CN107001419A

CN107001419A - 神经变性障碍

Info

Publication number: CN107001419A
Application number: CN201580064081.4A
Authority: CN
Inventors: 苏珊·阿黛尔·格林菲尔德; 格温内尔·波迪埃茨; 萨拉·埃斯特·加西亚-瑞茨
Original assignee: Neuro Bio Ltd
Current assignee: Neuro Bio Ltd
Priority date: 2014-11-26
Filing date: 2015-11-26
Publication date: 2017-08-01
Anticipated expiration: 2035-11-26
Also published as: KR102489620B1; AU2015352182A1; GB201420986D0; AU2015352182B2; US20170266265A1; EP3224270A1; CN107001419B; WO2016083809A1; MX2017006692A; JP2018506506A; CA2968933A1; EP4116415A1; ES2925550T3; RU2707191C2; GB2539161A; KR20170104457A; BR112017011226A2; JP6708646B2; RU2017121836A; US10729749B2

Abstract

本发明涉及用于治疗神经变性障碍，例如，阿尔茨海默病的新的肽、组合物、疗法，以及方法。

Description

神经变性障碍

本发明涉及神经变性障碍，并且特别地涉及用于治疗这种病，例如阿尔茨海默病的新的肽、组合物、疗法和方法。

阿尔茨海默病主要影响65岁以上的男人和女人，并且随着年龄增加而被诊断为这种病的可能性显著地增加。预期全世界65岁以上成人的百分数在下个40年会增长，预期阿尔茨海默病的发病率会超过两倍，从2010年的2100万病例快速增加到2050年的5300万(来自于www.alzheimersresearchuk.org和www.alz.org的统计)。患有阿尔茨海默病的患者的预期数量的这种指数增加，不仅代表未满足的医疗需要的主要领域，也给治疗学和诊断学提供了重大的市场机会，因为目前没有完全有效的治疗这种疾病的方法。

在过去的10年，还没有特别地抗阿尔茨海默病，更通常地抗神经变性的新药物。原因是至今，还没有确认基本潜在的大脑机理，而该基本潜在的大脑机理由此可以被药物地靶向。用于解释神经变性过程原因的主要竞争者是“淀粉样蛋白假说”，其中神经元死亡归因于淀粉样蛋白的有毒沉淀物引起的细胞膜破坏，阿尔茨海默大脑的尸体解剖的特性，并且由淀粉样蛋白的前体蛋白的不正常切割引起。然而，这种“淀粉样蛋白假说”不能解释阿尔茨海默病和帕金森病经常观察到的共同病理学，也不能解释尽管在所有大脑细胞中淀粉样蛋白的潜在普遍性，易受变性损伤的细胞的特性选择性，也不能解释在痴呆的动物模型中淀粉样蛋白沉淀物的缺少，也不能解释实际上在认知缺陷不明显的一些大脑区域中淀粉样蛋白的出现。尽管在过去的二十年，淀粉样蛋白形成作为药物靶向的普遍性，至今还没有证明基于该理论的治疗有效。更可能的可能性是一旦神经变形过程正在进行，那么将另外地产生淀粉样蛋白作为很少特异性的次要、加重的结果。

用于确认神经变性的主要机理的一个线索可以是只有各种各样的神经元组是主要易受损的。而且，易患阿尔茨海默病、帕金森病和运动神经元病的不同细胞亚组尽管如此仍然彼此邻近和形成从脑干延伸到前脑的连续的“毂”，所有这些向上和向外地发送扩散投射给更高级的脑中枢。因此，尽管它们在递质方面的异质性，但是这些神经元组已经被集体地授予“全局”神经元的称号以区别它们与大脑的大多数其它部分，诸如小脑、丘脑、皮层等中更熟悉的和局部的细胞回路。几十年之前，就先确认了这些选择性易损的全局神经元作为神经变性中的枢轴，虽然使用了不同的术语(“异树突状核”)。

全局神经元的亚组具有共同的特定特征，这可能解释即使受到中风的损伤时，关于为什么只有这些细胞屈从于渐进死亡，而在大脑中其它地方的它们的配对物不会屈从于渐进死亡的费解和至今还没有回答的问题：在遍布整个成年期中它们保持强壮的塑性，同时伴有对帮助和维持生长“营养因子”的物质特异的敏感性。在发展的大脑中，营养因子通过刺激钙流入而工作，这触发了细胞内的级联事件，最终导致选择性分化和生长。然而，更高的剂量或更长时间的暴露，维持的钙进入对神经元有毒。更重要地，关于是否钙进入触发营养或有毒效应的进一步决定因素是年龄：随着神经元成熟，细胞内钙的原来的营养水平变得是致死的。

发明人之前已经建议神经变性过程实际上是异常激活的发展过程。在该假说的支持下，实际上已经报道过在阿尔茨海默大脑中，脑干“毂”神经元的肥大(Bowser等,1997,Brain Pathol.7:723-30)。如果大面积的该毂被损伤，那么一种以上神经变性疾病将出现，如常常看到的发生，但是至今还没能解释阿尔茨海默病和帕金森病的共同病理学的情况。有趣地，全局神经元的易受损毂内所有的神经元，尽管递质的异质性，但是所有都包含熟悉的酶，乙酰胆碱酯酶(AChE)。因此，AChE存在于神经元中，在神经元中它不能执行其正常功能，因为这种亚组细胞作为去甲肾上腺素能的蓝斑，多巴胺能的黑质或者血清素激活的缝核，绝不含有通常的物质，乙酰胆碱。与其正常的酶促作用进一步意外的偏离是AChE实际上从全局神经元释放，大概独立地作为一些种类的细胞内信使。通常，现在已经广泛地和很好地建立了AChE作为信号分子，该信号分子在神经和非神经组织两者中的各种各样的位置中具有营养活性。

发明人之前已经表明AChE，作为营养剂起作用，独立于其酶促作用，实际上确实触发钙进入神经元。因此，可能地在全局神经元内，AChE具有双重非经典作用，其范围沿着营养-有毒轴线，取决于数量、可用性持续时间和最重要地年龄。如果在成年期损伤了标准神经元，如在中风中，其它神经元将功能性地补偿。相比较，全局神经元将通过召唤它们的营养源，试图再生而应答。但是因为在老人、成熟细胞中随后的钙流入将是致死的，所产生的损伤将进一步触发在以神经变性为特征的恶性循环中的补偿试图。

乙酰胆碱酯酶(AChE)在发育的不同阶段表达为各种形式，所有的形式都有相同的酶促活性，但是各种形式都具有非常不同的分子组分。“有尾”(T-AChE)在突触处表达，并且发明人之前已经鉴定了两种肽，可以从C-末端切割这两种肽，一种肽称为“T14”，其位于另一种肽内，另一种肽称为“T30”，两者与β-淀粉样蛋白的可比较区域都具有高度序列同源性。AChE C-末端肽“T14”已经被鉴定为是AChE分子的重要部分，负责非水解作用的其范围。合成的14氨基酸肽类似物(即，“T14”)以及随后它被嵌入到其中的更大、更稳定、和更有效的氨基酸序列(即，“T30”)展示了与报道的“非胆碱能的”AChE的作用相似的作用，其中T30序列内的惰性残基(即，“T15”)没有效应。

T14和T30的急性效应在于它们：-(i)随着从毫秒到小时的时标流逝，调制钙进入到大脑切片中的神经元中；(ii)折衷PC 12细胞以及体外神经元器官型培养中的细胞生存力；(iii)调制从神经元和PC12细胞的“补偿的”钙诱导AChE释放；(iv)激活大脑切片中卵母细胞和神经元中的钙流；(v)在有毒效应方面与淀粉样蛋白协同；和(vi)参与淀粉样蛋白前体蛋白质的产生和淀粉样蛋白β(Aβ)肽释放。T14和T30的慢性效应在于它们：-(i)减少神经元生长；(ii)诱导AChE细胞程序死亡；(iii)增加AChE释放；(iv)结合和调制α7烟碱性受体；和(v)经过24小时，增强α7受体在细胞表面上的表达，因此提供用于进一步毒性的前馈机理。

因为在诱导毒性方面，T14和T30比β-淀粉样蛋白更有选择性，并且也与淀粉样蛋白协同加剧毒性，已经假定阻断T14或T30有毒作用的任何试剂也将会减少淀粉样蛋白的更少选择性的和随后的有毒作用。发明人之前已经表明T30和T14肽结合α7烟碱性受体上别构位点，以诱导营养-有毒效应的范围。在大脑发育的至关重要时期期间，该受体与AChE共表达，以及在成年大脑中显示紧密的平行分布，并且是大脑中最强大的钙离子载体之一。它也独立于胆碱能的传递起作用，因为(来自于饮食的)胆碱可以用作可替代的初级配体。而且，该受体已经牵涉到阿尔茨海默病中，作为用于目前疗法雪花胺的靶之一(加兰他敏(Reminyl)(RTM))，以及与淀粉样蛋白的作用相关。

然而，已经证明雪花胺的效力有限，而其它α7烟碱性乙酰胆碱受体的拮抗剂还在临床试验中。不仅雪花胺对其它受体具有非特异性作用，以及抑制AChE，而且与T30和T14比较，雪花胺对α7烟碱性受体具有低的亲和性(即，仅仅10μM)，而T30和T14对α7烟碱性受体具有更高的亲和性(即，5nM)。因此，如果在阿尔茨海默的大脑中，T30肽的内源等同物已经占据各自的受体位点，那么不需要以非生理学高剂量给药雪花胺，因为雪花胺具有不可避免的副作用，并且最重要地具有可疑的效力。

本发明人之前已经证明包含来自于乙酰胆碱酯酶(AChE)C-末端氨基酸序列的环形多肽体外选择性地抑制AChE和/或其末端肽的非经典作用(即，AChE的作用独立于其酶促活性)，并且由此可以被用于治疗神经变性障碍。例如，已经表明在图2和图中示出的称为“NBP14”的环形肽是特别有活性的，因为它作为拮抗AChE肽和淀粉样蛋白β作用的α7烟碱性受体的别构调制剂。已经表明保护细胞免受线性T14、T30和β-淀粉样蛋白毒性，并且它阻断由线性T14和T30的毒性所诱导的补偿AChE的释放。此外，他们观察到在大鼠大脑切片中单独给出的环形NBP14对Ca2+浓度没有明显的作用，但是阻断β-淀粉样蛋白的作用。

然而，尽管环形NBP14显示的活性，由于其尺寸，存在对穿过血脑屏障的其能力的一些关注。因此，正需要提供用于神经变性障碍，诸如阿尔茨海默病和帕金森病治疗的改进的药物。

如实施例中所讨论的，发明人通过将他们的注意转向到来源于乙酰胆碱酯酶(AChE)C-末端的小线性肽(即，4-14个氨基酸长度)或者其环形变异体，建立了他们之前的工作。他们已经生产了肽阵列，并且发现令人惊奇地可以归类活性线性肽，该活性线性肽用于治疗神经变性障碍，并且从无用的非活性线性肽分离它们。这些活性和非活性肽根据抗T30或淀粉样蛋白的它们的神经变性效力，被归类，如通过细胞损失的减少和伴随的AChE补偿性释放测量的该效力，即，通过计算从在线性肽存在的情况下培养的PC12细胞释放的乙酰胆碱酯酶与肽不存在的情况下PC12细胞的乙酰胆碱酯酶比较的百分数，并且该值除以在肽存在的情况下PC12细胞的生存力的百分数来确定的数值系数。

因此，根据本发明的第一方面，提供了肽、其衍生物或类似物，其包含来源于乙酰胆碱酯酶(AChE)C-末端，或其环形变异体或其截断段的5到8个氨基酸序列或由它们组成，其中肽、其衍生物或类似物具有1.0到1.1的数值系数x,

其中

其中，“％AChE释放”是从在选自T30(SEQ ID NO:156)或Aβ(SEQ ID NO:158)的有毒肽、以及肽、其衍生物或类似物存在的情况下培养的PC12细胞制备释放的乙酰胆碱酯酶与在不存在任何肽、其衍生物或类似物(即，对照)的情况下培养的PC12细胞制备的乙酰胆碱酯酶比较的百分数，并且“％PC12细胞生存力”是在选自T30(SEQ ID NO:156)或Aβ(SEQID NO:158)的有毒肽、以及肽、其衍生物或类似物存在的情况下培养的PC12细胞制备的生存力与在不存在任何肽、其衍生物或类似物(即，对照)的情况下培养的PC12细胞制备的生存力比较的百分数。

如实施例中所述，发明人已经令人惊奇地表明可以根据活性肽和非活性肽的数值系数(X)分离活性肽与非活性肽，该数值系数表示它们抗T30和Aβ毒性的保护效力。对照数值，即，不存在肽的情况下是1.0。数值系数是两个生物学参数的关系，其中x＝1.0到1.1，意指无毒性或是保护性的，并且其中x>1.1意指毒性。T30的数值是x＝169.45/74.309＝2.28，并且对于淀粉样蛋白β(Aβ)，x＝124.19/87.42＝1.42。

表1和表2表示线性肽对AChE活性和抗T30和Aβ毒性的PC12细胞生存力的效果。如可以看到的，一些肽是保护性的，而其它的肽不防止毒性。不可能已经预测到本发明的肽胜出已经占据各自受体位点的内源等同T30肽。相应地，第一方面的肽防止之前建立的线性T30(T14)肽以及β-淀粉样蛋白(Aβ)的有毒作用。另一个标准是活性肽是5-8个氨基酸长度，因为认为更大尺寸的化合物有从外周进入大脑即，穿过血脑屏障的更小可能性。因此，两个标准的使用(即，氨基酸长度和神经保护性活性)能够通过结构以及通过功能实现神经保护性线性肽的分离。同样地，本发明人对它们的体内效力有信心，并且认为本发明的肽在稳定任何进一步细胞损失中，将对神经变性障碍的治疗有显著的有用性。

在本发明的第二方面中，提供了根据第一方面的一种或多种肽、其衍生物或类似物在治疗或诊断中的用途。

在第三方面中，提供了根据第一方面的一种或多种肽、其衍生物或类似物在治疗、改善或防止神经变性障碍中的用途。

在第四方面，供了一种在受试者中治疗、改善或防止神经变性障碍的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试者给药治疗有效量的根据本发明第一方面的一种或多种肽、其衍生物或类似物。

治疗的神经变性障碍优选地是神经变性障碍中每个都以“全局”神经元的损伤或死亡为特征的神经变性障碍。例如，神经变性障碍可以选自有下列组成的群组：阿尔茨海默病；帕金森病；亨廷顿舞蹈病；运动神经元病；脊髓小脑的类型1、类型2和类型3；肌萎缩性(脊髓)侧索硬化症(ALS)；和精神分裂症；路易(Lewy)体痴呆和额颞(骨)的痴呆。

优选地，治疗的神经变性障碍是阿尔茨海默病、帕金森病或运动神经元病。更优选地，用根据本发明第一方面的肽、其衍生物或类似物治疗的神经变性障碍是阿尔茨海默病。

术语“其衍生物或类似物”可以意指一种肽，在该肽内氨基酸残基被具有相似侧链或肽骨架特性的残基(无论是天然氨基酸、非天然氨基酸或氨基酸拟态)取代。因此，这种肽末端可以被与乙酰基或胺基具有相似特性的N-或C-末端保护基团保护。

根据本发明的肽的衍生物和类似物也可以包含体内增加肽半衰期的肽的衍生物和类似物。例如，本发明的肽衍生物或类似物可以包含肽的类肽和逆类肽(retropeptoid)衍生物、肽-类肽杂交体和肽的D-氨基酸衍生物。

类肽或多-N-取代的甘氨酸是一类肽模拟物，当它们在氨基酸中时，其侧链悬挂到肽骨架的氮原子，而不是悬挂到α-碳。从肽的结构知识，可以容易地设计本发明肽的类肽衍生物。根据本发明，逆类肽(其中逆序地由类肽残基置换所有氨基酸)也是适合的衍生物。与肽或含有一个肽残基的肽-肽杂交体比较，期望逆类肽在相反方向上结合在结合配体的沟槽中。结果，类肽残基的侧链能够与原始肽中侧链一样指向相同的方向

术语“来源于”可以意指氨基酸序列，该氨基酸序列是AChE的C-末端或其一部分，或者其环形变异体中，诸如NBP-14中存在的或者形成AChE的C-末端或其一部分，或者其环形变异体，诸如NBP-14的氨基酸序列的衍生物或者修饰。

术语“其截短段”可以意指来源于AChE的肽通过氨基酸的移除而减小了大小。通过从肽的C-或N-末端移除残基，或者从肽的核心内缺失一个或多个氨基酸，可以获得氨基酸的减少。

在一个实施方式中，第一方面的肽、其衍生物或类似物可以是环形的或被环化。然而，最优选地，肽、其衍生物或类似物不是环形的或被环化。优选地，肽、其衍生物或类似物是线性的。优选地，纯化和/或分离肽、其衍生物或类似物，即，它不是天然地被发现的。优选地，肽、其衍生物或类似物是至少95％纯度，或者至少99％纯度，即，无杂质。

乙酰胆碱酯酶是水解乙酰胆碱的丝氨酸蛋白酶，并且是本领域技术人员公知的。大脑中发现的乙酰胆碱酯酶的主要形式称为有尾乙酰胆碱酯酶(T-AChE)。鉴于本发明主要涉及治疗神经变性障碍，优选地肽、其衍生物或类似物包含来源于有尾乙酰胆碱酯酶(T-AChE)的C-末端或者其环形变异体或者其截短段的氨基酸序列或者由它们组成。

人类有尾乙酰胆碱酯酶(Gen Bank:AAA68151.1)的一个实施方式的蛋白质序列长度是614氨基酸，并且此处提供为SEQ ID No:157，序列如下：

将意识到移除了SEQ ID No:157的最初31个氨基酸残基，同时释放蛋白质，因此留下了583个氨基酸序列。相应地，优选地，肽、其衍生物或类似物包含来源于乙酰胆碱酯酶C-末端或环形变异体或其截短段的氨基酸序列，其中乙酰胆碱酯酶包含基本上如SEQ ID No:157中所述的氨基酸序列，或者其功能性变异体或片段。优选地，不包括在N-末端的31个氨基酸。

优选地，肽、其衍生物或类似物包含来源于形成乙酰胆碱酯酶C-末端或者其环形变异体或其截短段的最后300、200、200或50个氨基酸的氨基酸序列或者由它们组成，最优选地其中乙酰胆碱酯酶包含基本上如SEQ ID No:157中所述的氨基酸序列。因此，肽、其衍生物或类似物优选地包含来源于形成乙酰胆碱酯酶C-末端或者其环形变异体或其截短段的最后40个或30个氨基酸的氨基酸序列。

如实施例中所述，并且如图7中图示地表示的，本发明人设计了一套标准，通过该标准确定活性肽。用于建立活性肽的第一个标准是数值系数(x)是1.0到1.1，该数值系数是AChE活性和PC12细胞生存力的测量。所用的另一个标准是活性肽是5-8个氨基酸长度，因为认为更大尺寸的化合物有从外周进入大脑即，穿过血脑屏障的更小可能性。

用于确定活性肽的另一个标准是基于肽与α7烟碱性受体的别构位点的理论结合值。通过使用Trott和Olson(Ref:O.Trott,A.J.Olson,AutoDock Vina:improving thespeed and accuracy of docking with a new scoring function,efficientoptimization and multithreading(具有新的记分功能、效率最佳化和多线程的锚定的改进的速度和精确性),Journal of Computational Chemistry 31(2010)455-461)公布的算法可以计算该理论结合值。因此，优选地，肽、其衍生物或类似物对α7烟碱性受体的别构位点具有小于-7.0kcal.mol^-1，更优选地小于-7.1kcal.mol^-1，并且最优选地小于-7.8kcal.mol^-1的理论结合亲和性。

用于确定活性肽的最终标准是由该肽引起的钙流入到PC12细胞的量。如在方法部分中所描述的，可以计算钙流入值。当单独施用T30或Aβ或者与小肽一起施用T30或Aβ时，钙流入值对应于来自于实验的结果。这些实验的对照值是基于乙酰胆碱单独引起的钙流入。优选地，肽、其衍生物或类似物具有小于120的钙流入值，并且更优选地97-120的钙流入值。

优选地，肽、其衍生物或类似物由5到8个氨基酸序列组成，该氨基酸序列来源于乙酰胆碱酯酶(AChE)C-末端，或者其环形变异体。

因此，特别优选地肽、其衍生物或类似物是(i)5-8个氨基酸长度；(ii)具有1.0到1.1的数值系数x；(ii)具有小于-7.0的肽与α7烟碱性受体的别构位点的理论结合值；并且具有小于120的钙流入值。

在最优选的实施方式中，肽、其衍生物或类似物是(i)5-8个氨基酸长度；(ii)具有1.0到1.1的数值系数x；(ii)具有小于-7.1或小于-7.80的肽与α7烟碱性受体的别构位点的理论结合值；并且具有97到120的钙流入值。

有利地，并且优选地，本发明的肽、其衍生物或类似物是保护性抗T30肽和/或Aβ的有毒作用。更优选地，本发明的肽、其衍生物或类似物是保护性抗T30肽和Aβ的有毒作用。量化毒性的参数为乙酰胆碱酯酶的增加，细胞生存力的降低，钙流入的增加和对α7烟碱性受体的理论亲和性的降低。这些参数的变化将决定肽的保护性效果。

本发明的肽、其衍生物或类似物的分子量优选地是小于1000Da，更优选地小于900Da。

优选地，肽、其衍生物或类似物包含5和8个氨基酸残基，或者5和7个氨基酸，或6和8个氨基酸，或者由它们组成。

在一个优选的实施方式中，肽、其衍生物或类似物包含6个氨基酸残基或由它们组成。优选地，肽、其衍生物或类似物包含基本上如序列SEQ ID No:30、32、40或42中所述的氨基酸序列或者由它们组成。

SEQ ID No:30(即，“NBP-601”)的氨基酸序列是：HWKAEF。

SEQ ID No:32(即，“NBP-603”)的氨基酸序列是：KAEFHR。

SEQ ID No:40(即，“NBP-611”)的氨基酸序列是：SYMVHW。

SEQ ID No:42(即，“NBP-613”)的氨基酸序列是：MVHWKA。

优选地，SEQ ID No:40是保护性抗Aβ的有毒作用。优选地，SEQ ID No:30、32和42是保护性抗T30的有毒作用。

在另一个优选的实施方式中，肽、其衍生物或类似物包含7个氨基酸或者由它们组成。优选地，肽、其衍生物或类似物包含基本上如序列SEQ ID No:48、51或53中所述的氨基酸序列或者由它们组成。

SEQ ID No:48(即，“NBP-705”)的氨基酸序列是：EFHRWSS。

SEQ ID No:51(即，“NBP-708”)的氨基酸序列是：RWSSYMV。

SEQ ID No:53(即，“NBP-710”)的氨基酸序列是：SSYMVHW。

优选地，SEQ ID No:53是保护性抗Aβ的有毒作用。优选地，SEQ ID No:48和51是保护性抗T30的有毒作用。

在另一个优选的实施方式中，肽、其衍生物或类似物包含8个氨基酸或者由它们组成。优选地，肽、其衍生物或类似物包含基本上如序列SEQ ID No:61中所述的氨基酸序列或者由它们组成。

SEQ ID No:61(即，“NBP-804”)的氨基酸序列是：AEFHRWSS。

优选地，SEQ ID No:61是保护性抗T30的有毒作用。

将要理解，NPB-601、603和804都来源于环形NBP14(SEQ ID No:1)，如图3中所示，其中末端的丙氨酸和赖氨酸被一起环化。NPB-601、603和804都是线性肽，并且包含连接在一起的丙氨酸和赖氨酸氨基酸(即，定义连接NBP-14的点)。

将要意识到Aβ是目前更普遍接受的引起神经变性障碍，诸如阿尔茨海默病的毒性机理。优选保护性抗Aβ毒性，并且由此尤其地用于治疗神经变性障碍的根据本发明的任何肽、其衍生物或类似物。然而，本发明人之前的工作表明T30毒性，而不是Aβ毒性，实际上更可能引起神经变性疾病。因此，最优选保护性抗T30毒性，并且特别地用于治疗神经变性障碍的根据本发明的任何肽。

本发明人在PC12中进行了优选的线性肽抗T30和淀粉样蛋白的剂量依赖的应答实验(实施例6)。他们也实验了T30对基底前脑中引起的应答的作用，并且检查了是否第一方面的环形NBP14或较短线性变异体中任一种能够逆转任何T30引起的改变。实施例6和7表示NBP601、NBP603和NBP613保护抗T30作用。因此，最优选这些肽。

在第五方面，提供了包含基本上如序列SEQ ID No:30、32、40、42、48、51、53或61中所述的氨基酸序列的肽，其衍生物或类似物。

在本发明的第六方面，提供了根据本发明的第五方面的一种或多种肽，其衍生物或类似物在治疗或诊断中的用途。

在第七方面，提供了根据本发明的第五方面的一种或多种肽，其衍生物或类似物在治疗、改善或防止神经变性障中的用途。

在第八方面，提供了一种在受试者中治疗、改善或防止神经变性疾病的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试者给药治疗有效量的根据第五方面的一种或多种肽，其衍生物或类似物。

在优选的实施方式中，单一的肽，其衍生物或类似物用于治疗神经变性疾病。然而，基于结果，在另一实施方式中，一种以上的肽，其衍生物或类似物用于治疗神经变性疾病，即，在联合疗法中。例如，可以使用已经显示保护性抗Aβ毒性的多种肽。可替代地，优选地，可以使用已经显示保护性抗T30毒性的多种肽。

在优选的实施方式中，然而，保护性抗T30毒性的一种或多种肽可以联合保护性抗Aβ毒性的一种或多种肽使用，即，两种肽的给药，一种来自于表1中所示的T30保护性组，并且一种来自于表2中所示的Aβ保护性组。例如，NBP-601(SEQ ID No:30)可以与NBP-710(SEQID No:53)共同给药，或者NBP-804(SEQ ID No:361)可以与NBP-611(SEQ ID No:40)共同给药，等等。

将要意识到根据本发明的肽可以用在药物中，该药物可以用在单一疗法中(即，第一方面的一种或多种肽、其衍生物或类似物的用途)，用于治疗、改善或防止神经变性障碍，诸如阿尔茨海默病。可替代地，根据本发明的肽可以用作已知疗法的辅助或者与已知疗法结合，该已知疗法用于治疗、改善或防止阿尔茨海默病，诸如乙酰胆碱酯酶抑制剂。

根据本发明的肽可以结合在具有大量不同形式的组合物中，该不同形式特别地取决于组合物将要被使用的方式。因此，例如，组合物可以是粉末形式、片剂、胶囊、液体、软膏、霜、凝胶、水凝胶、气溶胶、喷雾、胶束溶液、皮肤贴、脂质体悬浮液或可以向需要治疗的人或动物给药的任何其它适合形式。将意识到，根据本发明的药物载体应该是它被给予的受试者良好地耐受的药物载体，并且优选地是能够穿过血脑屏障递送肽的药物载体。

将意识到用于脑障碍的任何治疗的效率取决于候选治疗肽穿过血脑屏障(BBB)的能力。然而，公知在阿尔茨海默病期间，血脑屏障增加了渗透性，这将允许本发明的肽到达中枢神经系统，实际上理想地只在需要它的变性位点，即，折衷BBB的地方。

可以应用两个主要策略用本发明的肽穿过BBB：包括(1)纳米颗粒用作转运蛋白以特异地靶向大脑和递送活性化合物。已经成功地使用该方法以递送肽、蛋白质，并且抗癌药物递送给大脑；(2)货物肽的使用。特异地转运穿过BBB的这种肽的添加允许通过有利的方式转移本发明的肽。

可以通过多种方式使用包含根据本发明的多肽的药物。例如，可以要求口服给药，在这种情况下，多肽可以包含在组合物中，例如，可以口服摄取片剂、胶囊或液体形式的组合物。用于给药肽的可替代的选择将是使用鼻喷入法，因为通过鼻喷入法的肽给药比口服或静脉内方式给药到达大脑更快和更有效(参见http://memoryzine.com/2010/07/26/nose-sprays-cross-blood-brain-barrier-faster-and-safer/)。因此，可以通过吸入(例如，鼻内地)给药包含本发明多肽的组合物。也可以制备组合物用于局部使用。例如，可以向皮肤，例如邻近大脑的皮肤施用霜或软膏。

也可以将根据本发明的多肽包括在缓慢或延迟释放的装置中。这种装置可以，例如插入在皮肤上或下，并且可以经过几周甚或几个月释放药物。该装置可以定位在至少邻近治疗位点，例如，头部。当需要使用根据本发明的多肽进行长期治疗以及这种长期治疗正常地需要经常给药(例如，至少每日注射)时，这种装置可以是特别地有利的。

在优选的实施方式中，根据本发明的药物可以通过注射到血流中或直接地到需要治疗的位点中而向受试者给药。例如，可以至少邻近大脑注射药物。注射可以是静脉内的(推注或输注)或皮下的(推注或输注)或者真皮内的(推注或输注)。

将意识到所需要的多肽的量由其生物活性和生物利用度确定，这接着取决于给药方式，多肽的生理化学特性以及是否它用作单一疗法或在联合疗法中。给药的频率也将受被治疗的受试者内多肽的半衰期影响。给药的最佳剂量可以由本领域技术人员确定，并且将随着使用的特定多肽、药物组合物的强度、给药方式以及神经变性疾病的进展而变化。依赖于受治疗的特定受试者的另外因素将引起调整剂量的需要，包括受试者年龄、体重、性别、饮食和给药的时间。

通常地，根据使用那种多肽，根据本发明的多肽的体重的0.001μg/kg和体重的10mg/kg之间的每日剂量可以用于治疗、改善或防止神经变性疾病。更优选地，每日剂量是体重的0.01μg/kg和体重的1mg/kg之间，并且最优选地约体重的0.1μg/kg和10mg/kg之间。

可以在神经变性疾病发作之前、期间或之后给药多肽。每日剂量可以给作单次给药(例如，鼻喷入的单次每日注射或吸入)。可替代地，多肽可以要求一天期间给药两次或多次。例如，可以给药多肽0.07μg和700mg之间的两次(或根据所治疗的神经变性疾病的严重性给药多次)每日剂量(即，假设70kg的体重)。接收治疗的患者可以在醒了时服用第一剂量，然后在晚上服用第二剂量(如果是两次剂量体系)或者此后的3或4小时间隔。可替代的方案，缓慢释放的装置可以用于向不需要给药重复剂量的患者提供根据本发明的多肽的最佳剂量。

已知的方法，诸如药学工业常规地使用的方法(例如，体外实验、临床试验等)可以用于形成根据本发明的多肽的特定制剂以及精确的治疗体系(诸如药剂的每日剂量和给药的频率)。发明人认为他们是基于本发明多肽的用途，第一个提出抗神经变性疾病组合物的。

因此，在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据第一方面的一种或多种肽、其衍生物或类似物，以及可选地药物学上可接受的载体。

药物组合物优选地是抗神经变性疾病的组合物，即，在受试者中神经变性障碍，诸如阿尔茨海默病中的治疗改善、预防或治疗中所用的药物制剂。

在第六方面，本发明也提供了制造根据第五方面的药物组合物的方法，该方法包括结合根据第一方面的治疗有效量的肽、其衍生物或类似物与药物学上可接受的载体。

肽、其衍生物或类似物优选地是NBP-601(SEQ ID No:30)、NBP-603(SEQ ID No:32)、NBP-613(SEQ ID No:42)、NBP-705(SEQ ID No:48)、NBP-708(SEQ ID No:51)、NBP-804(SEQ ID No:61)、NBP-611(SEQ ID No:40)或NBP-710(SEQ ID No:53)。

“受试者”可以是脊椎动物、哺乳动物或家畜。因此，根据本发明的药物可以用于治疗任何哺乳动物，例如家畜(例如，马)、宠物，或者可以用在其它脊椎动物的应用中。更优选地，然而，受试者是人类。

肽的“治疗有效量”是任何量，当向受试者给药时，该任何量是治疗神经变性障碍病所需的或者产生期望效果的活性剂的量。

例如，所用的治疗有效量的肽可以是从约0.01mg到约800mg，并且优选地从约0.01mg到约500mg。优选地，肽的量是从约01mg到约100mg的量。

此处所提到的“药物学上可接受的载体”是任何已知化合物或已知化合物的联合，本领域技术人员已知这些化合物用在制备药物组合物中。

在一个实施方式中，药物学上可接受的载体可以是固体，并且组合物可以是粉末或片剂的形式。固体的药物学上可接受的载体可以包含一种或多种物质，所述物质也可以作为调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、染料、填料、助流剂、压缩助剂、惰性粘合剂、甜味剂、防腐剂、包衣或片剂-崩解剂。载体也可以是包囊材料。在粉末情况下，载体是精细地分离的固体，其与根据本发明的精细地分离的活性剂混合。在片剂的情况下，活性剂可以与具有以适合比例的必要压缩性质和压缩成期望形状和尺寸的载体混合。粉末和片剂优选地包含直到99％的活性剂。适合的固体载体包含，例如，磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、低熔化的蜡和离子交换树脂。在另一个实施方式中，药物载体可以是凝胶，并且组合物可以是霜的形式或类似物。

然而，药物载体可以是液体，并且药物组合物是溶液的形式。液体载体用于制备溶液、悬浮液、乳液、糖浆、酏剂和加压的组合物。根据本发明的活性剂可以溶解或悬浮在药物学上可接受的液体载体，诸如水、有机溶剂、两者混合物或药物学上可接受的油或脂肪中。液体的载体可以包含其它适合的药物添加剂，诸如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘性调节剂、稳定剂或渗透调节剂。用于口服和非肠道给药的液体载体的适合例子包括水(部分地包含如上所述的添加剂，例如，纤维素衍生物，优选地羧甲基纤维素钠溶液)、乙醇(包括一元醇和多元醇，例如，二醇)和它们的衍生物，以及油(例如，分级的椰子油和花生油)。对于非肠道给药，载体也可以是油酯，诸如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌的液体载体在用于非肠道给药的无菌液体形式组合物中是有用的。用于加压组合物的液体载体可以是卤化的碳氢化合物或其它药物学上可接受的推进剂。

可以通过例如，肌肉、鞘内、硬膜外、腹膜内、静脉内和特别地皮下注射，利用液体药物组合物，其是无菌的溶液或悬浮液。多肽可以制备为无菌的固体组合物，当使用无菌水、盐水或其它适合的无菌可注射介质给药的时候，可以溶解或悬浮该固体组合物。

可以通过无菌的溶液或悬浮液形式，口服给药本发明的多肽和组合物,该溶液或悬浮液包含其它溶质或悬浮剂(例如，足够的盐水或葡萄糖以使溶液等渗压)，胆汁盐、阿拉伯树胶、明胶、山梨聚糖单油酸酯、聚山梨酸酯80(山梨糖醇的油酸酯以及与环氧乙烷共聚合的其酐)等等。还可以通过液体或固体组合物形式，口服地给药根据本发明所用的多肽。适于口服给药的组合物包括固体形式，诸如丸剂、胶囊、颗粒、片剂和粉末以及液体形式，诸如溶液、糖浆、酏剂和悬浮液。用于非肠道给药的形式包括无菌的溶液、乳液和悬浮液。

将意识到本发明延伸到任何核酸或肽或其变异体、衍生物或类似物，其包含这里所提到的任何序列的基本上的氨基酸或核酸序列，包含其功能性变异体或功能性片段。术语“基本上的氨基酸/核苷酸/肽序列”，“功能性变异体”和“功能性片段”可以是与这里提到的任何一个序列的氨基酸/核苷酸/肽序列具有至少40％序列同一性，例如与鉴定为SEI IDNo:1-157的序列具有40％同一性的序列，等等。

也可以设想具有与所提到的任何序列相比大于65％，更优选地大于70％，甚至更优选地大于75％，并且还是更优选地大于80％序列同一性的序列同一性的氨基酸/多核苷酸/多肽序列。优选地，氨基酸/多核苷酸/多肽序列与所提到的任何序列具有至少85％的同一性，与这里所提到的任何序列具有更优选地至少90％的同一性，甚至更优选地至少92％的同一性，甚至更优选地至少95％的同一性，甚至更优选地至少97％的同一性，甚至更优选地至少98％的同一性，并且最优选地至少99％的同一性。

本领域技术人员将意识到如何计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性。为了计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性，首先必须准备两个序列的比对，接着通过计算序列同一性数值。两个序列的百分比同一性可以采用不同的数值，这取决于：(i)用于比对序列的方法，例如，ClustalW,BLAST,FASTA,Smith-Waterman(通过不同程序实施的)，或者来自于3D比较的结构比对；和(ii)比对方法所使用的参数，例如，局部对全部比对，所用的成对记分矩阵(例如，BLOSUM62,PAM250,Gonnet等)和空位罚分，例如功能性形式或常数。

已经进行了比对，存在计算两个序列之间的百分比同一性的许多不同方法。例如，人们可以将同一性的数值分成：(1)最短序列的长度；(ii)比对的长度；(iii)序列的平均长度；(iv)非空位位置的数量；或(iv)不包括突出端等同位置的数量。而且，将意识到百分比同一性也是强烈地长度依赖的。因此，一对序列越短，人们可以预期偶然地出现序列的同一性越高。

因此，将意识到蛋白质或DNA序列的精确比对是复杂的过程。流行的多比对程序ClustalW(Thompson et al.,1994,Nucleic Acids Research,22,4673-4680；Thompson etal.,1997,Nucleic Acids Research,24,4876-4882)是用于产生根据本发明的蛋白质或DNA的多比对的优选方法。用于ClustalW的适合参数可以如下：对于DNA比对：空位开放罚分＝15.0，空位延伸罚分＝6.66，并且矩阵＝Identity。对于蛋白质比对：空位开放罚分＝10.0，空位延伸罚分＝0.2，并且矩阵＝Gonnet。对于DNA和蛋白质比对：ENDGAP＝-1和GAPDIST＝4。本领域技术人员将意识到对于最佳序列比对改变这些和其它参数可以是必要的。

优选地，两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性的计算然后可以从这种比对计算为(N/T)*100，其中N是序列共有相同残基的位置数，并且T是包含空位但是不包含突出端的比较的总位置数。因此，用于计算两个序列之间百分比同一性的最优选的方法包括(i)使用适合的一组参数，例如，如上所述的参数，使用ClustalW程序，准备序列比对；和(ii)将N和T的值插入到下列公式：序列同一性＝(N/T)*100。

用于鉴定相似序列的可替代的方法对于本领域技术人员将是已知的。例如，实质上相似的核苷酸序列将由与DNA序列或它们的互补序列在严格条件下杂交的序列编码。通过严格条件，我们意指在约45℃，在3X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中核苷酸杂交滤膜结合的DNA或RNA，接着在约20-65℃，在0.2X SSC/0.1％SDS中进行至少一次冲洗。可替代地，基本上相似的多肽可以与这里所示的序列不同于至少1个、但是小于5个、10个、20个、50个或100个氨基酸。

由于遗传密码的简并性，清楚地，可以变化或改变这里所述的任何核酸序列，而不实质上影响由此所编码的蛋白质序列，以提供其功能性变异体。适合的核苷酸变异体是具有不同密码子取代所改变的序列的变异体，该不同的密码子编码序列内相同的氨基酸，因此产生沉默改变。其它适合的变异体是具有同源核苷酸序列，但是包含序列的所有或部分的变异体，通过不同密码子取代改变序列的所有或部分，该不同的密码子编码具有与它取代的氨基酸具有相似生物物理特性的侧链的氨基酸，以产生保守改变。例如，小的非极性的疏水性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸。大的非极性疏水性氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。极性中性氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。正电荷(碱性)氨基酸包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸。负电荷(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。因此，将意识到哪种氨基酸可以用具有相似生物物理特性的氨基酸取代，并且本领域技术人员将知道编码这些氨基酸的核苷酸序列。

在进一步方面，提供了一种包含5到8个氨基酸序列的肽、其衍生物或类似物，该氨基酸序列来源于乙酰胆碱酯酶(AChE)，或其截短段，其中肽、其衍生物或类似物具有1.0到1.1的数值系数x，

其中

其中，“％AChE释放”是从在肽、其衍生物或类似物存在的情况下培养的PC12细胞制备释放的乙酰胆碱酯酶与在不存在肽、其衍生物或类似物的情况下培养的PC12细胞制备的乙酰胆碱酯酶比较的百分数，并且“％PC12细胞生存力”是在肽、其衍生物或类似物存在的情况下培养的PC12细胞制备的生存力与在不存在肽、其衍生物或类似物的情况下培养的PC12细胞制备的生存力比较的百分数。

这里所述的所有特征(包括任何所附的权利要求、摘要和附图)，和/或所公开的任何方法和工艺的所有步骤可以通过任何联合方式与任何上述方面联合，除了至少一些这种特征和/或步骤的联合是相互地排他的除外。

为了更好地理解本发明，并且为了表示本发明的实施方式如何可以实施生效，现在将通过实施例方式参考附图，其中：

图1a表示结合α7烟碱性受体的环形多肽NBP-14(此处称为SEQ ID No:1)的结合，并且图1b表示环形NBP-14的3D结构的放大视图。

图2表示NBP-14的序列，具有末端丙氨酸(A)和赖氨酸(K)残基，形成环化位点。

图3表示环形NBP-14肽，其中末端丙氨酸和赖氨酸残基连接在一起。

图4a-4k是表格，表示根据本发明的线性肽的各种实施方式。将肽分成各组肽，各组肽具有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸。

图5是具有α7烟碱性受体的靶位点的组成本发明线性肽的各种实施方式的肽的理论亲和性的图示。

图6表示数据以及相应的图表，它们表示乙酰胆碱酯酶的释放、钙离子流入和细胞生存力之间的关系。图6a表示乙酰胆碱酯酶的释放和钙离子流入之间的关系(相关性是0.210)，图6b表示钙离子流入和细胞生存力之间的关系(相关性是0.026)，并且图6c表示乙酰胆碱酯酶的释放和细胞生存力之间的关系(相关性是-0.550)。

图7是流程图，表示在根据本发明的活性肽的确定中所用的4个筛选或标准。标准1涉及从PC12细胞的AChE释放和PC12细胞生存力之间的相关性；标准2涉及应用标准1后保留的肽的理论结合亲和性；标准3涉及应用标准2后保留的肽所引起的PC12细胞中钙离子流入；并且标准4涉及肽的大小，即，排除应用标准3后保留的肽，具有多于8个以上氨基酸。

图8是图表，表示线性变异体NBP-601或NBP-603抗T30的对钙增强的剂量依赖效应。

图9是图表，表示线性变异体NBP-613抗T30的对钙增强的剂量依赖效应。

图10是包含斜角带复合体(内侧隔核(MS)，腹肢斜角带(VDB)，横肢斜角带(HDB))的冠状大鼠脑切片的图片(上部组)和匹配的示意图(下部组)；构成基底前脑的部分的大脑亚区。红色星表示用于电压敏感染料成像(VSDI)和电生理学实验的适当的刺激位置。

图11表示VSDI平均的时间系列，其表示在基线(蓝色迹线)期间，在T30(2μM；绿色迹线)和T30(2μM)&NBP14(4μM；红色迹线)灌注条件下，目的区域(ROI)内发射的荧光的量(dF/F_o)。在基底前脑中的应答轮廓表示三阶段应答，阶段1是初始峰应答(初始刺激后0-15ms)，阶段2是在峰应答后直接看到的短期静止(初始刺激后15-25秒)，以及阶段3看作阶段2后直接地的回弹、长潜伏时间(复现的)的活性(25ms+刺激后)。通过求和(Σ)初始刺激后0和280ms之间发射的荧光获取数据。

图12表示符合的原始数据图表(n＝14)，表示对于基线(蓝色)、T30(绿色)和T30&NBP14(红色)，最大峰振幅(阶段1)的各个数据点-上部左侧组；总计的荧光(ΣdF/F₀)应答的各个数据点-下部左侧组。相同的数据表示在峰应答振幅(上部右侧组)和总计荧光(下部右侧组)中实验特定的趋势。上部组的Y轴线单元：记录的荧光，dF/F₀；下部组：记录的荧光总和(刺激后0→280ms)，ΣdF/F_o。

图13表示从原始数据库所取的总计长潜伏时间活性的各个值(图12中所示，下部组)，该原始数据库表示实施例实验，在该实验中T30诱导总基底前脑神经元网络活性的降低(上部组)以及T30诱导网络活性的增加(下部组)。在两种情况下，网络活性的变化表示从基线水平的至少50％的应答变化(增加/降低)。在两种情况下，T30与NBP14的共灌注(第三种条件)总是恢复T30灌注所诱导的变化返回朝向基线活性水平。

图14是图表，表示根据T30灌注引起的变化(T30应答-基线应答；y-轴线)绘制的基线应答期间总计发射的荧光的各个数据点(x-轴线)。相关性可以看到基线应答水平越高，T30引起的变化越大；p＝0.007。

图15是根据NBP14添加到灌注液所引起的变化(T30&NBP14应答-T30应答；y-轴线)绘制的T30灌注期间总计发射的荧光引起的变化的各个数据点(T30应答-基线应答；x-轴线)。可以看到相关性，其中T30引起的变化越大，一旦NBP14添加到灌注液，效果的逆转越大；p＝0.015-表示NBP14是T30作用的有效阻断剂。

图16表示VSDI平均的时间系列，其表示在基线(蓝色迹线)期间，在T30(2μM；绿色迹线)和T30(2μM)&NBP603(4μM；红色迹线)灌注条件下，目的区域(ROI)内发射的荧光的量(dF/F_o)。通过求和(Σ)初始刺激后0和280ms之间发射的荧光获取数据。

图17表示符合的原始数据图表(n＝5)，表示对于基线(蓝色)、T30(绿色)和T30&NBP603(红色)，最大峰振幅(阶段1)的各个数据点-上部左侧组；总计的荧光(ΣdF/F₀)应答的各个数据点-下部左侧组。相同的数据表示在峰应答振幅(上部右侧组)和总计荧光(下部右侧组)中实验特定的趋势。上部组的Y轴线单元：记录的荧光，dF/F₀；下部组：记录的荧光总和(刺激后0→280ms)，ΣdF/F_o。

图18是图表，表示根据T30灌注引起的变化(T30应答-基线应答；y-轴线)绘制的基线应答期间总计发射的荧光的各个数据点(x-轴线)。由于数据点的低数量和它们之间的高变化性，发现了向下的趋势(就如上所看到的)；p>0.05。

图19是图表，表示根据NBP-603添加到灌注液所引起的变化(T30&NBP-603应答-T30应答；y-轴线)绘制的T30灌注期间总计发射的荧光引起的变化的各个数据点(T30应答-基线应答；x-轴线)。可以看到相关性，其中T30灌注引起的变化越是正数，一旦NBP-603添加到灌注液，效果的逆转越大；p＝0.024。

图20表示结合α7烟碱性受体(α7-nAChR)的线性肽NBP-601的结合(此处称为SEQID No:30)。以及

图21表示环形NBP-14的化学结构。

实施例

材料和方法

PC12细胞培养

PC12细胞是来源于肾上腺髓质的克隆的、嗜铬细胞瘤细胞系(Greene和Tischler,1976,Proc Natl Acad Sci U S A 73:2424-2428；Mizrachi等,1990,Proc Natl Acad SciU S A 87:6161-6165)。它们容易培养和易于实验操作。因为嗜铬细胞来源于神经嵴，但是位于可接近的外周器官(肾上腺髓质)的中心中，它们已经被描述为提供大脑的“视窗”(Bornstein等,2012,Mol Psychiatry 17:354-358)。这些细胞作为有力的、但是新的体外模型用于研究还未知的神经变性的初级过程，并且为什么它们用于这种课题的原因如下：阿尔茨海默患者中的肾上腺髓质显示了各种病理特征，这些病理特征表明在CNS中所看到的，例如，大量Lewy小体样包涵体、神经原纤维缠结和成对的螺旋微丝，以及淀粉样蛋白前体蛋白质(APP)的表达(Takeda等,1994,Neurosci Lett 168:57-60)。而且，Appleyard和Macdonald(1991,Lancet 338:1085-1086)证明了只有来自于AD中肾上腺的可溶，(即，可释放)形式AChE的选择性减少，可能是由于它增强的分泌到血浆中引起的，在血浆中，在AD患者中它升高(Atack等,1985,J Neurol Sci 70:1-12；Berson等,2008,Brain 131:109-119)。

由Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)提供野生型PC12细胞。在涂覆胶原(2μg/cm²)的100mm皿(Corning)中常规地涂平板PC12细胞培养物或制备物，并且在具有极限必需培养基Eagle(MEM)的生长培养基中维持，该极限必需培养基Eagle(MEM)补充有热失活的10％马血清(HS)和5％胎儿牛血清(FBS)，10mM HEPES，2mM L-谷氨酰胺和1:400青霉素/链霉素溶液。在5％CO₂的湿润环境中，在37℃维持细胞，并且每两天替换培养基。对于分裂，使用带有培养基的吸液管，从皿中取出细胞，这些细胞中一部分被重新接平板到新的培养皿上。使用12和25传代之间的细胞。

β-淀粉样蛋白制备

如提供者(Abcam,Cambridge UK))所描述的制备β-淀粉样蛋白(1-42)原纤维。在1ml的100％1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(HFIP)中溶解1mgβ-淀粉样蛋白(1-42)。在室温下温育该溶液1h。接着，超声溶液10分钟，然后在速度真空干燥器(Thermo Fisher Scientific,Loughborough,UK)中干燥，并且在-80℃存储。对于实验，在100％DMSO中稀释样品以及在室温下温育2小时，以确保原纤维形成。

细胞生存力测定

使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)作为之前所用的SRB技术的改进。通过利用高水溶性四唑盐WST-8，一旦在电子载体存在的情况下还原，CCK-8产生水溶性甲染料。在细胞中WST-8被脱氢酶还原，以产生黄色产物(甲)，其在组织培养基中是可溶的。细胞中，由脱氢酶活性产生的甲染料的量与活细胞数量成正比。在96孔板中实验之前那天，在200μl完全生长培养基中涂平板PC12细胞。添加用T30或Aβ单独地处理或联合NBP-14或更小的肽的处理，并且在培养箱中温育1小时。随后，移除100μl生长培养基，并且添加10μl CCK-8(细胞计数试剂盒-8)溶液。在培养箱中温育平板2小时，然后放置在吸光度平板读数仪中。必须在450nm测量吸光度。

乙酰胆碱酯酶活性测定

使用Ellman试剂测定AChE活性，该Ellman试剂测定作为AChE活性结果的巯基的存在。在用于细胞生存力测定的实验的前一天平板培养细胞。用T30或Aβ(5μl)单独地处理或联合NBP-14或更小的肽(0.5μl)处理细胞。处理后，收集每个处理的上清液(灌注液)，并且向新的平底96孔板添加25μl的每种情况，接着添加175μl Ellman试剂(溶液A：KH₂PO₄ 139mM和K₂HPO₄ 79.66mM,pH 7.0；溶液B(底物)：碘化硫代乙酰胆碱11.5mM；溶液C(试剂):5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)8mM和NaHCO₃ 15mM)。Ellman试剂以33(A):3(B):4(C)的比率制备成3种溶液的混合物。在405nm，在整个实验中以规律间隔(3、10、30和60分钟)取吸光度测定值。

钙荧光测定法

在96孔板中实验之前那天，在200μl完全生长培养基中涂平板PC12细胞。在实验当天，制备Fluo-8溶液(Abcam)(按照提供者的方法)。随后，移除100μl生长培养基，并且添加100μl Fluo-8溶液。添加用T30或Aβ联合NBP-14或更小的肽的处理，并且在培养箱中温育30分钟以及在室温温育30分钟。

1小时后，将平板放置在荧光板读数仪(Fluostar)中。在读取荧光之前，制备100μM乙酰胆碱(ACh)，并且放置在Fluostar注射器中。对于每个孔，读数将由乙酰胆碱注射后的基本荧光形成，该乙酰胆碱的注射经由烟碱性受体，将引起钙的增加。然后，估计肽的效果。

VSDI方法学：

脑切片的制备和来自体内的记录

根据在(Badin et al.,2013)中描述的方法，制备冠状大鼠脑切片，但是这次包含来自于前囟的基底前脑(+0.70和-0.26毫米(mm))(Paxinos and Watson,1998)。然后，如之前所述，进行使用电压敏感染料的光学成像(Badin et al.,2013,Neuropharmacology.73C:10-18)。

数据分析和统计学(VSDI)

在等同于100x100像素-每个像素是40x40微米(μm)的4x4mm-二维图像中记录VSDI数据，从其中提取关键数据。VSDI数据不是在整个实验过程中都被收集，而是实际上被记录在长度15分钟的离散时间周期中。刺激之间的刺激间的间隔(ISI)是28秒，并且因此，每个记录的时期由32个连续的刺激组成。来自于所有32个刺激的数据然后被平均成对于每个实验条件的单个文件，并且使用特别地制造的用于MatLab的VSDI数据分析工具盒分析该数据(Bourgeois et al.,2014,PLoS One.9:e108686)。简而言之，该工具盒允许可以应用于每个切片的固定区域目的(ROI)几何学的选择，以从经过所有切片和实验条件的相同ROI提取和混合数据。沿着切片的隔膜区域的软膜表面选择ROI，以包含内侧内侧隔核(MS)，腹肢斜角带(VDB)和横肢斜角带(HDB)。取自ROI的VSDI数据然后被绘制为单个的平均时间系列(图11)。为了定量VSDI数据，然而，计算刺激时刻(t＝0)和此后280ms之间曲线下的面积(总计的荧光分数改变，图11-22)。该定量方法考虑了即刻和更长潜伏时间应答的所有组成部分。使用GraphPad Prism 6(v6.05；GraphPad软件公司,CA，USA)进行所有统计学试验(单因素方差分析-ANOVA-除非另外说明)，数据(发现其所有都是正态分布的(未示出数据))。对于所有统计学试验，p<0.05认为是显著的；数据表示为平均值±S.E.M。

药物和试剂

由Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)提供MEM、培养血清、抗生素、胶原、细胞计数试剂盒-8和缓冲液试剂。通过Genosphere Biotechnologies(法国)合成T30、AchE肽和环形T14。由Abcam(Cambridge,UK)提供淀粉样蛋白β和Fluo-8。使用常规肽合成技术合成小的肽。在蒸馏水中稀释肽贮存液。

数据分析

在每个不同的技术中，用12次或更多次实验的百分数数值的平均值进行统计学分析。使用GraphPAD Instat(GraphPAD软件,San Diego,CA)，通过单因素方差分析(ANOVA)和Tukey事后检验法，进行多个处理组和相同对照之间的比较。这些实验比较每个处理的平均值与每个其它处理的平均值；即，同时应用于所有成对的比较组，并且确定将预期允许两个平均值之间差值大于标准误差。在P值<0.05取统计学显著性。用GraphPAD Prism 6(GraphPAD软件,San Diego,CA)绘制图表。

实施例1-环形T14(即，“NBP14”)

在突触表达“有尾”乙酰胆碱酯酶(T-AChE)，并且发明人之前已经确定了可以从其C-末端切割的两种肽，一种称为“T14(14个氨基酸长度)”，其位于另一种肽内，另一种称为“T30”(30个氨基酸长度)，并且两者与β-淀粉样蛋白的可比较区域具有强的序列同源性。

线性肽T14的氨基酸序列是AEFHRWSSYMVHWK[SEQ ID No:1]。

线性肽T30的氨基酸序列是KAEFHRWSSYMVHWKNQFDHYSKQDRCSDL[SEQ ID No:156]。

AChE C-末端肽“T14”已经被鉴定为是AChE分子的重要部分，负责非水解作用的其范围。合成的14氨基酸肽类似物(即，“T14”)以及随后它被嵌入到其中的更大、更稳定、和更有效的氨基酸序列(即，“T30”)展示了与报道的“非胆碱能的”AChE的作用相似的作用。

首先参考图1a到图20，显示了14氨基酸长的环形T14肽(即，“NBP-14”)与α7烟碱性受体上别构位点的结合，以完成与线性肽T14和T30的结合，并且以拮抗β-淀粉样蛋白。环形肽NBP-14是基于T14的氨基酸序列，即，AEFHRWSSYMVHWK[SEQ ID No:1]，但是该氨基酸序列经由末端丙氨酸(A)和赖氨酸(K)残基也已经被环化。图1b表示位于α7烟碱性受体的结合袋中的环形NBP-14的3D结构。

现在参考图2，表示具有形成环化位点的末端丙氨酸(A)和赖氨酸(K)残基的NBP-14的序列，并且图3表示环形NBP-14肽，其中末端丙氨酸和赖氨酸残基连接在一起。通过几种不同的手段可以获得环化。例如，Genosphere Biotechnologies(法国)通过转换线性肽为N-末端到C-末端的内酰胺，进行T14的环化。产生环形NBP14的T14的环化使得两个末端在一起，即HWK-AEF。

本发明人之前已经证明环形NBP-14体外选择性地抑制AChE和/或其末端肽的非经典作用(即，独立于其酶促活性的AChE的作用)，并且可以用于治疗神经变性障碍。NBP14用作α7烟碱性受体的真正拮抗剂，并且已经表明保护细胞免受T14、T30和β-淀粉样蛋白的毒性。它也阻断线性T14和T3的毒性所诱导的补偿AChE释放。此外，当单独提供时，环形NBP14对大鼠脑切片中Ca²⁺浓度没有显著作用，但是阻断了β-淀粉样蛋白的作用。

实施例2-来源于环形NBP14的线性肽阵列的产生

基于他们之前用实施例1中讨论的NBP-14的令人惊奇的观察结果，发明人基于NBP14序列制备了线性肽(4-14个氨基酸长度)的阵列，其中每个线性肽序列沿着NBP14序列开始或结束在任何氨基酸位置。线性肽阵列被表示在跨越图4a-4k的大表中(鉴定为SEQ IDNo:2-155)。

图4a的表列出14个线性肽(SEQ ID No:2-15)，其中每天是4个氨基酸长度。每个线性肽都被给出了名称，例如NBP-401，其表示它是具有4个氨基酸的第一个肽，并且NBP-402，其是具有4个氨基酸的第二肽，等等。图4b的表列出了14个线性肽(SEQ ID No:16-29)，其中每个是5个氨基酸长度。在该表中每个线性肽都被给出了名称，例如NBP-501，其表示它是具有5个氨基酸的第一个肽，并且NBP-502，其是具有5个氨基酸的第二肽，等等。图4c列出14个6氨基酸长的肽(SEQ ID No:30-43)，图4d列出了14个7氨基酸长的肽(SEQ ID No:44-57)，图4e列出了14个8氨基酸长的肽(SEQ ID No:58-71)，图4f列出了14个9氨基酸长的肽(SEQID No:72-85)，图4g列出14个10氨基酸长的肽(SEQ ID No:86-99)，图4h列出14个11氨基酸长的肽(SEQ ID No:100-113)，图4i列出14个12氨基酸长的肽(SEQ ID No:114-127)，图4j列出14个13氨基酸长的肽(SEQ ID No:128-141)，并且图4k列出14个14氨基酸长的肽(SEQID No:142-155)。

合成每个线性肽，然后分析它们的活性如下。

实施例3：来源于NBP-14的小线性肽对T30或Aβ毒性和细胞生存力的作用

用抗有毒T30线性肽[SEQ ID No:156]和野生型淀粉样蛋白β(1-42)(Aβ)(SEQ IDNo:158)的三个体外系统，即(i)从PC12细胞的AChE释放，(iii)PC12细胞生存力；和(iii)钙流入到PC12细胞中，分析来源于NBP-14(SEQ ID No:2-155)的每个小线性肽。

这里提供β-淀粉样蛋白(Aβ)部分的氨基酸序列为SEQ ID No:158如下：DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA[SEQ ID No:158]。

然后，根据如图7中概述的一系列4个筛选或标准确定每个线性肽抗T30和/或Aβ的保护或有毒作用：

1.AChE释放对PC12细胞生存力(对于这个，存在显著的负相关性)；

2.在经由电脑模拟中(In silico)，结合α7烟碱性受体的别构位点；

3.钙流入到PC12细胞中；和

4.肽大小。

筛选1：AChE释放对PC12细胞生存力

最初，由于其相关性，发明人使用下面的方程式，联合了测定(i)和(ii)，以获得“数值系数(X)”，其表示每个线性肽抗T30和/或Aβ的保护性或有毒作用。发明人确定了数值系数(X)，其被计算如下：

数值系数(X)＝(％AChE释放)/(％细胞生存力)

如下所述，发明人已经令人惊奇地表明可以根据活性肽和非活性肽的数值系数(X)分离活性肽与非活性肽，该数值系数表示它们抗T30和Aβ毒性的保护效力。

对照(即，不存在任何肽的情况下)具有数值1。如在方法部分中所述的，从没有处理的细胞获得对照值，从用T30或Aβ处理的细胞获得有毒值，并且从用NBP-14联合T30或Aβ处理的细胞获得保护值。T30的数值是x＝169.45/74.309＝2.28，并且对于淀粉样蛋白β(Aβ)，x＝124.19/87.42＝1.42。

因此，具有1.0以下和高于1.1的数值系数(X)的肽是有毒的，而具有1.0到1.1数值系数的任何肽被考虑为有活性，并且由此是有保护性的。表1和表2表示线性肽(在0.5μM浓度)对(在5μM浓度)抗T30和Aβ毒性的AChE活性和PC12细胞生存力的作用。“数值”列表示每个肽的保护作用。

本发明人已经表明两个参数，灌注液中AChE活性和PC12细胞生存力与-0.55(n＝10)的相关性系数是非常紧密之间相关的，其在P<0.05的水平是显著性的(参见图6c)。抗细胞生存力的AChE释放的这种初始量度产生了55个成功的肽，这些肽是保护性的或者抗T30(如表1中所示n＝23肽)或Aβ(如表2中所示n＝32肽)。表1-来源于NBP-14的线性肽对T30毒性的作用

表2-来源于NBP-14的线性肽对Aβ毒性的作用

筛选2-在经由电脑模拟中(In silico)结合

然后，发明人检查了活性肽与α7烟碱性受体的别构位点的理论经由电脑模拟的结合亲和性，并且该数值也在表1和表2中示出。使用Journal of Computational Chemistry(O.Trott,A.J.Olson AutoDock Vina:improving the speed and accuracy of dockingwith a new scoring function,efficient optimization and multithreading(具有新的记分功能、效率最佳化和多线程的锚定的改进的速度和精确性),Journal ofComputational Chemistry 31(2010)455-461)中公开的Autodock Vina软件，进行在经由电脑模拟中的分析。如作者所建议的进行分析。手动地比较与受体结合的氨基酸和氨基酸之间的距离，进行结果分析和比较。

他们发现低于-7.0的理论结合亲和性对应于肽和α7烟碱性受体的别构位点之间的更高亲和性。因此，活性肽的总数从基于筛选1的55个减少到筛选2后的28个肽。

筛选3-钙流入

本发明人也研究了细胞生存力和上面讨论的第三参数(iii)，即，钙流入到PC12细胞中之间的关系。然而，他们发现这些参数，它们具有不同的时标，并不相关，具有仅0.026(n＝10)的相关性系数，如图6b中所示。本发明人也研究了AChE活性和钙流入到PC12细胞中之间的关系。然而，他们发现这些参数，再次随着不同时标过去，而不相关，具有仅0.21(n＝10)的相关性系数，如图6a中所示。

因此，本发明人假设AChE释放最可能是由最终细胞死亡引起的直接“补偿”，而不是由非特异性钙的立即进入引起的，但是代替更慢的细胞内级联。

对于筛选2所产生的28个肽的钙流入的数值也表示在表1和表2中。发明人发现97到120的钙流入值对应于活性肽。因此，活性肽的总数从基于筛选2的28个减少到筛选3后的12个肽。

筛选4-肽大小

最后，发明人认为大于8个氨基酸的任何肽(理论分子量高于900Da)都不呈现用于治疗神经变性障碍的实际的前驱化合物候选物。因此，减低这些更大的肽。因此，活性肽的总数从基于筛选3的12个减少到筛选4后的8个肽。

结论

同样地，当考虑所有的4个筛选时，抗T30的可能的神经保护性试剂的数量是6个肽(即，NBP-601、603、613、705、708和804)，并且抗Aβ的试剂的数量仅仅是两种(即，NBP-611和710)。表1和表2表示对应于保护性或活性肽的绿色数值，而红色数值是毒性或非活性的肽。因此，联合筛选的使用能够通过结构以及通过机理或功能，实现神经保护性线性肽的分离。同样地，发明人对它们的体内效力是有信心的。

实施例4-使用线性肽的联合疗法

发明人已经清楚地证明来源于环形NBP-14的一小亚组的线性肽显示了抗T30毒性的令人惊奇的保护性活性，并且另一亚组肽是保护性抗Aβ的。将要意识到Aβ是目前最通常接受的用于引起神经变性的毒性机理，诸如阿尔茨海默病。因此，一种或多种肽NBP-611和710特别地用于治疗神经变性障碍。

因此，本发明之前的工作将表明T30毒性实际上是这种疾病的最可能的病因，而不是Aβ毒性。因此，一种或多种肽NBP-601、603、613、705、708和804特别地用于治疗神经变性障碍。

在一些实施方式中，发明人认为给药两种肽，一种来自于表1中所示的T30保护性组，并且另一种来自于表2中所示的Aβ保护性组，是有益的。例如，NBP-601可以与NBP-611共给药，或者NBP-705可以与NBP-710共给药，等等。

实施例5-结合亲和性分析

参考图5和图20，表示肽的理论结合亲和性的图示，该肽组成如框中所示的具有α7烟碱性受体的靶位点的各种实施方式的本发明的线性肽。

实施例6-在PC12细胞中抗T30和淀粉样蛋白的剂量依赖的应答中优选的肽的分析

用选择的抗T30的环形NBP-14的小线性变异体进行剂量依赖实验，并且结果如图8和图9中所示。所获得的结果表明NBP601、NBP603和NBP613保护抗T30作用。这些实验确证了实施例7中讨论的大脑切片上所获得的结果。

实施例7-大脑切片实验中抗T30的优选肽(和NBP-14对照)的分析

图10示例了包含内侧隔核、垂直斜角带和横斜角带的基底前脑的位置。VSDI实验的目的是表征用30V电刺激诱发的基底前脑中的应答，并且观察如何这些应答通过高浓度T30的添加而被首先调制的(2μl；图11)。

实际上发现诱发的应答被T30调制，在调制中大多数显示了抑制，而一些应答显示了增加的活性(图12)。在所有情况下，发现NBP14添加到灌注液显著地逆转了T30引起的任何变化(图13、14&15)。

此外，如同用于NBP14，在相同精确的实验范例中试验NBP14变异体NBP-603(图16)。发现变异体NBP-603在逆转T30引起的变化中具有一些显著的作用(图17&19)。

序列表

<110> 神经生物有限公司

<120> 神经变性障碍

<130> GBA1V170004230

<160> 158

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5 10

<210> 2

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 2

His Trp Lys Ala

1

<210> 3

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 3

Trp Lys Ala Glu

1

<210> 4

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 4

Lys Ala Glu Phe

1

<210> 5

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 5

Ala Glu Phe His

1

<210> 6

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 6

Glu Phe His Arg

1

<210> 7

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 7

Phe His Arg Trp

1

<210> 8

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 8

His Arg Trp Ser

1

<210> 9

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 9

Arg Trp Ser Ser

1

<210> 10

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 10

Trp Ser Ser Tyr

1

<210> 11

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 11

Ser Ser Tyr Met

1

<210> 12

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 12

Ser Tyr Met Val

1

<210> 13

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 13

Tyr Met Val His

1

<210> 14

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 14

Met Val His Trp

1

<210> 15

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 15

Val His Trp Lys

1

<210> 16

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 16

His Trp Lys Ala Glu

1 5

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 17

Trp Lys Ala Glu Phe

1 5

<210> 18

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 18

Lys Ala Glu Phe His

1 5

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 19

Ala Glu Phe His Arg

1 5

<210> 20

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 20

Glu Phe His Arg Trp

1 5

<210> 21

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 21

Phe His Arg Trp Ser

1 5

<210> 22

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 22

His Arg Trp Ser Ser

1 5

<210> 23

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 23

Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5

<210> 24

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 24

Trp Ser Ser Tyr Met

1 5

<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 25

Ser Ser Tyr Met Val

1 5

<210> 26

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 26

Ser Tyr Met Val His

1 5

<210> 27

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 27

Tyr Met Val His Trp

1 5

<210> 28

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 28

Met Val His Trp Lys

1 5

<210> 29

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 29

Val His Trp Lys Ala

1 5

<210> 30

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 30

His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5

<210> 31

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 31

Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5

<210> 32

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 32

Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5

<210> 33

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 33

Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5

<210> 34

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 34

Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5

<210> 35

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 35

Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5

<210> 36

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 36

His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5

<210> 37

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 37

Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5

<210> 38

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 38

Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5

<210> 39

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 39

Ser Ser Tyr Met Val His

1 5

<210> 40

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 40

Ser Tyr Met Val His Trp

1 5

<210> 41

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 41

Tyr Met Val His Trp Lys

1 5

<210> 42

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 42

Met Val His Trp Lys Ala

1 5

<210> 43

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 43

Val His Trp Lys Ala Glu

1 5

<210> 44

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 44

His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5

<210> 45

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 45

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5

<210> 46

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 46

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 47

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 48

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5

<210> 49

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 49

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 50

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5

<210> 51

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 51

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5

<210> 52

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 52

Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5

<210> 53

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 53

Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5

<210> 54

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 54

Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5

<210> 55

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 55

Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5

<210> 56

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 56

Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5

<210> 57

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 57

Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5

<210> 58

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 58

His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5

<210> 59

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 59

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5

<210> 60

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 60

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5

<210> 61

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 61

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5

<210> 62

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 62

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5

<210> 63

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 63

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5

<210> 64

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 64

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5

<210> 65

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 65

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5

<210> 66

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 66

Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5

<210> 67

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 67

Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5

<210> 68

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 68

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5

<210> 69

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 69

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5

<210> 70

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 70

Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5

<210> 71

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 71

Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5

<210> 72

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 72

His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5

<210> 73

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 73

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5

<210> 74

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 74

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5

<210> 75

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 75

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5

<210> 76

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 76

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5

<210> 77

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 77

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5

<210> 78

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 78

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5

<210> 79

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 79

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5

<210> 80

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 80

Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5

<210> 81

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 81

Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5

<210> 82

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 82

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5

<210> 83

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 83

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5

<210> 84

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 84

Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5

<210> 85

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 85

Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5

<210> 86

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 86

His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5 10

<210> 87

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 87

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 88

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 88

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5 10

<210> 89

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 89

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5 10

<210> 90

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 90

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5 10

<210> 91

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 91

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5 10

<210> 92

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 92

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5 10

<210> 93

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 93

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5 10

<210> 94

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 94

Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5 10

<210> 95

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 95

Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5 10

<210> 96

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 96

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5 10

<210> 97

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 97

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5 10

<210> 98

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 98

Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5 10

<210> 99

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 99

Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5 10

<210> 100

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 100

His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 101

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5 10

<210> 102

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 102

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5 10

<210> 103

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 103

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5 10

<210> 104

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 104

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5 10

<210> 105

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 105

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5 10

<210> 106

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 106

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5 10

<210> 107

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 107

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5 10

<210> 108

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 108

Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5 10

<210> 109

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 109

Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5 10

<210> 110

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 110

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5 10

<210> 111

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 111

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5 10

<210> 112

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 112

Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5 10

<210> 113

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 113

Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5 10

<210> 114

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 114

His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5 10

<210> 115

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 115

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5 10

<210> 116

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 116

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5 10

<210> 117

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 117

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5 10

<210> 118

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 118

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5 10

<210> 119

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 119

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5 10

<210> 120

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 120

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5 10

<210> 121

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 121

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5 10

<210> 122

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 122

Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5 10

<210> 123

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 123

Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5 10

<210> 124

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 124

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5 10

<210> 125

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 125

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5 10

<210> 126

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 126

Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5 10

<210> 127

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 127

Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 128

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 128

His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5 10

<210> 129

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 129

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5 10

<210> 130

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 130

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5 10

<210> 131

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 131

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5 10

<210> 132

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 132

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5 10

<210> 133

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 133

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5 10

<210> 134

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 134

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5 10

<210> 135

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 135

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5 10

<210> 136

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 136

Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5 10

<210> 137

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 137

Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5 10

<210> 138

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 138

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5 10

<210> 139

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 139

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5 10

<210> 140

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 140

Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 141

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 141

Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5 10

<210> 142

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 142

His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5 10

<210> 143

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 143

Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5 10

<210> 144

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 144

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp

1 5 10

<210> 145

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 145

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5 10

<210> 146

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 146

Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala

1 5 10

<210> 147

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 147

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu

1 5 10

<210> 148

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 148

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe

1 5 10

<210> 149

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 149

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5 10

<210> 150

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 150

Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg

1 5 10

<210> 151

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 151

Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp

1 5 10

<210> 152

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 152

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

1 5 10

<210> 153

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 153

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser

1 5 10

<210> 154

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 154

Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr

1 5 10

<210> 155

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 根据本发明的肽

<400> 155

Val His Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5 10

<210> 156

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Linear, T30 peptide

<400> 156

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Asn

1 5 10 15

Gln Phe Asp His Tyr Ser Lys Gln Asp Arg Cys Ser Asp Leu

20 25 30

<210> 157

<211> 614

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人类乙酰胆碱酯酶的尾部的氨基酸序列

<400> 157

Met Arg Pro Pro Gln Cys Leu Leu His Thr Pro Ser Leu Ala Ser Pro

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Trp Leu Leu Gly Gly Gly Val Gly Ala Glu

20 25 30

Gly Arg Glu Asp Ala Glu Leu Leu Val Thr Val Arg Gly Gly Arg Leu

35 40 45

Arg Gly Ile Arg Leu Lys Thr Pro Gly Gly Pro Val Ser Ala Phe Leu

50 55 60

Gly Ile Pro Phe Ala Glu Pro Pro Met Gly Pro Arg Arg Phe Leu Pro

65 70 75 80

Pro Glu Pro Lys Gln Pro Trp Ser Gly Val Val Asp Ala Thr Thr Phe

85 90 95

Gln Ser Val Cys Tyr Gln Tyr Val Asp Thr Leu Tyr Pro Gly Phe Glu

100 105 110

Gly Thr Glu Met Trp Asn Pro Asn Arg Glu Leu Ser Glu Asp Cys Leu

115 120 125

Tyr Leu Asn Val Trp Thr Pro Tyr Pro Arg Pro Thr Ser Pro Thr Pro

130 135 140

Val Leu Val Trp Ile Tyr Gly Gly Gly Phe Tyr Ser Gly Ala Ser Ser

145 150 155 160

Leu Asp Val Tyr Asp Gly Arg Phe Leu Val Gln Ala Glu Arg Thr Val

165 170 175

Leu Val Ser Met Asn Tyr Arg Val Gly Ala Phe Gly Phe Leu Ala Leu

180 185 190

Pro Gly Ser Arg Glu Ala Pro Gly Asn Val Gly Leu Leu Asp Gln Arg

195 200 205

Leu Ala Leu Gln Trp Val Gln Glu Asn Val Ala Ala Phe Gly Gly Asp

210 215 220

Pro Thr Ser Val Thr Leu Phe Gly Glu Ser Ala Gly Ala Ala Ser Val

225 230 235 240

Gly Met His Leu Leu Ser Pro Pro Ser Arg Gly Leu Phe His Arg Ala

245 250 255

Val Leu Gln Ser Gly Ala Pro Asn Gly Pro Trp Ala Thr Val Gly Met

260 265 270

Gly Glu Ala Arg Arg Arg Ala Thr Gln Leu Ala His Leu Val Gly Cys

275 280 285

Pro Pro Gly Gly Thr Gly Gly Asn Asp Thr Glu Leu Val Ala Cys Leu

290 295 300

Arg Thr Arg Pro Ala Gln Val Leu Val Asn His Glu Trp His Val Leu

305 310 315 320

Pro Gln Glu Ser Val Phe Arg Phe Ser Phe Val Pro Val Val Asp Gly

325 330 335

Asp Phe Leu Ser Asp Thr Pro Glu Ala Leu Ile Asn Ala Gly Asp Phe

340 345 350

His Gly Leu Gln Val Leu Val Gly Val Val Lys Asp Glu Gly Ser Tyr

355 360 365

Phe Leu Val Tyr Gly Ala Pro Gly Phe Ser Lys Asp Asn Glu Ser Leu

370 375 380

Ile Ser Arg Ala Glu Phe Leu Ala Gly Val Arg Val Gly Val Pro Gln

385 390 395 400

Val Ser Asp Leu Ala Ala Glu Ala Val Val Leu His Tyr Thr Asp Trp

405 410 415

Leu His Pro Glu Asp Pro Ala Arg Leu Arg Glu Ala Leu Ser Asp Val

420 425 430

Val Gly Asp His Asn Val Val Cys Pro Val Ala Gln Leu Ala Gly Arg

435 440 445

Leu Ala Ala Gln Gly Ala Arg Val Tyr Ala Tyr Val Phe Glu His Arg

450 455 460

Ala Ser Thr Leu Ser Trp Pro Leu Trp Met Gly Val Pro His Gly Tyr

465 470 475 480

Glu Ile Glu Phe Ile Phe Gly Ile Pro Leu Asp Pro Ser Arg Asn Tyr

485 490 495

Thr Ala Glu Glu Lys Ile Phe Ala Gln Arg Leu Met Arg Tyr Trp Ala

500 505 510

Asn Phe Ala Arg Thr Gly Asp Pro Asn Glu Pro Arg Asp Pro Lys Ala

515 520 525

Pro Gln Trp Pro Pro Tyr Thr Ala Gly Ala Gln Gln Tyr Val Ser Leu

530 535 540

Asp Leu Arg Pro Leu Glu Val Arg Arg Gly Leu Arg Ala Gln Ala Cys

545 550 555 560

Ala Phe Trp Asn Arg Phe Leu Pro Lys Leu Leu Ser Ala Thr Asp Thr

565 570 575

Leu Asp Glu Ala Glu Arg Gln Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

580 585 590

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Asn Gln Phe Asp His Tyr Ser Lys Gln

595 600 605

Asp Arg Cys Ser Asp Leu

610

<210> 158

<211> 42

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> β-淀粉样蛋白

<400> 158

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys

1 5 10 15

Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile

20 25 30

Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala

35 40

Claims

1.肽、其衍生物或类似物，其包含来源于乙酰胆碱酯酶(AChE)C-末端，或其环形变异体或其截断段的5到8个氨基酸序列或由它们组成，其中肽、其衍生物或类似物具有1.0到1.1的数值系数x,

其中

其中，“％AChE释放”是从在选自T30(SEQ ID NO:156)或Aβ(SEQ ID NO:158)的有毒肽、以及肽、其衍生物或类似物存在的情况下培养的PC12细胞制备释放的乙酰胆碱酯酶与在不存在任何肽、其衍生物或类似物的情况下培养的PC12细胞制备的乙酰胆碱酯酶比较的百分数，并且“％PC12细胞生存力”是在选自T30(SEQ ID NO:156)或Aβ(SEQ ID NO:158)的有毒肽、以及肽、其衍生物或类似物存在的情况下培养的PC12细胞制备的生存力与在不存在任何肽、其衍生物或类似物的情况下培养的PC12细胞制备的生存力比较的百分数。

2.根据权利要求1所述的肽、其衍生物或类似物，其中乙酰胆碱酯酶包含基本上如在SEQ ID No:157中所述的氨基酸序列、或者其功能性变异体或片段，或者由它们组成。

3.根据权利要求1或2所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物包含来源于形成乙酰胆碱酯酶C-末端或其截短段的最后40或30个氨基酸的氨基酸序列，或者由它们组成。

4.根据任一前述权利要求所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物对α7烟碱性受体的别构位点具有小于-7.0kcal.mol^-1，或小于-7.1kcal.mol^-1，或小于-7.8kcal.mol^-1的理论结合亲和性。

5.根据任一前述权利要求所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物具有小于120的钙流入值或97-120的钙流入值。

6.根据任一前述权利要求所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物的分子量小于1000Da或小于900Da。

7.根据任一前述权利要求所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物由5和8个氨基酸残基组成，或者由5和7个氨基酸组成，或者由6和8个氨基酸组成。

8.根据任一前述权利要求所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物由6个氨基酸组成。

9.根据权利要求8所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物由基本上如SEQ ID No:30、32、40或42中所述的氨基酸序列组成。

10.根据权利要求1-7中任一权利要求所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物由7个氨基酸组成。

11.根据权利要求10所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物由基本上如SEQ ID No:48、51或54中所述的氨基酸序列组成。

12.根据权利要求1-7中任一所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物由8个氨基酸组成。

13.根据权利要求12所述的肽、其衍生物或类似物，其中肽、其衍生物或类似物由基本上如SEQ ID No:61中所述的氨基酸序列组成。

14.肽、其衍生物或类似物，其由基本上如SEQ ID No:30、32、40、42、48、51、53或61中所述的氨基酸序列组成。

15.药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种根据权利要求1-14中任一权利要求所述的肽、其衍生物或类似物，以及可选地药物学上可接受的载体。

16.用于制备根据权利要求15所述的药物组合物的方法，该方法包括结合根据权利要求1-14中任一所述的治疗有效量的肽、其衍生物或类似物与药物学上可接受的载体。

17.一种或多种根据权利要求1-14中任一所述的肽、其衍生物或类似物在治疗或诊断中的用途。

18.一种或多种根据权利要求1-14中任一所述的肽、其衍生物或类似物在治疗、改善或预防神经变性障碍中的用途。

19.根据权利要求18所述的一种或多种肽、其衍生物或类似物的用途，其中治疗的神经变性障碍是神经变性障碍中每个都以“全局”神经元的损伤或死亡为特征的神经变性障碍。

20.根据权利要求18或19所述的一种或多种肽、其衍生物或类似物的用途，其中神经变性障碍选自由下列组成的群组：阿尔茨海默病；帕金森病；亨廷顿舞蹈病；运动神经元病；脊髓小脑的类型1、类型2和类型3；肌萎缩性(脊髓)侧索硬化症(ALS)；和精神分裂症；路易体痴呆和额颞(骨)痴呆。

21.根据权利要求18-20中任一所述的一种或多种肽、其衍生物或类似物的用途，其中治疗的神经变性障碍是阿尔茨海默病、帕金森病或亨廷顿舞蹈病。

22.根据权利要求18-21中任一所述的一种或多种肽、其衍生物或类似物的用途，其中治疗的神经变性障碍是阿尔茨海默病。

23.根据权利要求18-22中任一所述的一种或多种肽、其衍生物或类似物的用途，其中一种以上的肽、其衍生物或类似物用于在联合疗法中治疗神经变性疾病。

24.根据权利要求23所述的一种或多种肽、其衍生物或类似物的用途，其中保护性抗T30毒性的一种或多种肽与保护性抗Aβ毒性的一种或多种肽联合使用。