CN107624116A - 具有抗癌活性的肽以及均含有该肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物 - Google Patents
具有抗癌活性的肽以及均含有该肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107624116A CN107624116A CN201680029185.6A CN201680029185A CN107624116A CN 107624116 A CN107624116 A CN 107624116A CN 201680029185 A CN201680029185 A CN 201680029185A CN 107624116 A CN107624116 A CN 107624116A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peptide
- cell
- lys
- seq
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 574
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 118
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 58
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 title abstract description 13
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 title abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 31
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 31
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 57
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 32
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 26
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 24
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 15
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 13
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 12
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 12
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 10
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 claims description 8
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 6
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 418
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 4
- DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N Asn-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 abstract description 2
- XOKGKOQWADCLFQ-GARJFASQSA-N Gln-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O XOKGKOQWADCLFQ-GARJFASQSA-N 0.000 abstract description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 abstract description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 abstract description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 70
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 53
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 42
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 41
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 23
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 22
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 22
- 208000029340 primitive neuroectodermal tumor Diseases 0.000 description 20
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 17
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 16
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 13
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 13
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 13
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 11
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- 230000034994 death Effects 0.000 description 8
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 8
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 8
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 8
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- YHTTWXCDIRTOQX-FQJIPJFPSA-N (6S,9S,15S,18R,23R,26S,29S)-18-amino-6-(4-aminobutyl)-9,26-bis(carboxymethyl)-15-[3-(diaminomethylideneamino)propyl]-2,5,8,11,14,17,25,28-octaoxo-20,21-dithia-1,4,7,10,13,16,24,27-octazabicyclo[27.3.0]dotriacontane-23-carboxylic acid Chemical compound NCCCC[C@@H]1NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)CNC1=O)C(O)=O YHTTWXCDIRTOQX-FQJIPJFPSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 6
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 6
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 6
- 229960005540 iRGD Drugs 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- 102100033658 Alpha-globin transcription factor CP2 Human genes 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 5
- -1 quinoline ketone Chemical class 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 4
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical group NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- 108700031361 Brachyury Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000029052 metamorphosis Effects 0.000 description 4
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical class FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 3
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 3
- 101000800875 Homo sapiens Alpha-globin transcription factor CP2 Proteins 0.000 description 3
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 102000004207 Neuropilin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108090000772 Neuropilin-1 Proteins 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 3
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- HLUCICHZHWJHLL-UHFFFAOYSA-N hematein Chemical compound C12=CC=C(O)C(O)=C2OCC2(O)C1=C1C=C(O)C(=O)C=C1C2 HLUCICHZHWJHLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 3
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 3
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- NGTYEHIRESTSRX-UWVGGRQHSA-N Arg-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NGTYEHIRESTSRX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004668 G2/M phase Effects 0.000 description 2
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- YUAXTFMFMOIMAM-QWRGUYRKSA-N Lys-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O YUAXTFMFMOIMAM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- NYTDJEZBAAFLLG-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NYTDJEZBAAFLLG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102100040065 Upstream-binding protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000018486 cell cycle phase Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000003924 normoblast Anatomy 0.000 description 2
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWSONZCNXUSTKW-UHFFFAOYSA-N 4,5-Dimethylthiazole Chemical compound CC=1N=CSC=1C UWSONZCNXUSTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKSYGLXHLSPWLB-UHFFFAOYSA-N 8-(2-ethoxyphenyl)-7,8-dihydro-5h-[1,3]dioxolo[4,5-g]quinolin-6-one Chemical compound CCOC1=CC=CC=C1C1C2=CC(OCO3)=C3C=C2NC(=O)C1 YKSYGLXHLSPWLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N Asp-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LBOVBQONZJRWPV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 108091012583 BCL2 Proteins 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 102100032857 Cyclin-dependent kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710106279 Cyclin-dependent kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- CEZSLNCYQUFOSL-BQBZGAKWSA-N Cys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O CEZSLNCYQUFOSL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 241001269238 Data Species 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101710100588 Erythroid transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 239000001512 FEMA 4601 Substances 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101100048228 Homo sapiens UBP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000747867 Homo sapiens Upstream-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N Lys-Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QOJDBRUCOXQSSK-AJNGGQMLSA-N Lys-Ile-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O QOJDBRUCOXQSSK-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100424919 Mus musculus Tfcp2 gene Proteins 0.000 description 1
- BNQSTAOJRULKNX-UHFFFAOYSA-N N-(6-acetamidohexyl)acetamide Chemical class CC(=O)NCCCCCCNC(C)=O BNQSTAOJRULKNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 1
- RCEAADKTGXTDOA-UHFFFAOYSA-N OS(O)(=O)=O.CCCCCCCCCCCC[Na] Chemical compound OS(O)(=O)=O.CCCCCCCCCCCC[Na] RCEAADKTGXTDOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 208000004072 Oncogene Addiction Diseases 0.000 description 1
- 229920002230 Pectic acid Polymers 0.000 description 1
- NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 102100034014 Prolyl 3-hydroxylase 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000010635 Protein Inhibitors of Activated STAT Human genes 0.000 description 1
- 108010038241 Protein Inhibitors of Activated STAT Proteins 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N Rebaudioside A Natural products O=C(O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@]1(C)[C@@H]2[C@](C)([C@H]3[C@@]4(CC(=C)[C@@](O[C@H]5[C@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)(C4)CC3)CC2)CCC1 HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 1
- 101100117629 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) LCB3 gene Proteins 0.000 description 1
- LRWBCWGEUCKDTN-BJDJZHNGSA-N Ser-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LRWBCWGEUCKDTN-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 1
- 235000006092 Stevia rebaudiana Nutrition 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 102000006463 Talin Human genes 0.000 description 1
- 108010083809 Talin Proteins 0.000 description 1
- 101710103765 Transcription factor CP2 Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 240000008866 Ziziphus nummularia Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N anhydrous quinoline Natural products N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 108010022472 dNP2 peptide Proteins 0.000 description 1
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N entered according to Sigma 01432 Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC(C1OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 235000019534 high fructose corn syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 150000005204 hydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 235000021096 natural sweeteners Nutrition 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 210000001636 ophthalmic artery Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N pectic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)O[C@H](C(O)=O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)C(O)=O)O)[C@@H](C(O)=O)O1 LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000010318 polygalacturonic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- LISFMEBWQUVKPJ-UHFFFAOYSA-N quinolin-2-ol Chemical compound C1=CC=C2NC(=O)C=CC2=C1 LISFMEBWQUVKPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930185107 quinolinone Natural products 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 1
- 235000019203 rebaudioside A Nutrition 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010129 solution processing Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
- A61K9/0056—Mouth soluble or dispersible forms; Suckable, eatable, chewable coherent forms; Forms rapidly disintegrating in the mouth; Lozenges; Lollipops; Bite capsules; Baked products; Baits or other oral forms for animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pediatric Medicine (AREA)
- Physiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
Abstract
本发明涉及具有抗癌活性的肽，以及均含有该肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物，并且更具体地，涉及具有预防和治疗癌症的活性且由SEQ ID NO：1表示的与转录因子CP2c结合的肽，以及均含有该肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物。＜SEQ ID NO：1＞Asn‑Tyr‑Pro‑Gln‑Arg‑Pro当用所述肽和含有该肽的药物组合物治疗癌细胞时，根据本发明，所述肽可以以非常高的稳定性通过细胞膜而与CP2c特异性结合，并且可以抑制CP2c的DNA结合能力，从而通过抑制CP2c活性来扰乱CP2c介导的癌细胞特异性转录活性，因此本发明可以有效地用于仅特异性地治疗癌细胞，并且可以用于癌症预防和作为其膳食补充添加剂。
Description
技术领域
本发明涉及具有抗癌活性的肽，以及具有所述肽作为活性成分的癌症预防或癌症治疗的药物组合物和健康功能性食品组合物。
背景技术
迄今为止已开发和使用了许多抗癌剂，包括天然产物、蛋白质能或肽能剂和合成小分子。然而，大多数这些抗癌剂对存活的正常细胞引起严重的副作用，并且可能对某些类型的癌不起作用。在一般情况下，抗癌剂的作用在患有同一类型的癌的患者中变化。在这样的情况下，已经在全世界进行了许多关于开发可以为上述问题提供解决方案，能够选择性地去除癌细胞而不影响存活的正常细胞，并且甚至可以消除任何类型的癌细胞之抗癌剂的新概念的研究。
转录因子CP2c(也称为CP2、Tfcp2、LSF、LBP1或UBP1)在哺乳动物中广泛表达。当细胞从休止期(G0)进入DNA复制期(S)时，CP2c的活性被精细地调节，并且其对于允许细胞有效地通过G1/S转变期至关重要。CP2c活性的调节主要通过翻译后修饰进行，并且其水平通常保持在低水平。然而，由于CP2c在肿瘤细胞中过表达，故其充当重要的癌基因在癌发生中起关键作用。
在这一点上，波士顿大学的一个研究小组报道了因子喹啉酮抑制剂1(FactorQuinolinone Inhibitor 1，FQI 1)作为抑制肝癌细胞系中CP2c的细胞活性的物质。FQI1及其衍生物通过化学文库筛选鉴定，并且在细胞和移植的小鼠模型中选择性地抑制癌细胞而不影响正常细胞方面是成功的(Grant等，Antiproliferative small-moleculeinhibitors of transcription factor LSF reveal oncogene addiction to LSF inhepatocellular carcinoma，Proc.Natl.Acad.Sci.2012；109(12)：4503-4508)。
此外，本发明人已经报道了通过筛选肽展示文库示出的识别CP2c不同区域的四种新的肽基序(HXPR、PHL、ASR和PXHXH)(Kang等，Identification and characterization offour novel peptide motifs that recognize distinct regions of thetranscription factor CP2，FEBS Journal 2005；272：1265-1277)。本发明人已经提出了CP2c识别靶蛋白的特异性结合基序并且与该蛋白质相互作用以调节多种细胞活性。基于可用于DNA-蛋白质相互作用的高度特异且灵敏分析的DNA免疫沉淀法，本发明人在其后续研究中已经通过体外测定筛选了抑制CP2c与DNA结合的肽，结果，发现由12个氨基酸构成的肽5以浓度依赖性方式抑制CP2c-DNA结合(Kim等，A DNA immunoprecipitation assay usedin quantitative detection of in vitro DNA-protein complex binding，AnalyticalBiochemistry.2013；441：147-151)。
发明内容
技术问题
因此，本发明是基于本发明人进行的研究结果进行的，并且旨在提供用于更有效地抑制CP2c(多种癌中已知的关键转录因子)活性的肽，含有所述肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物，以及含有所述肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的健康功能性食品组合物。
技术方案
本发明提供了针对癌症具有预防和治疗活性的肽，其与转录因子CP2c结合并具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列：
Asn-Tyr-Pro-Gln-Arg-Pro (1)。
根据本发明的一个实施方案，乙酰基和酰胺基可分别与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基和C端Pro残基连接(或键合)。
根据本发明的另一个实施方案，具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基可与具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽连接：
Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys (2)。
根据本发明的另一个实施方案，当具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基连接时，乙酰基和酰胺基可分别与具有SEQID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基和具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基键合。
根据本发明的另一个实施方案，具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基和N端Asn残基可分别与具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽和具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的肽连接：
Lys-Cys-Lys-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Ser (3)
其中第一氨基酸Lys和第三氨基酸Lys表示6-氨基己酸，并且具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的肽的N端Lys残基可与异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate，FITC)连接。
根据本发明的另一个实施方案，当具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基连接并且具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的肽与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基连接时，酰胺基可与具有SEQID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基连接。
根据本发明的另一个实施方案，具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基可与具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的肽键合：
Lys-Ile-Lys-Lys-Val-Lys-Lys-Lys-Gly-Arg-Lys-Gly-Ser-Lys-Ile-Lys-Lys-Val-Lys-Lys-Lys-Gly-Arg-Lys-Gly-Gly (4)。
根据本发明的另一个实施方案，当具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的肽与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基连接时，乙酰基和酰胺基可分别与具有SEQID NO：4所示氨基酸序列的肽的N端Lys残基和具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基连接。
根据本发明的另一个实施方案，具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽可与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基连接，并且生物素标记的Lys可与具有SEQID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基的ε-NH2连接。
根据本发明的另一个实施方案，当具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基连接，并且生物素标记的Lys与具有SEQ IDNO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基的ε-NH2连接时，乙酰基和酰胺基可分别与具有SEQID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基和生物素标记的C端Lys连接，所述生物素标记的C端Lys与具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基的ε-NH2连接。
本发明还提供了用于预防和治疗癌症的含有至少一种调节CP2c活性的肽作为活性成分的药物组合物。
本发明还提供了用于预防和治疗癌症的含有至少一种调节CP2c活性的肽作为活性成分的健康功能性食品组合物。
本发明的效果
肽或药物组合物以非常高的效力穿透癌细胞的膜，能够与CP2c特异性结合，并且可以抑制CP2c与DNA结合的能力。因此，本发明的肽或药物组合物具有抑制CP2c活性的能力。本发明的肽或药物组合物由于其能力而阻碍CP2c介导的癌细胞特异性转录活性，因此在特异性地治疗癌细胞中有效。此外，本发明的肽或药物组合物可以用于预防癌症。此外，本发明的肽可以用作用于癌症预防的健康食品添加剂。
附图说明
图1是由总共6个区域构成的CP2c全长氨基酸序列以及其中缺失CP2c序列N端和C端的多种CP2c突变体的氨基酸序列的示意图。
图2示出了通过DNA免疫沉淀(DIP)测定测量的DNA-CP2c复合物对五种CP2c结合肽(肽5、肽8、肽13、肽21和肽31)的结合亲和力。
图3示出了通过DIP测定的DNA-CP2c复合物对肽5、肽8、肽5-1和肽5-2的结合亲和力。
图4a至4e是在将多种癌细胞系和正常人干细胞和分化细胞与FQI1、肽5C和肽5-2C培养之后获取的显微图像：具体地，图4a的图像示出了肝癌细胞系(HepG2、Hep3B)，人胚胎肾细胞系(293T)，乳腺癌细胞系(MVCF7、MDA-MB-231)，血癌细胞系(K562、MEL、HEL、HL60)和成胶质细胞瘤细胞系(U251、U373MG、U87MG)；图4b的图像示出了来自多种组织来源的表皮细胞系(MCF10A、BEAS2B)，原代培养的小鼠T淋巴细胞(静息和活化的T淋巴细胞)和人间充质干细胞(hMSC)；图4c的图像示出了在乳腺球培养期间的MCF7、293T和MBA-MB-231细胞系；图4d的图像示出了在与成纤维细胞共培养期间的人胚胎干细胞(hESC)；图4e的图像示出了人造血祖细胞(HPC)和在分化成红细胞期间来源于其的细胞(在分化诱导后第3、7和14天的细胞)。
图5a至5j示出了HepG2细胞系和Hep3B细胞系(5a)，MCF7细胞系和MDA-MB-231细胞系(5b)，U251细胞系，U87MG细胞系和U343细胞系(5c)，K562细胞系、HEL细胞系和HL60细胞系(5d)，293T细胞系(5e)，MCF10A细胞系和BEAS2B细胞系(5f)，原代培养的小鼠T淋巴细胞(静息和活化T淋巴细胞)(5g)，hMSC细胞系(5h)，hESC细胞系(5i)，造血祖细胞(HPC)和在诱导分化成红细胞期间来源于其的细胞(在第3、7和14天)(5j)在用浓度提高的FQI1、肽5C和肽5-2C处理一次后的相对生存力，而图5k示出了肽处理后96小时的孔板的图像。
图6a和6b是比较如通过Western印迹确定的来自多种组织来源的6种结肠癌细胞系，6种肺癌细胞系，3种乳腺癌细胞系，3种成胶质细胞瘤细胞系和一种宫颈癌细胞系(6a)和血癌细胞系(MEL、K562、HEL、HL60)，肝癌细胞系(HepG2、Hep3B)，人表皮样癌细胞系(A431)，结肠癌细胞系(HCT116)，表皮细胞系(293T、BEAS2B、MCF10A)，以及hMSC细胞系(6b)中的CP2c蛋白质表达水平的图像。
图7a和7b示出了用于在用肽5-2C处理细胞系之后计算图5所示细胞系的肽5-2C的IC50值的图以及计算的IC50值：具体地，图7a示出了用于在用肽5-2C处理每种细胞系一次后48小时计算IC50值的图以及计算的IC50值；图7b示出了在用肽5-2C处理成胶质细胞瘤细胞系U343、U373MG、U251和U87MG一次后48小时和96小时计算IC50值的图以及计算的IC50值。
图8示出了用于在用FQI1、肽5C和肽5-2C处理MCF10A细胞系和BEAS2B细胞系后48小时计算IC50值的图以及计算的IC50值。
图9a至9f示出了MDA-MB-231细胞系和MCF7细胞系(9a)，U343细胞系和U87MG细胞系(9b)，HCT116细胞系和HT29细胞系(9c)，293T细胞系和HepG2细胞系(9d)，U937细胞系、Jurkat细胞系、HL60细胞系和HEL细胞系(9e)以及MCF10A细胞系和BEAS2B细胞系(9f)在用浓度增加的肽5-2C和肽5-2D处理一次后的相对生存力，而图9g示出肽处理后96小时的孔板的图像。
图10示出了用于在用肽5-2C和肽5-2D处理细胞系后计算图9所示细胞系的肽5-2C和肽5-2D的IC50值的图以及计算的IC50值。
图11a至11g示出了移植有U343成胶质细胞瘤细胞系的小鼠模型中肽5-2C抑制肿瘤生长的能力和肽5-2C的生理特性。将U343成胶质细胞瘤细胞系(2.5×106个细胞/50μl)皮下注射到雄性BALB/C裸鼠(n＝6只/组)的背部，从肿瘤大小增加到约80mm3的时间起，每3天将肽5-2C(3mg/kg)直接注射到肿瘤部位，测量小鼠的体重和肿瘤的体积，在肽注射后第70天处死小鼠，并切除肿瘤、血液和主要器官。具体地，图11a示出了实验期间肿瘤的体积，图11b示出了小鼠的体重变化，图11c示出了在肽施用后第70天的小鼠的图像，图11d示出了切除的肿瘤的图像，图11e示出了从小鼠切除的肿瘤的重量及其平均值，图11f示出了对照组和肽处理组中小鼠的多种标准血液指标，图11g示出了主要器官(脾、肝、肺和肾)的H/E染色图像。
图12a至12d示出了移植有A431人表皮样癌细胞系的小鼠模型中肽5-2C抑制肿瘤生长的能力和肽5-2C的生理特性。将A431细胞系(5×106个细胞/100μl)皮下注射到雄性BALB/C裸鼠(n＝4只/组)的背部，从肿瘤大小增加到约50mm3的时间起，每隔一天将肽5-2C(1×IC50；1.7mg/kg，2×IC50；3.5mg/kg)通过尾静脉注射到小鼠中，总共5次，测量肿瘤体积，在肽注射后第13天处死小鼠，并切除肿瘤和主要器官。图12a示出了实验期间肿瘤的体积，图12b示出了小鼠和切除的肿瘤的图像，图12c示出了从小鼠切除的肿瘤的重量及其平均值，图12d示出了组的主要器官(脾、肝、肺、血管和肌肉)的H/E染色图像。
图13a至13d示出了移植有能够转移到肺组织的MDA-MB-231细胞系(LM1细胞)的动物模型中肽5-2C抑制转移到肺组织和肿瘤生长的能力以及肽5-2C的生理特性。将MDA-MB-231细胞系(LM1细胞；1×106个细胞/40μl)注射到12周龄雌性BALB/C裸鼠(n＝5只/组)的乳腺脂肪垫中，从肿瘤大小增加到约50mm3的时间起，每3天将肽5-2C(1×IC50；1.7mg/kg＝52μg/小鼠，2×IC50；3.5mg/kg＝104μg/小鼠)通过尾静脉注射到小鼠中，总共5次，测量肿瘤体积，在肽注射后第30天处死小鼠，并切除肿瘤和主要器官。图13a示出了具有肿瘤的小鼠和切除的肿瘤的图像，图13b示出了从小鼠切除的肿瘤的重量及其平均值，图13c示出了对照组和肽处理组中转移到肺的肿瘤灶数量的平均值和标准偏差，图13d示出了对照组和肽处理组中小鼠的血液指标。
图14a至14e示出了正常CP2c结合位点和CP2c突变体序列的荧光素酶报道基因的表达谱，以通过肽5C和肽5-2C分析CP2c的转录活性。
图15a至15c示出了在用0、1、2、3和10μM的多个浓度的肽5-2C(为了分析肽5-2C对细胞周期的影响)处理细胞系后48小时通过FACS的多种细胞系(MEL、K562、MCF-10A、MDA-MB-231)的细胞周期分析结果：具体地，图15a示出了取决于FACS期间的DNA的量的细胞分布；图15b示出了不同细胞周期阶段中细胞的定量分布；图15c示出了在显示出凋亡的subG1期中细胞的扩大分布。
图16a至16d示出了当用不同浓度的肽5-2C处理MCF7细胞系不同的时间段时细胞周期相关标志物基因的表达谱：具体地，图16a示出了在用2μM肽5-2C处理72小时时如通过Western印迹确定的多种细胞周期相关标志物基因蛋白质的时间依赖性表达谱，图16b示出了在用多个浓度(0、1、2和3μM)的肽5-2C处理48小时后如通过Western印迹确定的细胞周期相关标志物基因蛋白质的表达谱。图16c和16d分别示出了图16a和16b中的标志物基因蛋白质表达的定量变化。
图17示出了在用2μM肽5-2C处理MDA-MB-231细胞系和MCF7细胞系后凋亡相关标志物基因蛋白质的时间依赖性表达谱。
图18示出了显示出在用2μM肽5-2C处理MDA-MB-231细胞系和MCF10A细胞系后24小时和48小时的细胞形态的电子显微图像，用生理盐水处理的细胞和用2μM FQI1处理的细胞分别用作阴性和阳性对照。
图19a至19d是确认随着时间的推移MDA-MB-231细胞系中FITC-缀合的肽5-2C的细胞内迁移途径的图：具体地，图19a示出了如通过MTT测定确定的用浓度为0、0.5、1、2、3和10μM的生理盐水以及FITC-缀合的iRGD、FITC-5-1C和FITC-5-2C肽处理MDA-MB-231细胞系96小时后的细胞生长速率的变化；图19b示出了用于在处理后48小时计算处理组中肽的IC50值的图以及计算的IC50值；图19c示出了显示出在96小时时MTT测定的实例的孔板的图像；图19d示出了显示出在用肽处理后24小时FITC-缀合的肽(各2μM)的时间依赖性细胞内分布的图像。
图20a至20d比较了肽5-2CB(生物素标记的肽5-2C)对癌细胞存活的影响与肽5-2C对癌细胞存活的影响：具体地，图20a示出了在用浓度增加的肽5-2C和两个不同批次的肽5-2CB处理一次之后MDA-MB-231细胞系的相对生存力；图20b示出了肽处理后96小时的孔板的图像；图20c示出了用于在用肽处理MDA-MB-231细胞系后48小时计算IC50值的图以及计算的IC50值；图20d示出了用于在用肽处理MCF7细胞系后48小时计算IC50值的图以及计算的IC50值。
图21a至21d示出了用于鉴定与肽5-2C结合的CP2c蛋白质区域(对应的第306至396位氨基酸)中用于DNA结合和肽5-2C结合的重要氨基酸的一系列实验的结果：具体地，图21a示出了与肽5-2C结合的区域的列表和通过用丙氨酸替换位点的氨基酸序列中的极性氨基酸而产生的19种GST-融合突变体；图21b示出了使用GST抗体珠之由大肠杆菌(E.coli)中过表达的突变体纯化的GST-融合蛋白与存在于放射性标记的α-球蛋白启动子中的CP2c结合位点的DNA探针结合的DNA-IP结果；图21c示出了纯化的GST-融合突变蛋白与肽5-2C结合的直接ELISA测定结果；图21d示出了基于CP2c的第306-396位氨基酸区域的Rosetta建模算法预测的用于DNA与三级结构结合和肽5-2C与三级结构结合的重要氨基酸。
最佳实施方式
现在将更详细地描述本发明。
本发明提供了针对癌症具有治疗活性的肽，其与转录因子CP2c结合并具有SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列：
Asn-Tyr-Pro-Gln-Arg-Pro (1)。
具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽(在下文中也称为“肽5-2”)由6个氨基酸构成，并且与CP2c蛋白质相互作用以调节该蛋白质的活性，如从以下实施例部分可以具体看出。CP2c是一种在肿瘤细胞中特异性过表达的蛋白质。这种活性调节最终导致抗癌效果。
如上所述，本发明人已发现由12个氨基酸构成的肽5以浓度依赖性方式抑制CP2c-DNA结合(Kim等，A DNA immunoprecipitation assay used in quantitative detectionof in vitro DNA-protein complex binding，Analytical Biochemistry.2013；441：147-151)。然而，从以下实施例部分的结果可以看出，由12个氨基酸构成的肽5即使在正常对照细胞系中也抑制细胞生长和诱导凋亡，而由6个氨基酸(肽5的6个下游氨基酸)构成的本发明的肽5-2基本上不诱导正常对照细胞系的生长抑制和凋亡。另一方面，由肽5的6个上游氨基酸构成的肽5-1不能抑制CP2c-DNA结合，并且用肽5-1处理不影响癌细胞系以及正常细胞对照组的生长抑制和凋亡诱导。因此，本发明的肽5-2由于其对癌细胞的特异性活性而不影响正常细胞提供了理想的癌症治疗的可能性。
本发明的肽5-2可通过修饰被赋予多种功能。例如，本发明的肽5-2可被修饰成以下肽。
首先，本发明的肽可通过修饰被赋予高稳定性。为此，乙酰基和酰胺基分别与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基和C端Pro残基连接。这种经修饰的肽也被称为“肽5-2A”。
其次，可通过修饰来提高具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的细胞穿透性效力。为此，用于与神经纤毛蛋白1受体结合的iRGD肽序列(CRGDKGPDC)与具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基连接。这种经修饰的肽也被称为“肽5-2B”。同样地，乙酰基和酰胺基团可分别与肽5-2B的N端Asn残基和C端Cys残基键合。这种经修饰的肽也被称为“肽5-2C”。
为了通过荧光/共焦显微术和生物成像容易地追踪肽5-2或5-2C的细胞内迁移途径和生物分布，可使含FITC荧光染料的化合物(FITC-(6-氨基己酸)-Cys-(6-氨基己酸)-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly)进一步与肽5-2或5-2C的N端Asn残基连接。这种经修饰的肽也被称为“肽FITC-5-2”或“肽FITC-5-2C”。同样地，酰胺基团可与肽FITC-5-2C的C端Cys键合。
此外，为了提高肽的血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)和细胞穿透效率，还可使具有这样功能的dNP2肽序列(KIKKVKKKGRKGSKIKKVKKKGRKGG；Lim等，Nat Commun(2015)6，8244)与肽5-2的N端Asn残基连接。这种经修饰的肽也被称为“肽5-2D”。同样地，乙酰基和酰胺基可分别与肽5-2D的N端Lys残基和C端Pro残基连接。
为了便于分析肽5-2C与转录因子CP2c之间的结合，也可使生物素标记的Lys与肽5-2C的C端Cys残基的ε-NH2连接。这种经修饰的肽也被称为“肽5-2CB”。同样地，乙酰基和酰胺基可分别与肽5-2CB的N端Asn残基和C端Lys残基连接。
本发明还提供了用于预防和治疗癌症的含有具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽作为活性成分的药物组合物，以及用于预防和治疗癌症的含有具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽作为活性成分的健康功能性食品组合物。
如本文中使用的术语“治疗”意指通过施用根据本发明的肽或药物组合物，癌症症状已经好转或减轻的所有作用。
如本文中使用的术语“施用”意指通过任何合适的方法将物质(即本发明的肽衍生物或药物组合物)引入到对象中。本发明的肽衍生物或药物组合物可经由任何常见的途径施用，只要其能够到达期望的组织即可。具体地，考虑多种施用途径，包括腹膜内、静脉内、肌内、皮下、皮内、经口、经表面、鼻内、肺内和直肠内，但本发明不限于这些施用途径。由于本发明的经口施用的肽不被消化，故本发明的组合物优选用活性药物包被或者被保护免于在胃中降解。优选地，本发明的组合物可以以可注射制剂的形式施用。本发明的药物组合物可使用能够将活性物质递送到靶细胞的某种装置来施用。
如本文中使用的术语“含有活性成分”意指存在足以以可应用于任何医学治疗的合理收益/风险比治疗疾病的量。组合物的有效剂量水平可根据包括以下的因素决定：疾病的类型和严重程度、药物的活性、患者对药物的敏感性、施用时间、施用途径、排泄率、治疗持续时间、与组合物组合使用的药物，以及医学领域已知的其他因素。本发明的肽或药物组合物可单独地或与其他治疗剂组合施用，并且可依次地或者与常规治疗剂同时施用。本发明的肽或药物组合物可以以单一剂量或多剂量施用。考虑到所有上述因素，重要的是以可以表现出最大效果而不引起副作用的最小量施用本发明的肽或药物组合物。根据本发明的肽或药物组合物的量可以容易地由本领域技术人员确定。根据本发明的药物组合物的剂量和施用频率根据作为活性成分的药物种类以及多种相关因素，包括待治疗的疾病的类型，施用途径，患者的年龄、性别和体重和疾病的严重程度确定。
本发明的药物组合物还可包含一种或更多种可药用载体，只要其含有本发明的肽作为活性成分即可。合适的可药用载体的实例包括：用于经口施用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、助悬剂、着色剂和风味剂；用于可注射制剂的缓冲剂、防腐剂、疼痛缓解剂、增溶剂、等渗剂和稳定剂；以及用于表面施用的基质、赋形剂、润滑剂和防腐剂。本发明的药物组合物可用上述可药用载体进行配制。这些制剂的实例包括：用于经口施用的片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂和糯米纸囊剂以及用于可注射制剂的单位安瓿和多剂量形式。本发明的药物组合物还可配制成其他制剂，例如，溶液剂、混悬剂、片剂、丸剂、胶囊计和持续释放制剂。
适用于根据本发明的药物组合物制剂的载体、赋形剂和稀释剂的实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶橡胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。本发明的药物组合物还可包含选自填料、抗凝剂、润滑剂、润湿剂、风味剂和防腐剂的至少一种添加剂。
本发明的肽用作健康功能性食品组合物的活性成分。本发明的食品组合物可与已知具有抗癌活性的一种或更多种活性成分组合使用。本发明的食品组合物还可包含一种或更多种营养学上可接受的食品补充剂。本发明的健康功能性食品组合物旨在包括用于所有类型的食品，例如功能性食品、营养补充剂、健康食品和食品添加剂的组合物。
食品组合物的类型可通过本领域已知的一般方法以多种形式制备。例如，健康食品可制备成多种制剂，例如片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、口香糖、维生素混合物、汁和饮料。本发明的食品组合物可以通过造粒、包封或粉碎制成可食用制剂。本发明的食品组合物可包含通常添加用于食品生产的一种或更多种成分，例如蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养物和调味剂。例如，本发明的食品组合物可制备成饮料。在这种情况下，本发明的食品组合物还可包含选自柠檬酸、高果糖玉米糖浆、糖、葡萄糖、乙酸、苹果酸、果汁、枣提取物和甘草提取物的至少一种添加剂。本发明的食品组合物还可包含选自本领域通常使用的食品添加剂(例如风味剂、甜味剂、着色剂、填料和稳定剂)的至少一种食品补充剂。本发明的食品组合物还可含有风味剂或天然碳水化合物，如一般饮料。这样的天然碳水化合物的具体实例包括单糖，例如葡萄糖和果糖；二糖，例如麦芽糖和蔗糖；多糖，例如糊精和环糊精；以及糖醇，例如木糖醇、山梨醇和赤藓糖醇。合适的风味剂的实例包括天然风味剂(索马甜和甜叶菊提取物(例如莱鲍迪苷A和甘草甜素))和合成风味剂(糖精和阿斯巴甜)。
此外，本发明的食品组合物还可含有选自以下的至少一种添加剂：营养补充剂、维生素、矿物质(电解质)、甜味剂(例如合成和天然的甜味剂)、着色剂、填料(乳酪和巧克力)、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇和用于碳酸饮料中的碳酸化剂，其可单独地或组合使用。
具体实施方式
将参考以下实施例更详细地说明本发明。提供这些实施例以帮助理解本发明，并且不旨在限制本发明的范围。
实施例1：通过肽5抑制CP2c-DNA结合
实施例1.1
使用由本发明人进行的先前研究中所公开的噬菌体展示技术鉴定的与鼠CP2c蛋白相互作用的5种肽基序(肽5、肽8、肽13、肽21和肽31)。
实施例1.2
为了分析实施例1.1中鉴定的五种肽是否与细胞中的CP2c结合以影响CP2c与DNA结合的能力，如由本发明人进行的另一项先前研究所公开的进行DNA免疫沉淀(DIP)测定(Kim等，A DNA immunoprecipitation assay used in quantitative detection of invitro DNA-protein complex binding，Analytical Biochemistry.2013；441：147-151)。
总之，通过用5mM六亚甲基双乙酰胺(HMBA)处理来诱导鼠红细胞白血病(murineerythroid leukemia，MEL)细胞系的分化，并且在分化之后第2天分离细胞核提取物。对于核提取物分离，首先收获所述细胞系的1×106个细胞并用PBS洗涤。在添加200μl的核提取缓冲液A(10mM HEPES、10mM KCl、0.1mM EDTA、0.1mM EGTA、0.5mM苯甲磺酰氟、蛋白酶抑制剂混合物(Roche))之后，使反应在4℃下进行15分钟。向反应混合物添加0.6％NP-40。对所得的混浊溶液进行离心并弃去上清液。向离心之后剩余的沉淀物添加50μl的核提取缓冲液C(20mM HEPES、400mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1mM苯甲磺酰氟、蛋白酶抑制剂混合物(Roche))。通过在4℃下轻敲5分钟至10分钟使沉淀物松动，然后离心。仅将上清液用于后续的实验。
随后，使5μg的核提取物和[α-32p]dCTP-标记的DNA探针(对应于存在于小鼠α-球蛋白启动子中的共用CP2c结合位点以及在α-球蛋白基因的起始密码子中-156与-124位点之间的序列，对于所述序列的细节参见Kim等的文章)与结合缓冲液(4％甘油、10mM Tris-HCl、1mM DTT、1mM EDTA和0.1％NP-40)反应15分钟，并且向其中添加逐渐增加量(0.2μg、0.5μg和1μg)的经鉴定的CP2c结合肽(肽5、肽8、肽13、肽21和肽31)。然后，在室温下继续再反应15分钟。向每个反应混合物添加20μl的50％蛋白G-琼脂糖珠悬液。所得的混合物在4℃下反应1小时(h)以除去非特异性结合。在添加2μg的抗-CP2c抗体(Cosmo genetech)之后，反应在4℃下进行10小时。向与CP2c抗体结合的反应产物添加20μl的50％蛋白G-琼脂糖珠悬液。反应在4℃下进行2小时。将反应混合物用细胞裂解缓冲液(50mM Tris-HCl、150mMNaCl、1mM EDTA和1mM苯甲磺酰氟)洗涤三次。向CP2c结合的DNA探针添加洗脱缓冲液(50mMTris-HCl、10mM EDTA和1％十二烷基硫酸钠)。使混合物在65℃下反应1小时。将CP2c蛋白从DNA探针移除，并使用闪烁计数器测量DNA探针的剩余量。
为了研究由总共6个区域构成的全长CP2c序列的哪个肽序列与CP2c区域相互作用，全长CP2c序列和其中缺失CP2c序列的N-端和C-端的多种CP2c突变体的序列示意性地在图1中示出。图2示出了通过经鉴定的五种CP2c-结合肽(肽5、肽8、肽13、肽21和肽31)的DNA免疫沉淀(DIP)测定测量的DNA-CP2c复合物的结合亲和力。参照图1和图2，肽5以浓度依赖性方式特异性地抑制CP2c-DNA结合。
实施例2：通过肽5-1和肽5-2抑制CP2c-DNA结合
将由12个氨基酸构成的CP2c-结合肽5分为肽5-1和肽5-2，每个肽均由6个氨基酸构成。此后，通过与实施例1中所述相同的方法分析肽5-1和肽5-2抑制CP2c与DNA结合能力的能力。
图3示出了通过对肽5、肽8、肽5-1和肽5-2的DIP测定来测量DNA-CP2c复合物的结合亲和力。参照图3，肽8和肽5-1可忽视地抑制CP2c结合DNA的能力，而肽5-2特异性抑制CP2c与DNA之间的结合，这与肽5相当。
实施例3：本发明合成肽的结构和表征
由于实施例1-2中所述的CP2c-结合肽非常不稳定，在培养期间处理细胞时它们倾向于在培养溶液中降解，并且在细胞处理时不容易穿透细胞膜，因此限制了其在体内实验中的使用。因此，需要修饰CP2c-结合肽以得到其高细胞穿透性。为了修饰每种肽以得到高稳定性，乙酰基和酰胺基分别与肽的N-端和C-端连接。作为得到高细胞穿透性的修饰，制备肽5C和肽5-2C，其中与神经纤毛蛋白1受体结合的iRGD肽序列(CRGDKGPDC)分别与肽5和肽5-2连接。经修饰的肽的肽序列列于表1中(肽在pepMic Co.，Ltd合成)。
表1
实施例4：显微观察肽5C和肽5-2C对癌细胞系的生长抑制和凋亡诱导
实施例4.1：显微观察肽5C和肽5-2C对正常细胞系与癌细胞系的生长抑制和凋亡诱导
肝癌细胞系(HepG2、Hep3B)，人胚胎肾细胞系(293T)，乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231)，血液肿瘤细胞系(K562、HEL、HL60)成胶质细胞瘤细胞系(U251、U373MG、U87MG)，乳腺上皮细胞系(MCF10A)，肺上皮细胞系(BEAS2B)，人间充质干细胞(hMSC)和鼠原代T细胞(静息和活化的T细胞)以3000个细胞/孔的密度接种到96孔板中，补充50μl的培养溶液，并且在37℃和5％CO2下培养1小时。将FQI1、肽5C和肽5-2C以2μM的浓度添加至细胞系接种的孔板，并在37℃和5％CO2下培养48小时。培养完成之后，在倒置相差显微镜下观察细胞并且拍摄其形态变化。
图4a示出了癌细胞系的显微图像，并且图4b示出了正常细胞系、生物衍生的正常干细胞和分化细胞的显微图像。参照图4a和图4b，FQI1以浓度依赖性方式抑制正常细胞系以及癌细胞系的生长并诱导凋亡，而肽5C和肽5-2C特异性抑制癌细胞系的生长并诱导凋亡而基本上不影响正常细胞系。
实施例4.2：显微观察肽5-2C在乳腺球培养期间对癌细胞系的生长抑制和凋亡诱导
将癌细胞系(MCF-7、293T、MDA-MB-231)以1×104个细胞/ml的密度接种到经聚HEMA涂覆的100phi培养皿中。生理盐水和肽5-2C以2μM的浓度添加至接种有所述细胞系的培养容器并且将细胞在37℃和5％CO2下培养4天。在倒置相差显微镜下观察细胞每天一次并且拍摄其形态变化。图4c示出了乳腺球培养期间每天观察到的细胞系的显微图像。已知癌细胞系的乳腺球培养增加了癌干细胞的数量。参照图4c，通过用肽5-2C处理有效地抑制了乳腺球的形成并且降低了细胞生长，这表明肽5-2C将抑制癌干细胞的形成并诱导凋亡。
实施例4.3：显微观察肽5C和肽5-2C在胚胎上皮细胞上共培养期间对胚胎干细胞系的生长抑制和凋亡诱导
将每孔中的人胚胎干细胞系(H9)的两个集落接种到96孔板中，在其上铺板正常胚胎上皮细胞或用罗丹明荧光染色的胚胎上皮细胞，然后培养24小时。向接种细胞系的孔板以增加的浓度(0、0.5、1、2、3和10μM)添加生理盐水、FQI1、肽5C和肽5-2C，并将细胞在37℃和5％CO2下培养3天。培养完成之后，在倒置相差显微镜下观察细胞并且拍摄其形态变化。
图4d示出了取决于处理组中处理浓度的72小时集落的显微图像(上)和代表性胚胎干细胞集落和荧光标记的共培养细胞的荧光显微图像(下)。图4d的最右边的红框图像(上)示出10μM处理组的图像中框的放大图像。参照图4d，对于FQI1和肽5C，胚胎干细胞和共培养的细胞系在≥3μM的浓度下死亡。相比之下，对于用肽5-2C处理的组，胚胎干细胞和共培养的细胞甚至在10μM的浓度下也没有死亡。这些结果表明，根据在实施例4.1中的正常细胞系中获得的结果，肽5-2C既不抑制全能干细胞的生长也不诱导凋亡。
实施例4.4：显微观察肽5C和肽5-2C对造血祖细胞和在分化成红细胞期间源自其的细胞的生长抑制和凋亡诱导
从人外周血中收集CD34+造血祖细胞(hematopoietic progenitor cells，HPC)和分化成红细胞期间(分化之后3、7和14天)的细胞并且然后用增加浓度下的生理盐水、FQI1、肽5C和肽5-2处理72小时。在倒置相差显微镜下观察细胞，并拍摄其形态变化。将CD34+造血祖细胞在含有1％BSA的IMDM培养基中培养。对于红细胞的分化诱导，前7天用EPO、SCF、IL-3和氢化可的松培养细胞，并且然后在仅补充有EPO、SCF和IL-3的培养基中培养。
图4e示出了处理组中造血祖细胞和分化诱导成红细胞期间(分化之后3天、7天和14天)的细胞的显微图像。参照图4e，当用包含浓度达10μM的肽5-2C的所有药物处理时，甚至没有观察到细胞的生长抑制和凋亡。
实施例5：肽5C和肽5-2C对癌细胞系的生长抑制和凋亡诱导：通过MTT测定定量测量细胞生存力
实施例5.1：分析当用肽5C和肽5-2C处理时肝癌细胞系的细胞生存力
将肝癌细胞系(HepG2、Hep3B)以3000个细胞/孔的密度接种到96孔板中，并且然后向其中添加50μl的培养溶液。细胞在37℃和5％CO2下培养1小时。FQI1、肽5C、肽5-2C以0、0.5、2、3和10μM的浓度添加到接种有肝癌细胞系的孔板。细胞在37℃和5％CO2下培养24、48、72和96小时。培养完成之后，从孔板除去剩余的培养溶液，将培养物用MTT溶液(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物)稀释直到最终密度为500μg/ml，并且细胞在37℃和5％CO2下培养3小时。除去剩余的MTT溶液，并且添加150μl的二甲基亚砜(DMSO)。反应在室温下进行20分钟。在反应完成之后，使用微板读数仪测量吸光度。
图5a示出了当用增加浓度的肽处理一次后，HepG2细胞系和Hep3B细胞系的相对生存力。参照图5a，肽5C和肽5-2C比FQI1更有效地抑制肝癌细胞系的生长并诱导凋亡。
实施例5.2：分析当用肽5C和肽5-2C处理时乳腺癌细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制乳腺癌细胞系(MCF7、MDA-MB-231)的生长并诱导凋亡。
图5b示出了当用增加浓度的肽处理时，MCF7细胞系和MDA-MB-231细胞系的相对生存力。参照图5b，肽5C和肽5-2C比FQI1更有效地抑制乳腺癌细胞系的生长并诱导凋亡。
实施例5.3：分析当用肽5C和5-2C处理时成胶质细胞瘤细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制成胶质细胞瘤细胞系(U251、U87MG、U343)的生长并诱导凋亡。
图5c示出了当用增加浓度的肽处理时，U251细胞系、U87MG细胞系和U343细胞系的相对生存力。参照图5c，肽5C和肽5-2C比FQI1更有效地抑制成胶质细胞瘤细胞系的生长并诱导凋亡。
实施例5.4：分析当用肽5C和肽5-2C处理时人血癌细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制人血癌细胞系(K562、HEL、HL60)的生长并诱导凋亡。
图5d示出了当用增加浓度的肽处理时，K562细胞系、HEL细胞系和HL60细胞系的相对生存力。参照图5d，肽5C和肽5-2C比FQI1稍微有效地抑制成胶质细胞瘤细胞系的生长并诱导凋亡。
实施例5.5：分析当用肽5C和肽5-2C处理时人胚胎肾癌细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制人胚胎肾癌细胞系(293T)的生长并诱导凋亡。
图5e示出了当用增加浓度的肽处理时293T细胞系的相对生存力。参照图5e，肽5C和肽5-2C类似于FQI1抑制成胶质细胞瘤细胞系的生长并诱导凋亡。
实施例5.6：分析当用肽5C和肽5-2C处理时人肺上皮细胞系和乳腺上皮细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制人肺上皮细胞系(BEAS2B)和乳腺上皮细胞系(MCF10A)的生长并诱导凋亡。
图5f示出了当用增加浓度的肽处理时，MCF10A细胞系和BEAS2B细胞系的相对生存力。
BEAS2B和MCF10A细胞系不是癌细胞但是是通常用作抗癌剂筛选实验中的正常对照组的正常上皮细胞系。参照图5f，FQI1显示浓度依赖性细胞毒性，而肽5C显示出比FQI1低的细胞毒性，肽5-2C甚至在10μM的浓度下也不产生显著的细胞毒性。
实施例5.7：分析当用肽5C和肽5-2C处理时原代培养的小鼠T淋巴细胞的细胞生存力
类似于实施例5.1的过程，确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制原代培养的小鼠T淋巴细胞(静息和活化的T淋巴细胞)的生长并诱导凋亡。在本实验中，切除C57BL/6小鼠的脾，通过物理方法分离组织细胞，并通过0.45μm筛网以获得细胞悬液。使用MACS将CD4+T细胞与悬浮细胞分离。将分离的T淋巴细胞(2.5×105个细胞/孔)在补充有10％血清的培养溶液中培养。通过在预先涂覆有抗-CD3和抗-CD28的板中培养来活化静息状态下所得的T淋巴细胞(2.5×105个细胞/孔)。
图5g示出了当用增加浓度的肽处理时原代培养的静息和活化的T淋巴细胞的相对生存力。参照图5g，即使在所有处理组(包括肽5-2C)中10μM浓度下，也没有观察到显著的细胞毒性。
实施例5.8：分析当用肽5C和肽5-2C处理时人间充质干细胞的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制人间充质干细胞(hMSC)的生长并诱导凋亡。
图5h示出了当用增加浓度的肽处理时hMSC细胞系的相对生存力。与BEAS2B和MCF10A细胞系相似，hMSC细胞不是癌细胞，但是是正常细胞。参照图5h，FQI1显示出浓度依赖性细胞毒性而肽5-2C即使在高浓度下也没有引起显著的细胞毒性。
实施例5.9：分析当用肽5C和肽5-2C处理时人胚胎干细胞的细胞生存力
类似于实施例5.1的过程，确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制通过与小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)共培养来保持多能性之人胚胎干细胞(hESC)的生长。在本实验中，将每个孔中的hESC(H9细胞)的两个集落共同培养在铺板有MEF细胞的96-孔板中，MEF细胞的生长已被丝裂霉素C(MMC)处理抑制。标记有罗丹明的MEF细胞通常用于区分它们与hESC衍生的细胞。
图5i示出了当用增加浓度的肽处理时未标记的hESC(上)和罗丹明标记的hESC(下)的相对生存力。由于实施例5.6中上皮细胞显示出对所有处理的物质没有毒性，所以本实验中测量的细胞生存力可以被认为是hESC的生存力。参照图5i，FQI1显示出浓度依赖性细胞毒性，肽5C在高浓度下引起轻微的细胞毒性，而肽5-2C即使在高浓度下也没有引起显著的细胞毒性。
实施例5.10：分析当用肽5C和5-2C处理时人造血祖细胞和分化成红细胞期间由其衍生的细胞的细胞生存力
类似于实施例5.1的过程，确定FQI1、肽5C和肽5-2C是否有效地抑制CD34+造血祖细胞(HPC)和分化成红细胞期间(分化之后第3天、第7天和第14天)的细胞中癌细胞的生长并诱导凋亡。在本实验中，以与实施例4.4相同的方式制备和培养细胞。
图5j示出造血祖细胞和在分化诱导成红细胞期间(分化之后第3天、第7天和第14天)源自其的细胞的相对生存力。参照图5j，即使当用包含浓度达10μM的肽5-2C的所有药物处理时也没有观察到显著的细胞毒性。
图5k示出在实施例5a至实施例5j中进行的MTT测定数据中肽处理之后76小时(实施例5.10)和96小时的孔板的图像。
实施例6：分析多种癌细胞系中CP2c蛋白的表达水平
实施例6.1
通过Western印迹比较并分析了总共19种细胞系(包括6种结肠癌细胞系，6种肺癌细胞系，3种乳腺癌细胞系，3种成胶质细胞瘤细胞系和1种宫颈癌细胞系)中的CP2c蛋白的表达水平。收集培养期间每种细胞系的1×106个细胞并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤。使用细胞裂解缓冲液(50mM Tris-HCl、pH 7.4，150mM NaCl、1mM EDTA、pH 8，1％Triton X-100，1mM苯甲磺酰氟，蛋白酶抑制剂混合物(Roche))获得细胞提取物。将预定量的蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶(7.5％至15％)上进行电泳，转移至PVDF膜，并在5％封闭溶液中反应1小时。将所述蛋白与作为一抗的抗-CP2c Ab(Cosmo gentech)在室温下反应1小时，并在室温下用作为二抗的辣根过氧化物酶缀合的抗兔Ab(Abcam)处理1小时。使用ECL系统(Amersham-GE Hearlthcare)进行检测。
实验结果显示在图6a中。参照图6a，CP2c在多种癌细胞系中过表达。
实施例6.2
重复实施例6.1的过程以确认来自多种组织来源的血癌细胞系(MEL、K562、HEL、HL60)，肝癌细胞系(HepG2、Hep3B)，表皮样癌细胞系(A431)，结肠癌细胞系(HCT116)和上皮细胞系(293T、BEAS2B、MCF10A)以及hMSC细胞系中CP2c蛋白的表达水平。
实验结果显示在图6b中。参照图6b，CP2c在多种癌细胞系中过表达，但是在正常细胞系(如hMSC)中没有观察到这种现象。
实施例7：测量肽5-2C处理之后多种癌细胞系中肽5-2C的IC50值
实施例7.1：测量肽5-2C处理之后多种癌细胞系和正常细胞系中肽5-2C的IC50值
基于在实施例5中对多种癌细胞系进行的MTT实验的结果，使用Graph Prism Pad6程序计算肽5-2C处理48小时之后的IC50值(IC50是指将细胞的数目减少50％所需的每种物质的浓度)。
图7a示出了用于计算每种细胞系用肽5-2C处理48小时之后肽5-2C的IC50值的图以及计算的IC50值。参照图7a，肽5-2C基本上不影响正常对照细胞系的生长抑制和凋亡的诱导，但是IC50值平均为～1μM，与多种癌细胞系存在轻微的差异。
实施例7.2：测量肽5-2C处理不同时间段之后肽5-2C的IC50值
在用肽5-2C处理多种成胶质细胞瘤细胞系(U343、U373MG、U251和U87MG)一次之后，使用Graph Prism Pad 6程序随时间测量IC50值。
图7b示出了用于计算用肽5-2C处理每种细胞系一次之后48小时和96小时的IC50值的图以及计算的IC50值。参照图7b，48小时之后的IC50值类似于96小时之后的IC50值，表明肽5-2C对细胞生长的抑制和凋亡的诱导的作用维持96小时。
实施例7.3：测量在用FQI1、肽5C和肽5-2C处理之后MCF10A细胞系和BEAS2B细胞系中FQI1、肽5C和肽5-2C的IC50值
基于在实施例5中对肺上皮细胞系(BEAS2B)和乳腺上皮细胞系(MCF10A)进行的MTT实验的结果，使用Sigma绘图程序计算FQI1、肽5C和肽5-2C处理之后的IC50值。
图8示出了用于计算用FQI1，肽5C和肽5-2C处理之后的IC50值的图以及计算的IC50值。参照图8，用FQI1处理正常对照细胞系抑制了细胞生长并诱导凋亡，类似于用肽5C的处理(FQI1的IC50值与MCF10A中肽5C的IC50值基本相同，但是肽5C的IC50值比BEAS2B中FQI1的IC50值高1.5倍)，但是用肽5-2C处理基本上不影响正常对照细胞系的生长抑制和凋亡的诱导。
实施例8：比较并分析肽5-2C和肽5-2D对癌细胞系的生长抑制和凋亡的诱导：通过MTT测定定量测量细胞生存力
肽5-2C是肽5-2(SEQ ID NO：1)的变体，其末端Pro残基与RGD肽序列(CRGDKGPDC；SEQ ID NO：2)键合，所述RGD肽序列与神经纤毛蛋白1受体结合。这种修饰提高了肽的细胞穿透性。如上述实施例所证明的，肽5-2可以特异性抑制癌细胞系的生长并且可以诱导凋亡。有必要使用肽5-2和另一种细胞穿透肽的复合物，以确认肽5-2C对癌细胞的特异性生长抑制和凋亡的诱导的这些作用取决于肽5-2而不是RGD序列。为此，合成肽5-2D，其中已知dNP2肽序列(KIKKVKKKGRKGSKIKKVKKKGRK；Lim等，Nat Commun(2015)6，8244)具有穿透血脑屏障(BBB)和细胞的能力，将其与肽5-2的N-端Asn残基连接。通过MTT测定定量测量当用肽5-2D处理时癌细胞系的细胞生存力并与肽5-2C的作用进行比较。
实施例8.1：分析当用肽5-2D处理时乳腺癌细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定肽5-2D是否有效地抑制乳腺癌细胞系(MCF7，MDA-MB-231)的生长并诱导凋亡。
图9a示出了当用增加浓度的作为阴性对照的生理盐水、作为阳性对照的肽5-2C、和肽5-2D处理时，MDA-MB-231细胞系和MCF7细胞系的相对生存力。参照图9a，类似于肽5-2C，肽5-2D抑制乳腺癌细胞系的生长并有效地诱导凋亡。
实施例8.2：分析当用肽5-2D处理时成胶质细胞瘤细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定肽5-2D是否有效地抑制成胶质细胞瘤细胞系(U343，U87MG)的生长并诱导凋亡。
图9b示出了当用增加浓度的作为阴性对照的生理盐水、作为阳性对照的肽5-2C、和肽5-2D处理时，U343细胞系和U87MG细胞系的相对生存力。参照图9b，类似于肽5-2C，肽5-2D抑制成胶质细胞瘤细胞系的生长并有效地诱导凋亡。
实施例8.3：分析当用肽5-2D处理时结肠癌细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定肽5-2D是否有效地抑制结肠癌细胞系(HCT116、HT29)的生长并诱导凋亡。
图9c示出了当用增加浓度的作为阴性对照的生理盐水、作为阳性对照的肽5-2C、和肽5-2D处理时HCT116细胞系和HT29细胞系的相对生存力。参照图9c，类似于肽5-2C，肽5-2D抑制成胶质细胞瘤细胞系的生长并有效地诱导凋亡。
实施例8.4：分析当用肽5-2D处理时人胚胎肾癌细胞系和肝癌细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定肽5-2D是否有效地抑制人胚胎肾癌细胞系(293T)和肝癌细胞系(HepG2)的生长并诱导凋亡。
图9d示出了当用增加浓度的作为阴性对照的生理盐水、作为阳性对照的肽5-2C、和肽5-2D处理时293T细胞系和HepG2细胞系的相对生存力。参照图9d，类似于肽5-2C，肽5-2D抑制人胚胎肾癌细胞系和肝癌细胞系的生长并有效地诱导凋亡。
实施例8.5：分析当用肽5-2D处理时人血癌细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定肽5-2D是否有效地抑制人血癌细胞系(U937、Jurkat、HL60、HEL)的生长并诱导凋亡。
图9e示出了当用增加浓度的作为阴性对照的生理盐水、作为阳性对照的肽5-2C、和肽5-2D处理时，U937细胞系、Jurkat细胞系、HL60细胞系和HEL细胞系的相对生存力。参照图9e，类似于肽5-2C，肽5-2D抑制人胚胎肾癌细胞系和肝癌细胞系的生长并有效地诱导凋亡。
实施例8.6：分析当用肽5-2D处理时人乳腺上皮细胞系和肺上皮细胞系的细胞生存力
重复实施例5.1的过程以确定肽5-2D是否有效地抑制乳腺上皮细胞系(MCF10A)和肺上皮细胞系(BEAS2B)的生长并诱导凋亡。
图9f示出了当用增加浓度的作为阴性对照的生理盐水、作为阳性对照的肽5-2C、和肽5-2D处理时，MCF10A细胞系和BEAS2B细胞系的相对生存力。参照图9f，类似于肽5-2C，肽5-2D没有影响乳腺上皮细胞系和肺上皮细胞系的生长和凋亡。
图9g示出了在实施例8.1至实施例8.6中进行的MTT测定的数据中在肽处理之后96小时的孔板的图像。
实施例9：测量肽5-2D处理之后多种癌细胞系中肽5-2D的IC50值
基于在实施例8中对多种癌细胞系和正常细胞系进行的MTT实验的结果，使用Graph Prism Pad 6程序计算肽5-2C处理48小时之后的IC50值(IC50是指将细胞数目减少50％所需的每种物质的浓度)。
图10示出了用于计算用肽5-2C和肽5-2D处理每种细胞系一次之后48小时的IC50值的图以及计算的IC50值。参照图10，类似于肽5-2C，肽5-2D基本上没有影响正常对照细胞系的生长抑制和凋亡的诱导，但是IC50值平均为～3μM，与多种癌细胞系存在轻微的差异。
总之，当细胞穿透促进肽(例如RGD或dNP2)与肽5-2的C-端或N-端连接时，肽5-2可以特异性地抑制癌细胞的生长并诱导凋亡。
实施例10：分析肽5-2C处理对移植有多种癌细胞系的小鼠模型中肿瘤生长的抑制作用并预测一般生理毒性
实施例10.1：分析肽5-2C处理对移植有成胶质细胞瘤细胞系(U343)的小鼠模型中肿瘤生长的抑制作用并预测一般生理毒性
将U343成胶质细胞瘤细胞系(2.5×106个细胞/50μl)皮下注射到5周龄雄性BALB/C裸鼠(n＝6只/组)的背部，将肽5-2C(3mg/kg)从当肿瘤大小增加到约80mm3时每三天直接注射到肿瘤部位中，测量小鼠的体重和肿瘤的体积，在肽注射之后第70天处死小鼠，并切除肿瘤，血液和主要器官。使用游标卡尺测量肿瘤大小，并通过(长轴×短轴2)/2计算肿瘤体积。使用涂覆有EDTA的微毛细管从每只小鼠的眼动脉中收集外周血，并储存在涂覆有5.4mgEDTA的样品管中。通过解剖切除肿瘤和主要器官。使用Coulter LH 750血液学分析仪对收集的血液进行基本完全的血细胞计数(CBC)。肿瘤称重之后，将肿瘤和主要器官用4％甲醛染色。通过石蜡切片制备组织薄片并用苏木精/伊红染色。使用Excel程序对获取的数据进行统计分析。
图11示出了在移植有U343成胶质细胞瘤细胞系的小鼠模型中肽5-2C抑制肿瘤生长的能力和肽5-2C的生理特性。具体地，图11a示出了实验期间的肿瘤体积，图11b示出了小鼠的体重变化，图11c示出了肽施用之后第70天小鼠的图像，图11d示出了切除的肿瘤的图像，图11e示出了从小鼠中切除的肿瘤的重量及其平均值，图11f示出了对照组和肽处理组中小鼠的多种标准血液指数，并且图11g示出了主要器官(脾、肝、肺和肾)的H/E染色图像。参照图11a至图11g，与仅施用生理盐水(对照)相比，当将肽5-2C直接施用于肿瘤部位时，小鼠的体重、小鼠的主要CBC指数以及主要器官的组织学/解剖特征不存在差异。然而，肿瘤体积和重量减少了～60％。总之，肽5-2C(3mg/kg)在移植有成胶质细胞瘤细胞系的肿瘤模型中有效地抑制了肿瘤的生长而不引起特别的生理毒性。
实施例10.2：分析肽5-2C处理对移植有表皮样癌细胞系(A431)的小鼠模型中肿瘤生长的抑制作用并预测一般生理毒性
将A431细胞系(5×106个细胞/100μl)皮下注射到7周龄雄性BALB/C裸鼠(n＝4只/组)的背部，肽5-2C(1×IC50；1.7mg/kg，2×IC50；3.5mg/kg)从当肿瘤大小增加到约50mm3时每隔一天通过尾静脉注射到小鼠中，共计5次，测量肿瘤体积，在肽注射之后第13天处死小鼠，并切除肿瘤和主要器官。肿瘤称重之后，将肿瘤和主要器官用4％甲醛染色。通过石蜡切片制备组织薄片并用苏木精/伊红染色。使用Excel程序对获取的数据进行统计分析。
图12a至12d示出了在移植有A431人表皮样癌细胞系的小鼠模型中，肽5-2C抑制肿瘤生长的能力和肽5-2C的生理特性。图12a示出了实验期间肿瘤的体积，图12b示出了小鼠和切除的肿瘤的图像，图12c示出了从所述组中的小鼠切除的肿瘤的重量及其平均值，并且图12d示出了所述组的主要器官(脾、肝、肺、血管和肌肉)的H/E染色图像。参照图12a至图12d，当每隔一天通过静脉注射肽5-2C总共5次时，源自A431表皮样癌细胞系的肿瘤的体积和重量分别降低≥70％和≥60％，并且主要器官的组织学/解剖特征没有显著变化。总之，这些结果表明通过静脉内施用肽5-2C可以有效地抑制源自表皮样癌细胞系的肿瘤的生长。
实施例10.3：分析肽5-2C处理对移植有乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)的小鼠模型中肿瘤生长的抑制作用并预测一般生理毒性
将已确认转移至肺组织的MDA-MB-231细胞系(LM1细胞；1×106个细胞/40μl)注射到12周龄雌性BALB/C裸鼠(n＝5只/组)的乳腺脂肪垫中，肽5-2C(1×IC50；1.7mg/kg＝52μg/小鼠，2×IC50；3.5mg/kg＝104μg/小鼠)从当肿瘤大小增加到约50mm3时每三天通过尾静脉注射到小鼠中，共计5次，测量肿瘤体积，在肽注射之后第30天处死小鼠，并切除肿瘤和主要器官。使用Coulter LH 750血液学分析仪对收集的血液进行基础CBC。肿瘤称重之后，将肿瘤和主要器官用4％甲醛染色。通过石蜡切片制备组织薄片，并用苏木精/伊红染色。使用Excel程序对所获取的数据进行统计分析。
图13a至图13d示出了在移植有能够转移至肺组织的MDA-MB-231细胞系(LM1细胞)的动物模型中肽5-2C抑制转移至肺组织和肿瘤生长的能力以及肽5-2C的生理特性。图13a示出了在注射乳腺癌细胞系之后第30天处死的小鼠和切除的肿瘤的图像，图13b示出了从对照组和肽处理组的小鼠切除的肿瘤的重量及其平均值，图13c示出了对照组和肽处理组中转移至肺的肿瘤灶的数量的平均值和标准偏差，并且图13d示出了对照组和肽处理组中的CBC指数。参照图13a至图13d，当将肽5-2C通过静脉注射到移植有已确认转移至肺组织的MDA-MB-231乳腺癌细胞系的肿瘤小鼠模型中，与对照组中的那些相比，肿瘤重量减少了～30％并且转移至肺的肿瘤灶的数量减少了～50％。另一方面，肽5-2C注射组中的CBC指数与对照组中的那些相似，但是移植有乳腺癌细胞系的对照小鼠中的白细胞数目相当于正常小鼠中的两倍，并且在注射肽5-2C的小鼠中的白细胞数目接近正常值(图13d)。总之，在移植有乳腺癌细胞的小鼠模型中肽5-2C在抑制肿瘤的生长和癌症转移方面是有效的。此外，肽5-2C可以将由癌细胞移植引起的提高的WBC值恢复至正常水平而不引起任何血液学毒性。
实施例11：分析当用肽5C和肽5-2C处理时CP2c的转录活性
293T细胞以1×105个细胞/孔的密度接种到12孔板中。接种之后12小时，通过使用effectene方法用报道载体(野生型报道子将包含两次重复CP2c结合位点的GATA-1基因的增强子序列连接到荧光素酶基因的上游，并且Mut 1/3、Mut 2/4和Mut 1-4报道子引起增强子序列中存在的CP2c结合位点的突变)与多种Flag-CP2c、HA-CP2b和HA-PIAS1表达载体的组合来转染细胞。在培养1小时之后，将细胞用浓度为2μM的FQI1、肽5C和肽5-2C处理，然后培养48小时。收集细胞并在250μl的被动细胞裂解缓冲液(Promega)中裂解以获得提取物。将20μl的细胞提取物和双荧光素酶测定试剂盒(Promega)用于测量GLOMAX(Promega)中标记的荧光素酶基因的活性(通过Western印迹确认每个表达载体的表达)。
结果示于图14a至图14e中。具体地，图14a示出了使用具有图14e所示的正常CP2c靶序列的报道载体所获得的结果。图14b至图14d分别示出了使用突变体2/4、1/3和1-4所获得的结果。图14e示出了正常序列和突变体的序列。参照图14a至图14e，肽5C和肽5-2C与FQI1相比有效地抑制了CP2c-介导的转录活性。在其中CP2c结合位点被突变的突变体中没有发现这种作用，并且具体观察到不仅在CP2c同源四聚体(J Biol Chem，1994；GenesCells，1998)的位点起作用而且在CP2c/CP2b/PIAS1异源六聚体(CBP complex，NucleicAcids Res.Kang等，2010)的序列中起作用。
实施例12：分析肽5-2C处理对癌细胞特异性生长中断和凋亡诱导的作用机制
实施例12.1：分析当用肽5-2C处理时多种癌细胞系的细胞周期
将MEL、K562、MCF-10A和MDA-MB-231每种细胞系的5×105个细胞接种到100mm培养皿中。在接种之后24小时，将细胞用肽5-2C处理，以使得最终浓度为0、1、2、3和10μM。在肽5-2C处理之后48小时，通过胰蛋白酶处理收集细胞。然后，将1×106个细胞悬浮于0.5ml PBS中，并通过吹打分离成单个细胞。将细胞悬液转移到包含4.5ml70％乙醇的离心管中，并在4℃下静置2小时以固定细胞。通过离心获得细胞沉淀物，用5ml的PBS溶液洗涤，充分悬浮在1ml的PI染色溶液中，并在黑暗中染色30分钟。在BD FACSAria中测量细胞荧光，并使用由相同公司提供的软件分析细胞周期。
图15a至图15c示出在用0、1、2、3和10μM的多种浓度的肽5-2C处理细胞系之后48小时通过FACS细胞周期分析多种细胞系(MEL、K562、MCF-10A、MDA-MB-231)的结果，从而分析肽5-2C对细胞周期的影响。具体地，图15a示出了在FACS期间取决于DNA的量的细胞分布，图15b示出了细胞周期阶段中的定量细胞分布，并且图15c示出了显示凋亡的subG1期中的细胞的放大分布。参照图15a至图15c，当用肽5-2C处理时，在其中生长中断和凋亡诱导不可能发生的MCF-10A细胞系中没有观察到细胞周期的显著变化。相比之下，在以高浓度(10μM)处理时诱导生长中断和凋亡的MEL细胞系中，在FACS分析中，仅在高浓度下，subG1期的细胞数目会显著增加。相比之下，在其中响应于肽5-2C敏感地诱导生长中断和凋亡的K562细胞系和MDA-MB-231细胞系中，S期的细胞数目减少，G2/M期的细胞数目增加，并且subG1期的细胞数目增加取决于肽5-2C的浓度。从这些结果可以得出：通过肽5-2C的癌细胞特异性生长中断和凋亡诱导的现象是由抑制转化为细胞周期的G2/M期的细胞生长中断而产生的。
实施例12.2：分析当用不同浓度的肽5-2C处理不同时间段时MCF7细胞系中细胞周期相关的标志物基因的表达谱
将MCF7乳腺癌细胞系的1×105个细胞接种在6孔板中。接种之后24小时，将细胞用最终浓度为2μM的肽5-2C处理。在0、24、48和72小时之后，以与实施例6相同的方式收集细胞提取物。使用针对细胞周期相关的标志物基因的多种抗体进行Western印迹。另一方面，从用最终浓度为1、2和3μM的肽5-2C处理48小时的组中获得细胞提取物并以相同的方式进行Western印迹。
图16a至图16d示出了当用不同浓度的肽5-2C处理MCF7细胞系不同时间段时，细胞周期相关的标志物基因的表达谱。具体地，图16a示出了当用2μM肽5-2C处理72小时时多种细胞周期相关的标志物基因的时间依赖性表达谱，如通过Western印迹测定。图16b示出了用多种浓度(0、1、2和3μM)的肽5-2C处理48小时之后多种细胞周期相关的标志物基因蛋白的表达谱，如通过Western印迹测定。并且图16c和图16d分别示出了图16a和图16b中标志物基因蛋白表达的定量变化。参照图16a至图16d，随着肽5-2C处理时间和浓度的增加，细胞周期蛋白E、p21和p53的表达逐渐提高，并且CDK1和细胞周期蛋白B1的表达逐渐降低，表明肽5-2C在G2期中中断了细胞周期。
实施例12.3：在MDA-MB-231细胞系和MCF7细胞系中凋亡相关的标志物基因的表达谱依赖于肽5-2C处理时间和浓度
以与实施例12.2相同的方式，将MDA-MB-231和MCF7乳腺癌细胞系用生理盐水和2μM肽5-2C处理达72小时。在0、24、48和72小时之后，收集细胞提取物。使用针对细胞周期相关的标志物基因的多种抗体进行Western印迹。
图17示出了用2μM肽5-2C处理MDA-MB-231细胞系和MCF7细胞系之后凋亡相关的标志物基因蛋白的时间依赖性表达谱。参照图17，随着肽5-2C处理时间增加，抗凋亡相关的标志物基因MCL1和BCL2的表达逐渐降低，凋亡促进相关的标志物基因Bim、Bax、Bak、切割的Cas3和Cas8、以及pro-Cas11的表达提高，并且pro-Cas3、pro-cas8、pro-Cas9、pro-Cas12的表达逐渐降低。这些结果可以得出这样的结论：随着肽5-2C处理时间的增加，抗凋亡相关的标志物基因的表达降低，并且凋亡促进相关的标志物基因的表达提高，从而导致凋亡的诱导。假设提高的p53通过线粒体途径诱导内在凋亡并且通过凋亡受体介导的pro-Cas8活化诱导凋亡(Ashkenazi A，Nat rev，2008)。
实施例12.3：电子显微分析肽5-2C处理时MDA-MB-231细胞系和MCF10A细胞系的细胞形态
将1.5×106个细胞的MDA-MB-231细胞系和5×105个细胞的MCF10A细胞系接种到100mm培养皿中。接种1小时之后，用生理盐水、2μM肽5-2C和2μM FQI1处理细胞。在培养24和48小时之后，收集细胞。离心培养溶液并且通过胰蛋白酶处理收集表面粘附的细胞。将收集的细胞用生理盐水洗涤一次。将细胞沉淀物直接用2.5％水性戊二醛溶液处理两次(每次10分钟)。制备电子显微术的样品并根据一般方法成像。
图18示出了显示在用2μM肽5-2C处理MDA-MB-231细胞系和MCF10A细胞系之后24小时和48小时细胞的形态的电子显微图像。用生理盐水处理的细胞和用2μM FQI1处理的细胞分别用作阴性对照和阳性对照。参照图18，对于发现生长中断和凋亡诱导对肽5-2C敏感的MDA-MB-231细胞系，与FQI1处理组相比，在肽5-2C处理组中观察到显著不同的细胞内结构异常。对于通过肽5-2C处理未发现生长中断和凋亡诱导的MCF10A细胞系，在肽5-2C处理组中没有观察到细胞内结构异常，而细胞内结构异常在肽处理之后24小时开始出现并且在FQI1处理组中在肽处理之后48小时观察到相当大的核破裂。总之，通过肽5-2C的肿瘤细胞特异性生长中断和凋亡诱导基于与FQI1不同的机制。在正常的乳腺上皮细胞系MCF10A中，通过肽5-2C处理没有引起细胞内结构修饰，而FQI1引起了严重的细胞内结构修饰。这些结果与实施例4、实施例5、实施例7和实施例8中获得的结果非常一致。
实施例13：分析在MDA-MB-231细胞系中FITC荧光标记的肽5-2C之细胞内迁移途径的跟踪
为了验证癌细胞特异性生长中断和凋亡诱导是由肽5-2C引起的，并且iRGD简单地帮助肽的细胞穿透，合成三种FITC-荧光标记的肽(FITC-iRGD、FITC-5-1C和FITC-5-2C)。以与实施例5.1相同的方式，将MDA-MB-231细胞系用生理盐水和FITC缀合的肽处理96小时并且通过MTT测定计算细胞生存力和IC50值。作为参考，由肽5的N-端残基的前6个氨基酸构成的肽5-1不影响CP2c与DNA结合的能力(参见图3)。每个FITC缀合的肽在实施例5.1所述的相同条件下处理30分钟。将孔用生理盐水洗涤三次，并用新的代替。随后获取延时相差显微图像和荧光显微图像，持续24小时(在肽处理之后1、2、4、8、12和24小时)。使用Photoshop程序合并细胞图像和荧光图像。
图19a至图19d是确认在MDA-MB-231细胞系中FITC-缀合的肽5-2C随时间经过的细胞内迁移途径的图。具体地，图19a示出了MDA-MB-231细胞系用浓度为0、0.5、1、2、3和10μM的生理盐水和FITC-缀合的iRGD、FITC-5-1C和FITC-5-2C肽处理96小时之后MTT测定的细胞生长速率的变化，图19b示出了用于计算在处理之后48小时处理组的IC50值的图以及计算的IC50值，图19c示出了在96小时显示示例性MTT测定的孔板的图像，并且图19d示出了显示在用肽处理之后24小时FITC-缀合的肽(各2μM)的时间依赖性细胞内分布的图像。参照图19a至图19d，仅FITC-缀合的肽5-2C抑制细胞生长并且其IC50值与非FITC-缀合的肽5-2C的IC50值相似。这证明了癌细胞特异性生长中断和凋亡诱导通过肽5-2C引起并且iRGD简单地帮助肽的细胞穿透。细胞穿透在肽处理之后2小时开始出现，并且细胞穿透的肽5-2C累积在细胞核中，而其他肽(iRGD和肽5-1C)保留在细胞质中，或者在8小时之后容易降解。
实施例14：鉴定与肽5-2C相互作用的CP2c蛋白区域以及该区域中的氨基酸
根据前述实施例获得的结果，可以认为由肽5-2引起的癌细胞特异性生长中断和凋亡诱导是因为肽5-2与CP2c结合以阻碍CP2c与表现出癌细胞特征的靶基因的调节位点的结合。为了支持这一假设，需要鉴定与肽5-2C相互作用的CP2c蛋白区域和直接与肽5-2C结合的区域中的氨基酸。因此，尝试获得突变体CP2c蛋白质，其中存在于与图1中所示的肽5结合的CP2c区域中的极性氨基酸被Ala替换，并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)分析突变体CP2c蛋白与肽5-2C的结合。为了便于这种分析，合成了肽5-2CB，其中生物素标签与肽5-2C的C-端Pro残基键合。为了确认肽5-2CB是否诱导癌细胞特异性生长中断和凋亡，如肽5-2C，通过与实施例5.1相同的方法在MDA-MB-231细胞系和MCF7细胞系中的两个不同批次的肽5-2CB上进行MTT测定。还从MTT测定的结果计算IC50值。为了获得19个突变体CP2c蛋白质，其中存在于与肽5-2C结合的CP2c区域中的极性氨基酸被Ala替换，合成了具有编码相应突变体氨基酸的序列的寡核苷酸并进行定点诱变。将编码突变体CP2c基因的碱基序列克隆到pGEX4载体中，并使用与针对GST-标签的抗体结合的珠纯化突变体GST-融合CP2c蛋白。以与实施例1相同的方式确认突变体CP2c与CP2c结合位点(α-球蛋白启动子上的CP2c结合碱基序列)的结合。通过直接ELISA确认每个突变体CP2c与肽5-2CB的结合，其用于通过噬菌体展示技术鉴定CP2c结合肽(Kang等，FEBS J，2005；272：1265-1277)。使用能够在肽5-2CB中识别生物素标签的HRP-缀合的链霉亲和素珠来确认肽5-2CB与每个突变体CP2c蛋白之间的结合。基于Rosetta建模算法预测了CP2c的306至396氨基酸区域的三级结构模型并且使用Swissprot程序获得了靶DNA结合和肽5-2C结合的重要氨基酸。
图20a至图20d比较了肽5-2CB(生物素标记的肽5-2C)对癌细胞存活的影响与肽5-2C的影响。具体地，图20a示出了用肽5-2C和两个不同批次的肽5-2CB以增加浓度处理一次之后MDA-MB-231细胞系的相对生存力，图20b示出了在肽处理之后96小时的孔板的图像，图20c示出了用于计算用每种肽处理MDA-MB-231细胞系之后48小时的IC50值的图以及计算的IC50值，并且图20d示出了用于计算用每种肽处理MCF7细胞系之后48小时的IC50值的以及计算的IC50值。参照图20a至图20d，类似于肽5-2C，肽5-2CB诱导癌细胞特异性细胞生长中断和凋亡，并具有与肽5-2C相似的IC50值。这些结果表明，肽5-2CB可以有效地用于图21a至图21d所示的实验。
图21a至图21d示出了用于鉴定肽5-2C结合的CP2c蛋白区域中的DNA结合或肽5-2C结合之重要氨基酸的一系列实验的结果。具体地，图21a示出了肽5-2C和19个GST-融合突变体的结合区的列表，所述突变体由位点的氨基酸序列中的极性氨基酸被丙氨酸替换而产生，图21b示出了使用GST抗体珠与存在于放射性标记的α-球蛋白启动子中的CP2c结合位点的DNA探针之从大肠杆菌中过表达的突变体纯化的GST-融合蛋白结合的DNA-IP的结果，图21c示出了用于纯化的GST-融合蛋白与肽5-2C结合的直接ELISA的结果，并且图21d示出了基于用于CP2c的306至396位氨基酸区域的Rosetta建模算法预测的用于与三级结构的DNA结合和肽5-2C结合的重要氨基酸。参照图21a至图21d，包含α-螺旋的CP2c蛋白的322至389位氨基酸区域识别CP2c的靶碱基序列，并参与与肽5-2的结合。特别地，E332、R339、R341和R387氨基酸对于结合DNA是重要的，而E332、R339、R341和R347氨基酸对于结合肽5-2是重要的。总之，肽5-2竞争性地结合重要的E332、R339和R341以结合至CP2c的靶DNA碱基序列，使得CP2c不可能结合至靶碱基序列。结果，肽5-2抑制参与转化至细胞周期G2/M期的CP2c靶基因的表达，从而诱导癌细胞特异性生长中断和凋亡。
工业适用性
本发明的肽5-2以非常高的效力穿透癌细胞的细胞膜，并且能够特异性结合至CP2c。因此，本发明的肽抑制了CP2c的活性，因此通过多种CP2c介导的癌细胞中的细胞生长抑制和凋亡诱导来有效地治疗癌症。
<110> INDUSTRY-UNIVERSITY COOPERATION FOUNDATION HANYANG UNIVERSITY
<120> 具有抗癌活性的肽，含有有效量的所述肽的用于预防和治疗癌症的药物组合物和健康功能性食物组合物
<130> JKPCT-023
<160> 4
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工合成的肽
<400> 1
Asn Tyr Pro Gln Arg Pro
1 5
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工合成的肽
<400> 2
Cys Arg Gly Asp Lys Gly Pro Asp Cys
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工合成的肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(3)
<223> No. 1 Lys和No. 3 Lys是6-氨基己酸
<400> 3
Lys Cys Lys Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 4
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工合成的肽
<400> 4
Lys Ile Lys Lys Val Lys Lys Lys Gly Arg Lys Gly Ser Lys Ile Lys
1 5 10 15
Lys Val Lys Lys Lys Gly Arg Lys Gly Gly
20 25
Claims (12)
1.针对癌症具有预防和治疗活性的肽，其与转录因子CP2c结合并具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列：
Asn-Tyr-Pro-Gln-Arg-Pro (1)。
2.根据权利要求1所述的肽，其中乙酰基和酰胺基分别与所述具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基和C端Pro残基键合。
3.根据权利要求1所述的肽，其中所述具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基与具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽键合：
Cys-Arg-Gly-Asp-Lys-Gly-Pro-Asp-Cys (2)。
4.根据权利要求3所述的肽，其中乙酰基和酰胺基分别与所述具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基和所述具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基连接。
5.根据权利要求1所述的肽，其中所述具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基和N端Asn残基与所述具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽和具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的肽连接：
Lys-Cys-Lys-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Ser (3)
其中第一氨基酸Lys和第三氨基酸Lys表示6-氨基己酸，并且所述具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的肽的N端Lys残基与异硫氰酸荧光素(FITC)连接。
6.根据权利要求5所述的肽，其中酰胺基与所述具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基键合。
7.根据权利要求1所述的肽，其中所述具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基与具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的肽连接：
Lys-Ile-Lys-Lys-Val-Lys-Lys-Lys-Gly-Arg-Lys-Gly-Ser-Lys-Ile-Lys-Lys-Val-
Lys-Lys-Lys-Gly-Arg-Lys-Gly-Gly (4)。
8.根据权利要求7所述的肽，其中乙酰基和酰胺基分别与所述具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的肽的N端Lys残基和所述具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的C端Pro残基键合。
9.根据权利要求3所述的肽，其中生物素标记的Lys与所述具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基的ε-NH2结合。
10.根据权利要求9所述的肽，其中乙酰基和酰胺基分别与所述具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的肽的N端Asn残基和生物素标记的C端Lys键合，所述生物素标记的C端Lys与所述具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽的C端Cys残基的ε-NH2结合。
11.用于预防和治疗癌症的药物组合物，其包含根据权利要求1至10中任一项所述的肽作为活性成分。
12.用于预防和治疗癌症的健康功能性食品组合物，其包含根据权利要求1至10中任一项所述的肽作为活性成分。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20150045480 | 2015-03-31 | ||
| KR10-2015-0045480 | 2015-03-31 | ||
| KR10-2016-0033118 | 2016-03-21 | ||
| KR1020160033118A KR101841339B1 (ko) | 2015-03-31 | 2016-03-21 | 항암 활성을 갖는 펩티드, 이를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물 |
| PCT/KR2016/003179 WO2016159627A1 (ko) | 2015-03-31 | 2016-03-29 | 항암 활성을 갖는 펩티드, 이를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107624116A true CN107624116A (zh) | 2018-01-23 |
| CN107624116B CN107624116B (zh) | 2021-08-31 |
Family
ID=57146316
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201680029185.6A Active CN107624116B (zh) | 2015-03-31 | 2016-03-29 | 抗癌活性的肽以及含有其作为活性成分的预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10611797B2 (zh) |
| EP (1) | EP3279210B1 (zh) |
| KR (1) | KR101841339B1 (zh) |
| CN (1) | CN107624116B (zh) |
| ES (1) | ES2793048T3 (zh) |
| PT (1) | PT3279210T (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112402626A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-02-26 | 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 | 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法 |
| CN113874029A (zh) * | 2019-04-01 | 2021-12-31 | 汉阳大学校产学协力团 | 基于cp2c靶向肽的抗癌剂 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101926918B1 (ko) * | 2016-08-30 | 2018-12-07 | 한양대학교 산학협력단 | 항암 활성을 갖는 펩티드, 이를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물 |
| KR102261371B1 (ko) * | 2019-04-01 | 2021-06-08 | 한양대학교 산학협력단 | CP2c 표적 펩티드 기반 항암제 |
| KR102355987B1 (ko) * | 2020-02-05 | 2022-01-26 | 한양대학교 산학협력단 | 불포화 지방산 결합 CP2c 표적 펩타이드 기반 항암제 |
| KR102457344B1 (ko) * | 2020-06-22 | 2022-10-24 | 건국대학교 글로컬산학협력단 | 항암 펩티드와 결합된 항원결합단편 플랫폼 |
| KR102528947B1 (ko) * | 2020-07-09 | 2023-05-08 | 한양대학교 산학협력단 | Nlrx1 단백질의 lrr 도메인을 기반으로 하는 신경계 자가면역질환 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR102475101B1 (ko) | 2020-08-26 | 2022-12-07 | 주식회사 씨쥐케이바이오파마엘티디 | 다양한 미생물 및 항생제 내성균에 항생 효과를 갖는 항생 펩타이드 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102600489A (zh) * | 2012-02-24 | 2012-07-25 | 南方医科大学南方医院 | 含iRGD序列的多肽放射性药物 |
| US20130028899A1 (en) * | 2010-04-01 | 2013-01-31 | Devanand Sarkar | Treatment of cancer by inhibiting activity or expression of late sv-40 factor |
| WO2013127288A1 (zh) * | 2012-02-27 | 2013-09-06 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 抗hiv-1多肽及其用途 |
| CN103347520A (zh) * | 2010-10-13 | 2013-10-09 | 波士顿大学管理委员会 | 用作癌症化学治疗的晚期sv40因子（lsf）的抑制剂 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5595756A (en) * | 1993-12-22 | 1997-01-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents |
| PL3233910T3 (pl) * | 2014-12-19 | 2020-06-01 | Ablynx N.V. | Dimery nanociał połączone cysteiną |
| RU2571551C1 (ru) * | 2015-04-16 | 2015-12-20 | Закрытое акционерное общество "ПЕПТЕК" | Специфическая сочетанная терапия злокачественных опухолей цитостатиком и его модификатором |
-
2016
- 2016-03-21 KR KR1020160033118A patent/KR101841339B1/ko active IP Right Grant
- 2016-03-29 US US15/563,533 patent/US10611797B2/en active Active
- 2016-03-29 PT PT167734086T patent/PT3279210T/pt unknown
- 2016-03-29 ES ES16773408T patent/ES2793048T3/es active Active
- 2016-03-29 CN CN201680029185.6A patent/CN107624116B/zh active Active
- 2016-03-29 EP EP16773408.6A patent/EP3279210B1/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130028899A1 (en) * | 2010-04-01 | 2013-01-31 | Devanand Sarkar | Treatment of cancer by inhibiting activity or expression of late sv-40 factor |
| CN103347520A (zh) * | 2010-10-13 | 2013-10-09 | 波士顿大学管理委员会 | 用作癌症化学治疗的晚期sv40因子（lsf）的抑制剂 |
| CN102600489A (zh) * | 2012-02-24 | 2012-07-25 | 南方医科大学南方医院 | 含iRGD序列的多肽放射性药物 |
| WO2013127288A1 (zh) * | 2012-02-27 | 2013-09-06 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 抗hiv-1多肽及其用途 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| HO CHUL KANG ET AL.: ""Erythroid Cell-Specific α-Globin Gene Regulation by the CP2 Transcription Factor Family"", 《MOLECULAR AND CELLULAR BOLOGY》 * |
| HO CHUL KANG ET AL.: "Identification and characterization of four novel peptide motifs that recognize distinct regions of the transcription factor CP2", 《FEBS JOURNAL》 * |
| MIN YOUNG KIM ET AL.: "A DNA immunoprecipitation assay used in quantitative detection of in vitro DNA–protein complex binding", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》 * |
| SANGHO LIM ET AL.: "dNP2 is a blood–brain barrier-permeable peptide enabling ctCTLA-4 protein delivery to ameliorate experimental autoimmune encephalomyelitis", 《NATURE COMMUNICATIONS》 * |
| 丁辉: "iRGD肽-紫杉醇纳米晶的制备及活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
| 姜昌富等: "《食源性病原微生物检测技术》", 30 April 2003, 湖北科学技术出版社 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113874029A (zh) * | 2019-04-01 | 2021-12-31 | 汉阳大学校产学协力团 | 基于cp2c靶向肽的抗癌剂 |
| CN112402626A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-02-26 | 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 | 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法 |
| CN112402626B (zh) * | 2020-11-26 | 2023-05-02 | 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 | 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107624116B (zh) | 2021-08-31 |
| PT3279210T (pt) | 2020-04-29 |
| EP3279210A4 (en) | 2018-08-15 |
| ES2793048T3 (es) | 2020-11-12 |
| EP3279210B1 (en) | 2020-02-26 |
| EP3279210A1 (en) | 2018-02-07 |
| KR101841339B1 (ko) | 2018-03-22 |
| US20180086788A1 (en) | 2018-03-29 |
| KR20160117198A (ko) | 2016-10-10 |
| US10611797B2 (en) | 2020-04-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107624116A (zh) | 具有抗癌活性的肽以及均含有该肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物 | |
| CN108778314A (zh) | Nk细胞中对细胞因子诱导的sh2蛋白的抑制 | |
| KR102011957B1 (ko) | Slit-robo 시스템을 이용한 근감소증 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN101878223A (zh) | 使用notch途径抑制剂治疗癌症的方法 | |
| KR101926918B1 (ko) | 항암 활성을 갖는 펩티드, 이를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물 | |
| CN107531768A (zh) | 抗衰老化合物及其用途 | |
| CN112386678B (zh) | 多肽或其衍生物的应用 | |
| CN101505780B (zh) | 发育相关疾病的治疗 | |
| KR101987354B1 (ko) | 티오레독신 결합단백질 유래 펩타이드 또는 이를 암호화 하는 폴리뉴클레오타이드를 유효성분으로 함유하는 노화 줄기세포의 역노화용 조성물 및 이의 용도 | |
| KR102261371B1 (ko) | CP2c 표적 펩티드 기반 항암제 | |
| KR20110060140A (ko) | 황기 추출물을 포함하는 대사 촉진 조성물 | |
| CN107001419A (zh) | 神经变性障碍 | |
| CN109942673A (zh) | 一种gpr1拮抗多肽及其衍生物与应用 | |
| CN109942670A (zh) | 一种gpr1拮抗多肽及其衍生物与应用 | |
| CN111534502B (zh) | 一种抗癌活性蛋白妙沙林及其编码基因和应用 | |
| CN109862903A (zh) | 治疗性sall4肽 | |
| CN108853108A (zh) | 化合物在制备用于治疗脑胶质瘤的药物中的用途 | |
| KR20150122043A (ko) | 혈관내피성장인자(vegf)를 유효성분으로 포함하는 니만픽병의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN103739716B (zh) | 一种具有保护神经元线粒体动态平衡的融合多肽及其应用 | |
| CN1938013A (zh) | 抑制发动蛋白依赖性的细胞内摄作用的方法和药剂 | |
| KR102312619B1 (ko) | Arl6ip5 단백질을 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
| KR102277435B1 (ko) | 소라페닙 저항성 간암 치료용 조성물 및 소라페닙 내성 간암 치료에 대한 정보 제공 방법 | |
| KR102187854B1 (ko) | Oct4를 인산화시키는 물질을 포함하는 줄기세포의 줄기세포성 억제용 조성물 | |
| KR101965363B1 (ko) | Ｃ１２ｏｒｆ５９ 유래 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물 | |
| CN110384696A (zh) | 咯利普兰在制备帕金森病药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220402 Address after: Seoul, South Kerean Patentee after: INDUSTRY-UNIVERSITY COOPERATION FOUNDATION HANYANG University Patentee after: Konkuk University Glocal Industry-Academic Collaboration Foundation Address before: Seoul, South Kerean Patentee before: INDUSTRY-UNIVERSITY COOPERATION FOUNDATION HANYANG University |