQ ID NO：211、SEQ ID ID NO：212、SEQ ID NO：213、SEQ ID NO：214、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：230或SEQ ID NO：231的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含分别编码SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242和SEQ ID NO：245的PIP-77多肽的SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：198、SEQ IDNO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228或SEQ ID NO：231的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ IDNO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244或SEQ ID NO：245的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ IDNO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ IDNO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-77多肽的全长序列。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ IDNO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244或SEQ ID NO：245相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ IDNO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244或SEQ ID NO：245相比具有至少约80％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ IDNO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244或SEQ ID NO：245相比具有至少约90％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：241、SEQID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244或SEQ ID NO：245相比具有至少约95％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245相比具有至少约80％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ IDNO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ IDNO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245相比具有至少约95％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：88相比具有至少93％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：89相比具有至少97％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：90相比具有至少99％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：92相比具有至少97％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：93相比具有至少87％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：94相比具有至少86％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：95相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：96相比具有至少84％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：97相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：98相比具有至少83％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ IDNO：100相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：241相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：242相比具有至少83％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该DNA构建体包含编码与SEQ ID NO：245相比具有至少96％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。
植物转化
这些实施例的方法涉及将多肽或多核苷酸引入植物。如在此使用的“引入”意指以下述方式给予植物多核苷酸或多肽，所述方式使得该序列可以访问植物细胞的内部。这些实施例的方法不依靠将多核苷酸或多肽引入植物的具体方法，只要多核苷酸或多肽可以访问植物的至少一个细胞的内部。将多核苷酸或多肽引入植物的方法在本领域内是已知的，这些方法包括但不限于：稳定转化方法、瞬时转化方法、和病毒介导方法。
如在此使用的“稳定转化”意指被引入植物的核苷酸构建体整合到植物的基因组并且能够被其后代遗传。如在此使用的“瞬时转化”意指多核苷酸被引入植物中但并不整合到植物的基因组中，或者多肽被引入植物中。如在此使用的“植物”是指整个植物、植物器官(例如，叶、茎、根等)、种子、植物细胞、繁殖体、胚以及其子代。植物细胞可以是分化的或未分化的(例如，愈伤组织、悬浮培养物细胞、原生质体、叶细胞、根细胞、韧皮部细胞和花粉)。
转化方案以及将核苷酸序列引入植物中的方案，可根据要靶向转化的植物或者植物细胞的类型(即单子叶植物或者双子叶植物)而变化。将核苷酸序列引入植物细胞并随后插入植物基因组的合适方法包括显微注射(Crossway，et al.，(1986)Biotechniques 4：320-334[Crossway等人，(1986)，生物科技，4：320-334])、电穿孔(Riggs，et al.，(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：5602-5606[Riggs等人，(1986)，美国国家科学院院刊，83：5602-5606])、农杆菌介导的转化(美国专利号5,563,055和5,981,840)、直接基因转移(Paszkowski，et al.，(1984)EMBO J.3：2717-2722[Paszkowski等人，(1984)，欧洲分子生物学杂志，3：2717-2722])和弹道粒子加速(参见，例如，美国专利号4,945,050、5,879,918、5,886,244和5,932,782；Tomes，et al.，(1995)in Plant Cell，Tissue，and OrganCulture：Fundamental Methods，ed.Gamborg and Phillips，(Springer-Verlag，Berlin)and McCabe，et al.，(1988)Biotechnology 6：923-926[Tomes等人，(1995)，在：植物细胞，组织和器官培养：基本方法中，编辑：Gamborg和Phillips，(施普林格出版社，柏林)和McCabe等人，(1988)，生物科技，6：923-926])和Lecl转化(WO 00/28058)对于马铃薯转化参见，Tu，et al.，(1998)Plant Molecular Biology 37：829-838 and Chong，et al.，(2000)Transgenic Research9：71-78[Tu等人，(1998)，植物分子生物学，37：829-838和Chong等人，(2000)，转基因研究，9：71-78]。另外的转化程序可以在以下找到：Weissinger，et al.，(1988)Ann.Rev.Genet.22：421-477；Sanford，etal.，(1987)Particulate Science andTechnology 5：27-37(onion)；Christou，et al.，(1988)Plant Physiol.87：671-674(soybean)；McCabe，et al.，(1988)Bio/Technology 6：923-926(soybean)；Finer andMcMullen，(1991)In Vitro Cell Dev.Biol.27P：175-182(soybean)；Singh，et al.，(1998)Theor.Appl.Genet.96：319-324(soybean)；Datta，et al.，(1990)Biotechnology8：736-740(rice)；Klein，et al.，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：4305-4309(maize)；Klein，et al.，(1988)Biotechnology 6：559-563(maize)；US Patent Numbers5,240,855；5,322,783 and 5,324,646；Klein，et al.，(1988)Plant Physiol.91：440-444(maize)；Fromm，et al.，(1990)Biotechnology 8：833-839(maize)；Hooykaas-VanSlogteren，et al.，(1984)Nature(London)311：763-764；US Patent Number 5,736,369(cereals)；Bytebier，et al.，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：5345-5349(Liliaceae)；De Wet，et al.，(1985)in The Experimental Manipulation of OvuleTissues，ed.Chapman，et al.，(Longman，New York)，pp.197-209(pollen)；Kaeppler，etal.，(1990)Plant Cell Reports 9：415-418 and Kaeppler，et al.，(1992)Theor.Appl.Genet.84：560-566(whisker-mediated transformation)；D′Halluin，etal.，(1992)Plant Cell 4：1495-1505(electroporation)；Li，et al.，(1993)Plant CellReports 12：250-255 and Christou and Ford，(1995)Annals of Botany 75：407-413(rice)；Osjoda，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14：745-750(maize viaAgrobacterium tumefaciens)[Weissinger等人，(1988)，遗传学年评，22：421-477；Sanford等人，(1987)，粒子科学与技术，5：27-37(洋葱)；Christou等人，(1988)，植物生理学，87：671-674(大豆)；McCabe等人，(1988)，生物/技术，6：923-926(大豆)；Finer和McMullen，(1991)，体外细胞和发育生物学，27P：175-182(大豆)；Singh等人，(1998)，理论与应用遗传学，96：319-324(大豆)；Datta等人，(1990)，生物技术，8：736-740(水稻)；Klein等人，(1988)，美国国家科学院院刊，85：4305-4309(玉蜀黍)；Klein等人，(1988)，生物科技，6：559-563(玉蜀黍)；美国专利号5,240,855、5,322,783和5,324,646；Klein等人，(1988)，植物生理学，91：440-444(玉蜀黍)；Fromm等人，(1990)，生物科技，8：833-839(玉蜀黍)；Hooykaas-Van Slogteren等人，(1984)，自然(伦敦)，311：763-764；美国专利号5,736,369(谷物)；Bytebier等人，(1987)，美国国家科学院院刊，84：5345-5349(百合科)；De Wet等人，(1985)，在：卵巢组织的实验操作，编辑：Chapman等人，(朗文出版社，纽约)，第197-209页(花粉)；Kaeppler等人，(1990)，植物细胞报道，9：415-418和Kaeppler等人，(1992)，理论与应用遗传学，84：560-566(晶须介导的转化)；D′Halluin等人，(1992)，植物细胞，4：1495-1505(电穿孔)；Li等人，(1993)，植物细胞报道，12：250-255以及Christou和Ford，(1995)，植物学年报，75：407-413(水稻)；Osjoda等人，(1996)，自然生物科技，14：745-750(经由根癌土壤杆菌的玉蜀黍)]；其全部通过引用结合在此。
在具体实施例中，可以使用各种瞬时转化方法将实施例的序列提供给植物。此类瞬时转化方法包括但不限于：将本披露的杀昆虫多肽或其变体或片段直接引入植物中或者将本披露转录物的杀昆虫多肽引入植物中。此类方法包括例如显微注射或粒子轰击。参见，例如，Crossway，et al.，(1986)Mol Gen.Genet.202：179-185；Nomura，et al.，(1986)PlantSci.44：53-58；Hepler，et al.，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.91：2176-2180 andHush，et al.，(1994)The Journal of Cell Science107：775-784[Crossway等人，(1986)，分子遗传和基因组学，202：179-185；Nomura等人，(1986)，植物科学，44：53-58；Hepler等人，(1994)，美国国家科学院院刊，91：2176-2180和Hush等人，(1994)，细胞科学杂志，107：775-784]，其全部通过引用结合在此。可替代地，可以使用本领域已知的技术将本披露多核苷酸的杀昆虫多肽瞬时转化到植物中。此类技术包括病毒载体系统和以排除后续DNA释放的方式沉淀多核苷酸。因此，可以从微粒结合的DNA进行转录，但其被释放以整合至基因组的频率大大降低了。这种方法包括使用包被有聚乙烯亚胺(PEI；西格玛(Sigma)#P3143)的粒子。
用于在植物基因组的特定位置定向插入多核苷酸的方法是本领域已知的。在一个实施例中，利用位点特异性重组系统实现多核苷酸在所期望的基因组位置的插入。参见，例如，WO 1999/25821、WO 1999/25854、WO 1999/25840、WO 1999/25855和WO 1999/25853，其全部通过引用结合在此。简而言之，本实施例的多核苷酸可以包含在侧翼为两个不相同重组位点的转移盒内。将转移盒引入植物中，该植物已经稳定地将靶位点并入其基因组，该靶位点侧接对应转移盒位点的两个不相同重组位点。提供了适当的重组酶，并且将该转移盒整合至靶位点。由此，感兴趣的多核苷酸被整合在植物基因组中特定的染色体位置。
植物转化载体可以由对于实现植物转化所需要的一个或多个DNA载体构成。例如，使用由一个以上连续DNA区段构成的植物转化载体是本领域常见的实践。在本领域内，这些载体经常被称为“二元载体”。二元载体以及具有辅助质粒的载体最通常被用于农杆菌介导的转化，其中对于实现有效转化所需要的DNA区段的大小以及复杂度是相当大的，并且将功能分到分离的DNA分子上是有利的。二元载体典型地包含质粒载体，该质粒载体包含T-DNA转移所需的顺式作用序列(如，左边界和右边界)、被工程化能够在植物细胞中表达的可选择的标志物、以及“感兴趣的基因”(被工程化能够在植物细胞中表达的基因，对于该植物细胞，产生转基因植物是所希望的)。在这种质粒载体上还存在着细菌复制所需要的序列。这些顺式作用序列以一种方式进行排列以便允许有效转移到植物细胞中并在其中进行表达。例如，该可选标记基因以及该杀有害生物基因位于该左边界与右边界之间。通常第二质粒载体包含反式作用因子，这些反式作用因子介导从农杆菌属到植物细胞的T-DNA转化。这种质粒经常包含这些毒性功能(Vir基因)，这些毒性功能允许由农杆菌属侵染植物细胞，并且通过在边界序列上的切割以及vir-介导的DNA转移来转移DNA，如在本领域中所理解的(Hellens and Mullineaux，(2000)Trends in Plant Science 5：446-451[Hellens和Mullineaux，(2000)，植物科学趋势，5：446-451])。若干种类型的农杆菌属菌株(例如，LBA4404、GV3101、EHA101、EHA105等)可以用于植物转化。该第二质粒载体是通过其他方法(如微粒轰击、显微注射、电穿孔、聚乙二醇等)转化这些植物所不必要的。
总体上，植物转化方法涉及将异源DNA转移到目标植物细胞中(例如，未成熟的或成熟的胚、悬浮培养物、未分化的愈伤组织、原生质体等)，随后应用最大阈值水平的适当选择(取决于可选标记基因)来从一组未转化的细胞物质中回收转化的植物细胞。在将异源外源DNA整合到植物细胞中之后，然后在该培养基中应用最大阈值水平的合适选择以杀灭这些未转化的细胞，并且通过定期转移到新鲜培养基中来分离和增殖从这种选择处理中存活的这些假定转化的细胞。通过连续传代和使用合适的选择进行攻击，鉴定并增殖了这些用该质粒载体转化的细胞。然后，可以使用分子和生物化学的方法来证实整合到该转基因植物的基因组中的感兴趣的异源基因的存在。
典型地将外植体转移到新鲜供应的相同培养基中并将其常规培养。随后，在被置于补充有最大阈值水平的选择试剂的再生培养基上之后，这些转化的细胞分化成枝条。然后，将这些枝条转移到选择性生根培养基中用于回收已生根的枝条或小植株。然后，该转基因小植株长成成熟植物并且产生能育的种子(例如，Hiei，et al.，(1994)The PlantJournal 6：271-282；Ishida，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14：745-750[Hiei等人，(1994)，植物杂志，6：271-282；Ishida等人，(1996)，自然生物科技，14：745-750])。典型地将外植体转移到新鲜供应的相同培养基中并将其常规培养。用于产生转基因植物的技术和方法的一般说明可见于Ayres and Park，(1994)Critical Reviews in Plant Science13：219-239 and Bommineni and Jauhar，(1997)Maydica 42：107-120[Ayres和Park，(1994)，植物科学的关键性评论，13：219-239以及Bommineni和Jauhar，(1997)，Maydica，42：107-120]。因为这种转化的材料包含多个细胞；转化的和未转化的细胞二者都存在于受试的靶愈伤组织或组织或细胞组群的任何部分中。杀灭未转化的细胞并允许转化的细胞进行增殖的能力导致了转化的植物培养物。通常地，去除未转化的细胞的能力是对于快速回收转化的植物细胞并且成功地生产转基因植物的一个限制。
已经被转化的细胞可根据常规方法生长为植物。参见，例如，McCormick，et al.，(1986)Plant Cell Reports5：81-84[McCormick等人，(1986)，植物细胞报道，5：81-84]。这些植物然后可以生长，并且用同样转化的菌株或不同的菌株授粉，并且所得杂交体具有鉴定的所需表型特征的组成型或诱导型表达。可以培养两代或更多代，以确保所需表型特征的表达稳定地保持并遗传，并且然后收获种子以确保已经实现了所需表型特征的表达。
可以通过使植物与病毒或者病毒核酸接触而向植物提供实施例的核苷酸构建体。通常，这类方法涉及将感兴趣的核苷酸构建体并入到病毒DNA或RNA分子中。应当认识到，实施例的重组蛋白最初可以被合成为病毒多蛋白的一部分，然后该病毒多蛋白的一部分可以通过在体内或体外蛋白水解加工，以产生所希望的杀昆虫多肽。还认识到，包含实施例的本披露的杀昆虫多肽的至少一部分氨基酸序列的这种病毒多蛋白可具有所需的杀有害生物活性。实施例涵盖这些病毒多蛋白和编码它们的核苷酸序列。为植物提供核苷酸构建体并在植物中产生所编码的蛋白质的方法是本领域已知的，该方法涉及病毒DNA或RNA分子。参见，例如，美国专利号5,889,191、5,889,190、5,866,785、5,589,367和5,316,931；其通过引用结合在此。
用于叶绿体转化的方法是本领域已知的。参见，例如，Svab，et al.，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：8526-8530；Svab and Maliga，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：913-917；Svab and Maliga，(1993)EMBO J.12：601-606[Svab等人，(1990)，美国国家科学院院刊，87：8526-8530；Svab和Maliga，(1993)，美国国家科学院院刊，90：913-917；Svab和Maliga，(1993)，欧洲分子生物学杂志，12：601-606]。该方法依赖于粒子枪递送包含可选择的标志物的DNA和经同源重组使DNA靶向质体基因组。另外，通过利用核编码的和质体导向的RNA合酶的组织优先的表达，通过反式激活沉默的质体携带的转基因，实现质体转化。这种系统己报导于McBride，et al.，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：7301-7305[McBride等人，(1994)，美国国家科学院院刊，91：7301-7305]中。
实施例进一步涉及实施例的转化植物的植物繁殖材料，这些繁殖材料包括但不限于种子、块茎、球茎、鳞茎、叶和根和枝条的插条。
实施例可以用于转化任何植物物种，这些任何植物物种包括但不限于：单子叶植物和双子叶植物。感兴趣的植物的实例包括但不限于：玉米(玉蜀黍)、芸苔属物种(例如，欧洲油菜(B.napus)、白菜型油菜(B.rapa)、芥菜(B.Juncea))，具体地可用作种子油来源的芸苔属物种的那些，苜蓿(alfalfa、Medicagosativa)、水稻(rice、Oryzasativa)、黑麦(rye，Secale cereale)、高粱(双色高粱、甜高粱)、小米(例如，珍珠粟(御谷(Pennisetumglaucum))、猪粟(黍稷)、粟(foxtail millet)(谷子)、穇子(龙爪稷(Eleusinecoracana)))、向日葵(sunflower，Helianthus annuus)、红花(safflower，Carthamustinctorius)、小麦(wheat，Triticum aestivum)、大豆(soybean，Glycine max)、烟草(tobacco，Nicotiana tabacum)、马铃薯(potato，Solanum tuberosum)、花生(peanut，Arachis hypogaea)、棉花(海岛棉、陆地棉)、红薯(甘薯(Ipomoea batatus))、木薯(cassava，Manihot esculenta)、咖啡豆(咖啡属物种(Coffea spp.))、椰子(coconut，Cocos nucifera)、菠萝(pineapple，Ananasco mosus)、柑橘树(柑橘属物种(Citrusspp.)、可可(cocoa，Theobroma cacao)、茶(野茶树)、香蕉(芭蕉属物种)、鳄梨(油梨(Persea americana))、无花果(fig，Ficus casica)、番石榴(guava，Psidium guajava)、芒果(杧果(Mangifera indica))、橄榄(油橄榄(Olea europaea))、番木瓜(papaya，Caricapapaya)、腰果(cashew，Anacardium occidentale)、夏威夷坚果(澳洲坚果(Macadamiaintegrifolia))、扁桃(巴旦杏)、甜菜(sugar beets、Beta vulgaris)、甘蔗(甘蔗属物种)、燕麦、大麦、蔬菜、观赏植物、和针叶树。
蔬菜包括番茄(西红柿)，生菜(例如，莴苣)，青豆(菜豆)，利马豆(大莱豆)，豌豆(山黎豆属物种)，以及黄瓜属的成员，如黄瓜(胡瓜)、香瓜(cantaloupe，C.cantalupensis)、以及甜瓜(musk melon，C.melo)。观赏植物包括杜鹃花(杜鹃花属物种)、八仙花(绣球花)、木槿(hibiscus、Hibiscus rosasanensis)、蔷薇(蔷薇属物种)、郁金香(郁金香属物种)、水仙花(水仙属物种)、矮牵牛花(矮牵牛)、康乃馨(香石竹)、猩猩木(一品红)、和菊花。可以用于实施实施例的针叶树包括，例如，松树，如火炬松(loblolly pine，Pinus taeda)、湿地松(slash pine，Pinus elliotii)、美国黄松(西黄松)、美国黑松(扭叶松)、和蒙特利松(辐射松)，道格拉斯-杉(北美黄杉)，西部铁杉(加拿大铁杉)，北美云杉(白云杉)，红木(北美红杉)，冷杉如银杉(温哥华冷杉)和香脂冷杉(胶冷杉)，以及雪松如美国西部侧柏(北美乔柏)和阿拉斯加黄杉(黄扁柏)。实施例的植物包括例作物植物(例如玉米、苜蓿、向日葵、芸苔属、大豆、棉花、红花、花生、高粱、小麦、小米、烟草等)如玉米和大豆植物。
草坪草包括但不限于：一年生早熟禾(早熟禾)、一年生黑麦草(多花黑麦草)、加拿大早熟禾(扁早熟禾)、咀嚼用羊茅(紫羊茅)、细弱剪股颖(colonial bentgrass、Agrostistenuis)、匍匐剪股颖(creeping bentgrass、Agrostis palustris)、麦穗草(沙生冰草)、扁穗冰草(冰草)、硬羊茅(苇草(Festuca longifolia))、肯塔基蓝草(草地早熟禾)、鸭茅(猫尾草)、多年生黑麦草(黑麦草)、红狐茅(紫羊茅)、小糠草(白翦股颖)、粗茎早熟禾(普通早熟禾)、羊茅(sheep fescue)(酥油草)、无芒雀麦(无芒雀麦草)、高羊茅(tallfescue、Festuca arundinacea)、梯牧草(timothy、Phleum pratense)、绒毛剪股颖(velvetbentgrass、Agrostis canina)、碱茅(weeping alkaligrass、Puccinellia distans)、西部麦草(蓝茎冰草)、百慕大草(狗牙根属物种)、圣奥古斯丁草(偏序钝叶草)、结缕草(结缕草属物种)、百喜草(Bahia grass、Paspalum notatum)、冰结草地(类地毯草)、百足草(假俭草)、隐花狼尾草(铺地狼尾草)、海滨雀稗(海雀稗)、blue gramma(格兰马草)、野牛草(buffalo grass、Buchloedactyloids)、sideoats gramma(垂穗草)。
感兴趣的植物包括提供感兴趣的种子的谷物植物、油料种子植物、和豆科植物。感兴趣的种子包括谷物种子，如玉米、小麦、大麦、水稻、高粱、黑麦、小米等。油料种子植物包括棉花、大豆、红花、向日葵、芸苔属植物、玉蜀黍、苜蓿、棕榈、椰子、亚麻、蓖麻、橄榄等。豆科植物包括豆和豌豆。菜豆包括瓜尔豆、槐豆、苦豆、大豆、菜用刀豆、豇豆、绿豆、利马豆、蚕豆、小扁豆、鹰嘴豆等。
转基因植物
本披露还涵盖了包含编码杀昆虫多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。本披露涵盖了包含编码PIP-45-1多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ IDNO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ IDNO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ IDNO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：232、SEQID NO：234和SEQ ID NO：236的PIP-45-1多肽的SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ IDNO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：132、SEQ IDNO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：154、SEQ IDNO：156、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：218、SEQ ID NO：220或SEQ ID NO：222的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234和SEQ ID NO：236的PIP-45-1多肽的SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ IDNO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：220或SEQ IDNO：222的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码PIP-45-1多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQID NO：51、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234或SEQ ID NO：236的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ ID NO：236的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-1多肽的全长序列。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ IDNO：51、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：234或SEQ ID NO：236相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ IDNO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：234或SEQ ID NO：236相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：1相比具有至少99.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：17相比具有至少99.4％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：19相比具有至少99.6％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：21相比具有至少87％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ IDNO：23相比具有至少88％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：27相比具有至少99.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQID NO：29相比具有至少99.8％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：31相比具有至少92.3％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：33相比具有至少91.1％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：35相比具有至少95.4％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：39相比具有至少95％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：43相比具有至少97.5％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：45相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：234相比具有至少94％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：236相比具有至少96％或更高序列同一性的PIP-45-1多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-45-2多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ IDNO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ IDNO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ IDNO：233、SEQ ID NO：235和SEQ ID NO：237的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：121、SEQID NO：123、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQID NO：145、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：219、SEQ ID NO：221或SEQ ID NO：223的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ IDNO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ IDNO：235和SEQ ID NO：237的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEO ID NO：221或SEQ ID NO：223的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码PIP-45-2多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ IDNO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ IDNO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：235和SEQ ID NO：237的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ IDNO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235或SEQ ID NO：237的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-45-2多肽的全长序列。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：26、SEQ IDNO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ IDNO：52、SEQ ID NO：233、SEQ ID NO：235或SEQ ID NO：237相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ IDNO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ IDNO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235或SEQ ID NO：237相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：2相比具有至少99.2％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：18相比具有至少98.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：20相比具有至少96％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：22相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：24相比具有至少81％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：28相比具有至少99.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQID NO：30相比具有至少98.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：32相比具有至少92％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：34相比具有至少91.5％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：36相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：40相比具有至少90％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：44相比具有至少94％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：46相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-45-2多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-64-1多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：56、SEQID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQID NO：69、SEQ ID NO：71和SEQ ID NO：238的PIP-64-1多肽的SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178或SEQ ID NO：224的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：238的PIP-64-1多肽的SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：165或SEQ ID NO：224的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码PIP-64-1多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71或SEQ ID NO：238的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：56、SEQ IDNO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：71或SEQ ID NO：238相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQ ID NO：238相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：53相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：58相比具有至少99.7％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：238相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-64-1多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-64-2多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQID NO：70、SEQ ID NO：72和SEQ ID NO：239的PIP-64-2多肽的SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：173、SEQID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：179或SEQ ID NO：225的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：54，SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：239的PIP-64-2多肽的SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：166或SEQID NO：225的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码PIP-64-2多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ IDNO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：239的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-64-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQID NO：63、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：239相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：54、SEQ IDNO：55、SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：239相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：54相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：55相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：59相比具有至少91％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：239相比具有至少70％或更高序列同一性的PIP-64-2多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-74-1多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75和SEQID NO：77的PIP-74-1多肽的SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182或SEQ ID NO：184的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码PIP-74-1多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQID NO：77的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-1多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQ ID NO：77相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：73相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：75相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：77相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-1多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-74-2多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76和SEQID NO：78的PIP-74-2多肽的SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：185的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码PIP-74-2多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQ ID NO：78的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-74-2多肽。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-74-2多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：74、SEQ IDNO：76或SEQ ID NO：78相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：74相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：76相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：78相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-74-2多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-75多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ IDNO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86和SEQID NO：87的PIP-75多肽的SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：189、SEQ ID NO：190、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：194的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：79、SEQ IDNO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87的PIP-75多肽的SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193或SEQ ID NO：194的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码PIP-75多肽的非基因组核酸分子。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87的氨基酸序列足够同源的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ IDNO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQID NO：87的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-75多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-75多肽的全长序列。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ IDNO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-75多肽。在一些实施例中，该多核苷酸编码与SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ IDNO：86或SEQ ID NO：87相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-75多肽。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：79相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：80相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：81相比具有至少86％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：84相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：85相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：86相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：87相比具有至少75％或更高序列同一性的PIP-75多肽的多核苷酸。
本披露还涵盖了包含编码PIP-77多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ IDNO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244和SEQ ID NO：245的PIP-45-2多肽的SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：198、SEQ IDNO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：208、SEQ ID NO：209、SEQ IDNO：210、SEQ ID NO：211、SEQ ID ID NO：212、SEQ ID NO：213、SEQ ID NO：214、SEQ ID NO：226、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229、SEQ ID NO：230或SEQ ID NO：231的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含分别编码SEQ ID NO：88、SEQ IDNO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ IDNO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242和SEQ ID NO：245的PIP-77多肽的SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ IDNO：198、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228或SEQ IDNO：231的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ IDNO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ IDNO：243、SEQ ID NO：244或SEQ ID NO：245的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ IDNO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ IDNO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQID NO：242或SEQ ID NO：245的氨基酸序列足够同源并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。“足够同源的”在此用于是指使用在此所述的这些比对程序中的一个，使用标准参数，与参比序列相比，具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大序列同源性的氨基酸序列。本领域技术人员将认识到，考虑到氨基酸相似性等，可以适当地调整这些值以确定的蛋白质的相应同源性。在一些实施例中，序列同源性针对PIP-77多肽的全长序列。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：88、SEQ IDNO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ IDNO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQID NO：244或SEQ ID NO：245相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245相比具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性并且具有杀昆虫活性的PIP-77多肽的多核苷酸。
在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：88相比具有至少86％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：89相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：90相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：91相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：92相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：93相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：94相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：95相比具有至少85％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：96相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：97相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：98相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。在一些实施例中，该转基因植物或植物细胞包含编码与SEQ ID NO：100相比具有至少80％或更高序列同一性的PIP-77多肽的多核苷酸。
植物转化的评估
在将异源外源DNA引入植物细胞中之后，通过不同的方法来证实异源基因在植物类基因组中的转化或整合，这些方法如对与该整合的基因相关的核酸、蛋白质以及代谢产物的分析。
PCR分析是在移植到土壤中之前的较早阶段时针对经并入的基因的存在来筛选转化的细胞、组织或枝条的一种快速方法(Sambrook and Russell，(2001)MolecularCloning：A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY[Sambrook和Russell，(2001)，分子克隆：实验室手册，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约州])。使用对感兴趣的基因或农杆菌属载体背景等具有特异性的寡核苷酸引物进行PCR。
可以通过基因组DNA的DNA印迹分析来证实植物转化(Sambrook和Russell，(2001)，同上)。通常，从转化体中提取总DNA，该转化体用适当的限制酶进行消化，在琼脂糖凝胶中进行分馏并且转到硝酸纤维素或尼龙膜上。然后，根据标准的技术，用例如放射性标记32P的靶DNA片段来探测该膜或“印迹”以证实引入的基因整合到该植物基因组中(Sambrook和Russell，(2001)，同上)。
在RNA印迹分析中，从该转化体的特定组织中分离了RNA，在甲醛琼脂糖凝胶中进行分馏，并且根据本领域常规使用的标准程序来印迹到尼龙滤膜上(Sambrook和Russell，(2001)，同上)。然后，通过在本领域内已知的方法，通过将该滤膜与源自杀有害生物基因的放射性探针进行杂交来测试由该杀有害生物基因所编码的RNA的表达(Sambrook和Russell，(2001)，同上)。
可以对转基因植物进行蛋白质印迹、生物化学测定以及类似测定，以便通过标准程序使用与本披露的杀有害生物多肽上存在的一个或多个表位结合的抗体来证实由该杀有害生物基因所编码的蛋白质的存在(Sambrook和Russell，(2001)，同上)。
转基因植物中性状的堆叠
转基因植物可以包含在此披露的一种或多种杀昆虫多核苷酸与一种或多种另外的多核苷酸的堆叠，导致产生或抑制多个多肽序列。包含多核苷酸序列堆叠的转基因植物可以通过传统育种方法或通过遗传工程方法中的一种或两种获得。这些方法包含但不限于：育种各自包含感兴趣的多核苷酸的单个系，将包含在此披露的基因的转基因植物与随后的基因转化并将基因共转化为单个植物细胞。如在此使用的，术语“堆叠”包括在同一植物中存在多个性状(即，将两个性状并入核基因组中，将一个性状并入核基因组中，并且将一个性状并入质体的基因组中，或者这两种性状都被并入质体的基因组中)。在一个非限制性实例中，“堆叠性状”包括其中序列在物理上彼此相邻的分子堆叠。如在此使用的性状是指源自特定序列或序列组群的表型。可以使用包含多个基因或在多个载体上分别携带的基因的单一转化载体进行基因的共转化。如果通过遗传转化植物来堆叠序列，则感兴趣的多核苷酸序列可以在任意时间并以任意次序组合。可以用由转化盒的任何组合提供的感兴趣的多核苷酸在共转化方案中同时引入性状。例如，若引入两个序列，则这两个序列可包含在分开的转化盒(反式)或包含在同一个转化盒(顺式)。这些序列的表达可以通过相同的启动子或通过不同的启动子驱动。在某些情况下，可能所希望的是引入一种将抑制所关注的聚核苷酸的表达的转化盒。此可以与其他抑制盒或过度表达盒的任何组合进行组合以在该植物中产生所需性状组合。进一步应当认识到，可以使用位点特异重组系统，来在希望的基因组位置堆叠多核苷酸序列。参见，例如，WO 1999/25821、WO 1999/25854、WO 1999/25840、WO1999/25855和WO 1999/25853，其全部通过引用结合在此。
在一些实施例中，单独或与一种或多种另外的昆虫抗性性状堆叠的编码在此披露的杀昆虫多肽的多核苷酸可以与一种或多种另外的输入性状(例如，除草剂抗性、真菌抗性、病毒抗性、胁迫耐受性、抗病性、雄性不育性、茎强度等)或输出性状(例如，增加的产量、改性淀粉、改进的油特性、平衡的氨基酸、高赖氨酸或甲硫氨酸、增加的消化性、改进的纤维品质、抗旱性等)堆叠。因此，可以使用多核苷酸实施例来提供改进的作物品质的完整的农艺包，具有灵活和成本有效地控制任何数量的农艺有害生物的能力。
用于堆叠的转基因包括但不限于：
1.赋予昆虫抗性或抗病性并编码以下各项的转基因：
(A)植物疾病抗性基因。通常通过植物中抗病性基因(R)的产物与病原体中相应的无毒性(Avr)基因的产物之间的特异性相互作用来活化植物防御。可以用经克隆的抗性基因来转化植物变种，以工程化对特定病原菌株具有抗性的植物。参见，例如，Jones，et al.，(1994)Science 266：789[Jones等人，(1994)，科学，266：789](克隆番茄Cf-9基因以抵抗黄枝孢霉(Cradosporium fulvum))；Martin，et al.，(1993)Science 262：1432[Martin等人，(1993)，科学，262：1432](对编码蛋白激酶的丁香假单孢菌番茄致病变种的抗性的番茄Pto基因)；Mindrinos，et al.，(1994)Cell 78：1089[Mindrinos等人，(1994)，细胞，78：1089](对丁香假单孢菌的抗性的拟南芥属RSP2基因)；McDowell and Woffenden，(2003)TrendsBiotechnol.21(4)：178-83 and Toyoda，et al.，(2002)Transgenic Res.11(6)：567-82[McDowell和Woffenden，(2003)，生物技术趋势，21(4)：178-83和Toyoda等人，(2002)，转基因研究，11(6)：567-82]。与野生型植物相比，对疾病具有抗性的植物对病原体更具抗性。
(B)编码苏云金芽孢杆菌蛋白质的基因，其衍生物或其上建模的合成多肽。参见，例如，Geiser，et al.，(1986)Gene 48：109[Geiser等人，(1986)，基因，48：109]，其披露了Btδ-内毒素基因的克隆和核苷酸序列。此外，编码δ-内毒素基因的DNA分子可购自美国典型培养物保藏中心(罗克维尔(Rockville)，马里兰州)，例如在登录号40098、67136、31995和31998下。在遗传工程中的苏云金芽孢杆菌转基因的其他非限制性实例在以下专利和专利申请中给出，并且以此目的通过引用结合在此：美国专利号5,188,960、5,689,052、5,880,275、5,986,177、6,023,013、6,060,594、6,063,597、6,077,824、6,620,988、6,642,030、6,713,259、6,893,826、7,105,332、7,179,965、7,208,474、7,227,056、7,288,643、7,323,556、7,329,736、7,449,552、7,468,278、7,510,878、7,521,235、7,544,862、7,605,304、7,696,412、7,629,504、7,705,216、7,772,465、7,790,846、7,858,849以及WO 1991/14778、WO 1999/31248、WO 2001/12731、WO 1999/24581和WO 1997/40162。
编码杀有害生物蛋白的基因也可以被堆叠，这些杀有害生物蛋白包括但不限于：来自以下各项的杀昆虫蛋白：假单孢菌属物种，如PSEEN3174(Monalysin，(2011)PLoSPathogens，7：1-13[Monalysin，(2011)，PLoS病原体，7：1-13])、假单胞菌(Pseudomonasprotegens)菌株CHA0和Pf-5(之前为荧光假单孢菌)(Pechy-Tarr，(2008)EnvironmentalMicrobiology 10：2368-2386：GenBank Accession No.EU400157[Pechy-Tarr，(2008)，环境微生物学，10：2368-2386：GenBank登录号EU400157])；台湾假单孢菌(PseudomonasTaiwanensis)(Liu，et al.，(2010)J.Agric.FoodChem.58：12343-12349[Liu等人，(2010)，农业与食品化学杂志，58：12343-12349])和假产碱假单孢菌(Zhang，et al.，(2009)Annalsof Microbiology 59：45-50 and Li，et al.，(2007)Plant Cell Tiss.Organ Cult.89：159-168[Zhang等人，(2009)，微生物学年鉴，59：45-50和Li等人，(2007)，植物细胞、组织和器官培养，89：159-168])来自发光杆菌属物种和致病杆菌属物种的杀昆虫蛋白(Hinchliffe，et al.，(2010)The Open Toxinology Journal 3：101-118 and Morgan，etal.，(2001)Applied and Envir.Micro.67：2062-2069[Hinchliffe等人，(2010)，开放的毒理学杂志，3：101-118和Morgan等人，(2001)，应用与环境微生物学，67：2062-2069])；美国专利号6,048,838和美国专利号6,379,946；美国专利号US 2014-0007297-A1的PIP-1多肽；美国专利公开号US 2014-0033361的AfIP-1A和/或AfIP-1B多肽；美国序列号13/839702的PHI-4多肽；PCT序列号PCT/US 14/51063的PIP-47多肽；美国专利公开US 20140274885或PCT专利公开WO 2014/150914的PHI-4多肽；PCT序列号PCT/US 14/55128的PIP-72多肽；美国序列号61/863761和61/863763的杀昆虫蛋白；以及δ-内毒素，包括但不限于：Cry1、Cry2、Cry3、Cry4、Cry5、Cry6、Cry7、Cry8、Cry9、Cry10、Cry11、Cry12、Cry13、Cry14、Cry15、Cry16、Cry17、Cry18、Cry19、Cry20、Cry21、Cry22、Cry23、Cry24、Cry25、Cry26、Cry27、Cry28、Cry29、Cry30、Cry31、Cry32、Cry33、Cry34、Cry35、Cry36、Cry37、Cry38、Cry39、Cry40、Cry41、Cry42、Cry43、Cry44、Cry45、Cry46、Cry47、Cry49、Cry51、Cry52、Cry53、Cry54、Cry55、Cry56、Cry57、Cry58、Cry59、Cry60、Cry61、Cry62、Cry63、Cry64、Cry65、Cry66、Cry67、Cry68、Cry69、Cry70、Cry71和Cry72类的δ-内毒素基因和苏云金芽孢杆菌细胞溶解性Cyt1和Cyt2基因。苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白的这些类别的成员包括但不限于Cry1Aa1(登录号AAA22353)；Cry1Aa2(登录号AAA22552)；Cry1Aa3(登录号BAA00257)；Cry1Aa4(登录号CAA31886)；Cry1Aa5(登录号BAA04468)；Cry1Aa6(登录号AAA86265)；Cry1Aa7(登录号AAD46139)；Cry1Aa8(登录号I26149)；Cry1Aa9(登录号BAA77213)；Cry1Aa10(登录号AAD55382)；Cry1Aa11(登录号CAA70856)；Cry1Aa12(登录号AAP80146)；Cry1Aa13(登录号AAM44305)；Cry1Aa14(登录号AAP40639)；Cry1Aa15(登录号AAY66993)；Cry1Aa16(登录号HQ439776)；Cry1Aa17(登录号HQ439788)；Cry1Aa18(登录号HQ439790)；Cry1Aa19(登录号HQ685121)；Cry1Aa20(登录号JF340156)；Cry1Aa21(登录号JN651496)；Cry1Aa22(登录号KC158223)；Cry1Ab1(登录号AAA22330)；Cry1Ab2(登录号AAA22613)；Cry1Ab3(登录号AAA22561)；Cry1Ab4(登录号BAA00071)；Cry1Ab5(登录号CAA28405)；Cry1Ab6(登录号AAA22420)；Cry1Ab7(登录号CAA31620)；Cry1Ab8(登录号AAA22551)；Cry1Ab9(登录号CAA38701)；Cry1Ab10(登录号A29125)；Cry1Ab11(登录号112419)；Cry1Ab12(登录号AAC64003)；Cry1Ab13(登录号AAN76494)；Cry1Ab14(登录号AAG16877)；Cry1Ab15(登录号AAO13302)；Cry1Ab16(登录号AAK55546)；Cry1Ab17(登录号AAT46415)；Cry1Ab18(登录号AAQ88259)；Cry1Ab19(登录号AAW31761)；Cry1Ab20(登录号ABB72460)；Cry1Ab21(登录号ABS18384)；Cry1Ab22(登录号ABW87320)；Cry1Ab23(登录号HQ439777)；Cry1Ab24(登录号HQ439778)；Cry1Ab25(登录号HQ685122)；Cry1Ab26(登录号HQ847729)；Cry1Ab27(登录号JN135249)；Cry1Ab28(登录号JN135250)；Cry1Ab29(登录号JN135251)；Cry1Ab30(登录号JN135252)；Cry1Ab31(登录号JN135253)；Cry1Ab32(登录号JN135254)；Cry1Ab33(登录号AAS93798)；Cry1Ab34(登录号KC156668)；Cry1Ab样(登录号AAK14336)；Cry1Ab样(登录号AAK14337)；Cry1Ab样(登录号AAK14338)；Cry1Ab样(登录号ABG88858)；Cry1Ac1(登录号AAA22331)；Cry1Ac2(登录号AAA22338)；Cry1Ac3(登录号CAA38098)；Cry1Ac4(登录号AAA73077)；Cry1Ac5(登录号AAA22339)；Cry1Ac6(登录号AAA86266)；Cry1Ac7(登录号AA346989)；Cry1Ac8(登录号AAC44841)；Cry1Ac9(登录号AA349768)；Cry1Ac10(登录号CAA05505)；Cry1Ac11(登录号CAA10270)；Cry1Ac12(登录号I12418)；Cry1Ac13(登录号AAD38701)；Cry1Ac14(登录号AAQ06607)；Cry1Ac15(登录号AAN07788)；Cry1Ac16(登录号AAU87037)；Cry1Ac17(登录号AAX18704)；Cry1Ac18(登录号AAY88347)；Cry1Ac19(登录号ABD37053)；Cry1Ac20(登录号ABB89046)；Cry1Ac21(登录号AAY66992)；Cry1Ac22(登录号ABZ01836)；Cry1Ac23(登录号CAQ30431)；Cry1Ac24(登录号ABL01535)；Cry1Ac25(登录号FJ513324)；Cry1Ac26(登录号FJ617446)；Cry1Ac27(登录号FJ617447)；Cry1Ac28(登录号ACM90319)；Cry1Ac29(登录号DQ438941)；Cry1Ac30(登录号GQ227507)；Cry1Ac31(登录号GU446674)；Cry1Ac32(登录号HM061081)；Cry1Ac33(登录号GQ866913)；Cry1Ac34(登录号HQ230364)；Cry1Ac35(登录号JF340157)；Cry1Ac36(登录号JN387137)；Cry1Ac37(登录号JQ317685)；Cry1Ad1(登录号AAA22340)；Cry1Ad2(登录号CAA01880)；Cry1Ae1(登录号AAA22410)；Cry1Af1(登录号AAB82749)；Cry1Ag1(登录号AAD46137)；Cry1Ah1(登录号AAQ14326)；Cry1Ah2(登录号ABB76664)；Cry1Ah3(登录号HQ439779)；Cry1Ai1(登录号AAO39719)；Cry1Ai2(登录号HQ439780)；Cry1A样(登录号AAK14339)；Cry1Ba1(登录号CAA29898)；Cry1Ba2(登录号CAA65003)；Cry1Ba3(登录号AAK63251)；Cry1Ba4(登录号AAK51084)；Cry1Ba5(登录号ABO20894)；Cry1Ba6(登录号ABL60921)；Cry1Ba7(登录号HQ439781)；Cry1Bb1(登录号AAA22344)；Cry1Bb2(登录号HQ439782)；Cry1Bc1(登录号CAA86568)；Cry1Bd1(登录号AAD10292)；Cry1Bd2(登录号AAM93496)；Cry1Be1(登录号AAC32850)；Cry1Be2(登录号AAQ52387)；Cry1Be3(登录号ACV96720)；Cry1Be4(登录号HM070026)；Cry1Bf1(登录号CAC50778)；Cry1Bf2(登录号AAQ52380)；Cry1Bg1(登录号AAO39720)；Cry1Bh1(登录号HQ589331)；Cry1Bi1(登录号KC156700)；Cry1Ca1(登录号CAA30396)；Cry1Ca2(登录号CAA31951)；Cry1Ca3(登录号AAA22343)；Cry1Ca4(登录号CAA01886)；Cry1Ca5(登录号CAA65457)；Cry1Ca6[1](登录号AAF37224)；Cry1Ca7(登录号AAG50438)；Cry1Ca8(登录号AAM00264)；Cry1Ca9(登录号AAL79362)；Cry1Ca10(登录号AAN16462)；Cry1Ca11(登录号AAX53094)；Cry1Ca12(登录号HM070027)；Cry1Ca13(登录号HQ412621)；Cry1Ca14(登录号JN651493)；Cry1Cb1(登录号M97880)；Cry1Cb2(登录号AAG35409)；Cry1Cb3(登录号ACD50894)；Cry1Cb样(登录号AAX63901)；Cry1Da1(登录号CAA38099)；Cry1Da2(登录号I76415)；Cry1Da3(登录号HQ439784)；Cry1Db1(登录号CAA80234)；Cry1Db2(登录号AAK48937)；Cry1Dc1(登录号ABK35074)；Cry1Ea1(登录号CAA37933)；Cry1Ea2(登录号CAA39609)；Cry1Ea3(登录号AAA22345)；Cry1Ea4(登录号AAD04732)；Cry1Ea5(登录号A15535)；Cry1Ea6(登录号AAL50330)；Cry1Ea7(登录号AAW72936)；Cry1Ea8(登录号ABX11258)；Cry1Ea9(登录号HQ439785)；Cry1Ea10(登录号ADR00398)；Cry1Ea11(登录号JQ652456)；Cry1Eb1(登录号AAA22346)；Cry1Fa1(登录号AAA22348)；Cry1Fa2(登录号AAA22347)；Cry1Fa3(登录号HM070028)；Cry1Fa4(登录号HM439638)；Cry1Fb1(登录号CAA80235)；Cry1Fb2(登录号BAA25298)；Cry1Fb3(登录号AAF21767)；Cry1Fb4(登录号AAC10641)；Cry1Fb5(登录号AAO13295)；Cry1Fb6(登录号ACD50892)；Cry1Fb7(登录号ACD50893)；Cry1Ga1(登录号CAA80233)；Cry1Ga2(登录号CAA70506)；Cry1Gb1(登录号AAD10291)；Cry1Gb2(登录号AAO13756)；Cry1Gc1(登录号AAQ52381)；Cry1Ha1(登录号CAA80236)；Cry1Hb1(登录号AAA79694)；Cry1Hb2(登录号HQ439786)；Cry1H样(登录号AAF01213)；Cry1Ia1(登录号CAA44633)；Cry1Ia2(登录号AAA22354)；Cry1Ia3(登录号AAC36999)；Cry1Ia4(登录号AAB00958)；Cry1Ia5(登录号CAA70124)；Cry1Ia6(登录号AAC26910)；Cry1Ia7(登录号AAM73516)；Cry1Ia8(登录号AAK66742)；Cry1Ia9(登录号AAQ08616)；Cry1Ia10(登录号AAP86782)；Cry1Ia11(登录号CAC85964)；Cry1Ia12(登录号AAV53390)；Cry1Ia13(登录号ABF83202)；Cry1Ia14(登录号ACG63871)；Cry1Ia15(登录号FJ617445)；Cry1Ia16(登录号FJ617448)；Cry1Ia17(登录号GU989199)；Cry1Ia18(登录号ADK23801)；Cry1Ia19(登录号HQ439787)；Cry1Ia20(登录号JQ228426)；Cry1Ia21(登录号JQ228424)；Cry1Ia22(登录号JQ228427)；Cry1Ia23(登录号JQ228428)；Cry1Ia24(登录号JQ228429)；Cr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δ-内毒素的实例还包括但不限于：美国专利号5,880,275和7,858,849的Cry1A蛋白；美国专利号8,304,604和8.304,605的DIG-3或DIG-11毒素(cry蛋白(如Cry1A)的α螺旋1和/或α螺旋2变体的N末端缺失)，美国专利申请序列号10/525,318的Cry1B；美国专利号6,033,874的Cry1C；美国专利号5,188,960、6,218,188的Cry1F；美国专利号7,070,982、6,962,705和6,713,063的Cry1A/F嵌合体；美国专利号7,064,249的Cry2蛋白如Cry2Ab蛋白；Cry3A蛋白，包括但不限于：通过融合至少两种不同Cry蛋白的可变区和保守区的独特组合产生的工程化杂合杀昆虫蛋白(eHIP)(美国专利申请公开号2010/0017914)；Cry4蛋白；Cry5蛋白；Cry6蛋白；美国专利号7,329,736、7,449,552、7,803,943、7,476,781、7,105,332、7,378,499和7,462,760的Cry8蛋白；Cry9蛋白如Cry9A、Cry9B、Cry9C、Cry9D、Cry9E和Cry9F家族的成员；Naimov，et al.，(2008)Applied and Environmental Microbiology，74：7145-7151[Naimov等人，(2008)，应用与环境微生物学，74：7145-7151]的Cry15蛋白；美国专利号6,127,180、6,624,145和6,340,593的Cry22、Cry34Ab1蛋白；美国专利号6,248,535、6,326,351、6,399,330、6,949,626、7,385,107和7,504,229的CryET33和CryET34蛋白；美国专利公开号2006/0191034、2012/0278954，和PCT公开号WO 2012/139004的CryET33和CryET34同源物；美国专利号6,083,499、6,548,291和6,340,593的Cry35Ab1蛋白；Cry46蛋白、Cry51蛋白、Cry二元毒素；TIC901或相关毒素；US 2008/0295207的TIC807；PCT US2006/033867的ET29、ET37、TIC809、TIC810、TIC812、TIC127、TIC128；US 2040194351的TIC807；美国专利8,513,494的TIC853毒素，美国专利号8,236,757的AXMI-027、AXMI-036、和AXMI-038；US 7,923,602的AXMI-031、AXMI-039、AXMI-040、AXMI-049；WO 2006/083891的AXMI-018、AXMI-020、和AXMI-021；WO 2005/038032的AXMI-010；WO 2005/021585的AXMI-003；US 2004/0250311的AXMI-008；US 2004/0216186的AXMI-006；US 2004/0210965的AXMI-007；US 2004/0210964的AXMI-009；US 2004/0197917的AXMI-014；US 2004/0197916的AXMI-004：WO 2006/119457的AXMI-028和AXMI-029；WO 2004/074462的AXMI-007、AXMI-008、AXMI-0080rf2、AXMI-009、AXMI-014和AXMI-004；美国专利号8,084,416的AXMI-150；US20110023184的AXMI-205；US 2011/0263488的AXMI-011、AXMI-012、AXMI-013、AXMI-015、AXMI-019、AXMI-044、AXMI-037、AXMI-043、AXMI-033、AXMI-034、AXMI-022、AXMI-023、AXMI-041、AXMI-063、和AXMI-064；US 2010/0197592的AXMI-R1和相关蛋白；WO 2011/103248的AXMI221Z、AXMI222z、AXMI223z、AXMI224z和AXMI225z；WO 11/103247的AXMI218、AXMI219、AXMI220、AXMI226、AXMI227、AXMI228、AXMI229、AXMI230和AXMI231；美国专利号8,334,431的AXMI-115、AXMI-113、AXMI-005、AXMI-163和AXMI-184；US 2010/0298211的AXMI-001、AXMI-002、AXMI-030、AXMI-035、和AXMI-045；US 20090144852的AXMI-066和AXMI-076；美国专利号8,318,900的AXMI128、AXMI130、AXMI131、AXMI133、AXMI140、AXMI141、AXMI142、AXMI143、AXMI144、AXMI146、AXMI148、AXMI149、AXMI152、AXMI153、AXMI154、AXMI155、AXMI156、AXMI157、AXMI158、AXMI162、AXMI165、AXMI166、AXMI167、AXMI168、AXMI169、AXMI170、AXMI171、AXMI172、AXMI173、AXMI174、AXMI175、AXMI176、AXMI177、AXMI178、AXMI179、AXMI180、AXMI181、AXMI182、AXMI185、AXMI186、AXMI187、AXMI188、AXMI189；US2010/0005543的AXMI079、AXMI080、AXMI081、AXMI082、AXMI091、AXMI092、AXMI096、AXMI097、AXMI098、AXMI099、AXMI100、AXMI101、AXMI102、AXMI103、AXMI104、AXMI107、AXMI108、AXMI109、AXMI110、AXMI111、AXMI112、AXMI114、AXMI116、AXMI117、AXMI118、AXMI119、AXMI120、AXMI121、AXMI122、AXMI123、AXMI124、AXMI1257、AXMI1268、AXMI127、AXMI129、AXMI164、AXMI151、AXMI161、AXMI183、AXMI132、AXMI138、AXMI137；US20140196175的AXMI221；US 20140373195的AXMI345；和美国专利号8,319,019的具有修饰的蛋白水解位点的Cry蛋白如Cry1A和Cry3A；和美国专利申请公开号2011/0064710的来自苏芸金芽孢杆菌菌株VBTS 2528的Cry1Ac、Cry2Aa和Cry1Ca毒素蛋白。其他Cry蛋白是本领域技术人员熟知的(参见，Crickmore，et al.，“Bacillus thuringiensis toxinnomenclature”(2011)[Crickmore等人，“苏云金芽孢杆菌毒素命名法”(2011)]在lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/intro.html上，其可以使用“www”前缀在万维网上访问)。Cry蛋白的杀昆虫活性是本领域技术人员熟知的(综述参见，vanFrannkenhuyzen，(2009)J.Invert.Path.101：1-16[van Frannkenhuyzen，(2009)，无脊椎动物病理学杂志，101：1-16])。使用Cry蛋白作为转基因植物性状是本领域技术人员熟知的，并且Cry转基因植物(包括但不限于：Cry1Ac、Cry1Ac+Cry2Ab、Cry1Ab、Cry1A.105、Cry1F、Cry1Fa2、Cry1F+Cry1Ac、Cry2Ab、Cry3A、mCry3A、Cry3Bb1、Cry34Ab1、Cry35Ab1、Vip3A、mCry3A、Cry9c和CBI-Bt)已获得法规性审批(参见，Sanahuja，(2011)Plant BiotechJournal 9：283-300 and the CERA(2010)GM Crop Database Center for EnvironmentalRisk Assessment(CERA)，ILSI Research Foundation，Washington D.C.[Sanahuja，(2011)，植物生物技术杂志，9：283-300和CERA，(2010)，环境风险评估的转基因作物数据库中心(CERA)，ILSI研究基金会，华盛顿])。本领域技术人员熟知的多于一种杀有害生物蛋白也可以在植物中表达，这些杀有害生物蛋白如Vip3Ab和Cry1Fa(US 2012/0317682)、Cry1BE和Cry1F(US 2012/0311746)、Cry1CA和Cry1AB(US 2012/0311745)、Cry1F和CryCa(US2012/0317681)、Cry1DA和Cry1BE(US 2012/0331590)、Cry1DA和Cry1Fa(US 2012/0331589)、Cry1AB和Cry1BE(US 2012/0324606)、以及Cry1Fa和Cry2Aa、Cry1I或Cry1E(US2012/0324605)。杀有害生物蛋白还包括杀昆虫脂肪酶，这些杀昆虫脂肪酶包括美国专利号7,491,869的脂质酰基水解酶，和胆固醇氧化酶，如来自链霉菌属(Purcell et al.(1993)Biochem Biophys Res Commun 15：1406-1413[Purcell等人，(1993)，生物化学与生物物理学研究通讯15：1406-1413])。杀有害生物蛋白还包括美国专利号5,877,012、6,107,279、6,137,033、7,244,820、7,615,686、和8,237,020等的VIP(营养期杀昆虫蛋白)毒素。其他VIP蛋白质是本领域技术人员熟知的(参见，lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/vip.html，其可以使用“www”前缀在万维网上访问)。杀有害生物蛋白还包括毒素复合物(TC)蛋白，该毒素复合物(TC)蛋白可从生物体如致病杆菌属、发光杆菌属和类芽孢杆菌属获得(参见，美国专利号7,491,698和8,084,418)。一些TC蛋白具有“独立”杀昆虫活性并且其他TC蛋白增强由相同给定生物体产生的独立毒素的活性。可以通过源自不同属的来源生物体的一种或多种TC蛋白“增效剂”来增强“独立”TC蛋白(例如来自发光杆菌属、致病杆菌属或类芽孢杆菌属)的毒性。有三种主要类型的TC蛋白。如在此所述，A类蛋白(“蛋白A”)是独立的毒素。B类蛋白(“蛋白B”)和C类蛋白(“蛋白C”)提高了A类蛋白的毒性。A类蛋白的实例是TcbA、TcdA、XptA1和XptA2。B类蛋白的实例是TcaC、TcdB、XptB1Xb和XptC1Wi。C类蛋白的实例是TccC、XptC1Xb和XptB1Wi。杀有害生物蛋白还包括蜘蛛、蛇和蝎毒蛋白。蜘蛛肽的实例包括但不限于莱科毒素-1肽及其突变体(美国专利号8,334,366)。
(C)编码昆虫特异性激素或信息素(如蜕化类固醇和保幼激素)的多核苷酸，其变体，基于其的模拟物，或者其拮抗剂或激动剂。参见，例如Hammock，et al.，(1990)Nature344：458[Hammock等人，(1990)，自然，344：458]，该文献披露了经克隆的保幼激素酯酶的杆状病毒表达是保幼激素的灭活剂。
(D)编码昆虫特异性肽的多核苷酸，该昆虫特异性肽在表达时破坏受影响的有害生物的生理学。例如，参见以下披露：Regan，(1994)J.Biol.Chem.269：9[Regan，(1994)，生物化学杂志，269：9](表达克隆产生编码昆虫利尿激素受体的DNA)；Pratt，et al.，(1989)Biochem.Biophys.Res.Comm.163：1243[Pratt等人，(1989)，生物化学与生物物理学研究通讯，163：1243](Diploptera puntata中索鉴定的allostatin)；Chattopadhyay，et al.，(2004)Critical Reviews in Microbiology 30(1)：33-54；Zjawiony，(2004)J Nat Prod67(2)：300-310；Carlini and Grossi-de-Sa，(2002)Toxicon 40(11)：1515-1539；Ussuf，et al.，(2001)Curr Sci.80(7)：847-853 and Vasconcelos and Oliveira，(2004)Toxicon 44(4)：385-403[Chattopadhyay等人，(2004)，微生物学重要评论，30(1)：33-54；Zjawiony，(2004)，天然产物杂志，67(2)：300-310；Carlini和Grossi-de-Sa，(2002)，毒素，40(11)：1515-1539；Ussuf等人，(2001)，当代科学，80(7)：847-853以及Vasconcelos和Oliveira，(2004)，毒素，44(4)：385-403]。还参见，Tomalski等人的美国专利号5,266,317，其披露编码昆虫特异性毒素的基因。
(E)编码负责单萜、倍半萜、类固醇、异羟肟酸、苯丙素衍生物或具有杀昆虫活性的另一种非蛋白质分子的超累积的酶的多核苷酸，包括但不限于7-epizingiberene合酶(美国专利公开20140157456)。
(F)编码涉及生物活性分子修饰(包括翻译后修饰)的酶的多核苷酸；例如，糖解酶、蛋白水解酶、脂解酶、核酸酶、环化酶、转氨酶、酯酶、水解酶、磷酸酶、激酶、磷酸化酶、聚合酶、弹性蛋白酶、几丁质酶以及葡聚糖酶，无论是天然还是合成的。参见，Scott等人名下的PCT申请WO 1993/02197，其披露了葡聚糖酶(callase)基因的核苷酸序列。可以获得包含几丁质酶编码序列的DNA分子，例如，从在登录号39637和67152下。还参见，Kramer，et al.，(1993)Insect Biochem.Molec.Biol.23：691[Kramer等人，(1993)，昆虫生物化学与分子生物学，23：691]，其教导编码烟草钩虫几丁质酶的cDNA的核苷酸序列，和Kawalleck，et al.，(1993)Plant Molec.Biol.21：673[Kawalleck等人，(1993)植物分子生物学，21：673]，其提供欧芹ubi4-2多泛素基因的核苷酸序列，和美国专利号6,563,020、7,145,060和7,087,810。
(G)编码刺激信号转导的分子的多核苷酸。例如，参见，由Botella，et al.，(1994)Plant Molec.Biol.24：757[Botella等人，(1994)，植物分子生物学，24：757]的，绿豆钙调蛋白cDNA克隆的核苷酸序列的披露，以及Griess，et al.，(1994)Plant Physiol.104：1467[Griess等人，(1994)，植物生理学，104：1467]，其提供了玉蜀黍钙调素cDNA克隆的核苷酸序列。
(H)编码疏水力矩肽的多核苷酸。参见，PCT申请WO 1995/16776和美国专利号5,580,852，速普肽(其抑制真菌植物病原体)的肽衍生物的披露和PCT申请WO 1995/18855和美国专利号5,607,914(教导了赋予疾病抗性的合成抗微生物肽)。
(I)编码膜通透酶，通道形成剂或通道阻断剂的多核苷酸。例如，参见，由Jaynes，et al.，(1993)Plant Sci.89：43[Jaynes等人，(1993)，植物科学，89：43]的，杀菌肽β-溶解肽类似物的异源表达以使转基因烟草植物对青枯假单孢菌具有抗性的披露。
(J)编码病毒侵入性蛋白质或由其衍生的复合毒素的基因。例如，病毒外壳蛋白在转化的植物细胞中的积累赋予由外源蛋白基因来源的病毒以及由相关病毒导致的病毒侵染和/或疾病发展的抗性。参见，Beachy，et al.，(1990)Ann.Rev.Phytopathol.28：451[Beachy等人，(1990)，植物病理学年评，28：451]。外壳蛋白介导的抗性已被赋予至转化植物抵抗以下各项：苜蓿花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草线条病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、烟草蚀纹病毒、烟草脆裂病毒和烟草花叶病毒。同上。
(K)编码昆虫特异性抗体或由其衍生的免疫毒素的基因。因此，靶向昆虫肠道中关键代谢功能的抗体将使受影响的酶失活，杀灭昆虫。Cf.Taylor，et al.，Abstract#497，SEVENTH INT′L SYMPOSIUM ON MOLECULAR PLANT-MICROBE INTERACTIONS[Cf.Taylor等人，摘要#497，分子植物-微生物相互作用的第七届国际研讨会](爱丁堡，苏格兰，1994)(通过生产单链抗体片段在转基因烟草中酶促失活)。
(L)编码病毒特异性抗体的基因。参见，例如，Tavladoraki，et al.，(1993)Nature366：469[Tavladoraki等人，(1993)，自然，366：469]，其表明表达重组抗体基因的转基因植物可以免受病毒攻击。
(M)编码在自然界中由病原体或寄生虫产生的发育阻滞蛋白的多核苷酸。因此，真菌内α-1，4-D-多聚半乳糖醛酸酶通过溶解植物细胞壁均α-1，4-D-半乳糖醛酸酶促进真菌定植和植物营养释放。参见，Lamb，et al.，(1992)Bio/Technology 10：1436[Lamb等人，(1992)，生物/技术，10：1436]。Toubart，et al.，(1992)Plant J.2：367[Toubart等人，(1992)，植物杂志，2：367]描述了编码豆内聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的基因的克隆和表征。
(N)编码在自然界中由植物产生的发育阻滞蛋白的多核苷酸。例如，Logemann，etal.，(1992)Bio/Technology 10：305[Logemann等人，(1992)，生物/技术，10：305]已经表明表达大麦核糖体失活基因的转基因植物具有增加的对真菌病的抗性。
(O)参与系统获得抗性(SAR)应答的基因和/或发病相关基因。Briggs，(1995)Current Biology 5(2)，Pieterse and Van Loon，(2004)Curr.Opin.Plant Bio.7(4)：456-64 and Somssich，(2003)Cell 113(7)：815-6[Briggs，(1995)，当代生物学，5(2)，Pieterse和Van Loon，(2004)，当代植物生物学观点，7(4)：456-64和Somssich，(2003)，细胞，113(7)：815-6]。
(P)抗真菌基因(Comelissen and Melchers，(1993)Pl.Physiol.101：709-712and Parijs，et al.，(1991)Planta 183：258-264 and Bushnell，et al.，(1998)Can.J.ofPlant Path.20(2)：137-149[Cornelissen和Melchers，(1993)，植物生理学，101：709-712和Parijs等人，(1991)，植物学，183：258-264和Bushnell等人，(1998)，加拿大植物病理学杂志，20(2)：137-149])。还参见，美国专利申请序列号09/950,933、11/619,645、11/657,710、11/748,994、11/774,121和美国专利号6,891,085和7,306,946。用于感知几丁质片段的LysM受体样激酶作为对真菌病原体的植物防御应答中的第一步(US 2012/0110696)。
(Q)解毒基因，如伏马菌素、白僵菌素、念珠菌素和玉米赤霉烯酮及其结构相关的衍生物的基因。例如，参见，美国专利号5,716,820、5,792,931、5,798,255、5,846,812、6,083,736、6,538,177、6,388,171和6,812,380。
(R)编码半胱氨酸蛋白酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶抑制剂的多核苷酸。参见，美国专利号7,205,453。
(S)防御素基因。参见，WO 2003/000863和美国专利号6,911,577、6,855,865、6,777,592和7,238,781。
(T)赋予对线虫抗性的基因。参见，例如，PCT申请WO 1996/30517，PCT申请WO1993/19181，WO 2003/033651和Urwin，et al.，(1998)Planta 204：472-479，Williamson，(1999)Curr Opin Plant Bio.2(4)：327-31[Urwin等人，(1998)，植物学，204：472-479，Williamson，(1999)，当代植物生物学观点，2(4)：327-31]，美国专利号6,284,948和7,301,069和miR164基因(WO 2012/058266)。
(U)孵育对疫霉根腐病抗性的基因，如Rps 1、Rps 1-a、Rps 1-b、Rps 1-c、Rps 1-d、Rps 1-e、Rps 1-k、Rps 2、Rps 3-a、Rps 3-b、Rps 3-c、Rps 4、Rps 5、Rps 6、Rps 7和其他Rps基因。参见，例如，Shoemaker，et al.，Phytophthora Root Rot Resistance GeneMapping in Soybean，Plant Genome IV Conference，San Diego，Calif.(1995)[Shoemaker等人，大豆中的疫霉根腐病抗性基因图谱，植物基因组IV会议，圣迭哥，加利福尼亚州，(1995)]。
(V)赋予对褐色茎腐病抗性的基因，如美国专利号5,689,035中所述，并以此目的通过引用结合。
(W)赋予对炭疽菌属抗性的基因，如美国专利申请公开US 2009/0035765中所述，并以此目的通过引用结合。这包括可以用作单一基因座转化的Rcg基因座。
2.赋予除草剂抗性的转基因，例如：
(A)编码对抑制生长点或分生组织的除草剂(如咪唑啉酮或磺酰脲)的抗性的多核苷酸。该类别中的示例性基因例如由Lee，et al.，(1988)EMBO J.7：1241and Miki，et al.，(1990)Theor.Appl.Genet.80：449[Lee等人，(1988)，欧洲分子生物学杂志，7：1241和Miki等人，(1990)，理论与应用遗传学，80：449]所描述的分别编码突变ALS和AHAS酶。还参见，美国专利号5,605,011、5,013,659、5,141,870、5,767,361、5,731,180、5,304,732、4,761,373、5,331,107、5,928,937和5,378,824，美国专利申请序列号11/683,737和国际公开WO1996/33270。
(B)编码对草甘膦(分别由突变体5-烯醇丙酮酰-3-磷酸合酶(EPSPS)和aroA基因赋予的抗性)和其他膦酰基化合物如草铵膦(草丁膦乙酰转移酶(PAT)和吸水链霉菌草丁膦乙酰转移酶(bar)基因)和吡啶氧基或苯氧基丙酸和环己酮(ACC酶抑制剂编码基因)有抗性的蛋白质的多核苷酸。参见，例如，美国专利号4,940,835至Shah等人，其披露了可以赋予草甘膦抗性的一种形式的EPSPS的核苷酸序列。美国专利号5,627,061至Barry等人，还披露了编码EPSPS酶的基因。还参见，美国专利号6,566,587、6,338,961、6,248,876 B1、6,040,497、5,804,425、5,633,435、5,145,783、4,971,908、5,312,910、5,188,642、5,094,945、4,940,835、5,866,775、6,225,114 B1、6,130,366、5,310,667、4,535,060、4,769,061、5,633,448、5,510,471、Re.36,449、RE37,287E和5,491,288以及国际公开EP 1173580、WO 2001/66704、EP 1173581和EP 1173582，以此目的将其通过引用结合在此。还将草甘膦抗性赋予表达编码草甘膦氧化还原酶的基因的植物，如在美国专利号5,776,760和5,463,175更完整描述的那样，以此目的将其通过引用结合在此。另外，草甘膦抗性可以通过编码草甘膦N-乙酰转移酶的基因的过表达赋予植物。参见，例如，美国专利号7,462,481、7,405,074以及美国专利申请公开号US 2008/0234130。编码突变体aroA基因的DNA分子可以在登录号39256下获得，并且美国专利号4,769,061至Comai中披露了突变基因的核苷酸序列。EP申请号0333033至Kumada等人，以及美国专利号4,975,374至Goodman等人披露了赋予对除草剂如L-草丁膦的抗性的谷氨酰胺合酶基因的核苷酸序列。EP申请号0 242 246和0 242 236至Leemans等人中提供了草丁膦乙酰基转移酶基因的核苷酸序列；De Greef，et al.，(1989)Bio/Technology 7：61[De Greef等人，(1989)，生物/技术，7：61]描述了表达编码草丁膦乙酰转移酶活性的嵌合bar基因的转基因植物的生产。还参见，美国专利号5,969,213、5,489,520、5,550,318、5,874,265、5,919,675、5,561,236、5,648,477、5,646,024、6,177,616 B1和5,879,903；以此目的将其通过引用结合在此。赋予对苯氧基丙酸和环己酮(如烯禾啶和氟吡甲禾灵)抗性的示例性基因是由Marshall，et al.，(1992)Theor.Appl.Genet.83：435[Marshall等人，(1992)，理论与应用遗传学，83：435]所描述的Acc1-S1、Acc1-S2和Acc1-S3基因。
(C)编码对抑制光合作用的除草剂具有抗性蛋白质的多核苷酸，如三嗪(psbA和gs+基因)和苯基氰(腈水解酶基因)。Przibilla，et al.，(1991)Plant Cell 3：169[Przibilla等人，(1991)，植物细胞，3：169]描述了用编码突变体psbA基因的质粒转化衣藻属。美国专利号4,810,648至Stalker中披露了腈水解酶基因的核苷酸序列，并且包含这些基因的DNA分子可在登录号53435、67441和67442下获得。Hayes，et al.，(1992)Biochem.J.285：173[Hayes等人，(1992)，生物化学杂志，285：173]描述了编码谷胱甘肽S-转移酶的DNA的克隆和表达。
(D)编码已经被引入到各种植物中对乙酰羟酸合酶具有抗性的蛋白质的多核苷酸，已经发现其使表达该酶的植物对多种类型的除草剂具有抗性(参见，例如，Hattori，etal.，(1995)Mol Gen Genet.246：419[Hattori等人，(1995)，分子遗传和基因组学，246：419])。赋予对除草剂抗性的其他基因包括：编码大鼠细胞色素P4507A1和酵母NADPH-细胞色素P450氧化还原酶的嵌合蛋白的基因(Shiota，et al.，(1994)Plant Physiol 106：17[Shiota等人，(1994)，植物生理学，106：17])、谷胱甘肽还原酶和超氧化物歧化酶的基因(Aono，et al.，(1995)Plant Cell Physiol 36：1687[Aono等人，(1995)，植物细胞生理学，36：1687])和各种磷酸转移酶的基因(Datta，et al.，(1992)Plant MolBiol20：619[Datta等人，(1992)，植物分子生物学，20：619])。
(E)编码对靶向原卟啉原氧化酶(protox)的除草剂的抗性的多核苷酸，该原卟啉原氧化酶是生产叶绿素所必需的。原卟啉原氧化酶酶用作为多种除草剂化合物的靶标。这些除草剂也抑制存在的所有不同物种的植物的生长，导致其完全破坏。美国专利号6,288,306 B1、6,282,837 B1和5,767,373和国际公开WO 2001/12825中描述了包含对这些除草剂具有抗性的改变的原卟啉原氧化酶活性的植物的发育。
(F)编码芳氧基链烷酸酯双加氧酶(AAD-1)蛋白的aad-1基因(最初来自于鞘氨醇除草剂)。性状赋予2，4-二氯苯氧基乙酸和芳氧基苯氧基丙酸酯(通常称为“fop”除草剂，如喹禾灵)除草剂的耐受性。在植物中除草剂耐受性的aad-1基因本身首先在WO 2005/107437中披露了(还参见，US 2009/0093366)。该aad-12基因，源自食酸戴尔福特菌，其编码芳氧基链烷酸酯双加氧酶(AAD-12)蛋白，蛋白质通过用芳氧基链烷酸酯部分使若干种除草剂去活来赋予对2，4-二氯苯氧基乙酸和吡啶氧基乙酸酯除草剂的耐受性，包括苯氧基生长素(例如，2，4-D，MCPA)以及吡啶氧基生长素(例如，氟草烟，绿草定)。
(G)编码美国专利申请公开2003/0135879中披露的用于赋予麦草畏耐受性的除草剂抗性麦草畏单加氧酶的多核苷酸；
(H)编码美国专利号4,810,648中所披露的用于赋予溴苯腈耐受性的溴草腈腈水解酶(Bxn)的多核苷酸分子；
(I)编码Misawa，et al.，(1993)Plant J.4：833-840 and in Misawa，et al.，(1994)Plant J.6：481-489[Misawa等人，(1993)，植物杂志，4：833-840和在：Misawa等人，(1994)，植物杂志，6：481-489]中所描述的达草灭耐受性的八氢番茄红素(crtl)的多核苷酸分子。
3.赋予或贡献于改变的谷物特征的转基因
如：
(A)改变的脂肪酸，例如，通过以下各项
(1)下调硬脂酰-ACP以增加植物的硬脂酸含量。参见，Knultzon，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：2624 and WO 1999/64579[Knultzon等人，(1992)，美国国家科学院院刊，89：2624和WO 1999/64579](改变玉米脂质谱的基因)。
(2)通过FAD-2基因修饰提高油酸和/或通过FAD-3基因修饰降低亚麻酸(参见，美国专利号6,063,947、6,323,392、6,372,965和WO 1993/11245)。
(3)改变共轭亚麻酸或亚油酸含量，如在WO 2001/12800中。
(4)改变LEC1，AGP，Dek1，Superall，mil ps，各种Ipa基因如Ipa1、Ipa3、hpt或hggt。例如，参见，WO 2002/42424、WO 1998/22604、WO 2003/011015、WO 2002/057439、WO2003/011015、美国专利号6,423,886、6,197,561、6,825,397和美国专利申请公开号US2003/0079247、US 2003/0204870和Rivera-Madrid，et al.，(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.92：5620-5624[Rivera-Madrid等人，(1995)，美国国家科学院院刊，92：5620-5624]。
(5)编码用于制备长链多不饱和脂肪酸的δ-8去饱和酶(美国专利号8,058,571和8,338,152)，用于降低饱和脂肪的δ-9去饱和酶(美国专利号8,063,269)，用于改进ω-3脂肪酸谱的报春花属Δ6-去饱和酶的基因。
(6)与脂质和糖代谢调节相关的分离的核酸和蛋白质，具体地，在生产转基因植物和调节种子储存化合物(包括脂质、脂肪酸、淀粉或种子贮藏蛋白)的水平的方法中使用的和在调节植物的种子大小、种子数、种子重量、根长和叶片大小的方法中使用的脂质代谢蛋白(LMP)(EP 2404499)。
(7)改变植物中糖诱导型2(HSI2)蛋白的高水平表达以增加或减少植物中HSI2的表达。增加HSI2的表达会增加油含量，同时降低HSI2的表达降低脱落酸敏感性和/或增加抗旱性(美国专利申请公开号2012/0066794)。
(8)细胞色素b5(Cb5)单独或与FAD2一起表达调节植物种子中的油含量，特别是增加ω-3脂肪酸的水平，并改进ω-6与ω-3脂肪酸的比例(美国专利申请公开号201I/0191904)。
(9)编码wrinkledl样多肽的核酸分子用于调节糖代谢(美国专利号8,217,223)。
(B)改变的磷含量，例如，通过以下各项
(1)引入植酸酶编码基因将增强植酸的分解，向转化的植物添加更多的游离磷酸。例如，参见，Van Hartingsveldt，et al.，(1993)Gene 127：87[Van Hartingsveldt等人，(1993)，基因，127：87]，公开了黑曲霉植酸酶基因的核苷酸序列。
(2)调节降低植酸含量的基因。在玉蜀黍中，例如，这可以通过以下各项来完成：克隆然后重新引入与以低水平植酸表征的玉蜀黍突变体中鉴定的一个或多个等位基因(LPA等位基因)相关的DNA，如在WO 2005/113778中，和/或改变肌醇激酶活性，如在WO 2002/059324、美国专利申请公开号2003/0009011、WO 2003/027243、美国专利申请公开号2003/0079247、WO 1999/05298、美国专利号6,197,561、美国专利号6,291,224、美国专利号6,391,348、WO 2002/059324、美国专利申请公开号2003/0079247、WO 1998/45448、WO 1999/55882、WO 2001/04147。
(C)例如，通过改变影响淀粉分支模式的酶的基因而影响的改变的碳水化合物，或改变硫氧还蛋白如NTR和/或TRX(参见，美国专利号6,531,648，以此目的2005/0204418其通过引用结合)和/或γ玉蜀黍蛋白敲除或突变体如cs27或TUSC27或en27的基因(参见，美国专利号6,858,778和美国专利申请公开号2005/0160488、美国专利申请公开号2005/0204418，以此目的其通过引用结合)。参见，Shiroza，et al.，(1988)J.Bacteriol.170：810[Shiroza等人，(1988)，细菌学杂志，170：810](链球菌突变果糖基转移酶基因的核苷酸序列)，Steinmetz，et al.，(1985)Mol.Gen.Genet.200：220[Steinmetz等人，(1985)，分子遗传学和基因组学，200：220](枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因的核苷酸序列)，Pen，et al.，(1992)Bio/Technology 10：292[Pen等人，(1992)，生物/技术，10：292](生产表达地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的转基因植物)，Elliot，et al.，(1993)Plant Molec.Biol.21：515[Elliot等人，(1993)，植物分子生物学，21：515](番茄转化酶基因的核苷酸序列)，etal.，(1993)J.Biol.Chem.268：22480[等人，(1993)，生物化学杂志，268：22480](大麦α-淀粉酶基因的定点诱变)和Fisher，et al.，(1993)Plant Physiol.102：1045[Fisher等人，(1993)，植物生理学，102：1045](玉米胚乳淀粉分支酶II)，WO 1999/10498(通过修饰UDP-D-木糖4-差向异构酶、脆性1和2、Refl、HCHL、C4H改进的消化性和/或淀粉提取)，美国专利号6,232,529(通过改变淀粉水平(AGP)生产高油种子的方法)。在此提及的脂肪酸修饰基因也可用于通过淀粉和油途径的相互关系影响淀粉含量和/或组成。
(D)改变的抗氧化剂含量或组成，如改变生育酚或生育三烯酚。例如，参见，涉及操作抗氧化剂水平的美国专利号6,787,683、美国专利申请公开号2004/0034886和WO 2000/68393，和通过改变尿黑酸香叶基转移酶(hggt)的WO 2003/082899。
(E)改变的必需种子氨基酸。例如，参见，美国专利号6,127,600(增加种子中必需氨基酸积累的方法)，美国专利号6,080,913(增加种子中必需氨基酸积累的二元方法)，美国专利号5,990,389(高赖氨酸)，WO 1999/40209(种子中氨基酸组成的变化)，WO 1999/29882(用于改变蛋白质氨基酸含量的方法)，美国专利号5,850,016(种子中氨基酸组成的改变)，WO 1998/20133(具有增加必需氨基酸水平的蛋白质)，美国专利号5,885,802(高甲硫氨酸)，美国专利号5,885,801(高苏氨酸)，美国专利号6,664,445(植物氨基酸生物合酶)，美国专利号6,459,019(增加的赖氨酸和苏氨酸)，美国专利号6,441,274(植物色氨酸合酶β亚基)，美国专利号6,346,403(甲硫氨酸代谢酶)，美国专利号5,939,599(高硫)，美国专利号5,912,414(增加的甲硫氨酸)，WO 1998/56935(植物氨基酸生物合酶)，WO 1998/45458(具有较高百分比必需氨基酸的工程化种子蛋白)，WO 1998/42831(增加的赖氨酸)，美国专利号5,633,436(增加的硫氨基酸含量)，美国专利号5,559,223(具有包含可编程水平的必需氨基酸的所定义结构的合成贮藏蛋白，用于改进植物的营养价值)，WO 1996/01905(增加的苏氨酸)，WO 1995/15392(增加的赖氨酸)，美国专利申请公开号2003/0163838，美国专利申请公开号2003/0150014，美国专利申请公开号2004/0068767，美国专利号6,803,498，WO 2001/79516。
4.控制雄性不育性的基因
存在若干可用的赋予遗传雄性不育性的方法，如在基因组内的单独位置处赋予雄性不育性的多个突变基因，如美国专利号4,654,465和4,727,219至Brar等人中所披露的，以及由美国专利号3,861,709和3,710,511中Patterson所描述的染色体易位。除了这些方法之外，Albertsen等人，美国专利号5,432,068描述了包括以下各项的核雄性不育：鉴定对雄性能育性至关重要的基因；沉默这种对雄性能育性至关重要的天然基因；从基本的雄性能育性基因中除去天然启动子并用诱导型启动子替换；将该遗传工程化基因插回入植物；并因此产生雄性不育的植物，因为诱导型启动子不是“开”的，导致雄性能育性基因不被转录。通过诱导或打“开”来恢复能育性，启动子进允许赋予雄性能育性的基因被转录。
(A)在绒毡层特异性启动子的控制下以及应用化学品N-Ac-PPT引入脱乙酰酶基因(WO 2001/29237)。
(B)引入各种雄蕊特异性启动子(WO 1992/13956、WO 1992/13957)。
(C)引入芽孢杆菌RNA酶和芽孢杆菌RNA酶抑制剂基因(Paul，et al.，(1992)PlantMol.Biol.19：611-622[Paul等人，(1992)，植物分子生物学，19：611-622])。
对于核雄性和雌性不育系统和基因的另外的实例，还参见美国专利号5,859,341、6,297,426、5,478,369、5,824,524、5,850,014和6,265,640，将其全部通过引用结合在此。
5.产生用于位点特异性DNA整合的位点的基因。
这包括引入可以在FLP/FRT系统中使用的FRT位点和/或可以在Cre/Loxp系统中使用的Lox位点。例如，参见，Lyznik，et al.，(2003)Plant Cell Rep 21：925-932[Lyznik等人，(2003)，植物细胞报告，21：925-932]和WO 1999/25821，将其通过引用结合在此。可以使用的其他系统包括噬菌体Mu的Gin重组酶(Maeser，et al.，(1991)Vicki Chandler，TheMaize Handbook ch.118[Maeser等人，(1991)，Vicki Chandler，玉蜀黍手册，第118章](施普林格出版社，1994))、大肠杆菌的Pin重组酶(Enomoto等人，1983)和pSRi质粒的R/RS系统(Araki等人，1992)。
6.影响非生物胁迫抗性的基因
包括但不限于开花，穗和种子发育，提高氮利用效率，改变氮反应性，抗旱性或耐旱性，抗寒性或耐寒性，抗盐性或耐盐性以及在胁迫下产量的增加。
(A)例如，参见：WO 2000/73475，其中通过改变苹果酸来改变用水效率；美国专利5,892,009、5,965,705、5,929,305、5,891,859、6,417,428、6,664,446、6,706,866、6,717,034、6,801,104、WO 2000/060089、WO 2001/026459、WO 2001/035725、WO 2001/034726、WO2001/035727、WO 2001/036444、WO 2001/036597、WO 2001/036598、WO 2002/015675、WO2002/017430、WO 2002/077185、WO 2002/079403、WO 2003/013227、WO 2003/013228、WO2003/014327、WO 2004/031349、WO 2004/076638、WO 199809521。
(B)WO 199938977描述了基因，这些基因包括有效减轻冷冻、高盐度和干旱对植物的负面影响以及赋予植物表型其他积极作用的CBF基因和转录因子
(C)美国专利申请公开号2004/0148654和WO 2001/36596，其中脱落酸在植物中被改变，导致改进的植物表型，如增加的产量和/或增加的对非生物胁迫的耐受性。
(D)WO 2000/006341、WO 2004/090143、美国专利号7,531,723和6,992,237，其中细胞分裂素表达被修饰，导致具有增加的胁迫耐受性的植物，如耐旱性和/或增加的产量。还参见，WO 2002/02776、WO 2003/052063、JP 2002/281975、美国专利号6,084,153、WO2001/64898、美国专利号6,177,275和美国专利号6,107,547(提高氮利用率和改变的氮反应性)。
(E)对于乙烯改变，参见美国专利申请公开号2004/0128719、美国专利申请公开号2003/0166197和WO 2000/32761。
(F)对于植物转录因子或非生物胁迫的转录调节子，参见，例如，美国专利申请公开号2004/0098764或美国专利申请公开号2004/0078852。
(G)增加液泡焦磷酸酶如AVP1表达以提高产量的基因，(美国专利号8,058,515)；编码HSFA4或HSFA5的核酸(A4或A5类的热休克因子)多肽，寡肽转运蛋白(OPT4样)多肽的核酸；间隔期2样(PLA2样)多肽或Wuschel相关同同源框1样(WOX1样)多肽(美国专利申请公开号US2011/0283420)。
(H)下调编码聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)蛋白的多核苷酸以调节程序性细胞死亡(美国专利号8,058,510)以增加活力。
(I)编码用于赋予抗旱性的DTP21多肽的多核苷酸(美国专利申请公开号US 2011/0277181)。
(J)编码用于调节发育，调节对胁迫的应答和调节胁迫耐受性的ACC合酶3(ACS3)蛋白的核苷酸序列(美国专利申请公开号US 2010/0287669)。
(K)编码赋予耐旱性表型(DTP)以赋予抗旱性的蛋白质的多核苷酸(WO 2012/058528)。
(L)用于赋予耐旱性和耐盐性的生育酚环化酶(TC)基因(美国专利申请公开号2012/0272352)。
(M)针对胁迫耐受性的CAAX氨基末端家族蛋白质(美国专利号8,338,661)。
(N)SAL1编码基因的突变具有增加的胁迫耐受性，包括耐旱性增加(美国专利申请公开号2010/0257633)。
(O)编码选自下组的多肽的核酸序列的表达，该组由以下各项组成：GRF多肽、RAA1样多肽、SYR多肽、ARKL多肽、和YTP多肽，增加产量相关性状(美国专利申请公开号2011/0061133)。
(P)调节植物中编码III类海藻糖磷酸酶(TPP)多肽的核酸的表达，用于增强植物中的产量相关性状，特别是增加种子产量(美国专利申请公开号2010/0024067)。
影响植物生长和农艺性状的其他基因和转录因子如产量，开花，植物生长和/或植物结构可以被引入或渗入植物，参见，例如，WO 1997/49811(LHY)、WO 1998/56918(ESD4)、WO 1997/10339和美国专利号6,573,430(TFL)、美国专利号6,713,663(FT)、WO 1996/14414(CON)、WO 1996/38560、WO 2001/21822(VRN1)、WO 2000/44918(VRN2)、WO 1999/49064(GI)、WO 2000/46358(FR1)、WO 1997/29123、美国专利号6,794,560、美国专利号6,307,126(GAI)、WO 1999/09174(D8和Rht)和WO 2004/076638和WO 2004/031349(转录因子)。
7.赋予产量增加的基因
(A)由1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶多肽(ACCDP)编码核酸转化的转基因作物植物，其中在作物植物中核酸序列的表达导致与植物的野生型品种相比，植物的根生长增加和/或增加的产量，和/或对环境胁迫的耐受性增加(美国专利号8,097,769)。
(B)已经显示出使用种子优先的启动子的玉蜀黍锌指蛋白基因(Zm-ZFP1)的过表达增强植物生长，增加每株植物的核数和总核重量(美国专利申请公开号2012/0079623)。
(C)已经显示出玉蜀黍侧生器官边界(LOB)结构域蛋白(Zm-LOBDP1)的组成型过表达增加每株植物的核数和总核重量(美国专利申请公开号2012/0079622)。
(D)通过调节植物中编码VIM1(甲基化的变体1)样多肽或VTC2样(GDP-L-半乳糖磷酸化酶)多肽或DUF1685多肽或ARF6样(生长素应答因子)多肽的核酸的表达来增强植物中的产量相关性状(WO 2012/038893)。
(E)调节植物中编码Ste20样多肽或其同源物的核酸的表达，给出相对于对照植物具有增加的产量的植物(EP 2431472)。
(F)编码用于修饰植物根系结构的核苷二磷酸酶激酶(NDK)多肽及其同源物的基因(美国专利申请公开号2009/0064373)。
8.赋予植物消化性的基因。
(A)通过调节木聚糖合酶的表达来改变植物细胞壁中存在的木聚糖水平(美国专利号8,173,866)。
在一些实施例中，堆叠的性状可以是已经获得法规性审批的性状或事件，包括但不限于表4A-4F中的事件。
表4A 向日葵(Helianthus annuus Sunflower)
表4B 水稻(Oryza sativa、Rice)
表4C 大豆(Glycine max L.、Soybean)
表4D 小麦(Triticum aestivum、Wheat)
表4E 苜蓿(Medicago sativa、Alfalfa)
表4F 玉蜀黍(Zea mays L、Maize)
具有法规性审批的其他事件是本领域技术人员熟知的，并且可以在环境风险评估中心(cera-gmc.org/？action＝gm_crop_database，其可以使用www前缀访问)和国际获得农业生物技术应用服务(isaaa.org/gmapprovaldatabase/default.asp，其可以使用www前缀访问)找到。
基因沉默
在一些实施例中，堆叠的性状可以处于一种或多种感兴趣的多核苷酸沉默的形式，导致抑制一种或多种靶有害生物多肽。在一些实施例中，通过使用抑制DNA构建体来实现沉默。
在一些实施例中，编码本披露的杀昆虫多肽的多肽或其片段或变体的一种或多种多核苷酸可以与编码具有如上所述的杀昆虫活性或农艺性状的一种或多种多肽的一种或多种多核苷酸堆叠，并且任选地可以进一步包括提供如下文所述一种或多种靶多核苷酸的基因沉默的一种或多种多核苷酸。
“抑制DNA构建体”是在转化或稳定整合进植物基因组时，导致该植物中的靶基因“沉默”的重组DNA构建体。对该植物来说，该靶基因可以是内源性的或是转基因的。如在此关于靶基因所使用的，“沉默”通常指在由靶基因表达的mRNA或蛋白质/酶的水平的抑制，和/或在酶活性或蛋白质功能性的水平的抑制。术语“抑制”包括降低、减少、下调、减弱、抑制、消除和阻止。“沉默”或“基因沉默”并没有规定机制，并且包括但不限于反义、共抑制、病毒抑制、发夹抑制、茎环抑制、基于RNAi的方法和基于小RNA的方法。
抑制DNA构建体可以包含源自感兴趣的靶基因的区域并且可以包含感兴趣的靶基因的正义链(或反义链)的核酸序列的所有或部分。取决于待利用的方法，该区域可以与感兴趣的基因的正义链(或反义链)的所有或部分是100％相同的或小于100％相同的(例如，至少50％或在51％和100％之间的任何整数相同的)。
抑制DNA构建体是本领域所熟知的，一旦选定感兴趣的靶基因就很容易构建，并且包括但不限于共抑制构建体、反义构建体、病毒抑制构建体、发夹抑制性构建体、茎环抑制性构建体、产生双链RNA的构建体、以及更通常的是，RNAi(RNA干扰)构建体和小RNA构建体，如siRNA(短干扰RNA)构建体和miRNA(微RNA)构建体。
“反义抑制”是指能够抑制靶蛋白表达的反义RNA转录物的产生。
“反义RNA”是指与靶初级转录物或mRNA的全部或部分互补，并阻断靶分离的核酸片段表达的RNA转录物(美国专利号5,107,065)。反义RNA可与特定基因转录物的任何部分，即5′非编码序列、3′非编码序列、内含子或编码序列互补。
“共抑制”是指能够抑制靶蛋白表达的正义RNA转录物的产生。“正义”RNA是指包括mRNA并且可在细胞内或体外翻译成蛋白质的RNA转录物。此前，已通过着眼于以正义方向过表达与天然mRNA具有同源性的核酸序列(其导致与过表达的序列具有同源性的所有RNA减少)设计出了植物中的共抑制构建体(参见，Vaucheret，et al.，(1998)Plant J.16：651-659 and Gura，(2000)Nature 404：804-808[Vaucheret等人，(1998)，植物杂志，16：651-659和Gura，(2000)，自然，404：804-808])。
另一种变型描述了将植物病毒序列用于引导对近端mRNA编码序列的抑制(PCT公开WO 1998/36083)。
最近的工作已经描述了“发夹”结构的利用，这些结构以互补方向并入mRNA编码序列的全部或部分，导致所表达的RNA的潜在的“茎-环”结构(PCT公开WO 1999/53050)。在这种情况下，茎是由相应于相对于启动子以正义或反义方向插入的感兴趣的基因的多核苷酸形成，并且环时由感兴趣的基因的一些多核苷酸形成，这些多核苷酸在构建体中不具有互补序列。这增加了回收的转基因植物中共抑制或沉默的频率。对于发夹抑制的综述，参见，Wesley，et al.，(2003)Methods in Molecular Biology，Plant Functional Genomics：Methods and Protocols236：273-286[Wesley等人，(2003)，分子生物学方法，植物功能基因组学：方法和方案，236：273-286]。
其中茎由至少来自待抑制基因的30个核苷酸形成并且环由随机的核苷酸序列形成的构建体也已经有效地用于抑制(PCT公开WO 1999/61632)。
已经描述了使用聚-T和聚-A序列产生茎环结构中的茎(PCT公开WO 2002/00894)。
然而另一种变型包括使用合成的重复序列来促进茎环结构中的茎的形成。已经证实，用这样的重组DNA片段制备的转基因生物体具有降低水平的由形成环的核苷酸片段编码的蛋白，如PCT公开WO 2002/00904中所述。
RNA干扰是指由短干扰性RNA(siRNA)介导的动物中序列特异性转录后基因沉默的过程(Fire等人，(1998)，自然，391：806)。在植物中的对应过程通常称为转录后基因沉默(PTGS)或RNA沉默，并且在真菌中又称为压制(quelling)。据信转录后基因沉默过程是用于防止外源基因表达的进化保守性细胞防御机制，并且通常由不同植物区系和门所共有(Fire，et al.，(1999)Trends Genet.15：358[Fire等人，(1999)，遗传学趋势，15：358])。这种防止外源基因表达的保护可能已经响应于双链RNA(dsRNA)的产生而演变，这些双链RNA源自病毒侵染或源自通过细胞应答将转座子元件随机整合到宿主基因组中，该细胞应答特异性地破坏病毒基因组RNA的同源单链RNA。dsRNA在细胞中的存在通过还没有完全表征的机制引发了RNAi应答。
细胞中长dsRNA的存在刺激称为dicer的核糖核酸酶III酶的活性。Dicer涉及使dsRNA加工成称为短干扰RNA(siRNA)的dsRNA是短片段(Berstein，et al.，(2001)Nature409：363[Berstein等人，(2001)，自然，409：363])。源自dicer活性的短干扰RNA的长度通常是约21至约23个核苷酸，并且包含约19个碱基对的双链体(Elbashir，et al.，(2001)GenesDev.15：188[Elbashir等人，(2001)，基因与发育，15：188])。Dicer还涉及从参与翻译控制的保守结构的前体RNA上切下21个和22个核苷酸的小时序RNA(stRNA)(Hutvagner，et al.，(2001)Science 293：834[Hutvagner等人，(2001)，科学，293：834])。RNAi应答的特征还在于内切核酸酶复合物，通常称为RNA诱导沉默复合物(RISC)，该复合物介导具有与siRNA双链体的反义链互补的序列的单链RNA的裂解。靶RNA的裂解在与siRNA双链体的反义链互补的区域中间发生(Elbashir，et al.，(2001)Genes Dev.15：188[Elbashir等人，(2001)，基因与发育，15：188])。此外，RNA干扰还涉及小RNA(例如，miRNA)介导的基因沉默，可推定是通过调节染色质结构并由此防止靶基因序列转录的细胞机制(参见，例如，Allshire，(2002)Science 297：1818-1819；Volpe，et al.，(2002)Science 297：1833-1837；Jenuwein，(2002)Science297：2215-2218and Hall，et al.，(2002)Science297：2232-2237[Allshire，(2002)，科学，297：1818-1819；Volpe等人，(2002)，科学，297：1833-1837；Jenuwein，(2002)，科学，297：2215-2218和Hall等人，(2002)，科学，297：2232-2237])。这样，本披露的miRNA分子可用于通过与RNA转录物的相互作用或可替代地通过与特定基因序列的相互作用介导基因沉默，其中这种相互作用导致转录或转录后水平的基因沉默。
进一步提供了允许增加从沉默元件所产生的RNAi的方法和组合物。在这些实施例中，这些方法和组合物使用包含有效地连接于植物细胞中有活性的启动子的靶有害生物序列的沉默元件的第一多核苷酸，和包括包含有效地连接于植物细胞中有活性的启动子的靶有害生物序列或活性变体或片段的抑制增强子元件的第二多核苷酸。沉默元件与抑制增强子元件的组合表达导致从沉默元件产生的抑制性RNA的扩增增加超过仅通过单独的沉默元件的表达可实现的抑制RNA的扩增。除了特定的RNAi种类自身的扩增增加以外，这些方法和组合物进一步允许产生可以提高破坏靶基因表达的有效性的RNAi种类的不同群体。正如，当抑制增强子元件在植物细胞中与沉默元件组合表达时，这些方法和组合物可以允许在整个植物内系统地产生RNAi；生产比仅用单独的沉默元件构建体观察到的更大量的RNAi；并且改进地将RNAi加载到植物的韧皮部中，从而通过RNAi方法更好地提供韧皮部摄食昆虫的控制。因此，各种方法和组合物提供用于将抑制性RNA递送至靶生物体的改进方法。参见，例如，美国专利申请公开2009/0188008。
如在此使用的，“抑制增强子元件”包括包含待抑制的靶序列或其活性片段或变体的多核苷酸。应当认识到，抑制增强子元件不需要与靶序列相同，而是，抑制增强子元件可以包含靶序列的变体，只要抑制增强子元件与靶序列具有足够的序列同一性，以允许由沉默元件产生的RNAi的增加水平超过仅通过沉默元件表达可实现的RNAi水平。相似地，抑制增强子元件可以包含靶序列的片段，其中该片段具有足够长度，以允许由沉默元件产生的RNAi的增加水平超过仅通过沉默元件表达可实现的RNAi水平。
应当认识到，可以使用来自相同靶序列或来自不同靶序列或来自相同靶序列的不同区域的多重抑制增强子元件。例如，所用的抑制增强子元件可以包含源自靶序列的不同区域(即，源自3′UTR、编码区、内含子、和/或5′URT)的靶序列片段。此外，抑制增强子元件可以如在此其他地方所述包含在表达盒内，并且在具体实施例中，抑制增强子元件作为沉默元件在相同或不同的DNA载体或构建体上。抑制增强子元件可以有效地连接于如在此披露的启动子。应当意识到，可以组成型或替代地表达抑制增强子元件，或可任选地，它可以以阶段特异性方式使用在此别处讨论的各种可诱导或组织优先的或发育调节的启动子产生。
在具体实施例中，使用沉默元件和抑制增强子元件两者时，RNAi的系统性产生发生在整个植物中。在其他实施例中，本披露的植物或植物部分具有比单独表达沉默元件构建体观察到的改进的RNAi加载到植物韧皮部中，从而通过RNAi方法提供更好的对韧皮部摄食昆虫的控制。在具体实施例中，本披露的植物、植物部分和植物细胞可以被进一步表征为允许生产可以增强破坏靶基因表达的有效性的多种RNAi种类。
在具体实施例中，沉默元件和抑制增强子元件的组合表达增加植物细胞、植物、植物部分、植物组织或韧皮部中的抑制性RNA的浓度超过当沉默元件单独表达时实现的水平。
如在此使用的，当与适当的对照植物相比时，“增加的抑制性RNA水平”包括在具有组合表达的植物中产生的RNAi水平的任何统计学显著的增加。例如，当与适当的对照相比时，植物、植物部分或植物细胞中RNAi水平的增加可以包括植物、植物部分、植物细胞或韧皮部中RNAi水平的至少约1％、约1％-5％、约5％-10％、约10％-20％、约20％-30％、约30％-40％、约40％-50％、约50％-60％、约60％-70％、约70％-80％、约80％-90％、约90％-100％或更高的增加。在其他实施例中，当与适当的对照相比时，植物、植物部分、植物细胞或韧皮部内RNAi水平增加包括植物、植物部分、植物细胞或韧皮部内RNAi水平的至少约1倍、约1倍-5倍、约5倍-10倍、约10倍-20倍、约20倍-30倍、约30倍-40倍、约40倍-50倍、约50倍-60倍、约60倍-70倍、约70倍-80倍、约80倍-90倍、约90倍-100倍或更高的增加。用于控制蝽象和草盲蝽的沉默元件与抑制增强子元件的组合表达的实例可以在美国专利申请公开2011/0301223和美国专利申请公开2009/0192117中找到。
一些实施例涉及通过干扰核糖核酸(RNA)分子下调昆虫有害生物物种中靶基因的表达。PCT公开WO 2007/074405描述了抑制包括马铃薯甲虫在内的无脊椎有害生物中靶基因表达的方法。PCT公开WO 2005/110068描述了作为控制昆虫侵袭的手段抑制无脊椎有害生物(包括具体地西方玉米根虫)中靶基因表达的方法。另外，PCT公开WO 2009/091864描述了用于抑制昆虫有害生物物种(包括来自草盲蝽(Lygus)属的有害生物)中的靶基因的组合物和方法。核酸分子包含用于靶向液泡ATP酶H亚基的RNAi，其可用于控制鳞翅目有害生物群体和侵袭，如美国专利申请公开2012/0198586中所描述的。PCT公开WO 2012/055982描述了抑制或下调编码以下各项的靶基因表达的核糖核酸(RNA或双链RNA)：昆虫核糖体蛋白如核糖体蛋白L19、核糖体蛋白L40或核糖体蛋白S27A；昆虫蛋白酶体亚基，如Rpn6蛋白、Pros25、Rpn2蛋白、蛋白酶体β1亚基蛋白或Pros β2蛋白；COPI囊泡的昆虫β-外被体，COPI囊泡的γ-外被体，COPI囊泡的β′-外被体蛋白或ζ-外被体；昆虫四跨膜蛋白2A蛋白，其是假定跨膜结构域蛋白；属于肌动蛋白家族的昆虫蛋白，如肌动蛋白5C；昆虫泛素-5E蛋白；昆虫Sec23蛋白，其是参与细胞内蛋白质转运的GTP酶活化剂；涉及运动活性的作为非常规肌球蛋白的昆虫皱纹蛋白质；涉及核替代mRNA剪接调节的昆虫曲颈蛋白；昆虫液泡H+-ATP酶G亚基蛋白和昆虫Tbp-1如Tat结合蛋白。美国专利申请公开2012/029750，US 20120297501、和2012/0322660描述了干扰核糖核酸(RNA或双链RNA)，其在昆虫有害生物物种摄取时起作用以下调所述昆虫有害生物中靶基因的表达，其中该RNA包含至少一个沉默元件，其中该沉默元件是包含退火的互补链的双链RNA的区域，该双链RNA中的一条链包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分互补的核苷酸序列或由其组成。美国专利申请公开2012/0164205描述了用于干扰双链核糖核酸(用于抑制无脊椎动物有害生物)的潜在靶标，包括：Chd3同源序列、β-微管蛋白同源序列、40kDa V-ATP酶同源序列、EF1α同源序列、26S蛋白质体亚基p28同源序列、保幼激素环氧化物酶水解酶同源序列、溶胀依赖氯通道蛋白同源序列、葡萄糖-6-磷酸1-脱氢酶蛋白同源序列、Act42A蛋白同源序列、ADP-核糖因子1同源序列、转录因子IIB蛋白同源序列、几丁质酶同源序列、泛素缀合酶同源序列、甘油醛-3-磷酸脱氢酶同源序列、泛素B同源序列、保幼激素酯酶同源物、和α微管蛋白同源序列。
在有害生物控制方面的用途
在有害生物控制或使其他生物体工程化中使用包含实施例的核酸序列或其变体的菌株作为杀有害生物剂的一般方法是本领域已知的。参见，例如，美国专利号5,039,523和EP 0480762 A2。
可以选择已知占据一种或多种感兴趣的作物的“植物圈”(叶面、叶际、根际和/或根面)的微生物宿主。选择这些微生物是为了能够在特定的环境中与野生型微生物成功竞争，提供表达本披露的杀昆虫多肽的基因的稳定维持和表达，并且理想的是，提供改进的保护杀有害生物剂免受环境退化和失活。
这些微生物包括细菌、藻类和真菌。特别令人感兴趣的是微生物如细菌，例如，假单胞菌属、欧文氏菌属、沙雷氏菌属、克雷伯氏菌属、黄单胞菌属、链霉菌属、根瘤菌属、红假单胞菌属、Methylius、农杆菌属、醋杆菌属、乳酸杆菌属、节细菌属、固氮菌属、明串珠菌属、和产碱杆菌属，真菌，特别是酵母，例如酵母菌属、隐球菌属、克鲁维酵母菌属、掷孢酵母属、赤酿母属、和短梗霉属。特别感兴趣的是这样的植物圈细菌物种如：核果树溃疡病菌、荧光假单胞菌、绿针假单胞菌、粘质沙雷氏菌、木醋杆菌、农杆菌、球红假单胞菌、野油菜黄单胞菌、苜蓿根瘤菌(Rhizobium melioti)、真养产碱杆菌、木棍状杆菌(Clavibacter xyli)和棕色固氮菌以及植物圈酵母物种如深红类酵母菌、黏红酵母、海滨红酵母、橙色红酵母(R.Aurantiaca)、浅白隐球菌、液化隐球菌(C.diffluens)、罗伦隐球菌、罗斯酵母(Saccharomyces rosei)、布雷多伦酵母(S.pretoriensis)、酿酒酵母、玫红掷孢酵母(Sporobolomyces roseus)、香气掷孢酵母(S.odorus)、维罗那克鲁维酵母(Kluyveromycesveronae)、和出芽短梗霉(Aureobasidium pollulans)。特别令人感兴趣的是着色微生物。特别感兴趣的宿主生物体包括酵母，如红酵母属物种、短梗霉属物种、酵母属物种(如酿酒酵母)、掷孢酵母属物种、叶面生物体如假单胞菌属物种(如绿脓假单胞菌、荧光假单胞菌、绿针假单胞菌)、欧文氏菌属物种、和黄杆菌属物种、和其他此类生物体，包括根癌土壤杆菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌等。
可以将编码实施例的杀昆虫多肽的基因引入到在植物(体表寄生菌)上繁殖的微生物中，以将杀昆虫多肽递送至潜在的靶有害生物。例如，体表寄生菌可以是革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。
例如根瘤化细菌可以通过本领域已知的方法从感兴趣的植物中分离出来。具体地，可以从植物的根中分离定植根部的蜡状芽孢杆菌菌株(参见，例如，Handelsman et al.(1991)Appl.Environ.Microbiol.56：713-718[Handelsman等人，(1991)，应用与环境微生物学，56：713-718])。可以通过本领域已知的标准方法将编码实施例的杀昆虫多肽的基因引入根瘤化蜡样芽胞杆菌。
可以通过电转化将编码本披露的杀昆虫多肽的基因引入，例如，到根瘤化芽孢杆菌中。具体地，可以将编码本披露的杀昆虫多肽的基因克隆到穿梭载体中，例如pHT3101(Lerecius，et al.，(1989)FEMS Microbiol.Letts.60：211-218[Lerecius等人，(1989)，FEMS微生物学快报，60：211-218])。可以通过电穿孔将包含本披露的具体杀昆虫多肽基因的编码序列的穿梭载体pHT3101转化到根瘤化芽孢杆菌(Lerecius，et al.，(1989)FEMSMicrobiol.Letts.60：211-218[Lerecius等人，(1989)，FEMS微生物学快报，60：211-218])。
可以设计表达系统，使得本披露的杀昆虫多肽例如在革兰氏阴性细菌如大肠杆菌的细胞质外分泌。具有所分泌的本披露的杀昆虫多肽的优点是：(1)避免所表达的本披露的杀昆虫多肽的潜在细胞毒性作用；和(2)本披露的杀昆虫多肽的纯化效率的改进，包括但不限于：每体积细胞培养液增加的蛋白质的回收和纯化效率和/或每单位蛋白回收和纯化的成本。
本披露的杀昆虫多肽可以在大肠杆菌中分泌，例如，通过将适当的大肠杆菌信号肽融合到本披露的杀昆虫多肽的氨基末端。由大肠杆菌识别的信号肽可以在已知在大肠杆菌中分泌的蛋白质中发现，例如OmpA蛋白质(Ghrayeb，et al.，(1984)EMBOJ，3：2437-2442[Ghrayeb等人，(1984)，欧洲分子生物学杂志，3：2437-2442])。OmpA是大肠杆菌外膜的主要蛋白质，并且因此其信号肽被认为在易位过程中是有效的。此外，OmpA信号肽在处理之前不需要被修饰，如其他信号肽的情况，例如脂蛋白信号肽(Duffaud，et al.，(1987)Meth.Enzymol.153：492[Duffaud等人，(1987)，酶学方法，153：492])。
实施例的杀昆虫多肽可以在细菌宿主中发酵，并且将所得细菌以与Bt菌株用作杀昆虫喷雾剂相同的方式加工并用作微生物喷雾剂。在由芽胞杆菌属分泌的本披露的杀昆虫多肽的情况下，使用本领域已知的程序除去或突变分泌信号。这种突变和/或缺失在发酵过程中防止杀昆虫多肽分泌到生长培养基中。本披露的杀昆虫多肽保留在细胞内，并且然后处理细胞以产生封装的杀昆虫多肽。任何合适的微生物可以用于此目的。已经使用假单孢菌属来表达Bt毒素作为包封的蛋白质，并将所得细胞作为杀昆虫剂加工和喷雾(Gaertner，et al.，(1993)，in：Advanced Engineered Pesticides，ed.Kim[Gaertner等人，(1993)，在：先进的工程化杀有害生物剂中，编辑：Kim])。
可替代地，本披露的杀昆虫多肽通过将异源基因导入细胞宿主而产生。该异源基因的表达直接或间接地导致了该杀有害生物剂的细胞内产生和维持。然后在以下条件下对这些细胞进行处理，当该细胞被施用到靶有害生物的环境时这些条件延长了在该细胞中产生的毒素的活性。得到的产物保留该毒素的毒性。然后，可以按照常规技术来配制这些天然胶囊化的杀有害生物多肽，以用于施用到寄宿着靶有害生物的环境(例如，土壤、水、以及植物的叶)。参见，例如，EPA 0192319和其中引用的文献。
杀有害生物组合物
在一些实施例中，活性成分可以以组合物的形式进行施用，并且可以同时或相继地与其他化合物一起施用到待处理的作物区域或植物中。这些化合物可以是肥料、除草剂、冷冻保护剂(cryoprotectant)、表面活性剂、洗涤剂、杀有害生物肥皂(pesticidal soap)、休眠喷洒油(dormant oil)、聚合物、和/或定时释放或生物可降解载体配制品，这些配制品允许在单次施用该配制品之后对靶区域进行长期给药。它们还可以是选择性除草剂、化学杀昆虫剂、杀病毒剂、杀微生物剂、杀变形虫剂、杀有害生物剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或这些制剂中的若干种的混合物，如果希望的话，与在配制品领域内通常使用的其他农业上可接受的载体、表面活性剂或促进施用的佐剂一起。合适的载体和佐剂可以是固体或液体，并且相应于在配制技术中常常采用的物质，例如天然的或再生的矿物质、溶剂、分散剂、湿润剂、增粘剂、粘合剂或肥料。同样地，可将这些配制品制备成可食用的“诱饵”或塑造成有害生物“陷阱”以允许由靶有害生物来摄食或摄取该杀有害生物配制品。
施用包含由细菌菌株产生的本披露的杀昆虫多肽中的至少一种的活性成分或农药组合物的方法包括叶施用、种子包衣和土壤施用。施用的次数和施用的速率取决于相应有害生物虫的侵袭强度。
可以将该组合物配制成粉末、粉剂、小丸、颗粒、喷雾剂、乳液、胶体、溶液、或类似剂型，并且并且可以通过脱水、冻干、匀浆、提取、过滤、离心、沉淀或浓缩包含该多肽的细胞培养物的常规方法来制备。在包含至少一种这种杀有害生物多肽的所有此类组合物中，该多肽可以按重量计以从约1％至约99％的浓度而存在。
可以在一个给定的区域内通过本披露的这些方法来杀灭鳞翅目、双翅目、异翅亚目、线虫、半翅目或鞘翅目有害生物或在数量上减少，或者可以将它们预防性地施用到环境区域内以防止由易感性有害生物的侵袭。优选地，这种有害生物摄取杀有害生物有效量的多肽、或与其接触。如在此使用的，“杀有害生物有效量”是指能够对至少一种有害生物造成死亡或明显减少有害生物生长、摄食或正常生理发育的杀有害生物剂的量。这个量将取决于以下因素而变化，例如：待控制的特定的靶有害生物，待处理的特定的环境、地点、植物、作物或农业场所，环境条件，以及施用杀有害生物有效的多肽组合物的方法、速率、浓度、稳定性、以及质量。这些配制品还可以根据气候条件、环境因素、和/或施用频率和/或有害生物侵袭的严重度而变化。
可通过将该细菌细胞、晶体、和/或孢子悬浮液或分离的蛋白组分与所希望的农业上可接受的载体配制在一起来制备所述的杀有害生物剂组合物。在施用之前，可以用适当的手段如冻干、冷冻干燥、脱水的，或在一种水性载体、培养基或合适的稀释剂，如盐水或其他缓冲液中配制这些组合物。这些经配制的组合物可以处于以下形式：粉剂或颗粒材料、或在油(植物性或矿物性)或水或油/水乳液中的悬浮液、或作为可湿性粉末、或与适合于农业施用的任何其他载体材料相组合。合适的农业载体可以是固体的或液体的，并且是本领域中熟知的。术语“农业上可接受的载体”覆盖了所有佐剂、惰性组分、分散剂、表面活性剂、增粘剂、粘合剂、等等，它们常用于杀有害生物剂配制技术中；这些是杀有害生物剂配制领域的技术人员熟知的。这些配制品可以与一种或多种固体或液体佐剂相混合，并且通过不同的手段进行制备，例如通过使用常规的配制技术将这种杀有害生物组合物与合适的佐剂进行均匀地混合、掺合和/或研磨。美国专利号6,468,523中描述了合适的配制品和施用方法，其通过引用结合在此。还可以用一种或多种化学组合物来处理植物，这些化学组合物包括一种或多种除草剂、杀昆虫剂或杀真菌剂。示例性化学组合物包括：果实/蔬菜除草剂：莠去津、除草定、敌草隆、草甘膦、利谷隆、嗪草酮、西玛津、氟乐灵、吡氟禾草灵、草铵膦、氯吡嘧磺隆Gowan、百草枯、戊炔草胺、烯禾啶、氟丙嘧草酯、氯吡嘧磺隆、茚嗪氟草胺(Indaziflam)；果实/蔬菜杀昆虫剂：涕灭威、苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuriengiensis)、甲萘威、克百威、毒死蜱、氯氰菊酯、溴氰菊酯、二嗪磷、马拉硫磷、阿维菌素、氟氯氰菊酯/β-氟氯氰菊酯、高氰戊菊酯、λ-氯氟氰菊酯、灭螨醌、联苯肼酯、甲氧虫酰肼、双苯氟脲、环虫酰肼、噻虫啉、呋虫胺、嘧螨酯、唑虫酰胺、噻虫胺、螺螨酯、γ-氯氟氰菊酯、螺甲螨酯、多杀菌素、氯虫酰胺、氰虫酰胺、Spinoteram、杀虫脲、螺虫乙酯、吡虫啉、氯虫双酰胺、硫双威、氰氟虫腙、氟啶虫胺腈、丁氟螨酯、Cyanopyrafen、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、Spinotoram、硫双威、氟啶虫酰胺、甲硫威、因灭汀-苯甲酸盐、茚虫威、噻唑磷、苯线磷、硫线磷、蚊蝇醚、苯丁锡、噻螨酮、灭多威、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮；水果/蔬菜杀真菌剂：多菌灵、百菌清、EBDC、硫、甲基硫菌灵、嘧菌酯、霜脲氰、氟啶胺、乙膦酸、异菌脲、醚菌酯、甲霜灵/精甲霜灵、肟菌酯、噻唑菌胺、丙森锌、肟菌酯、环酰菌胺、富马酸噁咪唑、氰霜唑、咪唑菌酮、苯酰菌胺、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯、环氟菌胺、啶酰菌胺；谷物除草剂：异丙隆、溴苯腈、碘苯腈、苯氧基类、氯磺隆、炔草酸、禾草灵、吡氟草胺、噁唑禾草灵、双氟磺草胺、氟草烟、甲磺隆、醚苯磺隆、氟酮磺隆、碘磺隆、丙苯磺隆、氟吡酰草胺、甲磺胺磺隆、氟丁酰草胺、唑啉草酯、酰嘧磺隆、噻吩磺隆甲基、苯磺隆、氟啶嘧磺隆、磺酰磺隆、磺酰草吡唑、甲氧磺草胺、氟噻草胺、肟草酮、吡咯磺隆；谷物杀真菌剂：多菌灵、百菌清、嘧菌酯、环唑醇、嘧菌环胺、丁苯吗啉、氟环唑、醚菌酯、喹氧灵、戊唑醇、肟菌酯、硅氟唑、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯、醚菌胺、丙硫菌唑、氟嘧菌酯；谷物杀昆虫剂：乐果、λ-氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、α-氯氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、联苯菊酯、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、Clorphyriphos、甲胺磷、乙酰甲胺磷、抗蚜威、甲硫威；玉蜀黍除草剂：莠去津、甲草胺、溴苯腈、乙草胺、麦草畏、二氯吡啶酸、(S-)二甲酚草胺、草铵膦、草甘膦、异噁唑草酮、(S-)异丙甲草胺、甲基磺草酮、烟嘧磺隆、氟嘧磺隆、砜嘧磺隆、磺草酮、甲酰胺磺隆、苯吡唑草酮、环磺酮(Tembotrione)、嘧啶肟草醚、酮脲磺草吩酯、氟噻草胺、吡咯磺隆；玉蜀 黍杀昆虫剂：克百威、毒死蜱、联苯菊酯、氟虫腈、吡虫啉、λ-氯氟氰菊酯、七氟菊酯、特丁硫磷、噻虫嗪、噻虫胺、螺甲螨酯、氯虫双酰胺、杀虫脲、氯虫酰胺、溴氰菊酯、硫双威、B-氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、联苯菊酯、虱螨脲、杀虫隆、七氟菊酯、嘧丙磷、乙虫腈、氰虫酰胺、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、阿维菌素、甲硫威、螺螨酯、螺虫乙酯；玉蜀黍杀真菌剂：种衣酯、福美双、丙硫菌唑、戊唑醇、肟菌酯；水稻除草剂：丁草胺、敌稗、四唑嘧磺隆、苄嘧磺隆、氰氟草酯、杀草隆、四唑酰草胺、唑吡嘧磺隆、苯噻草胺、去稗安、吡嘧磺隆、稗草畏、二氯喹啉酸、禾草丹、茚草酮、氟噻草胺、四唑酰草胺、氯吡嘧磺隆、去稗安、苯并双环酮、环酯草醚、五氟磺草胺、双草醚、丙炔噁草酮、乙氧嘧磺隆、丙草胺、甲基磺草酮、特呋三酮、噁草酮、噁唑禾草灵、吡丙醚；水稻杀昆虫剂：二嗪磷、杀螟硫磷、仲丁威、久效磷、丙硫克百威、噻嗪酮、呋虫胺、氟虫腈、吡虫啉、异丙威、噻虫啉、环虫酰肼、噻虫啉、呋虫胺、噻虫胺、乙虫腈、氯虫双酰胺、氯虫酰胺、溴氰菊酯、啶虫脒、噻虫嗪、氰虫酰胺、多杀菌素、Spinotoram、因灭汀-苯甲酸盐、氯氰菊酯、毒死蜱、杀螟丹、甲胺磷、醚菊酯、三唑磷、4-[[(6-氯吡啶-3-基))甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、克百威、丙硫克百威；水稻杀真菌剂：甲基硫菌灵、嘧菌酯、环丙酰菌胺、敌瘟磷、嘧菌腙、异稻瘟净、稻瘟灵、戊菌隆、噻菌灵、咯喹酮、三环唑、肟菌酯、双氯氰菌胺、氰菌胺、硅氟唑、噻酰菌胺；棉花除草剂：敌草隆、伏草隆、MSMA、乙氧氟草醚、扑草净、氟乐灵、唑草酮、烯草酮、吡氟禾草灵-丁基、草甘膦、达草灭、二甲戊乐灵、嘧硫草醚钠、三氟啶磺隆、得杀草、草铵膦、丙炔氟草胺、塞苯隆；棉花杀昆虫剂：乙酰甲胺磷、涕灭威、毒死蜱、氯氰菊酯、溴氰菊酯、马拉硫磷、久效磷、阿维菌素、啶虫脒、因灭汀-苯甲酸盐、吡虫啉、茚虫威、λ-氯氟氰菊酯、多杀菌素、硫双威、γ-氯氟氰菊酯、螺甲螨酯、啶虫丙醚、氟啶虫酰胺、氯虫双酰胺、杀虫脲、氯虫酰胺、β-氟氯氰菊酯、螺虫乙酯、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、呋虫胺、氯虫双酰胺、氰虫酰胺、多杀菌素、Spinotoram、γ-氯氟氰菊酯、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、硫双威、阿维菌素、氟啶虫酰胺、啶虫丙醚、螺甲螨酯、氟啶虫胺腈、丙溴磷、三唑磷、硫丹；棉花杀真菌剂：土菌灵、甲霜灵、喹硫磷；大豆除草 剂：甲草胺、灭草松、氟乐灵、氯嘧磺隆-乙基、氯酯磺草胺、噁唑禾草灵、氟磺胺草醚、吡氟禾草灵、草甘膦、甲氧咪草烟、灭草喹、咪草烟、(S-)异丙甲草胺、嗪草酮、二甲戊乐灵、得杀草、草铵膦；大豆杀昆虫剂：λ-氯氟氰菊酯、灭多威、对硫磷、硫威(Thiocarb)、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、氯虫双酰胺、氯虫酰胺、氰虫酰胺、多杀菌素、Spinotoram、因灭汀-苯甲酸盐、氟虫腈、乙虫腈、溴氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、γ和λ氯氟氰菊酯、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、螺虫乙酯、螺螨酯、杀虫脲、氟啶虫酰胺、硫双威、β-氟氯氰菊酯；大豆杀真菌剂：嘧菌酯、环唑醇、氟环唑、粉唑醇、吡唑醚菌酯、戊唑醇、肟菌酯、丙硫菌唑、四氟醚唑；甜菜除草剂：杀草敏、甜菜安、乙氧氟草黄、甜菜宁、野麦畏、二氯吡啶酸、吡氟禾草灵、环草定、苯嗪草酮、喹草酸、噻草酮、氟胺磺隆、得杀草、喹禾灵；甜菜杀昆虫剂：吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、溴氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、γ/λ氯氟氰菊酯、4-[[(6-氯吡啶-3-基))甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮、七氟菊酯、氯虫酰胺、氰虫酰胺、氟虫腈、克百威；卡诺拉除草剂：二氯吡啶酸、禾草灵、吡氟禾草灵、草铵膦、草甘膦、吡草胺、氟乐灵、胺苯磺隆、喹草酸、喹禾灵、烯草酮、得杀草；卡诺 拉杀真菌剂：嘧菌酯、多菌灵、咯菌腈、异菌脲、丙氯灵、烯菌酮；卡诺拉杀昆虫剂：克百威、有机磷酸盐类、拟除虫菊酯、噻虫啉、溴氰菊酯、吡虫啉、噻虫胺、噻虫嗪、啶虫脒、呋虫胺、β-氟氯氰菊酯、γ以及λ氯氟氰菊酯、τ-氟氰胺菊酯、乙虫腈、多杀菌素、Spinotoram、氯虫双酰胺、氯虫酰胺、氰虫酰胺、4-[[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基]呋喃-2(5H)-酮。
在一些实施例中，除草剂是莠去津、除草定、敌草隆、氯磺隆、甲磺隆、噻吩磺隆甲基、苯磺隆、乙草胺、麦草畏、异噁唑草酮、烟嘧磺隆、砜嘧磺隆、嘧硫草醚钠、丙炔氟草胺、氯嘧磺隆-乙基、嗪草酮、喹禾灵、精-异丙甲草胺、环己通(Hexazinne)或其组合。
在一些实施例中，杀昆虫剂是高氰戊菊酯、氯虫苯甲酰胺、灭多威、茚虫威、草氨酰或其组合。
杀有害生物和杀昆虫活性
“有害生物”包括但不限于：昆虫、真菌、细菌、线虫、螨、蜱等。昆虫有害生物包括选自以下各目的昆虫：鞘翅目、双翅目、膜翅目、鳞翅目、食毛目、同翅目、半翅目、直翅目、缨翅目、革翅目、等翅目、虱目、蚤目、毛翅目等，特别是鳞翅目和鞘翅目。
本领域的技术人员会知道，不是所有的化合物均对所有有害生物同样有效。实施例的化合物显示针对昆虫有害生物的活性，其可以包括经济上重要的农艺学、森林、温室、苗圃观赏植物、食物和纤维，公共和动物健康，国内和商业结构，家庭和储存产品有害生物。
鳞翅目幼虫包括但不限于：夜蛾科(Noctuidae)中的夜蛾、地老虎、尺蠖和实夜蛾亚科，草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda JE Smith)(秋夜蛾(fall armyworm))；甜菜夜蛾(S.exigua Hübner)(甜菜夜蛾(beet armyworm))；斜纹夜蛾(S.lituraFabricius)(斜纹夜蛾(tobacco cutworm)，茶蚕(cluster caterpillar))；蓓带夜蛾(Mamestraconfigurata Walker)(披肩粘虫(bertha armyworm))；甘蓝夜蛾(M.brassicae Linnaeus)(菜夜蛾(cabbage moth))；小地老虎(Agrotis ipsilon Hufnagel)(黑切根虫(blackcutworm))；西方灰地老虎(A.orthogonia Morrison)(西部切根虫(western cutworm))；粒肤地老虎(A.subterranea Fabricius)(粒肤切根虫(granulate cutworm))；棉叶波纹夜蛾(Alabama argillacea Hübner)(棉叶虫(cotton leaf worm))；粉纹夜蛾(TrichoplusianiHübner)(甘蓝银纹夜蛾(cabbage looper))；大豆尺夜蛾(大豆夜蛾)；梨豆夜蛾(黎豆夜蛾)；粗长须夜蛾(Hypena scabra Fabricius)(苜猜绿夜蛾(green cloverworm))；烟芽夜蛾(Heliothis virescens Fabricius)(烟青虫(tobacco budworm))；一星黏虫(Pseudaletia unipuncta Haworth)(夜蛾)；粗皮委夜蛾(Athetis mindaraBarnes andMcdunnough)(粗皮切根虫(rough skinned cutworm))；二点委夜蛾(Athetis lepigone)；暗缘地老虎(Euxoa messoriaHarris)(暗黑切根虫(darksided cutworm))；棉斑实蛾(Earias insulana Boisduval)(多刺螟蛉(spiny bollworm))；翠纹钻夜蛾(E.vittellaFabricius)(斑点螟蛉(spotted bollworm))；棉铃虫(Helicoverpa armigera Hübner)(美洲螟蛉(American bollworm))；玉米穗虫(玉米穗蛾(corn earworm)或棉螟蛉(cottonbollworm))；斑马纹夜蛾(Melanchra pictaHarris)(斑马纹夜蛾(zebra caterpillar))；柑橘夜蛾(Egira(Xylomyges)curialis Grote)(柑橘地老虎(citrus cutworm))；钻蛀虫、鞘蛾、结网毛虫、球果蛾；大螟(Sesamia inferens)(亚洲粉红梗螟(Asiatic pink stemborer))、和来自螟蛾科玉米螟(欧洲玉米螟)的雕叶虫；脐橙螟蛾(Amyelois transitellaWalker)(脐橙螟(naval orangeworm))；地中海粉螟(Anagasta kuehniellaZeller)(地中海粉斑螟(Mediterranean flour moth))；干果斑螟(Cadracautella Walker)(粉斑螟(almond moth))；二化螟(Chilo suppressalis Walker)(水稻螟虫(rice stem borer))；斑禾草螟(C.partellus)，(高粱螟(sorghum borer))；米螟(Corcyra cephalonicaStainton)(米蛾(rice moth))；玉米根草螟(Crambus caliginosellus Clemens)(玉米根网虫(corn root webworm))；早熟禾草螟(C.teterrellus Zincken)(早熟禾草螟(bluegrass webworm))；稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis Guenée)(稻纵卷叶螟(rice leafroller))葡萄里予螟(Desmia funeralis Hübner)(葡萄野螟(grapeleaffolder))；甜瓜绢野螟(Diaphania hyalinata Linnaeus)(甜瓜野螟(melon worm))；黄瓜绢野螟(D.nitidalis Stoll)(泡菜虫(pickleworm))；巨座玉米螟(Diatraeagrandiosella Dyar)(西南玉米秆草螟(southwestern corn borer))、蔗螟(D.saccharalis Fabricius)(甘蔗螟虫(surgarcane borer))；墨西哥稻螟(Eoreumaloftini Dyar)(墨西哥稻螟(Mexican rice borer))；烟草粉斑螟(Ephestia elutella Hübner)(烟草飞蛾(tobacco (cacao)moth))；大蜡螟(Galleria mellonella Linnaeus)(大蜡蛾(greater wax moth))；水稻切叶野螟(Herpetogramma licarsisalis Walker)(草地螟(sod webworm))；向日葵同斑螟(Homoeosoma electellumHulst)(向日葵螟(sunflowermoth))；南美玉米苗斑螟(Elasmopalpus lignosellusZeller)(小玉米茎蛀虫(lessercornstalk borer))；小蜡螟(Achroiagrisella Fabricius)(小蜡蛾(lesser wax moth))；草地螟(Loxostege sticticalisLinnaeus)(草地螟(beet webworm))；茶树螟(OrthagathyrisalisWalker)(茶树蛾(tea tree web moth))；豆荚野螟(Maruca testulalisGeyer)(豆荚蛀螟(bean pod borer))；印度谷螟(Plodia interpunctellaHübner)(印度谷螟(Indian meal moth))；三化螟(Scirpophagaincertulas Walker)(三化螟(yellow stemborer))；温室螟(Udea rubigalis Guenée)(芹菜卷叶螟(celery leaftier))；和卷蛾科(Tortricidae)中的卷叶虫、蚜虫、种实虫以及果实虫，西部黑头长翅卷蛾(Aclerisgloverana Walsingham)(西部黑头蚜虫(Western blackheaded budworm))；东部黑头长翅卷蛾(A.varianaFernald)(东部黑头蚜虫(Eastern blackheaded budworm))；果树黄卷蛾(ArchipsargyrospilaWalker)(果树卷叶蛾(fruit tree leaf roller))；罗萨娜黄卷蛾(A.rosana Linnaeus)(欧洲卷叶蛾(European leafroller))；和其他黄卷蛾属物种，苹小卷叶蛾(Adoxophyes orana Fischer von)(苹果小卷蛾(summer fruittortrix moth))；条纹向日葵螟(Cochylis hospes Walsingham)(带状向日葵斑蛾(bandedsunflower moth))；榛小卷蛾(Cydia latiferreana Walsingham)(filbertworm)；苹果蠹蛾(C.pomonella Linnaeus)(苹果蚕蛾(codling moth))；杂色卷叶蛾(Platynotaflavedana Clemens)(色稻纵卷叶螟(variegated leafroller))；荷兰石竹小卷蛾(P.stultana Walsingham)(杂食卷叶蛾(omnivorous leafroller))；鲜食葡萄小卷蛾(Lobesia botrana Denis&Schiffermüller)(欧洲葡萄蛾(European grape vine moth))；苹白小卷蛾(Scilonota ocellana Denis&Schiffermüller)(苹果芽小卷叶蛾(eyespottedbud moth))；萄果实虫主虫(Endopiza viteana Clemens)(葡萄小卷叶蛾(grape berrymoth))；女贞细卷蛾(Eupoecilia ambiguellaHübner)(葡萄果蠹蛾(vine moth))；巴西苹果卷叶虫(Bonagota salubricola Meyrick)(巴西苹果小卷叶蛾(Brazilian appleleafroller))；东方果实蛾(Grapholita molesta Busck)(梨小食心虫(oriental fruitmoth))；向日葵芽蛾(Suleima helianthana Riley)(向日葵芽蛾(sunflower bud moth))。带卷蛾属物种；卷叶蛾属物种。
鳞翅目中选择的其他农艺学有害生物包括但不限于秋星尺蠖(AlsophilapometariaHarris)(秋星尺蠖(fall cankerworm))；桃条麦蛾(AnarsialineatellaZeller)(桃条麦蛾(peach twig borer))；栎橙纹犀额蛾(AnisotasenatoriaJ.E.Smith)(橙色斑纹橡木虫(orange striped oakworm))；柞蚕(Antheraeapernyi Guérin-Méneville)(中橡木柞蚕虫(Chinese Oak Tussah Moth))；家蚕(Bombyxmori Linnaeus)(桑蚕(Silkworm))；棉潜蛾(Bucculatrix thurberiellaBusck)(棉叶潜蛾(cotton leaf perforator))；纹黄豆粉蝶(Colias eurytheme Boisduval)(苜蓿粉蝶(alfalfa caterpillar))；桃蛀螟(Conogethes punctiferalis)(桃蛀野螟(Yellow PeachMoth))；核桃舟蛾(Datana integerrima Grote&Robinson)(核桃天社蛾(walnutcaterpillar))；落叶松毛虫(Dendrolimus sibiricus Tschetwerikov)(西伯利亚蚕蛾(Siberian silk moth))，白尺蠖蛾(Ennomos subsignariaHübner)(榆角尺蠖(elmspanworm))；菩提尺蠖(Erannis tiliaria Harris)(椴尺蠖(linden looper))；黄毒蛾(Euproctis chrysorrhoea Linnaeus)(棕尾毒蛾(browntail moth))；黑拟蛉蛾(Harrisina americana Guérin-Méneville)(野棉花夜蛾(grapeleaf skeletonizer))；牧草天蚕蛾(Hemileuca oliviae Cockrell)(牧草天蚕蛾(range caterpillar))；美国白蛾(Hyphantria cunea Drury)(美国白蛾(fall webworm))；番茄茎麦蛾(Keiferialycopersicella Walsingham)(番茄蛲虫(tomato pinworm))；东部铁杉尺蠖(Lambdinafiscellaria fiscellariaHulst)(东部铁杉尺蠖(Eastern hemlock looper))；西部铁杉尺蠖(L.fiscellaria lugubrosa Hulst)(西部铁杉尺蠖(Western hemlock looper))；柳毒蛾(Leucoma salicis Linnaeus)(雪毒蛾(satin moth))；舞毒蛾(Lymantriad isparLinnaeus)(舞毒蛾(gypsy moth))；番茄天蛾(Manduca quinquemaculata Haworth)(五点天蛾(five spotted hawk moth)，番茄天蛾(tomato hornworm))；烟草天蛾(M.sextaHaworth)(番茄天蛾(tomato hornworm)，烟草天蛾(tobacco hornworm))；冬尺蠖蛾(Operophtera brumataLinnaeus)(冬尺蠖蛾(winter moth))；春尺蠖(PaleacritavernataPeck)(春尺蠖(spring cankerworm))；美洲大芷凤蝶(Papilio cresphontesCramer)(大黄带凤蝶(giant swallowtail)，柑桔凤蝶(orange dog))；加州木角斗蛾(Phryganidia californica Packard)(加州槲蛾(California oakworm))；柑桔潜蛾(Phyllocnistis citrella Stainton)(柑桔潜叶蛾(citrus leafminer))；斑幕潜叶蛾(Phyllonorycter blancardellaFabricius)(斑幕潜叶虫(spotted tentiformleafminer))；欧洲粉蝶(Pieris brassicae Linnaeus)(大白粉蝶(large whitebutterfly))；菜青虫(P.rapae Linnaeus)(小白粉蝶(small white butterfly))；暗脉菜粉蝶(P.napi Linnaeus)(绿脉菜粉蝶(green veined white butterfly))；洋蓟葱羽蛾(Platyptilia carduidactyla Riley)(洋蓟羽蛾(artichoke plume moth))；小菜蛾(Plutella xylostella Linnaeus)(小菜蛾(diamondback moth))；棉红铃虫(Pectinophora gossypiella Saunders)(粉螟蛉(pink bollworm))；多形云粉蝶(PontiaprotodiceBoisduval and Leconte)(南方菜青虫(Southern cabbageworm))；杂食尺蠖(Sabulodes aegrotata Guenée)(杂食尺蠖(omnivorous looper))；红抚天社蛾(Schizuraconcinna J.E.Smith)(红疣天社蛾(red humped caterpillar))；麦蛾(Sitotrogacerealella Olivier)(麦蛾(Angoumois grain moth))；松异舟蛾(Thaumetopoeapityocampa Schiffermuller)(松橡树带蛾毛虫(pine processionary caterpillar))；幕谷蛾(Tineola bisselliella Hummel)(负袋夜蛾(webbing clothesmoth))；番茄斑潜蝇(Tuta absoluta Meyrick)(番茄斑潜蝇(tomato leafminer))；苹果巢蛾(YponomeutapadellaLinnaeus)(巢蛾(ermine moth))；Heliothis subflexa Guenée；天幕毛虫属(Malacosoma)物种和古毒蛾属(Orgyia)物种
感兴趣的是鞘翅目的幼虫和成体，其包括来自长角象科(Anthribidae)、豆象科(Bruchidae)和象甲科(Curculionidae)的象鼻虫(包括但不限于：墨西哥棉铃象(Anthonomus grandis Boheman)(棉铃象甲(boll weevil))；稻水象甲(Lissorhoptrusoryzophilus Kuschel)(稻水象虫(rice water weevil))；谷象(Sitophilus granariusLinnaeus)(谷象(granary weevil))；米象(S.oryzae Linnaeus)(米象(rice weevil))；三叶草叶象(Hypera punctata Fabricius)(车轴草叶象虫(clover leaf weevil))；密点细枝象(Cylindrocopturus adspersus LeConte)(向日葵茎象鼻虫(sunflower stemweevil))；黄褐小爪象(Smicronyx fulvus LeConte)(红葵花籽象甲(red sunflower seedweevil))；灰色小爪象(S.sordidusLeConte)(灰葵花籽象甲(gray sunflower seedweevil))；玉米隐啄象(Sphenophorus maidisChittenden)(玉蜀黍象虫(maizebillbug)))；叶甲科(Chrysomelidae)的跳甲、黄瓜叶甲、根虫、叶甲、马铃薯叶甲以及潜叶虫(包括但不限于：马铃薯叶甲(Leptinotarsa decemlineata Say)(马铃薯甲虫(Coloradopotato beetle))；玉米根萤叶甲(Diabrotica virgifera virgifera LeConte)(西方玉米根虫)；北方玉米根虫(D.barberi Smith and Lawrence)(北方玉米根虫(northern cornrootworm))；黄瓜十一星叶甲食根亚种(D.undecimpunetata howardi Barber)(南方玉米根虫(southern corn rootworm))；玉米铜色跳甲(Chaetocnema pulicaria Melsheimer)(玉米跳甲(corn flea beetle))；十字花科跳甲(Phyllotreta cruciferae Goeze)(十字花科蔬菜跳甲(Crucifer flea beetle))；黄曲条跳甲(Phyllotreta striolata)(黄曲条跳甲(stripped flea beetle))；肖叶甲褐斑(Colaspis brunnea Fabricius)(葡萄肖叶甲(grape colaspis))；橙足负泥虫(Oulema melanopus Linnaeus)(谷叶甲虫(cerealleafbeetle))；向日葵叶甲(Zygogramma exclamationisFabricius)(向日葵叶甲(sunflower beetle)))；来自瓢虫科(Coccinellidae)的甲虫(包括但不限于：墨西哥豆瓢虫(Epilachna varivestisMulsant)(墨西哥豆瓢虫(Mexican bean beetle)))；金龟子和来自金龟子科(Scarabaeidae)的其他甲虫(包括但不限于：日本丽金龟(Popilliajaponica Newman)(日本金龟子(Japanese beetle))；北方圆头犀金龟(CyclocephalaborealisArrow)(北方独角仙(northern masked chafer)，白蛴螬(white grub))；南方圆头犀金龟(C.immaculata Olivier)(南方独角仙(southern masked chafer)，白蛴螬(white grub))；欧洲切根鳃金龟(Rhizotrogus majalis Razoumowsky)(欧洲金龟子(European chafer))；长毛食叶然金龟(Phyllophaga crinita Burmeister)(白蛴螬(white grub))；胡萝卜金龟(Ligyrus gibbosus De Geer)(胡萝卜金龟(carrot beetle)))；来自皮蠹科(Dermestidae)的地毯圆皮蠹(carpet beetle)；来自叩甲科，伪金针虫属物种，梳爪叩头虫属物种的金针虫；宽胸叩头虫属物种；Limonius物种；缺隆叩甲属物种；Ctenicera物种；Aeolus物种；来自小蠹科的小蠹虫和来自拟步甲科的甲虫。
双翅目(Diptera)的成体和未成熟体是感兴趣的，包括潜叶虫美洲黍潜叶蝇(Agromyza parvicornis Loew)(玉米斑潜叶蝇(corn blotch leafminer))；摇蚊科(包括但不限于：高粱瘿蚊(Contarinia sorghicola Coquillett)(高梁瘿蚊(sorghum midge))；黑森瘿蚊(Mayetiola destructor Say)(黑森蝇(Hessian fly))；麦红吸浆虫(Sitodiplosis mosellana Géhin)(小麦吸浆虫(wheat midge))；葵花籽蚊(Neolasioptera murtfeldtiana Felt)，(向日葵籽瘿蚊(sunflower seed midge)))；果蝇(实蝇科(Tephritidae))、瑞典麦秆蝇(Oscinella frit Linnaeus)(果蝇(frit flies))；蛆虫(包括但不限于：灰地种蝇(Deliaplatura Meigen)(种蝇(seedcorn maggot))；麦地种蝇(D.coarctata Fallen)(麦种蝇(wheat bulb fly))和其他地种蝇属，美洲麦秆蝇(Meromyza americana Fitch)(美洲麦秆蝇(wheat stem maggot))；家蝇(MuscadomesticaLinnaeus)(家蝇(house flies))；夏厕蝇(Fannia canicularis Linnaeus)、小舍蝇(F.femoralis Stein)(小家蝇(lesser houseflies))；厩螫蝇(Stomoxys calcitransLinnaeus)(螫蝇(stable flies))；秋家蝇，角蝇，绿头苍蝇，金蝇属；蝇属物种和其他麝香蝇(muscoid fly)有害生物、马蝇虻属(Tabanus)物种；肤蝇胃蝇属(Gastrophilus)物种；狂蝇属(Oestrus)物种；纹皮蝇皮蝇属(Hypoderma)物种；鹿蝇斑虻属(Chrysops)物种；绵羊虱蝇(Melophagus ovinus Linnaeus)(绵羊蜱)和其他短角亚目，蚊子伊蚊属(Aedes)物种；疟蚊属(Anopheles)物种；家蚊属(Culex)物种；黑蝇原蚋属(Prosimulium)物种；蚋属(Simulium)物种；吸血蠓、沙蝇、眼菌蚊(sciarid)和其他长角亚目(Nematocera)。
作为感兴趣的昆虫包括了半翅目和同翅目的成体和若虫，如但不限于：来自球蚜科(Adelgidae)的球蚜、来自盲蝽科(Miridae)的盲蝽、来自蝉科(Cicadidae)的蝉、叶蝉、小绿叶蝉属(Empoasca)物种；来自叶蝉科的，来自菱蜡蝉科(Cixiidae)、青翅飞虱科(Flatidae)、蜡蝉总科(Fulgoroidea)、瓢蜡蝉科(Issidae)和(Delphacidae)的飞虱，来自角蝉科(Membracidae)的角蝉，来自木虱科(Psyllidae)的木虱，来自粉虱科(Aleyrodidae)的粉虱，来自蚜科(Aphididae)的蚜虫，来自根瘤蚜科(Phylloxeridae)的葡萄根瘤蚜，来自粉蚧科(Pseudococcidae)的粉蚧，来自链介壳虫科(Asterolecanidae)、蚧科(Coccidae)、粉蚧科(Dactylopiidae)、盾蚧科(Diaspididae)、绒蚧科(Eriococcidae)、旌介壳虫科(Ortheziidae)、刺葵介壳虫科(Phoenicococcidae)和绵蚧科(Margarodidae)的介壳虫，来自网蝽科的网蝽，来自蝽科(Pentatomidae)的椿象，长蝽(cinch bug)，土长蝽属物种；和来自长蝽科(Lygaeidae)的其他籽长蝽、来自沫蝉科(Cercopidae)的沫蝉、来自缘蝽科(Coreidae)的南瓜缘蝽和来自红蝽科(Pyrrhocoridae)的秋恙螨和棉蝽。
来自同翅目的农艺重要成员进一步包括但不限于：豌豆蚜(Acyrthisiphon pisumHarris)(豌豆蚜虫(pea aphid))；黑豆蚜(Aphis craccivora Koch)(蚕豆蚜(cowpeaaphid))；黑豆蚜(A.fabae Scopoli)(蚕豆蚜(black bean aphid))；棉蚜(A.gossypiiGlover)(棉蚜(cotton aphid)，瓜叶菊蚜虫(melon aphid))；玉米根蚜(A.maidiradicisForbes)(玉米根蚜(corn root aphid))；苹果黄蚜(A.pomi De Geer)(苹蚜(appleaphid))；绣线菊蚜(A.spiraecola Patch)(绣线菊蚜(spirea aphid))；茄粗额蚜(Aulacorthum solani Kaltenbach)(指顶花无网长管蚜(foxglove aphid))；草莓钉蚜(Chaetosiphon fragaefolii Cockerell)(草莓毛管蚜(strawberry aphid))；麦双尾蚜(Diuraphis noxia Kurdjumov/Mordvilko)(俄罗斯小麦蚜虫(Russian wheat aphid))；车前圆尾蚜(Dysaphis plantaginea Paaserini)(苹粉红劣蚜(rosy apple aphid))；苹果绵蚜(Eriosoma lanigerum Hausmann)(苹果绵蚜(woolly apple aphid))；甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae Linnaeus)(菜蚜(cabbage aphid))；桃粉大尾蚜(Hyalopteruspruni Geoffroy)(桃大尾蚜(mealy plum aphid))；萝卜蚜(Lipaphis erysimiKaltenbach)(萝卜蚜(turnip aphid))；麦无网长管蚜(Metopolophium dirrhodum Walker)(麦蚜虫(cereal aphid))；马铃薯长管蚜(Macrosiphum euphorbiae Thomas)(马铃薯蚜(potato aphid))；桃蚜(Myzuspersicae Sulzer)(桃蚜(peach-potato aphid，greenpeach aphid))；莴苣衲长管蚜(Nasonovia ribisnigri Mosley)(莴苣蚜(lettuceaphid))；瘿绵对属(Pemphigus)物种(根蚜虫(root aphids)和倍蚜(gall aphids))；玉米蚜(Rhopalosiphum maidis Fitch)(玉米蚜(corn leafaphid))；禾谷缢管蚜(R.padiLinnaeus)(禾谷缢管蚜(bird cherry-oat aphid))；麦二叉蚜(Schizaphis graminumRondani)(麦二叉蚜(greenbug))；牛鞭草蚜(SiphaflavaForbes)(甘蔗黄蚜(yellowsugarcane aphid))；麦长管蚜(Sitobion avenae Fabricius)(麦长管蚜(English grainaphid))；苜蓿斑蚜(Therioaphis maculata Buckton)(苜蓿斑蚜(spotted alfalfaaphid))；茶二叉蚜(Toxoptera aurantii Boyer de Fonscolombe)(黑色柑橘蚜(blackcitrus aphid)和褐色橘蚜(T.citricida Kirkaldy)(桔二叉蚜(brown citrusaphid))；球属(Adelges)物种(球蚜(adelgids))；长山核桃根瘤蚜(Phylloxera devastatrixPergande)(山胡桃根瘤蚜(pecan phylloxera))；烟粉虱(Bemisia tabaci Gennadius)(烟粉虱(tobacco whitefly)，甘薯粉虱(sweetpotato whitefly))；银叶粉虱(B.argentifolii Bellows&Perring)(银叶粉虱(silverleaf whitefly))；柑橘粉虱(Dialeurodes citri Ashmead)(柑桔粉虱(citrus whitefly))；结翅白粉虱(Trialeurodes abutiloneus)(带状翅白粉虱(bandedwinged whitefly)和温室粉虱(T.vaporariorum Westwood)(温室粉虱(greenhouse whitefly))；马铃薯小绿叶蝉(Empoasca fabae Harris)(马铃薯叶蝉(potato leafhopper))；灰飞虱(Laodelphaxstriatellus Fallen)(灰飞虱(smaller brown planthopper))；二点叶蝉(Macrolestesquadrilineatus Forbes)(紫菀叶蝉(aster leafhopper))；黑尾叶蝉(Nephotettixcinticeps Uhler)(绿叶蝉(green leafhopper))；二条斑黑尾叶蝉(N.nigropictus)(稻叶蝉(rice leafhopper))；褐飞虱(Nilaparvata lugens)(褐飞虱(brownplanthopper))；玉米蜡蝉(Peregrinus maidis Ashmead)(玉米飞虱(cornplanthopper))；白背飞虱(Sogatella furcifera Horvath)(白背飞虱(white-backedplanthopper))；稻条背飞虱(Sogatodes orizicola Muir)(稻飞虱(rice delphacid))；苹果白叶蝉(Typhlocyba pomariaMcAtee)(苹白小叶蝉(white apple leafhopper))；葡萄斑叶蝉属(Erythroneoura)物种(葡萄叶蝉(grape leafhoppers))；十七年蝉(MagicicadaseptendecimLinnaeus)(周期蝉(periodical cicada))；吹绵蚧(lcerya purchasiMaskell)(吹绵蚧(cottony cushion scale))；梨圆蚧(Quadraspidiotus perniciosusComstock)(梨圆蚧(San Jose scale))；臀纹粉蚧(Planococcus citri Risso)(桔粉蚧(citrus mealybug))；粉蚧属(Pseudococcus)物种(其他粉蚧系群)；梨木虱(CacopsyllapyricolaFoerster)(梨木虱(pear psylla))；柿木虱(Trioza diospyri Ashmead)(柿木虱(persimmon psylla))。
来自半翅目的感兴趣的农艺重要物种包括但不限于：拟绿蝽(Acrosternumhilare Say)(稻绿蝽(green stink bug))；南瓜缘蝽(Anasa tristis De Geer)(南瓜虫(squash bug))；美洲谷长蝽(Blissus leucopterus leucopterus Say)(麦长蝽(chinchbug))；方翅网蝽(Corythuca gossypii Fabricius)(棉网蝽(cotton lace bug))；番茄蝽(Cyrtopeltis modesta Distant)(番茄蝽(tomato bug))；棉蝽(Dysdercus suturellusHerrich-)(棉红蝽(cotton stainer))；褐臭蝽(Euschistus servus Say)(褐臭蝽(brown stink bug))；一斑臭蝽(E.variolarius Palisot de Beauvois)(一斑臭蝽(one-spotted stink bug))；长蝽属(Graptostethus)物种(果实蝽系群(complex of seedbugs))；松叶根蝽(Leptoglossus corculus Say)(松叶根蝽(leaf-footed pine seedbug))；美洲牧草盲蝽(Lygus lincolaris Palisot de Beauvois)(牧草盲蝽(tarnishedplant bug))；牧草盲蝽(L.HesperusKnight)(西部牧草盲蝽(Western tarnished plantbug))；牧草盲蝽(L.pratensisLinnaeus)(牧草盲蝽(common meadow bug))；长毛草盲蝽(L.rugulipennis Poppius)(长毛草盲蝽(European tarnished plant bug))；长绿盲蝽(Lygocoris pabulinus Linnaeus)(苹绿盲蝽(common green capsid))；稻绿蝽(Nezaraviridula Linnaeus)(南方绿椿象(southern green stink bug))；美洲稻蝽(Oebaluspugnax Fabricius)(稻褐蝽(rice stink bug))；马利筋长蝽(Oncopeltus fasciatusDallas)(大马利筋长蝽(large milkweed bug))；棉跳盲蝽(Pseudatomoscelis seriatusReuter)(棉跳盲蝽(cotton fleahopper))。
此外，实施例可以对半翅目有效，如草莓蝽(Calocoris norvegicus Gmelin)(草莓长蝽(strawberry bug))；Orthops campestris Linnaeus；苹果盲蝽(Plesiocorisrugicollis Fallen)(苹盲蝽(apple capsid))；番茄蝽(Cyrtopeltis modestus Distant)(番茄蝽(tomato bug))；黑斑烟盲蝽(Cyrtopeltis notatus Distant)(吸蝇(suckfly))；白斑盲蝽(Spanagonicus albofasciatus Reuter)(白斑盲蝽(whitemarkedfleahopper))；皂荚蝽(Diaphnocoris chlorionis Say)(皂角蝽(honeylocust plantbug))；洋葱蝽(Labopidicola allii Knight)(葱盲蝽(onion plant bug))；棉盲蝽(Pseudatomoscelis seriatus Reuter)(棉盲蝽(cotton fleahopper))；苜蓿褐盲蝽(Adelphocoris rapidus Say)(苜蓿褐盲蝽(rapid plant bug))；四线盲蝽(Poecilocapsus lineatus Fabricius)(四线叶虫(four-lined plant bug))；小长蝽(Nysius ericae Schilling)(多彩长蝽(false chinch bug))；假麦长蝽(Nysiusraphanus Howard)(假麦长蝽(false chinch bug))；稻绿蝽(Nezara viridula Linnaeus)(南方绿椿象(Southern green stink bug))；扁盾蝽属(Eurygaster)物种；缘蝽科(Coreidae)物种；红蝽科(Pyrrhocoridae)物种；谷蛾科(Tinidae)物种；负子蝽科(Blostomatidae)物种；猪蝽科(Reduviidae)物种和臭虫科(Cimicidae)物种
另外，包括蜱螨目(Acari)(螨类)的成体和幼虫，如小麦瘤瘿螨(Aceriatosichella Keifer)(小麦卷叶螨(wheat curl mite))；麦岩螨(Petrobia latens Müller)(褐色小麦螨(brown wheat mite))；在叶螨科(Tetranychidae)中蜘蛛螨和红螨，苹果全爪螨(Panonychus ulmi Koch)(欧洲红螨(European red mite))；二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch)(二点叶螨(two spotted spider mite))；迈叶螨(T.mcdanieli McGregor)(迈叶螨(McDaniel mite))；朱砂叶螨(T.cinnabarinusBoisduval)(朱砂叶螨(carmine spider mite))；土耳其斯坦叶螨(T.turkestani Ugarov&Nikolski)(土耳其斯坦叶螨(strawberry spider mite))；细须螨科中的葡萄短须螨，桔短须螨(Brevipalpus lewisi McGregor)桔短须螨(citrus flatmite))；瘿螨科(Eriophyidae)中的锈螨和芽瘿螨以及其他食叶螨和对人类和动物健康重要的螨，即表皮螨科(Epidermoptidae)的尘螨、蠕形螨科(Demodicidae)的毛囊螨、食甜螨科(Glycyphagidae)的谷螨，硬蜱科(Ixodidae)的蜱。黑脚硬蜱(Ixodes scapularis Say)(鹿蜱(deertick))；全环硬蜱(I.holocyclus Neumann)(澳大利亚致瘫痪埤(Australianparalysis tick))；变异矩头蜱(Dermacentor variabilis Say)(美洲犬蜱(American dogtick))；美洲钝眼蜱(Amblyomma americanum Linnaeus)(孤星蜱(lone star tick))以及在痒螨科、蒲螨科和疥螨科中的痒螨和疥螨。
缨尾目(Thysanura)的昆虫有害生物是感兴趣的，如衣鱼(Lepisma saccharinaLinnaeus)(蠹虫(silverfish))；斑衣鱼(Thermobia domestica Packard)(小灶衣鱼(firebrat))。
所覆盖的另外节肢动物有害生物包括：蛛蛛目中的蜘蛛如褐隐毒蛛(Loxoscelesreclusa Gertsch and Mulaik)(褐皮花蛛(brown recluse spider))和黑寡妇蜘蛛(Latrodectus mactans Fabricius)(黑寡妇毒蛛(black widow spider))，以及蚰蜒目(Scutigeromorpha)中的蜈蚣如蚰蜒(Scutigera coleoptrata Linnaeus)(蚰蜒(housecentipede))。
感兴趣的昆虫包括椿象和其他相关昆虫的超家族，包括但不限于属于以下各科的物种：蝽科(稻绿蝽、茶翅蝽(Halyomorpha halys)、Piezodorus guildini、褐臭蝽、拟绿蝽、英雄美洲蝽(Euschistus heros)、美洲蝽(Euschistus tristigmus)、拟绿蝽、褐蝽(Dichelops melacanthus)、和蓓蝽(Bagrada hilaris)(蓓蝽(Bagrada Bug)))，龟蝽科(Plataspidae)(筛豆龟蝽(Megacopta cribraria)-豆平腹蝽蟓(Bean plataspid))和土蝽科(Scaptocoris castanea-Root stink bug)，以及鳞翅目物种包括但不限于：小菜蛾，例如，玉米穗虫；大豆夜蛾，例如，大豆尺夜蛾和黎豆夜蛾，例如，梨豆夜蛾。
用于测量杀有害生物活性的方法是本领域中所熟知的。参见，例如，Czapla andLang，(1990)J.Econ.Entomol.83：2480-2485；Andrews，et al.，(1988)Biochem.J.252：199-206；Marrone，et al.，(1985)J.of Economic Entomology 78：290-293[Czapla和Lang，(1990)，经济昆虫学杂志，83：2480-2485；Andrews等人，(1988)，生物化学杂志，252：199-206；Marrone等人，(1985)，经济昆虫学杂志，78：290-293]以及美国专利号5,743,477，它们全部通过引用以其全文结合在此。总体上，在摄食测定中混合并使用了这种蛋白质。参见，例如，Marrone，et al.，(1985)J.of Economic Entomology 78：290-293[Marrone等人，(1985)，经济昆虫学杂志，78：290-293]。此类测定可以包括将植物与一种或多种有害生物接触，并且确定该植物存活和/或造成这些有害生物死亡的能力。
线虫包括寄生线虫如根结线虫、胞囊线虫、和腐线虫，包括异皮线虫属物种、根结线虫属物种、和球异皮线虫属物种；特别是胞囊线虫的成员，包括但不限于：大豆异皮线虫(大豆胞囊线虫)；甜菜异皮线虫(甜菜胞囊线虫)；燕麦异皮线虫(谷物胞囊线虫(cerealcyst nematode))和马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)和马铃薯白线虫(Globodera pailida)(马铃薯胞囊线虫(potato cyst nematodes))。腐线虫包括短体线虫属物种。
种子处理
为了保护并提高产量生产和性状技术，种子处理方案可以为昆虫、杂草和疾病提供另外的作物计划灵活性和成本有效的控制。种子材料可以用包含化学或生物除草剂、除草剂安全剂、杀昆虫剂、杀真菌剂、发芽抑制剂和增强剂、营养素、植物生长调节剂和活化剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀鸟剂和/或杀软体动物剂的组合的组合物进行处理，通常进行表面处理。这些化合物通常与配制品领域中通常使用的其他载体、表面活性剂或促进施用的佐剂一起配制。这些包衣可通过用液体配制品浸渍增殖材料或通过用组合的湿或干配制品进行涂覆来施加。在以下提供了可用作种子处理的各种类型的化合物的实例：ThePesticide Manual：A World Compendium，C.D.S.Tomlin Ed.，Published by the BritishCrop Production Council[农药手册：世界纲要，C.D.S.汤姆林编辑，由英国作物生产委员会出版]，其通过引用结合在此。
可用于作物种子的一些种子处理包括但不限于下列一种或多种：脱落酸、阿拉酸式苯-S-甲基、阿维菌素、杀草强、阿扎康唑、固氮螺菌属、印楝素、嘧菌酯、芽孢杆菌属物种(包括蜡状芽孢杆菌，坚果芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌，短小芽孢杆菌，球形芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌和/或苏云金芽孢杆菌物种中的一种或多种)，短根瘤菌属物种(包括bradyrhizobium betae、bradyrhizobium canariense、埃氏慢生根瘤菌、西表岛慢生根瘤菌、慢生型大豆根瘤菌、bradyrhizobium liaonigense、bradyrhizobium pachyrhizi和/或圆明慢生根瘤菌)，克菌丹，萎锈灵，壳聚糖，噻虫胺，铜，溴氰虫酰胺，苯醚甲环唑，氯唑灵，氟虫腈，咯菌腈，氟嘧菌酯，氟喹唑，解草胺，氟草肟，超敏蛋白，抑霉唑，吡虫啉，种菌唑，isoflavenoids，脂质几丁寡糖，代森锰锌，锰，代森锰，精甲霜灵，甲霜灵，叶菌唑，腈菌唑，PCNB，氟唑菌苯胺，青霉菌属，吡噻菌胺，氯菊酯，啶氧菌酯，丙硫菌唑，唑菌胺酯，氯虫苯甲酰胺，S-metolachlor，皂苷，氟唑环菌胺，TCMTB，戊唑醇，噻苯咪唑，噻苯哒唑，硫威，福美双，甲基立枯磷，三唑醇，木霉属，肟菌酯，灭菌唑和/或锌。PCNB种皮是指包含喹硫磷和氯唑灵的EPA注册号00293500419。TCMTB是指2-(硫氰基甲基硫代)苯并噻唑。
可以测试具有特定转基因性状的种子品种和种子以确定哪些种子处理方案和施用率可以补充这些品种和转基因性状以增加产量。例如，具有良好产量潜力但丝黑穗病易感性的品种可以受益于使用提供针对丝黑穗病的保护的种子处理，具有良好产量潜力但胞囊线虫易感性的品种可以受益于使用提供针对胞囊线虫的保护的种子处理等。同样，涵盖赋予昆虫抗性的转基因性状的品种可以从种子处理赋予的第二种作用方式中获益，涵盖赋予除草剂抗性的转基因性状的品种可以从用安全剂的种子处理中获益，这种安全剂增强植物对该除草剂的抗性，等。此外，当与种子处理组合时，正确使用种子处理所产生的良好根系建立和早期出苗可能导致更有效的氮利用，更好的抗干旱能力以及包含某种性状的一种或多种品种的产量潜力的总体增加。
用于杀灭昆虫有害生物和控制昆虫群体的方法
在一些实施例中，提供了用于杀灭昆虫有害生物的方法，这些方法包括将昆虫有害生物与杀昆虫有效量的本披露的杀昆虫多肽接触。在一些实施例中，提供了用于杀灭昆虫有害生物的方法，这些方法包括将昆虫有害生物与杀昆虫有效量的本披露的PIP-45-1多肽和本披露的PIP-45-2多肽、本披露的PIP-64-1多肽和本披露的PIP-64-2多肽、本披露的PIP-74-1多肽和本披露的PIP-74-2多肽、本披露的PIP-75多肽和/或本披露的PIP-77多肽接触。
在一些实施例中，提供了用于控制昆虫有害生物群体的方法，这些方法包括将昆虫有害生物群体与杀昆虫有效量的这些实施例的重组杀昆虫多肽接触。在一些实施例中，提供了用于控制昆虫有害生物群体的方法，这些方法包括将昆虫有害生物群体与杀昆虫有效量的本披露的PIP-45-1多肽和本披露的PIP-45-2多肽、本披露的PIP-64-1多肽和本披露的PIP-64-2多肽、本披露的PIP-74-1多肽和本披露的PIP-74-2多肽、本披露的PIP-75多肽和/或本披露的PIP-77多肽接触。如在此使用的，“控制有害生物群体”或“控制有害生物”是指对有害生物的任何影响，导致限制了有害生物造成的损害。控制有害生物包括但不限于以一定方式杀灭有害生物、抑制有害生物发育、改变有害生物能育性或生长，使得有害生物对植物造成的较少损害，减少所产生后代的数量，产生适应力较弱的有害生物，产生易受捕食者攻击的有害生物或阻止有害生物啃食植物。
在一些实施例中，提供了用于控制对杀有害生物蛋白有抗性的昆虫有害生物群体的方法，这些方法包括将昆虫有害生物群体与杀昆虫有效量的本披露的重组杀昆虫多肽接触。在一些实施例中，提供了用于控制对杀有害生物蛋白有抗性的昆虫有害生物群体的方法，这些方法包括将昆虫有害生物群体与杀昆虫有效量的本披露的PIP-45-1多肽和本披露的PIP-45-2多肽、本披露的PIP-64-1多肽和本披露的PIP-64-2多肽、本披露的PIP-74-1多肽和本披露的PIP-74-2多肽、本披露的PIP-75多肽和/或本披露的PIP-77多肽接触。
在一些实施例中，提供了用于保护植物免受昆虫有害生物侵害的方法，这些方法包括在植物或其细胞中表达编码本披露的杀昆虫多肽的重组多核苷酸。在一些实施例中，提供了用于保护植物免受昆虫有害生物侵害的方法，这些方法包括在植物或其细胞中表达编码本披露的PIP-45-1多肽和本披露的PIP-45-2多肽、本披露的PIP-64-1多肽和本披露的PIP-64-2多肽、本披露的PIP-74-1多肽和本披露的PIP-74-2多肽、本披露的PIP-75多肽和/或本披露的PIP-77多肽的杀有害生物蛋白的重组多核苷酸。
昆虫抗性管理(IRM)策略
苏云金芽孢杆菌δ-内毒素在转基因玉米植物中的表达已被证明是控制农业重要昆虫有害生物的有效手段(Perlak等人，1990；1993)。然而，昆虫已经进化，这些昆虫对在转基因植物中表达的苏云金芽孢杆菌δ-内毒素是具有抗性的。如果这种抗性普遍存在，它将明显限制包含编码这种苏云金芽孢杆菌δ-内毒素的基因的种质的商业价值。
增加转基因杀昆虫剂对靶有害生物的有效性并且同时减少杀昆虫剂抗性有害生物发展的一种方法是提供非转基因(即，非杀昆虫蛋白)避难所(一部分非杀昆虫作物/玉米)用于与生产对靶有害生物具有活性的单一杀昆虫蛋白的转基因作物一起使用。美国环境保护局(epa.gov/oppbppdl/biopesticides/pips/bt_corn_refuge_2006.htm，其可以使用www前缀进行访问)发布与生产一种对靶有害生物具有活性的单一Bt蛋白的转基因作物一起使用的要求。另外，国家玉米种植者协会在他们的网站上也提供了有关避难所要求的类似指导：(ncga.com/insect-resistance-management-fact-sheet-bt-corn，其可以使用www前缀进行访问)。由于避难区内的昆虫损失，较大的避难所可能会降低总产量。
增加转基因杀昆虫剂对靶有害生物的有效性并且同时减少杀昆虫剂抗性有害生物发展的另一种方法是具有杀昆虫基因的储存库，该储存库可以有效地对抗昆虫有害生物的组，并通过不同的作用方式显现其作用。
在植物中表达对相同昆虫物种有毒的两种或更多种杀昆虫组合物，每种杀昆虫剂以有效水平表达是实现对抗性发展的控制的另一种方法。这是基于以下原则：对两种不同行动模式的抗性演变比仅一种远远更不可能。例如，罗斯概述了两种毒素战略，也称为“金字塔”或“堆叠”，用于管理杀昆虫转基因作物(The Royal Society.Phil.Trans.R.Soc.Lond.B.(1998)353：1777-1786[英国皇家学会，英国皇家学会哲学学报B(1998)353：1777-1786])。每种都能有效抵抗靶有害生物并几乎没有或没有交叉抗性的两种不同蛋白质的堆叠或金字塔可以允许使用较小的避难所。美国环境保护局要求所种植非Bt玉米的结构性避难所(通常为5％)比单一性状产品(通常为20％)显著更少。存在各种方法提供避难所的IRM效应，包括在田地的各种几何种植模式和袋内种子混合物，如进一步通过Roush所讨论的。
在一些实施例中，本披露的杀昆虫多肽可用作与其他杀有害生物蛋白组合的(即金字塔的)昆虫抗性管理策略，包括但不限于Bt毒素、致病杆菌属物种或光杆状菌属物种杀昆虫蛋白等。
提供了在促进昆虫抗性管理的转基因植物中控制鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵袭的方法，该方法包括在植物中表达具有不同作用模式的至少两种不同的杀昆虫蛋白。
在一些实施例中，控制转基因植物中鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵袭并促进昆虫抗性管理的方法，该至少一种杀昆虫蛋白包含对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫有杀昆虫性的本披露的杀昆虫多肽。
在一些实施例中，控制转基因植物中鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵袭并促进昆虫抗性管理的方法包括在转基因植物中表达本披露的杀昆虫多肽和对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫有杀昆虫性的具有不同作用模式的Cry蛋白。
在一些实施例中，控制转基因植物中鳞翅目和/或鞘翅目昆虫侵袭并促进昆虫抗性管理的方法包括在转基因植物中实施例的PIP-45-1多肽和实施例的PIP-45-2多肽、实施例的PIP-64-1多肽和实施例的PIP-64-2多肽、实施例的PIP-74-1多肽和实施例的PIP-74-2多肽、实施例的PIP-75多肽和实施例的PIP-77多肽以及对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫有杀昆虫性的具有不同作用模式的Cry蛋白。
还提供了减少对转基因植物的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫抗性的出现的可能性并在植物中表达杀昆虫蛋白以控制昆虫物种的方法，该方法包括表达与对该昆虫物种具有不同作用模式的第二杀昆虫蛋白结合的对昆虫物种具有杀昆虫性的本披露的杀昆虫多肽。
还提供了减少对转基因植物的鳞翅目和/或鞘翅目昆虫抗性的出现的可能性并在植物中表达杀昆虫蛋白以控制昆虫物种的方法，该方法包括表达与对昆虫物种具有不同作用模式的第二杀昆虫蛋白结合的对昆虫物种具有杀昆虫性的实施例的PIP-45-1多肽和实施例的PIP-45-2多肽、实施例的PIP-64-1多肽和实施例的PIP-64-2多肽、实施例的PIP-74-1多肽和实施例的PIP-74-2多肽、实施例的PIP-75多肽和实施例的PIP-77多肽。
还提供了转基因植物的有效鳞翅目和/或鞘翅目昆虫抗性管理的手段，该手段包括在植物中以高水平共表达对鳞翅目和/或鞘翅目具有毒性的两种或更多种杀昆虫蛋白，但是每种都展现出不同的实行其杀灭活性的模式，其中这两种或更多种杀昆虫蛋白包含本披露的杀昆虫多肽和Cry蛋白。还提供了转基因植物的有效鳞翅目和/或鞘翅目昆虫抗性管理的手段，该手段包括在植物中以高水平共表达对鳞翅目和/或鞘翅目具有毒性的两种或更多种杀昆虫蛋白，但是每种都展现出不同的实行其杀灭活性的模式，其中这两种或更多种杀昆虫蛋白包含实施例的PIP-45-1多肽和实施例的PIP-45-2多肽、实施例的PIP-64-1多肽和实施例的PIP-64-2多肽、实施例的PIP-74-1多肽和实施例的PIP-74-2多肽、实施例的PIP-75多肽和实施例的PIP-77多肽、以及Cry蛋白。
此外，提供了获得用于种植或商业化表达对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性的蛋白的植物的法规性审批的方法，该方法包括以下步骤：参考、提交或依赖昆虫测定结合数据，这些数据显示本披露的杀昆虫多肽不与这些昆虫中的Cry蛋白的结合位点竞争。此外，提供了获得用于种植或商业化表达对鳞翅目和/或鞘翅目昆虫具有杀昆虫性的蛋白的植物的法规性审批的方法，该方法包括以下步骤：参考、提交或依赖昆虫测定结合数据，这些数据显示实施例的PIP-45-1多肽和实施例的PIP-45-2多肽、实施例的PIP-64-1多肽和实施例的PIP-64-2多肽、实施例的PIP-74-1多肽和实施例的PIP-74-2多肽、实施例的PIP-75多肽和实施例的PIP-77多肽不与这些昆虫中的Cry蛋白的结合位点竞争。
用于增加植物产量的方法
提供了用于增加植物产量的方法。这些方法包括提供表达对在此披露的杀有害生物多肽序列进行编码的多核苷酸的植物或植物细胞，并且在一块侵袭有有害生物的田地中使该植物或其种子生长，该多肽具有针对该有害生物的杀有害生物活性。在一些实施例中，该多肽具有针对鳞翅目、鞘翅目、双翅目、半翅目或线虫有害生物的杀有害生物活性，并且该田地侵袭有鳞翅目、半翅目、鞘翅目、双翅目或线虫有害生物。
如在此所定义的，该植物的“产量”是指由该植物所产生的生物质的品质和/或数量。如在此使用的，“生物质”是指任何所测量的植物产品。生物质产生的增加是在所测量的植物产物的产量方面的任何改进。增加植物产量具有几种商业应用。例如，增加植物叶生物质可以增加用于人或动物消费的叶菜的产量。另外，增加叶生物质可以用于增加植物衍生的药学或工业产物的生产。产量的增加可以包括与不表达该杀有害生物序列的植物相比任何统计学显著的增加，包括但不限于：产量的至少1％的增加、至少3％的增加、至少5％的增加、至少10％的增加、至少20％的增加、至少30％、至少50％、至少70％、至少100％或更大的增加。
在特定的方法中，植物产量由于表达本文披露的披露内容的杀昆虫多肽的植物的改进的有害生物抗性而增加。本披露的杀昆虫多肽的表达导致有害生物侵袭植物或以植物为食的能力下降，从而改进植物产量。
加工的方法
进一步提供了加工植物、植物部分或种子以从包含本披露的杀昆虫多肽的植物、植物部分或种子获得食品或饲料产品的方法。可以加工本文提供的植物、植物部分或种子以产生作为通过具有商业价值的加工获得的衍生物的油、蛋白质产物和/或副产物。非限制性实例包括包含编码本披露的杀昆虫多肽的核酸分子的转基因种子，这些转基因种子可以被处理以产生大豆油、豆制品和/或大豆副产物。
“加工”是指用于获得任何豆制品的任何物理和化学方法，并且包括但不限于热调节、剥落和研磨、挤出、溶剂萃取或水性浸泡和提取全部或部分种子。
以下实例以举例说明的方式而不是以限定的方式提供。
实验
实例1.昆虫摄食测定
在清除的裂解物上进行杀昆虫活性生物测定筛选，以评估杀昆虫蛋白对各种以下品种的影响：鳞翅目物种(欧洲玉米螟(玉米螟)、玉米穗蛾(玉米穗虫)、黑切根虫(小地老虎)、秋夜蛾(草地贪夜蛾)、大豆夜蛾(大豆尺夜蛾)和黎豆夜蛾(梨豆夜蛾))，鞘翅目物种(西方玉米根虫(玉米根萤叶甲))，个两个半翅目物种，豆荚盲蝽和稻绿蝽(南方绿椿象(Southern Green Stinkbug))。
鳞翅目测定
在96孔板装置中包含细菌菌株的澄清裂解物的人工饵料上进行鳞翅目摄食测定。将澄清裂解物与鳞翅目特异性人工饵料以20μl澄清裂解物和40ul饵料混合物的比例掺入。在每个孔放置两至五只新生幼虫来摄食5天。结果表示为幼虫反应如生长抑制呈阳性和/或死亡率。如果幼虫与正在摄食仅施用上述缓冲液的饵料的阴性对照相似，那么结果表示为阴性。在欧洲玉米螟(玉米螟)、玉米穗蛾(玉米穗虫)、黑切根虫(小地老虎)、秋夜蛾(草地贪夜蛾)、大豆夜蛾(大豆尺夜蛾)和黎豆夜蛾(梨豆夜蛾)上测定每个澄清的裂解物。对这些昆虫进行了一系列浓度的浓度测定，并计算了个体的50％死亡率的浓度(LC50)或50％抑制的浓度(IC50)。
鞘翅目测定
在96孔板装置中包含细菌菌株的澄清裂解物的人工饵料上进行鞘翅目摄食测定。将澄清裂解物与鞘翅目特异性人工饵料以10μl澄清裂解物和50ul饵料混合物的比例掺入。在每个孔中放置两至五只西方玉米根虫(玉米根萤叶甲)新生幼虫来摄食5天。结果表示为幼虫反应如生长抑制呈阳性和/或死亡率。如果幼虫与正在摄食仅施用上述缓冲液的饵料的阴性对照相似，那么结果表示为阴性。对这些昆虫进行了一系列浓度的浓度测定，并计算了个体的50％死亡率的浓度(LC50)或50％抑制的浓度(IC50)。
草盲蝽属豆荚盲蝽生物测定
在96孔生物测定板(BD Falcon 353910)中的每个孔中将20μl澄清的裂解物样品与混合75ul草盲蝽属饵料(Bio-Serv F9644B)，并用一片Parafilm覆盖。将不同数量的豆荚盲蝽二龄若虫(2至7只)置于96孔过滤板的每个孔中。然后将样品板翻转到过滤板上并用橡皮筋保持在一起。测定在25℃下运行四天，并且然后对昆虫死亡率和/或昆虫生长的生长抑制迟缓进行评分。对这些昆虫进行了一系列浓度的浓度测定，并计算了个体的50％死亡率的浓度(LC50)或50％抑制的浓度(IC50)。
南方绿椿象(稻绿蝽)和棕纹蝽(Brown Marmorated Stinkbug)(茶翅蝽)生物测定
将40ul澄清的裂解物样品与包装中的360ul草盲蝽属饵料(Bio-ServF9644B)混合。将10至15只新蜕皮的龄若虫置于聚苯乙烯培养皿(100mmx20mm)中，该培养皿衬有湿式滤纸(直径100mm)。在该平皿中包括水源。将生物测定在25℃下在黑暗中孵育4天。针对死亡率和生长抑制对生物测定进行评分。为了产生ILC50或LC50数据，对昆虫进行了一系列浓度的纯化蛋白质的测定，并且50％的昆虫遭受严重损害的浓度是ILC50并且50％昆虫死亡的浓度是LC50。
马铃薯甲虫(Colorado Potato Beetle、Leptinotarsa decemlineata)生物测定
在96孔生物测定板(BD Falcon 353910)中的每个孔中将20ul澄清的裂解物样品与混合75ul改良的鞘翅目饵料(Bio-Serv F9800B)混合，并且允许凝固。将单个新生儿幼虫置于每个孔中，并用盖板密封该板。在片中打孔，并将板在25℃下不加光照孵育4天。针对死亡率和/或生长抑制对生物测定进行评分。
实例2.鉴定杀昆虫活性菌株
从在LB培养基(10g/L胰蛋白胨、5g/L酵母提取物、和10g/L NaCl)或TSB(大豆胰蛋白酶肉汤)培养基(17g/L胰酶解胨、3g/L大豆蛋白胨、2.5g/L右旋糖、2.5g/L K2HPO4和5g/LNaCl)中生长的细菌菌株的清澈细胞裂解物中观察到针对SBL、CEW、BCW、VBC、ECB、Lygus、SGSB和WCRW的杀昆虫活性，并且在26℃下在以250rpm的震荡下孵育过夜。这种杀昆虫活性表现出热和蛋白酶敏感性，表明蛋白质性质。活性菌株及其杀昆虫活性列于表5中。
表5
实例3.活性菌株的物种鉴定和基因组测序
根据制造商的说明书，用细菌基因组DNA提取试剂盒(目录号NA2110-KT，西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)，邮政信箱14508，圣路易，密苏里州63178)提取活性菌株的基因组DNA。使用NanoDropTM分光光度计(赛默科技公司(Thermo Scientific)，西尔维路3411号(3411Silverside Road)，班克罗夫特大厦(Bancroft Building)，100号套房，威明顿市，多佛州，19810)确定DNA浓度，并将基因组DNA用无菌水稀释至40ng/ul。通过组合80ng基因组DNA，2ul(5uM)16S核糖体DNA引物TACCTTGTTACGACTT(SEQ ID NO：216)和AGAGTTTGATCMTGGCTCAG(SEQ ID NO：217)，1ul 10cmM dNTP，1xHF缓冲液，和1单位高保真DNA聚合酶来建立25ul PCR反应(新英格兰生物实验室(New EnglandBiolabs)，目录号M0530L，县公路240号，伊普斯威奇，马萨诸塞州，01938-2723)。PCR反应在MJ Research PTC-200热循环仪(伯乐实验室有限公司(Bio-Rad Laboratories，Inc.)，阿尔弗雷德诺贝尔道1000号，赫拉克勒斯，加利福尼亚州，94547，美国)中按以下程序运行：96℃1分钟；30个循环：96℃15秒，52℃2分钟和72℃2分钟；72℃10分钟；并且保持在4℃。PCR产物用DNA纯化试剂盒(目录号28104，凯杰公司(QIAGEN Inc.)，坦伯利车道27220号，瓦伦西亚(Valencia)，加利福尼亚州91355)纯化。将纯化的PCR样品进行DNA测序，并将所得的16S核糖体DNA序列对NCBI数据库进行BLAST搜索。顶部命中表明菌株的物种(参见表5)。
还根据依诺米那公司(Illumina)开发的文库构建方案制备活性菌株的基因组DNA，并使用Illumina MiSeqTM进行测序。组装核酸重叠序列，并且生成开放阅读框。
实例4.通过LC-MS/MS鉴定杀昆虫蛋白
如所述分馏和富集所有杀昆虫蛋白。为了鉴别候选物，将蛋白条带切除，用胰蛋白酶消化并且通过纳米液相色谱/电喷雾串联质谱法(纳米-LC/ESI-MS/MS)在Thermo QExactiveTM OrbitrapTM质谱仪(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))，该质谱仪与NanoLC-1DTM Plus nanoLCTM系统(爱博才思公司(AB Sciex))接口。在MS1全谱扫描后，以信息依赖采集模式收集十个产品离子谱。
通过使用Mascot(Matrix Science)通过数据库搜索进行蛋白质鉴定。针对内部数据库Bacteria-Plus进行搜索，该内部数据库Bacteria-Plus组合了所有细菌蛋白质序列和源自NCBI非冗余数据库(nr)的角蛋白序列以及内部蛋白质序列。
实例5.杀昆虫蛋白的分离和鉴定
PIP-45-Aa-1和PIP-45-Aa-2的分离和鉴定
从布式假单孢菌菌株LBV 5480的透明细胞裂解物中观察到针对WCRW(玉米根萤叶甲)的杀昆虫活性，该布式假单孢菌菌株LBV5480在营养肉汤(蛋白胨-5g/L、肉提取物-1g/L、酵母提取物-2g/L，氯化钠-5g/L)中生长，并且在26℃下在以250rpm的震荡下孵育过夜。这种杀昆虫活性表现出热和蛋白酶敏感性，表明蛋白质性质。
在Tris缓冲液(pH 8)中再悬浮后，将LBV 5480的细胞颗粒在约20,000psi下匀浆。将粗裂解物通过离心清除并加载到HiTrap Q-FF柱(GE医疗集团(GE Healthcare))上。结合蛋白用线性氯化钠梯度洗脱并分馏。将包含感兴趣的蛋白的馏分合并，并在50mM Tris(缓冲液A)中调节至1M硫酸铵浓度。将该物质加载到在缓冲液A中平衡的苯基琼脂糖HP柱(GE医疗集团)上。用从1M至0M硫酸铵的线性梯度洗脱活性蛋白，并通过尺寸排阻层析进一步纯化。为此，将苯基池浓缩并加载到200柱(GE医疗集团)上，在20mM Tris、150mM NaCl，pH 8中平衡。具有WCRW活性的馏分的SDS-PAGE分析在用蓝染料染色后显示出2个主要条带。LC-MS/MS用于鉴定由菌株LBV 5480编码的两个新颖基因。这些基因形成操纵子，并且两种基因产物都是如用重组蛋白所证实的杀昆虫活性所必需的。这些蛋白质被命名为PIP-45-Aa-1(SEQ ID NO：1)和PIP-45-Aa-2(SEQID NO：2)。
PIP-64-Aa-1和PIP-64-Aa-2的分离和鉴定
从布式假单孢菌菌株LBV 9691的透明细胞裂解物中观察到针对WCRW(玉米根萤叶甲)和大豆夜蛾(SBL黄豆银纹夜蛾(Chrysodeixis includes))的杀昆虫活性，该布式假单孢菌菌株LBV 9691在2x YT培养基(16g/L胰蛋白胨、10g/L酵母抽提物、5g/L NaCl)中生长，并且在26℃下在以250rpm的震荡下培养3天。这种杀昆虫活性表现出热和蛋白酶敏感性，表明蛋白质性质。
生长条件和昆虫活动差异很大。较高活性还与约28kDa的蛋白质条带的较高表达水平相关，可通过SDS-PAGE检测。为了进一步确认该候选条带，在20mM Tris缓冲液(pH 8)中再悬浮后，将LVB 9691的细胞颗粒在约30,000psi下匀浆。将粗裂解物通过离心清除并加载到75柱(GE医疗集团(GE Healthcare))上。WCRW和SBL活性与洗脱馏分中的28kDa条带密切相关。通过LC-MS/MS鉴定蛋白质条带。数据库搜索通过菌株LBV 9691鉴定了在操纵子中编码的类似大小的两种新颖蛋白质，这两种新颖蛋白质命名为PIP-64-Aa-1(SEQ ID NO：53)和PIP-64-Aa-2(SEQ ID NO：54)。重组表达显示，在所测试的浓度下，两种蛋白质都是针对鳞翅目和半翅目的物种的活性所需要的。发现PIP-64Aa-1(SEQ ID NO：53)和PIP-64Aa-2(SEQ ID NO：54)的摩尔比分别为5∶1的活性是最佳的。单独PIP-64-Aa-1(SEQID NO：53)对于WCRW活性是足够的。
PIP-74-Aa-1和PIP-74-Aa-2的分离和鉴定
从布式假单孢菌菌株SS135B4的透明细胞裂解物中观察到针对WCRW(玉米根萤叶甲)的杀昆虫活性，该布式假单孢菌菌株SS135B4在2x Yt培养基中生长，并且在26℃下在以250rpm的震荡下培养2天。这种杀昆虫活性表现出热和蛋白酶敏感性，表明蛋白质性质。
在25mM Tris缓冲液(pH 9)中再悬浮后，将SS135B4的细胞颗粒在约30,000psi下匀浆。将粗裂解物通过离心清除，调节至0.5M硫酸铵，并加载到苯基琼脂糖FF柱(GE医疗集团(GE Healthcare))上。将WCRW活性蛋白以线性梯度洗脱至0M硫酸铵，合并并透析至50mM乙酸钠缓冲液(pH 5)。然后将调节的池装载到用相同缓冲液平衡的S-琼脂糖FF柱(GE医疗集团)上。将包含WCRW活性蛋白的未结合蛋白质馏分缓冲液交换为50mM CAPS(pH 10)，加载到柱(GE医疗集团)上，并用50mM CAPS(pH 10)的线性氯化钠梯度洗脱。这些馏分的SDS-PAGE分析在用染料染色后显示出若干个条带。切下蛋白质条带并通过LC-MS/MS鉴定。数据库搜索通过菌株SS135B4鉴定了在操纵子中编码的两种新颖蛋白质，这两种新颖蛋白质分别命名为PIP-74-Aa-1(SEQ ID NO：73)和PIP-74-Aa-2(SEQ ID NO：74)。重组表达显示，在所测试的浓度下，两种蛋白质都是针对WCRW的活性所需要的。
PIP-75-Aa的分离和鉴别
从南极假单胞菌LBV 6019的透明细胞裂解物中观察到针对WCRW(玉米根萤叶甲)的杀昆虫活性，该南极假单胞菌LBV 6019在2x Yt培养基中，在26℃下在以250rpm的震荡下生长1天。这种杀昆虫活性表现出热和蛋白酶敏感性，表明蛋白质性质。
在25mM Tris缓冲液(pH 8.5)中再悬浮后，将LBV 6019的细胞颗粒在约30,000psi下匀浆。将粗裂解物通过离心清除并加载到Q柱(生命技术公司(LifeTechnologies))上。将包含WCRW活性蛋白的未结合蛋白质馏分通过对10mM MES(pH 6)的透析进行缓冲液交换，并且然后加载到S-HP柱(GE医疗集团)上，并用线性氯化钠梯度洗脱。将包含活性蛋白的馏分合并，进行缓冲液调节，并在pH 8.5下进行重复的阴离子交换步骤。再次将未结合的馏分进行缓冲液交换，然后在用20mM MES(pH 6)平衡的Mono柱(GE医疗集团)上进行最终分馏步骤。在以线性梯度洗脱至0.3M NaCl后获得若干种活性馏分。具有WCRW活性的馏分的SDS-PAGE分析在用蓝染料染色后显示出若干个主要条带。切下蛋白质条带并通过LC-MS/MS鉴定。
数据库搜索揭示了由菌株LBV 6019编码的3个新颖的基因候选物。克隆和重组表达证实了这些候选物之一的杀昆虫活性。该蛋白质被命名为PIP-75-Aa(SEQ ID NO：79)。
PIP-77-Aa的分离和鉴别
从绿针假单胞菌菌株SS344E5的透明细胞裂解物中观察到针对WCRW(玉米根萤叶甲)的杀昆虫活性，该绿针假单胞菌菌株SS344E5在大豆胰蛋白酶肉汤(TSB，来自酪蛋白的蛋白胨15g/L，来自豆粕的蛋白胨5g/L；氯化钠5.0g/L)中在26℃下在以250rpm的震荡下生长1天。这种杀昆虫活性表现出热和蛋白酶敏感性，表明蛋白质性质。
在25mM Tris缓冲液(pH 8.5)中再悬浮后，将SS344E5的细胞颗粒在约30,000psi下匀浆。将粗裂解物通过离心清除并加载到Q柱(生命技术公司(LifeTechnologies))上。将包含WCRW活性蛋白的未结合蛋白质馏分对10mM MES(pH 6)进行透析，加载到S-HP柱(GE医疗集团)上，并用线性氯化钠梯度洗脱至0.5M。将包含WCRW活性蛋白的馏分合并，并使用75柱(GE医疗集团)通过尺寸排阻色谱进一步分离。具有WCRW活性的馏分的SDS-PAGE分析在用蓝染料染色后显示出7kDa的主要条带。LC-MS/MS用于鉴定由菌株SS344E5编码的两个新颖基因。克隆和重组表达证实了该基因产物的杀昆虫活性，其被命名为PIP-77-Aa(SEQ ID NO：88)。
实例6.鉴定同源物
从各种内部菌株中提取基因组DNA，鉴定出物种，并且基因组是如实例3中所述的序列。在与内部基因组和公开可用的BLAST“nr”数据库中包含的序列相似的默认参数下，基因同一性可以通过进行BLAST(基本局部比对20搜索工具(Basic Local Alignment 20Search Tool)；Altschul，et al.，(1993)J.Mol.Biol.215：403-410[Altschul等人，(1993)，分子生物学杂志，215：403-410]；还参见ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/，其可以使用www前缀访问)搜索(包括所有非冗余的GenBank CDS翻译，源自3维结构布鲁克港蛋白质数据库的序列，25SWISS-PROT蛋白质序列数据库，EMBL和DDBJ数据库的最后主要版本)。分析以下各项的多肽序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ IDNO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：79和SEQ ID NO：88。
表6显示了所鉴定的PIP-45-1多肽和PIP-45-多肽同源物，每个的序列识别号码和它们鉴定出的细菌菌株。表7显示在PIP-45-1多肽同源物之间的序列同一性百分比。图1a-1m显示PIP-45-1多肽同源物的氨基酸序列比对。
表6
n.d.＝未确定
表7
表7(续)
表7(续)
表8显示在PIP-45-2多肽同源物之间的序列同一性百分比。图2a-21显示PIP-45-2多肽同源物的氨基酸序列比对。
表8
表8(续)
表8(续)
表9显示了所鉴定的PIP-64-1多肽和PIP-64-2多肽同源物，每个的序列识别号码和它们鉴定出的细菌菌株。表10显示在PIP-64-1多肽同源物之间的序列同一性百分比。图3a-3b显示PIP-64-1多肽同源物的氨基酸序列比对。表11显示在PIP-64-2多肽同源物之间的序列同一性百分比。图4a-4b显示PIP-64-2多肽同源物的氨基酸序列比对。
表9
表10
表11
表12显示了所鉴定的PIP-74-1多肽和PIP-74-2多肽同源物，每个的序列识别号码和它们鉴定出的细菌菌株。表13显示在PIP-74-1多肽家族成员之间的序列同一性百分比。图5a-5b显示PIP-74-1多肽同源物的氨基酸序列比对。表14显示在PIP-74-2多肽家族成员之间的序列同一性百分比。图6显示PIP-74-2多肽同源物的氨基酸序列比对。
表12
表13
PIP-74Ab-1 PIP-74Ca-1
PIP-74Aa-1 99.6 74.5
PIP-74Ab-1 - 74.5
表14
PIP-74Ab-2 PIP-74Ca-2
PIP-74Aa-2 98.0 66.3
PIP-74Ab-2 - 66.3
表15显示了所鉴定的PIP-75多肽同源物，每个的序列识别号码和它们鉴定出的细菌菌株。表16显示在PIP-75多肽家族成员之间的序列同一性百分比。图7显示PIP-75多肽同源物的氨基酸序列比对。
表15
表16
表17显示了所鉴定的PIP-77多肽同源物，每个的序列识别号码和它们鉴定出的细菌菌株。表18显示在PIP-77多肽家族成员之间的序列同一性百分比。图8a-8b显示PIP-77多肽同源物的氨基酸序列比对。
表17
表18
表18
实例7.来自不同来源的PIP-45-1和PIP-45-2组分的功能测试
为了测试来自不同PIP-45同源物的PIP-45-1和PIP-45-2组分的功能，单独表达了5个选择的活性同源物对(在表19中列出)。每个PIP-45-1组分与五个PIP-45-2组分中的每一个混合。如上所述，在基于饵料的测定中测试所有对的WCRW杀昆虫活性。结果示于表19中，表明当将来自不同来源的PIP-45-1和PIP-45-2组分配对时可提供杀昆虫活性。
表19
粗体有活性的＝来自原始对；有活性的＝用不同来源的组分检测的杀昆虫活性
实例8.基因亚克隆和大肠杆菌表达
首先通过使用其基因组DNA作为模板的PCR扩增编码杀昆虫蛋白的靶基因。基于具有所结合的适当限制性位点的5’末端和3’末端序列设计PCR引物。在限制酶消化后，将PCR产物克隆到各种大肠杆菌表达载体中，即具有N-His标签的pCOLDTM 1，具有和不具有MBP融合的pMALTM载体或具有和不具有His标签的pCOLDTM载体。在16℃下用1mM IPTG过夜诱导，蛋白质在BL21(DE3)或C41大肠杆菌宿主细胞中表达。
诱导后从大肠杆菌培养物中提取重组蛋白，如实例1所述，对昆虫靶标进行纯化和测定。
实例9.在瞬时叶组织上的瞬时表达和昆虫生物测定
编码PIP-64Aa-1(SEQ ID NO：160)和PIP-64Aa-2(SEQ ID NO：161)的多核苷酸分别在病毒启动子pDMMV的控制下克隆到瞬时表达载体中(Dav等人，(1999)，植物分子生物学，40：771-782)。将农杆菌属细胞悬浮液引入完整组织的植物细胞以使得可重复侵染和随后的植物来源的转基因表达可被测量或研究的农杆菌浸润法是本领域熟知的(Kapila，et.al.，(1997)Plant Science 122：101-108[Kapila等人，(1997)，植物科学，122：101-108])。简而言之，用测试和对照菌株的标准化细菌细胞培养物对矮菜豆(bush bean)(菜豆(common bean、Phaseolus vulgaris))和大豆(soybean、Glycine max)的幼株进行农杆菌浸润。每个小植株产生10个叶片，并且单独用大豆夜蛾(Soy Bean Looper、SBL)(大豆尺夜蛾)和黎豆夜蛾(VBC、梨豆夜蛾(Velvet Anticarsia gemmatalis))的3只幼虫侵袭，其中两个叶片对照仅用农杆菌属和农杆菌属中的DsRed2荧光标志物(克罗泰克公司，山景城，加利福尼亚州)产生。侵袭后两天对绿叶组织的消耗量进行评分。通过基于质谱法的蛋白鉴定方法，使用来自共浸润叶组织的提取的蛋白质裂解物确认PIP-64-1(SEQ ID NO：53)和PIP-64-2(SEQ ID NO：54)的瞬时蛋白质表达(Patterson，(1998)10(22)：1-24，CurrentProtocol in Molecular Biology published by John Wiley&Son Inc[Patterson，(1998)，10(22)：1-24，由约翰威利父子公司出版的当前分子生物学方案])。.PIP-64-1(SEQID NO：53)和PIP-64-2(SEQ ID NO：54)的瞬时共表达保护叶片免受侵袭昆虫的消耗，而观察到两个阴性对照的总绿色组织消耗。
实例10-农杆菌介导的玉蜀黍的稳定转化
对于农杆菌介导的昆杀虫多肽的玉蜀黍转化，使用Zhao的方法(美国专利号5,981,840和国际专利公开号WO 1998/32326，其内容通过引用结合在此)。简而言之，从玉蜀黍中分离未成熟的胚，并且将胚与农杆菌属悬浮液接触，其中细菌能够将编码本披露的杀昆虫多肽的多核苷酸转移至至少一种未成熟胚的至少一个细胞中(步骤1：侵染步骤)。在该步骤中，将未成熟胚胎浸泡在农杆菌属悬液中用于开始接种。使这些胚胎与农杆菌属共培养一段时间(步骤2：共培养步骤)。将这些未成熟的胚胎在有抗生素但没有选择剂的固体培养基上培养，用于农杆菌属消除并用于经侵染的细胞的静置期。然后，接种的胚芽在含有一种选择剂的培养基上培养，回收生长的转化的愈伤组织(步骤4：选择步骤)。在含选择剂的固体培养基上培养这些未成熟胚胎，使经转化的细胞选择性生长。然后将愈伤组织再生成植物(步骤5：再生步骤)，并将生长在选择培养基上的愈伤组织在固体培养基上培养以再生植物。
为了检测叶组织中的杀昆虫多肽，将4个冻干叶穿孔/样品粉碎并重新悬浮于含有0.1％TWEENTM 20的100μL PBS(PBST)，含有1片/7mL完整的迷你蛋白酶抑制剂(罗氏公司1183615301)的1％β-巯基乙醇。将悬浮液超声处理2分钟，并且然后在4℃、20,000g下离心15分钟。向上清液等份1/3体积的3XLDS样品缓冲液(InvitrogenTM，加利福尼亚州，美国)中，添加含有1片7mL完整迷你蛋白酶抑制剂的1％B-ME。将反应物在80℃下加热10min，并且然后离心。将上清液样品按照制造商(InvitrogenTM)说明书装载在具有MES运行缓冲液的4％-12％Bis-Tris Midi凝胶上，并使用装置(InvitrogenTM)转移到硝酸纤维素膜上。将硝酸纤维素膜在含有5％脱脂奶粉的PBST中孵育2小时，然后在PBST中亲和纯化的兔抗杀昆虫多肽中孵育过夜。将膜用PBST冲洗三次，并且然后在PBST中孵育15分钟，并且然后冲洗两次5分钟，然后孵育2小时在具有山羊抗兔HRP的PBST中持续3小时。使用ECL蛋白质印迹试剂(GE医疗集团，目录号RPN2106)和Mr膜可以观察到所检测的蛋白质。为了检测根中的杀昆虫蛋白，将根冻干，并且将每个样品2mg粉末重新悬浮于LDS中，添加含有1片/7mL完整迷你蛋白酶抑制剂的1％β-巯基乙醇。将反应在80℃下加热10分钟，并且然后在4℃、20,000g下离心15分钟。将上清液样品按照制造商(InvitrogenTM)说明书装载在具有MES运行缓冲液的4％-12％Bis-Tris Midi凝胶上，并使用装置(InvitrogenTM)转移到硝酸纤维素膜上。将硝酸纤维素膜在含有5％脱脂奶粉的PBST中孵育2小时，然后在PBST中亲和纯化的多克隆兔抗杀昆虫抗体中孵育过夜。膜用PBST冲洗三次，并且然后在PBST中孵育15分钟，并且然后冲洗两次5分钟，然后孵育2小时在具有山羊抗兔HRP的PBST中持续3小时。使用ECLTM蛋白质印迹试剂(GE医疗集团，目录号RPN2106)和Mr膜可以检测到抗体结合杀昆虫蛋白。
使用本领域已知的标准生物测定法测试杀昆虫蛋白表达阳性的转基因玉蜀黍植物的杀有害生物活性。这些方法包括例如根切除生物测定和全植物生物测定。参见，例如，美国专利申请公开号US2003/0120054和国际公开号WO 2003/018810。
实例11-用于在植物中表达杀昆虫多肽的表达载体构建体
可以构建植物表达载体以包括包含杀昆虫多肽编码序列的转基因盒，该昆虫多肽编码序列在于增强子元件结合的紫茉莉花叶病毒(MMV)启动子的控制下[Dey N and MaitiIB，1999，Plant Mol.Biol.40(5)：771-82[Dey N和Maiti IB，1999，植物分子生物学，40(5)：771-82]]。这些构建体可用于产生转基因玉蜀黍事件，以测试通过本披露的杀昆虫多肽的表达提供的针对玉米根虫的功效。
事件的T0温室效应可以通过免受西方玉米根虫的根保护来测量。使用由Oleson，等人，(2005)，[J.Econ Entomol.(经济昆虫学期刊)98(1)：1-8]开发的方法，根据损伤的根的节点数测量根保护(CRWNIS＝玉米根虫节点损伤评分)。根损伤评分测量为从“0”到“3”，其中“0”表示无可见根损伤，“1”表示1个根损害节点，“2”表示2个节点或根损害，并且“3”表示3个节点的根损害的最大分数。中间评分(例如1.5)表示损害节点的额外分数(例如一个半所损伤的节点)。
序列表
<110> 先锋良种国际有限公司
Steve, Gruver
Heather, Kozy
Jessica, O'Rear
Rosen, Barbara
Schellenberger, Ute
Wei, Zun-Zhi
Xie, Weiping
Zhong, Xiaohong
Zhu, Genhai
<120> 杀昆虫蛋白及其使用方法
<130> 5914-PCT
<150> 62/103787
<151> 2015-01-15
<160> 245
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 578
<212> PRT
<213> 布式假单孢菌
<400> 1
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<212> PRT
<213> 布式假单孢菌
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370 375 380
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Arg Glu His Pro Leu Pro Thr Glu Leu Gln Ala Leu Asn Gly Ala Val
405 410 415
Gln Ala Asn Phe Ala Gln Gln Ser Gln Gly Lys Ser Val Phe Gln Tyr
420 425 430
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<211> 578
<212> PRT
<213> 恶臭假单孢菌
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Thr Asp Trp Asn Asn Asn Leu Thr Gly Trp Thr Glu Ser Ser Ile Ile
35 40 45
Gly Asn Pro Trp Ser Gly Leu Asn Asp Ala Pro Arg Ser Gly Tyr Tyr
50 55 60
Asn Pro Leu Val Glu Gly Phe Gly Asp Val Thr Ala Pro Ala Ile Thr
65 70 75 80
Trp Ala Pro Phe Pro Asn Arg Leu Trp Thr Phe Phe Tyr Asn Asn Gly
85 90 95
Ala Ala Val Ile Pro Gln Leu Gly Gly Lys Ala Met Thr Leu Asp Gln
100 105 110
Val Met Glu Leu Thr Asp His Gly Gln Ile Thr Leu Asp Asn Thr Leu
115 120 125
Tyr Met Leu Tyr Asp Pro Asn Lys Gln Gly Thr Val Leu Gln Leu Pro
130 135 140
Ala Lys Arg Cys Pro Ser Ile Asp Trp Asn Gly Lys Tyr Thr Ala Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Gly Pro Arg Gly Trp Leu Asp Glu Tyr Cys Glu Trp Ser
165 170 175
Ile Val Arg Asp Ala Asn Gly Asn Met Arg Lys Ile Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Glu Asn Pro Ala Tyr Phe Leu Thr Met Trp Arg Ile Asp Pro Asn Ala
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210 215 220
Asp Leu Tyr Leu Arg Tyr Thr Val Asp Cys Pro Thr Gly Lys Ala Gly
225 230 235 240
Asp Pro Val Ile Asp Pro Thr Thr Gly Lys Pro Ala Tyr Asp Thr Val
245 250 255
Asn Lys Trp Asn Ala Gly Thr Ala Cys Val Pro Gly Gln Tyr Gly Gly
260 265 270
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275 280 285
Leu Ala Ala Ala Ala Thr Ile Leu Arg Pro Val Ser Ser Ser Gln Asn
290 295 300
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305 310 315 320
Ser Asp Pro His Ile Gly Phe Met Ala Asn Thr Thr Ala Val Asn Asn
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340 345 350
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355 360 365
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385 390 395 400
Ile Asn Asp Ile Thr Ile Asn Asn Gln Lys Val Asn Tyr Val Trp Val
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
Val Ser Ala Thr Asp His Pro Trp Glu Ser Gly Leu Ala Leu Val Pro
565 570 575
Gly Ala
<210> 14
<211> 535
<212> PRT
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 14
Met Met Ser Arg Ser Arg Leu Ser Pro Leu Ser Leu Leu Cys Gly Ile
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Asn Pro Gly Trp Pro Ala Thr Ala Ser Leu Ala Gly Glu Pro Asp Met
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Pro Val Met Glu Ala Ser Gly Gly Trp Leu Thr Asp Gln Ala Gly Lys
195 200 205
Leu Val Phe Phe Glu Arg Lys Val Gly Lys Ala Glu Phe Asp Tyr Ile
210 215 220
Val Asp Lys Gly Leu Tyr Asp Ala Ala Asn Gln Leu Lys Val Ala Gln
225 230 235 240
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245 250 255
Pro Met Arg Ser Leu Pro Thr Ser Pro Val Pro Gln Glu Gln Leu Gly
260 265 270
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275 280 285
Leu Phe Gly Arg Tyr Leu Thr Thr Val Ala Trp Leu Lys Arg Pro Asp
290 295 300
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305 310 315 320
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340 345 350
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515 520 525
Glu Thr Leu Lys Asp Arg Pro
530 535
<210> 15
<211> 578
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 真菌圃结合的
<400> 15
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1 5 10 15
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35 40 45
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65 70 75 80
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115 120 125
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130 135 140
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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325 330 335
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340 345 350
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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Gly Ala
<210> 16
<211> 534
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 真菌圃结合的
<400> 16
Met Ser Arg Ser Arg Leu Ser Leu Leu Ser Leu Leu Cys Gly Ile Leu
1 5 10 15
Leu Cys Leu Ser Thr Pro Gln Pro Ala Thr Ala Ala Thr Leu Ser Asp
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35 40 45
Gly Phe Leu Pro Val Asn Asn Phe Asn Ala Thr Ser Gln Ala Phe Met
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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515 520 525
Thr Leu Lys Asp Arg Pro
530
<210> 17
<211> 578
<212> PRT
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 17
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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130 135 140
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180 185 190
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Gln Ile Leu Gln Ala Val Phe Glu Val Pro Glu Ser Ala Gly Phe Ser
385 390 395 400
Ile Asn Asp Ile Thr Ile Asn Asn Gln Lys Val Asn Tyr Val Trp Val
405 410 415
Ile Ala Gln Gln Leu Leu Val Gly Leu Ser Val Thr Ala Lys Pro Leu
420 425 430
Ser Ala Thr Pro Gln Ala Phe Pro Cys Val Gln Asp Arg Val Ala Gly
435 440 445
Leu Gln Pro Trp Pro Val Gln Leu Leu Pro Leu Asp Leu Phe Tyr Gly
450 455 460
Gln Ser Pro Thr Asp Leu Pro Ala Trp Leu Ala Pro Gly Ser Ser Asn
465 470 475 480
Gln Phe Val Leu Val Val Gln Gly Ala Asp Pro Thr Thr Thr Ala Gln
485 490 495
Asn Ala Arg Val Gln Phe Ser Asn Pro Gly Val Thr Ala Gln Val Thr
500 505 510
Gln Tyr Leu Pro Asp Ala Ser Ala Ile Pro Gly Gln Thr Asn Ser Gly
515 520 525
Gly Thr Gln Ala Tyr Ile Leu Thr Ile Thr Val Ser Pro Ser Ala Ala
530 535 540
Pro Gly Leu Val Ala Leu Arg Ala Leu Asn Pro Gly Glu Asp Val Asn
545 550 555 560
Val Ser Ala Thr Asp His Pro Trp Glu Ser Gly Leu Ala Leu Val Pro
565 570 575
Gly Ala
<210> 18
<211> 535
<212> PRT
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 18
Met Met Ser Arg Ser Arg Leu Ser Leu Leu Ser Leu Leu Cys Gly Ile
1 5 10 15
Leu Leu Cys Leu Ser Thr Pro Gln Pro Ala Thr Ala Ala Thr Leu Ser
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35 40 45
Gly Gly Phe Leu Pro Val Asn Asn Phe Asn Ala Thr Ser Gln Ala Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Asn Pro Gly Trp Pro Ala Thr Ala Ser Leu Ala Gly Glu Pro Asp Met
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Gln Ser Thr Leu Ala Gln Phe Gly Val Pro Ser Thr Pro Gly Gln Pro
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115 120 125
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130 135 140
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Gly Ala Arg Lys Phe Met Asn Ala Thr Ser Glu Gly Ala Ile Asn Ala
165 170 175
Leu His Gly Phe His Leu Ser Thr Gly Thr Leu Ala Ser Ile Pro Asp
180 185 190
Pro Val Met Glu Ala Ser Gly Gly Trp Leu Thr Asp Gln Ala Gly Lys
195 200 205
Leu Val Phe Phe Glu Arg Lys Val Gly Lys Ala Glu Phe Asp Tyr Ile
210 215 220
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225 230 235 240
Asn Leu Asp Gly Gln Thr Pro Glu Gly Leu Ser Leu Pro Ile Gly Glu
245 250 255
Pro Met Arg Ser Leu Pro Thr Ser Pro Val Pro Gln Glu Gln Leu Gly
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Ala Ile Glu Leu Lys Ala Ala Trp Arg Val Leu Thr Gly Lys Pro Glu
275 280 285
Leu Phe Gly Arg Tyr Leu Thr Thr Val Ala Trp Leu Lys Arg Pro Asp
290 295 300
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305 310 315 320
Ile Asn Lys Thr Gln Ala Ser Pro Asn Phe Ile Trp Thr Thr Phe Glu
325 330 335
Gln Val Asp Asn Val Pro Glu Pro Ala Gln Val Pro Pro Gln Gln Thr
340 345 350
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355 360 365
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385 390 395 400
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515 520 525
Glu Thr Leu Lys Asp Arg Pro
530 535
<210> 19
<211> 578
<212> PRT
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 19
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145 150 155 160
Thr Pro Ser Gly Pro Arg Gly Trp Leu Asp Glu Tyr Cys Glu Trp Ser
165 170 175
Ile Val Arg Asp Ala Asn Gly Asn Met Arg Lys Ile Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Glu Asn Pro Ala Tyr Phe Leu Ala Met Trp Arg Ile Asp Pro Asn Ala
195 200 205
Val Leu Gly Leu Tyr Arg Glu Tyr Ile Asp Pro Ser Val Gln Leu Glu
210 215 220
Asp Leu Tyr Leu Arg Tyr Ala Glu Asp Cys Pro Thr Gly Lys Ala Gly
225 230 235 240
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245 250 255
Asn Lys Trp Asn Ala Gly Thr Ala Cys Val Pro Gly Gln Tyr Gly Gly
260 265 270
Ala Met His Leu Thr Ser Gly Pro Asn Thr Leu Ser Ala Glu Val Tyr
275 280 285
Leu Ala Ala Ala Ala Thr Ile Leu Arg Pro Val Ser Ser Ser Gln Asn
290 295 300
Ala Gln Ser Leu Ile Cys Cys Ala Gln Tyr Gly Gln Asn Tyr Arg Asn
305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Gln Ile Leu Gln Ala Val Phe Glu Val Pro Glu Ser Ala Gly Phe Ser
385 390 395 400
Ile Asn Asp Ile Thr Ile Asn Asn Gln Lys Val Asn Tyr Val Trp Val
405 410 415
Ile Ala Gln Gln Leu Leu Val Gly Leu Ser Val Thr Val Lys Pro Leu
420 425 430
Ser Val Thr Pro Gln Ser Phe Pro Cys Val Gln Asp Arg Val Ala Gly
435 440 445
Leu Gln Pro Trp Pro Val Gln Leu Leu Pro Leu Asp Leu Phe Tyr Gly
450 455 460
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Gln Phe Val Leu Val Val Gln Gly Ala Asp Lys Thr Thr Thr Ala Gln
485 490 495
Asn Ala Arg Val Gln Phe Ser Asn Pro Gly Val Thr Ala Gln Val Thr
500 505 510
Gln Tyr Leu Pro Asp Ala Ser Ala Ile Pro Gly Gln Thr Asn Ala Gly
515 520 525
Gly Thr Gln Ala Tyr Ile Leu Thr Ile Thr Val Ser Pro Thr Ala Ala
530 535 540
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545 550 555 560
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<212> PRT
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 20
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Ala Asp Ala Cys Val Gln Gln Gln Leu Val Phe Asn Pro Ala Ser Gly
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Gly Phe Leu Pro Val Asn Asn Phe Asn Ala Thr Ser Gln Ala Phe Met
50 55 60
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<212> PRT
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<400> 21
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<212> PRT
<213> 布式假单孢菌
<400> 22
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<212> PRT
<213> 盖氏假单孢菌
<400> 23
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Thr
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<212> PRT
<213> 盖氏假单孢菌
<400> 24
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<210> 25
<211> 578
<212> PRT
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 25
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<210> 26
<211> 534
<212> PRT
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 26
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Val Phe Phe Glu Arg Lys Val Gly Lys Ala Glu Phe Asp Tyr Ile Val
210 215 220
Asp Lys Gly Leu Tyr Asp Ala Ala Asn Gln Leu Lys Val Ala Gln Asn
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Leu Asp Gly Gln Thr Pro Glu Gly Leu Ser Leu Pro Ile Gly Glu Pro
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Met Arg Ser Leu Pro Thr Ser Pro Val Pro Gln Glu Gln Leu Gly Ala
260 265 270
Ile Glu Leu Lys Ala Ala Trp Arg Val Leu Thr Gly Lys Pro Glu Leu
275 280 285
Phe Gly Arg Tyr Leu Thr Thr Val Ala Trp Leu Lys Arg Pro Asp Thr
290 295 300
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Gln Ala Asn Phe Ala Gln His Ser Gln Gly Lys Ser Val Phe Gln Tyr
420 425 430
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Thr Leu Lys Asp Arg Pro
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<210> 27
<211> 578
<212> PRT
<213> 变形假单孢菌
<400> 27
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<213> 变形假单孢菌
<400> 28
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<400> 32
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Thr Leu Lys Asp Leu Pro
530
<210> 33
<211> 578
<212> PRT
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 33
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Asp Pro Val Ile Asp Pro Thr Thr Gly Leu Pro Ala Tyr Asp Thr Val
245 250 255
Asn Lys Trp Asn Ala Gly Thr Ala Cys Val Pro Gly Gln Phe Gly Gly
260 265 270
Ala Met His Leu Thr Ser Gly Pro Asn Thr Leu Ser Ala Glu Val Tyr
275 280 285
Leu Ala Ala Ala Ala Thr Ile Leu Arg Pro Val Thr Ser Ser Gln Asn
290 295 300
Ala Gln Ser Leu Ile Cys Cys Ala Gln Tyr Gly Gln Asn Tyr Arg Asn
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Pro Gly Leu Val Thr Val Arg Ala Leu Asn Pro Gly Glu Asp Gly Asn
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Val Ser Ala Ala Asp His Pro Trp Glu Ser Gly Leu Ala Leu Val Pro
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Gly Ala
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<212> PRT
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 34
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Ala Asp Ala Cys Val Gln Gln Gln Leu Val Phe Asn Pro Ala Ser Gly
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<212> PRT
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<400> 35
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<212> PRT
<213> 草假单孢菌
<400> 36
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Pro
<210> 37
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<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 山松甲虫微生物群落
<400> 37
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Ser Ala Thr Gln His Pro Trp Glu Ser Gly Leu Ala Leu Val Pro Asp
565 570 575
Ala
<210> 38
<211> 529
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 山松甲虫微生物群落
<400> 38
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Cys Trp Ile Thr Cys Ala Leu Leu Pro Leu Leu Ala Pro Ser Pro Ala
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Tyr Ile Val Asp Asn Gly Leu Tyr Asp Ala Ala Asn Gln Leu Ile Val
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Gln
<210> 39
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<212> PRT
<213> 平凡假单孢菌
<400> 39
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Ser Ala Ala Gln His Pro Trp Glu Ser Gly Leu Ala Leu Val Pro Gly
565 570 575
Ala
<210> 40
<211> 528
<212> PRT
<213> 平凡假单孢菌
<400> 40
Met Tyr Gly Trp Pro Arg Pro Leu Cys Arg Ala Arg Leu Asn Val Phe
1 5 10 15
Ser Leu Leu Ala Gly Ala Leu Leu Ser Leu Val Ala Pro Pro Pro Ala
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Ser Ala Ser Asp Ala Gln Thr Cys Val Gln Gln Leu Val Phe Asp Pro
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145 150 155 160
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165 170 175
Arg Lys His Arg Phe His Leu Ser Ser Gly Thr Gln Val Thr Leu Pro
180 185 190
Asp Ser Ile Met Glu Ala Ala Gly Gly Trp Leu Thr Asp Gln Ser Gly
195 200 205
Asn Leu Val Phe Phe Glu Arg Lys Val Gly Lys Ala Glu Phe Asp Tyr
210 215 220
Ile Val Asn Asn Gly Leu Tyr Asp Ala Ala Asn Gln Leu Ile Val Ala
225 230 235 240
Gln Asn Ser Asp Asn Arg His Pro Ala Gly Leu Ser Leu Pro Ala Gly
245 250 255
Lys Leu Val Arg Glu Leu Pro Ala Lys Ala Leu Pro Gln Glu Glu Leu
260 265 270
Gly Ala Leu Glu Leu Lys Ala Ala Trp Arg Val Leu Thr His Lys Pro
275 280 285
Glu Leu Tyr Ala Arg Tyr Leu Thr Thr Val Ala Trp Leu Gln Arg Pro
290 295 300
Asp Thr Leu Gln Cys Thr Gln Glu Val Val Gly Leu Val Gly Leu His
305 310 315 320
Ile Ile Asn Lys Thr Gln Thr Gln Pro Asn Phe Ile Trp Thr Thr Phe
325 330 335
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<213> 铁角蕨假单孢菌
<400> 46
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180 185 190
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Asp Pro Val Met Asp Pro Thr Thr Gly Arg Pro Ala Tyr Asp Val Thr
245 250 255
Asn Lys Trp Asn Arg Gly Thr Val Arg Val Pro Gly Gln Ser Gly Gly
260 265 270
Ala Leu His Leu Thr Ser Gly Pro Asn Thr Leu Ser Ala Glu Ile Tyr
275 280 285
Leu Ala Ala Ala Ala Thr Ile Gln Arg Pro Asp Leu Ser Ser Arg Asp
290 295 300
Pro Gln Ser Leu Ile Cys Cys Ala Gln Tyr Gly Gln Asn Tyr Arg Asn
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Tyr Gly Glu Ser Pro Thr Asp Leu Pro Ala Leu Met Val Pro Gly Thr
465 470 475 480
Val Asn Ser Phe Val Leu Ile Val Gln Gly Ala Asp Lys Asn Thr Thr
485 490 495
Ile Asp Asn Ala Arg Ile Glu Phe Ser Asn Pro Gly Ile Lys Ala Lys
500 505 510
Val Thr Lys Phe Leu Pro Asp Ala Ser Ala Ile Pro Gly Gln Thr Asp
515 520 525
Gly Gly Gly Thr Gln Gly Phe Ile Met Asp Val Ala Val Ser Ser Ser
530 535 540
Ala Lys Pro Gly Ser Val Ser Leu Arg Val Leu Asn Pro Asn Glu Pro
545 550 555 560
Ala Asn Pro Ser Asp Ala Asp His Pro Trp Glu Ser Gly Leu Ala Val
565 570 575
Ile Pro Ser His
580
<210> 48
<211> 539
<212> PRT
<213> 厦门海旋菌
<400> 48
Met Asn Arg Leu His Leu Gly Ala Gly Cys Val Ile Ala Gly Phe Cys
1 5 10 15
Ile Leu Ala Ile Ala Gly Leu Leu Trp Val Ile Asp Val Pro Ala Gly
20 25 30
Arg Ala Asp Glu Ile Asn Ile Ser Arg Val Thr Glu Ile Ala Gln Ser
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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115 120 125
Ser Val Pro Val Trp Gly Ser Phe Lys Asp Ala Gln Ala Ile Phe Leu
130 135 140
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Ser Gly Cys Lys Ser Asp Lys Met Leu Leu Gly Tyr Pro Ala Gly Ser
165 170 175
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225 230 235 240
Asn Ala Leu Tyr Asp Ala Ala Tyr Gln Met Arg Val Ala Thr Asn Ala
245 250 255
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260 265 270
Arg Val Pro Pro Thr Glu Pro Gln Gly Gln Asp Ala Leu Gly Ala Phe
275 280 285
Glu Ile Lys Ala Ala Trp Arg Val Leu Thr Gly Gln Ser Asp Ile Tyr
290 295 300
Asp Arg Tyr Leu Thr Ser Val Ala Trp Leu Lys Arg Pro Asp Thr Gly
305 310 315 320
Glu Cys Ser Gln Glu Val Val Gly Leu Val Gly Leu His Ile Ile His
325 330 335
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355 360 365
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405 410 415
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420 425 430
Gly Lys Ser Val Phe Gln Tyr Tyr Lys Leu Val Asn Val Leu Trp Asp
435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Asn Thr Thr Met Glu Thr Tyr Ile Gln Asp Gln Ser Cys Asp Phe Cys
485 490 495
His Ala Asn Ala Thr Ile Ala Gly Ser Asp Thr Leu Ala Ser Asp Phe
500 505 510
Ser Phe Ile Phe Arg Asp Ala Gly Ser Ala Lys Asn Pro Ser Leu Val
515 520 525
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530 535
<210> 49
<211> 577
<212> PRT
<213> 脱氮副球菌
<400> 49
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Asp Arg Cys Pro Ala Ile Asp Trp Asp Gly Lys Tyr Val Asp Phe Ser
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Leu Phe Leu Arg Tyr Glu Tyr Asp Gln Pro Thr Gly Lys Lys Gly Asp
225 230 235 240
Pro Val Leu Asp Pro Thr Thr Gly Asn Pro Ala Tyr Asp Pro Thr Asn
245 250 255
Lys Trp Asn Arg Gly Pro Ala Arg Val Pro Gly Ser Phe Gly Gly Ala
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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Thr Pro Glu Gln His Pro Trp Glu Ala Gly Leu Ala Val Ile Ser Ser
565 570 575
Arg
<210> 50
<211> 502
<212> PRT
<213> 脱氮副球菌
<400> 50
Met Arg Thr Gly Gln Ile Leu Ile Ala Leu Val Ala Gly Val Met Leu
1 5 10 15
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20 25 30
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100 105 110
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115 120 125
Gly Trp Gly Glu Thr Ser Pro Pro Pro Ala Ser Cys Gly Ser Ala Ser
130 135 140
Leu Ala Ala Ser Ala Gly Ser Ile Arg Met Leu Asn Ala Val Ser Lys
145 150 155 160
Ser Ala Val Ser Pro Arg His Gly Phe Asn Leu Asp Thr Gly Thr Met
165 170 175
Ser Ser Ile Ser Asp Glu Ile Glu Glu Ala Thr Gly Gly Trp Leu Thr
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195 200 205
Glu Tyr Asp Tyr Ile Val Ala Lys Gly Leu Tyr Asp Ala Ala Asn Gln
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Leu Lys Val Ala Thr Asn Ala Asp Gly Ala Thr Pro Glu Gly Leu Ser
225 230 235 240
Leu Pro Lys Gly Thr Pro Pro Gly Ser Ala Val Gln Asn Gln Asp Glu
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Asp Asp Leu Tyr Gly Arg Tyr Leu Thr Ser Thr Val Tyr Leu Leu Tyr
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290 295 300
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305 310 315 320
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340 345 350
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355 360 365
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435 440 445
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485 490 495
Ser Arg Asp Phe Val Pro
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<210> 51
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<212> PRT
<213> 纤维弧菌
<400> 51
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1 5 10 15
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50 55 60
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100 105 110
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Tyr Asp Pro Lys Gly Pro Arg Gly Trp Leu Asp Glu Tyr Cys Glu Trp
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515 520 525
Lys Ser Ala Gly Gly Asp Gly Leu Phe Asn Tyr Ile Ile Ser Ile Ser
530 535 540
Val Ala Pro Gly Val Ser Pro Gly Phe Lys Gly Val Thr Val Arg Asn
545 550 555 560
Pro Ala Cys Asp Met Pro Leu Pro Leu Pro Gly Val Leu Phe Val Thr
565 570 575
Ala Lys Gly Asn
580
<210> 52
<211> 506
<212> PRT
<213> 纤维弧菌
<400> 52
Met Lys His Thr Leu Leu Ile Gly Val Thr Thr Gly Leu Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala Cys Gln Gln Pro Val Gln Glu Ser Ser Ala Ala Val Asp Ala Pro
20 25 30
Ala Val Ser Thr Val Ser Ser Ser Ser Ala Pro Ile Ser Phe Pro Cys
35 40 45
Leu Asn Lys Pro Ala Val Asn Tyr Asn Thr Pro Gly Asp Thr Pro Ile
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Asn Trp Pro Val Asp Ala Ser His Pro Gly Glu Pro Asp Lys Thr
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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165 170 175
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180 185 190
Glu Ile Leu Ile Gly Lys Asp Glu Tyr Asp Tyr Ile Asn Asn Asn Gly
195 200 205
Leu Tyr Asn Ala Asn Thr Gln Ala Ala His Ile Gln Gln Asn Lys Asn
210 215 220
Ile Ala Met Pro Leu Gly His Asp Lys Val Leu Gly Gly Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys Ala Ala Trp Leu Ser Val Ser Asp Pro Gln Asn Pro Lys Trp Lys
245 250 255
Asn Tyr Lys Leu Ser Thr Ser Val Ile Tyr Asp Pro Val Ser Lys Asp
260 265 270
Cys His Ala Ser Thr Ile Ala Leu Val Gly Met His Ile Ile Arg Lys
275 280 285
Thr Ala Ser Gln Pro Gln Trp Ile Trp Ala Thr Phe Glu His Lys Asp
290 295 300
Asn Ala Pro Asp Thr Ala Ser Ile Lys Ser Asp Gly Thr Val Asp Gly
305 310 315 320
Asp Tyr Thr Phe Tyr Ser Asn Ser Cys Thr Val Lys Pro Val Pro Ala
325 330 335
Gly Cys Lys Ala Lys Val Glu Asn Gly Thr Ser Val Thr Gln Thr Ser
340 345 350
Cys His Val Asn Val Ser Pro Ala Tyr Tyr Leu Asp Thr Ser Gly Asn
355 360 365
Cys Pro Ala Tyr Pro Ile Gln Val Ser Arg Asp Phe Ala Ile Lys Asp
370 375 380
Ser Thr Asp Asn His Val Ala Ser Leu Asn Arg Ala Val Gln Gln Leu
385 390 395 400
Ile Ala Ser Ser Asn Ala Asp Ser Val Tyr Thr His Tyr Gln Leu Val
405 410 415
Asn Val Leu Trp Ser Ser Ala Ala Val Asn Asp Asn Ala Pro Pro Gly
420 425 430
Asn Pro Pro Leu Thr Pro Leu Ser Ile Ser Gly Glu Thr Pro Ser Leu
435 440 445
Asn Thr Val Pro Val Ala Asn Thr Met Leu Glu Thr Tyr Ala Gln Gly
450 455 460
Phe Asn Cys Leu Ser Cys His Ala Tyr Ala Ser Val Ala Arg Asp Ala
465 470 475 480
Arg Ala Gln Leu Gly Gly Lys Ala Tyr Ala Thr Asp Tyr Ser Phe Ile
485 490 495
Phe Ser Phe Ala Thr Ser Pro Ala Ala Lys
500 505
<210> 53
<211> 256
<212> PRT
<213> 布式假单孢菌
<400> 53
Met Gly Ser Ile Thr Asp His Asn Gln Leu Leu Ala Trp Val Ala Ser
1 5 10 15
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50 55 60
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Lys Lys Leu Gly Lys Asn Ala Glu Glu Phe Ile Asp Asp Leu Glu Ile
245 250 255
<210> 54
<211> 260
<212> PRT
<213> 布式假单孢菌
<400> 54
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1 5 10 15
Ser Ala Thr Pro Ser Leu Thr Asp Pro Thr Val Leu Glu Asp Ile Ala
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165 170 175
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180 185 190
Lys Glu Leu Leu Gly Asn Val Ser Val Ser Thr Phe Glu Ala Lys Leu
195 200 205
Leu Glu Ser Ser Tyr Ala Gly Ile Arg Gln Ser Ile Ile Asp Lys Leu
210 215 220
Gly Glu Asp Asn Ile Arg Glu Asn Ile Leu Leu Val Pro Ala Val Ser
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245 250 255
Glu Leu Asp Ile
260
<210> 55
<211> 260
<212> PRT
<213> 盖氏假单孢菌
<400> 55
Met Lys Leu Ser Thr Asp Glu Val Tyr Val Ile Ser Gly Asn Leu Leu
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Ser Ala Thr Pro Ser Leu Thr Asp Pro Ala Val Leu Glu Asp Ile Ala
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Asn Ser Asn Leu Leu Cys Gln Leu Ala Ala Asp Lys Asn Gln Gly Thr
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Arg Phe Ile Asp Pro Ala Ala Trp Leu Asp Phe Tyr Arg Asn Ser Leu
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Gly Lys Leu Phe Trp Arg Ile Ser Asn Ser Gly Thr Val Ser Tyr Ala
65 70 75 80
Ile Pro Gln Leu Val His Lys Ile Thr Val Lys Glu Val Leu Glu Lys
85 90 95
Thr Phe Tyr Lys Asn Leu Asp Arg Pro Gln Arg Ile Arg Val Glu Asp
100 105 110
Ser Ile Glu Leu Leu Gly Glu Gln Ser Val Asp Ser Pro Ser Ala Thr
115 120 125
Leu Tyr Ser Leu Lys Thr Gln Val Asn Phe Asn Glu Thr Thr Ser Ser
130 135 140
Pro Gly Leu Leu Pro His Ser Val Ser Ser Val Asn Leu Gln Leu Ser
145 150 155 160
Val Val His Ser Glu Thr Cys Ile Ser Val Cys Ser Val Tyr Phe Lys
165 170 175
Thr Ser Thr Arg Ile Gly Asp Asp Val Phe Asn Gln Lys Phe Pro Val
180 185 190
Lys Glu Leu Leu Gly Asn Val Ser Val Ser Thr Phe Glu Ala Lys Leu
195 200 205
Leu Glu Ser Ser Tyr Ala Ser Ile Arg Gln Ser Ile Ile Asp Lys Leu
210 215 220
Gly Glu Asp Asn Ile Arg Glu Asn Ile Leu Leu Val Pro Ala Val Ser
225 230 235 240
Pro Ser Leu Ser Asn Ser Arg His Ala Gly Ala Arg Gln Phe Val Gln
245 250 255
Glu Leu Asp Ile
260
<210> 56
<211> 260
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 56
Met Gly Ser Ile Thr Asp His Gly Lys Leu Leu Ala Trp Val Glu Ser
1 5 10 15
Leu Asp Val Pro Lys Ser Thr Gly Asn Ala Asn Leu Lys Arg Ala Ser
20 25 30
Ala Val Leu Arg Ser Ala Ala Gln Asn Ser Asp Glu Asp Gly Ala Ala
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Lys Val Thr Glu Lys Thr Phe Leu Ala Leu Lys Asn Asn Pro Asn Asn
145 150 155 160
Lys Asp Ala Leu Lys Leu Phe Asp Val Ser Ser Thr Arg Asn Asp Leu
165 170 175
Gly Thr Phe Gln Ile Leu Pro Val Met Gln Asp Lys Asp Gly Asn Val
180 185 190
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195 200 205
Ser Phe Leu Phe Trp His Trp Ser Ser Thr Ser Ala Glu Met Tyr Arg
210 215 220
Ala Ala Gln Gln Val Val Leu Asn Gln Asn Val Tyr Ala Thr Val Arg
225 230 235 240
Gln Ser Val Leu Lys Lys Leu Gly Lys Asn Ala Glu Asp Phe Ile Asp
245 250 255
Gly Leu Asp Ile
260
<210> 57
<211> 259
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 57
Met Ser Phe Thr Ala Pro Glu Val His Val Val Ser Gly Asn Leu Ile
1 5 10 15
Ser Ala Met Pro Ser Val Asn Ser Pro Gln Val Leu Glu Asp Ile Leu
20 25 30
Glu Ser Asn Leu Leu Cys Gln Met Ala Ala Asp Lys Ser Leu Gly Ser
35 40 45
Arg Phe Asn Asn Pro Ala Ala Trp Leu Asp Phe Tyr Arg Asn Ser Leu
50 55 60
Gly Lys Leu Phe Trp Lys Ile Thr Asn Phe Asn Thr Val Ser Tyr Pro
65 70 75 80
Val Pro Ser Pro Thr Arg Ser Val Ser Val Met Gly Ile Leu Glu His
85 90 95
Thr Phe Phe Lys Val Leu Ala Gln Pro Leu Arg His Gln Ile Glu Ala
100 105 110
Asp Ile Glu Leu Leu Met Glu Leu Pro Leu Thr Ser Pro Ala Ser Gln
115 120 125
Leu Tyr Thr Ser Lys Thr His Val Glu Met Ser Thr Arg Ala Arg Ser
130 135 140
Ser Phe Asp Gly Arg Ser Glu Ser Val Ile Ser Leu Gln Ile Ser Val
145 150 155 160
Val His Ser Gly Ser Leu Ile Ser Val Cys Ser Val Tyr Phe Lys Thr
165 170 175
Ala Glu Pro Val Ala Ala Asp Val Phe Ser Gln Lys Phe Lys Val Arg
180 185 190
Asp Leu Leu Gly Asn Ile Ser Val Asn Ser Phe Glu Ala Asp Leu Leu
195 200 205
Glu Gly Ser Tyr Glu Gly Val Arg Gln Gln Ile Lys Thr Lys Leu Gly
210 215 220
Glu Ala Asn Ile Arg Glu Asn Ile Leu Leu Ile Ala Asp Asn Pro Ile
225 230 235 240
Pro Val Asp Glu Leu Pro His Ala Asn Ala His Gln Phe Leu Lys Gly
245 250 255
Leu Asp Ile
<210> 58
<211> 255
<212> PRT
<213> 粪产碱菌
<400> 58
Met Ser Thr Ile Thr Asp His Lys Gln Val Leu Ala Trp Ile Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Ile Pro Asp Ala Pro Ala Gly Gly Asn Arg Val Ala Ala Arg
20 25 30
Ala Thr Ser Ser Ala Asp Glu Asp Gly Ala Val Val Ala Lys Ala Ser
35 40 45
Ile Pro Cys Phe Val Ser Gly Leu Thr Glu Gln Ser Arg Ala Asp Val
50 55 60
Gln Asn Ser Thr Leu Leu Met Gln Leu Ala Ala Asp Lys Lys Tyr Pro
65 70 75 80
Asn Glu Asn Asp Arg Glu Lys Trp Phe Lys Phe Tyr Ser Asp Gly Leu
85 90 95
Thr Asn Leu Gly Trp Gly Ser Ser Ser Ser Phe Phe Glu Arg Phe Gln
100 105 110
Pro Lys Asn Thr Asp Val Thr Met Asp Gln Val Val Leu Glu Val Ile
115 120 125
Leu Thr Val Val Asn Asn Val Asn Asn Pro Leu Tyr Lys Ile Ala Gln
130 135 140
Glu Thr Phe Gly Ala Leu Asn Lys Pro Ala Asn Gln Lys Pro Met Lys
145 150 155 160
Leu Phe Asp His Ser Ser Thr Lys Glu Asp Arg Gly Lys Phe Gln Ile
165 170 175
Leu Pro Ala Gly Gln Asp Gln His Gly Thr Val Ser Met Val Leu Thr
180 185 190
Ala Ile Asn Ala Arg Thr Asp Ile Gln Ser Gly Ser Phe Leu Phe Trp
195 200 205
Lys Trp Ser Lys Ser Thr Ala Trp Leu Tyr Arg Ala Ala Asn Leu Ile
210 215 220
Val Leu Asn Glu Ser Val Tyr Ser Lys Val Arg Gln Ala Val Ile Asp
225 230 235 240
Lys Leu Gly Asp Asn Ala Val Asn Phe Val Leu Asp Leu Asp Ile
245 250 255
<210> 59
<211> 268
<212> PRT
<213> 粪产碱菌
<400> 59
Met Ala Phe Ser Thr Glu Gln Thr Tyr Val Val Ser Gly Asn Leu Ile
1 5 10 15
Ser Ala Thr Thr Glu Asp Thr Asn Thr Leu Ser Tyr Glu Asp Phe Ile
20 25 30
His Ser Asn Leu Leu Ala Gln Met Gly Ala Asp Lys Lys Leu Gly Ser
35 40 45
Arg Phe Val Asp Pro Ala Gly Trp Leu Ser Phe Phe Lys Asn Thr Val
50 55 60
Gly Asn Leu Phe Trp Asn Leu Ser Glu Gln Gly Thr Ser Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Ala Gly Thr Ala Ser Ile Thr Val Gln Gln Ile Leu Glu Gln
85 90 95
Ser Phe Phe Lys Arg Leu Asn Gln Ala Gln Ile Asp Ser Ala Thr Ala
100 105 110
Ser Val Asp Leu Phe Ser Gln Leu Ser Glu Asp Asp Pro Ala Phe Ile
115 120 125
Leu Tyr Asn Ala Lys Ser His Ala Gln Ile Ser Thr Ala Thr Lys Val
130 135 140
Ile Lys Pro Pro Gln Lys Glu Thr Tyr Ser Val Asn Leu Gln Ile Ser
145 150 155 160
Ile Ala His Thr Gly Ser Glu Ile Ala Leu Cys Asn Ile Phe Phe Gln
165 170 175
Thr Ser Gln Ala Val Ser Asp Glu Leu Phe Thr Gln Lys Phe Ala Ile
180 185 190
Lys Asp Leu Ile Gly Asn Ile Asn Val Phe Tyr Leu Lys Ala Leu Leu
195 200 205
Ser Glu Thr Asn Tyr Gly His Ile Arg Gln Gln Val Ile Glu Lys Leu
210 215 220
Gly Glu Asn Ile Asn Thr Asn Ile Val Leu Val Ala Asp Asn Ser Asp
225 230 235 240
Lys Pro Ser Pro Pro Phe Ser His Arg Gly Ala Gln Phe His Thr Gln
245 250 255
Pro Glu Asn Leu Ile Gln Gln Arg Thr Gly Pro Pro
260 265
<210> 60
<211> 255
<212> PRT
<213> 粪产碱菌
<400> 60
Met Ser Thr Ile Thr Asp His Lys Gln Val Leu Ala Trp Ile Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Ile Pro Asp Ala Pro Ala Gly Gly Asn Arg Val Ala Ala Arg
20 25 30
Ala Ser Ser Ser Ala Asp Glu Asp Gly Ala Val Val Ala Lys Ala Ser
35 40 45
Ile Pro Cys Phe Val Ser Gly Leu Thr Glu Gln Ser Arg Ala Asp Val
50 55 60
Gln Asn Ser Thr Leu Leu Met Gln Leu Ala Ala Asp Lys Lys Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Glu Asn Asp Arg Glu Lys Trp Phe Lys Phe Tyr Ser Asp Gly Leu
85 90 95
Thr Asn Leu Gly Trp Gly Ser Ser Ser Ser Phe Phe Glu Arg Phe Gln
100 105 110
Pro Lys Asn Thr Asp Val Thr Met Asp Gln Val Val Leu Glu Val Ile
115 120 125
Leu Thr Val Val Asn Asn Val Asn Asn Pro Leu Tyr Lys Ile Ala Gln
130 135 140
Glu Thr Phe Gly Ala Leu Asn Lys Pro Ala Asn Gln Lys Pro Met Lys
145 150 155 160
Leu Phe Asp His Ser Ser Thr Lys Glu Asp Arg Gly Lys Phe Gln Ile
165 170 175
Leu Pro Ala Gly Gln Asp Gln His Gly Thr Val Ser Met Val Leu Thr
180 185 190
Ala Ile Asn Ala Arg Thr Asp Ile Gln Ser Gly Ser Phe Leu Phe Trp
195 200 205
Lys Trp Ser Lys Ser Thr Ala Trp Leu Tyr Arg Ala Ala Asn Leu Ile
210 215 220
Val Leu Asn Glu Ser Val Tyr Ser Lys Val Arg Gln Ala Val Ile Asp
225 230 235 240
Lys Leu Gly Asp Asn Ala Val Asn Phe Val Leu Asp Leu Asp Ile
245 250 255
<210> 61
<211> 259
<212> PRT
<213> 粪产碱菌
<400> 61
Met Ala Phe Ser Thr Glu Gln Thr Tyr Val Val Ser Gly Asn Leu Ile
1 5 10 15
Ser Ala Thr Thr Lys Asp Thr Asn Thr Leu Ser Tyr Glu Asp Phe Ile
20 25 30
His Ser Asn Leu Leu Ala Gln Met Gly Ala Asp Lys Lys Leu Gly Ser
35 40 45
Arg Phe Val Asp Pro Ala Gly Trp Leu Ser Phe Phe Lys Asn Thr Val
50 55 60
Gly Asn Leu Phe Trp Asn Leu Ser Glu Gln Gly Thr Ser Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Ala Gly Thr Ala Ser Ile Thr Val Leu Gln Ile Leu Glu Gln
85 90 95
Ser Phe Phe Lys Arg Leu Asn Gln Ala Gln Ile Asp Ser Ala Thr Ala
100 105 110
Ser Ile Asp Leu Phe Asp Gln Leu Pro Glu Asp Asp Pro Ala Phe Ile
115 120 125
Leu Tyr Asn Val Lys Ser His Ala Gln Ile Ser Ala Ala Ala Lys Ala
130 135 140
Ile Lys Pro Pro Gln Lys Ala Thr Tyr Ser Val Asn Leu Gln Ile Ser
145 150 155 160
Ile Ala His Thr Gly Ser Glu Ile Ala Leu Cys Asn Val Phe Phe Gln
165 170 175
Thr Ser Gln Ala Val Ser Asp Glu Leu Phe Thr Gln Lys Phe Ala Ile
180 185 190
Lys Asp Leu Ile Gly Asn Ile Asn Ile Phe Tyr Leu Lys Ala Gln Leu
195 200 205
Ser Glu Thr Asn Tyr Gly Gln Ile Arg Gln Gln Val Ile Glu Lys Leu
210 215 220
Gly Glu Asn Ile Asn Thr Asn Ile Leu Leu Val Ala Asp Asn Ser Glu
225 230 235 240
Thr Pro Ser Pro Pro Ser Pro Ala Glu Ala Arg Ser Phe Ile Arg Ser
245 250 255
Leu Lys Ile
<210> 62
<211> 255
<212> PRT
<213> 产碱菌属物种HPC1271
<400> 62
Met Ser Thr Ile Thr Asp His Lys Gln Val Leu Ala Trp Ile Asn Ala
1 5 10 15
Leu Asp Ile Pro Asp Ala Pro Ala Gly Gly Asn Arg Val Thr Ala Arg
20 25 30
Ala Thr Ser Ser Ala Asp Glu Asp Gly Ala Val Val Ala Lys Ala Ser
35 40 45
Ile Pro Cys Phe Val Ser Gly Leu Thr Glu Gln Ser Arg Ala Asp Val
50 55 60
Gln Asn Ser Thr Leu Leu Met Gln Leu Ala Ala Asp Lys Lys Tyr Pro
65 70 75 80
Asn Glu Asn Asp Arg Glu Lys Trp Phe Lys Phe Tyr Ser Asp Gly Leu
85 90 95
Thr Asn Leu Gly Trp Gly Ser Ser Ser Ser Phe Phe Glu Arg Phe Gln
100 105 110
Pro Lys Asn Thr Asp Val Thr Met Asp Gln Val Val Leu Glu Val Ile
115 120 125
Leu Thr Val Val Asn Asn Val Asn Asn Pro Leu Tyr Lys Ile Ala Gln
130 135 140
Glu Thr Phe Gly Ala Leu Asn Lys Pro Ala Asn Gln Lys Pro Met Lys
145 150 155 160
Leu Phe Asp His Ser Ser Thr Lys Glu Asp Arg Gly Lys Phe Gln Ile
165 170 175
Leu Pro Ala Gly Gln Asp Gln His Gly Thr Val Ser Met Val Leu Thr
180 185 190
Ala Ile Asn Ala Arg Thr Asp Ile Gln Ser Gly Ser Phe Leu Phe Trp
195 200 205
Lys Trp Ser Lys Ser Thr Ala Trp Leu Tyr Arg Ala Ala Asn Leu Ile
210 215 220
Val Leu Asn Glu Ser Val Tyr Ser Lys Val Arg Gln Ala Val Ile Asp
225 230 235 240
Lys Leu Gly Asp Asn Ala Val Asn Phe Val Leu Asp Leu Asp Ile
245 250 255
<210> 63
<211> 259
<212> PRT
<213> 产碱菌属物种HPC1271
<400> 63
Met Ala Phe Ser Thr Glu Gln Thr Tyr Val Val Ser Gly Asn Leu Ile
1 5 10 15
Ser Ala Thr Thr Glu Asp Thr Asn Thr Leu Ser Tyr Glu Asp Phe Ile
20 25 30
His Ser Asn Leu Leu Ala Gln Met Gly Ala Asp Lys Lys Leu Gly Ser
35 40 45
Arg Phe Val Asp Pro Ala Gly Trp Leu Ser Phe Phe Lys Asn Thr Val
50 55 60
Gly Asn Leu Phe Trp Asn Leu Ser Glu Gln Gly Thr Ser Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Ala Gly Thr Ala Ser Ile Thr Val Leu Gln Ile Leu Glu Gln
85 90 95
Ser Phe Phe Lys Arg Leu Asn Gln Ala Gln Ile Asp Ser Ala Thr Ala
100 105 110
Ser Val Asp Leu Phe Ser Gln Leu Ser Glu Asp Asp Pro Ala Phe Ile
115 120 125
Leu Tyr Asn Ala Lys Ser His Ala Gln Ile Ser Ala Ala Thr Lys Val
130 135 140
Ile Lys Pro Pro Gln Lys Glu Thr Tyr Ser Val Asn Leu Gln Ile Ser
145 150 155 160
Ile Ala His Thr Gly Ser Glu Ile Ala Leu Cys Asn Ile Phe Phe Gln
165 170 175
Thr Ser Gln Ala Val Ser Asp Glu Leu Phe Thr Gln Lys Phe Ala Ile
180 185 190
Lys Asn Leu Ile Gly Asn Ile Asn Val Phe Tyr Leu Lys Ala Leu Leu
195 200 205
Ser Glu Thr Asn Tyr Gly His Ile Arg Gln Gln Val Ile Glu Lys Leu
210 215 220
Gly Glu Asn Ile Asn Thr Asn Ile Val Leu Val Ala Asp Asn Ser Asp
225 230 235 240
Lys Pro Ser Pro Pro Ser Pro Thr Glu Ala Arg Ser Phe Ile Arg Ser
245 250 255
Leu Lys Ile
<210> 64
<211> 260
<212> PRT
<213> 肠杆菌属物种
<400> 64
Met Asn Thr Asn Ala Leu Asp Phe Val Leu Lys Thr Pro Ile Glu Thr
1 5 10 15
Thr Ala Asp Leu Ala Pro Leu Leu Glu Arg Leu Lys Gly Val Pro Asp
20 25 30
His Gly Gln Ser Lys Arg Lys Thr Met Leu Thr Asp Asn Lys Val Ser
35 40 45
Ala Gln Val Asn Ala Gly Ser Leu Ile Ser Phe Thr Glu Arg Leu Asp
50 55 60
Gly Gln Asn Lys Gln Asp Val Gln Asn Ser Thr Leu Phe Ala Gln Leu
65 70 75 80
Ala Ala Asp Lys His Cys Asn Arg Tyr Thr Ala Pro Met Asp Trp Tyr
85 90 95
Arg Phe Tyr Val Asn Val Leu Gly Gln Ile Gly Trp Asn Gln Pro Ala
100 105 110
Phe Ala Phe Asp Thr Tyr Thr Ser Gly Ala Ser Thr Val Lys Leu Asp
115 120 125
Glu Ala Val Leu Gly Ile Ile Ala Gln Ile Ala Thr Val Gly Glu Val
130 135 140
Ala Leu Val Ala Ala Ala Met Lys Ala Leu Ser Ser Leu Ser Asp Thr
145 150 155 160
Ser Lys Gln Met Leu Ile Trp Asp Ala Lys Ser Asn Ser Glu Asn Thr
165 170 175
Gly Asn Phe Gln Ile Phe Pro Ala Asp Leu Leu Pro Asn Gly Asp Val
180 185 190
Val Met Met Leu Asp Gly Met Gln Phe Asp Ala Lys Arg Asn Glu Gly
195 200 205
Arg Phe Leu Trp Val Thr Trp Gln Ser Thr Ser Ile Lys Ile Gln Arg
210 215 220
Ala Ala Asn Lys Phe Val Leu Asn Glu Gly Val Tyr Lys Gly Val Arg
225 230 235 240
Gln Ala Val Ile Asp Lys Leu Gly Asp Arg Ala Ile Asp Met Ile Ala
245 250 255
Asn Ile Glu Ile
260
<210> 65
<211> 258
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 65
Met Ser Phe Glu Val Cys Asp Ser Ser Val Ala Ala Cys Val Ala Arg
1 5 10 15
Leu Glu Ser Tyr Asp Ile Tyr Pro Asp Ile Ser Pro Arg Ser Leu Tyr
20 25 30
Ser Gly Asp Ile Glu Pro Pro Ala Lys Gly Ser Val Val Gly Glu Gly
35 40 45
Ile Leu Ala Phe Ala Gly Gly Leu Ser Ser Gln His Gln Glu Asp Ala
50 55 60
Gln His Ala Phe Leu Phe Ala Ser Leu Val Ala Asn Arg Gln Tyr Pro
65 70 75 80
Leu Glu Ser Gln Gly Arg Glu Trp Tyr Tyr Lys Phe Val Glu Val Met
85 90 95
Thr Asn Ala Gly Trp Val Ala Thr Gln Arg Phe Tyr Asp Asp Leu Ser
100 105 110
Ile Ala Gly Asn Thr Val Arg Met Asp Lys Leu Val Leu Asp Ile Leu
115 120 125
Ala Ser Val Val Ser Gly Ile Ala Leu Gly Ser Ala Thr Ser Ala Leu
130 135 140
Leu Leu Arg Val Ala Asp Ser Ala Ile Thr Ala Leu Gln Lys Lys Glu
145 150 155 160
Lys Thr Leu Thr Leu Phe Glu Arg Asn Leu Leu Glu His Gly Val Gly
165 170 175
Gly Met Ala Ala Gly Thr Cys Val Glu Ile Asp Gly Glu Val Ser Met
180 185 190
Leu Leu Gly Thr Val Arg Phe Ile Arg Arg Asn Ser Ala Thr Gln Val
195 200 205
Leu Phe Ala Asp Trp Asn Ser Arg Glu Val Lys Leu Tyr Lys Gly Glu
210 215 220
Ser Val Phe Arg Lys Val Pro Ser Ile Val Glu Arg Thr Arg Gly Ile
225 230 235 240
Ile Ile Gly Arg Leu Gly Asn His Ala Val Ser Lys Ile Glu Glu Tyr
245 250 255
Glu Ile
<210> 66
<211> 242
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 66
Met Asp Lys Ala Tyr Ser Ile Phe Val Asn Ala Ala Ala Ile Val Leu
1 5 10 15
Val Ser Ser Thr Val Arg Gly Thr Gly Val Glu Asp Leu Met Asn Ser
20 25 30
Val Leu Leu Ala Gln Leu Val Ala Asn Lys Asn Leu Gln Arg Ile Pro
35 40 45
Ser Ala Asp Trp Tyr Ala Ser Tyr Met Asp Val Leu Ser Val Ala Trp
50 55 60
Val Ala Gly Ala Lys Arg Arg Lys Asp Leu Leu Pro Lys Gln Asp Ala
65 70 75 80
Ala Ser Ser Pro Val Glu Trp Val Thr Ala Ile Pro Leu Asp Asp Arg
85 90 95
Pro Asp Gln Gln Gln Gln Ile Met Ala Val Leu Asp Arg Val Ala Ala
100 105 110
Leu Pro Gly Ser Leu Pro Ala Leu Ser Ile Leu Arg Lys His Met Gln
115 120 125
Lys Pro Asn Glu Pro Glu Pro Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ser Pro
130 135 140
Val Arg Leu Leu Val Ile Val Ala His Ser Pro Val Ser Met Thr Gly
145 150 155 160
Ile Cys Leu Gln Phe Asn Thr Gly Lys Ala Ile Asn Ala Asn Pro Trp
165 170 175
Gly Gln Cys Phe Asp Gly Lys Asp Ile Asp Gly Cys Val Ser Ala Arg
180 185 190
Tyr Leu Arg Met Gln Leu Ser Glu Thr Leu Phe Ala Pro Ala Arg Glu
195 200 205
Val Ile Ala Arg Lys Val Gly Thr Val Val Gly Asp Asn Val Val Asp
210 215 220
Ile Thr Gly Ala Ile Glu Asp Ser Val Val Arg Pro Ala Glu Glu Val
225 230 235 240
Gly Arg
<210> 67
<211> 258
<212> PRT
<213> 芸苔假单孢菌
<400> 67
Met Ser Phe Glu Met Cys Asp Ser Ala Val Ala Ala Cys Val Ala Arg
1 5 10 15
Leu Glu Ser Tyr Asp Ile Tyr Pro Asp Val Ser Pro Arg Ser Leu Tyr
20 25 30
Val Asp Asp Val Glu Pro Pro Ala Lys Gly Ser Val Val Gly Glu Gly
35 40 45
Ile Leu Ala Phe Ala Gly Gly Leu Ser Pro Gln His Gln Glu Asp Ala
50 55 60
Gln His Ala Phe Leu Phe Ala Ser Leu Val Ala Asn Arg Gln Tyr Pro
65 70 75 80
Leu Glu Ser Gln Gly Arg Glu Trp Tyr Tyr Lys Phe Val Glu Val Met
85 90 95
Thr Asn Ala Gly Trp Val Ala Thr Gln Arg Phe Tyr Asp Asp Leu Ser
100 105 110
Val Gly Gly Asn Thr Val Arg Met Asp Lys Leu Val Leu Asp Ile Leu
115 120 125
Ala Ser Val Val Ser Gly Ile Ala Leu Gly Ser Ala Thr Ser Ala Leu
130 135 140
Leu Leu Arg Val Val Asp Ser Ala Ile Thr Ala Leu Gln Lys Lys Glu
145 150 155 160
Glu Thr Leu Thr Leu Phe Glu Arg Asn Leu Leu Glu His Gly Val Gly
165 170 175
Gly Met Ala Ala Gly Thr Cys Val Glu Ile Asp Gly Glu Val Ser Met
180 185 190
Met Leu Gly Thr Val Arg Phe Ile Arg Arg Asn Ser Ala Thr Gln Val
195 200 205
Leu Phe Ala Asp Trp Asn Ser Arg Glu Val Lys Leu Tyr Lys Gly Glu
210 215 220
Ser Val Phe Arg Lys Val Pro Ser Val Val Glu Arg Thr Arg Asp Ile
225 230 235 240
Ile Ile Gly Arg Leu Gly Asn His Ala Val Ser Lys Ile Glu Glu Tyr
245 250 255
Glu Ile
<210> 68
<211> 242
<212> PRT
<213> 芸苔假单孢菌
<400> 68
Met Asp Lys Glu Tyr Ser Val Phe Val Asn Ala Ala Ala Ile Val Leu
1 5 10 15
Ala Pro Cys Ala Leu Arg Arg Thr Glu Val Asp Asp Leu Met Asn Ser
20 25 30
Val Leu Leu Ala Gln Leu Val Ala Asp Lys Ser Leu Leu Arg Ala Pro
35 40 45
Ala Val Asp Trp Tyr Ala Thr Tyr Leu Glu Val Leu Ser Val Ala Trp
50 55 60
Ile Ser Ala Ala Lys Arg Arg Lys Asp Leu Gln Pro Gln Lys Glu Asp
65 70 75 80
Thr His Ser Pro Leu Glu Trp Val Ala Ala Ile Pro Leu Asp Asp Gln
85 90 95
Val Asp Gln Gln Gln Arg Ile Met Ala Val Met Glu Arg Ile Ala Ala
100 105 110
Leu Pro Gly Ser Leu Pro Ala Met Gly Ile Val Arg Lys His Val Gln
115 120 125
Lys Gln Tyr Glu Pro Asp Ala Ala Gln Ser Pro Ser Ser Ser Ser Pro
130 135 140
Val Arg Leu Leu Val Ile Val Ala Gln Ser Pro Val Ser Met Ala Gly
145 150 155 160
Val Tyr Leu Gln Phe Asn Thr Ala Lys Val Ile Glu Ala Asn Pro Trp
165 170 175
Arg Gln Cys Phe Asp Gly Lys Asp Ile Asp Gly Cys Val Thr Ala Arg
180 185 190
Tyr Phe Arg Thr Gln Leu Ser Glu Thr Leu Phe Ala Pro Ala Arg Glu
195 200 205
Val Ile Ala Arg Lys Val Ala Ala Ala Val Gly Asp Asn Ile Val Asp
210 215 220
Ile Thr Lys Ala Ile Asp Asp Ser Gly Val Leu Pro Ala Glu Glu Val
225 230 235 240
Cys Arg
<210> 69
<211> 263
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 来自密歇根州的柳枝稷根际微生物群落
<400> 69
Met Ser Val Asn Met Ile Asp Ser Ala Thr Val Ala Ala Cys Val Arg
1 5 10 15
Arg Leu Glu Ser Tyr Glu Ile Asp Glu Val Pro Val Val Arg Ser Arg
20 25 30
Ala Phe Ala Ala Ser Gly Ile Val Val Glu Glu Pro Ser Lys Gly Ala
35 40 45
Val Val Gly Glu Gly Ile Leu Ser Phe Val Gly Asn Leu Ser Glu Gln
50 55 60
Asn Gln Val Asp Ala Met His Ala Phe Leu Phe Ala Ser Leu Val Ala
65 70 75 80
Asn Lys Gln Phe Pro Tyr Glu Tyr Gln Gly Lys Glu Trp Tyr Tyr Lys
85 90 95
Phe Val Glu Val Met Thr Ser Ala Gly Trp Leu Thr Ser Gln Lys Tyr
100 105 110
Tyr Asn Asp Ile Glu Ile Ser Gly Asn Thr Val Arg Met Asp Gln Leu
115 120 125
Val Leu Glu Ile Leu Gly Ser Val Val Ala Gly Leu Ala Ile Pro Gly
130 135 140
Thr Ala Ser Ala Leu Met Leu Lys Val Ala Gly Asp Ala Ile Thr Ala
145 150 155 160
Leu Lys Lys Lys Glu Thr Ala Leu Thr Leu Tyr Glu Arg Asn Leu Leu
165 170 175
Glu His Gly Val Gly Gly Met Ala Ala Gly Thr Cys Thr Glu Val Asn
180 185 190
Gly Glu Val Thr Leu Ala Leu Gly Thr Val Arg Phe Ile Arg Lys Asn
195 200 205
Thr Ala Thr Gln Val Leu Phe Met Asp Trp Asp Ser Arg Asp Val Gln
210 215 220
Leu Tyr Lys Gly Glu Ser Val Phe Arg Lys Val Pro Tyr Ile Ala Asp
225 230 235 240
Gln Thr Arg Asp Leu Ile Arg Thr Lys Leu Gly Thr Asn Ala Val Ser
245 250 255
Lys Ile Glu Gly Tyr Glu Ile
260
<210> 70
<211> 242
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 来自密歇根州的柳枝稷根际微生物群落
<400> 70
Met Ala Arg Glu Tyr Ser Val Phe Val Asn Ala Ala Ala Ile Val Leu
1 5 10 15
Leu Pro Ser Asn Pro Val Glu Ser Ala Thr Asn Asp Leu Met Asn Ser
20 25 30
Val Leu Leu Ala Gln Leu Val Ala Asn Lys Arg Ala Glu Ala Thr Ser
35 40 45
Ala Val Asp Trp Tyr Glu Thr Tyr Val Gly Val Leu Gly Asp Phe Trp
50 55 60
Leu Thr Arg Ala Arg Ser Arg Gln Asp Ile Gln Pro Gly Lys Asp Asp
65 70 75 80
Thr Ala Ser Pro Leu Glu Trp Ile Ala Ala Val Leu Ala Ser Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Glu Ala Arg Leu Val Thr Ala Leu Leu Lys Gly Ile Ala Arg
100 105 110
Leu Ser Asp Ser Leu Pro Ala Met Ser Leu Leu Arg Lys His Val Gln
115 120 125
Lys Glu Ser Asp Asp Glu Pro Ala Glu Ile Ser Leu Gln Ser Lys Pro
130 135 140
Val Arg Leu Val Val Ile Val Ala Gln Asp Asn Ala Ser Met Thr Ser
145 150 155 160
Val Cys Leu Gln Phe Lys Thr Arg Gln Met Leu Asp Pro Asn Pro Trp
165 170 175
Gly Gln Arg Phe His Val Glu Asp Met Glu Gly Cys Val Ser Ala His
180 185 190
Phe Phe His Ala His Leu Ser Glu Thr Leu Tyr Ala Pro Ala Arg Glu
195 200 205
Ala Val Ala Arg Lys Val Glu Gly Val Leu Ser Asp Asn Ile Val Asp
210 215 220
Ile Thr Glu Ala Ile Asp Ala Leu Ala Phe Leu Pro Thr Glu Glu Ala
225 230 235 240
Gly Thr
<210> 71
<211> 261
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 来自凯洛格的芒属根际微生物群落
<400> 71
Met Asn Val His Asp Val Glu Asp Cys Thr Val Ala Glu Cys Ile His
1 5 10 15
Arg Leu Glu Ser Tyr Glu Leu Asp Gly Ala Glu Val Met Arg Pro Arg
20 25 30
Ser Phe Ser Val Pro Val Val Asn Glu Pro Gly Lys Gly Ser Ile Val
35 40 45
Gly Glu Gly Ile Leu Ser Phe Thr Gly Asn Leu Ser Glu Gln Asn Arg
50 55 60
Glu Asp Val Gln His Ala Phe Leu Phe Ala Ser Leu Val Ala Asn Lys
65 70 75 80
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Glu Ile Leu Gly Ser Val Val Ala Gly Leu Ala Val Pro Gly Ser Ala
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Arg Gly Asp Ser Val Phe Arg Lys Val Pro Tyr Ile Val Glu Gln Thr
225 230 235 240
Arg Asp Thr Ile Arg Ala Lys Leu Gly Leu Asn Ala Lys Pro Lys Ile
245 250 255
Glu Asp Tyr Asp Ile
260
<210> 72
<211> 240
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 来自凯洛格的芒属根际微生物群落
<400> 72
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1 5 10 15
Ile Pro Ala Ala Asp Gly Ala Ala Gln Tyr Thr Asp Leu Val Asn Ser
20 25 30
Val Leu Leu Ala Gln Leu Ile Ala Asn Lys Lys Ile Glu Lys Ala Pro
35 40 45
Glu Ile Asp Trp Tyr Asn Ala Tyr Val Glu Phe Leu Asp Asp Tyr Trp
50 55 60
Leu Arg Arg Thr Arg Ala Arg Gln Asp Trp Ser Ile Ala Gln Asp Arg
65 70 75 80
Val Glu Ser Val Ser Asp Trp Val Ile Ala Ala Ile Ser Gln Asp Ala
85 90 95
Val Asp Lys Gly Ser Ala Thr Ala Ala Thr Leu Gln Arg Leu Ala Arg
100 105 110
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115 120 125
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210 215 220
Leu Thr Leu Ser Asp Asp Ala Ser Ala Met Glu Ile Cys Ala Val Asp
225 230 235 240
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<211> 555
<212> PRT
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 73
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<211> 451
<212> PRT
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 74
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450
<210> 75
<211> 555
<212> PRT
<213> 东方假单孢菌
<400> 75
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<211> 451
<212> PRT
<213> 东方假单孢菌
<400> 76
Met Arg Arg Arg Pro Thr Val Leu Leu Gly Leu Ala Leu Leu Leu Gly
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<213> 假单胞菌属物种PKRS11
<400> 77
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<210> 78
<211> 448
<212> PRT
<213> 假单胞菌属物种PKRS11
<400> 78
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145 150 155 160
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<210> 79
<211> 96
<212> PRT
<213> 南极假单孢菌
<400> 79
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<211> 96
<212> PRT
<213> 东方假单孢菌
<400> 80
Met Lys Met Ser Ser Val Leu Leu Met Ser Ile Ala Phe Val Cys Gln
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Gly Met Val Phe Ala Asp Thr Gln Lys Ser Asn Thr Glu Thr Leu Phe
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<210> 81
<211> 95
<212> PRT
<213> 阿氏肠杆菌
<400> 81
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<210> 82
<211> 95
<212> PRT
<213> 肠杆菌属物种
<400> 82
Met Lys Thr Leu Val Ile Ala Ile Leu Thr Ala Val Leu Cys Gln Gly
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Asn Glu Lys Pro Pro Leu Val Leu Thr Ala Asp Glu Lys Lys Ala Ser
35 40 45
Glu Ala Asn Ala Asp Arg Asn Glu Cys Trp Ser Ala Arg Asn Cys Ser
50 55 60
Gly Lys Ile Leu Asn Asn Lys Asp Ala His Asn Cys Lys Asn Ser Gly
65 70 75 80
Gly Lys Ser Trp Arg Gly Lys Asn Ser Ser Gln Cys Thr Asn Leu
85 90 95
<210> 83
<211> 105
<212> PRT
<213> 燕麦食酸菌
<400> 83
Met Lys Lys Leu Leu Leu Ile Ala Ser Leu Leu Val Ser Ile Ser Gly
1 5 10 15
Ala Asn Val Phe Ala Gln Ala Pro Ser Ser Gly Asp Ala Pro Ala Ala
20 25 30
Val Ala Gly Lys Gln Asp Gly Ala Ser His Lys Asp Thr Glu Gln Ala
35 40 45
Ala Asn Val Glu Cys Asp Val Asn Ala Thr Val Gln Gln Cys Cys Ser
50 55 60
Ala Ala Lys Cys Gln Gly Lys Val Leu Ser Asn Arg Asp Ala His Asn
65 70 75 80
Cys Lys Asp Lys Ser Lys Gly Lys Ser Trp His Ala Ala Ala Gln Gly
85 90 95
Gly Gln Pro Ala Ala Cys Gln Arg Met
100 105
<210> 84
<211> 94
<212> PRT
<213> 普城沙雷氏菌
<400> 84
Met Gln Cys Asn Gly Ala Ile Leu Lys Leu Leu Cys Ala Gln Arg Lys
1 5 10 15
Asp Gln Phe Met Asn Leu Arg Ile Arg Thr His Ala Met Lys Asn Leu
20 25 30
Ser Ile Leu Val Val Leu Ser Ser Cys Leu Leu Leu Pro Leu Thr Ala
35 40 45
Ser Ala Ala Ala Gly Thr Cys Tyr Ser Ala Lys Asn Cys Ser Gly Lys
50 55 60
Val Leu Ser His Arg Asp Ala His Asn Cys Lys Val Lys Asp Lys Gly
65 70 75 80
Lys Ser Trp Arg Ser Asp Ile Thr Asn Gln Cys Thr Asn Leu
85 90
<210> 85
<211> 93
<212> PRT
<213> 液化沙雷氏菌
<400> 85
Met Arg Glu Glu Ala Ile Leu Lys Leu Leu Cys Ala Gln Arg Lys Asp
1 5 10 15
Gln Phe Met Asn Ser Arg Ile Arg Thr His Ala Met Lys Asn Leu Ser
20 25 30
Ile Leu Val Val Leu Ser Ser Cys Leu Leu Leu Pro Leu Thr Ala Ser
35 40 45
Ala Ala Ser Gly Lys Cys Tyr Ser Ala Lys Asn Cys Ser Gly Lys Val
50 55 60
Leu Ser Lys Arg Asp Ala His Asn Cys Lys Val Lys Asp Arg Gly Lys
65 70 75 80
Ser Trp Leu Ser Asp Val Thr Gly Lys Cys Thr Asn Leu
85 90
<210> 86
<211> 78
<212> PRT
<213> 沙雷氏菌属物种
<400> 86
Met Lys Leu Lys Tyr Glu Arg Ile Arg Ile Tyr Val Met Lys Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Val Ile Thr Leu Ala Ser Cys Leu Leu Leu Pro Leu Thr Ala
20 25 30
Ser Ala Ala Ala Gly Thr Cys Tyr Ser Ala Lys Asn Cys Ser Gly Lys
35 40 45
Val Leu Ser His Arg Asp Ala His Asn Cys Lys Val Lys Asp Lys Gly
50 55 60
Lys Ser Trp Arg Ser Asp Ile Thr Gly Gln Cys Thr Asn Leu
65 70 75
<210> 87
<211> 75
<212> PRT
<213> 沙雷氏菌属物种
<400> 87
Met Asn Ser Arg Ile Arg Thr Tyr Ala Met Lys Asn Leu Ser Ile Leu
1 5 10 15
Val Val Leu Ser Ser Cys Leu Leu Leu Pro Leu Thr Ala Ser Ala Ala
20 25 30
Ala Gly Thr Cys Tyr Ser Ala Lys Asn Cys Ser Gly Lys Val Leu Ser
35 40 45
His Arg Asp Ala His Asn Cys Lys Val Lys Asp Lys Gly Lys Ser Trp
50 55 60
Arg Ser Asp Ile Thr Gly Lys Cys Thr Asn Leu
65 70 75
<210> 88
<211> 89
<212> PRT
<213> 绿针假单胞菌
<400> 88
Met Ser Ala Gln Glu Asn Phe Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Lys Glu Ala Leu Ala Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Thr Pro Glu Leu Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Gln Ser Lys Ala Thr Leu Pro Gly Ser Ser
50 55 60
Glu Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Lys Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile His Arg Ile
85
<210> 89
<211> 89
<212> PRT
<213> 绿针假单胞菌
<400> 89
Met Ser Ala Gln Glu Asn Phe Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Lys Glu Ala Leu Ala Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Pro Glu Gln Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Leu Ser Lys Ala Thr Val Pro Gly Ser Ser
50 55 60
Asp Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Lys Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile His Arg Ile
85
<210> 90
<211> 89
<212> PRT
<213> 芸苔假单孢菌
<400> 90
Met Ser Ala Gln Glu Asn Phe Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Arg Glu Val Phe Lys Glu Ala Leu Ala Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Thr Pro Glu Lys Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Leu Ser Lys Ala Thr Val Pro Gly Ser Ser
50 55 60
Asp Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Lys Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile His Arg Ile
85
<210> 91
<211> 89
<212> PRT
<213> 绿针假单胞菌
<400> 91
Met Ser Ala Gln Glu Asn Phe Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Arg Glu Val Phe Lys Glu Ala Leu Ala Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Pro Glu Lys Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Leu Ser Lys Ala Thr Val Pro Gly Ser Ser
50 55 60
Asp Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Lys Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile His Arg Ile
85
<210> 92
<211> 89
<212> PRT
<213> 绿针假单胞菌
<400> 92
Met Ser Ala Gln Glu His Phe Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Lys Glu Val Phe Lys Glu Ala Leu Ala Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Pro Glu Lys Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Leu Ser Lys Ala Thr Leu Pro Gly Ser Ser
50 55 60
Asp Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Lys Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile His Arg Ile
85
<210> 93
<211> 89
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 93
Met Ser Ala Gln Glu Asn Leu Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Asp Glu Ala Leu Ala Gly Leu
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Ala Glu Leu Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Gln Thr Lys Ala Thr Gln Pro Gly Ser Ser
50 55 60
Asn Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Asn Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85
<210> 94
<211> 89
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 94
Met Ser Ala Gln Glu Asn Leu Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Asp Glu Ala Leu Ala Gly Leu
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Ala Glu Leu Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Gln Ala Lys Ala Thr Gln Pro Gly Ser Pro
50 55 60
Asn Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Asn Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85
<210> 95
<211> 89
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 95
Met Ser Ala Gln Glu Asn Leu Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Asp Glu Ala Leu Ala Gly Leu
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Ala Glu Leu Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Gln Ala Gln Ala Thr Gln Pro Gly Ser Pro
50 55 60
Asn Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Asn Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85
<210> 96
<211> 89
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 96
Met Ser Ala Gln Glu Asn Leu Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Asp Glu Ala Leu Ala Gly Leu
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Ala Glu Leu Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Gln Ala Lys Ala Thr Gln Pro Gly Ser Pro
50 55 60
Asn Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Asn Gly Lys
65 70 75 80
Pro Tyr Val Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85
<210> 97
<211> 89
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 97
Met Ser Ala Gln Glu Asn Leu Val Gly Gly Trp Thr Gly Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Lys Glu Val Phe Lys Glu Ala Leu Glu Gly Leu
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Pro Glu Leu Val Ser Ser Gln Ile Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Gln Thr Lys Ala Thr Gln Pro Gly Ser Ser
50 55 60
Thr Ser Trp Gln Ala Ile Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Lys Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85
<210> 98
<211> 89
<212> PRT
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 98
Met Ser Ala Gln Glu Asn Leu Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Glu
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Asp Val Ala Leu Ala Gly Leu
20 25 30
Val Gly Val His Tyr Thr Ala Glu Leu Val Ser Thr Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Gln Ala Lys Ala Thr Gln Pro Gly Ser Pro
50 55 60
Asn Ser Trp Gln Ala Val Val Glu Ile Tyr Ala Pro Ile Asn Gly Lys
65 70 75 80
Pro Tyr Val Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85
<210> 99
<211> 89
<212> PRT
<213> 绿针假单孢菌物种
<400> 99
Met Thr Ala Gln Glu His Leu Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Thr Pro Lys Asp Gln Glu Val Phe Lys Glu Ala Leu Ala Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Ser Tyr Thr Pro Glu Glu Val Ser Ser Gln Val Val Asn
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr Lys Ser Lys Ala Thr Leu Pro Gly Ser Pro
50 55 60
Asn Gly Trp Gln Ala Ile Val Glu Ile Tyr Ala Pro Thr Asn Gly Lys
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Gln Ile His Arg Ile
85
<210> 100
<211> 91
<212> PRT
<213> 荧光假单胞菌
<400> 100
Met Ser Ala Gln Glu Asn His Val Gly Val Gly Gly Trp Thr Ala Tyr
1 5 10 15
His Glu Leu Thr Pro Lys Asp His Ala Val Phe Lys Glu Ala Leu Glu
20 25 30
Gly Phe Val Gly Val Gln Tyr Thr Pro Glu Thr Val Ser Thr Gln Val
35 40 45
Val Ala Gly Thr Asn Tyr Arg Tyr His Ser Lys Ala Gln Gln Pro Gly
50 55 60
Ser Pro Ala Ile Trp Ala Ala Ile Val Glu Ile Tyr Ala Pro Leu Lys
65 70 75 80
Gly Lys Pro His Ile Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85 90
<210> 101
<211> 92
<212> PRT
<213> 肠杆菌属物种
<400> 101
Met Ser Glu Gln Gln Thr Leu Leu Pro Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His
1 5 10 15
Pro Leu Thr Ala Gln Asp Arg Lys Val Phe Glu Glu Ala Leu Asn Gly
20 25 30
His Leu Gly Val Asp Tyr Glu Pro Gln Lys Val Lys Thr Gln Val Val
35 40 45
Ala Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Leu Cys Glu Ala Ser Val Pro Pro Ser
50 55 60
Thr Ala Val Trp Glu Ala Ile Val Glu Ile Tyr Ala Pro Leu Pro Gly
65 70 75 80
Gln Gly Ala Pro His Ile Thr Gln Ile Ile Arg Ile
85 90
<210> 102
<211> 89
<212> PRT
<213> 脱氮希瓦氏菌
<400> 102
Met Ser Asn Asn Glu Thr Ile Val Gly Gly Trp Thr Ala Tyr Asn Ala
1 5 10 15
Ile Thr Ser Ala Glu Arg Glu Ile Phe Asn Lys Ala Met Glu Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Ser Tyr Met Pro Glu Thr Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Met Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Glu Ala Ser Met Pro Pro Ser Glu
50 55 60
Val Leu Trp Glu Ala Ile Val Glu Ile Tyr Gln Pro Leu Lys Gly Ile
65 70 75 80
Pro His Ile Thr Asn Ile Thr Lys Ile
85
<210> 103
<211> 90
<212> PRT
<213> 豚鼠气单胞菌
<400> 103
Met Ser Asp Gln Ala Val Leu Val Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Arg
1 5 10 15
Leu Thr Ala Glu Asp Gln Ala Val Phe Gln Glu Ala Leu Lys Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Glu Tyr Lys Pro Phe Glu Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Met Asn Tyr Arg Tyr Lys Cys Lys Thr Thr Val Pro Leu Pro Thr
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Gln Ser Leu Asp Gly
65 70 75 80
Ser Ala His Ile Thr Ser Ile Thr Pro Ile
85 90
<210> 104
<211> 90
<212> PRT
<213> 杀鲑气单胞菌
<400> 104
Met Ser Glu Gln Ala Val Leu Val Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Thr Ala Glu Asp Gln Ala Val Phe Asp Gln Ala Leu Lys Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Val Pro Phe Glu Val Cys Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Lys Ser Thr Val Pro Leu Ala Lys
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Gln Ser Leu Asp Gly
65 70 75 80
Ser Ala His Ile Thr Ser Ile Thr Pro Ile
85 90
<210> 105
<211> 90
<212> PRT
<213> 维氏气单胞菌
<400> 105
Met Ser Glu Gln Ala Val Leu Val Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Thr Ala Glu Asp Gln Ala Val Phe Asp Gln Ala Leu Lys Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Val Pro Phe Glu Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Lys Ser Thr Val Pro Leu Ala Lys
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Lys Ser Leu Asp Gly
65 70 75 80
Asp Ala His Ile Thr Ser Ile Thr Pro Ile
85 90
<210> 106
<211> 88
<212> PRT
<213> 软体动物气单胞菌
<400> 106
Met Ser Glu Gln Ala Val Leu Leu Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ala Lys Asp Gln Ala Val Phe Asn Gln Ala Leu Glu Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Thr Pro Phe Glu Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Lys Ser Thr Val Pro Leu Pro Asn
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Gln Ala Leu Phe Pro
65 70 75 80
Lys Ser Met Gln Leu Glu Trp Asn
85
<210> 107
<211> 90
<212> PRT
<213> 水生气单胞菌
<400> 107
Met Ser Glu Gln Ala Val Leu Leu Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ala Lys Asp Gln Ala Val Phe Asn Gln Ala Leu Glu Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Thr Pro Phe Glu Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Lys Thr Thr Val Pro Leu Pro Asn
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Gln Ser Leu Asp Gly
65 70 75 80
Ser Ala His Ile Thr Ser Ile Thr Pro Ile
85 90
<210> 108
<211> 1737
<212> DNA
<213> 布式假单孢菌
<400> 108
atgagcacac ccttcaaaca attcacctcc cccgccgggc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaaaacca gctgccgcag tttgaaaccg actggaacaa tgacctcacc 120
ggctggaccc agtccgcgat catcggcaac ccgtggtcgg gcctcaatga cgcgccgcgc 180
tcgggctatt acaacccgct ggtggaaggc tacggcccca ccacgccgcc ggcgattacc 240
tgggcgccct tccccaatcg gctgtggacg ttcttctaca acaacggcac ggcggtgatt 300
ccgcaattgg gcggcaaggc catgtccctg caacaggtga tggagctgac cgacaacggc 360
cagattacga tcaacaacac cctgtacatg ctctacgacc cgaacaagca aggcaccctg 420
ctgcaactgc ccgtcacccg ctgcccgacc atcgactggc aaggcaagta caaggatttc 480
tcgccctcgg ggccccgtgg ctggcttgac gaatactgcg agtggtccat cgtgcgcgat 540
gccgacggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgcgaaa acccggcgta tttcctggcc 600
atgtggcgca ttgatccaaa tgcagtgctg ggcctgtacc gcgactacat cgacccgcag 660
gtgcagctcg aagacctcta cctgcgctac accgccgact gtccgaccgg caaagcgggc 720
gatccggtca tcgaccctac caccggccaa ccggcctacg acacggtcaa caaatggaac 780
gccggcaccg cctgcgtacc cggccaatac ggcggggcga tgcacctgac ctccggcccc 840
aacaccctga gcgccgaggt gtacctggcc gccgcggcga ccatcctgcg tccactggcc 900
agcagccaga attcccaggc attgatctgc tgcgcgcaat acgggcagaa ctaccgcaac 960
tccgacccgc atatcggttt ctcggccaac agcgtggcgg tgaataaccg gctgtccctg 1020
accaatccca tcggccttta cctgcaacaa cccaccgatt tctcggcgtg gaaaggccct 1080
caaggccagg acgtcagcca gtactggaaa atcacccgtg gcaccgccaa gtccgccgcc 1140
aacggctccg accagatcct gcaagcggtg tttgaagtgc cggtcagcgc cgggttttcg 1200
atcaacgaca tcaccatcag tggccagccg atcgactatg tgtgggtgat tgcccagcag 1260
ttgctggtgg gcctgagtgt gacaaccacg cccatcagcc cgacgccgga ttcctgcccc 1320
tgcgtgaagg atcgggtcaa cggcgtgcaa ccctggccgg tgcaactgct gcccctggat 1380
ctgttctacg ggcagtcgcc taccgacctg ccggcctggc tggcacccgg caccagcgga 1440
cagttcgccc tggtggtgca aggcgccgat ctcaagacca ccgccgagac ggcgcgggtg 1500
caattttcca atcccggcgt gacggcgcag gtcacccagt tcctgccgga tgcctccgcc 1560
atccccgggc aaaccaactc cggcggcacc cagggctact tgctgaccat caccgtaagc 1620
cccactgccg ctccggggct ggtgacggtg cgcgcgctca acccgggcga agccgataac 1680
cccagcgcga cggaacaccc atgggaatcc ggattggcgc tggtgcctgg cgcctga 1737
<210> 109
<211> 1608
<212> DNA
<213> 布式假单孢菌
<400> 109
atgtccaggt tacgcttaag tgttttatcg ctgctgacca gtgtggtgct gagcctgttc 60
gccatgcagg ccgcctacgc atcccccacg tccgacgccg acgcttgcgt gcagcaacag 120
ttggtgttca atccgaaaag cggcggtttc ctgccgatta acaacttcaa cgccaccggc 180
cagagcttta tgaattgctt tggctggcag ttgttcattg ccctgaactg gccggtgaat 240
cccggttggc cagccacgcc cgccctcgcg ggtgagccgg acatgaacag tacattggcg 300
caattcggtg taccgactgc ctccgggcag ccgatgagcg tggcgcccgt gtgggccagc 360
tacaaggatg ccaacgatat cttcctgccc ggcgcgcccg cgcccaccgg ctggggcgtg 420
caaaccctgg tgccgtccaa ttgcagcacc cagggcagcc tcagggcgat atcggtgggg 480
gcgcgcaagt tcatgaccgc cacctccgaa agcgcgatca acgcgcgtca tgggtttcac 540
ctgtccagcg gcaccctcgc ctcgattcca gacccgatca tggaagcctc cggcggctgg 600
ctgacggacc agtcgcagaa cctggtgttt tttgaacgca aggtgggcaa ggccgagttc 660
gactacatcg tcagcaaagg gctgtacgac gcagccaacc agctgacagt cgcgcagaac 720
ctcgacaacc agaacccggg cgggctgtct ctgcccatcg gtgaacccat gcgctcgctg 780
ccgcccaacc cggtgccgca ggagcaactg ggagcgctgg aggtcaaggc ggcgtggcgg 840
atccttaccg gcaaacccga gctctacggg cgttacctga ccaccgtcgc ctggctcaaa 900
aacccggcca ccttgcagtg cacccaacaa gtggtgggcc tggtgggcct gcatatcatc 960
aacaagaccc aagcctcgcc caacttcatc tggaccacct tcgagcaggt ggacaacgtg 1020
ccggaaccca accaggtgcc gccacaacag acgccgcccg acagctttgc cttcaacaac 1080
ccgaactgcg gcaccggccc cgaatgcacg ccgaacgtgg cgcgtatcca gtgcaaacag 1140
caccatcccg accgcgactg caccgagccg tttccacggg accaacccgt gcagaccacc 1200
cgggaacatc cgctgcccac tgaactgcag gcgcttaacg gcgcggtgca ggccaacttt 1260
gcccagcaga gccagggcaa gtcggtgttc cagtactaca aactgatcaa cgtactctgg 1320
accctcaccc ccaacccgcc cacccagccg gaaccgggtg tcagtgcgca agtgccgctg 1380
tcctacgggc cgtttatcag ccagggcaac gtaccggtgg ccaacaccac cctggagacc 1440
tacgtccagg gcgataactg caatgcctgt catcagtacg cgaccatcgc cggcagctcc 1500
accctggctt cggacttttc gttcctgttc aacagcgccg actcggccag caagaacagc 1560
ctggtcaagc gcgtgaaagc cttccagacc ctcaaggatc aaccgtga 1608
<210> 110
<211> 1737
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种Ag1
<400> 110
atgagcacac ccttcaaaca attcacctct cccgccgggc aagctcccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaaaacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa cgacctcacc 120
ggctggaccc agtccgcgat catcggcaac ccgtggtcgg gcctcaatga cgcgccgcgc 180
tcgggctatt acaacccact ggtggaaggc tacggcccca ccacgccgcc ggcgattacc 240
tgggcgccct tccccaatcg gctgtggacg tttttctaca acaacggcac ggcggtgatt 300
ccacagttgg gcggcaaggc catgtccatg caacaggtga tggagctgac cgacaacggc 360
cagattacga tcaacaacac cctgtacatg ctctacgacc cgaacaagca aggcaccctg 420
ctgcaactcc ccgtcactcg ctgcccgagc atcgactggc aaggcaagta caaggatttc 480
tcgccttcgg gcccccgtgg ctggcttgac gaatattgcg agtggtccat agtgcgcgat 540
gccgacggca acatgcgcaa gatcaccttc acttgcgaaa acccggcgta tttcctggcc 600
atgtggcgca tcgatccgac tgctgtactg gggctgtatc gcgactacat cgacccgcag 660
gtgcaactcg aagacctgta cctgcgctac accgccgact gcccgaccgg taaggccggc 720
gacccggtca tcgaccccac caccggtcaa ccggcctacg acaccgtcaa caaatggaac 780
gccggcaccg cctgtgtgcc aggccaatac ggcggtgcga tgcacctgac ctccggcccc 840
aacaccctga gcgccgaggt gtacctggct gccgcggcga ccatcctgcg gccattgagc 900
agcagccaga attcccaggc gttgatctgc tgcgcgcaat acgggcagaa ctaccgcaac 960
tccgatccgc atatcggttt ctcggccaac agcgtggcag tgaataaccg gctgtcgctg 1020
acgaacccca tcggcctgta cctgcaacaa cccaccgact tctcggcgtg gaaaggcccc 1080
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<210> 111
<211> 1611
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种Ag1
<400> 111
atgtccaggt tacgcttgag tgttttatcg ctgctgacca gtgtggtgct gagcctgttc 60
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<210> 112
<211> 1740
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种PAMC 25886
<400> 112
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<210> 113
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<212> DNA
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<400> 113
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<210> 114
<211> 1740
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种PAMC 25886
<400> 114
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<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种PAMC 25886
<400> 115
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<210> 116
<211> 1737
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 116
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<210> 117
<211> 1611
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 117
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cagcatccgg accgcgactg caccgagccg tttccacggg accaacccgt gcagaccacc 1200
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gcccagcaga gccagggcaa gtcggtgttc cagtactaca aactgatcaa cgtactctgg 1320
accctcaccc ccaacccgcc cacccagccg gaaccgggtg tcagtgcgca agtgccgctg 1380
tcctacgggc catttatcag ccagggcaac gtaccggtgg ccaacaccac cctggagacc 1440
tacgtccagg gcgacaactg caatgcctgt catcagtacg cgaccatcgc cggcagctcg 1500
accctggcct cggacttttc gttcctgttc aacagtgccg attcggccag caagaaaagc 1560
ctggtcaagc gcgtaaaagc cttccagacc ctcaaggacg gttcaccctg a 1611
<210> 118
<211> 1737
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种PAMC 26793
<400> 118
atgagcacac ccttcaaaca attcacctct cccgccgggc aagcacccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaaaacca gctgccgcag tttgaaaccg actggaacaa cgacctcacc 120
ggctggaccc agtccgcaat catcggcaac ccgtggtcgg gcctcaatga cgcaccgcgc 180
tcgggctatt acaacccgct ggtggaaggc tacggcccca gcacgccgcc ggcgattacc 240
tgggcgccct tccccaatcg gctgtggacg ttcttctaca acaacggcac ggcggtgatt 300
ccgcaattgg gcggcaaggc catgtccatg caacaggtga tggaactgac cgacaacggc 360
cagattacga tcaacaacac cctgtacatg ctctacgacc cgaacaagca aggcaccctg 420
ctgcaactgc ccgtcacccg ctgcccgacc atcgactggc aaggcaagta caaggatttc 480
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gccaatggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgcgaaa acccggcgta tttcctggcc 600
atgtggcgca ttgatccaaa tgcagtgctg ggcctgtacc gcgactacat cgacccgcag 660
gtgcaactcg aagacctgta cttgcgctac accgccgact gcccgaccgg caaagccggc 720
gatccggtca tcgaccctac caccggccaa ccggcctacg acacggtcaa caaatggaac 780
gccggcaccg cctgcgtacc cggccaatac ggcggggcga tgcacctgac ctccggcccc 840
aacaccttga gcgccgaggt gtacctggcc gccgcagcga ccatcctgcg tccactggcc 900
agcagccaga attcccaggc attgatctgc tgcgcgcaat acgggcagaa ctaccgcaac 960
tctgacccgc atatcggttt ctcggccaac agcgtggcgg tgaataaccg gctgtccctg 1020
accaacccca tcggccttta cctgcaacaa cccaccgatt tctcggcgtg gaaaggccct 1080
caaggccagg acgtcagcca gtactggaaa atcacccgtg gcaccgccaa gtccgccgcc 1140
aacggctccg accagattct gcaagcggtg tttgaagtgc cggtcagcgc cgggttttcg 1200
atcaacgaca tcaccatcag tggccagccg atcaactatg tgtgggtgat tgcccagcag 1260
ttgctggtgg gcctgagtgt gacaaccacg cccatcagcc cgacgccgga ttcctgcccc 1320
tgcgtgacgg atcgggtcaa cggcgtgcaa ccctggccgg tgcaactgct gcccctggat 1380
ctgttctacg ggcagtcgcc taccgacctg ccggcgtggc tggcacccgg caccagcggg 1440
cagttcgctc tggtggtgca aggcgccgac ctcaagacca ccgccgagac ggcgcgggtg 1500
cagttttcca atcctagcgt gacggcgcag gtcacccagt tcctgccgga tgcctccgcc 1560
atcccagggc aaaccaactc cggtggcacc cagggctacc tgctgaccat caccgtaagc 1620
cccactgccg ctccgggact ggtgacggtg cgcgcgctca acccgggcga agccgataac 1680
cccagcgcga cggaacatcc atgggagtcc ggattggcgc tggtgcctgg cgcctga 1737
<210> 119
<211> 1608
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种PAMC 26793
<400> 119
atgtccaggt tacgcttaag tgttttatcg ctgctgacca gtgtggtgct gagcctgttc 60
gccatgcagg ccgcctacgc atcccccact tccgacgccg acgcttgcgt gcagcaacag 120
ttggtgttca acccgaaaag cggcgggttc ctgccgatca acaacttcaa cgccaccggc 180
cagagcttta tgaattgctt tggctggcag ttgttcattg ccctgaactg gccggtgaat 240
cccggttggc cagccacgcc cgccctcgcg ggtgagccgg acatgaacag taccctggcg 300
caattcggtg tgccgcccgc ctccgggcag ccaatgagcg tcgcgccggt atgggccagc 360
tacaaggacg ccaacgatat cttcctgccc ggcgcccccg cgcccaccgg ctggggcgtg 420
caaaccctgg tgccgtccaa ttgcagcacc cagggcagcc tcagggcgat gtcggtgggg 480
gcgcgcaagt tcatgaccgc cacctccgaa agcgcgatca acgcccgcca tggttttcac 540
ctgtccagcg gcaccttggc ctcgattcca gacccgatca tggaagcctc cggcggctgg 600
ctgacggacc agtcgcagaa cctggtgttt tttgaacgca aggtgggcaa ggccgagttc 660
gactacatcg tcagcaaagg gctgtacgac gcagccaacc agctgaaagt cgcgcagaac 720
atcgacaacc agaacccggg cgggctgtcc ttgcccatcg gtgagcccat gcgctcgctg 780
ccgcccaacc cggtgccgca ggagcaactg ggagccctgg aggtcaaggc ggcgtggcgg 840
atcctcaccg gcaaacccga gctctacggg cgttacctga ccaccgtcgc ctggctcaaa 900
aacccggcca ccttgcagtg cacccagcaa gtggtgggcc tggtgggcct gcatatcatc 960
aacaagaccc aagcctcgcc caacttcatc tggaccacct tcgagcaggt ggacaacgtg 1020
ccggaaccca accaggtgcc gccacaacag acgccgcccg acagctttgc cttcaacaac 1080
ccgaactgcg gcaccggccc cgaatgcacg ccgaacgtgg cgcgtatcca gtgcaaacag 1140
caccatcccg accgcgactg caccgagccg tttccacggg accaacccgt gcagaccacc 1200
cgggaacatc cgctgcccac tgaactgcag gcgcttaacg gcgcggtgca ggccaacttc 1260
gcccagcaga gccagggcaa gtcggtgttc caatactaca aattgatcaa cgtactctgg 1320
accctcaccc ccaacccgcc cacccagccg gaaccgggtg tcagtgcgca agtgccactg 1380
tcctacgggc cgtttatcag ccagggcaac gtaccggtgg ccaacaccac cctggagacc 1440
tacgtccagg gcgataactg caatgcctgt catcagtacg caaccatcgc cggcagctcc 1500
accctggctt cggacttttc gttcctcttc aacagcgccg actcggccag caagaaaagc 1560
ctggtcaagc gcgtgaaagc cttccagacc ctcaaggatc aaccgtga 1608
<210> 120
<211> 1737
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 120
atgagcacgc ccttcaagca gttcacctct cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa caacctcacc 120
ggctggaccg aatcgtcgat catcggcaac ccctggtcgg gcctgaacga cgccccccgc 180
tcgggttact acaacccgct ggtggaaggt ttcggcgacg tgaccgcccc ggcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg gctctggacg ttcttctaca acaacggtgc ggcggtcatt 300
ccccagctgg gtggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tggaattgac cgaccacggc 360
cagatcaccc tcgacaacac cctctacatg ctctacgacc ccaacaagca aggtaccgtg 420
ctgcaactgc cggccaagcg ctgcccgagc atcgactgga acggcaaata cacggcgttc 480
tcgccttccg gcccgcgggg ctggctcgac gagtactgcg agtggtcgat cgtacgcgat 540
gccaacggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgcgaaa accccgcgta cttcctgacc 600
atgtggcgca tcgacccgaa cgcagtactg gggctgtacc gcgactacat cgacccgaac 660
gtgcaactcg aagacctgta cctgcgctac accgtcgact gcccgaccgg caaggccggc 720
gacccggtca tcgaccccac caccggcaag ccggcctatg acaccgtcaa caaatggaac 780
gccggaacgg cctgtgtacc cggccagtac ggcggtgcga tgcacctgac ctccggcccc 840
aataccctca gcgccgaggt gtacctggcc gccgccgcca ccattctgcg cccggtgagc 900
agcagccaga acgcccagtc gttgatctgc tgcgcgcagt acgggcaaaa ctatcgcaac 960
tctgatccgc acatcggttt catggccaat accacggcag tgaacaaccg actgtcgctg 1020
accaacccca ttggcctgta cttgcagcag cccaccgatt tcagcgcctg gaagggcccg 1080
caaggccagg acgtgagcca gtattggcgc atcacgcgcg gtacggccaa gtcggctgcc 1140
aatggttccg accagatcct gcaggcggtg ttcgaggtgc cggaaagcgc cggcttctcg 1200
atcaatgaca tcaccatcaa caaccagaag gtcaactatg tgtgggtcat cgcccaacaa 1260
ctgctggtcg gcctgagtgt caccgtcaag ccgctcagcg ccacgcttca agcattccca 1320
tgcgtgcagg accgggtggc cggcctgcaa ccctggccag tgcaactgct gccgctggac 1380
ctgttctacg ggcaatcccc aaccgacctg cccgcctggc ttgcaccggg tagcagcaac 1440
cagttcgtgc tggtggtgca aggggccgac ccgactacca cggcgcagaa tgcaagggtg 1500
caattctcca accccggggt gacggcgcag gtcacccagt acctgcccga cgcgtcggcc 1560
attcccggcc agaccaactc gggcggcacc caggcctaca ttctgaccat cacggtcagc 1620
ccctccgcag cacccggcct ggtgacagtg cgtgccctca acccgggtga agatgtgaac 1680
gtgagcgcga cagaccaccc ttgggaatct ggcctggcgc tggtgccggg ggcctga 1737
<210> 121
<211> 1608
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 121
atgatgtcca ggtcacgctt gagtcctctg tcgctgctgt gcggcattct actgtgcctg 60
tcgaccctgc aacccgccac ggcggccacg ctgtcggacg ccgatacctg tgtacagcag 120
caattggtgt tcaacccggc cagcggggga ttcctgccgg tcaacaactt caatgccacc 180
agccaggcgt tcatgaactg ctttggctgg caattgttca ttgccttgaa ctggccggtg 240
aaccccggtt ggccggccac cgccagcctg gcgggtgaac ccgacatgca aagcacgctg 300
gcgcagttcg gggtcccctc cgcaccgggt cagcccatga gcgtggcccc ggtatgggcc 360
agctacaagg acgccaacga catcttcctg cccggcgcac ccacgcccac cggctggggt 420
gtgcaaaccc tggtgccgtc cggctgcagc acccagggta gcctcaaggc gctcaaggtg 480
ggcgcacgca agttcatgaa cgccacctcc gaaggcgcga tcaatgcctt gcacggtttc 540
cacctgtcga ccgggacact tgcgtccatt cccgacccgg tcatggaggc gtccggcggc 600
tggctgacgg accaggcggg caaactggta ttttttgagc gcaaggtggg caaggccgag 660
ttcgactaca tcgtcgacaa ggggctctac gacgccgcca accagttgaa ggtcgcgcaa 720
aacctcgacg gccagacacc ggagggcctg tcgttgccca tcggcgaacc gatgcgctca 780
ctgccaacct ccccagtgcc acaggaacaa ctgggcgcga tcgagctcaa ggccgcctgg 840
cgggtgctga ccggcaaacc cgagctgttc ggccgctacc tgactaccgt cgcctggctc 900
aaacgccccg acacgctgga gtgcacccag gaggtggtgg ggctggtggg cctgcatatc 960
atcaacaaga cccaggcttc gcccaacttc atctggacca ccttcgagca ggtggacaac 1020
gtgcccgaac cggcccaggt cccgccgcaa caaaccccgc cgaacgggtt cgccttcaac 1080
aaccctgact gtggcgacgg ccccgagtgc acaccgaacc aagcccgtat ccagtgcaag 1140
caaacgcatc ccgacaagga ctgcaccgat ctcttcccac gcgaccagcc ggtacagacc 1200
acccgcgaac accccgtgcc cggcgacctg caagccctca acagcgcggt acaagccaac 1260
ttcgcgcagc acagccaagg caagtcggtg ttccagtact acaagctgat caacgtactc 1320
tggaccctcg ctcccaatcc gcccagcccg gaaccgggcg ccaacgcgca agtgccgctg 1380
tcgtacgggc ccttcatcag ccagggcaac gtgccggtgg ccaacaccac catggagacc 1440
tacgtgcagg gtgatgactg caatcagtgc catcagtacg cgacgattgc cggcagcccg 1500
tcattggcct cggatttctc tttcctgttc aacagtgccg gttccgccag caacaaaagc 1560
ctgatcaaaa gcgtcaaagc cttcgaaacc ctcaaggacc gtccctga 1608
<210> 122
<211> 1737
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 真菌圃结合的
<400> 122
atgagcacgc ccttcaagca gttcacctct cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa caacctcacc 120
ggctggaccg aatcgtcgat catcggcaac ccctggtcag gcctgaacga cgccccccgc 180
tcgggttact acaacccgct ggtggaaggt ttcggcgacg tgaccgcccc ggcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg gctctggacg ttcttctaca acaacggtgc ggcggtcatt 300
ccccagctag gtggcaaggc catgaccctg gaccaggtaa tggcgttgac cgaccacggc 360
cagatcaccc tcgacaacac cctctacatg ctctacgacc ccaacaagca aggtactgtg 420
ctgcaactgc cggccaagcg ctgcccgagc atcgactgga acggcaagta cacggcgttc 480
tcgccttccg ggcctcgggg ctggctcgac gagtactgcg agtggtcgat cgtacgcgat 540
gccaacggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgcgaaa accccgcgta cttcctgacc 600
atgtggcgca tcgacccgaa cgcagtactg ggcctgtacc gcgactacat cgacccgaac 660
gtgcaactcg aagacctgta cctgcgctac accgtcgact gcccgaccgg caaagccggc 720
gacccggtca tcgaccccac caccggcaag ccggcctatg acaccgtcaa caaatggaac 780
gccggaacgg cctgtgtgcc cggccagtac ggcggtgcga tgcacctgac ctccggcccc 840
aataccctca gcgccgaggt gtacctggcc gccgccgcca ccatcctgcg cccggtgagc 900
agcagccaga acgcccagtc gttgatctgc tgcgcgcagt acgggcaaaa ctatcgcaac 960
tctgatccgc acatcggttt catggccaat accacggcag tgaacaaccg actgtcgctg 1020
accaacccca ttggcctgta cttgcaacag cccaccgatt tcagcgcctg gaagggcccg 1080
caaggccagg acgtgagcca gtactggcgc atcacgcgcg gtacggccaa gtcggctgcc 1140
aacggttccg accagatcct ccaggcggtg ttcgaggtgc cggaaagcgc tggtttctcg 1200
atcaatgaca tcaccatcaa caaccagaag gtcaactatg tgtgggtcat cgcccaacaa 1260
ctgctagtcg gcctgagcgt caccgtcaag ccgctcagca ccacgcctca agcgttccca 1320
tgcgtgcagg accgggtggc cggccggcaa ccctggccag tgcaactgct gccgctggac 1380
ctgttctacg ggcaatcccc caccgacctg cccgcctggc ttgcaccggg tagcagcaac 1440
cagttcgtgc tggtggtgca aggtgccgac ccgactacca cggcgcagaa tgcaagggtg 1500
caattctcca accctggggt gacggcgcag gtcacccagt acctgcccga cgcatcggcc 1560
attcctggcc agaccaactc gggcggcacc caggcctaca ttctgaccat cacggtcagc 1620
ccctccgcag cacccggctt ggtggcagtg cgtgccctca atccgggtga agacgttaac 1680
gtgagcgcga cagaccaccc ttgggagtct ggcctggcgc tggtgcctgg cgcctga 1737
<210> 123
<211> 1605
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 真菌圃结合的
<400> 123
atgtccaggt cacgcttgag tcttctgtcg ctgctgtgcg gcattctact gtgcctgtcg 60
accccgcaac ccgccacggc ggccacgctg tcggacgccg atacctgtgt acagcagcaa 120
ttggtgttca acccggccag cgggggattc ctgccggtca acaacttcaa tgccaccagc 180
caggcgttca tgaactgctt tggctggcaa ttgttcattg ccttgaactg gccggtgaac 240
cccggttggc cagccaccgc cagcctggcg ggtgaacccg acatgcaaag cacgctggcg 300
cagttcgggg tcccctccgc accgggtcag cccatgagcg tggccccggt atgggccagc 360
tacaaggacg ccaacgacat cttcctgccc ggcgcaccca cgcctaccgg ttggggcgtg 420
caaaccctgg tgccgtccgg ctgcagcacc cagggtaacc tcaaggcgct caaggtgggc 480
gcacgcaagt tcatgaacgc cacctccgaa ggcgcgatca atgccttgca cggtttccac 540
ctgtcgaccg ggacacttgc gtccattccc gacccggtca tggaggcgtc cggcggctgg 600
ctgacggacc aggcgggcaa gctggtgttt ttcgaacgca aggtgggcaa ggccgagttc 660
gactacatcg tcgacaaggg gctctacgac gcagccaacc agttgaaggt cgcgcaaaac 720
ctcgacggcc agacaccgga gggcctgtcg ctgcccatcg gcgaaccgat gcgctcactg 780
ccgacctccc cagtgccaca ggagcaactt ggcgcgatcg agctcaaggc cgcctggcgg 840
gtgctgaccg gcaaacccga gctgttcggg cgctacctga ctaccgtcgc ctggctcaaa 900
cgccccgaca cgctggagtg tacccaggag gtggtggggc tggtgggcct gcatatcatc 960
aacaagaccc aggcttcgcc caacttcatc tggaccacct tcgagcaggt ggacaacgtg 1020
cccgaaccgg cccaggtccc gccgcaacaa accccgccga acgggttcgc cttcaacaac 1080
cctgactgtg gcgacggccc cgagtgcaca ccgaaccaag cccgtatcca gtgcaagcaa 1140
acgcatcccg acaaggactg caccgatctc ttcccacgcg accagccggt acagaccacc 1200
cgcgaacacc ccgtgcccgg cgacctgcaa gccctcaaca gcgcggtaca agccaacttc 1260
gcgcagcaca gccaaggcaa gtcggtgttc cagtactaca agctgatcaa cgtactctgg 1320
accctcgccc ccaatccgcc cagcccggaa ccgggcgcca acgcgcaagt gccgttgtcg 1380
tacgggccgt tcatcagcca gggcaacgta ccggtggcca acaccaccat ggagacctac 1440
gtgcagggtg atgactgcaa tcagtgccat cagtacgcga cgattgccgg cagcccgtca 1500
ttggcctcgg atttctcttt cctgttcaac agtgccggct ccgccagcaa caaaagcctg 1560
atcaaaagcg tcaaagcctt cgaaaccctc aaggaccgcc cctga 1605
<210> 124
<211> 1734
<212> DNA
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 124
atgagcacgc ccttcaagca gttcacatct cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa caacctcacc 120
ggctggaccg aatcgtcgat catcggcaac ccctggtcgg gcctgaacga cgccccccgc 180
tcgggttact acaacccgct ggtggaaggt ttcggcgacg tgaccgcccc ggcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg gctctggacg ttcttctaca acaacggtgc agcggtcatt 300
ccccagctgg gtggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tggagttgac cgaccacggc 360
cagatcaccc tcgataacac cctctacatg ctctacgacc ccaacaagca aggtaccgtg 420
ttgcaactgc cggccaagcg ctgcccgagc atcgactgga acggcaagta cacggcgttc 480
tcgccttccg ggcctcgggg ctggctcgac gagtactgcg agtggtcgat cgtacgcgat 540
gccaacggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgcgaaa accccgcgta cttcctgacc 600
atgtggcgca tcgacccgaa cgcagtactg gggctgtacc gcgactacat cgacccgaac 660
gtgcaactcg aagacctgta cctgcgctac accgtcgact gcccgaccgg caaagccggc 720
gacccggtca tcgaccccac caccggcaag ccggcctatg acaccgtcaa caaatggaac 780
gccggaacgg cctgtgtgcc cggccagtat ggcggtgcga tgcacctgac ctccggcccc 840
aataccctca gcgccgaggt gtacctggcc gccgccgcca ccatcctgcg cccggtgagc 900
agcagccaga acgcccagtc gttgatctgc tgcgcgcagt acgggcaaaa ctatcgcaac 960
tctgatccgc acatcggttt catggccaat accacggcgg tgaacaaccg actgtcgctg 1020
accaacccca ttggcctgta cttgcaacag cccaccgatt tcagcgcctg gaagggccca 1080
caaggccagg acgtgagcca gtactggcgc atcacgcgcg gtacggccaa gtcggctgcc 1140
aacggttccg accagatcct gcaggcggtg ttcgaggtgc cggaaagcgc tggtttctcg 1200
atcaatgaca tcaccatcaa caaccagaag gtcaactatg tgtgggtcat cgcccaacaa 1260
ctgttggtcg gcctgagcgt caccgccaag ccgctcagcg ccacgcccca agcattccca 1320
tgcgtgcagg accgggtggc cggcctgcaa ccctggccag tgcaactgct gccgctggac 1380
ctgttctacg ggcaatcccc caccgacctg cccgcctggc ttgcaccggg tagcagcaac 1440
cagttcgtgc tggtggtgca aggtgccgac ccgactacca cggcgcagaa tgccagggtg 1500
caattctcca accccggggt gacggcgcag gtaacccagt acctgcccga cgcgtcggcc 1560
attcccggcc agaccaactc gggcggcacc caggcctaca ttctgaccat cacggtcagc 1620
ccctccgcag cacccggcct ggtggcattg cgtgccctca acccgggtga agatgtgaac 1680
gtgagcgcga cagaccaccc ttgggaatct ggcctggcgc tggtgcctgg cgcc 1734
<210> 125
<211> 1605
<212> DNA
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 125
atgatgtcca ggtcacgctt gagtcttctg tcgctgctgt gcggcattct actgtgcctg 60
tcgaccccgc aacccgccac ggcggccacg ctgtcggacg ccgatacctg tgtacagcag 120
caattggtgt tcaacccggc cagcggggga ttcctgccgg tcaacaactt caatgccacc 180
agccaggcgt tcatgaactg ctttggctgg cagttgttca ttgccttgaa ctggccggtg 240
aaccccggtt ggccggccac cgccagcctg gcgggcgaac ccgacatgca aagcacgctg 300
gcgcagttcg gggtcccctc cacaccgggt caacccatga gcgtggcccc ggtatgggcc 360
agctacaagg acgccaacga catcttcctg cccggcgccc ccacgcccac cggctggggc 420
gtgcaaaccc tggtaccgtc cgactgcagc acccaaggta gcctcaagac actcaaggtg 480
ggcgcgcgca agttcatgaa cgccacctcc gaaggcgcga tcaatgcctt gcacggtttc 540
cacctgtcga ccgggacact tgcctccatt cccgacccgg tcatggaagc gtccggcggc 600
tggctgacgg accaggcggg caaactggtg ttttttgaac gcaaggtggg caaggccgag 660
ttcgactaca tcgtcgacaa ggggctctac gacgccgcca accaattgaa ggtcgcgcga 720
aacctcgacg gccagacacc ggagggtctg tcactgccca tcggcgaacc gatgcgctca 780
ctgcctacct ccccagtgcc acaggagcaa ctgggcgcga tcgagctcaa ggccgcctgg 840
cgggtactga ctggcaaacc cgagctgttc gggcgctacc tgactaccgt cgcctggctc 900
aaacgtcccg acacgctgga gtgcacccag gaggtggtgg ggctggtggg cctgcatatc 960
atcaacaaga cccaggcttc gcccaacttc atctggacca ccttcgagca ggtggacaac 1020
gtgcccgaac cggcccaggt tccgccgcaa caaaccccgc caaacgggtt tgccttcaac 1080
aaccctgact gtggcaacgg ccccgagtgc acaccaaacc aagcccgtat ccagtgcaag 1140
caaacgcatc ccgacaagga ctgcaccgat ctcttcccgc gcgaccagcc ggtacagacc 1200
acccgcgaac accccgtgcc cggcgacctg caagccctca acagcgcggt acaagccaac 1260
ttcgcgcagc acagccaagg caagtcggtg ttccagtact acaagctggt caacgtactc 1320
tggaccctcg ctcccaaccc gcccagcccg gaaccgggcg ccaacgcgca agtgccgctg 1380
tcgtacgggc cgttcatcag ccaggggaac gtgccggtgg ccaacaccac catggagacc 1440
tacgtgcagg gtgataactg caatcagtgc catcagtacg cgacgattgc cggcagcccg 1500
tcattggcct cggatttctc ttttctgttc aacagtgccg gctccgccag caacaaaagc 1560
ctgatcaaaa gcgtcaaagc cttcgaaacc ctcaaggacc gcccc 1605
<210> 126
<211> 1738
<212> DNA
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 126
atgagcacac ccttcaaaca attcacctct cccgccggac aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa caacctcacc 120
ggctggaccc aatcgtccat catcggcaac ccttggtcgg gcctgaacga cgctccccgc 180
tcgggctact acaacccgct cgtagagggc ttcggcgacg tgaccccacc cgcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg cctgtggacg ttcttctaca acaacggtgc ggcggtcatt 300
ccccagttgg gcggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tggaattggc cgaccacggc 360
cagatcaccc tcgacaacac cctctacacg ctttacgacc cgaacaaaaa gggcactgtg 420
ctgcaactgc cggtcaagcg ctgccccagc atcgcctgga atggcacgta caaggatttc 480
acgccttccg gcccacgggg ctggctcgac gagtactgcg agtggtcgat cgtgcgcgat 540
gccaacggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgtgaaa accccgcgta cttcctggcc 600
atgtggcgca tcgacccgaa cgcggtcctg ggcctgtacc gcgaatacat cgacccgagc 660
gtgcagctcg aagacctgta cctgcgctat gccgaagact gcccgaccgg caaggccggc 720
gatccggtca tggaccccac caccggcaag ccggcctatg acaccgtcaa caaatggaac 780
gccggaaccg cctgtgtgcc cggccagtac ggcggagcga tgcacctgac atccggcccc 840
aataccctca gtgccgaggt gtacctggcc gccgccgcca ccatcctgcg cccggtgagc 900
agcagccaga atgcccagtc gctgatctgc tgcgcgcagt acgggcagaa ctatcgcaac 960
tccgacccgc acatcggctt catggccaat accacggcgg tcaacaaccg actgtcgctg 1020
accaacccta ttggcctgta cttgcaacaa cccaccgact tcagcgcctg gaagggcccg 1080
caaggccagg acgtgagcca gtactggcgc atcacccgcg gtacggccaa gtcggccgcc 1140
aacggctccg accagatcct gcaggcggtg ttcgaggtgc cggaaagcgc cggcttctcg 1200
atcaatgaca tcaccatcaa caaccagaag gtcaactatg tgtgggtcat cgcccaacaa 1260
ctgttggtgg gcctgagcgt caccgtcaaa ccgctcagcg tcacacctca atccttccca 1320
tgcgtgcagg accgggtggc cggcctgcaa ccctggccgg tgcaactgct gccgctggac 1380
ctgttctacg ggaactcccc caccgacctg cccgcctggc ttgcaccggg cagcagcaat 1440
cagttcgtgc tggtggtgca aggcgccgac aagaccacca cggcgcagaa tgccagggtg 1500
caattctcca accccggggt taccgcgcag gtcacccagt acctgcccga cgcgtcggcc 1560
attcccggcc agaccaacgc cggcggcaca caggcctaca tcctgaccat cacggtcagc 1620
cccaccgcag cccccggcct ggtgacggtg cgtgcgctca atccggatga agacgtgaac 1680
gtgagcgcgg cagaccaccc ttgggaatcc ggcctggcgc tggtgcctgg cgcctgaa 1738
<210> 127
<211> 1605
<212> DNA
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 127
atgtccaggt cacgcttgag tcttctgtcg ctgctgtgcg gcattttact gtgcctgtcg 60
accccgcaac ccgccatggc agccacgctg tcggatgccg acgcctgtgt gcagcagcag 120
ttggtgttca acccggccag cgggggattc ctgccggtca acaacttcaa tgccaccagc 180
caggcgttca tgaactgctt tggctggcag ctgttcattg ccttgaactg gccggtgaac 240
cccggctggc cggccaccgc cagcctggcg ggcgaacccg acatgaacag cacgctggcg 300
cagttcggtg tcccctccgc accgggccaa cccatgagcg tggccccggt atgggccagc 360
tacaaggacg ccaatgacat cttcctgccc ggcgcgccca cgcccactgg ctggggcgta 420
caaaccctgg tgccgtccgg ttgcagcact cagggtagcc tcaagtcact caaggtaggc 480
gcacgcaagt tcatgaacgc cacctccgaa ggcgcgatca atgccttgca ccgattccac 540
ctgtctaccg gaacactcgc gtccattccc gacccggtca tggaagcgtc cggcggctgg 600
ttgacggacc agtctggcaa cctggtgttt tttgagcgca aggtaggcaa ggccgagttc 660
gactacatcg tcgacaaggg gctctacgac gccgccaacc agttgaaggt ggcgcaaaac 720
caggacggca agacaccgga ggggctgtcg ctgccaatcg gcgaaccgat gcgctcgctg 780
cctccgtccc ctgtcccgca ggagcagctg ggcgcgatcg agctcaaggc cgcctggcgg 840
gtgctgaccg gcaaacccga actgttcggg cgctacctga ccaccgtcgc ctggctcaaa 900
cgccccgata ccctgaactg cacccaggaa gtggtggggc tggtgggcct gcatatcatc 960
aacaagaccc aggcttcgcc caacttcatc tggaccactt tcgagcaggt cgacaacgtg 1020
cctgaaccgg cccaggcccc gccgcaacaa accccaccga acggttttgc cttcaacaac 1080
cctgactgtg gcagtggccc cgagtgcaca ccgaaccaag cccgtatcca gtgcaagcaa 1140
caccatcccg ataagcaatg caccgatctc ttcccacgcg accagccggt acagaccacc 1200
cgcgaacacc ccatacccag cgacctgcag gccctcaaca gcgcggtgca agccaacttc 1260
gcgcagcaca gtcaaggcca gtcggtgttc cagtactaca agctgatcaa cgtactctgg 1320
accctcgccc ccaatccgcc cagcccggaa ccgggcgcca acgcgcaagt gccgctgtcg 1380
tacgggccat tcatcagcca gggcaacgtg ccggtggcca acaccaccat ggagacttac 1440
gtacagggtg atgactgcaa ccagtgccat cagtacgcga cgattgccgg cagcccttcg 1500
ttggcctcgg acttctcttt cctgttcaac agtgccggtt ctgccagcac caaaagcctg 1560
atcaaaagcg tcaaagcctt ccagaccctc aaggatcaac cgtga 1605
<210> 128
<211> 1746
<212> DNA
<213> 布式假单孢菌
<400> 128
atgagcacgc ccttcaagca attcacctcc cccgctgggc aagcgccaaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccacaa ttcgaaaccg actggaacaa cgacataacc 120
ggctggaccg aagcggcgat catcggcaac ccctggtcgg gcctgtatga cgcgccccgc 180
tcggcctatt acaacccgct ggtcgaaggc tatggcgaca ccaccctgcc ggcgattacc 240
tggcaaccct ttcccaaccg gctgtggacc tttttctaca acaacggcac ggcggtgatt 300
ccccaactgg gcaacaaggc catgaccctg caacaggtca tggagctgac cgacaacggc 360
cagatcacca tcaacggcac cctgtacacc ctgtacgacc cggacaagaa aggcaccctg 420
ctgcaactgc ccgtaacccg ctgcccgact atcgactgga acggcaaata caaagacttc 480
tcaccctcgg ggccacgggg ctggctggac gaatactgcg agtggtcgat cgtgcgcgat 540
accaacggca acatgcgcaa gatcaccttt accagtgaaa acccggcgta cttcctggcc 600
atgtggcgca tcgatccgaa tgccgtgctg ggcttgtatc gcgactacat cgacccgaat 660
gtgcaactgc aagatctcta tctgcgctac accgccgact gcaagaccgg caaggccggt 720
gacccggtga ttgacccgac cacgggcctg ccggcctacg acacggtcaa caaatggaac 780
tccggcactg cctgcacccc cggccagttc ggcggcgcga tgcacctgac ctctgggccc 840
aacactctca gcgccgaggt gtacctggcg gcggcggcca ctatcatgcg gcccctgaaa 900
agcagccaga gcgcccaggc gctgatctgc tgcgcgcaat atgggcagaa ctatcgcaac 960
tccgacccgc atatcggctt tgcagccaac ggggcgacaa atgatggggc cacccccagc 1020
cggatttccc tgaccaaccc catcgccctg tacctgcaac agccgaccaa cttcaatgcc 1080
tggaaaggcc cccaaggcca ggatgtgagc cagtactggc gcatcacccg cggtaccgcc 1140
aaatcggcga tcaacggctc cgaccagatc ctgcaggcgg tgttcgaggt accggaaagt 1200
gccgggttct cgatcaacga catcaccatc aatggccagg cggtggacta tgtgtgggtg 1260
attgcccagc aattgctggt gggcctgagt gtcaccacca tgccgagcac cgcgcagcag 1320
caatcgcctt gcgtgcagga tcgggtcaat ggcctgcagc cctggccggt gcagttgttg 1380
ccgctggacc tgttctacgg ccagtcgccc accgacctgc cggcctggct ggccccaggt 1440
accagcgggc aattcgcgct ggtggtacaa ggcgcggacc tcaagaccac cgccgccacc 1500
gcacggatcc agttcaacaa ccccggggtc acggcgcagg tcacggagtt cctgcccgac 1560
gcctcggcca ttcccggcca gaccaatgcg ggcggcaccc agggctacat catgaccatc 1620
accgtcgcaa aagacgcggc gccgggactg gtgacagtgc gcgcgctcaa tccgggcgag 1680
gcggataacg tcagcgcggc ggaccaccct tgggagtccg ggctggcgct ggtgccatcc 1740
acttaa 1746
<210> 129
<211> 1602
<212> DNA
<213> 布式假单孢菌
<400> 129
atgatgtaca gatttcgctt acgtggtctg ctgctggtcg gcacgctgct gtcgctgttt 60
ctcctgccca cggcccaggc atcggatgcc gatacctgcg tccagcagca gttggtgttc 120
gaccccaaca gcggcggttt tctacccgtc aacaatttca acaccactgg ccagagcttc 180
atgaactgtt ttggctggca gctgtttatt gccctgaact ggcccgtgga tcccggatgg 240
ccagccaatg cagccctcgc gggcgagccg aaccgcaaga tcagcatggc gcaatttggc 300
gtgccccagg tcgccgggca acccatgacc accgcgccgg tgtgggcaag ctttaaagac 360
gctaacgata tattcctgcc cggcgcccga ccgcccacag gctggggcgt gcagacattg 420
gtgccgtcca attgcagcag cgagggcagc ctcaaagcgt tgtcggtggg ggcgcgcaag 480
ttcatgaacg ccacctcgga aagcgcgacc aacgccaagc atcgcttcca cttgtccagc 540
ggtaccctgg cgtcgattcc cgacccgatc atggaagccg ccggtggctg gctgacggac 600
cagaccggca acctggtgta tttcgagcgc aaggtgggca aggccgagtt tgactatatc 660
gtcaagtacg ggctgtacga tgccgccaat caaatggtcg ttgcacaaaa cagcgatggc 720
aatcatccgg ccgggctgtc cctgcccgcc ggcgagctga tgcgctcgat gccggcgcaa 780
cccctgcccc aggagcaact gggcgccctg gaactcaagg ccgcctggcg tatcctcacc 840
ggcaagcccc agctctacgg gcgctacctg accaccgtgg cctggctcaa gaaccccgcc 900
accctgcagt gcacccaaca ggtggtgggc ctggtgggcc tgcatatcat caacaagacc 960
cagagttcac cgaactttat ctggaccaca ttcgagcaag tagacaacgt acaagagcca 1020
ggccaggtgc ccgcgcaaca gacaccgccc gacggtttta ccttctacaa ccccaattgc 1080
accggtggcc ctgacgtgtg cacgcccaac gtggcccgta tccagtgcca gcagcaccac 1140
cctgatcgcg aatgcaccga gccctatcca cgcaaccaac cggtccagac cactcgcgaa 1200
caccccctgc cttcggacat gcaggccctc aacggcgccg tgcaggctaa cttcgcccag 1260
cagaccaacg gccagtcggt gttccagtac tacaaactgg tcaatgtgct gtggatcacc 1320
gccccgaccg caccggaccc ggagccgggc gcgggtgcga aggtgcccct gtcctatggc 1380
gcctttatca gcgatagcaa cgtaccggtg gccaatacca ccatggagac ctacgtccag 1440
agcatggact gcaatgcctg ccatcagcag gcgacgattg ccggcagcag cagcctggcc 1500
tcggacttct cgttcctgtt caacaacgcc gattcggcca agcaaaaaag cctgatcaaa 1560
cgcgtaaatg ccttcgaaac cctcaaggat ggcccaccat ga 1602
<210> 130
<211> 1851
<212> DNA
<213> 盖氏假单孢菌
<400> 130
atgcccgctg cctggcttta tcgcccaact ggtgtgggac gacccgcgcc agaccgttgc 60
cgaccctccc tcgagtgccg gttgctgctc cgtttctacc ccccatggag atctgacatg 120
agcacgccct tcaagcaatt cacctccccc gccgggcaag cgccaaagga ctacaacaag 180
ctgggcctgg aagaccagtt gccgcaattt gaaaccgact ggaacaacga cgtcaccggc 240
tggaccgaag cggcgatcat cggcaaccca tggtcgggcc tgtacgacgc gccacgctcg 300
ggctattaca acccgctggt cgagggctat ggcgacacca ccccgccggc gattacctgg 360
caaccctttc ccaaccggct gtggacgttt ttttatagca acggcacggc ggtgattccg 420
caactgggcg gcaaggccat gaccctgcaa caggtcatgg aactgaccga caatggccag 480
atcaccatca acgacaccct gtacaccctg tacgacccgg acaagaaagg caccctgctg 540
caactgccgg tgacccgttg cccgagtatc gactggaacg gcaagtacaa ggatttctca 600
ccctcgggcc cacggggctg gctggacgag tattgcgagt ggtcgattgt ccgcgatgcc 660
aatggcgaca tgcgcaaaat caccttcacc agtgaaaacc cggcgtattt cctggccatg 720
tggcgcatcg acccgaatgc cgtgctgggg ctgtatcgcg actacatcga cccgaacgtc 780
caactcgaag acctctacct gcgctatgcc accgactgcc cgaccggcaa tgccggggat 840
ccggtgattg acccgaccac gggcctgccc gcctacgaca ctgtcaacaa atggaacgcc 900
ggcaccgcct gtacgcccgg ccagttcggc ggcgcgatgc acctgacgtc cggccccaac 960
accctcagcg ccgaggtgta cctggcggcg gcggccacga tcatgcggcc cctgaaaagc 1020
agccagaacc ctcagtcgct gatctgctgc gcgcaatatg ggcagaacta tcgcaactcc 1080
gacccgcata tcggttttgc ggccaatgag gcggccatca gcaaccgtat ctccctgacc 1140
aatcccatcg ccctgtacct gcagcaaccg accaacttca gcgcgtggaa aggcccgcag 1200
ggccaggatg tgagtcagta ctggcgcatt acccgcggca ccgccaaatc ggcgatcaac 1260
ggctccgacc agatcctcca ggcggtgttc gaggtgccgc aaagcgcggg gttctcgatc 1320
aatgacatca ccatcaacgg ccaggccgtg gactatgtgt gggtgattgc ccagcaactg 1380
ctggtgggcc tgagtgtgac cgtcatgccg agcaccacgg cggcgccgtc tccttgcgta 1440
caagaccggg tcaatggcct gcaaccctgg ccggtgcagt tattgccgct ggacctgttc 1500
tacggccagt cgcctaccga cctgccggcc tggctggccc ctggcagcag cgggcagttt 1560
gtcctggtgg tgcaaggcgc cgatctgcag accaccgccg ccacggcgag gatccagttc 1620
agcaatcccg gggtgacggc acaggtcacg aagttcatgc ccgacgcctc ggccattccc 1680
ggccagacca acgcgggcgg cacccagggt tacatcatga ccatcagcgt cgcggcgaac 1740
gcggcgccgg gactggtgac ggtacgcgcg ctcaacccgg gcgaggcgga taacgtcagc 1800
gcggcggacc acccgtggga atccgggctg gcgctggtgc catccaccta a 1851
<210> 131
<211> 1602
<212> DNA
<213> 盖氏假单孢菌
<400> 131
atgatgtcca ggtttcgctt gagtcgtctg ctgctggtca gcaccctgct gtcactgttt 60
atcctgccct tggcccacgc gtccgatgcc gataactgcg tccagcagca actggtgttc 120
aaccccaaga gcggcgggtt tatgccggtc aacaacttca acaccaccgg ccagagcttt 180
atgaattgct ttggctggca attgttcatc gccctgaact ggccggtgga ccccggctgg 240
ccggccaatg ccagcctggc gggcgagccg gacagaacca tcaccgtcgc gcaattcggc 300
gtgcccacca ccgccgggca gcccatgagc gtggcgccgg tatgggccag ctacaaagac 360
gccaatgaga ttttcctgcc cggtgcaccc aagcccagcg gttggggggt gcaaaccctg 420
gtgccgccca attgcagcag ccaggacagc ctccaggccc tgtcggtagg ggcgcgtaaa 480
ttcatgaatg ccacctcgga aagcgcgacc aacgccaagc atcgcttcca cttgtccagc 540
ggcaccctgg cgtcgattcc cgacccgatc atggaagccg ccggtggctg gctcacggac 600
cagaccggca acctggtgta tttcgaacgc aaggtgggca aggccgagtt cgactacatc 660
gtcgacaacg gtctgtacga tgccgccaat caactgatcg tcgcgcaaaa cagcgatggc 720
aaacacccgg ccggcctgtc gctgcccgcc ggtgagctga tgcgctcgat gcccaccacc 780
ccgctgcccc aggagcaact gggcgccctg gaactcaagg ccgcctggcg catcctcacc 840
ggccagcccc agctctacgg gcgctacctg accactgtgg cctggctcaa gaaccccgcc 900
accctgcaat gcacccaaca ggtggtgggc ctggtgggcc tgcatatcat caacaagacc 960
cagagctcac cgaactttat ctggaccacc ttcgagcacg tggacaacgt accggaaccg 1020
ggccaggtgc ccgcgcaaca gctgcccccg gacggctaca ccttcaacaa tcccaactgc 1080
accggcggcc ccgatgtgtg tacgccgaac gtggcgcgca tccagtgcaa acagcaccac 1140
ccggatcgcg aatgcaccga accctatcca cgggaccaac cggtgcagac cacccgcgaa 1200
cacccactgt cgtcggacat gcaggcgctc aacggcgcag tgcaggcaag cttcgcccaa 1260
cagaccaacg gccagtcggt gttccagtac tacaagctga tcaatgtgct gtggatcacc 1320
gccccgacgc cgcccgaccc cgagccgggc ccgaatgcga aggttcccct gtcctacggt 1380
gcttttatca gcgacagcaa cgtacccgtg gccaatacca ccctggagac gtacgtccag 1440
ggcatgaact gcaatgactg ccatcagcaa gcgaccattg ccggcagcgc caccctggcc 1500
tcggacttct cgttcctgtt caacaacgcc gattcggcca agcatacaag cctgatcaaa 1560
cgcgtacatg ccttcgaaac cctcaaggac ggccaaccat ga 1602
<210> 132
<211> 1737
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 132
atgagcgcgc ccttcaagca gttcacctct cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa caacctcacc 120
ggctggaccg aatcgtcgat catcggcaac ccctggtcgg gcctgaacga cgccccccgc 180
tcgggttact acaacccgct ggtggaaggt ttcggcgacg tgaccgcccc ggcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg gctctggacg ttcttctaca acaacggtgc ggcggtcatt 300
ccccagctgg gtggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tggcgttgac cgaccacggc 360
cagatcacgc tcgacaacac cctctacatg ctctacgacc ccaacaagca aggtactgtg 420
ctgcaactgc cggccaagcg ctgcccgagc atcgactgga acggcaagta cacggcgttc 480
tcgccttccg gcccgcgggg ctggctcgac gagtactgcg agtggtcgat cgtacgcgat 540
gccaacggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgcgaaa accccgcgta cttcctgacc 600
atgtggcgca tcgacccgaa cgcagtgctg ggcctgtacc gcgactacat cgacccgaac 660
gtgcaactcg aagacctgta cctgcgctac accgtcgact gcccgaccgg caaggccggc 720
gacccggtca tcgaccccac caccggcaag ccggcctatg acaccgtcaa caaatggaac 780
gccggaacgg cctgtgtgcc cggccagtac ggcggtgcga tgcacctgac ctccggcccc 840
aataccctca gcgccgaggt gtacctggcc gccgccgcca ccatcctggg cccggtgagc 900
agcagtcaga acgcccagtc gttgatctgc tgcgcgcagt acgggcaaaa ctatcgcaac 960
tctgatccgc acatcggttt catggccaat accacggcag tgaacaaccg actgtcgctg 1020
accaacccca ttggcctgta cttgcagcag cccaccgatt tcagcgcctg gaagggcccg 1080
caaggccagg acgtgagcca gtactggcgc atcacgcgcg gtacggcgaa gtcggccgcc 1140
aatggttccg accagatcct gcaggcggtg ttcgaggtgc cggaaagcgc cggcttctcg 1200
atcaacgaca tcaccatcaa caaccagaag gtcaactatg tgtgggtcat cgcccaacaa 1260
ctgctggtcg gcctgagcgt caccgtcaag ccgctcagca ctgcgcctca agcgttccca 1320
tgcgtgcagg accgggtggc cggcctgcaa ccctggccag tgcaactgct gccgctggat 1380
ctgttctacg ggcaatcccc caccgacctg cccgcctggc ttgcaccggg tagcagcaac 1440
cagttcgtgc tggtggtgca aggtgccgac ccgactacca cggcgcagaa tgcaagggtg 1500
caattctcca accctggggt gacggcgcag gtcacccagt acctgcccga cgcatcggcc 1560
attcctagcc agaccaactc gggcggcacc caggcctaca ttctgaccat cacggtcagc 1620
ccctccgcag cacccggcct ggtggcagtg cgtgccctca acccgggtga agatgtgaac 1680
gtgagcgcga cagaccaccc ttgggaatct ggcctggcgc tggtgcctgg cgcctga 1737
<210> 133
<211> 1605
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 133
atgtccaggt cacgcttgag tcttctgtcg ctgctgtgcg gcattctact gtgcctgtcg 60
accccgcaac ccgccacggc ggccacgctg tcggacgccg atacctgtgt acagaagcaa 120
ttggtgttca acccggccag cgggggattc ctgccggtca acaacttcaa tgccaccagc 180
caggcgttca tgaactgctt tggctggcag ttgttcattg ccttgaactg gccggtgaac 240
cccggttggc cagccaccgc cagcctggcg ggtgaacccg acatgcaaag cacgctggcg 300
cagttcgggg tcccctctgc accgggtcag cccatgagcg tggccccggt atgggccagc 360
tacaaggacg ccaacgacat cttcctgccc ggcgcaccca cgcctaccgg ctggggcgtg 420
gaaaccctgg tgccgtccgg ctgcagcacc cagggtagcc tcaaggcgct caaggtgggc 480
gcacgcaagt tcatgaacgc cacctccgaa ggcgcgatca atgccttgca cggtttccac 540
ctgtcgaccg ggacacttgc gtccattccc gacccggtca tggaggcgtc cggcggctgg 600
ctgacggacc aggcgggcaa actggtattt tttgagcgca aggtgggcaa ggccgagttc 660
gactacatcg tcgacaaggg gctctacgac gctgccaacc agttgaaggt cgcgcaaaac 720
ctcgacggcc agacaccgga gggcctgtcg ctgcccatcg gcgaaccgat gcgctcactg 780
ccgacctccc cagtgccaca ggagcaactg ggcgcgatcg agctcaaggc cgcctggcgg 840
gtgctgaccg gcaaacccga gctgttcggg cgctacctga ctaccgtcgc ctggctcaaa 900
cgccccgaca cgctggagtg cacccaggag gtggtggggc tggtgggcct gcatatcatc 960
aacaagaccc aggcttcgcc caacttcatc tggaccacct tcgagcaggt ggacaacgtg 1020
cccgaaccgg cccaggtccc gccgcaacaa accccgccaa acgggtttgc cttcaacaac 1080
cctgactgtg gcgacggccc cgagtgcaca ccgaaccaag cccgtatcca gtgcaagcaa 1140
acgcatcccg acaaggactg caccgatctc ttcccacgcg accagccggt acagaccacc 1200
cgcgtacacc ccgtgcccgg cgacctgcaa gccctcaaca gcgcggtaca agccaacttc 1260
gcgcagcaca gccaaggcaa gtcggtgttt cagtactaca agctgatcaa cgtactctgg 1320
accctcgccc ccaatccgcc cagcccggaa ccgggcgcca acgcgcaagt gccgctgtcg 1380
tacgggccgt tcatcagcca gggcaacgtg ccggtggcca acaccaccat ggagacctac 1440
gtgcagggtg atgactgcaa tcagtgccat cagtacgcga cgattgccgg cagcccgtca 1500
ttggcctcgg atttctcttt cctgttcaac agtgccggct ccgccagcaa caaaagcctg 1560
atcaaaagcg tcaaagcctt cgaaaccctc aaggaccgcc cctga 1605
<210> 134
<211> 1737
<212> DNA
<213> 变形假单孢菌
<400> 134
atgagcacgc ccttcaagca gttcacctct cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa caacctcacc 120
ggctggaccg aatcgtccat catcggcaac ccttggtcgg gcctgaacga cgccccccgc 180
tcgggttact acaacccgct ggtggaaggc ttcggcgacg tgaccgcccc ggcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg gctctggacc ttcttctaca acaacggtgc ggcggtcatt 300
ccccagttgg gtggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tggagttgac cgaccacggc 360
cagatcaccc tcgacaacac cctctacatg ctctacgacc ccaacaaacg aggtaccgtg 420
ctgcaactgc cggccaagcg ctgcccgagc atcgactgga acggcaagta cacggcgttc 480
tcgccttccg gcccacgggg ctggctcgac gagtactgcg agtggtcgat cgtgcgcgat 540
gccaacggca acatgcgcaa gatcaccttc acctgcgaaa accccgcgta cttcctgacc 600
atgtggcgta tcgacccgaa cgcagtattg ggcctgtacc gcgactacat cgacccgaac 660
gtgcaactcg aagacctgta cctgcgctac accgccgacg gcccgaccgg caaggccggt 720
gacccggtca tcgaccccac caccggcaag ccggcctatg acaccgtcaa caaatggaac 780
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accaacccca ttggcctgta cttgcaacag cccaccgact tcagcgcctg gaagggcccg 1080
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ctgctggtcg gcctgagcgt caccgtcaag ccgctcagca ccacgcctca agcgttccca 1320
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caattctcca accctggggt gacggcgcag gtcacccagt acctgcccga cgcgtcggcc 1560
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gtgagcgcga cagaccatcc ttgggaatct ggcctggcgc tggtgccggg ggcctga 1737
<210> 135
<211> 1605
<212> DNA
<213> 变形假单孢菌
<400> 135
atgtccaggt cacgcttgag tcttctgtcg ctgctgtgcg gcattctgct gtgcctgtcg 60
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<210> 136
<211> 1737
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 136
atgagcacgc ccttcaagca gttcacctct cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
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<210> 137
<211> 1605
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 137
atgtccaggt cacgcttgag tcttctgtcg ctgctgtgcg gcattctact gtgcctgtcg 60
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<210> 138
<211> 1737
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 138
atgagcacgc ccttcaagca gttcacctcg cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
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<210> 139
<211> 1605
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 139
atgtccagcc tacgcttgag tcttctgtcg ctgctaagcg gcattctcct gtgcctgtcc 60
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<210> 140
<211> 1737
<212> DNA
<213> 蒙氏假单孢菌
<400> 140
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<213> 蒙氏假单孢菌
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ctgaccgacc aggcgggcaa cctggtgttc ttcgagcgca aggtgggcaa ggccgagttc 660
gactacatcg tcggcaaggg gctgtacgac gccgccaacc agttgaaggt cgcgcaaaac 720
gccgacggca ctacaccgga ggggttgtcg ttgcccattg gcgagccgat gcgctcgctg 780
ccgccatccc cggtgccgca ggaacaactc ggcgcgatcg aactcaaggc cgcctggcgc 840
atactgaccg gcaaacccga actgttcggg cgctacctga ccaccgtcgc ctggctcaag 900
cgccccgaca cgctgacgtg tacccaggaa gtggtggggc tggtgggcct gcatatcatc 960
aacaagaccc aggcctcgcc gaacttcatc tggaccactt tcgagcaggt cgacaacgtg 1020
cccgagccgg gtcaggtacc gccgcaacaa accccgccga acggcttcgc cttcaacaac 1080
ccggactgcg gcagcggccc tgagtgtgaa ccgaaccagc cccgtatcca atgcaagcaa 1140
caccaccccg accgggactg caccgatctg ttcccacgcg accagccagt gcagaccacg 1200
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ctggcctcgg acttctcgtt cctgttcaac agtgccagct cagccagcaa gcacagcctg 1560
atcaagcgtg tccaagcctt cgaaacgctg aaggaccgtc gctga 1605
<210> 142
<211> 1734
<212> DNA
<213> 草假单孢菌
<400> 142
atgagcacac ccttcaccca attcacctcc cctgccgaac aagcgcccaa ggactacaac 60
aagttgggcc tggaggacca gttgccggcg ttcgaaaccg actggaacaa caacgtcacc 120
ggctggaccc agatgtcgat catcggcaac ccctggtcca acctcaacga tgcaccgcgc 180
tcgggctatt acaacccgct ggagagcggc tacggcacgc tgacgccaaa gaccatcacc 240
tggcagccct tccccaatcg gctgtggacg tttttctata acgagggcgc tgccgtggtc 300
ccgcaactgg gcggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tgcaactgac cgaccacggc 360
cagatcaccc tcaacgacac cctctattcg ctgtacccgg accccaaggc cacccaactg 420
cagatcccca gcgtgctgtg caaatccatc aactggaacg gcccctacgc cgacttttcg 480
ccctcgggtc cacggggctg gctggacgaa tactgcgagt ggtcgatcac ccgcgacccc 540
gacggcaaca tgcgcagcat catgttcacc agcgagaacc cggcgtattt cctgaccatg 600
tggaacatcg acccgggtgc cgtgctgggc ctgtaccagg cgtatgtcga cccgcaggtg 660
aaactcgaag acctgtacct gcgctacacc gccgacggcc cgaccggcaa ggccggcgaa 720
ccggtactcg accccaccac cggccagccc gcctacgaca ccgtgaacaa atggaacagc 780
ggcaccgtgc gcataccggg cgtatcgggc ggcgcgatgc acctgacttc cggccccaat 840
accctgagtg ccgagatcta cctggcggcg gcggccacca tcctgcggcc actcaccagc 900
agccagaacc agcagagcct gatctgctgc gcgcaatacg ggcagaacta ccgcaactcc 960
gacccgcata tcgggttctc cgcgaaccag gcggcggtca acaacctgat ctcgttgacc 1020
aaccctatcg gcctgtacct gcagcaaccc aagtccttca gcacctggaa gggcccgcaa 1080
ggccaggatg tcagcagcta ctggcgcgtt acccgtggca ccgccggcac cggcccgaac 1140
aactccgacc agattctcca ggcggtcttc gaggtgccgg ccagcgcggg gttctcgatc 1200
aatgagatca ccatcaacgg cacgccgatc gactacgtgt gggtgatcgc caacgaactg 1260
aacgtggccc tcagcgtgac ccctgcgccg ctcacggccc agcccaagga gtgtgcctgc 1320
gtggcggcca acaccaccga tgcgcaaccc tggcccgtgc agttgctgcc gattgacctg 1380
ttctacggcc aatcccccag cgacttgccg gccagttttg cccccggcag ctcaggccag 1440
ttcgtattgg tggtacaagg cgccgacccg aacaccacgg cggcggatgc acgggtgcag 1500
ttctccaacc cgggcatcac ggcccaggtc acgcagttcc tgccggatgc ctcggcgatt 1560
cccggccaga ccgacggcgg cggcacccag ggctacatca tgaccatcac cgtcagcagc 1620
aacgcggcgc cggggctggt cagtgtgcgt gcgctgaacc ccagcgaagc ggccaacccg 1680
agtgcctccg agcacccctg ggaaagcggc ctggccctgg tgcccagcgc ctga 1734
<210> 143
<211> 1587
<212> DNA
<213> 草假单孢菌
<400> 143
atgaacggat ggcttcgccc gctgcgccgg gcacgcttgc gtattgcctg cgcaatcacc 60
tgcacccttc tcccactgct ggccgccaca ccggccaatg ccgcctcgga cgcccagagc 120
tgcgtcagcc agctggtgtt cgatcccacc agcggcggct tcctgccggt gaacaatttc 180
ggcaccgagc aggcttttct caattgtttc ggctggcagt tgttcatcgc catgaactgg 240
ccggtcaatc ccggctggcc ggccaaccca agcctggccg gtgagccgga cacccaaagc 300
agcgcggccc agttcggcgt gccgccaacc cccggccaac cgatgagcaa tgccccggtg 360
tgggccagct acaaggatgc cagcgaaatc ttcctgcccg gcgcggccaa gccgtccggc 420
tggggcgtgg aaaccctggt gccgtccaat tgcaccgcca ccggcaacct caaggcgttt 480
gccacggggg cgcgtaaatt catcaccgcc acctcggaaa gcgcgatcaa ccgcaagcac 540
cgcttccacc tgtccagcgg cacccaggtg accctgccgg attcgatcat ggaagcgtcc 600
ggcggctggc tcacggacca gtcgggcaac ctggtgtttt tcgagcgcaa ggtgggcaag 660
gccgagttcg actacatcgt cgacaacggt ttgtacgacg ccgccaacca actgatcgtg 720
gcgcaaaaca gcgacaaccg acaccccgcc ggcctgtcac tgccggccgg caagccggtg 780
cgcgagctgc cagccaaggc gctaccccag gaggagctgg gtgccctgga actcaaggcg 840
gcctggcgcg tgctcaccaa caagcccgac ttgtacgggc gctacctgac caccgtggcc 900
tggctgcaac gcccggacac gctgcaatgc acccaggaag tgataggcct ggtagggctg 960
catatcatca acaagaccca gacccagccg aacttcatct ggaccacctt cgagcagatc 1020
gacaacgtgc ccgatggcgg cgccgcccca ccccagggct acagcttcaa caaccccgag 1080
tgcaccggcg atgcctgcgc gccaaacgtc gcccgcgtgc agtgcgacgc cacccacacg 1140
ccgcccgact gcacgcccct ggaccagccg gtgcaggcca cccggctcaa cgccacgccc 1200
caggacatgc aggcgctgaa cacggcggtg cagcagacct tcgcccagca gacccagggc 1260
cagtcggtgt tccagtacta caaactggtg aacgtgctgt ggtccaagac gcccaacgcc 1320
cccaacgatc caggccctgg gccgaacgtg aaggtgccgc tgtcctatgg gccgtttgtc 1380
agcgaccaga gtgtcgtggt cgccaacacc acgatggaaa cctacgtgca gacagacaac 1440
tgcaatgact gccaccagta cgcggcgatt gccggcaaat ccgggctggc gtcggacttc 1500
tcgttcctgt tcggcaatgc cgactcggcg aaaaatacgc ggctgatcaa acgcatcgag 1560
tcgttcaaga ccctcaagga caacccg 1587
<210> 144
<211> 1734
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 山松甲虫微生物群落
<400> 144
atgagcacgc ccttcaccca attcacctcc cctgccgaac aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggagaacca actgcccacc ttcgaaacca actggaacaa caacgtcacc 120
ggctggaccc agatgtcggt gatcggcaac ccgtggtcca acctcaacga cgcaccgcgc 180
tcgggctact acaacccgct ggagagcggc tacggcacgc agacgccagt gaccatcacc 240
tggcagccct tccccaatcg gctgtggacg ttcttctaca acaacggcgc cgccgtggtc 300
ccgcaactgg gcggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tgcagttgac tgaccatggc 360
cagatcaccc tgaacaacac cctctattcg ctgtacccgg accccaaggc aacccaactg 420
cagatcccca gcgtgctgtg caagtccatc aactggaacg gtccttacgc cgacttttca 480
ccctcgggcc cacggggctg gctggatgaa tactgcgagt ggtcgatcac ccgcgatccc 540
gacggcaaca tgcgcagcat catgttcacc agcgagaacc cggcgtactt cctgaccatg 600
tggaacatcg atccgcaggc cgtgctgggg ttgtacaagg cgtatgtcga cccgcaagtg 660
aagatcgaag acctgtacct gcgctacacc gccaacggcc cgaccggcca ggccggcgaa 720
ccggtgctcg accccaccac cggccagccc gcctatgaca cggtgaacaa atggaacagc 780
ggcaccgtgc gtatcccagg ggtgtcgggc ggcgccatgc acctgacctc cgggcccaat 840
accctgagtg ctgagatcta cctggcggcg gccgccacta tcctgcggcc gctcaacagc 900
agccgtaacc agcagagcct gatctgctgc gcgcagtacg ggcagaacta tcgcaactcc 960
gacccgcata tcggcttttc cgccaaccag gcggcggtca acaacctgat ctcattgacc 1020
aaccccatcg gcctgtacct gcaacagccg aaatccttca gcacctggaa aggcccgcaa 1080
ggccaggatg tcagcagcta ctggcgcgtc acccgtggca cggccggcac cggtccaaac 1140
aactccgacc agatcctgca ggcggtgttc gaggtgccac aaagcgcggg gttctcgatc 1200
aatgacatta ccatcaacgg cacgccgatc gactacgtgt gggtgatcgc caatgaattg 1260
aatgtggccc tgagcgtcac cccggcgccg ctccccgcac cgcccaagga atgcgattgc 1320
gtggcggcca acaacaccga tgcgcaaccc tggccggtgc agttgctgcc gatcgacctg 1380
ttctacggcc agtctcccag cgacttgccg gccagctttg cccccggcag ttccggccag 1440
ttcgtgctgg tggtgcaagg cgccgacccg aacaccacgg cggcggatgc gcgggtgcag 1500
ttttccaacc cagggattac cgcccaggtc acccagttct tgccggatgc gtcggccatt 1560
ccagggcaga ccgacagcgg cggcacccag ggctacatca tgacggtcac cgtcagcagc 1620
aacgcggcac cggggctggt cagcgtgcgt gcgctgaacc ccagcgaagg cgccaacccg 1680
agtgccaccc agcacccatg ggaaagcggc ctggccctgg tgcccgacgc ctga 1734
<210> 145
<211> 1590
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 山松甲虫微生物群落
<400> 145
atgaacggat ggcttcgccc gctgcgtcgg gcacgcttgc gtgtgttctg ctggatcacc 60
tgcgcccttc tcccactgct ggccccgtca ccggccaatg cggctaccga tgcccagagc 120
tgcgtcagcc agctggtgtt cgaccccacc agcggcggct tcctgccggt gaataacttc 180
ggcaccgagc aggactttct caattgtttc ggctggcagc tgttcatcgc catgaactgg 240
cccgtcaacc ctggctggcc ggccaacgcg agcctggccg gcgagccgga cacccaaagc 300
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tgggccagct ataaggatgc cagcgagatc ttcctgcctg gtgcgcccaa accctctggc 420
tggggcttgg aaaccctggt gccgtccaat tgcaccgcca gcggcaacct caaggcctat 480
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cgtttccacc tgtccagcgg cacccaggtg accctgccgg actcgatcat ggaagcctcc 600
ggcggctggc tgacggacca gtcgggcaac ctggtgtttt tcgagcgcaa ggtcggcaaa 660
gccgagttcg actacatcgt cgataacggg ctgtacgacg ctgccaacca attgatcgtg 720
gcgcagaaca gcgacaaccg gcaccccgcc gggctgtcct tgcccgccgg caaactggtg 780
cgtgaactgc cagcccaggc actgccccaa gaggaattgg gcgccctgga gctgaaggcg 840
gcctggcgcg tactcaccaa caagcccgaa ttgtacgggc gctacctgac caccgtcgcg 900
tggctgcaac gcccggacac gctgcagtgc acccaggaag tggtgggcct ggtgggcctg 960
catatcatca acaagaccca gacccagccg aacttcatct ggaccacctt cgagcaggtc 1020
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caggacctgc aggccttgaa tacggctgta cagcaaacct tcgcccagaa aacccagggc 1260
cagtcggtgt tccagtacta caaactggtg aatgtgctgt ggtccaagac gcccaatgcg 1320
cccaacgatc caggccctgg gcccaacgtg aaaacgccgc tgtcctacgg gccgtttgtc 1380
agcgaccaga gcgtcgtcgt cgccaatacc acgatggaaa cctacgtgca ggcagacaac 1440
tgcaacgact gtcaccagta cgcggcgatt gccggcaagt cgggcctggc atcagacttt 1500
tcgttcctgt tcggcaatgc cgattcggcg aagaacaccc gcctgatcaa acgcatcgag 1560
gggttcaaga ccctcaagga tgatcaatag 1590
<210> 146
<211> 1734
<212> DNA
<213> 平凡假单孢菌
<400> 146
atgagcacgc ccttcaccca attcacctcc cctgccgaac aagcgcccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaggacca gctatcgacc ttcgaaacca attggaacaa caacgtcacc 120
ggctggaccc aaatgtcggt catcggcaac ccctggtcga acctcaatga cgcaccgcgt 180
tcgggctact acaacccgct ggaaagcggc tacggcacgc agacaccgct gaccattacc 240
tggcagccct tccccaatcg actgtggacg tttttctaca acaatggcgc cgccgtggtt 300
ccgcaactgg gcggcacggc catgaccctg gaccaggtga tgcagttgac cgatcacggc 360
cagatcaccc ttaacaacac gctttattcg ctgtacccgg acccggcggc aacccaactg 420
cagatcccca aagtgttgtg caagtccatc aactggcacg gcccctatgc cgatttttcg 480
ccctcgggtc cacggggctg gctggatgag tattgcgagt ggtccatcac ccgcgacccc 540
gacggcaaca tgcgcagcat catgttcacc agcgagaacc cggcctactt cctgaccatg 600
tggaacatcg acccaaatgc cgtgctgggg ctgtaccagg cgtacgtcga cccgcaggtg 660
aaactcgaag acctgtacct gcgctacacc gccaacggcc cgaccggcaa tgccggtgac 720
ccggtgatcg atgaaaccac cgggcggccc gcctatgaca ccgtcaacaa atggaacgcc 780
ggcaccgtgc gtataccggg cgtctcaggc ggcgcgatgc acctgacctc cgggcccaac 840
accctgagtg ccgagatcta cctggcggcc gcggctacca tccttcggcc gatccaaagc 900
agcggcaacc aacagaacct gatctgttgc gctcaatacg ggcagaacta tcgcaactcc 960
gacccgcata tcggcttttc cgccaaccag gctgcggtta aaaacctgat ctcgttgacc 1020
aatcccatcg gcctgtacct gcaacagccg aaatccttca gcacctggaa aggccctcaa 1080
ggccaggatg tgagcagcta ctggcgcgtc acccgtggca ctgccggcac cggcccgaac 1140
aactccgacc agatcttgca ggcggtgttc gaggtgccgc aaagcgcggg gttctcgatc 1200
aatgacatca ccatcaacgg cacaccgatc gactacgtgt gggtgattgc caacgaattg 1260
aatgtcgcct tgagcgtgac gccagcaccg ttgaccgcca cgcccaagga atgcgattgc 1320
gtggccgcca ataacaccga tgcccaaccc tggcccgtgc aactgctgcc attggacctg 1380
ttctacggcc agtcacccag tgacttgccg gccagttttg cacccggcag ctcagctcag 1440
ttcgtgctgg tggtgcaagg ggcagacccg aacaccaccg tggcggatgc gcgggtgcag 1500
ttttccaacc cggggatcag cgcccaggtc acgcagttct tgccggatgc ctcggcgatt 1560
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aacgctgcgc cggggctggt cagcgtgcgg gcgctgaacc ccagcgaagc cgccaacccc 1680
agcgcggccc aacacccatg ggaaagcggc cttgcgctgg tgccaggcgc ctga 1734
<210> 147
<211> 1587
<212> DNA
<213> 平凡假单孢菌
<400> 147
atgtacggat ggcctcgccc gctgtgtcgg gctcgcttga atgttttctc gttactggcc 60
ggcgccctgc tgtcactggt ggcgccgcca ccggccagcg cttcggacgc gcagacctgc 120
gtccagcaac tggtgttcga ccccgcaagt gggggcttcc tgccggtgaa caatttcggc 180
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gtcaatcccg gctggccggc cgacccgacc ctggcgggcg agccagacac gcaaagcagc 300
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ggctggctga cggaccagtc gggcaacctg gtgtttttcg agcgcaaggt cggcaaggcc 660
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gagctgccgg ccaaggcgct gccccaggaa gagttgggcg ccctggaact caaggcggcc 840
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<210> 148
<211> 1734
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种R81
<400> 148
atgagcacgc ccttcaccca attcacctcg cctgccgagc aagcccccaa ggactacaac 60
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ggctggaccc agatgtcggt gatcggcaac ccctggtcca acctcaatga cgcaccgcgt 180
tcgggctatt acaacccgct ggacagcgga tacggcacgc agacgccagt gaccatcacc 240
tggcagccct tccccaaccg gctgtggacg tttttctaca acgacggcgc cgccgtggtc 300
ccacaattgg gcggcaaggc catgaccctt gaccaggtga tgcagttgac cgaccacggt 360
cagatcacgc tcaacaacac cctgtattcg ctgtacccgg acccgaaagc gacccagctg 420
cagatcccca gcgtgctgtg caagtccatc aactggaacg gcccctacgc tgacttttca 480
ccctcgggcc cacggggctg gctggatgaa tattgcgagt ggtcgatcac ccgcgacccc 540
gacggcaaca tgcgcagcat catgttcacc agcgagaacc cggcctattt cctgaccatg 600
tggaacatcg acccgcaggc cgtgctcggg ctgtacaaag cgtacgtcga cccgcaagtg 660
aagatcgaag acctgtacct gcgctacacc gccaacggcc cgaccggcaa ggccggcgag 720
ccggtgcttg acccgaccac cggccagccc gcctacgaca ccgtgaacaa atggaacagc 780
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accttgagtg ccgagatcta cctcgcggcc gcggccacca tcctgcggcc gatcaagagc 900
agcgccaacc aacagagcct gatctgctgc gcccaatacg ggcagaacta ccgcaactcc 960
gatccgcata tcggtttctc cgctaaccag gaagccgtca aagccctgat ttcactgacc 1020
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ggccaggatg tcagcagcta ctggcatgtc acccgaggca ctgctggcac cgggccgaac 1140
aagtccgacc agatcctgca agccgtcttc gaggtgcccc aaagcgcggg gttctcgatc 1200
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aacgcggtgc cggggctggt cagcgtgcgc gcgcttaacc ccagcgaagc cgccaacccc 1680
agcgccaccc agcacccgtg ggaaagcggc ctggcgctgg tgcctggcgt ctga 1734
<210> 149
<211> 1587
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种R81
<400> 149
atgaacaaat ggcttcgccc gctgcgtcgg gcacgcttga gtgtgttgtg ctggataccc 60
tgcgcccttc tccccctcgc ccccgcaccg gccattgcgg cctcggacgc ccagagctgc 120
gtcagtcaac tggtgttcga tcccaccagc ggcggcttcc tgccggtcaa caactttggc 180
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gtcaatcccg gctggccagc cgacccgagc ctggccggtg agccggacac gcaaagcacc 300
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gccagctaca aggatgccag cgagatcttc ctgcccggcg cccccaaacc ctcgggttgg 420
ggcgtggaaa ccctggtgcc gtccaattgc accgccaccg gcaacctcaa ggcgtttgcc 480
acgggcgcgc gtaaattcat ggcggccacg tctgaaagcg cgatcaaccg caagcaccgt 540
ttccatttgt ccagcggcac ccaggtgacc ttgccggact cgatcatgga ggcttccggt 600
ggctggctta cggaccagtc gggcaacctg gtgtttttcg agcgcaaggt cggcaaggcc 660
gagttcgatt acatcgtcga taacgggctg tacgacgccg ccaaccaact gatcgtggcg 720
cagaacagcg acaaccggca ccccgccggc ctgtcattgc ccgccggcaa actggtgcgc 780
gagctgccgg ccaaagctct gccccaggaa gaactcggcg ccctggaact caaggcggcc 840
tggcgcgtac tcaccaacaa accccagctg tacgggcgtt atctgaccac cgtcgcctgg 900
ctgcagcgcc ccgacacgct gcagtgcacc caggaagtgg tggggctggt gggcttgcac 960
atcatcaaca agacccagac tcagccgaac ttcatctgga ccaccttcga gcaggtcgac 1020
aacgtgccgg acaacggcac ggctgcgccc gagggctaca gtttcaacaa cccgacctgc 1080
accggtgatg cctgcacgcc caacgtcgca cgggtgcaat gcgatgccac ccacacgccg 1140
cccgactgca cgccccttga tcagccggtg caggccacgc gggtcaatgc cacgccccag 1200
gacctgcaga tgctgaacac cgctgtgcag cagaccttcg cccaaaagac ccagggccaa 1260
tcggtgttcc agtactacaa actggtgaat gtgctgtggt ccaaaacgcc taacgcgccc 1320
aacgatccgg gccctgggcc caacgtgaag gtgccgctgt cctatggacc gtttgtcagc 1380
gaccagagtg tcgtcgtcgc caacaccacc ctcgaaacct acgtgcaaaa caagaactgc 1440
aacgactgcc accagtacgc ggcgattgcc ggcacctccc aactgacatc ggacttctcc 1500
ttcctgtttg gtaatgccga ttcggcgaag aacgcgcgcc tgatcaaacg catcgaggcg 1560
ttcaagaccc tcaaggacag cccgtaa 1587
<210> 150
<211> 1734
<212> DNA
<213> 黎巴嫩假单孢菌
<400> 150
atgagcacgc ccttcaccca attcacctcc ccggccgaac aagcccccaa ggactacaac 60
aagctaggcc tggaaaacca gttgccgacc ttcgaaaccg actggaacaa caacgtcacc 120
ggctggaccc agatgtcggt gatcggcaac ccctggtcca acctcaacga cgcaccacgc 180
tcgggctact acaacccgat cgaaagcggc tacggcacac agacgccagt gaccatcacc 240
tggcagccct tccccaaccg gctgtggacg tttttctata acaatggcgc cgccgtggtc 300
ccgcaactgg gtggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tgcagttgac cgatcacggc 360
cagatcaccc tcaacaacac cctgtattcg ctctacccgg acccgaaggc gacccaactg 420
cagatcccca gcgtgctgtg caagtccatc aactggaacg gcccctacgc cgacttttca 480
ccttcgggcc caaggggctg gctggatgaa tactgcgagt ggtcgatcac ccgcgacccc 540
gacggcaaca tgcgcagcat catgttcacc agcgagaacc cggcgtattt cctgaccatg 600
tggaacatcg acccgcaggc cgtgctgggg ctgtacaaag cctatgtcga cccacaagtg 660
aagatcgaag acctgtacct gcgctacacc gccaacggcc cgaccggcaa ggccggtgac 720
ccggtgcttg accccaccac cggccagccc gcctacgaca ccgtgaacaa atggaattcc 780
ggcaccgtgc gtattcccgg cgtatcgggc ggcgcgatgc acctgacctc cggccccaat 840
accttgagtg ccgaaatcta cctggcagcg gcggcgacta tcttgcgccc gctcaacagc 900
agccgtaacc agcaaagcct gatctgctgc gcccagtacg ggcagaacta ccgcaactcc 960
gatccgcata tcggttattc cgccaaccag gaagccgtga aagccctgat ttccttgacc 1020
aaccccatcg gcctgtacct gcaacaaccc aagtccttca gcacctggaa aggcccgcaa 1080
ggccaggacg tgagcagcta ctggcgcatc acccgtggca ccgccggcac cgggccgaac 1140
aactccgacc agattctgca ggcggtgttc gaggtgccgg ccagcgcggg gttctcgatc 1200
aatgacatca ccatcaacgg cacgccgatt gactacgtgt gggtgatcgc caacgagctg 1260
aatgtggcct tgagcgtcac cccggcaccg ctcagcggca cgcccaagga gtgcgattgc 1320
gtggcggcca acaataccga tgcgcaaccc tggcccgtgc agttgctgcc gattgacctg 1380
ttctacggcc aatcccccag cgacttgccg gccagctttg cgcccggcag ctcaggccag 1440
ttcgtgctgg tggtgcaagg cgccgacccg aacaccacgg cggcggatgc acgggtgcag 1500
ttctccaacc caggcatcac ggcccaggtc acgcagtttc tgccggatgc ttcggcgatt 1560
cctgggcaga ccgacagcgg cggcacccag ggctacatca tgaccgtcac cgtcagcagc 1620
aacgcggcgc cggggctggt cagcgtgcgc gcgctgaacc ccagcgaagc cgccaacccc 1680
agcgccaccc agcacccatg ggaaagtggc ctggcgctgg tgcccgtcgc ctga 1734
<210> 151
<211> 1587
<212> DNA
<213> 黎巴嫩假单孢菌
<400> 151
atgaacggat ggcttcgccc gctgcgccgg gcacgcttga atgtgttgtg ctggatcacc 60
tgcgcccttc tccccttcgc acccgcaccg gtcagcgcgg cgtcagatgc ccagagctgc 120
gtcagtcagt tggtgttcga ccccaccagc ggcggcttcc tgccggtgaa caacttcggc 180
accgagcagg actttctcaa ctgtttcggc tggcagttgt tcatcgccat gaactggccg 240
gtcaaccccg gctggccagc caacccgagc ctggccgggg agccggacac gcaaagcacc 300
gcggcccagt tcggcgtgcc gccaacgccc ggccagccca tgagcaatgc cccggtgtgg 360
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ggcgtggaaa cccgggtgcc gtccaattgc accgccaccg gcaacctcaa ggcgttttcc 480
acgggcgcgc gtaaattcat cacggccact tccgaaagcg cgatcaaccg caaacaccgc 540
ttccacttgt ccagcggcac ccaggtgacc ttgccggatt cgatcatgga ggcttccggc 600
ggctggctca cggaccagtc gggcaacctg gtgtttttcg agcgcaaggt cggcaaggcc 660
gagttcgact acatcgtcga caacgggctg tacgacgccg ccaaccaact gatcgtggcg 720
cagaacagcg acaaccggca cccggccggc ctgtcactgc cggccggcaa actggtgcgc 780
gagctgccgg cccaggcgct gccccaggaa gaactcggcg ccctggaact caaggcggcc 840
tggcgcgtac tcaccaacaa acccgagctg tacgggcgtt acctgaccac cgtcgcctgg 900
ctgcaacgcc cggatacgct gcaatgcacc caggaagtgg tgggcctggt gggcctgcac 960
atcatcaaca agacccagac ccagccgaac ttcatctgga ccaccttcga gcaggtcgac 1020
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cccaactgca cgccccttga tcagccggtg caggccacgc gggtcaatgc cacgcctcag 1200
gacatgcaag cgctgaacac ggcggtgcag cagactttcg cgcagaagac ccagggccag 1260
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gaccagagtg tcgtcgtcgc caacaccacg atggaaacct atgtgcagag cgacaactgc 1440
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ttcaagaccc tcaaggacaa tccgtag 1587
<210> 152
<211> 1731
<212> DNA
<213> 铁角蕨假单孢菌
<400> 152
atgagcatcc cgttcacacg attcagccca cccgccaatc aggctcagaa ggactaccag 60
aaactgggcc tggaacagca acaagcgcaa ttcgataccg actggagcaa caatctagca 120
ggctggaccg aagcagcaat cattggcaac ccatggaccg gcctgaacga cgcaccgcgc 180
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tggacgccgt tccccaatcg actgattacc tacctcacgc aagccgactc ggcaaaaaac 300
ccacaactgg gtggcaagcc actgaccatg gaccaggtca tgcaactggc cgataccggc 360
gaaatcgata tcaatggtac cccgctcaaa ctctacgacc cgctaggcag caacaccctg 420
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tggcgcatcg accccaaggc ggtgttaggc ctgtaccgaa tgtacatcga ctcggccgtg 660
cagttggaag acctgtacct gcgctacccg gtcgaccagc cgaccggcaa gcagggcgaa 720
ccggtgatcg accctaccac tgggctgccc gcatacgacg tgaccaacaa gtggaactcg 780
ggtaccgcgc gcaagcccgg cctgtttgga ggtgccctgc accttacttc cgcccccaac 840
accctcagcg ccgagatcta cctggcgggt gcttcgacca tccagcgctc ggataagagt 900
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gacccgcaca tcggctacgt cgccaacggg atagcctacg gcaaccgcat ttccctgacc 1020
gacccagtcg gtctgtacct gcaacagccc aagaacttca gcaaatggaa agacccgcag 1080
ggcaatagcg tcagccagta ctggcagatc acccgtggca ccgccggaac cgggccactg 1140
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gataccgatc acccatgggc cagttcactg gcgatcgtgc cagcgcttta g 1731
<210> 153
<211> 1557
<212> DNA
<213> 铁角蕨假单孢菌
<400> 153
atgttctcac tcgattgttc ccgggggaat ggccggttct gcctgcctcc cttgttactg 60
atcatttggc tgctcggcag cctggtcgcc cgaaacgcct atgcgctatc cgaccccgaa 120
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cccgatacca aaagcccggc cgcccagttc ggtgtgccga cgatagcgga ccagcccatg 360
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gccattccta ccgcctgggg catgcagccc cctgagccgg tcggctgcca gacaaaaccc 480
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ctgttcgaga gtgccgactc gtccaagata ccgacactga tcaagaagat gccctag 1557
<210> 154
<211> 1743
<212> DNA
<213> 厦门海旋菌
<400> 154
atgagcacac cctttgccag atttacgtcg cccgcccatc aggcacccaa ggattacaaa 60
aagcttggta tggaaaacga actgtcggct tttgaaaccg attggaacaa taatgttgcc 120
ggttggaccg agatggcgat cattggtgat ccgtggtcga acctgaatga tgcaccacgg 180
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aaaatcccgg ccaaacggtg tccggagatc gactggaccg gggaatacgt tgatttctcg 480
ccatccggcc cacgtggctg gcttgatgaa tattgtgaat ggtcgattac ctatgatgcg 540
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gatcctgtca tggatccgac caccggacgt ccggcctatg acgtgaccaa caagtggaac 780
cgcggcacgg tgcgggttcc cggccagtcg ggcggggcgc tgcatctgac gtcaggcccc 840
aatacgctga gtgctgaaat ttaccttgcc gcggcggcaa ccattcagcg tccggattta 900
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gccaatccat cggatgctga tcatccgtgg gaaagtggtt tggcggttat tcccagtcat 1740
taa 1743
<210> 155
<211> 1620
<212> DNA
<213> 厦门海旋菌
<400> 155
atgaaccgat tacatttggg ggcaggctgt gtgattgcgg ggttttgtat cctggcgatt 60
gcgggacttc tttgggtgat tgatgttccg gctggcaggg cggatgaaat caatatcagc 120
cgggtgacgg aaatagccca atcggcacag caatgcccgg atcaactggt tttcgatccg 180
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tcggcgaaaa acccgtcact ggtggaagag gtaaaacaat tcatggagca ggcacaatga 1620
<210> 156
<211> 1734
<212> DNA
<213> 脱氮副球菌
<400> 156
atgaccatat tcacggaatt ttcgaccccc gcacagcagg gcccgaagga ttaccagctt 60
ctcggcctgc cagccgccga tctggccgcg ttcgaggcgg actggagcgc gaatatcgcc 120
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gacaactact atgatccgct ggtcgagggg atgggcgagg ccacggcggc cgtcatcagc 240
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acgctgtcgg cagagatcta tcttgccgcc gccgcgacga tccagcgccc ctcctcggtc 900
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<210> 157
<211> 1509
<212> DNA
<213> 脱氮副球菌
<400> 157
atgcgcacag gtcagatcct catcgcactg gtcgcaggcg tcatgcttgc ctttgccgca 60
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gacgaaatcg aagaggctac gggtggctgg ctgaccgatc agaagggcaa gctggtgttt 600
ttcgaacgga tgatcggcaa ggccgaatac gactatatcg tcgcgaaggg cctgtatgac 660
gcggccaacc agttgaaagt ggcgaccaat gccgacggag ccacccccga aggcctgtcc 720
ctgcccaaag gcacgccacc gggatcggcc gttcagaacc aggatgagct tggcgccttc 780
gagctgaagg ccgcctggcg gaacctgacc gggctggatg acctttatgg ccgctatctg 840
acctccacgg tctatctgct gtatcccgac ggctcttgcg aaaaggctgt cgtcgggctg 900
gtcggtctcc atatcattca caagaccgcc tccatgccag atttcgtctg gtccaccttc 960
gagcagatcg acaatgttcc gggcgcgtcc gcgccggaag tggatttcag tttcaacaac 1020
ccggcctcga atgcgaagcc gaaccagatg ccgcactgtg tgaatggtgt ctgcgactat 1080
tccctcccca tccaggtcac gcgcgaagtc gcgatcccgg ccggtgtggc gcagaccaac 1140
cgcgacgtgc agcagttgct tgcggaccgg acggggggca agtcggtgtt ccagtactac 1200
cagctcgtga acgtgctgtg ggacggcgca ccgaccccgc cgtcaccgga acccggcgcg 1260
aatgcccagg ttccgctggt ctatggcacc ttccagacgg atggcagcgt gccggtcgcc 1320
aatacgacga tggagaccta tgcgcagcaa ttcacccccg gtctggggcc gtcctgcacc 1380
gcctgccaca agggcgccac catcgccaac agcgcaacgc tggcgtcgga tttttccttc 1440
ctgttctcga ccgcgtccag cgccacgaaa ctgccgggcc tgttcatatc ccgcgacttt 1500
gttccatga 1509
<210> 158
<211> 1743
<212> DNA
<213> 纤维弧菌
<400> 158
atgtcagcgt ttacattttc cactcctgca ttaattcagg atttcagcga caacccctcc 60
ctgcagcagc aactcaacca aaattgggat ttggcaattg atgcgtatac ccaggctgcc 120
ctggttagca atccctggac tgtggattac caggctccct gcgattggta tgtgaatccc 180
aaacaggcgg atattaccgc agctaatccg gttgaaccta ttttttggac ggcttttccc 240
aaccgcttga aaatttattt ttcggcggct gaaaaaagtc cttatcaaat ggcgaatgcg 300
caggtttttg cgctggcgga ttttggcaat gttccgcaat cgaaggcgtt tcccacaggt 360
ttgccgttta ttattcccag caagcgctgc cctaatttga attggcagca gtcgattgct 420
gagtgggtac agtacgatcc taaagggccg cgcggttggt tggatgaata ttgtgagtgg 480
tccgtgacgc gcaatgccga tggaaaaatt accaagattg cgtttacctg cgagaatccg 540
gagtactggt ttaccctgtg gcaggtttca ccggaaaaag tattggcgct ttaccagcaa 600
ttggtgagcc cgaatgtggt gctggaggat ttgcaattgc catcagccga tggcaaggga 660
tttgttatcg atccgacaac agggcgccct gcctataacc ccttgaataa atggaattcc 720
ggtacggtgg cgacagaaac ctatggcggt gctgtgcatc tcaccagccc accgaacacc 780
atcggtgcgg aaattatgtt ggcggcacag gcaaccctgt tgcgcgattt gccgccggac 840
cagtacaaca tgcagcgtat ggtatgcgcc ggtgcctatg gacgcgctta tcgcaacagt 900
gatccgcata tcggtttgca ggcaaaccag ttggtgaaaa acctgggtgt gaaaatcacc 960
ttaaccaacc cggtgggttt gtatttgcag cgcccggatt tcagcagcta taagacaccc 1020
gatggtaagg atgccggcca attctataag gtcattcgcg gtcgcaccgc ccaacaggca 1080
ggtacgactt acgaccagat attgcatgcg gaattttcag taccggaaga actgggttat 1140
accgtcagtg atattttgat tggcaacgcc gtgcccggca gttcccaggt gcctgtgccg 1200
attctctatg cgggtcaaat tgcagaaaca ttccatgtat gcctggcggg aacagcgatt 1260
gcccccgcta caggtgaacc ttcgcaagca tttttaccac cggtgactga taaaaccggt 1320
aataccaacg gccaggtgag catgctgttg gcaaacccgg tattgctggc catgcaggca 1380
gtgaacccct ttcccccgtt tgtgcaattg ccggtacaaa ttgcccaggg tcaaacactc 1440
accaatatgg ctttgcaggt cagttacgcc aatgacaatt tccaggaggc gcaaattgca 1500
ttctgggatg cacagggcaa tagcgagccg ggcatcagtg tgacagtaac ggccatagag 1560
actgctgatg ggacaccggc gggaaaaagc gccggtggtg atggactgtt taattacatt 1620
atcagcatca gtgtcgcgcc gggggtaagt cccggcttta aaggtgtgac ggtgcgcaac 1680
cccgcatgtg atatgccctt gccgttgccg ggtgtgttgt ttgtgactgc aaaaggaaac 1740
taa 1743
<210> 159
<211> 1521
<212> DNA
<213> 纤维弧菌
<400> 159
atgaagcata cattactgat aggggttacc accggtttgc tggtggctgc ctgccagcaa 60
ccggtacagg agtcatccgc agcggttgac gctcccgccg tgagcacggt gtccagcagc 120
agtgcgccaa tcagctttcc ctgcctgaat aaaccggcgg ttaattacaa cacaccgggg 180
gatacaccca tcacttcgca agatggtgtg aattgttttg cctggcaaac gtttattggc 240
ctgaactggc cggtcgatgc cagccatccg ggtgagccgg ataagacggc gtctgcgtct 300
gtgtttggtg agccgggttt gcaccaaacc tcggtgtggg aaacctatgc caatagcaag 360
agtgtatttc gtgcaaacgc ccaaccaccc ctgccctggg gacatacgcc cgatgtgcca 420
tccagctgtc aaaaaatatc ccagacactg ggcttgcgcg ttatgcaggc gagccgcatg 480
ccgggcagtt ttaatatgag taaggaggcc tcgcaggcat ttcccggcaa caatcccaat 540
tggctggcgg ataagagtgg caacctggtg tattacgaaa tcctgattgg caaggacgag 600
tacgattaca tcaataataa tggtttgtat aacgccaata cccaggctgc ccatatccag 660
cagaacaaga atattgccat gcccctgggc cacgacaagg tgctgggtgg gttggagatt 720
aaagcggcct ggctgagcgt gagcgatcca caaaatccca agtggaaaaa ttacaagctc 780
agtaccagtg tgatttacga tccggtttcc aaggattgcc acgcgagcac gattgcgtta 840
gtgggcatgc acattatccg caagaccgca tcgcaaccgc agtggatctg ggccacgttt 900
gagcacaagg acaatgcgcc ggatactgcc agtattaaaa gtgatggcac ggtggatggc 960
gattacacct tctatagcaa cagctgcacg gtcaaaccgg tgccggcggg ttgcaaggcc 1020
aaggttgaaa atggcacatc ggttacccaa acctcctgcc acgtgaatgt atcgcccgcg 1080
tattatctgg atactagcgg caactgtccg gcctatccca tccaggtgag ccgcgatttt 1140
gcgatcaagg attccaccga taaccacgtg gcctcgctca accgcgcagt acaacaactg 1200
attgccagca gcaatgccga ttcggtgtat acccattacc agctggtgaa tgtgctctgg 1260
tcatcggcgg cggtgaatga caatgcacca ccgggcaatc cgccgctgac gcccttatcg 1320
atcagcggtg aaacgccatc gctcaatacc gtgccggttg ccaataccat gctggaaacc 1380
tacgcacagg gttttaactg tttgtcctgc catgcctatg ccagtgtcgc gcgcgatgcc 1440
agggcacagc tgggcggtaa ggcttacgca acggattaca gttttatttt tagttttgcg 1500
acgtcacccg ctgccaaata g 1521
<210> 160
<211> 771
<212> DNA
<213> 布式假单孢菌
<400> 160
atgggttcca ttactgatca taatcaactg ctggcctggg tagcatcctt ggatattccc 60
gaagcttccg gagtaaaaac ccgttcgcgt aatgtggttg cgcgtgctaa tgccgaggac 120
gaaggcgcgg cagtagtacg cggtagtatt acttcgtttg tgaccggcct gagtcaacaa 180
gcgcgtgatg acgtgcaaaa cagcacgttg ttgatgcagt tggctgcgga taaaaaattc 240
aatccggaaa aacaacggga agagtggttc aagttctata ccgatggcct tgctaacctg 300
ggctgggggc gtgttagctc gtattatcag agctatcagc cgcgtaatac caatgtcacc 360
atggaccagg tcgtacttga ggtgattgct gcagtcgtgg gcgctgacag cgctgtgtac 420
aaggtgactg aaaaaacctt ctcgtcactc caagacaatc cgaagaacca ggccccgctg 480
aaactgttcg acagtagcag cactcgggac agcgtgggca cgttccagat actcccagtg 540
atgcaggata gggacggaaa cgtggtaatg gtactgacta ccgtcaacgc cagtaccacg 600
gtacagcgag gcagcttcct gttctggagt tggagcaaga ccaccgcgtg gatgtatcgg 660
gctgcacagc agactgtgct caatgagtcg gtatatgcga ctgttcgcca atctgtcatc 720
aagaagctgg gcaaaaacgc cgaagaattc atcgatgatc tggaaattta a 771
<210> 161
<211> 783
<212> DNA
<213> 布式假单孢菌
<400> 161
atgaaattgt ctgccgacga agtttatgtg atttcgggta acttgctatc cgcgacgcct 60
tcgctcaccg atcctacggt acttgaagat atcgccaatt caaacctttt gtgccagttg 120
gcagccgata agaatcaagg cacgcggttt atcgatccag ctgcgtggct ggacttctat 180
cgaagctcac taggtaggtt gttctggcgc atcagtaatt caggcacggt tagttatgct 240
ataccgcaac tcgtgcataa aattaccgtg aaagaagttt tggaaaaaac gttctacaag 300
actctggatc gcccccagcg catccgggtt gaagaaagta ttgaattgtt gggtgagcaa 360
tcagccgata gcccgtcggc gacattgtac agcctcaaga cccaggtcaa tttcaatgag 420
acgacatcat ctccaggtct cttgccccac tctatatcgt ccgttaactt gcaactcagt 480
gtggtgcaca gtgagacgtg catttcggtg tgcagtgttt acttcaaaac gtcgacccgg 540
atcggtgatg atgtattcaa tcagaagttc ccggtaaaag aactgctggg caatgttagt 600
gtgagtacgt tcgaagccaa gctgctggaa tcgagttatg ccggcataag gcagagcatc 660
atcgataagt tgggtgagga caatattcgc gagaacattc tgcttgtccc cgccgtttca 720
ccgtcgttgt ccaacacgcg ccacgcgggg gcgctgcagt tcgtgcagga actggatatt 780
tag 783
<210> 162
<211> 783
<212> DNA
<213> 盖氏假单孢菌
<400> 162
atgaaattgt ctaccgacga agtttatgtg atttcgggta acttgctttc cgcgacgcct 60
tcgctcaccg atcctgcggt acttgaagat atcgccaatt caaacctttt gtgccagttg 120
gcagccgata agaatcaagg cacgcggttt atcgacccag ctgcgtggct ggacttctat 180
agaaactcac taggtaagtt gttctggcga atcagtaatt caggcacggt tagttatgct 240
ataccgcaac tcgtgcataa aattaccgtg aaagaagttc tggaaaaaac gttctacaag 300
aatctggacc gcccccagcg catccgggtt gaagatagta ttgaattatt gggtgagcaa 360
tcagtcgaca gtccgtcggc gacattgtac agcctcaaga cccaggtcaa tttcaatgag 420
acgacatcat ctccaggtct cttgccccac tctgtatcgt ccgttaactt gcaactcagt 480
gtggtgcaca gtgagacgtg catttcggtg tgcagtgttt acttcaaaac gtcgacccgg 540
atcggtgatg atgtattcaa tcagaagttc ccggtaaaag aactgctggg caatgttagt 600
gtgagtacgt tcgaagccaa gctgctggaa tcgagttatg ccagcataag gcagagcatc 660
atcgataagt tgggtgagga caatattcgc gagaacattc tgcttgtccc cgccgtttca 720
ccgtcgttgt ccaactcgcg ccacgcgggg gcgcggcagt tcgtgcagga actggatatt 780
tag 783
<210> 163
<211> 783
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 163
atggggtcaa ttactgatca tggaaaactg ttggcttggg tcgagtcgct ggatgtaccc 60
aagtcgaccg gcaatgccaa cctcaagcgc gcttcggctg tgctgcgcag tgccgcgcag 120
aacagtgatg aagatggcgc cgcagtcgtg cgcggcagta tcacttcgtt tgtgaccggc 180
ctgacgcccc aggcacggga tgacgtgcaa aacagcacgt tgttgatgca attggcggcg 240
gacaagaaat acaacccgga tacacaacgg gaagagtggt tcaagttcta caccgatggt 300
ttggccaacc tgggttgggg acgtgtgtct tcggcgtacc agaaatacaa gccgaccaac 360
accaatgcca ccatggacca ggttgtgctt gaaatcatca gctccgtggt cagcccggaa 420
agcgcgctgt acaaggtgac tgaaaaaacc ttcctggcac tcaagaacaa cccgaacaac 480
aaagatgcgc tgaagctgtt cgatgtcagc agcacccgca acgacctggg caccttccag 540
atcttgccgg tgatgcagga caaggacggc aacgtggtca cggtgctgac ctgcatcaac 600
gcccataccg aggtacaaaa gggtagcttc ctgttctggc actggagctc gaccagtgcg 660
gaaatgtacc gcgccgcgca acaagttgta ctcaatcaga atgtgtacgc caccgtgcgc 720
cagtcggtat tgaagaagct tgggaaaaat gccgaagact tcattgatgg tctggacatc 780
taa 783
<210> 164
<211> 780
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 164
atgagtttta ctgcccctga agttcatgtg gtttcaggca acctgatatc ggcgatgccg 60
tcggtcaaca gccctcaggt acttgaagat attcttgaat cgaatttgtt gtgccagatg 120
gcggcggata aaagtttggg ttcgcgattc aataatccgg ctgcctggct ggatttttat 180
cgcaactcgc tgggcaagct gttctggaaa atcaccaact tcaacacggt cagttatccc 240
gtgccgtcac ctacgcgttc cgtgagcgtc atgggcatac tggagcacac tttcttcaag 300
gtgttggcgc agccacttcg tcatcagata gaagcggata tcgagttgct gatggagctg 360
ccgctgacga gcccagcatc gcagctatac acctcaaaga cccatgtgga aatgagcacg 420
cgtgcgcgct caagttttga tgggcgctct gagtcggtga tcagcctgca aatcagcgtt 480
gtccacagcg ggtcgctgat ttcggtgtgc agtgtctact tcaagaccgc agagccggtg 540
gcagctgatg tgttcagtca gaagttcaag gtgagggatt tgctgggcaa catcagcgtc 600
aactcgttcg aggctgattt gttggagggt agttacgaag gcgttcgaca gcaaatcaag 660
acgaagctgg gtgaagccaa tatccgcgag aatatcctgt tgatcgctga caaccccatc 720
ccggtggacg aattgcccca cgcaaatgcc catcagtttc tcaaagggtt ggatatctga 780
<210> 165
<211> 768
<212> DNA
<213> 粪产碱菌
<400> 165
atgagcacga ttactgacca caagcaggta ttggcatgga ttaacgccct ggacattccc 60
gacgccccgg ccggcggcaa ccgtgtagcc gcacgagcga ccagcagtgc cgacgaagat 120
ggtgccgtcg ttgccaaagc cagcatccct tgctttgtca gcggactgac cgaacaatcc 180
cgcgccgacg tgcaaaacag caccttgttg atgcaactgg ccgctgacaa gaaatacccc 240
aacgaaaatg atcgcgaaaa atggttcaag ttttactccg atgggctgac caacctgggc 300
tggggtagca gcagcagctt ctttgaacgc ttccaaccca agaatacgga cgtcaccatg 360
gaccaggtcg tactggaggt gatactgaca gtggttaaca acgtcaataa tccgctatac 420
aaaatcgccc aggaaacatt cggcgccttg aacaagcctg ccaatcaaaa gcccatgaag 480
ctgtttgacc acagcagcac caaagaagac cgcggcaaat tccagattct gcctgctggc 540
caggaccagc acggcaccgt cagcatggtg ctgaccgcca tcaatgcacg gaccgacatc 600
caatccggca gcttcctgtt ctggaaatgg agcaaatcca ccgcttggct ctaccgcgca 660
gccaacctga ttgtgctcaa tgaatcggtg tactcgaagg tacgccaggc agtcatcgac 720
aagctcggcg ataacgctgt gaactttgtg ctggatctgg atatttaa 768
<210> 166
<211> 807
<212> DNA
<213> 粪产碱菌
<400> 166
atggcttttt ctactgagca aacctatgtg gtgtcaggca atctgatttc tgccaccaca 60
gaagacacca atacgctgag ctatgaagac tttatccatt ccaacctttt ggcccagatg 120
ggcgccgaca aaaaactggg ctcccgcttt gttgaccccg caggctggct gagttttttc 180
aagaatacag taggcaatct gttctggaac ctgagcgagc agggaaccag cacgttgaaa 240
atctcagccg gtaccgcaag catcaccgtg cagcaaatac tggagcagag ttttttcaaa 300
cggctcaacc aagcgcaaat cgatagcgcc acggcaagtg ttgatctgtt tagtcaactc 360
tctgaagatg atcctgcctt catcctctat aacgcgaaat cacatgccca gatctctacg 420
gctaccaagg tgatcaagcc accccaaaaa gagacttata gcgtcaactt gcaaatcagc 480
attgcccata cagggtcgga aatcgcactg tgcaatattt tcttccaaac cagccaggca 540
gtcagcgacg aattattcac acagaaattc gcaatcaaag atctgattgg aaacattaat 600
gtgttttatt taaaggctct actctccgag accaattacg gccacatcag gcaacaggtt 660
atcgaaaagc tgggtgagaa catcaacacc aatattgtgc tggtagccga taacagcgat 720
aagccctccc cccccttctc ccacagaggc gcgcagtttc atacgcagcc tgaaaatcta 780
atccagcaac gcacaggccc accatga 807
<210> 167
<211> 768
<212> DNA
<213> 粪产碱菌
<400> 167
atgagcacga ttactgatca caagcaggta ttggcatgga ttaacgccct ggacattccc 60
gacgctccgg ccggcggcaa ccgcgtcgcc gcacgagcaa gcagcagtgc cgacgaagat 120
ggtgccgtcg tcgccaaggc cagcatcccg tgctttgtca gcggactgac cgaacaatcc 180
cgcgccgacg tgcaaaacag caccttgttg atgcaactgg ccgctgacaa gaaatacccc 240
gacgaaaatg atcgggaaaa atggttcaag ttttactccg atgggctgac caacctgggc 300
tggggtagca gcagcagctt ctttgagcgc ttccaaccca agaacacgga cgtcaccatg 360
gaccaggtcg tactggaggt gatattgacg gtcgttaaca acgtcaataa tccgctgtac 420
aaaatcgccc aggaaacatt tggcgccctg aacaagcctg ccaatcaaaa gcccatgaag 480
ctgtttgacc acagcagcac caaagaagac cgcggcaaat tccagattct gcctgcaggc 540
caggaccagc acggcaccgt cagcatggtg ctgaccgcca tcaatgcacg gaccgacatc 600
caatccggca gcttcctgtt ctggaaatgg agcaaatcca ccgcttggct ctatcgcgcc 660
gccaacctga ttgtgctcaa tgaatcggtg tactcgaagg tacgtcaggc agtcatcgac 720
aagctcggcg ataacgccgt gaactttgtg ctggatctgg atatttaa 768
<210> 168
<211> 780
<212> DNA
<213> 粪产碱菌
<400> 168
atggcttttt ctactgagca aacctatgtg gtgtcaggca acctgatttc tgccaccacg 60
aaagatacca atacgctgag ctatgaagac tttattcatt ccaatctttt ggctcagatg 120
ggcgccgata aaaaactggg ttcccgcttt gttgaccccg caggctggct gagttttttc 180
aagaatacag taggcaatct gttctggaac ctgagcgagc aaggaaccag cacgctgaaa 240
atctcagccg gtaccgcaag catcaccgtg ctgcaaatac tggagcagag ttttttcaaa 300
cgactaaacc aagcacaaat cgatagcgcc acggcaagta ttgatctgtt tgatcaactc 360
cctgaagatg atcctgcctt catcctctat aacgtgaaat cacatgccca gatctctgcg 420
gctgccaagg caatcaagcc gccccaaaaa gcgacatata gcgtcaactt gcaaatcagc 480
attgcccata ccgggtctga aattgcactg tgcaacgttt tcttccaaac cagccaagcc 540
gtcagcgatg aactgttcac tcagaaattc gcaatcaaag atctgattgg caacatcaat 600
atcttttatt taaaggctca gctctccgag accaactacg gccaaatcag gcagcaggtt 660
atcgagaagc tgggtgagaa catcaacacc aatattttgc tggtagccga taacagcgaa 720
acgccctccc ctccttctcc tgcagaagcg cgcagtttca tacgcagcct gaaaatctaa 780
<210> 169
<211> 768
<212> DNA
<213> 产碱菌属物种HPC1271
<400> 169
atgagcacga ttactgacca caagcaggta ttggcatgga ttaacgccct ggacattccc 60
gacgccccgg ccggcggcaa ccgtgtaacc gcacgagcga ccagcagtgc cgacgaagat 120
ggtgccgtcg ttgccaaagc cagcatccct tgctttgtca gcggactgac cgaacaatcc 180
cgcgccgacg tgcaaaacag caccttgttg atgcaactgg ccgctgacaa gaaatacccc 240
aacgaaaatg atcgcgaaaa atggttcaag ttttactcgg atgggctgac caacctgggc 300
tggggtagca gcagtagctt ctttgaacgc ttccaaccca agaatacgga cgtcaccatg 360
gaccaggtcg tactggaggt gatactgaca gtggttaaca acgtcaataa tccgctatac 420
aaaatcgccc aggaaacatt cggcgccttg aacaagcctg ccaatcaaaa acccatgaag 480
ctgtttgacc acagcagcac caaagaagac cgcggcaaat tccagattct gcctgctggc 540
caggaccagc acggcaccgt cagcatggtg ctgaccgcca tcaatgcacg gaccgacatc 600
caatccggca gcttcctgtt ctggaaatgg agcaaatcca ccgcttggct ctaccgcgca 660
gccaacctga ttgtgctcaa tgaatcggtg tactcgaaag tacgccaggc agtcatcgac 720
aagctcggcg ataacgccgt gaactttgtg ctggatctgg atatttaa 768
<210> 170
<211> 780
<212> DNA
<213> 产碱菌属物种HPC1271
<400> 170
atggcttttt ctactgagca aacctatgtg gtgtcaggca atctgatttc tgccaccacg 60
gaagacacca atacgctgag ctatgaagac tttatccatt ccaacctttt ggcccagatg 120
ggcgccgata aaaaactggg ctcccgcttt gttgaccccg caggctggct gagttttttc 180
aaaaatacag taggcaatct gttctggaac ctgagcgagc agggaaccag cacgctgaaa 240
atctcagccg gtaccgcaag catcaccgtg ctgcaaatac tggagcagag ttttttcaaa 300
cggctcaacc aagcgcaaat cgatagcgcc acggcaagtg ttgatctgtt tagtcaactc 360
tctgaagatg atcctgcctt catcctctat aacgcgaaat cacatgccca gatctctgcg 420
gctaccaagg tgatcaaacc gccccaaaaa gagacttata gcgtcaactt gcaaatcagt 480
attgcccata cagggtcgga aatcgcactg tgcaatattt tcttccaaac cagccaggca 540
gtcagcgacg aattattcac acagaaattc gcaatcaaaa atctgattgg aaacattaat 600
gtgttttatt taaaggctct actctccgag accaattacg gccacatcag gcaacaagtt 660
atcgaaaagc tgggtgagaa catcaacacc aatattgtgc tggtagccga taacagcgat 720
aagccctccc ccccttcccc cacagaggcg cgcagtttca tacgcagcct gaaaatttaa 780
<210> 171
<211> 783
<212> DNA
<213> 肠杆菌属物种
<400> 171
atgaatacta acgctttgga ttttgtgctt aaaacaccga ttgaaaccac tgccgatctg 60
gcaccgttac tggaacgtct aaagggggta ccggatcatg gtcagtcaaa aagaaaaacc 120
atgctgactg ataataaagt atctgcacaa gtcaatgccg gcagcctcat ctcatttacc 180
gaacgtttgg atgggcagaa taaacaagat gtgcagaact caacactgtt cgctcaactg 240
gcggcggata aacactgcaa ccgttatact gcgcccatgg attggtatcg tttttatgtc 300
aatgtactgg gccaaattgg ctggaaccaa cctgctttcg cgtttgatac ctatacgtca 360
ggtgccagta ccgtaaaact ggatgaggct gtgttgggga tcattgcgca aatcgctact 420
gtcggtgagg ttgcattagt ggcagcggca atgaaggcgt tatccagcct gagcgatacc 480
tcaaagcaaa tgcttatctg ggacgcgaaa tcaaattcgg aaaacaccgg taattttcaa 540
attttcccgg cagatctgtt accaaatggc gatgtggtaa tgatgcttga tggtatgcaa 600
tttgatgcaa agcgcaatga ggggcgtttt ctgtgggtaa cctggcaatc cacctcgatc 660
aaaattcaac gcgcggcaaa taaattcgtc ttaaacgaag gtgtttataa gggggtgcgc 720
caggccgtta ttgataaact gggtgatcgg gcaatcgata tgattgcaaa tattgaaatc 780
tga 783
<210> 172
<211> 777
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 172
atgagttttg aagtgtgtga cagcagcgtg gccgcctgtg tggcgcgtct ggaaagttat 60
gatatctatc cagatatcag tccccgctcg ttgtattcgg gtgatatcga gcctccggcg 120
aaggggtcgg ttgtcggtga aggtatcctg gccttcgccg gtggtctttc ttcgcaacac 180
caggaagatg cgcagcatgc ctttctcttt gcgtccctgg tcgccaacag gcagtaccct 240
ctcgaatccc aggggcgaga gtggtactac aagtttgttg aagtcatgac gaacgccggt 300
tgggtcgcca cgcagcgctt ctacgatgat ctgagcatcg ccggcaacac cgtgcgaatg 360
gacaagctgg tgttggacat cctcgcttcc gtagtgtcgg ggattgccct cggaagcgcg 420
acttcggcgt tgctattgag ggtcgccgac agtgcaatca cggccctgca gaagaaggaa 480
aagaccctga cccttttcga gcgaaacctg ctggaacatg gtgtgggcgg aatggcggcc 540
gggacctgtg ttgaaatcga cggtgaggtc agcatgctgc ttggcactgt gcgctttatc 600
cggcgcaaca gcgcgaccca ggtcttgttt gcagattgga acagtcgcga agtgaagttg 660
tataaaggtg agtcggtttt caggaaagtg ccgagtattg tcgagcgaac ccgaggcatc 720
attattggtc ggctgggtaa tcatgccgtc agcaagatcg aagagtacga aatctaa 777
<210> 173
<211> 729
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 173
atggacaagg catattcgat ttttgttaac gcggcggcga ttgttttagt ttcctccact 60
gtgcggggaa caggggttga agacctgatg aattcggtct tgctcgcgca attggtggct 120
aacaagaatc tgcagcgcat accaagcgct gattggtacg ctagttatat ggacgtcctg 180
agtgtcgcct gggtagcggg tgccaaacgc cgaaaggacc tgctaccgaa acaagacgct 240
gccagctcgc cagtggagtg ggttacagca atacctttgg acgatcggcc ggaccagcaa 300
cagcagatca tggcggtgtt ggaccgtgtc gccgcgttac ccggctcgct gccggcgctg 360
agtatcctgc gcaagcatat gcaaaaacca aacgaacctg agccgacgca gagcccttca 420
gcgtccagcc ccgtgcgctt gttggtgatc gtagcgcaca gccccgtttc gatgaccggt 480
atctgtttgc aattcaacac agggaaagcg atcaatgcca acccttgggg gcaatgcttt 540
gatggaaagg acatcgacgg ttgtgtgtcg gcgcgttatt tgcgcatgca actgagcgaa 600
acattgttcg cgccggcccg tgaggttatc gcccgtaagg tagggactgt cgtgggcgac 660
aacgtggtgg atatcaccgg ggctatcgag gattcggttg ttcgtcctgc cgaggaggtc 720
gggcgatga 729
<210> 174
<211> 777
<212> DNA
<213> 芸苔假单孢菌
<400> 174
atgagttttg aaatgtgtga tagcgctgta gccgcctgtg tggcgcggtt ggaaagttat 60
gatatttacc ctgatgtcag tcctcgttcg ttgtatgtgg acgatgttga gccaccggcg 120
aagggatcgg ttgtcggtga aggcatcctg gcgttcgccg gtggtctttc tccccagcat 180
caagaggatg cgcagcatgc ttttctcttt gcttccctgg tcgccaacag gcaataccct 240
ctcgaatccc aaggacgaga gtggtactac aagtttgttg aagtcatgac gaacgccggt 300
tgggtcgcta cgcagcgctt ctatgatgac ctgagcgtcg gcggtaacac cgtgcggatg 360
gacaagctgg tgttggacat cctcgcctcc gtagtgtcgg gtattgccct cggaagcgcg 420
acttcggcgt tgctgttgag ggtcgtcgac agtgcaatca ctgccttgca gaagaaggaa 480
gagaccctga ccctttttga gcgaaacctg ctggagcatg gggtaggcgg aatggcagcg 540
ggtacctgtg tcgaaattga cggtgaagtc agcatgatgc ttggcaccgt gcgctttatc 600
cggcgcaaca gcgcaaccca ggtcttgttt gcggattgga atagccgcga agtgaagtta 660
tataaaggcg agtcggtttt tcgaaaagtt ccaagtgttg tcgagcgaac tcgagatatc 720
attattgggc ggctgggtaa tcatgccgta agcaagatcg aagagtacga aatctaa 777
<210> 175
<211> 729
<212> DNA
<213> 芸苔假单孢菌
<400> 175
atggataagg aatattcggt ttttgttaac gctgcggcga ttgttttagc gccctgcgca 60
ctacggcgca cggaagttga cgacctgatg aattcggtct tgctcgcaca actggttgct 120
gataagagtc tgctgcgtgc accagcggtt gattggtacg ccacttattt ggaggtcttg 180
agtgtcgcct ggatatcagc tgccaaaagg cgaaaggatc tgcagccgca aaaagaagat 240
acccattcgc cattggagtg ggtggcggcc atccccttgg atgatcaggt ggatcagcaa 300
cagcggatca tggcggtgat ggagcgtatc gcagcgttac ccggctcgct gcctgcgatg 360
gggattgtgc gcaagcatgt gcaaaaacaa tacgagcctg acgcggcaca gagcccgtca 420
tcttccagcc ccgtgcgctt gctggtgatc gtggcgcaaa gccctgtttc gatggctggt 480
gtctatttgc aattcaacac agcgaaagtg atcgaggcca atccttggag gcagtgcttt 540
gatggcaaag acatcgacgg ttgtgtgacg gcacgttatt tccgcacgca actgagcgaa 600
acattgttcg cgcctgcccg tgaggttatc gcccgtaagg tcgcggctgc cgtgggtgac 660
aacattgtcg atatcaccaa ggctatcgat gattcaggtg ttcttcctgc cgaagaggtc 720
tgcagatga 729
<210> 176
<211> 792
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 来自密歇根州的柳枝稷根际微生物群落
<400> 176
atgagtgtaa atatgatcga tagtgctact gttgctgcct gtgtaaggcg tctggaaagt 60
tacgaaattg atgaagtgcc agttgtacgt tctcgtgcat ttgctgcaag tgggattgtt 120
gttgaggagc cttcgaaggg ggctgtcgtt ggcgaaggca ttttgtcctt cgtaggcaac 180
ctgtccgagc aaaatcaagt agatgcgatg cacgcctttc tttttgccag ccttgttgcg 240
aataagcaat ttccttacga gtatcagggc aaggaatggt actacaagtt tgtcgaagtt 300
atgacctccg ccggttggct gacgagccaa aaatattaca acgacattga aattagcgga 360
aataccgttc ggatggacca gttggtactg gaaatccttg gctcggtggt cgctggcctc 420
gctataccag gcactgcttc tgcactgatg ctgaaggttg ccggtgatgc cattaccgcc 480
ttgaaaaaga aagaaacggc tttaacgctg tatgaacgga atttgttgga acatggcgta 540
ggcggtatgg ctgcaggaac ctgtaccgaa gtcaatggtg aggtaaccct ggcactaggg 600
actgtacgtt ttattcgcaa aaatacagca acccaagtcc tgttcatgga ttgggatagt 660
cgtgatgtgc agctgtataa aggtgaatct gttttcagaa aggttcctta tatcgctgac 720
caaacccgag acctgattcg gacaaaactt gggacgaatg cagtcagtaa aatcgaaggc 780
tacgagatct ga 792
<210> 177
<211> 729
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 来自密歇根州的柳枝稷根际微生物群落
<400> 177
atggcaaggg aatattcggt atttgttaat gccgctgcta tcgttttatt gccgagcaat 60
cccgtggagt cagcaactaa cgacctgatg aattcagtcc tgcttgcaca actggtcgcc 120
aataagcgtg ccgaagccac gagcgcggtc gattggtatg agacctatgt gggggtgctg 180
ggtgatttct ggttaacgag ggccagaagc aggcaagata tccagccggg aaaagacgat 240
accgcttcac cgcttgaatg gatcgctgcg gtgctggcaa gtagcactga ggatgaggcg 300
cggctggtga cggcgttgtt gaagggtatc gcacgactat ccgattcttt gcccgcgatg 360
agtttgctgc gcaagcatgt gcaaaaagag tccgatgatg aaccggcaga aatctccttg 420
cagtccaagc ctgttcgctt ggtcgtgatc gtggcccaag acaacgcttc gatgaccagc 480
gtctgcctcc aattcaaaac acggcaaatg cttgacccca atccctgggg gcagcgcttc 540
catgtcgagg atatggaggg ctgcgtttcg gcccattttt tccatgcgca cctgtccgag 600
acattgtacg cgcccgcccg tgaagcggtc gcccgcaagg ttgagggcgt tttgagcgac 660
aacatcgtgg atatcacgga ggccatcgat gctttggcct ttctgcccac tgaggaggct 720
ggcacatga 729
<210> 178
<211> 786
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 来自凯洛格的芒属根际微生物群落
<400> 178
atgaatgttc atgatgtcga agattgcact gtagccgaat gtattcatcg tttggaaagt 60
tatgagctgg acggcgctga agttatgcgc cctcgcagtt tctcggtacc ggttgtcaat 120
gaacccggca aaggttccat cgtgggtgag ggcatcttgt cctttaccgg caacctgagt 180
gagcaaaatc gggaagatgt tcaacacgct tttctattcg cgagtctggt cgcaaacaaa 240
aagtacccgt atgagtatca gggtaaggaa tggtattacc agttcctgga agtcatgacc 300
catgcaggct ggctgccgac cagtaagtac tacaacgaca tgaacatcag cggtaacacc 360
gtacggatgg atcaattggt gctggagatc ctcggcagtg tggttgccgg gcttgccgtg 420
cctggctccg cctccgtcct gatgctgaag gtggcaggcg atgcaatcac cgcattgaaa 480
aaacgtgaaa ccgcgttgac cctgtatgag cgcaacatgc tggagcacgg tgtgggtggt 540
atggcggccg gcacctgcac cgaagtcaac ggtgaagtca ccatggcatt gggtactgtt 600
cgtttcatcc gcaagaacac cgcaaagcaa gtgctgttca tggattggga ctcccgcgag 660
gtgaaactgt atcgcggtga ctctgtcttc aggaaagtgc cttatatcgt cgagcaaacc 720
cgcgacacga ttcgtgcaaa acttggtttg aatgcgaaac caaagatcga agattacgac 780
atctga 786
<210> 179
<211> 723
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 来自凯洛格的芒属根际微生物群落
<400> 179
atgagttacg aatattctgt attgatcgtt ggggcttgtg tcgtgattat tccggccgcg 60
gatggggcgg cccaatatac ggatctggtc aattccgtgt tgctggcgca actgattgcc 120
aataagaaga tcgaaaaagc tccggaaatt gactggtaca acgcttatgt agaatttctg 180
gatgattact ggctgcgacg tacaagagcg cgacaggatt ggtctatcgc ccaagacaga 240
gtcgagtctg tcagcgactg ggtcattgca gcgatttcac aagatgctgt ggataaagga 300
agcgctactg cggcaacatt gcagcggctg gcaaggttgt ccggcaacga gcctgcaatg 360
ggtttgctgc gcggtcacat gcagaaaata tccactgacg agtcgggtga tgtacttgcg 420
cccgcaaagg ctgtgcgttt gctggtggtt atcgcgcaga cgccgacatc ggtcgcaagc 480
gtctacatcg agcttaagac ccgccagatc atcagtgcca atccgctggc ccagcgacat 540
ctggctgagg atgtacaagg cagcgtttgc atgcgctacg ccgctgctaa cttgtccgaa 600
actctctaca gccctgtgcg cgacgccatt gccttgaagg tcagggacaa gtatcaggac 660
aacgtagcga tgttgacatt gagcgatgat gcttcggcca tggagatctg tgcggtagat 720
tga 723
<210> 180
<211> 1668
<212> DNA
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 180
atggccaaac tcacgcaatt ttccaccccc gccgacatcc aggacttcag tgacagcccc 60
gcccagcaag agcggatgaa cgccgcctgg agcggcaaca tcaatcgctg ggtcaacgca 120
gcactggtgg gcgacgtctg ggacctgatc aactacggcc cgcgcccggc cttctacaac 180
cctctggaca ccgacacccc gagcacctcg gtgaatgccc ccatcacctg gaacgccttc 240
cccgggcgca tccccgcgtt gttccccaac cagtcggcga actggctgca atgggccgac 300
cagggcgtgc cggccaacgt caccaccaac ctctgcaccc aacagagcgt ccccccggcg 360
ccctactcgc ccaccggccc ccggggctgg caggacgaat actgtgaatg gagcgtgacc 420
cgcaacgccg ccgggcagat caccagcgtg atgttcacct gtgagaaccc ggaatactgg 480
atgaccctgt ggcaagtgga cccgggcaaa gtgctgcagc gctaccagca gttgatcaac 540
ccggcggtgc aactggccga cctgagcctc aaggacgccc agggccaaac ggtgatcgac 600
ccggtgaccg gagcgccgtg ctacaacccg ctgaacaagt ggaacagcgg cacccagacc 660
ctgcccggca gcggcggcgc catgcacctg accagctcgc ccaacaccct gggtgccgag 720
tacgacctgg cagcggccgc gaccatgccc cgggagctga acaacgaacc ggtgacctcg 780
gcctcgcaac tggtgtgcta cgcccgttac gggcgcatcg gccgccacag cgacccgacc 840
atcggccaga acgtcaacca gtacgtcaac tacacctccg ggctgaccga ggtccgggcg 900
accctgacca acccgccggg tctgtacatc cagaccccgg acttcagcgg ctacaccacc 960
cccgacggca gcccggcggc ggcctgctgg accatcaacc gaggccacct ggcgcagacc 1020
tcggacgaca tcgaccgcat cctccacgcg accttcagcg tgcccgcggg caaaaacttc 1080
accgtcagcg acatcagcat caacggtgca aaaatccagt acgcctcgca gatcgccggc 1140
accatcacca tgggcttgat ggccacggtg tttggcaaca gcggcgtgac ccagcaaccg 1200
gtggccggca ccctggacag cgacaacccc agcccgtcgg tatcggcgct gcaaccgctg 1260
tcggtgttca acgcctaccg ggcccaggaa ctggccagca acgagcaggc gctgtcgatt 1320
ccaatcctgg ccctggccat ccgccccgga cagcaagtgg acaacatcgc cttgctgctc 1380
aacaccagcc agaccccgaa cggcgccagc ttcagcgtgg tcgaaggcgg cgtcagcatc 1440
agcatcaccg gcacccagga cctgccgggg ttggacatga gcctgtacct ggtgagcatc 1500
agcgccgacg ccaacgccgc cccgggggat cgcacggtcc tcgccagcgt gcctggcatg 1560
gccagcaccc aacaggcggc gatcggcctg ctgaccgtcg gcggcccaac cctggtcacc 1620
tcccagaccg gcccgagcaa gccgaacttc cgtcgcggtc gcggctga 1668
<210> 181
<211> 1356
<212> DNA
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 181
atgcgccgtc gtcccacggt gttactcggc ctggccctgc tactcggttt accggccacc 60
caggccatgg gcgcgccgct gtgcggcagc ccgttcgtcc cctcgccgac cctgcaaccg 120
acactcgccc cccccaattt cagcgccagc gacagcgcgg tggactgctt catgtggcaa 180
accatggtct acctcaactg gccggccacc ccaggccaac ggggcgtacc gaatgccgcc 240
gccagcctgg gcagcccggg ccccagcgtc tggcagacct acaaggatta caacgagctg 300
tacctgccca atggccagca accgccagcc tggaacgaca acttcctgtc ggtgcagcgc 360
ttgcagaccc gaggcgtggc acgggcgttg ccgtcgatcc gcctgcttaa cagcaccagc 420
aaggtctttc gcgccgccaa tgccaacgaa tccccggcgc tacgggaaat cgagcaggtc 480
ggcggcggcg tgctctacga ccaggccggc agcccggtgt actacgaaat gctggtgaat 540
gaggtcaact tcgacttcat ctacaacaac cagctgtaca accccgccca gcagaacctc 600
tatgccaagc aaaaaggcat cgtgctgccg aacaactcca tcgagatcaa ggccgcctgg 660
aaggtgctga gcgacccgga taacccccag cgctttctca ccgcccaagc gttgctgccc 720
ggcagcagca cgccggtgac cgtgggcctg gtcgggctgc atgtgttcca gatgccttcc 780
agcgcgttca accaggggtt ctgggcgacc ttccagcagc tcgacaacgc ccccacggtg 840
gccggcgcca ccccaggggc gcactactcg ttcaacaacc cgcagtgcgc gccggcccag 900
tgcccgccca atgacaaaac cagcaatccg acccaggtgg tgcagaactt cccgccgacg 960
ccagaggcgc agaacatcaa ccactacatg cagaacctga tcgcccagca ggccccgggc 1020
tccgcgttgc agtactacca gttggtggac gtgcaatggc cgacttcgcc acaagccatc 1080
ggtcagcccg gggccacggc gccggcgccc agtggcacgc cgaaccacga caccctgatc 1140
aacccggtgc tggaaacctt tctccaggcc aatcacaaga gctgcctggg ttgccatgtg 1200
tacgccagcg tggcggcgga cggcagcaac ccgcccaccc actaccaggc cagcttcagc 1260
ttcctgctgg gccacgccaa aagcccggcc ctgggaagca acctgaaaag cctggcgcaa 1320
cagatcgagg acgcgtccct gagcctgcaa cactga 1356
<210> 182
<211> 1668
<212> DNA
<213> 东方假单孢菌
<400> 182
atggccaaac tcacgcaatt ttccaccccc gccgacatcc aggacttcag tgacagcccc 60
gcccagcaag agcggatgaa cgccgcctgg agcggcaaca tcaatcgctg ggtcaacgcg 120
gcactggtgg gcgacgtctg ggacttgatc aactacggcc cgcgcccggc cttctacaac 180
cctctggaca ccgacacccc gagcacttcg gtgaatgccc ccatcacctg gaacgccttc 240
cccgggcgca tccccgcgct gttccccaac cagtcggcga actggctgca atgggccgac 300
cagggcgtgc cggccaacgt caccaccaac ctctgcaccc agcagagcat ccccgcggcg 360
ccctactcgc ccaccggccc ccggggctgg caggacgaat actgtgaatg gagcgtgacc 420
cgcaacgccg ccgggcagat caccagcgtg atgttcacct gtgagaaccc ggaatactgg 480
atgaccctgt ggcaagtgga cccgggcaaa gtgctgcagc gctaccagca gttgatcaac 540
ccggcggtgc agttggccga cctgagcctc aaggatgccc agggacaaac ggtgatcgac 600
ccggtgaccg gagcgccgtg ctacaacccg ctgaacaagt ggaacagcgg cacccagacc 660
ctgcccggca gcggcggcgc catgcacctg accagctcgc ccaacaccct gggtgccgag 720
tacgacctgg cagcggccgc gaccatgccc cgggagctga acaacgaacc ggtgacctcg 780
gcctcgcaac tggtgtgcta cgcccgttac gggcgcatcg gccgccacag cgacccgacc 840
atcggccaga acgtcaacca gtacgtcaac tacacctccg ggctgaccga ggtccgggcg 900
accctgacca acccgccggg gctgtacatc cagaccccgg acttcagcgg ctacaccacc 960
cctgacggca gcccggcggc ggcctgctgg accatcaacc gaggccacct ggcgcagacc 1020
tcggacgaca tcgaccgcat cctccacgcg accttcagcg tgcccgcggg caaaaacttc 1080
accgtcagcg acatcagcat caacggtgca aaaatccagt acgcctcgca gatcgccggc 1140
accatcacca tgggcttgat ggccacggtg tttggcaaca gcggcgtgac ccagcaaccg 1200
gtggccggca ccctggacag cgacaacccc agcccgtcgg tatcggcact gcaaccgctg 1260
tcggtgttca acgcctaccg ggcccaggaa ctggccagca acgagcaggc actgtcgatt 1320
ccgatcctgg ccctggccat ccgccccggg cagcaagtgg acaacatcgc cttgctgctc 1380
aacaccagcc agaccccgaa cggcgccagc ttcagcgtgg tcgaaggcgg cgtcagcatc 1440
agcatcaccg gcacccagga cctgccgggg ctggacatga gcctgtacct ggtgagcatc 1500
agcgccgacg ccaacgccgc cccgggggat cgcacggttc tcgccagcgt gcctggcatg 1560
gccagcaccc aacaggcggc gatcggcctg ctgaccgtcg gcggcccaac cctggtcacc 1620
tcccagaccg gcccgagcaa gccgaacttc cgtcgcggtc gcggctga 1668
<210> 183
<211> 1356
<212> DNA
<213> 东方假单孢菌
<400> 183
atgcgccgtc gtcctacggt gttactcggc ctggccctgc tactcggctt accggccacc 60
caggccatgg gcgcgccgct atgcggcagc ccgttcgtcc cctcgccaac cctgcaaccg 120
acactcgcca accccaattt cagcgccagc gacagcgcgg tggactgctt catgtggcaa 180
accatggtct acctcaactg gccggccacc ccaggccaac ggggcgtacc gaatgccgcc 240
gccagcctgg gcagcccggg ccccagcgtc tggcagacct acaaggatta caacgagctg 300
tacctgccca atggccagca accgccagcc tggaacgaca acttcctgtc ggtgcagcgc 360
ttgcagaccc gaggcgtggc acgggcgttg ccgtcgatcc gcctgcttaa cagcaccagc 420
aaggtctttc gcgccgccaa tgccaacgaa tccccggcgc tacgggaaat cgagcaggtc 480
ggcggcggcg tgctctacga ccaggccggc agcccggtgt actacgaaat gctggtgaat 540
gaggtcaact tcgacttcat ctacaacaac cagctgtaca accccgccca gcagaacctc 600
tatgccaagc aaaaaggcat cgtgctgccg aacaactcca tcgagatcaa ggccgcctgg 660
aaggtgctga gcgccccgga taacccccag cgctttctca ccgcccaagc gttgctgccc 720
ggcagcagca cgccggtgac cgtgggcctg gtcgggctgc atgtgttcca gatgccttcc 780
agcgccttca accagggatt ctgggcgacc ttccagcagc tcgacaacgc ccccacggtg 840
gccggcgcca gcccaggggc acactactcg ttcaacaacc cgcagtgcgc gccggcccag 900
tgcccgccca atgacaaaac cagcaatccg acccaggtgg tgcagaactt cccgccgacg 960
ccagaggcgc agaacatcaa ccaatacatg cagaacctga tcgcccaaca ggccccgggc 1020
tccgccttgc agtactacca gttggtggac gtgcaatggc cgacttcgcc acaagccatc 1080
ggtcagcccg gggccacggc accggcgccc agtggcacgc cgaaccacga caccctgatc 1140
aacccggtgc tggaaacctt cctccagacc aatcacacga gctgcctggg ttgccatgtg 1200
tacgccagcg tggcggcgga cggcagcaag ccggccaccg actaccaggc cagcttcagc 1260
ttcctgctgg gccacgccaa aagcccggcc ctgggcagca acctgaaaag cctggcgcaa 1320
cagatcgagg acgcgtccct gagcctgcaa cactga 1356
<210> 184
<211> 1671
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种PKRS11
<400> 184
atggccaaac tcgcgcaatt ctcgcctccc gcccgtatcc aggacttcag caacgacccc 60
gcccagcagg agtgtttgaa cgctgcctgg agcggcaaca tcaatcgctg ggtcaacgcc 120
gccctgctgg gggacgtctg ggatcgaatc aattacggac cgcgcccggc gttctacaat 180
ccgttggtga ccgatacccc cgacaccgcg ggcaatgtgc cgatcacctg gaacgccttc 240
cccggccgcc tgcaagcgct gtttccgaac cagggcgcgt cgtggcaaca gtgggccgac 300
cagggcgtgc cggataaagt caccaccgac ctctgcagcg gcaagcccat tgacccggcc 360
ccctactcgc ccaccggtcc acggggctgg caggacgaat actgcgaatg gagcgtgacc 420
cgcaacggtg ccggacagat caccagcgtg atgttcacct gcgaaaaccc cgagtactgg 480
atgaccctgt ggcaggtcga tccgggcaag gtgctgcaga tctaccagca ggtgatcaac 540
ccggcggtgc aactgtcgga cctgtgcctg aaagacagcc atggccagac ggtcaacgat 600
ccgctcaccg gccagccgtg ctacaacccg ctgaacaaat ggaacagcgg cacccgcacc 660
ctggcgaaca gcggtggcgc catgcacctg accagctccc ccaataccct cggcgcggaa 720
tacgacctgg ccgccgcggc caccatgccg cgcgaaaagg accacgaccc ggtgacctcg 780
gccgcagccc tggtgtgctt tgcccgctat ggccggatcg gccgccacag cgatccgacc 840
attggccaga acgtcaacca gtacgccaac tacaccccga ccctaccgca tccccaggcc 900
accctcgccg accctccggg gctgtacatg cagaccccgc agttcagcga ctacgtcacc 960
cccgacaaca ccccggcgca gactttctgg accgtggtgc gtggcagcct gaaagacccg 1020
aatacgtccg aggacatcga tcgcatcctg cacgccacct tcagtgtccc tccggaactg 1080
ggctacaccg tcagcgacat caagatcggc aaccagccga tccggtacgg ctcgcagatc 1140
gccgccacca tcaccatggc cctgctggcc acggcctttc ccaacagtgg agtggtgcag 1200
accccggtcg gcgcgacgct cgacaactcg aaccccagcc cctcggtcag cgccctgcag 1260
gcacttgcgg tgttcaccgc gtaccgggcc caggagctgg ccagcaatga acaaccgctg 1320
tcgataccgg tactggctct ggccgtcagt ccggggcagc aggtgagcaa tatcgccctg 1380
ctgctcaaca ccagcgacac cccggatggc gcggtgttca cggtgcccga aggcggggta 1440
agcatccgta tcgacggcac ccaagcgcta cccaatgcgg agctgagcct gtatcaggtg 1500
acgctgtgcg tcgacgccaa tgccgccatc ggcgaccgca gcatcctggc cagcgtgccg 1560
agcatgccag ccacccaaca ggcggccatc ggcctgctga cggtcgtcgc cccgccccag 1620
gtccggcttg ccggcggacc gcgcaaacct cacgcccgtc acagtcgcta a 1671
<210> 185
<211> 1350
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种PKRS11
<400> 185
atgcgtgcca ttctcgccct cttgctgtac gccggattgt cgctggcgcc ggtcgcggcc 60
cgggccgccg gcaatccctg tggcagcccc ttcagcccgg aaccggtcat ccagccggtc 120
ctggccaacc cgcagataag caacctggac ccgtcggtgg actgcttcat gtggcaaacc 180
atggtctacc tcaactggcc ggcccaggcc ggccagcgtg gtctccccaa taccgacgcg 240
cacctgggcg accccggccc cacggtctgg caaaccttca aggacttcaa cgaactctac 300
ctgcccggtg gccagcgccc ggccccctgg aacgacaact tcctcaccat gcaacgcctg 360
gaattgcgcg gcgtggagcg gccaaggcca tcgatccgcc tgctcaacag caccagcaag 420
gtgtttcgca atgccgatgc cagcgaacaa aaggccctgg acgaattcaa gcaagtgggc 480
ggcggcgtgc tctacgacca gaacggccag ccggtgtact acgagatgct gatcaaccag 540
atcaacttcg attacatcta cagcaatcag ctgtacaacg ctgcccagca gaatctccac 600
gccgccaagc agggcatcgt cctgcccagc aactccatcg aactcaaggc ggcctggaaa 660
gtcctcagcc cccaggaagc cgcgccgccc ttgcgctttc tcactgccca ggccctgctc 720
ccgggcagcc aggtgccggt taccgtcggc ctggtgggcc tgcacgtgtt ccagatgccc 780
tccaaggact tcgcccaggg cttctgggcg accttttccc aggtggacaa cgcccccacc 840
ctgaatacac ctggccaggc ccattactcg ttcaataacc cgcagtgcag ccagtgtccg 900
gtcaacgacc ttggcagcaa gccgacgcag gtggtgcagg tccaggccaa cgccgtctac 960
gcccaggccg tcaaccagta catgcaggcg ctgatccagc agcaggcgcc gaactcggcc 1020
ttgcagtatt accaactgat caacgtgcag tggcccaact catcggtacc catcggccag 1080
cccggccagc cgacacctgc gccaaccggc agcccgagca ccgacaccct ggtcaatccg 1140
gtgctggaaa cctttatgca ggtcagcaac atgagctgcc tgggttgcca caagtccgcc 1200
agcgttgccg acaatggcac gcagccgccc agcggctatc aggcaagcta cagtttcctc 1260
ctgggccacg cccagaaccc gccgccgcaa ggcagcctca agagccttgc gcgacaggtg 1320
gaagaagcct cgacagcccg tcaacggtag 1350
<210> 186
<211> 291
<212> DNA
<213> 南极假单孢菌
<400> 186
atgaaattat caaatgtctt actattgagt atcgtatttg cttggcaagg catggccttc 60
gccgatacac agaagtctaa tgccgaaacc ttgttatcta acgacaaacc accgctaaca 120
caggcggcgc aggagaagga acaagaaaat gttgaggctg accggaatga atgttggtcc 180
gctaagaatt gttctggaaa gatcctaaac aataaagatg cgcacaactg taaattatcc 240
ggcggtaagt catggcggag caagactaca gggcaatgca ctaatcttta a 291
<210> 187
<211> 291
<212> DNA
<213> 东方假单孢菌
<400> 187
atgaaaatgt ccagcgtctt actgatgagt attgcgtttg tatgtcaagg catggtcttc 60
gctgatacac agaagtccaa tactgaaacc ttgttttcca acgacaagcc accgctgata 120
cagacggccc aagagcagga acaaaaagag gttgaggttg accgcaatca atgttggtcc 180
gccaagaatt gctctggaaa gatcctgaac aataaagatg cacataactg taagttgtcc 240
ggcggtaagt cttggcggag caagactaca gggcagtgca ccaatctgta g 291
<210> 188
<211> 288
<212> DNA
<213> 阿氏肠杆菌
<400> 188
atgaaaacac tcgttatcgc aattctcacc gctgttcttt gccagggcat ggcgatggct 60
gatacacaga aaccagcaac cggggctttg ccagcaaatg aaaaaccccc tctcgttcag 120
ccagctgacg aacataaaac gagcgaggca aatgccaatc gtaatgaatg ctggtcagca 180
aaaaattgta ccggaaaaat ccttaataat aaggatgcgc ataattgcaa aaactccggg 240
ggtaaatcat ggcggagtaa aaccaccgga cagtgtacca atctttga 288
<210> 189
<211> 288
<212> DNA
<213> 肠杆菌属物种
<400> 189
atgaaaacac tcgttatcgc aattcttacc gctgttctgt gccagggcat ggcgatggcc 60
gaaacgcagc aaccggcatc cggggctttg cctgccaatg aaaagccgcc cctggtgctg 120
acggccgacg aaaaaaaagc gagtgaggct aatgccgaca ggaatgaatg ctggtcggcc 180
agaaattgta gcgggaaaat ccttaataat aaggatgcgc ataactgcaa aaactccggg 240
ggtaaatcct ggcggggtaa aaactccagc cagtgcacca atctttaa 288
<210> 190
<211> 318
<212> DNA
<213> 燕麦食酸菌
<400> 190
atgaaaaagc tgttgctcat cgcttcgtta ctcgtttcca tttccggtgc gaatgtgttc 60
gcccaggcac cgtcatccgg cgatgctccc gcagccgtcg cgggcaagca ggatggggcc 120
tcgcacaaag acacggaaca ggcggccaat gtggaatgcg acgtcaatgc gaccgtccag 180
cagtgctgct ctgccgccaa atgccagggg aaagtgctca gcaatcgcga tgcccacaac 240
tgcaaggaca agtccaaggg caagagctgg catgcggcgg cgcaaggggg acagcccgct 300
gcgtgccagc ggatgtaa 318
<210> 191
<211> 285
<212> DNA
<213> 普城沙雷氏菌
<400> 191
atgcagtgta atggggctat tttaaagttg ttgtgcgcgc aacgaaaaga ccaatttatg 60
aacttacgca taaggacaca tgctatgaaa aatttgtcga ttttagttgt tctatcttcc 120
tgcctcttac ttcctttaac cgcgtctgcg gctgctggta cgtgctatag tgcgaagaac 180
tgctccggta aagtgttaag ccatcgagat gcacataact gcaaggtcaa ggataagggt 240
aagtcttggc gcagtgatat cacaaatcaa tgtaccaacc tgtga 285
<210> 192
<211> 282
<212> DNA
<213> 液化沙雷氏菌
<400> 192
atgcgtgagg aggctatttt aaagttgttg tgcgcgcaac gaaaagacca atttatgaat 60
tcacgcataa ggacacatgc tatgaaaaat ttgtcgattt tagttgttct atcttcatgc 120
ctcttacttc ctctaactgc gtcggcggcg tccggtaagt gctacagtgc taagaactgt 180
tctggaaaag ttttaagcaa aagagacgcg cataactgca aggtcaagga tcggggcaaa 240
tcttggctta gtgatgtcac aggcaaatgt accaacctgt ga 282
<210> 193
<211> 237
<212> DNA
<213> 沙雷氏菌属物种
<400> 193
atgaaactta aatatgaacg aataaggata tatgttatga aaagtctatc gattgttatt 60
actctcgctt catgcttact gctacctctg actgcgtctg cggccgcagg cacatgttat 120
agcgcaaaga actgttccgg gaaggtgctt agccaccggg atgcccataa ctgcaaggtt 180
aaggacaaag gtaaatcctg gcgcagtgat attacaggcc aatgcacgaa tctttga 237
<210> 194
<211> 228
<212> DNA
<213> 沙雷氏菌属物种
<400> 194
atgaattcac gcataaggac atatgctatg aaaaatttgt cgattttagt tgtactatct 60
tcatgcctct tactccctct aaccgcttct gcagctgctg gcacatgcta tagcgcaaag 120
aactgctctg gaaaagtttt aagccatcga gacgcgcata actgcaaggt caaggacaag 180
ggtaaatctt ggcgcagtga tatcactggc aagtgtacca atctgtaa 228
<210> 195
<211> 270
<212> DNA
<213> 绿针假单胞菌
<400> 195
atgtcggctc aagagaactt tgttggcgga tggactcctt atcacaaact gaccccaaag 60
gatcaggaag tattcaaaga agccctggcc gggttcgtgg gtgtgcagta cacacctgaa 120
ctggtttcga cccaggtcgt caacggcacg aactatcgct atcaatcgaa agcgacgctg 180
cctggctcgt cggaaagttg gcaagcggta gtggaaatct acgcgcctat caaaggcaag 240
ccgcacatca cccagatcca ccggatctaa 270
<210> 196
<211> 270
<212> DNA
<213> 绿针假单胞菌
<400> 196
atgtcggctc aagagaactt tgttggcgga tggactcctt accacaaact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcaaaga agccctggcc ggattcgtgg gtgtgcacta cacgcctgaa 120
caggtttcaa cccaggtcgt caacggtacg aactaccgtt atctgtcgaa agcaacggtg 180
cctggctcgt cggacagctg gcaagcggtc gtagaaatct acgcgcctat caagggcaag 240
ccgcacatca cccagatcca ccggatctaa 270
<210> 197
<211> 270
<212> DNA
<213> 芸苔假单孢菌
<400> 197
atgtcggctc aagagaactt tgttggcgga tggactcctt accacgaact gactccaaag 60
gatcgggaag tattcaaaga ggccctggcc gggttcgtgg gtgtgcaata cacccctgaa 120
aaagtttcga cccaagtcgt caacggcacg aactatcgtt atctgtcgaa agcaacggtg 180
cctggctcgt cggacagctg gcaagccgta gtggaaatct acgcgcctat taaaggcaag 240
ccgcacatca cccagatcca ccggatctaa 270
<210> 198
<211> 270
<212> DNA
<213> 绿针假单胞菌
<400> 198
atgtcggctc aagagaactt tgttggcgga tggactcctt accacgaact gactccaaag 60
gatcgggaag tattcaaaga ggccctggcc gggttcgtgg gtgtgcacta cacccctgaa 120
aaagtttcga cccaagtcgt caacggcacg aactatcgct atctgtcgaa agcaacggtg 180
cctggctcgt cggacagctg gcaggccgta gtggaaatct acgcgcctat taaaggcaag 240
ccgcacatca cccagatcca ccggatctaa 270
<210> 199
<211> 270
<212> DNA
<213> 绿针假单胞菌
<400> 199
atgtcggctc aagaacattt tgttggcgga tggactcctt accacgaact gacgccaaag 60
gataaagaag tattcaagga agccctggcc gggttcgtgg gtgtgcacta cacccctgaa 120
aaggtttcga cccaggtcgt caacggcact aactaccgtt atctgtccaa agccacgctg 180
cctggctcct ctgacagctg gcaggcggta gtggaaatct acgcgccgat caaaggcaag 240
ccgcacatca cccagatcca tcggatctaa 270
<210> 200
<211> 270
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 200
atgtcggctc aagaaaatct tgttggcgga tggactcctt accacgaact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcgatga agccctggcc gggctcgtgg gtgtgcacta caccgccgag 120
ctggtttcga cccaggtcgt taacggcacc aactatcgtt atcagacgaa agcaacgcag 180
ccgggttcat caaacagctg gcaagcggtc gtggaaattt acgcgcctat taacggcaag 240
ccgcatatca cccagatcat tcggatctaa 270
<210> 201
<211> 270
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 201
atgtcggctc aagaaaatct tgttggcgga tggactcctt accacgaact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcgatga agccctggcc gggctcgtgg gtgtgcacta caccgctgag 120
ctggtttcga cccaggtcgt taacggtacc aactatcgtt atcaggctaa agcaacgcaa 180
cctggttcgc caaacagctg gcaagcggtc gtggaaattt acgcgcctat taacggcaag 240
ccgcatatca cccagatcat ccggatctaa 270
<210> 202
<211> 270
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 202
atgtcggctc aagagaatct cgttggcgga tggactcctt atcacgaact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcgatga agccctggcc gggctcgtgg gtgtgcacta cacggctgaa 120
ctggtttcca cccaggtcgt caacggcacc aactatcgtt atcaggcgca agcaacgcag 180
cctggttcgc caaacagctg gcaagcggtc gtggaaattt acgcgcctat taacggcaaa 240
ccgcacatca cccagatcat ccggatctaa 270
<210> 203
<211> 270
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 203
atgtcggctc aagaaaatct cgttggcgga tggactcctt atcacgaact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcgatga agccctggcc gggctcgtgg gtgtgcacta caccgctgag 120
ctggtttcga cccaggtcgt taacggtacc aactatcgtt atcaggcgaa agcaacgcag 180
cctggttcac caaacagctg gcaagcggtc gtggaaattt acgcgccgat taacggcaag 240
ccgtatgtca cccagatcat ccggatctaa 270
<210> 204
<211> 270
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 204
atgtcggctc aagaaaacct cgttggcgga tggactggct accacgaact gactccaaaa 60
gataaggaag tattcaaaga agctctggag ggactcgtcg gtgtgcatta cacacctgaa 120
ctggtttcga gccagatcgt taatggcact aattatcgct atcaaactaa agcgacccag 180
ccaggctcgt caacgagctg gcaagccatc gtggaaattt acgcgcctat caagggcaag 240
ccgcatatca ctcagatcat ccggatctaa 270
<210> 205
<211> 270
<212> DNA
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 205
atgtcggctc aagaaaatct cgttggcgga tggactcctt atcacgaact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcgatgt agctctggcc gggctcgtgg gtgtgcacta caccgctgag 120
ctggtttcga cccaggtcgt taacggtacc aactatcgtt atcaggcgaa agcaacgcag 180
cctggttcac caaacagctg gcaagcggtc gtggaaattt acgcgcctat caacggcaag 240
ccgtatgtca cccagatcat ccggatctaa 270
<210> 206
<211> 270
<212> DNA
<213> 假单孢菌属物种
<400> 206
atgacagctc aagaacatct tgttggtgga tggacccctt accacaaact gactcccaag 60
gatcaggaag tcttcaaaga agcactggcc ggcttcgttg gcgtgagcta cacgcccgaa 120
gaggtttcca gccaagtcgt taatggcacc aactatcgct acaagtcgaa agccacgctt 180
ccgggttcgc caaacggctg gcaagcgatc gtagaaatct acgcgccaac taatggcaag 240
ccgcacatca ctcagatcca tcggatctaa 270
<210> 207
<211> 276
<212> DNA
<213> 荧光假单胞菌
<400> 207
atgtcagctc aagaaaacca cgttggcgtt ggcggatgga ctgcttacca cgaactgacc 60
ccaaaggacc atgctgtatt caaagaggcc ttggaaggct ttgtgggggt gcaatacacc 120
cctgagacgg tttcgactca ggtcgtcgcc ggcacaaact atcgctatca ctcgaaagca 180
cagcagcctg gttcgccagc aatctgggca gcaatcgtgg aaatctacgc ccccctcaaa 240
ggtaaaccgc acatcaccca gatcatccgc atctaa 276
<210> 208
<211> 279
<212> DNA
<213> 肠杆菌属物种
<400> 208
atgtcggaac aacaaacgct gctgcctggc ggctggacgg cttatcatcc gctgactgct 60
caggaccgaa aagtgttcga agaggcgctc aacgggcatc tgggcgtgga ttacgagcca 120
caaaaggtaa aaacccaggt cgtggccgga acaaactacc gcttcctttg tgaggcttcg 180
gtcccgccgt ctacggccgt ctgggaagcg atagtggaaa tttatgcgcc attaccggga 240
cagggcgccc cgcatattac tcaaattatc agaatttag 279
<210> 209
<211> 270
<212> DNA
<213> 脱氮希瓦氏菌
<400> 209
atgtcaaata atgaaactat cgttggtggt tggacagctt acaacgcaat cacatctgct 60
gaaagagaaa ttttcaataa agccatggag ggttttgttg gtgtaagtta catgccagag 120
acggtttcaa cccaggttgt tgcgggaatg aattatcgtt ttaaatgcga agcgtctatg 180
ccaccatcag aagtgttatg ggaagcaatt gttgaaatat atcagccatt aaagggcatc 240
ccgcacatca caaacatcac aaaaatataa 270
<210> 210
<211> 273
<212> DNA
<213> 豚鼠气单胞菌
<400> 210
atgtcggatc aagctgtgct ggttggcgga tggactgcat atcacaggct gactgcggaa 60
gaccaagcgg tgtttcagga agcgctgaaa ggatttgttg gggtggagta taagcccttt 120
gaagtttcca cccaggtggt agcgggtatg aactaccgct acaagtgcaa gaccacggta 180
cccttgccga ctccgatcca tggcgaagcc gtggtacaga tcttccagtc gctggacggc 240
tctgcccata tcacctccat cactcccatc taa 273
<210> 211
<211> 273
<212> DNA
<213> 杀鲑气单胞菌
<400> 211
atgtcagaac aagcagtgtt ggtgggtgga tggaccgcat atcacaagct gaccgccgag 60
gatcaggcgg tatttgacca ggcgctgaaa ggatttgtcg gggtgcagta cgtacccttt 120
gaagtctgca cccaggtggt ggccggcacc aactaccgct tcaagtgcaa gagcacagtg 180
ccgcttgcca aaccgatcca tggcgaagcc gtggtgcaga tcttccagtc tctggatggc 240
tcggcccata tcacctccat taccccgatc tga 273
<210> 212
<211> 273
<212> DNA
<213> 维氏气单胞菌
<400> 212
atgtcagaac aagcagtgtt ggtgggtgga tggaccgcat atcacaagct gaccgccgag 60
gatcaggcgg tatttgatca ggcgctgaaa ggatttgtcg gggtgcagta cgtacccttt 120
gaagtctcca ctcaagtggt ggctggcacc aactaccgct tcaagtgcaa gagcactgtg 180
ccgcttgcca aaccgatcca tggcgaagcc gtggtacaga tcttcaaatc actggacggg 240
gatgcccata tcacctccat taccccgatc tga 273
<210> 213
<211> 267
<212> DNA
<213> 软体动物气单胞菌
<400> 213
atgtcagaac aagcagtgct gttgggcgga tggactgcct accacaagct gagcgccaag 60
gatcaggcgg tattcaacca ggcgctggaa ggatttgtcg gggtgcagta cacacccttt 120
gaagtctcca cccaggtcgt cgccggtacc aactaccgct tcaaatgcaa gagcactgtg 180
ccgctgccca accccatcca cggggaagcc gtggtgcaga tcttccaggc gttgtttccc 240
aaatcgatgc agcttgaatg gaactaa 267
<210> 214
<211> 273
<212> DNA
<213> 水生气单胞菌
<400> 214
atgtcagaac aagcagtgtt gttgggcgga tggactgcct accacaagct gagcgccaaa 60
gatcaggccg tattcaacca ggcgctggaa ggatttgtcg gggtgcagta cacccccttt 120
gaagtctcca cccaggtcgt cgccggcacc aactaccgtt tcaaatgcaa aactactgtg 180
ccgctgccta acccgatcca cggagaagcc gtagtgcaga tcttccagtc gctggatggc 240
tcggcccata tcacctccat taccccgatc tga 273
<210> 215
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 裂解接头
<400> 215
Glu Glu Lys Lys Asn
1 5
<210> 216
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 16S核糖体引物
<400> 216
taccttgtta cgactt 16
<210> 217
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 16S核糖体引物
<400> 217
agagtttgat cmtggctcag 20
<210> 218
<211> 1737
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种VLB120
<400> 218
atgagcacgt ccttcacaca gttcacctcg cccgccggcc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctgggcc tggaagacca gttgccgcag tttgaaaccg actggaacaa caacctcacc 120
ggctggaccc aatcgtccat catcggcaac ccctggtcca acctgaacga cgccccccgc 180
tcgggttact acaatccgct cgtcgaaggc ttcggtgacg tgactgtccc cgcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg gctctggacg tttttctaca acaacggtgc ggcgatcgtt 300
ccccaactgg gcggcaacgc catgactctg gagcaggtga tggaattggc cgatcacggc 360
cagatcaccc tcaacaacac cctctacaaa ctctacgatc ccgacaacca agggaccttg 420
ctgcaactgc cggccaagcg ctgccccagc atcgactgga aaggccagta cacggcgttc 480
tcgccctccg gcccacgggg ctggctcgac gagtactgcg agtggtccat cgtgcgcgat 540
accgacggca acatgcgcaa gatcacattc acctgcgaaa accccgccta tttcctggcc 600
atgtggcgca tcgatccgaa cgcggtactg ggcctgtacc gggactacat cgacccgaac 660
gtacaactcg aagacctgta cctgcgctat gccgtcgatt gcccgaccgg caaggccgga 720
gatccagtga tcgaccccac caccggccag ccggcctatg acacggtcaa caaatggaac 780
gccggtacgg cctgtgtacc cggccagtac ggcggcgcga tgcacctgac gtccggcccc 840
aacaccctca gtgccgaggt gtacctggct gccgccgcca ccctcctgcg accggtgagc 900
agcagccaga acgcccagtc gctgatctgc tgcgcgcagt acggacagaa ctatcgcaac 960
tccgacccgc acatcggctt catggccaat accaaggcgg tgaacaatcg gctgtcgctg 1020
accaacccca ttggcctgta cctgcaacag cccaccgatt tcagcgcctg gaaaggcccg 1080
cagggccagg acgtgagcca gtattggcgc atcacgcgcg gcacggccaa gtcggcggcc 1140
aacggctccg accagatcct gcaggcggtg ttcgaggttc cgcaaagcgc aggcttctcg 1200
atcaatgaca tcaccatcaa tggccaacgg gtcgactatg tgtgggtcat cgcccaacaa 1260
ctgctggtgg gcctgagcgt caccgccaag ccgatcaccg tcacaccccc gtcgttccct 1320
tgcgtacagg cgcgggttga ggggctgcaa ccctggccgg ttcaactgct gccagtagac 1380
ctgttctacg gacaatcacc caccgacctg cccgcctggc ttgcaccggg aagcagcaac 1440
tcgttcgtac tggtggtgca gggcgccgac ccgagcacca cgacgcagaa tgcacgggtg 1500
caattctcca accccggcat cacggcgcag gtcacccact acctgccaga cgcatccgcc 1560
attcccggac agaccaactc cggcggtacc caggcctaca tcctcaccat cacggtgagc 1620
ccgacggcag cacccggtct ggtcatggtg cgcgcgctca atccgggcga agacgcgaac 1680
gtgagcgcgg ccgatcaccc ttgggaggcc ggcctggcgc tggtgcccgg cgcctga 1737
<210> 219
<211> 1605
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种VLB120
<400> 219
atgtccaggt cacgcttgag tctcatctcg ctgttgagcg gcatgttgct gtatctgtcg 60
gccctgcctc ccgctgcggc agccacgatg tcggatgccg acagctgtgt gcagcagcaa 120
ttggtgttca atccggccag tggagggttc ctgccggtca acaacttcaa tgccaccaac 180
caggcattca tgaactgttt tgcctggcag ttgttcatcg ccctgaattg gccggtcaat 240
cccggctggc ctgccaccgc cagcctggcg ggtgaacccg acatgaacag caccctggcg 300
caattcggag tgccctcttc cccggggcaa cccatgagcg tggcgcccgt gtgggccagc 360
tacaaagatg ccaacgacat cttcctgccc ggcgcgccca cgcccaccgg ttggggcgtg 420
caaaccatgg taccgtccgg ttgcagcacc cagggcagtc tgaaggccct gaaggtaggt 480
gcacgcaagt tcatgaatgc cacctcagaa ggcgcgatca acgccttgca tggtttccac 540
ctctcgaccg ggacggtcgc ttctattccc gaccccgtca tggaagcgtc cggcggctgg 600
ctgacggacc agtctggcaa cttggtgttc tttgaacgca aagtgggcaa ggccgagttc 660
gactacatcg tcgagaaggg gctctatgat gccgccaatc agttgaaggt cgcgcaaaac 720
ctcgatggca atacaccgga aggcctgtcg ctgcccctcg gcgagccaat gcgttcgctg 780
ccgccgaccc ctgtgccaca ggagcagctg ggcgcgcttg agctcaaggc cgcgtggcgt 840
gtgctgaccg gcaaacccga gctgttcggg cgctacctga ccaccgtcgc ctggctcaaa 900
cgccccgaca cactggagtg cacccaggaa gtggtggggc tggtgggcct gcatatcatc 960
aacaagaccc aggcgtcgcc caatttcatc tggaccacct tcgagcaggt ggacaacgtg 1020
cccgaaccgg accaggcccc gccgcaagga accccgccga acggtttctc tttcaacaac 1080
cccgactgtg ggagcggccc tgcgtgtgaa cccaatgtgg ctcgtatcca gtgcaagcaa 1140
taccaccccg acaaggactg caccgatctc tttccacgcg accagccggt acagaccacc 1200
cgtgagcacc ccgtccccag cgacctgcaa gccctgaaca gcgcggtgca atccaacttt 1260
gcacagcaga cccacggcca gtcggtgttc cagtactaca agctgatcaa cgtactgtgg 1320
accctcgcgc ccaatcctcc cagcccggag ccgggcgcca atgcccaggt gccgctgtca 1380
tacgggccgt tcatcagtca gggcaacgtg ccggtggcca acaccaccat ggagacttac 1440
gtacagggcg atgactgcaa caaatgccat cagtacgcga cgattgccgg cagcccctcc 1500
ttggcctcgg acttctcctt cctgttcaac agcgcgagtt ccgccggcca taaaagcctg 1560
atcaagcgcg tcaaagcctt cgaaacgctc aaggaccgcc cctga 1605
<210> 220
<211> 1734
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 220
atgagcacgc ccttcaagca gttcacctct cccgctggcc aagcccccaa ggactacaac 60
aagctaggcc tggaggacca gttgcagcag tttgaaaccg actggaacaa cgacctcacc 120
ggctggaccg agtcgtcgat catcggcaac ccttggtcgg gccagaacga cgcgcctcgc 180
tctggctatt acaacccgct ggtggagggt ttcggtgaag tgaccccgcc cgcgatcacc 240
tgggcgccct tccccaaccg gctgtggacg ttcttctaca acaacggtgc agcggtcgtt 300
ccgcaacttg gcagagccat gaccctgaac caggtgatgg agctggccga ccgcggccag 360
atcaccctcg acaacaccct ctacacgcta tacgacccgg acaaacaggg caccctgctg 420
caactaccgg ccaagcgctg cccaagtatc gactggaacg gcaggtacac ggcgttctca 480
ccttccggcc cgcggggctg gctcgacgag tattgcgagt ggtcgatcgt acgcgatgcc 540
aacggcaaca tgcgcaagat caccttcacc tgcgaaaacc ccgcctactt cctggccatg 600
tggcgcatcg acccgcaggc agtattgggc ctgtaccgcg actacataga ccccagcgtg 660
caactcgagg acctgtacct gcgctacacc gtcgactgcc cgaccggcaa agccggcgat 720
ccggtcatcg acccgaccac tggccagccg gcctatgaca ccgtcaacaa atggaacgcc 780
ggcaccgcct gcgttcccgg gcaatacggt ggtgcgatgc acctgacctc cggccccaac 840
accctcagtg ccgaggtgta cctggccgcc gccgccacca tcctgcgccc ggtcagcagc 900
agccagaatg cccagtcgct gatctgctgc gcgcagtatg ggcagaacta ccgcaactcc 960
gacccgcaca tcggcttcat ggccaattcg acggcagtga aaaatcgcct gtcgctgacc 1020
aacccgattg gcctctacct gcagcaacct accgatttca gtggctggaa aggcccgcaa 1080
ggccaggacg taagccagta ctggcgcatc acccgcggca ccgccaagtc ggccgccaac 1140
gggtccgacc aaatcctgca ggcggtgttc gaagtcccag aaagcgccgg tttctcgatc 1200
aacgacatca ccatcaacaa ccagccggtc aactatgtgt gggtcatcgc ccagcaactg 1260
ttggtgggcc tgagcgtcac cgtcaagccg cttgctacca caccgccctc cttcccgtgc 1320
gtgcaggacc ggcagaccgg ccggcaaccc tggccggtgc agctgctgcc actggacttg 1380
ttctacgggc agtcccccac cgacctgccc gcctggctgg caccgggtag cagcaactcg 1440
ttcgtgcttg tggtgcaagg cgcagacgcc aacaccacgg cgcagaacgc cagggtgcaa 1500
ttctccaacc ctggggtgac ggcacaggtc acccagtacc tgcccgacgc gtcggcgatt 1560
cctggccaga ccaactctgg tggcactcaa gcctacatgc tgaccatcac ggtcagcccc 1620
aacgcagcac ccggcctggt gacggtgcgt gcactgaacc cgggcgaaga cgtgaacgta 1680
agcgcggcag accacccgtg ggaatccggc ctggcgctgg tgcctggcgc ctga 1734
<210> 221
<211> 1590
<212> DNA
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 221
atgatgtcca gcttacgcct gagccttctg tcgctgctca gcggcatcct gctttgcctg 60
cagaccctgc aacccgctgc tgcggccacg ctgtcggacg ccgatgcctg tgtgcagcaa 120
cagttggtgt tcaaccctgc gagcgggggg tttctgccgg tcaataactt caatgccacc 180
agccaggcgt tcatgaactg cttcggctgg caactgttca ttgccttgaa ctggccagta 240
aaccccggct ggccggccac ccccagcctg gcgggcgaac ccgacaggca aagcaccctg 300
gcgcagttcg gtgtgccgac cacggcgggt gaaccgatga gcgtggcccc ggtgtgggcc 360
agctacaagg acgccaacga tatctttctg ccaggcgcgc ccgcgcccac cggttggggg 420
gtacaaaccc tggtaccaag cagctgcaat agccagggta gcctgaaggc gctcaaggtg 480
ggtgcgcgca aattcatgaa cgctacctca gaaggcgcga tcaacgccct gcacgggttc 540
cacctgtcta ccgggacact ggcatccatt cccgacccgg tcatggaagc gtccggcggc 600
tggctgacgg atcagtcggg caacctggta tttttcgaac gcaaggtagg caaggccgaa 660
ttcgactaca tcgtcgagca tgggctatat gacgcggcca accagttgaa gctcgcccaa 720
accgaggggc tgtcgctgcc catcggtgaa gcgatgcgcg aactgccgcc gtcgcctgtg 780
ccgcaggagc aactgggcgc aatcgagctc aaggccgcct ggcgggtgct gactggcaaa 840
cccgaactgt tcggtcgcta cctcaccacc gtcgcctggc tcaagcgccc cgacaccctg 900
gcatgcaccc aggaagtggt gggcctggtg ggcctgcaca tcatcaacaa gacccaggct 960
tcgcccaact tcatctggac cacgttcgag caggtggaca acgtgcccga acctgcccag 1020
gtgccgccgc agcaaacccc gccgggcggt tttgcgttca acaaccccga atgtggcacc 1080
ggccccgagt gtaaaccgaa cgtggcccgt atccagtgca agcaacacca ccccgaccgc 1140
gactgcagcg acctcttccc gcgcgaccag ccggtacaga ccacccgtga ataccccgtg 1200
cccagtgccc tgcaggccct gaacagcgca gtgcaagcca acttcgcgca gcaaagccag 1260
ggccagtcgg tgttccagta ctacaagctg atcaatgtgc tgtggaccct tgcccccaac 1320
ccacccagcc cagaaccggg tgccaacgca caggtgccgt tgtcctacgg gccgttcatc 1380
agcgagggcc ccgtgccagt ggccaacacc accatggaaa cctacgtgca gggtgatgac 1440
tgcaaccagt gccatcagta cgcgaccatt gccggcagtc cctcgctggc ttcggacttc 1500
tcgttcctgt tcaacactgc cagctcggcc agccagaaaa gcctgatcaa gcgcgtcaaa 1560
gccttcgaga ccctcaagga ccggccctga 1590
<210> 222
<211> 1734
<212> DNA
<213> 草假单孢菌
<400> 222
atgagcacac ccttcaccca attcacctcc cctgccgaac aagcgcccaa ggactacaac 60
aagctcggcc tggaggacca attgccgacc ttcgagaccg actggaacaa caacgtcacc 120
ggctggaccc agatgtcgat catcggcaac ccctggtcca acctcaacga tgcaccgcgc 180
tcgggctatt acaacccgct ggagagcggc tacggcacgc tgacgccgaa gaccatcacc 240
tggcagccct ttcccaatcg cctctggacg ttcttctaca acaacggcgc cgccgtggtc 300
ccgcaactgg gcggcaaggc catgaccctg gaccaggtga tgcaactgac cgaccacggc 360
cagatcaccc tcaataacac cctgtattcg ctgtacccgg acccgcaggc gacccaactg 420
cagatcccca gcgtgctgtg caaatccatc aactggaacg gcccctacgc cgacttttcg 480
ccctctggcc cacggggctg gctggatgaa tactgcgagt ggtcgatcac ccgcgacccc 540
gacggcaaca tgcgcagcat catgttcacc agcgagaacc cggcgtactt cctgaccatg 600
tggaacatcg acccgggtgc cgtgctgggc ctgtaccagg cgtatgtcga cccgcaggtg 660
aaactcgaag acctgtacct gcgctacacc gccgacggcc cgaccggcaa ggccggcgaa 720
ccggtgctcg accccaccac cggccagccc gcctacgaca ccgtgaacaa atggaacagc 780
ggcaccgtgc gcataccggg cgtgtcgggc ggcgcgatgc acctgacctc cggccccaat 840
accctgagtg ccgagatcta cctggcggcg gccgccacca tcctgcggcc gctcagcagc 900
agccagaacc agcagagcct gatctgctgc gcgcagtacg ggcagaacta ccgcaactcc 960
gacccgcata tcgggttctc cgccaaccag gcggcggtca acaacctgat ctcgttgacc 1020
aaccccatcg gcctgtacct gcagcaaccc aagtccttca gcacctggaa aggcccgcaa 1080
ggcgaggatg tcagcagcta ctggcgcgtc acccgtggca ccgccggcac cggcccgaac 1140
aactccgacc agatcctcca ggcggtcttc gaagtgccgg ccagtgcagg gttctcgatc 1200
aatgacatca ccatcagcgg cacgccgatc gactacgtgt gggtgatcgc caacgaactg 1260
aatgtggccc tcagcgtgac cccggcaccg ctcaccgccc agcccaagga gtgcgcctgc 1320
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ttctccaacc cgggcatcac ggcccaggtc acgcagttcc tgccggatgc ctcggcgatt 1560
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agtgccaccg agcacccatg ggaaagcggc ctggccctgg tgcccagcgc ctga 1734
<210> 223
<211> 1590
<212> DNA
<213> 草假单孢菌
<400> 223
atgaacggat ggcttcgccc gctgcgccgg gcacgcttgc gtattgtctg cacaatcacc 60
tgcgcccttc tcccgtggct ggcccccgca ccggcaagtg ccgcctcgga tgcccagagc 120
tgcgtcagcc agttggtgtt cgaccccacc agcggcggct tcctgccggt gaacaatttc 180
ggcaccgagc aggcttttct caattgtttc ggctggcagt tgttcatcgc catgaactgg 240
ccggtcaacc ccggctggcc cgccaacccg agcctggccg gtgagccgga tacgcaaagc 300
agcgcggccc agttcggcgt gccgccaacc ccaggccaac cgatgagcaa tgccccggtg 360
tgggccagct acaaggatgc cagcgagatc ttcctgcccg gcgcggccaa gccgtccggc 420
tggggcgtgg aaaccctggt gccgtccaat tgcaccgcca ccggcaatct caaggcgttt 480
gccacgggcg cgcgtaaatt catcaccgcc acctcggaaa gcgcgatcaa ccgcaagcac 540
cgcttccacc tgtccagcgg cacccaggtg accctgcccg attcgatcat ggaagcctcc 600
ggcggttggc taacggacca gtccggcaac ctggtgtttt tcgagcgcaa ggtgggcaag 660
gccgagttcg actacatcgt cgacaacggc ttgtacgacg ccgccaacca gctgatcgtg 720
gcgcagaaca gcgacaaccg gcaccccgcc ggcctgtcac tgccggccgg caagctggtg 780
cgtgaactgc cggccaaggc gctaccccag gaggaactcg gcgccctgga actcaaggcc 840
gcctggcgcg tgctcaccaa caagcccgcc ctatacgggc gctacctgac caccgtggcc 900
tggctgcaac gcccggacac gctgcaatgc acccaggaag tgattggcct ggtgggcctg 960
catatcatca acaagaccca gacccagccg aatttcatct ggaccacctt cgagcaggtc 1020
gacaacgtgc ctgacggtgg tgccgcgccg cccgagggct acagcttcaa caacccggca 1080
tgcaccggtg atgcctgcac gccgaatgtg ccccgcgtgc agtgcgacgc cacgcacacg 1140
ccgcccaact gcacgcccct cgaccagccg gtgcaggcca cccgcgccaa cgccacgccc 1200
caggacatgc aggcgctgaa caccgcggtg cagcagacct tcgcccagca gacccagggc 1260
cagtcggtat tccagtacta caaactggtg aatgtgctgt ggtccaagac gcccaatgcg 1320
cccaacgacc caggcccagg gccgaacgtg caggtaccgc tgtcctatgg gccgtttgtc 1380
agcgaccaga gtgtcgtcgt cgccaacacc accatggaaa cctacgtgca gaccgacaac 1440
tgcaacgact gccaccagta cgcggcgatt gccggaaaat ccgggctggc gtcggacttc 1500
tccttcctgt tcagcaatgc cgactcggcg aagaacacgc ggctgatcaa acgcatcgag 1560
tcgttcaaga ccctcaagga caacccgtaa 1590
<210> 224
<211> 771
<212> DNA
<213> 虫媒假单孢菌
<400> 224
atgggttcta ttactgatca tgatcaactg atcgcttggg ttcaatcgct ggatattcct 60
gagcccacga aaagtattgc gcggtcacgc aatgcggtgg ttcgcgccag cagcgaagaa 120
gaaggagctg cggtggtgcg cggtagcgtg acatcgttcg ttactggatt gaaacagcaa 180
gcgcgcgatg atgtgcagaa cagtacgctg ctgatgcaac tggcggccga caagaaatat 240
aatcccgaca cgcaacggga ggagtggttc aagttctaca ccgatggctt agccaacctg 300
ggctgggggc gcgtcagttc gatttaccag aaatataacc cgcgtaatac caatgtcacc 360
atggatgaag tggtgctgga ggtgatcgct gcggttgtcg gtgctgacag tgccgtgtac 420
aaggtcaccg agaagacctt cgcggcgctg gaaagcaacc cgaagaatca gggggcgctg 480
aagctgttcg acagtaccac cactcgcgac gacatcggca cgttccagat ccttccggtc 540
atgcaggacc gggatggcaa cgtggtcatg gtactgacca cagtcaacgc cagcaccact 600
gtgcaaaagg gtagcttcct gttctggagc tggagcaaga ccacggcctg gatgtatcgg 660
gctgcgcagc agacggtgct caacgaatcg gtgtactcac gcgtgcgtga gtcggtgatc 720
cagaaattgg gcaagaatgc cgaagatttt attgatggtc tcgatatcta a 771
<210> 225
<211> 783
<212> DNA
<213> 虫媒假单孢菌
<400> 225
atggcattat cagccgatga agtttatgtg gtttcgggca acctgctgtc tgcaatgccc 60
aagcttgttg atcctgtgat gttcgaagat tttgccaatt ccaatttgct ctgccaattg 120
gcggcggaca agaaccaagg cacgcggttt gttgatccgc ccgcctggct agacttctac 180
aggaatgcat tgggcaaggt gttctggagg atcagtaatt ccgggacggt cagttttaac 240
ataccgcctc tggttcgcag cataacgata aaggaagtgc tggagaagac gttctataaa 300
acactggatc atgaagtctc gctgcaatta gatagcagta tcgagcgttt ggaagagcag 360
ccagaagaga gtgctgctgc acgcttgtat cgtgcgaaga cccaggtcac ttacaagtcc 420
gccgtctcgg acctggccgt ccggccgcac cccatctcga ccattaatct gcagataagc 480
gcggtgcaga gtggaggtaa aatatcggtc tgtagtgtct attttacaac gtcggctgat 540
attgaaagtg atgtgttcaa ccagaagttt ctggtcagtc agctccgggg caatgtcagc 600
gtgagtacgt ttgatgcaaa attgctggag tcgagttacg cgggtatccg acagagcgtt 660
atcgaaaagt tggggcctga aaatatccgc gagaacatca tccaggtgtc agctgaggtg 720
ttctccctcg cgggcccgcg ccatgccggt gccaagcagt tcattcagga actggaaatc 780
tag 783
<210> 226
<211> 270
<212> DNA
<213> 绿针假单胞菌
<400> 226
atgtcggctc aagaaaactt tgttggcgga tggactcctt atcacgaact gactccaaag 60
gatcgggaag tattcaaaga ggccctggcc gggttcgtgg gtgtgaacta cacccctgaa 120
aaagtttcga cccaggtcgt caacggcacg aactatcgtt atctgtcgaa agcaacggtg 180
cctggctcct cggacagctg gcaagcggta gtggaaatct acgcgcctat caaaggcaag 240
ccgcacatca cccagatcca ccggatctaa 270
<210> 227
<211> 270
<212> DNA
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 227
atgtcggctc aagagaatct cgttggcgga tggactcctt atcacgaact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcgatga agccctggcc gggctcgtgg gtgtgcacta caccgccgag 120
ttggtttcga cccaggtcgt taacggcacc aactatcgtt atcagacgaa agcaacgcag 180
ccgggttcat caaacagctg gcaagcgatc gtggaaattt acgcgccgat taatggcaag 240
ccacatatca cccagatcat ccggatctaa 270
<210> 228
<211> 270
<212> DNA
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 228
atgtcggctc aagaaaatct cgttggcgga tggactcctt atcacgtact gactccaaag 60
gatcaggaag tattcgatga agccctggcc gggctcgtgg gtgtgcacta caccgccgag 120
ctggtttcga cccaggtcgt taacggcacc aactatcgtt atcaggcgaa agccacgcag 180
cctggttcgc caaacagctg gcaagcggtc gtggaaattt acgcgccgat taacggcaag 240
ccgtatgtca cccagatcat ccggatctaa 270
<210> 229
<211> 273
<212> DNA
<213> 嗜水气单胞菌
<400> 229
atgtcagaac aagcagtgtt gttgggtgga tggactgcct accacaagct gagcgccaag 60
gatcaggccg tattcaacca ggcgctggaa ggatttgtcg gggtgcagta cacacccttt 120
gaagtctcca cccaggtcgt cgccggcacc aactaccgtt tcaaatgcaa aagcactgtg 180
ccgctgccca acccgatcca cggggaagcc gtggtgcaga tcttccaatc cctggatggg 240
tcggcccata tcacctccat caccccgatt tga 273
<210> 230
<211> 273
<212> DNA
<213> 维氏气单胞菌
<400> 230
atgtcagaac aagcagtgtt ggtgggtgga tggaccgcat atcacaagct gaccgccgag 60
gatcaggcag tgttcaacca ggcgatgaaa ggatttgtcg gggtgcagta cgtacccttt 120
gaagtctcca ctcaagtggt ggctggcacc aactaccgct tcaagtgcaa gagcactgtg 180
ccgcttgcca aaccgatcca tggcgaagcc gtggtacaga tcttcaaatc actggacggg 240
gatgcccata tcacctccat taccccaatc tga 273
<210> 231
<211> 273
<212> DNA
<213> 鱼嗜血杆菌
<400> 231
atgtcagaac aagcagtgtt gttgggtgga tggaccgcat accacaagct gagcgcaaaa 60
gatcaggcgg tatttgacct ggcactgaaa ggatttgtcg gggtgcagta ccagccgttt 120
gaagtctcca cccaggtggt ggctggcacc aactaccgtt tcaaatgcaa aaccacggtg 180
ccgctgccca acccgatcca cggggaagcc gtggtgcaga tcttccagtc tctggatggc 240
tctgctcata tcacctccat caccccgatc tga 273
<210> 232
<211> 578
<212> PRT
<213> 假单胞菌属物种VLB120
<400> 232
Met Ser Thr Ser Phe Thr Gln Phe Thr Ser Pro Ala Gly Gln Ala Pro
1 5 10 15
Lys Asp Tyr Asn Lys Leu Gly Leu Glu Asp Gln Leu Pro Gln Phe Glu
20 25 30
Thr Asp Trp Asn Asn Asn Leu Thr Gly Trp Thr Gln Ser Ser Ile Ile
35 40 45
Gly Asn Pro Trp Ser Asn Leu Asn Asp Ala Pro Arg Ser Gly Tyr Tyr
50 55 60
Asn Pro Leu Val Glu Gly Phe Gly Asp Val Thr Val Pro Ala Ile Thr
65 70 75 80
Trp Ala Pro Phe Pro Asn Arg Leu Trp Thr Phe Phe Tyr Asn Asn Gly
85 90 95
Ala Ala Ile Val Pro Gln Leu Gly Gly Asn Ala Met Thr Leu Glu Gln
100 105 110
Val Met Glu Leu Ala Asp His Gly Gln Ile Thr Leu Asn Asn Thr Leu
115 120 125
Tyr Lys Leu Tyr Asp Pro Asp Asn Gln Gly Thr Leu Leu Gln Leu Pro
130 135 140
Ala Lys Arg Cys Pro Ser Ile Asp Trp Lys Gly Gln Tyr Thr Ala Phe
145 150 155 160
Ser Pro Ser Gly Pro Arg Gly Trp Leu Asp Glu Tyr Cys Glu Trp Ser
165 170 175
Ile Val Arg Asp Thr Asp Gly Asn Met Arg Lys Ile Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Glu Asn Pro Ala Tyr Phe Leu Ala Met Trp Arg Ile Asp Pro Asn Ala
195 200 205
Val Leu Gly Leu Tyr Arg Asp Tyr Ile Asp Pro Asn Val Gln Leu Glu
210 215 220
Asp Leu Tyr Leu Arg Tyr Ala Val Asp Cys Pro Thr Gly Lys Ala Gly
225 230 235 240
Asp Pro Val Ile Asp Pro Thr Thr Gly Gln Pro Ala Tyr Asp Thr Val
245 250 255
Asn Lys Trp Asn Ala Gly Thr Ala Cys Val Pro Gly Gln Tyr Gly Gly
260 265 270
Ala Met His Leu Thr Ser Gly Pro Asn Thr Leu Ser Ala Glu Val Tyr
275 280 285
Leu Ala Ala Ala Ala Thr Leu Leu Arg Pro Val Ser Ser Ser Gln Asn
290 295 300
Ala Gln Ser Leu Ile Cys Cys Ala Gln Tyr Gly Gln Asn Tyr Arg Asn
305 310 315 320
Ser Asp Pro His Ile Gly Phe Met Ala Asn Thr Lys Ala Val Asn Asn
325 330 335
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Trp Arg Ile Thr Arg Gly Thr Ala Lys Ser Ala Ala Asn Gly Ser Asp
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Ile Asn Asp Ile Thr Ile Asn Gly Gln Arg Val Asp Tyr Val Trp Val
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Ile Ala Gln Gln Leu Leu Val Gly Leu Ser Val Thr Ala Lys Pro Ile
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Thr Val Thr Pro Pro Ser Phe Pro Cys Val Gln Ala Arg Val Glu Gly
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<400> 233
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<213> 恶臭假单孢菌
<400> 234
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Ala
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<212> PRT
<213> 恶臭假单孢菌
<400> 235
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500 505 510
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515 520 525
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<400> 236
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Ala
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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<210> 238
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<213> 虫媒假单孢菌
<400> 239
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165 170 175
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180 185 190
Ser Gln Leu Arg Gly Asn Val Ser Val Ser Thr Phe Asp Ala Lys Leu
195 200 205
Leu Glu Ser Ser Tyr Ala Gly Ile Arg Gln Ser Val Ile Glu Lys Leu
210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260
<210> 240
<211> 89
<212> PRT
<213> 绿针假单胞菌
<400> 240
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<210> 241
<211> 89
<212> PRT
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 241
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85
<210> 242
<211> 89
<212> PRT
<213> 罗氏假单孢菌
<400> 242
Met Ser Ala Gln Glu Asn Leu Val Gly Gly Trp Thr Pro Tyr His Val
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<212> PRT
<213> 嗜水气单胞菌
<400> 243
Met Ser Glu Gln Ala Val Leu Leu Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ala Lys Asp Gln Ala Val Phe Asn Gln Ala Leu Glu Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Thr Pro Phe Glu Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Lys Ser Thr Val Pro Leu Pro Asn
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Gln Ser Leu Asp Gly
65 70 75 80
Ser Ala His Ile Thr Ser Ile Thr Pro Ile
85 90
<210> 244
<211> 90
<212> PRT
<213> 维氏气单胞菌
<400> 244
Met Ser Glu Gln Ala Val Leu Val Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Thr Ala Glu Asp Gln Ala Val Phe Asn Gln Ala Met Lys Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Val Pro Phe Glu Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Lys Ser Thr Val Pro Leu Ala Lys
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Lys Ser Leu Asp Gly
65 70 75 80
Asp Ala His Ile Thr Ser Ile Thr Pro Ile
85 90
<210> 245
<211> 90
<212> PRT
<213> 鱼嗜血杆菌
<400> 245
Met Ser Glu Gln Ala Val Leu Leu Gly Gly Trp Thr Ala Tyr His Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ala Lys Asp Gln Ala Val Phe Asp Leu Ala Leu Lys Gly Phe
20 25 30
Val Gly Val Gln Tyr Gln Pro Phe Glu Val Ser Thr Gln Val Val Ala
35 40 45
Gly Thr Asn Tyr Arg Phe Lys Cys Lys Thr Thr Val Pro Leu Pro Asn
50 55 60
Pro Ile His Gly Glu Ala Val Val Gln Ile Phe Gln Ser Leu Asp Gly
65 70 75 80
Ser Ala His Ile Thr Ser Ile Thr Pro Ile
85 90

Claims (20)

1.一种杀昆虫多肽，该杀昆虫多肽选自：
a)PIP-45-1多肽，其包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
b)PIP-45-1多肽，其包含选自以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ IDNO：234和SEQ ID NO：236；
c)PIP-45-2多肽，其包含与SEQ ID NO：2的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
d)PIP-45-2多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235或SEQID NO：237；
e)PIP-64-1多肽，其包含与SEQ ID NO：53相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
f)PIP-64-1多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQID NO：238；
g)PIP-64-2多肽，其包含与SEQ ID NO：54的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
h)PIP-64-2多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQID NO：59或SEQ ID NO：239；
i)PIP-74-1多肽，其包含与SEQ ID NO：73相比具有大于75％序列同一性的氨基酸序列；
j)PIP-74-1多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQID NO：77；
k)PIP-74-2多肽，其包含与SEQ ID NO：74的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
l)PIP-74-2多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQID NO：78；
m)PIP-75多肽，其包含与SEQ ID NO：79的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
n)PIP-75多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ IDNO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87；
o)PIP-77多肽，其包含与SEQ ID NO：88的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；和
p)PIP-77多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245。
2.一种杀昆虫组合物，其包含如权利要求1所述的PIP-45-1多肽和如权利要求1所述的PIP-45-2多肽。
3.一种杀昆虫组合物，其包含如权利要求1所述的PIP-64-1多肽。
4.一种杀昆虫组合物，其包含如权利要求1所述的PIP-64-1多肽和如权利要求1所述的PIP-64-2多肽。
5.一种杀昆虫组合物，其包含如权利要求1所述的PIP-74-1多肽和如权利要求1所述的PIP-74-2多肽。
6.一种杀昆虫组合物，其包含如权利要求1所述的PIP-75多肽。
7.一种杀昆虫组合物，其包含如权利要求1所述的PIP-77多肽。
8.一种编码杀昆虫多肽的重组多核苷酸，该杀昆虫多肽选自：
a)PIP-45-1多肽，其包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
b)PIP-45-1多肽，其包含选自以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ IDNO：234和SEQ ID NO：236；
c)PIP-45-2多肽，其包含与SEQ ID NO：2的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
d)PIP-45-2多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：18、SEQ IDNO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：235或SEQID NO：237；
e)PIP-64-1多肽，其包含与SEQ ID NO：53相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
f)PIP-64-1多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：58或SEQID NO：238；
g)PIP-64-2多肽，其包含与SEQ ID NO：54的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
h)PIP-64-2多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQID NO：59或SEQ ID NO：239；
i)PIP-74-1多肽，其包含与SEQ ID NO：73相比具有大于75％序列同一性的氨基酸序列；
j)PIP-74-1多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75或SEQID NO：77；
k)PIP-74-2多肽，其包含与SEQ ID NO：74的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
l)PIP-74-2多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76或SEQID NO：78；
m)PIP-75多肽，其包含与SEQ ID NO：79的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；
n)PIP-75多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ IDNO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86或SEQ ID NO：87；
o)PIP-77多肽，其包含与SEQ ID NO：88的氨基酸序列相比具有大于80％序列同一性的氨基酸序列；和
p)PIP-77多肽，其包含以下各项的氨基酸序列：SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、SEQ IDNO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242或SEQ ID NO：245。
9.如权利要求8所述的重组多核苷酸，其中该重组多核苷酸选自：
a)SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ IDNO：146、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：220或SEQ ID NO：222的多核苷酸；
b)SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ IDNO：147、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：221或SEQ ID NO：223的多核苷酸；
c)SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：165或SEQ ID NO：224的多核苷酸；
d)SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：59和SEQ ID NO：239的多核苷酸；
e)SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182和SEQ ID NO：184的多核苷酸；
f)SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：183和SEQ ID NO：185的多核苷酸；
g)SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193和SEQ ID NO：194的多核苷酸；和
h)SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ IDNO：207、SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228和SEQ ID NO：231的多核苷酸。
10.一种DNA构建体，该DNA构建体包含如权利要求8或9所述的重组多核苷酸和有效地连接至该重组多核苷酸的异源调节序列。
11.一种转基因植物或植物细胞，该转基因植物或植物细胞包含如权利要求10所述的DNA构建体。
12.一种抑制农业昆虫有害生物群体的生长或杀灭农业昆虫有害生物群体的方法，该方法包括将该昆虫有害生物群体与杀昆虫有效量的如权利要求1所述的PIP-45-1多肽和如权利要求1所述的PIP-45-2多肽接触。
13.一种抑制农业昆虫有害生物的生长或杀灭农业昆虫有害生物的方法，该方法包括将该昆虫有害生物与杀昆虫有效量的如权利要求1所述的PIP-64-1多肽接触。
14.一种抑制昆虫有害生物的生长或杀灭昆虫有害生物的方法，该方法包括将该昆虫有害生物与杀昆虫有效量的如权利要求1所述的PIP-64-1多肽和如权利要求1所述的PIP-64-2多肽接触。
15.一种抑制昆虫有害生物的生长或杀灭昆虫有害生物的方法，该方法包括将该昆虫有害生物与杀昆虫有效量的如权利要求1所述的PIP-74-1多肽和如权利要求1所述的PIP-74-2多肽接触。
16.一种抑制昆虫有害生物的生长或杀灭昆虫有害生物的方法，该方法包括将该昆虫有害生物与杀昆虫有效量的如权利要求1所述的PIP-75多肽接触。
17.一种抑制昆虫有害生物的生长或杀灭昆虫有害生物的方法，该方法包括将该昆虫有害生物与杀昆虫有效量的如权利要求1所述的PIP-77多肽接触。
18.一种控制转基因植物中鳞翅目(Lepidoptera)和/或鞘翅目(Coleoptera)昆虫侵袭并提供昆虫抗性管理的方法，该方法包括在该植物中表达如权利要求8或9所述的多核苷酸。
19.如权利要求12至18中任一项所述的方法，其中该昆虫有害生物或昆虫有害生物群体对Bt毒素有抗性。
20.至少一种如权利要求1所述的杀昆虫多肽用于抑制昆虫或昆虫群体的生长或杀灭昆虫或昆虫群体的用途。
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