CN104472552A - 一种黄粉虫提取物及其分离方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种黄粉虫提取物及其分离方法和应用，该分离方法步骤包括：S1，黄粉虫乙醇索氏提取：将黄粉虫粉与乙醇在索氏提取器中回流提取3-7小时；S2，将步骤S1所得乙醇索氏提取液浓缩、干燥得黄粉虫提取物，不仅能够防治多种植物病害，而且能够促进植物生长，对提高作物产量和提升品质均具有积极作用且黄粉虫资源丰富，价格低廉，同时本发明的分离方法简单易实现，因此，本发明的黄粉虫提取物是一种具有较大应用前景的生物防治新品种。

Description

一种黄粉虫提取物及其分离方法和应用

技术领域

本发明涉及生物防治领域，具体涉及动物源农药，更具体的涉及一种黄粉虫提取物及其分离方法和应用。

背景技术

生物农药相对于化学农药来说一般具有绿色环境友好、低残留和不易产生抗药性等特性，因此近年来一直是国际国内的研究热点。生物农药主要包括植物源、动物源农药和微生物源农药。其中动物源农药的研究和应用主要集中在动物毒素、昆虫激素、昆虫信息素和天敌中。昆虫是地球上数量最多的动物群体，已发现超过100万种，其中单鞘翅目中所含的总数就比其它所有动物界中的总数还多。如此数量巨大的昆虫，蕴藏着巨大的资源有待于开发利用。很多昆虫可以生存在异常恶劣环境条件中的原因是，其体内具有一定量的抗菌物质，可以高效地杀死或抑制病源微生物。在医药领域昆虫源抗菌物质具有一定研究，但是由于目前应用研究发现的昆虫源昂贵且其提纯过程较为复杂，在农药领域的应用研究极少，限制了此类抗菌物质的应用发展。

发明内容

本发明为了解决现有的昆虫源抗菌物质提纯过程复杂昂贵，应用受限的技术问题，提供了一种具有较大应用前景的生物防治菌株黄粉虫提取物及其分离方法和应用。

本发明的第一个目的是提供一种黄粉虫提取物的分离方法，其步骤包括：S1，黄粉虫乙醇索氏提取：将黄粉虫粉与乙醇在索氏提取器中回流提取3-7小时得乙醇索氏提取液；S2，将步骤S1所得乙醇索氏提取液浓缩、干燥得黄粉虫提取物。

其中，黄粉虫又叫面包虫，在昆虫分类学上隶属于鞘翅目、拟步行虫科、粉甲虫属(拟步行虫属)。原产于北美洲，50年代从苏联引进我国饲养，黄粉虫干品含脂肪30wt％，含蛋白质高达50wt％以上，并含有多种常规和微量元素，黄粉虫因其养殖投资少、技术简单易学等特点，已经被广泛工厂化养殖，被昆虫专家称为是继家蚕和蜜蜂之后的第三大昆虫产业。

本发明的第二个目的是提供上述分离方法制得的黄粉虫提取物。

本发明的第三个目的是提供上述黄粉虫提取物的应用，该黄粉虫提取物用于防治植物病害。

本发明所得的黄粉虫提取物具有较强的抗菌性，经过室内生物活性测定发现其对水稻纹枯、小麦赤霉等多种植物病原菌均有抑制作用，利用本发明的黄粉虫提取物不仅能够防治多种植物病害，而且能够促进植物生长，对提高作物产量和提升品质均具有积极作用。且黄粉虫资源丰富，价格低廉，同时本发明的分离方法简单易实现，因此，本发明的黄粉虫提取物将是一种具有较大应用前景的生物防治新品种。

具体实施方式

为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供了一种黄粉虫提取物的分离方法，其步骤包括：S1，黄粉虫乙醇索氏提取：将黄粉虫粉与乙醇在索氏提取器中回流提取3-7小时，优选为5小时，得乙醇索氏提取液；S2，将步骤S1所得乙醇索氏提取液浓缩、干燥得黄粉虫提取物，能提供一种具有较大应用前景的生物防治菌株，不仅能够防治多种植物病害，而且能够促进植物生长，对提高作物产量和提升品质均具有积极作用。

优选，黄粉虫粉与乙醇的质量比为1:5-1:10，进一步优选为1:8，使索氏提取更充分。

优选，回流的温度为70-78℃，进一步优选为74℃，进一步保证能提取所得菌株。

为增加固液接触的面积，提取前一般先将固体物质研碎，本发明可以先将黄粉虫研碎，采用黄粉虫粉来进行索氏提取。优选，黄粉虫粉通过将黄粉虫干加入液氮急速冷却后，粉碎制得。

其中，浓缩本发明没有限制，可以采用常用的浓缩方法，本发明可以优选浓缩包括对步骤S1所得乙醇索氏提取液进行减压蒸馏，浓缩至溶液呈粘稠状得浓缩物。干燥本发明没有限制，可以采用本领域技术人员公知的各种干燥方式，例如常温烘干。

本发明的分离方法还可包括对所得黄粉虫提取物的保存，优选，将所得黄粉虫提取物于丙酮中保存，保存简单。优选，黄粉虫提取物与丙酮的质量比为2:1-1:3，进一步优选为2:1-1:2，只需少量丙酮即可。保存的温度为-25℃至6℃，进一步优选为4℃，保存条件要求较低，保存方便。

本发明的步骤具体可以为：

S1，黄粉虫干的粉碎：将黄粉虫干转移至研钵中，加入液氮对其进行急速冷却，然后将黄粉虫干研碎得黄粉虫粉；

S2，使用乙醇索氏提取步骤S1所得黄粉虫粉：称取黄粉虫粉，加入质量为黄粉虫粉8倍的乙醇，使用索氏提取器74℃回流提取5小时得乙醇索氏提取液；

S3，对步骤S2所得乙醇索氏提取液进行浓缩及干燥：对乙醇索氏提取液进行减压蒸馏，浓缩至溶液呈粘稠状；后对浓缩物进行常温烘干，得到粘稠深褐色固体干燥物；

S4，黄粉虫提取物的保存：对干燥物用丙酮溶解，然后转入离心管中于4℃保存备用。

本发明同时提供了上述分离方法制得的黄粉虫提取物及上述黄粉虫提取物的应用，该黄粉虫提取物用于防治植物病害，可以防治多种植物病害，例如水稻纹枯、棉花黄萎、黄瓜灰霉、白瓜腐霉、番茄灰霉、水稻恶苗、辣椒枯萎或番茄早疫中的一种或几种。

以下结合具体实施例对本发明做进一步详述。

实施例1

黄粉虫提取物的分离

1、黄粉虫干的粉碎：

将50g黄粉虫干转移至研钵中，加入约50ml液氮对其进行急速冷却，然后将黄粉虫干研碎。

2、使用乙醇索氏提取上述所得黄粉虫粉：称取35.00g黄粉虫粉，加入300ml乙醇，使用索氏提取器74℃回流提取5小时。

3、对上述所得乙醇索氏提取液进行浓缩及蒸干：

A、对黄粉虫粉的乙醇索氏提取液进行减压蒸馏，浓缩至溶液呈粘稠状；

B、将上述所得粘稠状浓缩物转移至已称重容器，

C、对浓缩物进行常温烘干，得到粘稠深褐色固体；

D、称容器与所得干燥物总重量；

4、计算黄粉虫粉乙醇提取率，计算方法：

5、黄粉虫提取物的保存

对干燥物用1:1量的丙酮溶解，然后转入离心管中于4℃保存备用。

实施例2

黄粉虫提取物对病原真菌离体活性测试

采用菌丝生长速率法，在土豆培养基(本实施例的土豆培养基的制备及灭菌：1L蒸馏水中加入200g土豆，20g蔗糖，20g琼脂,小火沸腾30分钟,过滤掉土豆渣即得到病原菌培养基，120℃灭菌20分钟。)中加入用无菌水稀释5倍的黄粉虫提取物丙酮溶液成1ml溶液，用涂布棒涂抹均匀，直至吸干。加入相同浓度丙酮(200μl丙酮和800μl无菌水)的土豆培养基作为对照。供试真菌在土豆培养基平板活化培养形成菌落，用打孔器(5mm)制取菌饼，将菌丝面朝下接菌于土豆培养基平板中央。将接种好的平板置于24℃生化培养箱中培养1-4天后调查(不同真菌生长速度不同)，采用十字交叉法测量菌落生长直径，并计算抑菌率。

黄粉虫提取物对供试病原真菌的抑制作用结果如表1所示。

表1

从离体测试防治结果可以看出，本发明的黄粉虫提取物对水稻纹枯、水稻恶苗等病具有一定的防治效果，是一种具有较大应用前景的生物防治菌株。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种黄粉虫提取物的分离方法，其特征在于，步骤包括：

S1，黄粉虫乙醇索氏提取：将黄粉虫粉与乙醇在索氏提取器中回流提取3-7小时得乙醇索氏提取液；

S2，将步骤S1所得乙醇索氏提取液浓缩、干燥得黄粉虫提取物。

2.根据权利要求1所述的黄粉虫提取物的分离方法，其特征在于，所述黄粉虫粉与乙醇的质量比为1:5-1:10。

3.根据权利要求1所述的黄粉虫提取物的分离方法，其特征在于，所述回流的温度为70-78℃。

4.根据权利要求1所述的黄粉虫提取物的分离方法，其特征在于，所述黄粉虫粉通过将黄粉虫干加入液氮急速冷却后，粉碎制得。

5.根据权利要求1所述的黄粉虫提取物的分离方法，其特征在于，所述浓缩包括对步骤S1所得乙醇索氏提取液进行减压蒸馏，浓缩至溶液呈粘稠状得浓缩物；所述干燥包括对浓缩物进行常温烘干。

6.根据权利要求1所述的黄粉虫提取物的分离方法，其特征在于，所述分离方法还包括将所得黄粉虫提取物于丙酮中保存，所述黄粉虫提取物与丙酮的质量比为2:1-1:3，保存的温度为-25℃至6℃。

7.根据权利要求1所述的黄粉虫提取物的分离方法，其特征在于，步骤包括：

S1，黄粉虫干的粉碎：将黄粉虫干转移至研钵中，加入液氮对其进行急速冷却，然后将黄粉虫干研碎得黄粉虫粉；

S2，使用乙醇索氏提取步骤S1所得黄粉虫粉：称取黄粉虫粉，加入质量为黄粉虫粉8倍的乙醇，使用索氏提取器74℃回流提取5小时得乙醇索氏提取液；

S3，对步骤S2所得乙醇索氏提取液进行浓缩及干燥：对乙醇索氏提取液进行减压蒸馏，浓缩至溶液呈粘稠状；后对浓缩物进行常温烘干，得到粘稠深褐色固体干燥物；

S4，黄粉虫提取物的保存：对干燥物用丙酮溶解，然后转入离心管中于4℃保存备用。

8.一种黄粉虫提取物，由权利要求1-7任意一项所述的分离方法制得。

9.权利要求8所述的黄粉虫提取物的应用，所述黄粉虫提取物用于防治植物病害。

10.如权利要求9所述的黄粉虫提取物的应用，所述植物病害包括水稻纹枯、棉花黄萎、黄瓜灰霉、白瓜腐霉、番茄灰霉、水稻恶苗、辣椒枯萎或番茄早疫中的一种或几种。