CN107624796A - 一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，涉及水稻病虫害的生物防治技术领域，本发明的制备方法包括：制备梯度稀释液、制备NA固体培养基、芽胞杆菌分离、制备PDA培养基、制备孢子液。本发明分离得芽胞杆菌能够分泌抗菌物质来抑制病原菌生长，并诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，供试菌株对稻瘟病菌分生抱子的萌发、芽管的延长和附着胞的形成具有显著的抑制作用，本发明的菌株活性物质对稻瘟病菌有较强的抑制作用，对稻瘟病菌菌丝生长抑制率达到80％以上。
Description
技术领域
本发明涉及水稻病虫害的生物防治技术领域，具体涉及一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法。
背景技术
水稻是中国第一大粮食作物，其产量占中国粮食产量的40％左右。而水稻3大病害包括稻瘟病、白叶枯病及稻纹枯病，其中稻瘟病是水稻生产上威胁最大的病害之一，由真菌梨抱霉菌感染引起，可发生在水稻整个发育时期。由于该病流行速度快，在适宜的环境条件下，短时间内即可造成大流行，给水稻生产带来巨大损失。目前，农业上主要采取抗病育种和化学药剂来逐渐控制稻瘟病。但由于稻瘟病菌的遗传背景复杂，易变异，抗病品种难跟上致病菌生理小种的变异速度，常常导致一个新的具有抗病性的水稻品种在种植几年后丧失抗性。而化学防治，不仅会污染环境，降低水稻质量，破坏生态，还导致病菌的耐药性不断增加从而降低防效。因此，探索新的方法来控制和解决稻瘟病越来越受关注。因此寻找稻瘟病有效的、低毒性、不受病原菌抗性影响的生物防治途径对于粮食安全至关重要。
发明内容
根据现有技术中存在的问题，本发明提供了一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，本发明的微生物农药低毒性、不受病原菌抗性影响，且对稻瘟病菌的抑制率高。
本发明采用以下技术方案：
一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：选取健康水稻叶片，剪成5cm的叶段，放入装有质量浓度75％乙醇的三角瓶中振荡洗涤2次后倒掉乙醇，加入无菌水浸泡30min后梯度稀释，得梯度稀释液；
步骤二：制备NA固体培养基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸馏水溶解，定容至1L，PH调至7±0.1，分装后121℃灭菌20min；
步骤三：吸取梯度稀释液涂布于NA固体培养基上，待吹干后，在30℃的恒温培养箱中倒置培养48h，挑取单菌落，在NA固体培养基上梯度划线再次获得单菌落，将获得的单菌落保存于NA固体培养基试管斜面备用；
步骤四：制备PDA培养基，将马铃薯去皮洗净，称取200g马铃薯并切成小块，加水煮沸20-30分钟，用八层纱布过滤，加入20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖20克，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升定容，115℃灭菌20分钟；
步骤五：NA固体培养基试管斜面上挑取单菌落，划线接种于PDA培养基上，置于25℃恒温光照条件下培养6d后，用接种环挑取菌落至无菌水中，配成孢子液，所述的孢子液即为微生物农药。
优选的，步骤一中所述的梯度稀释共稀释2次，每次稀释2倍。
优选的，步骤五中所述的孢子液浓度为106－107CFU/mL。
优选的，所述的单菌落为芽胞杆菌。
一种防治稻瘟病的微生物农药的应用，所述的微生物农药用于防治稻瘟病。
本发明的有益效果在于：
1)芽胞杆菌能够分泌抗菌物质来抑制病原菌生长，并诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，供试菌株对稻瘟病菌分生抱子的萌发、芽管的延长和附着胞的形成具有显著的抑制作用，本发明的菌株活性物质对稻瘟病菌有较强的抑制作用，对稻瘟病菌菌丝生长抑制率达到80％以上。
2)本发明的微生物农药可以调控水稻植株的生长发育进程，微生物农药包含有益的细茵群落在植株生长中具有促生、抗病、抗逆等功能。根据植物微生态理论，这些细菌和宿主之间在长期的进化过程中能够建立互惠互利的关系。从生物间巧生互作等关系考虑，这些细菌将更有利于生物的定殖，可更好地发挥生防作用。
3)本发明采用生物防治是发展绿色水稻产业的重要手段，芽胞杆菌是防治稻瘟病的重要生防微生物。从植物中寻找具有生物活性的化合物，直接将其发成为新农药，是目前农药研发的一条重要途径。
具体实施方式
下面通过对实施例的描述，对本发明作进一步详细的说明，以帮助本领域技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
实施例1
一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：选取健康水稻叶片，剪成5cm的叶段，放入装有质量浓度75％乙醇的三角瓶中振荡洗涤2次后倒掉乙醇，加入无菌水浸泡30min后梯度稀释，得梯度稀释液；
步骤二：制备NA固体培养基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸馏水溶解，定容至1L，PH调至7±0.1，分装后121℃灭菌20min；
步骤三：吸取梯度稀释液涂布于NA固体培养基上，待吹干后，在30℃的恒温培养箱中倒置培养48h，挑取单菌落，在NA固体培养基上梯度划线再次获得单菌落，将获得的单菌落保存于NA固体培养基试管斜面备用；
步骤四：制备PDA培养基，将马铃薯去皮洗净，称取200g马铃薯并切成小块，加水煮沸20-30分钟，用八层纱布过滤，加入20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖20克，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升定容，115℃灭菌20分钟；
步骤五：NA固体培养基试管斜面上挑取单菌落，划线接种于PDA培养基上，置于25℃恒温光照条件下培养6d后，用接种环挑取菌落至无菌水中，配成孢子液，所述的孢子液即为微生物农药。
步骤一中所述的梯度稀释共稀释2次，每次稀释2倍。
步骤五中所述的孢子液浓度为106－107CFU/mL。
所述的单菌落为芽胞杆菌。
Claims (5)
1.一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：选取健康水稻叶片，剪成5cm的叶段，放入装有质量浓度75％乙醇的三角瓶中振荡洗涤2次后倒掉乙醇，加入无菌水浸泡30min后梯度稀释，得梯度稀释液；
步骤二：制备NA固体培养基，采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g，加蒸馏水溶解，定容至1L，PH调至7±0.1，分装后121℃灭菌20min；
步骤三：吸取梯度稀释液涂布于NA固体培养基上，待吹干后，在30℃的恒温培养箱中倒置培养48h，挑取单菌落，在NA固体培养基上梯度划线再次获得单菌落，将获得的单菌落保存于NA固体培养基试管斜面备用；
步骤四：制备PDA培养基，将马铃薯去皮洗净，称取200g马铃薯并切成小块，加水煮沸20-30分钟，用八层纱布过滤，加入20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖20克，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升定容，115℃灭菌20分钟；
步骤五：NA固体培养基试管斜面上挑取单菌落，划线接种于PDA培养基上，置于25℃恒温光照条件下培养6d后，用接种环挑取菌落至无菌水中，配成孢子液，所述的孢子液即为微生物农药。
2.根据权利要求1所述的一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，其特征在于：步骤一中所述的梯度稀释共稀释2次，每次稀释2倍。
3.根据权利要求1所述的一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，其特征在于：步骤五中所述的孢子液浓度为106－107CFU/mL。
4.根据权利要求1所述的一种防治稻瘟病的微生物农药的制备方法，其特征在于：所述的单菌落为芽胞杆菌。
5.一种如权利要求1所述的防治稻瘟病的微生物农药的应用，其特征在于：所述的微生物农药用于防治稻瘟病。
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