CN116004426B - 用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌av1及其应用 - Google Patents

用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌av1及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116004426B
CN116004426B CN202211010406.9A CN202211010406A CN116004426B CN 116004426 B CN116004426 B CN 116004426B CN 202211010406 A CN202211010406 A CN 202211010406A CN 116004426 B CN116004426 B CN 116004426B
Authority
CN
China
Prior art keywords
enterobacter
tobacco mosaic
mosaic virus
application
preventing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211010406.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116004426A (zh
Inventor
王芳
王可
徐传涛
严丹侃
周本国
马超
陈莹
张浩苏
刘静
张永辉
夏春
谢强
王飞
蒲进平
肖文洋
雷波
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Plant Protection and Agricultural Products Quality Safety of AAAS
Original Assignee
Institute of Plant Protection and Agricultural Products Quality Safety of AAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Plant Protection and Agricultural Products Quality Safety of AAAS filed Critical Institute of Plant Protection and Agricultural Products Quality Safety of AAAS
Priority to CN202211010406.9A priority Critical patent/CN116004426B/zh
Publication of CN116004426A publication Critical patent/CN116004426A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116004426B publication Critical patent/CN116004426B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌AV1及其应用，所述阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)AV1于2022年7月27日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：M 20221183。该阿氏肠杆菌AV1对烟草花叶病毒的钝化作用突出，抑制率达到70％，远高于常规药剂宁南霉素的防效(抑制率仅为47％)，并且阿氏肠杆菌AV1是筛选出的天然病毒接抗菌对环境无污染，不会破坏生物多样性。

Description

用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌AV1及其应用
技术领域
本发明涉及烟草花叶病毒防治技术领域，具体涉及用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌AV1及其应用。
背景技术
烟草花叶病毒病是烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus，TMV)引起的一种主要植物病毒病害，TMV通过机械摩擦传播，如TMV存活在土壤中，通过植株根部的微伤口侵染，以及田间农事操作过于频繁也利于病毒传播危害加重，植物感染TMV后叶片表现花叶症状，严重影响作物的品质和产量，对产业的发展具有很大威胁。
病毒属于细胞内专性寄生物，烟株一旦感染，生产上尚无有效的药剂进行彻底控制。因此，筛选天然微生物拮抗菌防治烟草病毒病符合国家绿色防控发展需求，减少化学农药对土壤及环境的污染。
发明内容
本发明为了筛选天然微生物拮抗菌防治烟草病毒病，减少化学农药对土壤及环境的污染，提供了一种防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌AV1及其应用。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的：
一种用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌AV1，所述阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae)AV1于2022年7月27日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：M20221183。
所述阿氏肠杆菌AV1菌落呈椭圆形、平滑均匀，乳白色，革兰氏染色阴性。纯化培养时，在NA培养基(牛肉膏3.0g/L、蔗糖10.0g/L、蛋白胨5.0g/L、酵母提取物1.0g/L，琼脂15.0g/L，pH＝7.1)上采用涂布平板法，28℃培养24h。
所述阿氏肠杆菌AV1的16S rDNA基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
所述阿氏肠杆菌AV1的16S rDNA基因引物为：
FD1(AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)；和
RD1(AAGGAGGTGATCCAGCC)。
本发明还提供了一种所述阿氏肠杆菌AV1在防治烟草花叶病毒病中的应用，所述阿氏肠杆菌AV1作为拮抗菌株，用于对烟草花叶病毒TMV侵染的抑制。
本发明的有益效果在于：该阿氏肠杆菌AV1对烟草花叶病毒的钝化作用突出，抑制率达到70％，远高于常规药剂宁南霉素的防效(抑制率仅为47％)，并且阿氏肠杆菌AV1是筛选出的天然病毒接抗菌对环境无污染，不会破坏生物多样性。
附图说明
图1为本发明阿氏肠杆菌AV1的菌落形态图；
图2为阿氏肠杆菌AV1与抗病毒常规药剂宁南霉素对TMV钝化作用后的烟草背面示意图；其中，A为菌株AV1与TMV病毒钝化及阴性对照；B是宁南霉素与TMV钝化及阴性对照。
具体实施方式
下面结合附图对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请做出一些非本质的改进和调整。
一种用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌AV1，所述阿氏肠杆菌(Enterobacterasburiae)AV1于2022年7月27日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：M20221183。
阿氏肠杆菌AV1的制备：
一、取样：在已有烟草花叶病发生的烟田中，选取仍然生长健康的烟株，在烟株根部20厘米深度选取烟株根际土壤，备用；
二、研磨：将备用的土壤10g置于灭过菌的三角瓶中，加入20ml无菌水，震荡待液体浑浊，室温静止10分钟，备用；
三、纯化：用无菌枪头吸取静止后的液体上清200微升，在NA培养基(牛肉膏3.0g/L、蔗糖10.0g/L、蛋白胨5.0g/L、酵母提取物1.0g/L，琼脂15.0g/L，pH＝7.1)上采用涂布平板法，28℃培养24h，待分离平皿上菌落长出后，根据微生物菌落的形态、大小、表面结构、边缘结构、质地、光泽、透明度、颜色和产生的可溶性色素等方面特征，用接种环将孤立的单个菌落一一挑出，挑取形态不同的单菌落在相应的空白NA培养基平板上进行划线纯化，并在28℃恒温培养箱中倒置培养24h，得纯化菌株，备用；
如图1所示，AV1菌落呈椭圆形、平滑均匀，乳白色，革兰氏染色阴性。利用Wizard基因组DNA纯化试剂盒(Promega，Madison，WI)提取病原菌DNA，其16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，16SrDNA基因引物为：FD1(AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)；和RD1(AAGGAGGTGATCCAGCC)。利用引物进行PCR扩增，反应体系为50μL(10×PCR buffer 5μL、dNTP 1μL、FD1 2μL、FD2 2μL、Tag酶1μL、模板DNA 2μL、dd H2O 37μL)，扩增条件为：94℃5min；94℃30s，55℃1min，72℃90s，30个循环；72℃1min；10℃20min。将菌株的16SrDNA基因测序结果于NCBI网站上用BLAST软件进行同源性比对，初步判断病原菌为Enterobacterasburiae。
四、筛选：挑选单菌落细菌于已经灭菌的盛有20ml培养基的100ml锥形瓶中，振荡培养(28℃，200r/min)24h，使菌液含量足够大，作发酵备用菌种。
烟草花叶病毒TMV的侵染抑制试验：
本试验利用枯斑三生烟(Nicotiana tabacum var.samsunNN)对TMV的过敏性坏死反应，采用半叶法测定AV1对TMV侵染的抑制率。具体为：将充分发病的TMV毒源幼嫩叶片以1:10(质量比体积)加蒸馏水研磨过滤后，作为病毒供试样品。病毒供试样品与液体NA培养基等体积混合，10min后摩擦枯斑三生烟左半叶(从叶片正面看，下同)，作为对照。将待测AV1与病毒样品等体积混合，10min后摩擦接种于枯斑三生烟的右半叶，作为处理。并采用相同方式，设置宁南霉素(购自于成都嘉叶生物科技有限公司)的处理和对照。
待出现枯斑后，分别记录AV1和宁南霉素组中左、右半叶的枯斑数。三次重复，每株烟接种三片叶。
左、右半叶枯斑数及抑制率如下表：
抑制率(％)＝[(对照枯斑数﹣处理枯斑数)/对照枯斑数]×100％，以平均抑制率进行评价。
可以看出菌株AV1对TMV拮抗作用明显更好，三次重复试验得出，AV1发酵液对TMV的抑制率可达70％，具体的防治效果见图2。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌AV1，其特征在于，所述阿氏肠杆菌（Enterobacter asburiae）AV1于2022年7月27日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：M 20221183。
2.一种如权利要求1所述阿氏肠杆菌AV1在防治烟草花叶病毒病中的应用，其特征在于，所述阿氏肠杆菌AV1作为拮抗菌株，用于对烟草花叶病毒TMV侵染的抑制。
CN202211010406.9A 2022-08-23 2022-08-23 用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌av1及其应用 Active CN116004426B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211010406.9A CN116004426B (zh) 2022-08-23 2022-08-23 用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌av1及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211010406.9A CN116004426B (zh) 2022-08-23 2022-08-23 用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌av1及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116004426A CN116004426A (zh) 2023-04-25
CN116004426B true CN116004426B (zh) 2023-10-20

Family

ID=86019825

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211010406.9A Active CN116004426B (zh) 2022-08-23 2022-08-23 用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌av1及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116004426B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200046768A (ko) * 2018-10-25 2020-05-07 대한민국(농촌진흥청장) 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이를 함유하는 미생물 제제
CN114075267A (zh) * 2015-01-15 2022-02-22 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
CN114480226A (zh) * 2022-04-02 2022-05-13 华南农业大学 一株阿氏肠杆菌及其在防治植物细菌性软腐病中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114075267A (zh) * 2015-01-15 2022-02-22 先锋国际良种公司 杀昆虫蛋白及其使用方法
KR20200046768A (ko) * 2018-10-25 2020-05-07 대한민국(농촌진흥청장) 신규 미생물 엔테로박터 아스뷰리에 ObRS-5 균주 또는 이를 함유하는 미생물 제제
CN114480226A (zh) * 2022-04-02 2022-05-13 华南农业大学 一株阿氏肠杆菌及其在防治植物细菌性软腐病中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Control of Tomato yellow leaf curl virus disease by Enterobacter asburiae BQ9 as a result of priming plant resistance in tomatoes;Li, HW等;《TURKISH JOURNAL OF BIOLOGY》;第40卷(第1期);第150-159页 *
番茄黄化曲叶病毒病的生物防治研究;丁雪玲;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》(第8期);D046-137 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN116004426A (zh) 2023-04-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107937300B (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用
CN108676778B (zh) 一株防治土传青枯病的噬菌体及其应用
CN107136122B (zh) 一种防治马铃薯晚疫病的生防菌剂
CN104946574B (zh) 一株抑制植物病原真菌的枯草芽孢杆菌Baisha2C
CN112779192B (zh) 一株对植物疮痂病有抑制作用的卡氏芽孢菌株dm4-2及其菌剂和应用
CN109452312B (zh) 一种甘蔗内生伯克氏菌及其生防应用
CN115612651B (zh) 一株指示器寡养单胞菌菌株107e3及其应用、产品和方法
CN113549578A (zh) 一株抑制稻瘟病菌和促进种子发芽的暹罗芽孢杆菌BsNlG13及其应用
CN114381391A (zh) 一株铜绿假单胞菌及其在抑制黄瓜土传病害中的应用
CN113913327A (zh) 一株可分泌iaa的耐盐碱促生菌ys-at1及其应用
CN116004426B (zh) 用于防治烟草花叶病毒病的阿氏肠杆菌av1及其应用
CN109355232B (zh) 一种白蚁菌is7及其在植物促生中的应用
CN115960762A (zh) 一种极端东方假单胞菌及其应用
CN111471609A (zh) 具有溶藻活性的假单胞菌及其应用
CN108239612B (zh) 涅斯捷连科氏菌属(Nesterenkonia)菌株X35及其应用
CN112391312B (zh) 一种新种链霉菌及其在防治植物卵菌病害中的应用
CN111040962B (zh) 一种新菌种海洋菌属菌株xaas-72及其在植物抗菌促生中的应用
CN117126770A (zh) 一种阿氏肠杆菌av1在防治烟草辣椒脉斑驳病毒中的应用
CN113373091A (zh) 一株防治水稻纹枯病的生防菌株苏云金芽孢杆菌fj2b-25
CN107815426A (zh) 发酵生产春雷霉素的专用菌株及其应用
CN117546873B (zh) 极端东方假单胞菌在防治辣椒轻斑驳病毒中的应用
CN108192841B (zh) 一种产细菌素的嗜冷菌、细菌素及其提取方法和应用
CN111269855A (zh) 一种溶藻菌、筛选方法及应用
CN112111426A (zh) 一种亚麻假单胞菌及其在大葱紫斑病生防中的应用
CN110760462A (zh) 一种防治姜瘟病的拮抗菌yj32及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant