CN104450546A - 一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的sy-17菌株及其生防菌剂 - Google Patents

一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的sy-17菌株及其生防菌剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17菌株及其生防菌剂，其特点是该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号：CGMCC No:7985；将可溶性淀粉10～30克/升，蛋白胨5～15克/升，NaCl为5～15克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为67～400克/升，发酵温度5～50℃，接种量5～30克/升，pH值1～12，转数80～200转/分钟；解淀粉芽孢杆菌SY-17菌株种子量按每平方厘米0.3～15个菌落数；转速80～200转/分钟，振荡发酵培养12～120小时即成SY-17生防菌剂。本发明的生防菌剂对辣椒枯萎病具有较好的防治效果。

Description

一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17菌株及其生防菌剂
技术领域
本发明涉及一种有益微生物及其制备的生防菌剂，特别是涉及一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17生防菌株及其制备的生防菌剂，属于生物制剂技术领域。 
背景技术
辣椒枯萎病由尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）引起，该病分布广泛，在吉林、甘肃、陕西、北京、四川、湖南、浙江、山西、广西等地均有发生，并造成严重经济损失。该病发病率一般为15％～30％，危害严重时可达70％～80％，甚至全田枯萎死亡。目前，对于辣椒枯萎病的防治主要以化学药剂为主，但随着化学农药的大量使用，产生了环境污染、农药抗性及农药残留等问题。 
植物病害生物防治是指在农业生态系统中通过控制改变寄主植物的微生态环境，创造有利于寄主而不利于病原物或者在寄主与病原物的相互作用过程中有利于寄主而不利于病原物的环境，最终达到防治病害的目的。生物防治具有许多特点优于化学防治，如不污染环境，不产生抗性，对人畜安全，能参与调控生态环境，保持生态平衡，起到长效的作用。许多细菌存在于植物根际和地上部分，与植物存在密切联系，因此生防细菌在植物病害防治中占有非常重要的地位。生防细菌的主要优势包括：①生防细菌因其生防机制的复杂多样化而使病原菌很难产生抗药性；②生防细菌大多分离自农田生态系统中，通常与病原菌具有相同或者相近的生态适应性，而且与寄主植物的亲和性也较高，定殖较其它微生物更容易，加之其繁殖速度快，使得应用生防细菌的活体防治植物病害成为可能。③与真菌或放线菌相比，生防细菌的繁殖速度相当惊人，在适宜的环境条件下，迅速发生分裂繁殖，一天便可产生数以千万的后代（何礼远，1985），更有利于它们占领空间及生存竞争；④生防细菌的应用有利于植物根围有益微生物的生态平衡。我国最早使用生防菌剂乳酶生来治疗肠道疾患，80年代初大连医科大学康白教授首先研制成功促菌生（蜡杆芽胞杆菌）以来，此后各种活菌生防菌剂相继研制成功。1999年孔建研究发现枯草芽孢杆菌B-903通过其产生的抗菌物质使病菌畸形、细胞壁崩溃和胞内物质外泄等作用，可有效防治菠菜枯萎病的发生；1996年Tang W.H研究表明，枯草芽孢杆菌产生的脂肤抗生素Iturin A2浓度为100μg·g-1时，可以有效防治枯萎病菌对番茄的侵染。由此可见，国内外有关各种枯萎病的研究很多，但对辣椒枯萎病的研究却很少，有关尖孢镰刀菌的生防菌剂种类也较少，且防治效果不稳定。因此，利用生防菌剂高效、稳定地防治辣椒枯萎病的技术将具有广阔的开发前景。 
发明内容
本发明的目的就是针对现有技术存在的上述问题，自主从土壤中分离筛选得到微生物SY-17菌株，经鉴定为解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)；并提供一种用于预防和治疗由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起辣椒土传病害的SY-17生防菌剂。 
本发明给出的这种对辣椒枯萎菌具有较好的防治作用的生防菌株，其特点是从土壤中分离筛选得到微生物SY-17菌株。 
微生物(株)：解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens) SY-17。 
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心。 
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 
保藏时间：2013年08月08日。 
保藏编号：CGMCC NO:7985。 
SY-17菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），经盆栽及田间试验结果表明，该菌株对辣椒枯萎菌具有较好的防治作用，且作用稳定、持效期长。盆栽试验防治效果可达70.83～85.91%，在田间试验中，本发明的生防菌剂防治效果也达到了78.76～83.15%，高于25%腈菌唑乳油800倍两种化学药剂的防治效果。本发明给出的这种能防治由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起辣椒土传病害的生防菌剂是涉及有益微生物制成SY-17生防菌剂，本发明可为辣椒枯萎病的生物防治提供新的材料与途径，具有广阔的开发与应用前景。 
为实现本发明的目的，本发明给出的技术方案为：这种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17生防菌剂，采用解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens) SY-17菌株制备，其特点是将可溶性淀粉10～30克/升，蛋白胨5～15克/升，NaCl为5～15克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为67～400克/升，发酵温度5～50℃，接种量5～30克/升，pH值1～12；解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17菌株种子量按每平方厘米0.3～15个菌落数（cfu/cm2）；转速80～200转/分钟，振荡发酵培养12～120小时即成。 
为更好地实现本发明的目的，优选的防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17生防菌剂，其特点是：将可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/升，NaCl为10克/升，其余为水，装液量为267克/升，将解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17生防菌株种子培养液接种量20克/升接入母液中，发酵温度30℃，pH7；SY-17菌株种子量按每平方厘米7个菌落数（cfu/cm2），转速140转/分钟，振荡发酵培养24小时即成。 
与现有技术相比，本发明的SY-17生防菌剂的有益效果。 
本发明的SY-17生防菌剂对辣椒枯萎病具有较好的防治效果：盆栽试验结果表明施用SY-17生防菌剂后对辣椒枯萎病的防效为74.90～81.85％，比多菌灵800倍防效稍低。但显著高于25%腈菌唑乳油800倍。田间试验防治效果看出SY-17生防菌剂对辣椒疫病防治效果为73.09%～78.76%，明显高于25%腈菌唑乳油800倍。SY-17菌株来源于土壤，因此对植物及人、畜安全，并且在土壤中具有较好的生长与繁殖能力，该菌剂可以通过改变土壤微生态区系及土壤酶活性，从而改善土壤微生态环境，调节微生态平衡，且避免了辣椒植株产生抗药性，提高了辣椒果实的品质，保证了人体健康。应用前景广阔。 
具体实施方式
实施例1。 
1. 种子培养液的制备。 
解淀粉芽孢杆菌SY-17菌株，由NA培养基活化培养，NA培养基成分: 牛肉膏3克/升、蛋白胨5克/升、酵母浸膏1克/升，葡萄糖10克/升，琼脂18克/升、蒸馏水1.0升，pH 7，在28℃培养箱中活化24 小时后，用接种针接种于100毫升 NB培养基的250毫升三角瓶中，NB培养成分: 牛肉膏3克/升、蛋白胨10克/升、葡萄糖2.5克/升，NaCl 10克/升，蒸馏水1.0升，pH7，28℃ 120转/分钟，振荡培养24小时，此时培养液为种子培养液。 
2. SY-17生防菌剂A配比的制备。 
将可溶性淀粉10克/升，蛋白胨5克/升，NaCl为5克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为67克/升，发酵温度5℃，接种量5克/升，pH值1；解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17菌株种子量按每平方厘米0.3个菌落数（cfu/cm2）；转速80转/分钟，振荡发酵培养12小时即成。 
3. SY-17生防菌剂B配比的制备。 
本发明的SY-17生防菌剂的母液为可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/升，NaCl为10克/升，其余为水，装液量为267克/升，将解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17生防菌株种子培养液接种量2％接入母液中，发酵温度30℃，pH7；SY-17菌株种子量按每平方厘米7个菌落数（cfu/cm2）；转速140转/分钟，振荡发酵培养24小时即成。 
4. SY-17生防菌剂C配比的制备。 
将可溶性淀粉30克/升，蛋白胨15克/升，NaCl为15克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为400克/升，发酵温度50℃，接种量30克/升，pH值12；解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17菌株种子量按每平方厘米15个菌落数（cfu/cm2）；SY-17菌株种子量按每平方厘米15个菌落数（cfu/cm2）；转速200转/分钟，振荡发酵培养120小时即成。 
将制备的生防菌剂于盆栽条件进行防治辣椒枯萎病试验。本试验每个配比（A、B和C）设6个处理：①接种SY-17生防菌剂100倍，②接种SY-17生防菌剂300倍，③接种SY-17生防菌剂600倍，④50％多菌灵可湿性粉剂800倍，⑤25%腈菌唑乳油800倍，⑥只接种辣椒枯萎病菌（CK）。每个处理辣椒苗60株，3次重复。盆栽试验是将培养好的SY-17生防菌剂和化学药剂提前施植株根部土壤中，24小时将辣椒枯萎病菌接种辣椒植株根部土壤中。接种25天后调查辣椒发病情况，调查病株数，计算发病率和防治效果。田间试验选择在往年辣椒设施生产上枯萎病发生较重的地块进行。 
（1）盆栽防效试验结果分析。 
SY-17生防菌剂A配比盆栽防效试验结果表明（表1）：SY-17生防菌剂对辣椒枯萎病有较好的防治效果。其防效为70.83～80.26％，其中SY-17生防菌剂100倍防效最高；50％多菌灵可湿性粉剂800倍的防效为86.21％，25%腈菌唑乳油800倍的防效为64.80％。在α=0.05水平上，各处理间均有显著差异。 
表1 SY-17生防菌剂A配比防治辣椒枯萎病盆栽防效分析。 
处理 调查总数 发病率（％） 防效（％）
SY-17生防菌剂 100倍 9.65 80.26b
SY-17生防菌剂 300倍 11.49 76.50c
SY-17生防菌剂 600倍 14.26 70.83d
50％多菌灵可湿性粉剂 800倍 6.67 86.21a
25%腈菌唑乳油 800倍 17.22 64.80e
CK 清水 48.89 -
SY-17生防菌剂B配比盆栽防效试验结果表明（表2）：SY-17生防菌剂对辣椒枯萎病有较好的防治效果。其防效为74.90～81.85％，其中SY-17生防菌剂100倍防效最高；50％多菌灵可湿性粉剂800倍的防效为86.21％，25%腈菌唑乳油800倍的防效为64.80％。在α=0.05水平上，SY-17生防菌剂100倍、300倍与600倍之间有显著差异，但均显著高于25%腈菌唑乳油800倍的防效，SY-17生防菌剂100倍与50％多菌灵可湿性粉剂800倍无显著差异。 
表2 SY-17生防菌剂B配比防治辣椒枯萎病盆栽防效分析。 
处理 调查总数 发病率（％） 防效（％）
SY-17生防菌剂 100倍 8.89 81.85ab
SY-17生防菌剂 300倍 10.56 78.36bc
SY-17生防菌剂 600倍 12.22 74.90c
50％多菌灵可湿性粉剂 800倍 6.67 86.21a
25%腈菌唑乳油 800倍 17.22 64.80d
CK 清水 48.89 -
SY-17生防菌剂C配比盆栽防效试验结果表明（表3）：SY-17生防菌剂对辣椒枯萎病有较好的防治效果。其防效为76.99～85.91％，其中SY-17生防菌剂100倍防效最高；50％多菌灵可湿性粉剂800倍的防效为86.21％，25%腈菌唑乳油800倍的防效为64.80％。在α=0.05水平上，除SY-17生防菌剂100倍与50％多菌灵可湿性粉剂800倍无显著差异外，其他处理间无显著差异。 
表3 SY-17生防菌剂C配比防治辣椒枯萎病盆栽防效分析。 
处理 调查总数 发病率（％） 防效（％）
SY-17生防菌剂 100倍 6.89 85.91a
SY-17生防菌剂 300倍 8.95 81.69b
SY-17生防菌剂 600倍 11.25 76.99c
50％多菌灵可湿性粉剂 800倍 6.67 86.21a
25%腈菌唑乳油 800倍 17.22 64.80d
CK 清水 48.89 -
（2）田间防效试验结果分析。 
SY-17生防菌剂A配比田间防效试验结果表明（表4）：SY-17生防菌剂对辣椒枯萎病有较好的防治效果。其防效为68.60%～74.34%，其中SY-17生防菌剂100倍防效最高；50％多菌灵可湿性粉剂800倍的防效为84.53％，25%腈菌唑乳油800倍的防效为65.47％。在α=0.05水平上，除SY-17生防菌剂300倍、600倍间无显著差异外，其他处理间有显著差异。 因此综合盆栽和田间防效试验看出，本发明的SY-17生防菌剂是防治辣椒枯萎病的较好药剂。 
表4 Y-17生防菌剂A配比防治辣椒枯萎病田间防效分析。 
处理 浓度 发病率（%） 防治效果（%）
SY-17生防菌剂 100倍 7.34 74.34b
SY-17生防菌剂 300倍 8.84 69.09c
SY-17生防菌剂 600倍 8.98 68.60c
50％多菌灵可湿性粉剂 800倍  4.44  84.53a
25%腈菌唑乳油 800倍  10.00  65.47d
CK 清水  28.60 —
Y-17生防菌剂B配比田间防效试验结果表明（表5）：SY-17生防菌剂对辣椒枯萎病有较好的防治效果。其防效为73.09%～78.76%，其中SY-17生防菌剂100倍防效最高；50％多菌灵可湿性粉剂800倍的防效为84.53％，25%腈菌唑乳油800倍的防效为65.47％。在α=0.05水平上，SY-17生防菌剂100倍、300倍、600倍三者之间无显著差异，但均显著高于25%腈菌唑乳油800倍的防效，SY-17生防菌剂100倍与50％多菌灵可湿性粉剂800倍无显著差异。 因此综合盆栽和田间防效试验看出，本发明的SY-17生防菌剂是防治辣椒枯萎病的较好药剂。 
表5 Y-17生防菌剂B配比防治辣椒枯萎病田间防效分析。 
处理 浓度 发病率（%） 防治效果（%）
SY-17生防菌剂 100倍 6.11 78.76ab
SY-17生防菌剂 300倍 6.67 76.91b
SY-17生防菌剂 600倍 7.78 73.09b
50％多菌灵可湿性粉剂 800倍 4.44 84.53a
25%腈菌唑乳油 800倍 10.00 65.47c
CK 清水 28.60 —
Y-17生防菌剂C配比田间防效试验结果表明（表6）：SY-17生防菌剂对辣椒枯萎病有较好的防治效果。其防效为76.01%～83.15%，其中SY-17生防菌剂100倍防效最高；50％多菌灵可湿性粉剂800倍的防效为84.53％，25%腈菌唑乳油800倍的防效为65.47％。在α=0.05水平上，SY-17生防菌剂100倍、300倍与50％多菌灵可湿性粉剂800倍无显著差异。因此综合盆栽和田间防效试验看出，本发明的SY-17生防菌剂是防治辣椒枯萎病的较好药剂。 
表6 Y-17生防菌剂C配比防治辣椒枯萎病田间防效分析 
处理 浓度 发病率（%） 防治效果（%）
SY-17生防菌剂 100倍 4.82 83.15a
SY-17生防菌剂 300倍 5.78 79.79ab
SY-17生防菌剂 600倍 6.86 76.01b
50％多菌灵可湿性粉剂 800倍 4.44    84.53a
25%腈菌唑乳油 800倍 10.00  65.47c
CK 清水 28.60 —

Claims (5)

1.一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17菌株，为从土壤中分离筛选得到，其特征在于：SY-17菌株为解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens) SY-17，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏时间：2013年08月08 日，保藏编号：CGMCC NO:7985 。
2.一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17生防菌剂，采用权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens) SY-17菌株制备，其特征在于将可溶性淀粉10～30克/升，蛋白胨5～15克/升，NaCl为5～15克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为67～400克/升，发酵温度5～50℃，接种量5～30克/升，pH值1～12，转数80～200转/分钟；解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17菌株种子量按每平方厘米0.3～15个菌落数（cfu/cm2）；转速80～200转/分钟，振荡发酵培养12～120小时即成。
3.根据权利要求2所述的一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17生防菌剂，其特征在于将可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/升，NaCl为10克/升，其余为水，装液量为267克/升，将解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17生防菌株种子培养液接种量20克/升接入母液中，发酵温度30℃，pH7；SY-17菌株种子量按每平方厘米7个菌落数（cfu/cm2）；转速140转/分钟，振荡发酵培养24小时即成。
4.根据权利要求2所述的一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17生防菌剂，其特征在于将可溶性淀粉20克/升，蛋白胨20克/升，NaCl为10克/升，其余为水，装液量为267克/升，将解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17生防菌株种子培养液接种量2％接入母液中，发酵温度30℃，pH7；SY-17菌株种子量按每平方厘米7个菌落数（cfu/cm2）；转速140转/分钟，振荡发酵培养24小时即成。
5.根据权利要求2所述的一种防治由镰刀菌引起辣椒土传病害的SY-17生防菌剂，其特征在于将将可溶性淀粉30克/升，蛋白胨15克/升，NaCl为15克/升，其余为水，配成母液；将母液按装液量为400克/升，发酵温度50℃，接种量30克/升，pH值12；解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SY-17菌株种子量按每平方厘米15个菌落数（cfu/cm2）；SY-17菌株种子量按每平方厘米15个菌落数（cfu/cm2）；转速200转/分钟，振荡发酵培养120小时即成。
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