TR201802790T4 - Nfkb sinyal yolu manipüle edilmiş dendritik hücreler. - Google Patents
Nfkb sinyal yolu manipüle edilmiş dendritik hücreler. Download PDFInfo
- Publication number
- TR201802790T4 TR201802790T4 TR2018/02790T TR201802790T TR201802790T4 TR 201802790 T4 TR201802790 T4 TR 201802790T4 TR 2018/02790 T TR2018/02790 T TR 2018/02790T TR 201802790 T TR201802790 T TR 201802790T TR 201802790 T4 TR201802790 T4 TR 201802790T4
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- rna
- dcs
- cells
- nfkb
- signaling pathway
- Prior art date
Links
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 title claims description 74
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 title abstract description 113
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims abstract description 98
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims abstract description 31
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 28
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 24
- 101100508533 Drosophila melanogaster IKKbeta gene Proteins 0.000 claims description 22
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 22
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 9
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 101150116749 chuk gene Proteins 0.000 claims description 8
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 7
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 230000011664 signaling Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 22
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 19
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 15
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 14
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 14
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 11
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 11
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 11
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 11
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 11
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 11
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 11
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N serine Chemical compound OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 7
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 7
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 7
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 7
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 description 7
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 7
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 7
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 7
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 6
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 6
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 6
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 6
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 6
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 6
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 6
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 5
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 5
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- 102100026890 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Human genes 0.000 description 5
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 5
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 5
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 4
- 101000764263 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Proteins 0.000 description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 4
- 241001522306 Serinus serinus Species 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 4
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 3
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 3
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 3
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 102000016200 MART-1 Antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 2
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 2
- 101001043754 Homo sapiens Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 102100021854 Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta Human genes 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- HWCBFXAWVTXXHZ-NYVOZVTQSA-N Trp-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)O)N HWCBFXAWVTXXHZ-NYVOZVTQSA-N 0.000 description 2
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- -1 among others Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000037011 constitutive activity Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 235000021251 pulses Nutrition 0.000 description 2
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 150000003588 threonines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- ZKHFSIMBFARVHY-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;hydrochloride Chemical compound Cl.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O ZKHFSIMBFARVHY-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- JFOWDKWFHZIMTR-RUCXOUQFSA-N (2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2,5-diamino-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JFOWDKWFHZIMTR-RUCXOUQFSA-N 0.000 description 1
- HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- YAXNATKKPOWVCP-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YAXNATKKPOWVCP-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UQJUGHFKNKGHFQ-VZFHVOOUSA-N Ala-Cys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UQJUGHFKNKGHFQ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 description 1
- HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- AECPDLSSUMDUAA-ZKWXMUAHSA-N Asn-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N AECPDLSSUMDUAA-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DXQOQMCLWWADMU-ACZMJKKPSA-N Asp-Gln-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DXQOQMCLWWADMU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N Asp-Leu-Lys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BJDHEININLSZOT-KKUMJFAQSA-N Asp-Tyr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BJDHEININLSZOT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100036842 C-C motif chemokine 19 Human genes 0.000 description 1
- 101150040772 CALY gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010082161 Chemokine CCL19 Proteins 0.000 description 1
- 102000003805 Chemokine CCL19 Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- JXVFJOMFOLFPMP-KKUMJFAQSA-N Cys-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JXVFJOMFOLFPMP-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 description 1
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N Gln-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SSHIXEILTLPAQT-WHFBIAKZSA-N Gln-Asp Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SSHIXEILTLPAQT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- UICOTGULOUGGLC-NUMRIWBASA-N Gln-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O UICOTGULOUGGLC-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- FNAJNWPDTIXYJN-CIUDSAMLSA-N Gln-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FNAJNWPDTIXYJN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LGWNISYVKDNJRP-FXQIFTODSA-N Gln-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LGWNISYVKDNJRP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- AKJRHDMTEJXTPV-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(O)=O AKJRHDMTEJXTPV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- APHGWLWMOXGZRL-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-His Chemical compound N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O APHGWLWMOXGZRL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LGQZOQRDEUIZJY-YUMQZZPRSA-N Gly-Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)CN)C(O)=O LGQZOQRDEUIZJY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N Gly-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- YJBMLTVVVRJNOK-SRVKXCTJSA-N His-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N YJBMLTVVVRJNOK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N His-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N His-His-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LVXFNTIIGOQBMD-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LVXFNTIIGOQBMD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WSEITRHJRVDTRX-QTKMDUPCSA-N His-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O WSEITRHJRVDTRX-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- WRPDZHJNLYNFFT-GEVIPFJHSA-N His-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O WRPDZHJNLYNFFT-GEVIPFJHSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 1
- 101000713106 Homo sapiens C-C motif chemokine 19 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 1
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000003458 I kappa b kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000001284 I-kappa-B kinase Human genes 0.000 description 1
- 108060006678 I-kappa-B kinase Proteins 0.000 description 1
- RWIKBYVJQAJYDP-BJDJZHNGSA-N Ile-Ala-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN RWIKBYVJQAJYDP-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- KVRKAGGMEWNURO-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N KVRKAGGMEWNURO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- BAJIJEGGUYXZGC-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N BAJIJEGGUYXZGC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N Leu-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FKQPWMZLIIATBA-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- VHFFQUSNFFIZBT-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N VHFFQUSNFFIZBT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DCRWPTBMWMGADO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CTJUSALVKAWFFU-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CTJUSALVKAWFFU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N Met-Glu-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XYSXOCIWCPFOCG-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XYSXOCIWCPFOCG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N Pro-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N Pro-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)[O-])C(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- VGFFUEVZKRNRHT-ULQDDVLXSA-N Pro-Trp-Glu Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O VGFFUEVZKRNRHT-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- UDQBCBUXAQIZAK-GLLZPBPUSA-N Thr-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UDQBCBUXAQIZAK-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- KBUBZAMBIVEFEI-ZFWWWQNUSA-N Trp-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CNC=N1 KBUBZAMBIVEFEI-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- BUBBEHCXSMCYNY-CVEARBPZSA-N [3-hydroxy-5-methyl-4-[(2S,3R)-2,3,4-trihydroxybutoxy]carbonylphenyl] 2,4-dihydroxy-6-methylbenzoate Chemical compound CC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)OC1=CC(C)=C(C(=O)OC[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=C1 BUBBEHCXSMCYNY-CVEARBPZSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000017488 activation-induced cell death of T cell Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001294 alanine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 108010029539 arginyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000182 cd11c+cd123- dc Anatomy 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 1
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000004665 defense response Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 239000012645 endogenous antigen Substances 0.000 description 1
- 239000003256 environmental substance Substances 0.000 description 1
- BUBBEHCXSMCYNY-UHFFFAOYSA-N erythrin Natural products CC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)OC1=CC(C)=C(C(=O)OCC(O)C(O)CO)C(O)=C1 BUBBEHCXSMCYNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000024715 positive regulation of secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 102200055464 rs113488022 Human genes 0.000 description 1
- 102200016720 rs121913492 Human genes 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 108010029384 tryptophyl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
- C12N5/064—Immunosuppressive dendritic cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/122—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells for inducing tolerance or supression of immune responses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Television Systems (AREA)
- Photovoltaic Devices (AREA)
- Stereo-Broadcasting Methods (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Buluş NF'B sinyal yolunun RNA transfeksiyonu ile manipüle edildiği dendritik hücreler, bunların üretimi ve kullanımı ile ilgilidir.
Description
Tarifname içinde günümüzün teknolojisinden patent basvurularEI/e üretici kullanIi kllâvuzlarlîl
dahil bir seri dokümandan bahsedilmektedir. Bu dokümanlar. açilîlama Içerigi bulusun patent
haline getirilmesi için önemli degildir.
Dendritik hücreler (DZ) (DH`Ier) dogustan ve adaptif baglgiKlllZltepkisi arasIdaki baglantIlE
Bunlar patojenleri bu sekilde tanlîrlilama ve adaptif (dolayEIîLla spesifik patojene uygun)
baglglzlllîl tepkisini baslatma ve yönetme durumundadB Ayrlîia, DH'Ier patojenlerin
yoklugunda endojen antijenlere karslîltoleransa aracÜJKl edebilmektedir. Böylece DH'Ier
baglgEllEJtepkilerinin hedeflenen indüksiyonu için, ama aynüamanda immünolojik toleransa
araclIJEI edilmesi için anahtarEtemsil etmektedir. Sitokin IL-12p70 hücre araciIJDDaglglEligiI
indüksiyonunda önemli rol oynarken Sitokin IL-10 humoral baglSIEIEîlEl indüksiyonunda, aynIZI
zamanda tolerans. içinde yer allEl DH'yi adjuvan olarak kullanan habis hastal[lZ]ar[E| immüno
terapisi, çesitli klinik arastlEünalarIa zaten kullanllE'iISIIEI ve bu yöntemin güvenilirligi ve
fizibilitesi kaniflhnmaktadß Bununla birlikte, kullanilan antijenlere karsEhastalarI baglgllZIlK]
tepkileri, in vitro olarak düzenli olarak saptanabilmesine ragmen, klinik sonuçlar beklentilerin
alt-a kalmaktadlEl DH'yi hücre kültüründe üretmek suretiyle, bunlarEözel olarak manipüle
etmek mümkündür. Bu baglamda uzun ömürlü T bellek hücrelerini indükleyebilen DH'Ierin
üretilmesi avantajdlrîl ve bu arada düzenleyici T hücrelerine (Treg) ve diger tolerojenik
mekanizmalara karslîlirençli davranlgâvantajdlü Uzun ömürlü T bellek hücreleri bir antijen ile
yenilenen bir temasta daha hlîIEl/e daha etkili sekonder bir tepki verir Bu haflîa fonksiyonu,
CD4-pozitif ve CD8-pozitif T-haflîla hücreleri tarafIan devraIIbilmektedir. Uzun ömürlü T
bellek hücreleri sadece klgla bir ömre sahip olan ve çogunlukla bir baglglKlilgtepkisinden sonra
aktivasyona baglühücre ölümü (AICD, activatibn-/nducihg cell death / aktivasyon /hdÜk/eyen
hücre ölümü) sonucu ölen efektör hücrelerinden farklIlEl Bununla birlikte iki hücre tipi
arasIa efektör bellek hücreleri gibi geçis formlar. sahiptir. Bunlar efektör hücreleri gibi
vücudun tamamlZIiçinde hareket etmektedirler ve antijen temasIa efektör fonksiyonlari]
uygulamaktadlEl daha da çogalabilmektedir ve efektör hücrelerine göre daha uzun ömürlüdür.
Diger taraftan otoimmünitenin ve alerjinin hedeflenen tedavisi için, DH'nin belirli kosullar
altIa baglgllîlllîl tepkisini baskllâyabilecegi ve toleransa aracüilîl edebilecegi için DH'nin
kullannEtlüsünülebilmektedir. DH'nin degisik türlerinin üretimine ait iyilestirilmis metotlar ve
protokoller bu nedenle büyük ilgiye sahiptir ve dünya çapia arastlEIIIhaktadE Bilinen teknige
verilmektedir. DH çesitli patojenlerin algllânmasllîlsaglayabilen çesitli yüzey reseptörlerine
sahiptir. DH ayrlEla sitokinler ve kemokinler gibi vücuda özel çesitli haberci maddeleri ve de
baglSJKIllZl sisteminin diger hücreleri üzerindeki yüzey moleküllerini algllâma durumundadlü DH
hücre içi sinyal yollarElyoluyla gelen çesitli sinyalleri hesaba katmakta, bu sayede çesitli
farklllâsma programlarEltetiklenmektedir. Bu sinyal yollar- saglanan manipülasyonu bu
sayede ya baglSlKllgb ( kanser baglglElilZlterapisinde) veya toleransa (otoimmün hastalllZIarI ve
aleijilerin tedavisinde) araclIJKJ etmek için daha çok uygun olan özellestirilmis DH'Ierin
olusmasi olanak saglamaktadlEl Genetik manipülasyon yoluyla DH'Ierin içindeki sinyal
yollar. müdahale etmeye ait degisik olanaklar zaten formüle edilmis ve uygulanmaktadlü
Bunula birlikte öncelikle insan DH'Ierinin manipülasyonunda degisik engeller ortaya
çlIZmaktadlEl Bir terapi çerçevesindeki genetik bir manipülasyon süpheli olarak görünmekte ve
somatik gen tedavisi ciddi bir sekilde düzenlenmektedir. Bunun dislüda, tlpta en çok kullanllân
insan DH'lerinin (monositlerden türetilmis DH) genetik olarak degistirilmesi olanaglZIçok
s-ndlEllB'iIStlE ve sadece lentivirüslerden veya adenovirüslerden gelistirilen viral
transfeksiyon sistemlerinin kullanliü bugüne kadar basarlillîl olmustur. Böylece US-Al
sayesinde bir adenovirüs vasEisEIle ifade edilen IKKoi için 176 ve 180 pozisyonlarIa ve IKKß
için 177 ve 181 pozisyonlarlfitla elde edilen aktif bir formunu açllZJamaktadlEl Bununla birlikte
DNA'nI katllmaslîlçin bu araçlar. kullanIiElçok kritik olarak dikkate almakta ve baska
riskleri de beraberinde taslaktadlB Böylece lenti virüsler sayesinde daima viral sekanslar da
hücrenin genomu içinde yapllânmaktadlü Bu sayede hücreye özel aktif genler zarar görebilir
veya viral promotorlar aktif olmayan genleri aktive etmektedirler. Bununla birlikte genom
içine entegrasyon rastlantElal olarak gerçeklestigi için hangi genlerin söz konusu olabilecegi
önceden kestirilememektedir. Tahrip olan veya aktif olan tümör baskllâylEDgenler veya
onkogenler söz konusu ise hücrenin kendisi, en kötü durumda, tümör hücresi olabilmektedir.
AyrlEla, indüklenen baglgKlllZl tepkisi, arzu edilen antijenlere degil, viral ürünlere
yönelebilmektedir. Sonuncusu adenoviral sistemler için de geçerlidir ve çok say. insan zaten
adenovirüslere karslîinevcut bir baglSIElllZltepkisine sahip oldugu Için burada baglgllîlllîltepkisi
çok siddetli olabilmektedir. Bir adenoviral vektöre karsDJu türlü siddetli bir baglglklllgltepkisi
1999 y-a hatta bir ölüm hadisesine yol açmlSIlE DH'Ierin merkezi bir sinyal yolu NFKB sinyal
iletim kaskadIlEl DH'Ierin çok sayida yüzey reseptörlerinin stimülasyonu bu iletim kaskad-
aktive olmalela yol açmaktadlüve inhibitör proteinler fosforilasyon ile destabilize olmakta ve
böylece kopyalama faktörleri çekirdegin içine ulaslEIve orada çesitli genlerin kopyalanmas-
neden olmaktadlEl Bu fosforilasyon islemini uygulayan kinazlar IKK (kappa kinazlar. inhibitörü)
olarak tan IanmaktadIEl
Bulusun klEla açflillamaslîl
Simdi, dendirik hücrelerin (asaglöh klgiaca "DH" ) NFKB sinyal yolunun mutant sinyal iletim
proteinlerinin RNA transfeksiyonu ve ekspresyonu ile kendi NFKB sinyal yolu içinde manipüle
edilebilecegi kesfedilmistir. Hem yapiEEblarak aktif hem de dominant negatif mutantlar
bulunabilirdi. DH'lerin RNA transfeksiyonundan önce veya sonra olgunlasmasElsayesinde
DH'ler degisik fenotipler ve sitokin profilleri ile üretilmekte ve burada IL-12p70 sitokinleri
(baglglElüZl Indüksiyonu için) ve IL-10 sitokinleri (tolerans indüksiyonu için veya bagEIEllglü
baskllânmlg fenotiplerin olusmasEliçin) merkezi bir rol oynamaktadE Böylece istemlerde
belirtildigi gibi sunlarla ilgilidir:
(1) NFKB sinyal yolunun mutant sinyal iletim proteini için kodlanan bir veya birden fazla
nükleotid sekanslar- sahip RNA transfeksiyonu ile kendi NFKB sinyal yolu içinde manipüle
edilmis dendritik hücreler (DH);
(2)NFKB sinyal yolunun mutant sinyal iletim proteini için kodlanan bir veya birden fazla
nükleotid sekanslarljile olgunlasmamlg veya olgunlasmis] DH'Ierin RNA transfeksiyonu
içeren ve (1)'e göre NFKB sinyal yolu tarafIan manipüle edilmis DH'Ierin üretimine ait bir
yöntem;
(3)bir bilesim, farmasötik kompozisyon veya (1)'e göre DH içeren bir ilaç;
(4)Ot0log CD8 + T hücrelerinin eX VIVO stimülasyonu Için (1)'e göre DH'Ierin kullanIlsîl
(5) bir hastadaki kanserin, HIV kaynakllltIDS gibi bulasIEIJIiastalilZIarI ve otoimmün hastalllZIarI
tedavisi ve önlenmesine ait bir ilaclEl üretimi için (1)'e göre DH'Ierin kullanIElre aynlîsekilde bir
hastadaki kanserin, HIV kaynaklllkIDS gibi bulaslEEEiastalllZIar ve otoimmün hastallklarltedavisi
ve önlenmesinde kullanI için (1)'e göre DH;
(6) (1)' e göre hücrelerin DH ile uyarllüiaslüüçeren otolog CD8 + T hücrelerinin ex i/i'i/o uyarliiwaslîl
dahil T hücrelerinin ekspansiyonuna ait bir yöntem
(7)Ayr|Ela tarifname içinde bir hastadaki kanserin, bulaslEElhastallEIarI ve otoimmün
hastalllZlarI tedavisi ve önlenmesine ait (1)'e göre DH'nin hastalara uygulanmaleEilçeren bir
yöntem tarif edilmektedir.
Sekillerin kEh açlElamasEl
S& NFKB, DH olgunlasma sinyal zincirinin merkez noktaslükla bulunmaktadlEI Tehlike
sinyalleri tarafüdan tetiklenen çok saylEIh yüzey reseptörleri ve DH oIgunIasmasIIZI
tetikledikleri bilien proenflamatuvar uyarlîllâr NFicB'nin aktivasyonuna neden olurlar.
NFKB'nin aktivasyonu yine IL-12p70 gibi önemli sitokinlerin dagIDEJiIEb ve DH'lerin
fenotipik degisikliklerine neden olmaktadß
Sek. 2: IKKß-EEAlO-RNA elektropolasyonuna tabi tutulmus dendritik hücreler ile IL-12p70
Sek. 3: NFicB-sinyal yolu bileseni IKKß-EEAIO ile transfekte edilmis dendritik hücreler
üzerine yüzey markerlarII ekspresyonu.
su IKKoc ve IKKß'nI temel olusturan aktive edilmis mutantlarIElkodIayan ve
astarlandlEtan sonra @1 ve yeniden canland-UZtan sonra 19) analize edilen bir veya iki
RNA ile elektropolasyona tabi tutulmus otolog T hücrelerinin dendritik hücreler ile tetramer
boyanmasEl
Sek. 5: IKKoc ve IKKß'nI temel olusturan aktive edilmis mutantlar-kodlayan RNA
transfeksiyonundan 24 saat sonra olgunlasmlgldendritik hücrelerin göçü:
% NFiçB sinyal yolunun bilesenleri ile elektropolasyona tabi tutulmus DH üzerindeki
yüzey markerlar- indüksiyon faktörü. DH'ler GM-CSF ve IL-4 ile altlgünlük bir kültürleme
esnasIa monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'ler standart bir olgunlasma kokteylinin
(IL-1 ß, IL-6, TNFoi ve PGE2) katHBiasIan 24 saat sonra olgunlastümDH). Daha sonra
RNA`slZ] DH, (alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKa-EE-A16-RNA ve(klasik sinyal yolunu
aktive eden) IKKß-EEAIO-RNA ile tek bas. veya kombinasyon içinde (her biri 15 ug RNA)
elektropolasyona tabi tutuldu. Bu DH'ler elektropolasyondan 24 saat sonra CD4O ve CD70'e
karsEIantikorlarla boyandEIve FACS sayesinde analize edilmistir. Bagnslîl 8 donörün
ortalama degeri ortalama degerin standart sapmalarEile berlilenmektedir.
S& NFicB sinyal yolunun bilesenleri ile elektropolasyona tabi tutulmus DH üzerindeki
yüzey markerlar- indüksiyon faktörü. DH'Ier GM-CSF ve IL-4 ile altlîgliünlük bir kültürleme
esnasIa monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'Ier standart bir olgunlasma kokteylinin
(IL-1 ß, IL-6, TNFoi ve PGE2) katliE1asIan 24 saat sonra olgunlastlîimDH). Daha sonra
RNA'sE DH, (alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKa-EE-Alö-RNA ve(klasik sinyal yolunu
aktive eden) IKKß-EEAlO-RNA ile tek bas. veya kombinasyon içinde (her biri 15 ug RNA)
elektropolasyona tabi tutuldu. Bu DH'Ier elektropolasyondan 24 saat sonra CD83 ve
CD86'ya karsüantikorlarla boyandElve FACS sayesinde analize edilmistir. Baglslîl 8
donörün ortalama degeri ortalama degerin standart sapmalarlîle belirlenmektedir.
S& NFicB sinyal yolunun bilesenleri ile elektropolasyona tabi tutulmus DH üzerindeki
yüzey markerlar- indüksiyon faktörü. DH'Ier GM-CSF ve IL-4 ile altlîgünlük bir kültürleme
esnasIa monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'Ier standart bir olgunlasma kokteylinin
(IL-1 ß, IL-6, TNFa ve PGE2) katliB1aleUan 24 saat sonra olgunlastIJmDH). Daha sonra
RNA` slZlDH, (alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKoc-EE-Alö-RNA ve (klasik sinyal yolunu
aktive eden) IKKß-EEAIO-RNA ile tek baslEa veya kombinasyon içinde (her biri 15 i.ig RNA)
elektropolasyona tabi tutuldu. Bu DH'Ier elektropolasyondan 24 saat sonra OX-40L ve
CD25'e karsßntikorlarla boyandüle FACS sayesinde analize edilmistir. BagIislZl8 donörün
ortalama degeri ortalama degerin standart sapmalarüle belirlenmektedir.
w NFKB sinyal yolunun bilesenleri ile elektropolasyona tabi tutulmus dendritik
hücrelerin IL-12p70 ve IL-10 sitokinlerinin sekresyonu. DH'Ier GM-CSF ve IL-4 ile altlîgünlük
bir kültürleme esnasIa monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'Ier standart bir
olgunlasma kokteylinin (IL-1 ß, IL-6, TNFoi ve PGE2) katllîhasIan 24 saat sonra olgunlastlîl
(mDH). Daha sonra RNA'slZl DH, (alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKa-EE-A16-RNA
ve(klasik sinyal yolunu aktive eden) IKKB-EEAlO-RNA ile tek bas. veya kombinasyon içinde
(her biri 15 ug RNA) elektropolasyona tabi tutuldu. Elektropolasyondan 24 saat sonra
fazlallElar alIlZl/e bir " Inf/ammation C ytometr/'c Bead Array/ Inflamasyon Sitometr/k
Boncuk D/'z/si”ile analiz edilmistir. 3 bag islZdonörün verileri gösterilmektedir.
Sek. 10: NFKB sinyal yolunun bilesenleri ile elektropolasyona tabi tutulmus dendritik
hücrelerin 1L-6 ve TNFoi sitokinlerinin sekresyonu. DH'Ier GM-CSF ve IL-4 ile altlîgünlük bir
kültürleme esnasIa monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'Ier standart bir olgunlasma
kokteylinin (IL-1 ß, IL-6, TNFa ve PGE2) katüiiasian 24 saat sonra olgunlastümDH).
Daha sonra RNA'slîl DH, (alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKoi-EE-A16-RNA ve(klasik
sinyal yolunu aktive eden) IKKß-EEAIO-RNA ile tek bas. veya kombinasyon içinde (her biri
ug RNA) elektropolasyona tabi tutuldu. Elektropolasyondan 24 saat sonra fazlalüîlar
allEtlEl/e bir " ln/?ammat/an C ytometr/'C Bead Array/ Inûamasyon Sitametr/'k Boncuk Dizisi"
ile analiz edilmistir. 3 bagIislîldonörün verileri gösterilmektedir.
Sek. 11: NFiçB sinyal yolunun bilesenleri iIe elektropolasyona tabi tutulmus dendritik
hücrelerin IL-8 ve IL-1 ß sitokinlerinin serkresyonu. DH'Ier GM-CSF ve IL-4 ile altlîgünlük bir
kültürleme esnasIa monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'Ier standart bir olgunlasma
kokteylinin (IL-1 ß, IL-6, TNFoc ve PGE2) katüEialetlan 24 saat sonra olgunlastümDH).
Daha sonra RNA'slZ DH, (alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKoi-EE-A16-RNA ve(klasik
sinyal yolunu aktive eden) IKKß-EEAlO-RNA ile tek bas. veya kombinasyon içinde (her biri
ug RNA) elektropolasyona tabi tutuldu. Elektropolasyondan 24 saat sonra fazIaIlKIar
aIIülie bir " [nûammatian Cytometr/'C Bead Array/ [hfiamasyon Sîtometr/'k Boncuk Diz/si"
ile analiz edilmistir. 3 bag Iislîldonörün verileri gösterilmektedir.
Sek. 12: NFKB sinyal yolunun bilesenlerinin RNA'sEiIe elektropolasyona tabi tutulmus
otolog T hücrelerinin dendritik hücreler ile tetramer boyanmasElOIgun dendritik hücreler
RNA'sEl(aIternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKoi-EE-A16-RNA ve(klasik sinyal yolunu aktive
eden) IKKß-EEAlO-RNA ile tek bas. veya kombinasyon içinde (her biri 15 ug RNA)
elektropolasyona tabi tutuldu. DH'Ierin bir bölümü MelanA (MeIA) için kodlanmlgl RNA ile
koelektropolasyona tabi tutuldu. Elektropolasyondan 4 saat sonra otolog CD8+ T hücreleri
bu DH'Ier ile 10 : 1 oranIa stimüle edilmistir. Stimülasyondan bir hafta sonra antijen
özgü T hücreleri tetramer boyanmasElle analize edilmistir ve fenotip CCR7 ve CD45RA
boyamasEile tanllandlîlT hücreleri aktive eden (1. stimülasyon) ve iki kere tekrarlanan
(2. ve 3. stimülasyon) stimülasyonlardan sonra analize edilmistir. Bagislîl 5 donörün
ortalama degeri ortalama degerin standart sapmalarlîile belirlenmektedir.
Sek. 13: NFKB sinyal yolunun bilesenlerinin transfeze edilen RNA'nI artan konsantrasyonu
ile eletropolasyona tabi tutulan DH üzerindeki yüzey markerlarlîlDH'Ier GM-CSF ve IL-4 ile
altlîgünlük bir kültürleme esnasIa monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'Ier standart
bir olgunlasma kokteylinin (IL-lß, IL-6, TNFoc ve PGE2) katliBwasIan 24 saat sonra
olgunlastümDH). Daha sonra RNA'slîI DH, (alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKch-EE-
A16-RNA ve (klasik sinyal yolunu aktive eden) IKKß-EEAlO-RNA ile tek bas. veya artan
konsantrasyonlarda kombinasyon içinde elektropolasyona tabi tutuldu. Bu DH'Ier
elektropolasyondan 24 saat sonra CD25, CD40, CD7O ve OX-4OL'e karslîantikorlarla boyandlZl
ve FACS sayesinde analize edilmistir. BagIislZl üç donörün ortalama degeri ortalama
degerin standart sapmalarlîle belirlenmektedir.
S& NFicB sinyal yolunun bilesenlerinin transfeze edilmis mRNA'nI artan
konsantrasyonlara sahip bilesenleri ile elektropolasyona tabi tutulmus DH ile Sitoki IL-12p70
ve IL-10 sekresyonu. DH'Ier GM-CSF ve IL-4 ile aItElgünlük bir kültürleme esnasIa
monositlerden olusturuldu. 6. günde DH'Ier standart bir olgunlasma kokteylinin (IL-1 ß, IL-
6, TNFoc ve PGE2) katllüiasian 24 saat sonra olgunlastlZQmDH). Daha sonra RNA'slZI DH,
(alternatif sinyal yolunu aktive eden) IKKa-EE-A16-RNA ve (klasik sinyal yolunu aktive eden)
elektropolasyona tabi tutuldu. Elektropolasyondan 24 saat sonra fazlalllZlar aIIEl/e bir "
edilmistir. BagIisE üç donörün ortalama degeri ortalama degerin standart sapmalarlZile
belirlenmektedir.
Sek. 15: NFicB sinyal yolunun bilesenleri ile elektropolasyona tabi tutulmus 293T
hücrelerinin Lusiferaz analizi. 293T hücreleri NFKB sinyal yolunun aktivatörleri (IKKa-
EEA16-RNA veya IKKß-EEAlO-RNA) veya inhibitörleri (IKKa-K44M-A16-RNA veya IKKß-
K44M-A10-RNA) ile tek baslEla veya kombinasyon içinde elektroplasyona tabi tutuldu. Tüm
hücreler bir NFKB promotoru dahil Lusiferaz için kodlanmlglvektörler ile koelektropolasyona
tabi tutuldu. Hücrelerin bir bölümünün NFKB sinyal yolu gece boyunca çözünür CD40L ile
aktive edilmistir. Lusiferaz aktivitesi elektropolasyondan 24 saat sonra ölçüldü.
Sek. 16: IL-12p70'in yaplîlal olarak aktif IKK mutantlarEile kodlanmE RNA ile transfeze
edilmis olgunlasmlîldendritik hücreler sayesinde serkresyonu
Sek. 17: yapElal olarak aktif IKK mutantlarEIile kodlanmEI RNA ile transfeze edilmis
olgunlasmlgldendritik hücrelerin göçü.
Bulusun ayrIt[l]l}ç[lillamasl:|
Sunulan bulus istemlerde karakterize edilen yapllândIElnalar, yani NFicB sinyal yolunun en
azIan mutasyona ugramlglsinyal ileten bir proteini kodlayan bir veya birden fazla nükleotid
sekansI RNA transfeksiyonu sayesinde kendi NFKB sinyal yolunda manipüle olan dendritik
hücreler (DH) ve de bunlar. üretimi ve kullanIiEHe ilgilidir. Bu, DH'Ierin NFiçB sinyal yolunun
mutasyona ugramlgl sinyal ileten proteinlerinin kendi NFKB sinyal yolunda manipüle
edilebilmesi bulgusuna dayanmaktadlü
Olgunlasmamgl durumda düsük seviyelerde MHC proteinleri ve yardlcEluyarEElB7
molekülleri ile ve de fagositoz ve pinositoz yetenegi ve de CD83 ve CD25 yüzey
moleküllerinin olmamasüile karakterize edilmektedir. OlgunlasmE durumda digerlerinin
yania yüzey proteinlerinin degismis bir örnegi ile karakterize edilmektedir ve su
moleküllerin bazHârII veya tümünün yüzey ekspresyonu yükselmektedir: CD25, CD40,
CD70, CD80, CD83, CD86 ve de MHC-proteinleri. "Olgunlasmlgl' DH'Ier "olgunlasmamlgi'
DH'Ierden, digerlerinin yanIa birincilerin baglglKliEJ uyarlEEblarak daha aktif olmaktadlü
genellikle canlElorganizma içinde drene olan lenf dügümlerinin içine ilerleme yetenegini
içermektedir ve MHC baglamIa endojen olarak eksprese edilen ve eksojen antijenin
buIunmasIEgüçlendirmektedir. Fizyolojik kosullar alt-a sadece "olgunlasmlSl' DH'Ier naif T
hücrelerini aktive etme durumundadlEi
kullanllâcaktlîl Benzer sekilde RNA transfeksiyonu yabancElRNA'nI ökaryotik bir hücre içine,
bulus içindeki anlamIa bir DH'nin, tercihen bir insan DH'sinin içine girisidir. " Nukleotid
sekanslar" bulus dogrultusunda DNA ve RNA içermektedir. Transfekte edilecek RNA'lar
tercihen intron içermeyen mRNA'IardlB mRNA'nI bir tanIiIZIgünümüzün teknolojisinden
bulunabilmektedir (bkz "Moleküler Genetik", Knippers, 9. revize edilmis baskÇiThieme Verlag,
2006). Bulus dogrultusundaki DH'nin baglgllzlllîl düzenleyici etkinligi mRNA'nI stabilize
edilmesi ile daha da yükseltilebilmektedir. Bu mRNA'nlEl canlljbrganizma içinde kopyalanmasEl
esnasEtla örnegin bir cap analogun eklenmesi ile gerçeklesebilmektedir. ARCA ("anti-
reverses capAnalogon / geri dönüssüz cap analogon ") adlZl/erilen teknolojinin kullanIiIZl
kap'I % 100 tam bir yönlendirilmesine ve bununla birlikte verimlilikte daha fazla bir artlgh
mRNA'nI stabilitesi bir kap yap-I enzimatik olarak zaten in vitro sentezlenen mRNA'ya
uygulanmasüialinde örn. Tcherepanova ve ark., (2008), 9:90 BMC Mol. Biol eserinde tarif
edildigi gibi artlEllâbilmektedir. mRNA'nI stabilitesi ayrlEh çevrilmemis bölgelerin (UTR),
örnegin ß-Globin-mRNA eklenmesi ile yükseltilebilmektedir. (bkz. örn. Yu et al., Mol. Cell
DH'nin bagElEllKl düzenleyici özelliklerinde beklenen bir iyilesme ile translasyon
verimliligindeki bir iyilesme aynEIsekilde daha önceki paragrafta tarif edilen capp/hg
yönteminin kullanIiEIIe ve de bir "Iç Ribozom Giris Sitesi"nin ("Internal Ribosome Entry Site"
(IRES)) in vitro dönüstürülen RNA'nI 5' ucunda eklenmesi gibi bilinen yöntemler ile de
deneylerindeki dönüstürülmüs protein oranlIiboliA kuyrugunun uzatüBwasÜiialinde genel olarak
ve sunulan bulus ile baglantüilblarak yükselebilmektedir. Bu teknoloji ARCA teknolojisi ile
birlikte uygulanmasEhalinde daha iyi sonuçlara götürebilmektedir (Mockey et al., Biochem.
Sunulan bulus ile ilgili olarak, bir "NFKB sinyal yolunun mutant sinyal iletim proteini" bilinen
sinyal iletim kaskadII NFKB'nin aktivasyonuna ve bu proteinin hücre çekirdegi içine
translokasyonuna yol açan bir bileseni olan protein olarak tanIiIanmaktadIE Ayri& bu
kavram tarafIdan modüler bir sekilde sinyal iletim kaskadII bilesenleri ile etkilesim içinde
olan ve bunlarEI kendi aktiviteleri içinde etkileyen bulus dogrultusundaki proteinler
kapsanmaktadß Tüm bu proteinler karsiliKi gelen vahsi tipli proteinlere karsEtlegisikliklere
(mutasyonlara) sahiptir. KarsiIIKl gelen mutasyonlar digerlerinin yanIda silme islemleri,
uzatma islemleri ve tercihen bir veya daha fazla amino asitin degisimi ile tannlanmaktadE
NFKB sinyal yolunun bulus dogrultusundaki tanIiEIklasik ve alternatif bir sinyal yolunu
içermektedir. Klasik sinyal yolu mikro biyolojik ve viral enfeksiyonlar ile veya sitokinler ile
aktive olmaktadE Bu baglamda IKKor, IKKß ve NEMO'dan olusan IKK kompleksi fosforilasyon
ile IKB'nin bozunmasIEiindükler ve transkripsiyon faktörü NFiçB hücre çekirdegi içinde
translokasyon yapar ve çesitli hedef genler etkinlestirilmektedir. Alternatif NFKB sinyal yolu
çekirdegine translokasyonu yapilân ve hedef genleri harekete geçiren p ile
etkilesime girmektedir.
NFKB sinyal yolunun mevcut bulusa iliskin olarak "manipülasyonlariîl dendritik hücrelerin
degistirilmis aktivitesi ile ölçülebilmektedir. Bu IL12p70 sekresyonunun, IL-10 salgilâmasIlEi,
örn. OX-40L veya CD25 gibi farklEI indüksiyon faktörlerinin migrasyonunu veya
ekspresyonunun degisikliklerini içermektedir. Kontrol RNA ile transfekte edilmis dendritik
hücrelere karsElveya tercihen olgunlasmlgl dendritik hücreler olan transfekte edilmemis
dendritik hücrelere karsEiiercihen en azIdan 5 misli, daha tercihen en azIan 10 misli, daha
da tercihen en ainan 30 misli ve en çok tercihen en az 50 misli artlElîhigi degerlere sahip
sahip IL12p70'in (çogaltilüilS) sekresyonu tercih edilmektedir. IKKa ve/veya IKKß'nI yapisal
olarak aktif mutantlar ile transfekte edilmis ve transfekte edilmemis veya kontrol RNA ile
transfekte edilmis dendritik hücreler ile karsilâst-[gllüda dendritik hücrelerden, tercihen
olgunlasmamlgldendritik hücrelerden en azlEUan 5 misli, daha tercihen en azlEUan 10 misli,
daha da tercihen en azIdan 30 misli artlîllîhlgl degerlere sahip IL-10'un sekresyonu daha
tercih edilmektedir. AynElanda IKKq ve/veya IKKß'nI yapisal olarak aktif mutantlar ile
transfekte edilmis tercihen olgun dendritik hücreleri sayesinde IL-12p70'nin IL-10'a tercihen
en azIan 3, daha tercihen en azIan 5, daha tercihen en azIan 10 ve daha tercihen en
azIan 20 bir miktar oran. sahip düsük IL-10 sekresyonunda yüksek bir IL-12p70
sekresyonu da tercih edilebilmektedir.
Dendritik hücrelerin RNA transfeksiyon hakkida sunulan bulus içinde bulus sahipleri
sasüâcak bir sekilde RNA transfeksiyonu sayesinde degistirilmis hücrelerin NFKB sinyal yolu
boyunca kendi fonksiyonel yaplîljçinde manipüle edilebilecegini göstermektedir. Dendritik
hücrelerin degisik RNA'IarI RNA transfeksiyonu ya baglgEllKl uyar[lî:has- veya tolerans
indüksiyona veya bir immünolojik tepkilerin bastEIB1alela yol açabilmektedir. Transfekte
edilen RNA'Iar IL-12p70'in sekresyonunu güçlendirebilir ve sonucu olarak bagEKllglI
uyarllü'ialea yol açabilmektedir. Sunulan bulusun diger bir sasIlEElatkisi identik RNA'Iarlîil,
örn. KKOL veya IKKß'nI yaplgial olarak aktive eden mutantlarIEkodlayan RNA'IarlEl dendritik
hücrelerin baglglKIiElarII kendi RNA transfeksiyonunun süresine baglüalarak degisik etkilere
sahip olmalela dayanmaktadlîl(bkz sek Za ve 2b). Bulus dogrultusunda olgunlasmlSDH'lerin,
transkripsiyonlarlElI IKK'nI fizyolojik aktivasyonu üzerine fosforile edilebildigi ve bu sayede
degistirdigi proteinlere yol açan RNA ile transfeksiyonunda bir baglgiElEEl uyarilfhasü
gözlenmektedir. Bu sayede, örnegin tümör antijenlerinin DH sayesinde eszamanllîshunumu ile
birlikte etkili bir öldürücü T-hücresi aktivasyonuna ulasllîhakta ve bu tümörle mücadelede
transfekte (otolog) DH'nin hastaya verilmesinden sonra faydalüalabilmektedir. Bu ilke karsililîl
gelen diger hastalilZlarda da uygulanabilmektedir. Buna karsiIJKi RNA transfeksiyonu
olgunlasmamlgl DH'Ier ile uygulanlEsa, bu türlü DH'Ier büyük miktarlarda baglgKMgBJastßn
iki alternatif tercih edilen uygulama sekilleri sunmaktadlEl SaslElllEEl bir sekilde bulus
dogrultusundaki olgunlasmEDH'lerin migrasyon yetenegine sahip olduklarüla gösterilebildi
(bkz. sekil 5). Dendritik hücrelerin immünolojik aktivitesi üzerinde bu türlü bir kontrol tllîbi
uygulama için kanser hastalarII tedavisinde örn. dendritik hücreler ile asllâma seklinde
ileriye dogru büyük bir ad sunmaktadE
Bulus dogrultusunda bahsedilen immünomodülatör, özellikle DH'nin antijen sunma özellikleri,
DH'nin içine bahsedilen mutasyona ugramig sinyal iletici proteini (proteinleri) kodlayan
RNA'nI yanIa, digerlerinin yanIa A20, IL-10, TGF gibi bagElKllgEbaskllâyan proteinleri
kodlayan mRNA'Iarlltkisizlestirmek için siRNA'Iar gibi inhibitör özellikle RNA'Iar katlIJBa veya
eksprese edilirse daha da gelistirilebilmektedir. Bu türlü bir yöntem Breckpot ve ark., J.
aktivitenin antijen sunan hücre olarak DH sayesinde daha verimli bir indüksiyonu bunun
içindeki immun proteazom mRNA örnegin siRNA'Iar ile etkisizlestirilmesi halinde de
örnegin kanserle mücadelede gelistirilmis bir etkisi DH'nin uyarmasIan sonra tek ya da çift
sarmaIlERNA sekanslarlîtayesinde beklenebilmektedir (bkz. örn. Diebold ve ark., Science 303
Burada NFKB sinyal yolunun tercih edilen uygun mutasyona ugramlgsinyal ileten proteinleri
kappa kinazI inhibitörlerinin (IKK'nlEl) mutantlarEl/e istemler dogrultusunda yaplîlal olarak
aktif IKKoi veya IKKB mutantlarIIEl DH'nin baklgl açEIZI(2) dogrultusundaki üretimi için
deneysel olarak farkliZlIKK'larI yaplglal olarak aktif veya dominant negatif mutantlarlZl
üretilmistir. Yaplîhl olarak aktif IKKoi ve IKKß mutantlarübu arada karslIJEJ gelen tercihen SEK
KIM NO:1 veya 4 vahsi tip sekanslardan baslayarak aktif merkez bölgede Glu sayesinde bir
veya daha fazla Ser ikame maddesine sahiptir.
Burada içinde SEK KIM NO:1 IKKa vahsi tipinin amino asit kallEtllârESer176 ve Ser180`nin biri
veya daha fazlasi' Glu ile ikame edildigi IKKOL mutantlarEtercih edilmektedir, SEK KIM
No:1 IKKa vahsi tipinin amino asit kaliEtliârESer176 ve Ser180'nin biri veya daha fazlasi.
Glu ile ikame edildigi ve opsiyonel olarak destabilize edilmis C teminalleri Serin kallEtUârII
ve Treonin kallEtllârII bir veya daha fazlasIlEl, tercihen destabilize edilmis Serin
kallBtDârII Serin kallEtElârII ve Treonin kaIlEtllârII SEK KIM NO:1 vahsi tipinin 661, 662,
özellikle tercih edilmektedir. Bahsedilen IKK mutantlarII alanin kaliEtllârII eklenmesi ile
karakterize edilen tümü, proteinin stabilizasyonuna yol açmaktadlîl ve ayriîla artan veya
inhibe eden aktivitenin her birinin etkisini güçlendirmek ile karakterize edilmektedir. Stabilize
eden alanin kallEtüârII proteinlerin içine verilmesi bulus dogrultusundaki yapüândlülna
örneklerinde bunun dlglEtla tercih edilen uygulama sekillerini sunmaktadlEI Tercihen en az iki,
tercihen en az üç, daha tercihen en az dört, daha da tercihen en az sekiz ve istemler
dogrultusunda bahsedilen kallEtüârI tümü alanin kallEtIErEile yer degistirmistir. Burada
bahsedilmemis olsa bir olasEtüm permutasyonlar bu spesiûkasyonun açUZJanmasEile açilZÇa
ayrEhyrEbahsedilmis gibi kapsanmaktadlB AyrIEla içinde SEK KIM No:4 IKKß vahsi tipinin
amino asit kaIIEtliârESer177 ve Ser181'in biri veya daha fazlalellEl Glu ile ikame edildigi IKKß
mutantlarEItercih edilmistir, SEK KIM No:4 IKKß vahsi tipinin amino asit kallEtHârESer177 ve
Ser181'in biri veya daha fazlasi. GIu ile ikame edildigi ve opsiyonel olarak destabilize
edilmis C teminalleri Serin kallEtlErII ve Treonin kallEHlârII bir veya daha fazlasIIEl,
tercihen destabilize edilmis Serin kallEtllârIlEl Serin kaIlEtllârII ve Treonin kaIlEtllârlEIlEl SEK
alanin kallEtllârEile ikame edildigi IKKß mutantlarEözelIikle tercih edilmektedir.
Bulus SEK KIM NO:2'nin 25'ten 769'a kadar amino asit kaIlEtllârIEl/eya SEK KIM NO:5'in
18'den 773'e kadar amino asit kallEtIErIEilçeren, ve tercihen SEK KIM NO:2'ye veya SEK KIM
NO:5'e sahip olan ya da kodlayan RNA sekansII SEK KIM NO:3'ü veya 6'yEiçerdigi yapßl
olarak aktif IKKa ve IKKß mutantlarlîla ilgilidir.Bunun disinda SEK KIM NO: 3 veya SEK KIM
No:6 sekansliaki sessiz mutasyonlarEille digerlerinin yanlEUa kodon optimizasyonu yoluyla
ortaya çlKlan bir sekansEIçeren her mRNA bu spesifikasyonun açllîlama içerigi tarafIan
kapsanmaktadlB
Aynüamanda burada tarif edilen inhibitör IKKa ve IKKß mutantlarEkarsÜJE gelen SEK KIM
No:1 veya 4 vahsi tip sekanslardan baslayarak Lys'in Met tarafIdan ikame edildigi
mutantlardE Burada içinde SEK KIM No:1 IKKoi vahsi tipinin amino asit kallEtlgELys 44'ün
Met ile ikame edildigi ve opsiyonel olarak destabilize edilmis C teminalleri Serin kallEtElârII
ve Treonin kallEtHârII bir veya daha fazlasIlEl, tercihen destabilize edilmis Serin
kaIlEtilârII Serin kallEtilârII ve Treonin kallEtllârII SEK KIM NO:1'in vahsi tipinin 661,
pozisyonlarülda alanin kallilârElle ikame edildigi IKKOL mutantlarEtercih edilmistir. Ayrlîa
SEK KIM No:4 IKKß vahsi tipinin amino asit kallEtlîELys 44'ün Met ile ikame edildigi ve
opsiyonel olarak destabilize edilmis C teminalleri Serin kalIEtllârII ve Treonin kallîitilârII
bir veya daha fazlasIlEl, tercihen destabilize edilmis Serin kallEtHârII Serin kaIlEtllârII ve
ve 705 pozisyonlar-a alanin kallEtHârEile ikame edildigi IKKß mutantlarEliercih edilmektedir.
Özellikle SEK KIM NO:7'nin 24'ten 768'e kadar amino asit kallEtllârIEiçeren veya SEK KIM
NO:9'un 24'ten 779'a kadar amino asit kallEtHârIljçeren, tercihen SEK KIM NO:7'ye veya
SEK KIM NO:9'a sahip olan ya da SEK KIM NO:8'in veya SEK KIM NO:10'un RNA sekanslBh
sahip olan veya bunlari RNA sekansII sessiz mutasyonlar sayesinde SEK KIM NO:8'in veya
SEK KIM NO:10'un RNA sekans- dönüsmesine izin veren inhibe edici IKKoc ve IKKß
mutantlarEllercih edilmektedir.
Yukari bahsedildigi gibi özellikle tercih edilen bir yapilândünada bulus dogrultusundaki
dendritik hücreler ile ilgilidir, burada (i) DH olgun DH'ler ve/veya (ii) NFKB, IL-12p70 üreten
aktive edilmis DH'ler ve/veya (iii) NFKB, IL-10 üreten aktive edilmis DH'ler ve/veya (iv) bir
veya birden fazla hedef antijen ile yüklenmis DH'lerdir. "Hedef antijenler" sunulan bulus
içinde örn. büyük doku uygunluk kompleksine (major histocompatibility complex (MHC))
baglanmlgl olan ve dendritik hücrelerin hücre üst yüzeyinde T hücrelerinin sunuldugu peptit
Zincirlerini Içermektedir. Bunlar digerlerinin yan-a MAGE familyasII öm. MelanA, GP100
gibi tümör antijenlerinden, ama aynüamanda BRAF-V600E ve GNAQ-Q209L gibi mutasyona
ugramE tümör antijenlerinde de türeyebilmektedir. Ancak tümör IisatlZlveya tümörden
yalitîllmlgl mRNA gibi tanilanmamglantijenlere ait kaynaklar da kullanllâbilmektedir. HIV-1-
NEF veya Influenza matris proteini gibi her bir viral protein aynElsekilde antijen kaynagEl
olabilmektedir.
Yukari sözü edilen mutantlar, DH'de karslllElgelen mRNA moleküllerinin RNA transfeksiyonu
ile eksprese edilebilmektedir. RNA transfeksiyonu DH'nin genetik bir degisimini göstermez ve
böylece klinik açin saklEtasEl/oktur. DH IL- lß, IL-6, TNFoi ve PGEZ sitokinleri ile inkübe
edilirken("olgunIastlthan") sonra yaplîlal olarak aktif bir IKK mutantlIiIe transfeze olursa,
bunlar saglam, uzun süreli baglglElllZltepkilerinin indüksiyonunda çok önemli bir rol oynayan
proinflamatuar sitokin IL-12p70 sekresyonuna baslarlar (sek. 2a). DH'nin olgunlasmasElle
ilgili olarak IL-lbeta, IL-6, TNF ve PGEZ'nin yanIa alternatif veya tamamlaylüßlarak DH'nin
olgunlasmasEiçin baska maddelerde kullanllâbilmekte, bunlarla lellHllZiblmamak üzere sunlarlîl
da kapsamaktadE IFN alfa, IFN beta, IFN gamma, yapay veya dogal agonistler, digerleri gibi
poli C, CpG, LPS, flagellin veya DH'nin spesifik yüzey resöpterlerini baglayan çözünür ve
yüzeye bagllîrlnaddeler.
Bununla birlikte RNA transfeksiyonu aktive edici mutantlar ile olgunlasmanI baslang-a
(yani olgunlasmamlgDH'lerde) gerçeklesmisse, belirli kosullarda bagElKllKl baskllâylîßitokin
üzerine tarif edilen ve DH'nin baglglKllEl sisteminin diger hücreleri ile iletisiminde rol atfedilen
RNA'IarI RNA transfeksiyonundan sonra artan bir ekspresyon göstermektedir (sek. 3).
Özellikle yüzey molekülü CD70 uzun ömürlü haflîa T hücrelerinin indüksiyonunda ona bir rol
verildigi için burada ilgi çekicidir (sek. 3 altta). Uzun ömürlü haflîla T hücrelerinin fenotipi
giriste tarif edilmektedir. Otolog CD8 T T hücrelerini tekrar tekrar uyarmak için bu türlü islem
gören kullanHIhlga, NFKB aktivasyonunun DH nitelikli T hücrelerini yeniden canlandlElna
süresince yayHBiaya devam ettigi gözlemlenmis olup, burada efektör bellek hücrelerinin T
hücre fenotipi güçlendirilmis bir sekilde sunulmaktadlE(sek. 4). Imünojenik DH'nin üretiminde
kritik diger faktör IL-12 salgüâyan DH'de ortadan kalkan migrasyon yetenegidir. Yapßl
olarak aktif NFKB mutantlarEile transfekte edilen DH sasüâcak bir sekilde, bir kontrol RNA ile
elektropolasyona tabi tutulmus DH gibi, aynEsekilde kemokin MIP-3ß'e karsütkili bir sekilde
göç etme durumunda bulunmaktadE (sek. 5). Böylece DH'nin NFKB sinyal yolunun
fonksiyonel mutantlarülçin kodlayan mRNA ile trasnfeksiyonu somut klinik uygulamaslîcbrtaya
çllZlan immünojenik veya tolerojenik DH'nin olusturmasEliçin yeni yenilikçi bir metodu
sunmaktadß
Bulusun diger bir yapüândlünaslda DH, CD70'i kodlayan mRNA'Iar ile birlikte, istege bagli]
olarak caTLR4 ve CD40 IigandlÃleya / OX40L kodlayanlarla birlikte kotransfeze olmaktadlEl Bu
basvuruda bahsedilen tercihen insan DH'si içine verilen insanlarda olusan amino asit
sekansIa bulunanlara karslHK] gelen veya bunlardan türeyen moleküllerin tümünü
kodlamaktadü
Bulusun 2. baklgaçElîcHogrultusundaki NFi
w'i/o üretimine ait yöntem bir veya birçok nükletoid sekans- sahip olgulasmamlgl veya
olgunlasmlgDH'nin RNA transfekti NFicB sinyal yolunun yukar- tarif edildigi gibi bir mutant
sinyal gönderici proteini kodlamaktadlü Bu arada RNA transfektinin elektroporasyon
sayesinde gerçeklesmesi tercih edilmektedir (uzman kisi taraf-an bilinen lipofeksiyon vb.
gibi yöntemler aynElsekilde uygulanabilmektedir). Elektroporasyon yönteminin tercih edilen
bir yapllândlîilna özellikle klinik uygulamalar için uygun olan Tuyaerts ve ark. taraflîitlan tarif
RNA transfeksiyon teknolojisi olarak nükleofeksiyon teknolojisi (Amaxa firmasII tescil
edilmis teknolojisi) kullanilmaktadß (bkz. örn. Melhem ve ark., Klinik AsEIImmünolü
konsantrasyonlarlîözellikle 1 ug/lOO ul ila yaklaslKl100 tig/100 ml arasIa, daha tercihen 2
ug/100 ul ila 50 Lig/100 ml araletla ve en çok tercih edilen sekilde yaklasllZlZO ug ila yaklaslE
40 ug /100 ul araslûbadlû mRNA transfeksiyonu hem bir kare dalgalarlîüarbesi ile hem de
üssel bir bozulma palslýla gerçeklesebildigi bahsedilen elektroporasyonun yanimda mRNA
transfeksiyonuna ait degisik reaktifler sayesinde de gerçeklestirilebilmektedir. Burada örnek
olarak yardIiIarElle DH'nin mRNA ile transfekte edilebildigi yüklenmis veya yüklenmemis
Bulus dogrultusundaki yöntem olgunlasmamlsiDH'nin RNA transfeksiyonu durumunda ayriîla
bir olgunlasma uyaranEiIe islemi de içermektedir. AyrlEla tercih edilen uygulama sekilleri
DH'nin bir hedef antijeni ile ve/veya olgunlasmlgl DH'nin kriyo prezervasyonu (iii) ile
yüklenmesini içermektedir.
olgunlasmlg dendritik hücreler haline gelecegi moleküller ve molekül kombinasyonlarlîl
tanIiIanacaktlE Burada tercih edilen molekül kombinasyonlarlîlIL-lß, IL-6, TNch ve
PGE2'den meydana gelmektedir.
Sunulan bulus ile ilgili olarak "kriyo prezervasyonu" hücrelerin -75 °C'nin altiEUa dondurarak
saklanmasßnlasllîhasügierekmektedir.
Bulusun baklglaçiîlîlß) dogrultusundaki bilesim, farmasötik bilesim veya ilaç opsiyonel olarak
farmazötik olarak uygun yardiElichilesikIere ve taslsîlîlîbilesiklere sahip olabilmektedir. Bu
arada farmasötik kullanIi için DH'Ierin otolog DH'Ier olmasEltercih edilmektedir. "Farmasötik
bir bilesim" veya "bir ilaç" bulus dogrultusundaki dendritik hücreleri ve hastalara örnegin
kanserin veya HIV'in tedavisi için bir asüseklinde uygulanan bir veya birçok bileseni
içermektedir. Farmasötik bir bilesimin formüle edilmesine ait bir yöntem ve maddeler uzman
kisi tarafIan bilinmektedir ve örnegin Ansel ve ark.'I1999'da 7. baskiglippincott Williams
eserinde görülebilmektedir. Farmasötik bir bilesim veya ilaç bir kisiye uygun bir dozda
uygulanabilmektedir. Uygulama özellikle parenteral olarak, örn damar Içi, Intraperitoneal, deri
aItIan ya da kas içinden veya bir atardamarI bir noktasia bir kateter vasitâslýla
uygulanabilmektedir. Parenteral bir uygulamaya ait preparatlar steril sulu veya susuz
çözeltiler, süspansiyonlar ve emülsiyonlar içermektedir. Sulu olmayan çözeltilere ait örnekler
propilen glikol, poli etilen glikol, örn. zeytin yagügibi yaglar ve enjeksiyonlar Için uygun olan
örn. etil oleat gibi ester bilesikleridir. Sulu tasüîllâr su, hidro alkolik çözeltiler, emülsiyonlar,
süspansiyonlar, tuz çözeltileri ve tamponlanmlglaklgkanlardlü Parenteral tasMößr sodyum
klorür çözeltileri, Ringer dekstrozu, dekstroz ve sodyum klorür, Ringer laktat ve baglü
yaglardlE Intravenöz tasMElBr örn. SED maddeler, besleyici maddeler ve elektrolit
tamamlaylEDmaddeler içermektedir (örn. Ringer dekstroz bazkDolanlar gibi). Farmasötik
bilesim veya ilaç bunun dlSlEda koruyucu maddeleri ve örn. antimikrobiyal bilesikler,
antioksidanlar veya kompleks yaplEIlâr gibi baska katkünaddelerini içerebilmektedir. Ayrlîa
amaçlanan spesifik kullanIia baglEioIarak interlökinler, büyüme faktörleri, farklllâsma
faktörleri, interferonlar, kemotaktik proteinler veya spesifik olmayan bir immün modülatör
ajan gibi baska etkin maddeler içerebilmektedir.
DozajI türü, klinik faktörlere göre doktor tarafIdan belirlenmektedir. Uzman kisi tarafIan
örn. vücut ölçüsü veya aglîllüîl vücut yüzeyi, yas, cinsiyet veya hastanI genel sagllEldurumu,
ama aynElzamanda özel olarak uygulanacak madde, uygulamanI süresi ve türü ve
muhtemelen birlikte uygulanacak ilaçlar gibi degisik faktörlere baglEbIdugu bilinmektedir.
Tipik bir doz uygulama basi 5 milyon ve 50 milyon DH araleUa olabilmektedir. Tekrarlanan
uygulamalari zamansal kademelendirilmesi genellikle önce bir ile 2 hafta arallgiiaki daha
lel aralllZlara ile gerçeklesir ve daha sonra aralllZJar 6 aya kadar esnetebilmektedir. Simdiye
kadarki çallgh'ialarda, DH'Ier genellikle intradermal, subkutanöz ve intravenöz olarak enjekte
edilmistir.
veya uygulanabilecegi ve örnegin hücreleri koruyan bilesenleri Içermektedir. Uygun
farmasötik olarak uyumlu yardIicElve taslsîIEElbilesiklere örnekler uzman kisi tarafIan
bilinmektedir ve örnegin fosfat tamponlu tuz çözeltisi, su, örn. yag / su emülsiyonlarlîgibi
emülsiyonlar, çesitli Elatma maddeleri veya deterjanlar, steril solüsyonlar vs.'dir. Bu tür
taslýlîllârüçeren farmasötik kompozisyonlar bilinen geleneksel metotlar vasltâslîile formüle
edilebilmektedir.
olusmus hücreler anlasilüiasügjerekmektedir.
Bulusun baklg] açEJM) dogrultusunda ex w'vo uygulamada otolog CD8+ T hücrelerinin
uyarllBiasülçin bulus dogrultusundaki DH'Ieri kullan“da tercihen (i) NFKB aktive edilen DH
pasif T hücre transferi ve bir T hücre klonunun olusmasübin (sonraki TCR izolasyonu da dahil
olmak üzere) ve (ii) NFicB baskliânan DH alerjinin, kronik enflamasyon otoimmünitesinin ve
transplant reddinin tedavisinde Treg'in yayHBiasEiçin kullan HBiaktadlE "CD8" T hücreleri" CD8
yüzey markerII varligilîile karakterize edilmistir ve enfeksiyonlu somatik hücreleri veya
tümör hücrelerini öldürme durumunda olan T Ienfositlerinin bir alt grubuna aittir.
Pasif baglSlEJIEtan veya "pasif T hücre transferinden" aI-I dIgEUa üretilen immünolojik
efektörlerin veya T hücrelerinin transferi anlasllîhaIIlB Yani aIlEDJaglglEHZl tepkisini kendisi
olusturmamalÇI aksine dElar-n, yani kendisi pasif olarak elde etmesi gerekmektedir. T
hücreleri ile bagEllZliKl yani pasif T hücresi transferi uyarlanabilir T hücresi transferi olarak da
tanIiIanlEl Sunulan bulus ile ilgili olarak bir "T hücre klonu" bir hastanI bir T hücresinden
türetilen ve kültür içinde tutulabilen bireysel bir T hücresine geri dönen hücrelerin
popülasyonudur.
kültürlenmesini ve çogaltEIEnasIEtanllamaktadlEl "Alerji" olarak bagEIElilZl sisteminin belirli
ve normalde zararslîl çevresel maddelere (alerjenlere) karsElaslElDsavunma reaksiyonu
tanIilanlB "Otoimmünite" bagEiEliKl sisteminin vücudun kendi dokusuna karslîiislîlßavunma
reaksiyonu olarak tanllanabilir.
sekanslarI elde edilmesi için bir yöntemi tanilamaktadlîl Bunlara ait metotlar günümüzün
teknolojinden bulunabilir.
Bulus dogrultusundaki DH'nin bulusun bak& açlîlîl (5) dogrultusundaki bir hastada
hastaliElarI tedavisine ait bir ilaci üretilmesi için kullanIiIa ve bir hastadaki kanserin,
enfeksiyon otoimmünasyon hastallEIarII bulus dogrultusundaki DH'nin hastaya bulusun
baklglaçlgl7) dogrultusunda uygulanmasIEiçeren tedavi yönteminde tercihen NFKB aktive
edilmis DH'Ier DH bazlüsllâma için, (özellikle yardncllpitoplarl veya fonksiyonel yardIiclZl
hücrelerin bulunmamaslda ve güçlü adjuvanlarI uygulanmasII mümkün olmamasEl
halinde) kansere ve enfeksiyonel hastalilZJara (HIV dahil) karsEtedavi amaçlühsilâma için ve
koruyucu asE] olarak ve NFKB bastlElliilgl DH olarak yasayan organizmada toleranslZl
indüklenmesi için ve alerjinin, kronik inflamasyonun, otoimmünitenin ve transplant reddinin
tedavisi için kullan ilE1aktadlEI
bir metodu tarif etmektedir. "Yardicllpitoplar" MHC / HLA sIiÜII içeriginde sunulur ve T
hücresi çogalmaslüle sitokinlerin sentezini indükleyebilir.
grubudur. Kendilerinden salgüânan sitokinier yardIiEile iki önemli alt gruba ayrIDEIlar. Bir alt
grup hücresel baglgKllE] tepkisinde, diger alt grup ise hümoral baglgklllîl tepkisinde yer
allEl"Adjuvantlar" bir reaktifin veya bir ilaci etksini, özellikle bagEIEIUZi tepkisini güçlendiren
yardIiclIrlnaddelerdir.
bir patojenden, örn. virüslerden, bakterilerden, mantarlardan veya diger mikro
organizmalardan kaynaklanan hastaliKIardEl
insanda immünolojik bir savunma tepkisinin baskilânmaleûanIilamaktadlB
Bulusun baklg açlglüö) dogrultusundaki T hücrelerinin bulus dogrultusundaki DH ile uyarilfhas-
içeren otolog CD8 + T hücrelerinin ex Viva uyarllüîasEtlahil T hücrelerinin ekspansiyonuna ait
yöntemde tercihen T hücrelerinin T hücrelerine transferi için NFiçB aktive edilmis DH hücreleri T
hücrelerinin pasif T hücre yayilBiasiiJ/e bir T hücre kionunun olusturulmasüisin (örn. sonraki TCR
izolasyonu için) ve NicB baskilânan DH alerjinin, kronik enflamasyon otoimmünitesinin ve
transplant reddinin tedavisinde Treg'in yayllîj'iaslîlçin kullan[[IE
Arzu edilen gelistirilmis bir T hücre çogalmasEi/e bununla birlikte gelistirilmis tIi bir etki
CTLA-4'e, PD-Ll'e, PD-L2'ye, PD1'e karsElya da agonistik bir anti-GITR antikorundan
antikorlarI transfekte edilmis mRNA (lar) vasißslîile DH'ler içinde eszamanlüliygulanmaslja
da aynlîianda eksprese edilmesi yoluyla saglanabilir ((bkz. örn. Leach ve ark., Science 271
Diger bir yapüândHna bir hastadaki hastalilZlarI bulus dogrutusundaki DH'nin hastalara
uygulanmasIElçeren tedavisine ait diger bir yöntem ile ilgilidir, burada tercihen (i) NFKB
aktive edilmis DH'ler DH bazllZiasliâma için, (özellikle yardIiclZiepitoplarI veya fonksiyonel
yardclZl hücrelerin bulunmamasIa ve güçlü adjuvanlarI uygulanmasII mümkün
olmamasühalinde) kansere ve enfeksiyonel hastallElara (HIV dahil) karsEltedavi amaçIEl
asllâma için ve koruyucu asüblarak ve (ii) NFi
toleransEindüklenmesi için ve alerjinin, kronik inflamasyonun, otoimmünitenin ve transplant
reddinin tedavisi için kullanilîhaktadß
Asag- dendritik hücrelerin oIasEterapötik uygulamalarEtartlglIâcaktlEl Bir kanser hastasi.
tedavisine ait olaleJir strateji, hastanI kanIan monozitlerin kurtarllîhasübu monositlerin
GM-CSF ve IL-4 veya aynlltkiyi gösteren sitokinler vasiEisEile dendritik hücrelere (DH'lere)
ayrilîhasIÇI DH'nin IL-1beta, IL-6, TNF ve PGE2 veya aynEIetkiyi gösteren olgunlastIEIEEl
uyarlîlßr vasitâslîile olgunlastlEllüîasIÇlDH'nin sekansEllKK alfa'nI ve IKK-beta'nI NFkappaB
aktive edici mutantlarIan birini veya her ikisini kodlayan mRNA ile elektroporasyonu,
DH'nin bir veya daha fazla tümör ile iliskili antijen ile ya sekanslZIbunun (bunlar) için
kodlanmlgl bir mRNA koeletroporasyonu sayesinde yüklenmesi veya DH'nin, DH'nin HLA
moleküllerine baglanabilen bir veya daha fazla sentetik peptid ile eksojen yüklenmesi, DH'nin
uygun porsiyonlarda kriyoprezervasyonu, DH'nin kalitesinin IL-12p70 sekresyonu sayesinde
kontrolü, DH'nin hastaya damar içine veya deri altlEla veya subdermal olarak birkaç kademeli
dozda enjeksiyonu içermektedir.
DH'nin hazlEllanmasüle ilgili olarak bulus dogrultusunda taze ya da kriyoprezervasyon patent
materyalinden manyetik veya floresansla aktive edilmis hücre ayrüBiasEl/a da DH'nin kök
hücre markeri CD34 vasßslîile saflastlEllBiEkemik iligi kök hücrelerinden ayrilBiasßayesinde
hastanI kanElveya kan hücreleri ya da diger dokusu ile sIlElIEloImamak üzere DH'nin
dogrudan elde edilmesi öngörülmektedir. Monozitlerin ve kök hücrelerin DH içine ayrllüiaslîl
için GM-CSF ve IL-4'ün yanIa Flt3-Ligand, IL-15, IFN alfa, TNF ile sIlHlEblmamak üzere
baska maddeler de kullanilâbilmektedir.
Antijen yüklenmesine ait antijen kaynaklarElolarak digerlerinin yanlEUa otolog ve allojen
tümör materyali ve de bundan elde edilen ve yükseltilen mRNA, bunun dlgEUa tümör
antijenlerini veya bunlari parçalarIEkodIayan enzimatik üretilmis mRNA kullanllâbilmektedir.
Tümör antijenlerinden türeyen HLA baglaylîlîlpeptitler dogrudan DH hücrelerinin HLA
moleküllerine yüklenebilir. Gen teknigi bazIda üretilmis tümör proteinleri veya tümör
antijenlerini veya bunlari parçalar-I DH'nin içine girise aracHJKIeden reseptör agonistleri ile
baglayan rekombinant proteinler aynDsekiIde kullanilâbilmektedir. Antijen yüklenmesine ait
bu metotlar DH'nin olgunlasmamglve/veya olgunlasmlglevresinde uygulanabilmektedir.
Otolog veya allojenik adaptif T hücre tedavisi için antijen-spesifik sitotoksik T hücreleri
üretmek için olaslîbir strateji örnekte tarif edildigi gibi NFkappa B aktive edilmis DH'nin
üretimini, T hücrelerinin hastanI kanElveya kan hücreleri ya da diger bir dokusu ile
sIIEIIanmadan taze veya kriyoprezervasyon patent materyalinden izole edilmesi, ayrlîla bu T
hücrelerinin karslHEl gelen antijen ile yüklenmis NFkB aktive edilmis DH'Ier ile tekrarlanan
inkübasyonu sayesinde antijen spesifik çogalmasÇl DH'nin uygun porsiyonlarda
kriyoprezervasyonu, T hücrelerinin kalitesinin kendi antijen spesifik Iitik aktivitesinin ve
antijen spesifik sitokin sekresyon yeteneginin belirlenmesi ile kontrolü, T hücrelerinin hastaya
damar içine veya deri ait. veya subdermal olarak bir veya birkaç kademeli dozda
enjeksiyonu içermektedir. Baska sekilde tanIiIanmadlgiElsürece burada kullanllân terimler
bilinen teknik ile aynljnlama sahiptir.
Sekans Protokolü , Serbest metin:
SEK KIM NO: Açtlillama
Vahsi tip IKKaprotein
Vahsi tip IKKB-Protein
nomximmAwNi-i
Örnekler
Malzemeler ve vöntemler
DH'Ierin elektroporasyonu: Olgunlasmlgl veya olgunlasmamlgl DH'Ier yakl. 40-60 x 106
hücre/ml optiMEM ile ayarlandE(4 mm bir elektroporasyon küveti için minimum haci:
100pl) ve hazIHlanan küvetlerin içine pipetlendi. Küvet içine bu arada IKKß-EEAIO, IKKor-
EEA16 kodlayan RNA eklendi. Elektropolasyon kare-dalga pulslarE](square-wave-pu/se)
programEiiIe 500V'ta 1 ms içinde gerçeklesti (4 mm küvet). Elektroporasyonun hemen
arkasIan DH'Ier haziElianmlg DH akigkanEiçine (IL-4 ve GM-CSF dahil) kat-De asag-ki
deneyler için inkübatöre inkübe edilmistir. Olgunlasmamlgl transfekte edilmis DH'Ier
elektroporasyondan sonra olgunlasmaslîdurumunda DH aklSkan olgunlasma kokteyli (ILl-ß,
A: YaDEial olarak aktif IKKoi ve IKKB mutantlarII sekanslarEl
1. IKKq-EEA amino
asit sekansII vahsi tip IKKoi (SEK KIM No:1) amino asit sekansEile karsllâstlîilüiaslîl
EE mutasyonlarEQSEK KIM NO:2'nin poz 200 ve 204'ü) IKKa'nI konstitütif aktivetisine
serinleri ve treoninleri ayrlSIlEEve bu proteinlerin büyük ölçüde artan bir stabilitesine
yol açmaktadlEl KarsiHKlgelen nükleotid sekans SEK KIM NO:3'tür.
asit sekansII vahsi tip IKKß (SEK KIM No:4) amino asit sekanslZiIe karsllâstlEllhîasü
EE mutasyonlarüSEK KIM NO:5'in poz. 231 ve 235'i) IKKß'nI konstitütif aktivetisine
749, 751 ve 759 pozisyonlarD] destabilize olan serinleri ayrlStlElEl ve bu proteinlerin
büyük ölçüde artan bir stabilitesine yol açmaktadlEl KarslUKlgeIen nükleotid sekans SEK
KIM NO:6'dIEl
B: IKKoi ve IKK inhibitör mutantlarI sekanslarü
3. IKKa-K44MA
amino asit sekansII vahsi tip IKKoc (SEK KIM No:1) amino asit sekansElile
karsllâstlüilmaslîl Kinaz aktivitesi AS lisin'in (Lis44; SEK KIM NO:7'de poz. 67)ATP
baglantünoktasia metiyonin ile inhibe edilmektedir. Dimerizasyon sayesinde bu
mutant dominant bir negatif etkiye sahiptir. A16 mutasyonlarüSEK KIM NO:7'de 684,
pozisyonlarmdestabilize olan serinleri ve treoninleri ayrStlElElve bu proteinlerin büyük
ölçüde artan bir stabilitesine yol açmaktadlü KarsiIJIZl gelen nükleotid sekansESEK KIM
NO:8'de gösterilmektedir.
4. IKKß-K44MA
amino asit sekansII vahsi tip IKKß (SEK KIM No:4) amino asit sekansElile
karsllâstlElllInasEKinaz aktivitesi AS lisin'in degisimi ile (Lis44; SEK KIM NO:9'da poz.
67)ATP baglantüioktaletla metiyonin ile inhibe edilmektedir. Dimerizasyon sayesinde
bu mutant dominant bir negatif etkiye sahiptir. A10 mutasyonlarüSEK KIM NO:9'un
serinleri ayrIStlElElve bu proteinlerin büyük ölçüde artan bir stabilitesine yol açmaktadlEl
KarslHlZl gelen nükleotid sekansESEK KIM NO:10'da gösterilmektedir.
Örnek 1: IL-12p70 ve IL-10'un IKKß-EEAIO-RNA elektropore edilmis dendritik hücreler
sayesinde sekresyonu. Dendritik hücreler olgunlasmamlgl (iDC) veya olgunlasmlg (mDC)
RNA'slZ bir Kontrol RNA veya IKKß-EEAlO-RNA (SEK KIM No:6) ile elektroporasyona tabi
tutuldu. Elektroporasyona tabi tutulmus olgunlasmamlgl hücrelerin yarlîEl dogrudan
elektroporasyondan hemen sonra olgunlastü(iDHm). Elektroporasyondan yirmi dört saat
sonra sitokin konsantrasyonlarIZI(IL-
içindeki üst slîlßrda belirlenmektedir. Sekil 2 (a) veya (b) içinde gösterilen dört bagnslZ
deneyden birini temsil etmektedir.
Örnek 2: NFKB sinyal yolu bileseni IKKß-EEAIO ile transfekte edilmis dendritik hücreler
üzerindeki yüzey markerlarII ekspresyonu. IKKß-EEAlO (SEK KIM No:6) için kodlanmg
olgunlasmamlgl (iDC) veya olgunlasmlsîl(mDC) dendritik hücreler RNA ile elektroporasyona
tabi tutuldu. Elektroporasyona tabi tutulmus olgunlasmamlgl hücrelerin yarlîlîldogrudan
elektroporasyondan hemen sonra olgunlastEÜDCm). Kontrol kosullarlîblarak, DH'Ier RNA'sE
veya ilgisiz RNA (kontrol RNA'sLIIile elektroporasyona tabi tutuldu. DH'ler elektroporasyondan
sonra 24 saat DH aklgkanEiÇInde kültürlenir, hasat edilmistir ve CD40, CD80 ve CD70'ye karsü
bir PE ile markerlanmlglantikorlar ile boyanE PE markerEfiko eritrin ile antikor araslîida bir
baglantlsîEltanHlamaktadlB Elektroporasyona tabi tutulmus dendritik hücrelerin ortalama
floresan yogunlugu (MFI) Akg] sitometrisi ile belirlenmektedir. Sekil 3'te verilmis degerler
ölçülen göreceli floresan degerinden izotip antikorun ölçülen floresan degerinin
düsülmesinden sonra spesifik MFI degerlerini göstermektedir. Veriler dört baglislîldeneyden
birini temsil etmektedir.
Örnek 3: NFKB sinyal yolu bilesenlerinin RNA ile elektroporasyona tabi tutuldugu dendritik
hücrelere sahip otolog T hücrelerinin uyarElîlElI tetramer boyamaslîl
Olgunlasmßdendritik hücreler kontrol RNA, IKKß-EEAIO-RNA (SEK KIM No:6) ve IKKa-EE-
RNA ile veya IKKß-EEAlO- ve IKKa-EE-RNA'dan bir kombinasyon ile elektroporasyona tabi
tutuldu. Hücrelerin bir bölümü tümör markerEl melanA ile kodlanan RNA ile
koelektroporasyona tutuldu (+ melanA-RNA). Elektroporasyondan üç saat sonra MelanA-RNA
olmayan kondüsyon serisinin yarlîlîll saat süre ile melanA/A2 peptid ile yüklendi (+ peptid
yüklemesi). Elektroporasyondan dört saat sonra otolog CD8+ T hücreleri dendritik hücreler ile
: 1 oranIa uyarlZl Bir hafta sonra antijen spesifik T hücreleri analiz edilmistir ve
bunlari fenotipi CCR7 ve CD45RA boyama sayesinde belirlendi. T hücreleri bir hazlülama
isleminden (4a) sonra ve yeniden uyarma isleminden sonra (4b) analiz edilmistir. Resimler bir
donörün verilerini göstermektedir.
Örnek 4: NFKB sinyal yolunun bilesenleri ile RNA transfeksiyonundan 24 saat sonra
olgunlasmlgdendritik hücrelerin migrasyonu. OlgunlasmlSDH'ler GFP, IKKß-EEAlO (SEK KIM
No:6) ve IKKa-EE tek baslEb ve kombinasyon için kodlanarak RNA ile elektroporasyona tabi
tutuldu. DH'ler elektroporasyondan sonra 24 saat kültürlendi ve daha sonra göç etme
yetenekleri aç-an Transwell testinde 2 saat test edilmistir. Sonuçlar sek. 5'te gösterilmistir
(kemokinsiz kosullar (=neg), ekteki kemokin (=anti), derinlik içindeki kemokin (=zu)).
Gösterilen veriler bagIisiîi üç deneyin standart sapmalarEi ile ortalama degerlerini
göstermektedir.
Örnek 5: DH'lerin NFKB mutantlarüle RNA transfeksiyonu sayesinde iyilestirilmesi. DH'nin
NFKB sinyal yolunun bilesenleri ile stimülasyonu, IKKß-EE-AlO ve IKKoc EE-A16 (SEK KIM NO
3): AsagIki konstrüksiyonlar kullanIlîi IKKß-EE-AIO DH'nin aktivasyonuna ve
olgunlasmas- yol açan klasik NFKB sinyal yolunu uyarEve IKKa EE-A16 alternatif NFKB
sinyal yolunun bir aktivatörüdür.
CD83 ve OX-40L, sekil 6-8) ve IL-10 çok küçük miktarlarda sekresyonuna karsEbitokin
sekresyonun, özellikle IL12p70'in upregülasyonuydu. (sek 9.) Diger salgllânan sitokinler IL-6,
TNFa (Sekil 12), IL-8 ve IL-lß idi (sekil 11). Bu etkiler klasik ve alternatif NFKB yolunun
(IKKß-EE-AlO ve IKKa-EE-A16) aktivatörlerinin koelektroporasyona tabi tutulmus RNA'sEl
olarak güçlendirilmistir. (Sek. 6-11 IKKocd-EE-A16-RNA'nI elektroporasyonu tek bas. daha
küçük miktarda salglIânmlgsitokin ve üst yüzeyleri ile benzer etkiler göstermistir (Sekil 6-11).
Elektroporasyona tabi tutulmus mDH'ler özellikle üçüncü uyarln sonra otolog T hücreleri
üzerinde çok daha fazla uyariüj bir kapasiteyi gösterdi (sekil 12). Iki aktivatör ile
elektroporasyona tabi tutulmus DH'ler spesifik T hücrelerinin uyarilîhaslîliçin en yüksek
kapasiteye sahip iken (spesiük T hücrelerinin yayilüîaslîiyedi misline kadar) sadece bir
aktivatör ile (IKch-EE-A16 veya IKKß-EE-AIO) elektroporasyona tabi tutulmus DH'ler benzer
uyarEEkapasitelere sahiptir (MeIA kontrol durumuna oranla üç misline kadar).
DH'nin RNA transfeksiyonu esnasiEha kullanilB'iak zorunda olunan en iyi RNA miktarIEl
belirlemek için doza bagIiIIZi deneyler uygulandü Olgunlasmigl DH'ler artan RNA
konsantrasyonlariîiile elektroporasyona tabi tutuldu. Yüzey markerlarII (CD25, CD40, CD7O
ve OX 4OL) artan ekspresyon numuneleri transfekte edilen RNA'nI konsantrasyonuna göre
elde edilmistir (sekil 13). Ancak buna ragmen iki aktivatör IKKß-EE-AIO ve IKKoi-EE-A16 (her
birine 15 ug) ile elektroporasyonu tüm markerlarlEl, özellikle CD70'in tek baslEla bir
aktivatörün 30 ug RNA's. oranla artan bir ekspresyonuna yol açmlgtß Sitokin
sekresyonundan IL- 10 çok düsük bir miktarda salgüânlîlken özellikle IL12p70'in dozaja baglEl
bir upregülasyon elde edilmistir (Sekil 14). Bunun dlgüla IL-6, IL-8 ve TNF'nin serkresyonu
benzer bir numune ile dozaja baglEildi (veriler gösterilmedi) Burada klasik ve alternatif NFKB
yolunun (IKKß-EE-AIO ve IKKa-EE-A16) aktivatörlerinin koelektroporasyona tabi tutulmus
olmasEhaIinde salgüânan sitokinin miktarElyüksek degildir (tek RNA'nI 30 pg'IIZl her iki
aktivatörün 15 ug RNA'sII kombinasyonu ile karsllâst-ü.
Örnek 6: Transfekte edilen 293T hücrelerinin NFKB aktivitesi: 293T hücreleri aktivatörler ile
NFKB sinyal yolunda elektroporasyona tabi tutuldu ve Iusiferaz için bir NFKB promotorunun
kontrolü altlEUa kodlanan bir vektör ile birlikte koelektroporasyona tabi tutuldu.Her durumda
(IKKa-EE-Alß ve IKKß-EE-AlO tek basIEb veya kombinasyon içinde) Iusiferaz aktivitesi
elektroporasyondan 24 saat sonra ölçüldü (Sek. 15). Yine iki aktivatöre sahip RNA
tranfeksiyonu en büyük etkiye sahiptir. Bu deney DH üzerinde de gerçeklestirildi, ancak
sonuç vermemistir (veriler gösterilmedi).
NFKB sinyal yolunun bir Inhibitörü ile bir Iusiferaz deneyi IKKoi-K44M-A16'nI veya IKKß-
K44M-A10-RNA'nI tek baslEla veya kombinasyon içinde elektroporasyona ve bir NFKB
promotorunu içeren Iusiferaz vektörleri ile koelektroporasyona tabi tutulan 293T hücreleri ile
uygulandElTransfekte edilen 293T hücrelerinin NFKB sinyal yollarlZigece boyunca çözünür
CD40L ile aktive edilmistir. Lusiferaz aktivitesi elektroporasyondan 24 saat sonra ölçüldü. Her
iki inhibitör açllZça Iusiferaz aktivitesini, sadece Iusiferaz vektörü ile transfekte olan ve
çözünür bir CD40L ile aktive olan pozitif kontrole oranla azaltacak durumda idi (Sekil 15).
m IL-12p70'in yaplglal olarak kodlanmlgl aktif IKK mutantlarlElElkodlayan RNA ile
transfekte edilmis olgunlasmg dendritik hücrelerin serkresyonu. Monozitlerden elde edilen
dendritik hücreler 6. günde standart olgunlastlÜna kokteylinin (IL-lß, IL- 6, TNFa ve PGE2)
yardIiEile 24 saat içinde olgulastlîllfhlgtlîlve daha sonra elektroporasyona tabi tutulmustur.
RNA olmayan, yaplêbl olarak aktif mutantlar IKKdEEA16 ve IKKßEEAlO'u kodlayan RNA'IEl/e
her iki RNA'nI bir kombinasyonu transfekte edilmistir (bkz. sek. 16). Daha sonra IL-12p70
konsantrasyonu elektroporasyondan 4 saat, 24 saat ve 48 saat sonra ölçüldü. Burada
yüksek IL-12p70 üretimini saglad ElÜç deneyden biri örnek deney olarak gösterilmektedir.
Örnek 8: Yapisal olarak aktif IKK mutantlarIEllodlayan RNA ile transfekte edilmis olgunlasmEI
dendritik hücrelerin migrasyonu. Monozitlerden elde edilen dendritik hücreler 6. günde
standart olgunlastlElna kokteylinin (IL-lß, IL- 6, TNFoi ve PGEZ) yardllîlle 24 saat içinde
olgunlastlîllhlgtlîlve daha sonra elektroporasyona tabi tutuldu. MelanA'ylZlkodlayan 5 ug/ 100
ul RNA'IElhücreler ve IKKq ve IKKß'nIyaplElal olarak aktif mutantlarIÜ/e her iki RNA'nlEl bir
kombinasyonunu kodlayan 15 iJg/. Daha sonra
transfekte edilen hücrelerin Chemokin CCL19'a migrasyon yetenegi arastIEIllB'ilgtlB Sonuçlar
sek. 17'de gösterilmistir (kemokinsiz kosullar (=neg), ekteki kemokin (=anti), derinlik içindeki
kemokin (=zu)). Gösterilen veriler bagnslîl dört deneyin standart sapmalarEIle ortalama
degerleri gösterilmistir.
SEKANS LISTESI
<:î ' C' › Fnedri'chddeicander-Ünwersitea Edangew'-Jümberg
<:12C~› NFkaDpaB-Sinyal Yolu Manipule Edilmis Dendriük hüci elei'
130 `T3091 PC'T
160 - 10
MYO› Patentln 'iersiyon 3.3
210 - 1
21 1 7.15
<:2 ' 3 › Homo sapiyen
.7 .-"al
171 IT'
Asn Leu ;“50 Trp Ser Trp Leu Thr
<'313› rapay
(:30 >
<'223 › IKKalfa yapisal olarak 3ka mmant
His His His His His. Gly asp T'yr
Pro 61)' Ala Gl'y Caly Pro Trp Glu
Gly Phe Gly Asn 'sal Cys Leu Tyr
lle Ala lle Lys Ser Cys Arg Leu
6.5. 79
Ar; Trp (33.5 His -i3lu Ile Gln Ile
ya] '.'3| Lys Ala Cys &sp 'fal Pro
Asp `Sal Pro Leu Leu Ala Mel GIU
MS 120
Lys -eu Leu Asn Lys Pro Glu Asn
13.0 135
ile Leu Ser Leu Leu Ser 'Asp Ile
Gln Asp '-.-'al Gly -Gly Lys Ile Ile
Ala Lys Asp sal ASD bln bly Glu
195 300
1:- r-
Gl'y' Asp
."81 Leu
433: Tyr
45.:-
Asp GI uIle Asn
-:3Iu
-:3Iu
-.' 5.
<:212 › DNA
<:213 › i'apay'
(4 c› 3
34: Ev
-13ln
<2211> 773
<212> PRT
<213> fapay
c ;30 >
< 223 > lKKbeta 'yapisal olarak aknf mutant
.3.70
.. 5:.'
Thr 'Sly
Leu Asri
-:3ln
.2 .. . .. Z.
.1 .... â. ..
.1 Z. I. ..
Met Na Gln Pro Ala ThrAia Ala Asn Ala Leu Dro Glu Pro &la Lys
bg Ma @m @m -mi anina Gm Ma Hm Asn.ju Cw 'm LaiLeu
.725 ?'30 735
Glu Asn Ala Ile Gln Asp Thr "lal img Glu "E-In Asp Gln Ser Phe 'hr
Ala Leu r«Sp Trp Ser Trp Leu Glri Thr Glu Glu Glu Glu His Ser Oya
75“ ?en ?es
LE'U i` Gln Ala 561'
(213›5
<`212> DNA
CNB > 'i'apay
<2î1>763
<2î2›PRT
<:2î3› i'apay
<::23 > IKKaITa Inhibitör Mutant
His His His His (EN Asp Tyr Lys Asp ?SD Asp Asp Lys C-.Iy' îso ile
1 _i :~
(Slu (BU .Arg Gl'y His Met Thr Met Glu Arg Pro Pro Gly Leu Mg Pro
25 30
bi, Ala ;5; Ui, Pro Trp cJiu :141061 »Uç blu Arg Leu :5" Thr Çr, bi,
Phe GI; AsnVal Cys Leu Tyr Gn His Arg Giu Leu .Asp Leu Lys lle
50 55 60
(31)'
4'.-' al
-13In
(3|",^'
5411)
Met u'al Lys Ile lle "i-'al His Thr fal Gln Ser Gln Asp Mg 'fal Leu
EIC- ms ESC'
Lys Glu Leu Dhe Giy His Leu Ser Lys Leu Leu Gly Cys Lys Gln -yi-
645- 650 855
660 565- B?
ile Trp His ..eu Leu Lys Ile Ala Cys Thr ':3ln Ala Ala Ala Arg Ala
8.75 #5550 EEE.
Leu -xai Gi-,i Ala Ala Leu Glu Gly Aia 'Hal Ala Pro sanma Ala ;da
599 695 72-›
TFD Leu Pro Dro Ala .Ala Ala Glu His Asp HIS Ala Leu Ala Cys .«'al
725- ,730 ?35
Leu Asn Cys Leu Gly His Leu Ala Ala ile ile His Glu Ala âsn -Slu
Glu Gln Gl'y' Asn Ser Me: Met ASF! Leu Asp 'rp Ser TFD Leu Thr Blu
.755 760 755'
<'31 1 > 2235
<1212 > D'JA
<313 › vapay
<1320 ›
.'1..
7.. ..d
.. 9 7. D. .i
3. a. ... a. a. ..n
3 › KKDeta Inhibitör Mutant
420› 9
-SIy Asp Tyr
1 E [2-
Gly' Thr
<3T2> PRT
-13In
< 2 T'3 › 'i'apa'y
< 123 › IKKbeta lnhitJitör Mmant
5535-
Met Gl'y
-:3|u Lys
Ala 'Tir 50
81)' GI'y' 65
A1.: Cys
(31)' Ala
(31)'
(31)'
Thr (2,5C ys Gly
Thr Gl'y'
Cys .Ala
(31)'
Thr 'Gîy
1_ ..a 1_ ..
.1 .. .. .. .i .. i n..
”4... ._ L... a_ .. ._
.2 .l ... v_ w. ... ... : .n
0,5 Gly
Ala Ci'y
0-25 GIV
GI 'g' Âli)
13135
0-15 Thr
K3 Ala
Aka Gl'y'
A3 Gly
üstfamilya
birçogu
Transkripsiyon
program i ni I m
indüksiyonu
SEKILi
-RNA “All RNA mîo - RNA m.
SEKIL 2a
RNA'szi Kontrol I m
SEKIL 2b
RNA'sz 'Kontrol- m ;RNA'sz i Kontrol I m
RNA mi. I -RNA ama
2 .o _1 ,_`
RNAsz Kontrol` m [RNAsz [Kontrol ooo.. lRNAsz r Kontrol ? m
RNA !Uno RNA EEMD -RNA EEMO
ioc IDCm mDC
1 1 I I :
RNAsz Kontrol I m IRNAsz TKonuoi. m RNAsz I Kontrol 1 m
-RNA ini. RNA EA” -RNA !1510
L _Kontrol m OHWO m 55 Kontrol- '00-
i- . Yapi + MelanA-RNA + Peptid yükleme
SEKIL 4a
Yapi + MelanA-RNA + Peptid yukleme
E; naif T-Hücreleri .Merkezi hafiza hücreleri I Efektör- hafiza hücreleri Q Iittik efektör hücreler
SEKIL4b
g ilave
GFP EEAIO EP Ealfa EP EEA10
~20.W J
CD40-lndüksiyon faktörü
CD70-Indüksiyon faktörü:E T
.2' 2 .
- ° RNA yok mum neyim rot-cum
SEKIL7 .... "n
2 C083- lnduksiyon faktoru
1.5 g '
0 RNA yok mwm Mim umiw
2 0086- Indüksiyon faktörü
o RNA yok Mil“ MW #CI-'HM
Indüksiyon faktörü
Indüksiyon faktörü
SEKIL 8 OX-40L Indüksiyon faktörü (n=8)
0 RNA yok Mum“ memnu “691500
CD25- Indüksiyon faktörü
O RNA mm MW ::canim
çekirdekleri 0 mm
1%&le
im EEAlG
olKKB-CEAIO
IILHEÜ IIEIÄ
m m m A.- i __ag wil_
1. Stimülasyon
2. Stimülasyon
Tetramerpozitif CD8* T-Hücreleri [%1
3. Stimülasyon
RNA yok Hem îKKa- nun. IkxavllAlö
/14
SEKIL 13 MFI. Doz bagmlugm=3; SEM
11/14
9.” ait”
-1-1 li
12/14
NFkB-Lusiferaz EP 293T içinde indüksiyon faktörü n=3
SEKIL16 o
KKWEEA'I BIBISA
WEEMIJISM
13/14
U 4saat
G 24saat
ci 485aat
Claims (13)
1. NFKB sinyal yolunun en azIan bir mutant sinyal iletim proteini için kodlanan bir veya daha fazla nükleotid sekanslar ile RNA transfeksiyonu yoluyla kendi NFKB sinyal yolu içinde manipüle edildigi, NFKB sinyal yolunun mutant sinyal iletim proteinin yapüândßn aktif bir (i) yapandlBin aktif IKKa mutantESEK KIMLIK NO:2'nin 25'ten 769'a kadar amino asit kallEtEIârlEEçermektedir, veya (ii) yapUândBin aktif IKKß mutantE$EK KIMLIK NO:5'in 18`den 773'e kadar amino asit kalEtUârEEtermektedir.
2. Yapilândlßn aktif IKKa ve IKKß mutantII SEK KIMLIK NO:2'nin veya SEK KIMLIK NO:5'in sekanslarlüljkserdigi veya RNA sekansIlEl SEK KIMLIK NO:3'e veya 6'ya sahip oldugu Istem 1'e göre DH.
3. Istem 1 veya 2'ye göre DH olup, burada DH (i) olgunlasmlglDH'dir; ve/veya (ii) IL-12p70 üreten NFKB ile aktiflestirilmis DH'dir; ve/veya (iii) IL-10 üreten NFKB ile aktiflestirilmis DH'dir; ve/veya (iv) ilave olarak bir veya daha fazla hedef antijenle yüklenmistir.
4. NFKB sinyal yolunun bir mutant sinyal iletim proteini için kodlanan olgunlasmamlgl veya olgunlasmlglDH'lerin bir veya daha fazla nükleotid sekanslar ile RNA-transfeksiyonunu içeren ve Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine göre NFKB sinyal yolu tarafIan manipüle edilen DH'nin organizma dEIIiliretimi için Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine göre yöntem.
5. RNA-transfeksiyonunun elektroporasyon sayesinde gerçeklestirildigi istem 4'e göre yöntem.
6. Ilave olarak asagßhkîleri içeren istem 4 veya 5'e göre yöntem: (i) olgunlasmamlgIDH'lerin RNA-transfeksîyonu söz konus oldugunda bir olgunlastlîilna uyarlEEÇIve/veya (ii) DH'Ierin bir hedef antijen ile yüklenmesi, ve/veya (iii) olgunlasm lgl DH'Ierin dondurularak saklanmasEl
7. Istemler 1 ila 3'ten biri veya birden fazlalela göre DH'Ieri ve opsiyonel olarak farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyan ve tasmilesikleri içeren bilesim, farmasötik bilesim veya ilaç olup, burada tercihen DH'Ier otolog DH'Ierdir.
8. Istemler 1 ila 3`ten birine veya birden fazlas- göre DH'Ierin otolog CD8+ T hücrelerinin ex vivo olarak uyarllüiastilsin kullanIiEl
9. NFKB ile aktiflestirilmis DH'lerin bir pasif T hücresi transferi için ve bir T hücresi klonunun olusturulmaslîtjn uygun oldugu istem 8'e göre kullanIi.
10. Bir hastanI hastalllZIar- tedavisinde kullanllân Istemler 1 ila 3'ten birine veya birden daha fazlaleb göre DH'Ier.
11. NFKB ile aktiflestirilmis DH'Ierin DH'ye dayalljsllâma, kansere veya enfeksiyonel hastalllZlara karsElierapötik asllâma olarak ve koruyucu aslîrlnaddesi olarak uygun oldugu istem 10'a göre kullan a yönelik DH`Ier.
12. Otolog CD8+ T hücrelerinin ex vivo uyarliülahil T hücrelerinin Istemler 1 ila 3'ten birine veya birden fazlasi göre DH'Ier ile uyarllIhasIlZiçeren T hücrelerinin büyütülmesi için yöntem.
13. NFKB ile aktiflestirilmis DH'Ierin, pasif T hücresi transferi için T hücrelerinin T-hücresi büyümesine ve T- hücresi klonunun üretilmesine uygun oldugu istem 12'ye göre yöntem.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP10188893 | 2010-10-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TR201802790T4 true TR201802790T4 (tr) | 2018-03-21 |
Family
ID=43629060
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TR2018/02790T TR201802790T4 (tr) | 2010-10-26 | 2011-10-26 | Nfkb sinyal yolu manipüle edilmiş dendritik hücreler. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9862968B2 (tr) |
| EP (1) | EP2633034B1 (tr) |
| CY (1) | CY1119959T1 (tr) |
| DK (1) | DK2633034T3 (tr) |
| ES (1) | ES2661369T3 (tr) |
| HR (1) | HRP20180334T1 (tr) |
| HU (1) | HUE036148T2 (tr) |
| LT (1) | LT2633034T (tr) |
| NO (1) | NO2633034T3 (tr) |
| PL (1) | PL2633034T3 (tr) |
| PT (1) | PT2633034T (tr) |
| RS (1) | RS56923B1 (tr) |
| SI (1) | SI2633034T1 (tr) |
| TR (1) | TR201802790T4 (tr) |
| WO (1) | WO2012055551A2 (tr) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR112019008369A2 (pt) * | 2016-10-26 | 2019-10-01 | Modernatx Inc | ácidos ribonucleicos mensageiros para intensificar respostas imunes e métodos para uso dos mesmos |
| BR112019015797A2 (pt) | 2017-02-01 | 2020-03-17 | Modernatx, Inc. | Composições de mrna terapêuticas imunomoduladoras que codificam peptídeos de mutação de oncogene de ativação |
| WO2019241666A1 (en) * | 2018-06-14 | 2019-12-19 | Thomas Jefferson University | Vaccine vector encoding mutated gnaq to treat uveal melanoma and cancers having mutated gnaq and gna11 proteins |
| CN117534753B (zh) * | 2023-12-07 | 2024-05-10 | 北京博奥森生物技术有限公司 | 一种诱导高性能NF-κB多克隆抗体多肽及其应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10162480A1 (de) * | 2001-12-19 | 2003-08-07 | Ingmar Hoerr | Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen |
| US20050059634A1 (en) * | 2003-07-28 | 2005-03-17 | Venton Duane L. | Per-6-substituted-per-6-deoxy-cyclodextrins, and use of the same to inhibit soluble beta-amyloid-peptide derived oligomers and to treat alzheimer's and related diseases |
| JP2005304470A (ja) | 2004-03-26 | 2005-11-04 | Hisamitsu Pharmaceut Co Inc | アポトーシスを促進又は抑制する化合物をスクリーニングする方法、アポトーシス促進剤及びアポトーシス抑制剤 |
| US20100196336A1 (en) | 2006-05-23 | 2010-08-05 | Dongsu Park | Modified dendritic cells having enhanced survival and immunogenicity and related compositions and methods |
| US20090202492A1 (en) | 2008-01-25 | 2009-08-13 | University Of South Florida | Adenovirus vaccine utilizing ikk as adjuvant |
-
2011
- 2011-10-26 SI SI201131437T patent/SI2633034T1/en unknown
- 2011-10-26 EP EP11787599.7A patent/EP2633034B1/de active Active
- 2011-10-26 LT LTEP11787599.7T patent/LT2633034T/lt unknown
- 2011-10-26 ES ES11787599.7T patent/ES2661369T3/es active Active
- 2011-10-26 RS RS20180232A patent/RS56923B1/sr unknown
- 2011-10-26 US US13/881,592 patent/US9862968B2/en active Active
- 2011-10-26 HU HUE11787599A patent/HUE036148T2/hu unknown
- 2011-10-26 WO PCT/EP2011/005400 patent/WO2012055551A2/de active Application Filing
- 2011-10-26 PL PL11787599T patent/PL2633034T3/pl unknown
- 2011-10-26 NO NO11787599A patent/NO2633034T3/no unknown
- 2011-10-26 TR TR2018/02790T patent/TR201802790T4/tr unknown
- 2011-10-26 PT PT117875997T patent/PT2633034T/pt unknown
- 2011-10-26 DK DK11787599.7T patent/DK2633034T3/en active
-
2017
- 2017-12-04 US US15/830,225 patent/US11466289B2/en active Active
-
2018
- 2018-02-23 HR HRP20180334TT patent/HRP20180334T1/hr unknown
- 2018-02-27 CY CY20181100240T patent/CY1119959T1/el unknown
-
2022
- 2022-07-22 US US17/871,680 patent/US20230151384A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20230151384A1 (en) | 2023-05-18 |
| EP2633034B1 (de) | 2017-11-29 |
| WO2012055551A2 (de) | 2012-05-03 |
| US20140004134A1 (en) | 2014-01-02 |
| EP2633034A2 (de) | 2013-09-04 |
| HRP20180334T1 (hr) | 2018-04-06 |
| HUE036148T2 (hu) | 2018-06-28 |
| CY1119959T1 (el) | 2018-12-12 |
| PL2633034T3 (pl) | 2018-05-30 |
| RS56923B1 (sr) | 2018-05-31 |
| SI2633034T1 (en) | 2018-05-31 |
| NO2633034T3 (tr) | 2018-04-28 |
| DK2633034T3 (en) | 2018-03-05 |
| LT2633034T (lt) | 2018-03-26 |
| WO2012055551A3 (de) | 2012-07-19 |
| PT2633034T (pt) | 2018-03-05 |
| US20180230486A1 (en) | 2018-08-16 |
| US9862968B2 (en) | 2018-01-09 |
| ES2661369T3 (es) | 2018-03-28 |
| US11466289B2 (en) | 2022-10-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230212511A1 (en) | Cells expressing recombinant growth factor receptors | |
| US10577586B2 (en) | Compositions and methods for modulating an immune response | |
| RU2709711C2 (ru) | Новые иммуногенные пептиды | |
| JP6697562B2 (ja) | 樹状細胞組成物 | |
| JP7320947B2 (ja) | 新規な免疫原性ＣＤ１ｄ結合ペプチド | |
| KR101408565B1 (ko) | Ｔ 세포 집단의 제조 방법 | |
| US20230151384A1 (en) | Nf-kb signalign pathway-manipulated dendritic cells | |
| JP2015231371A (ja) | 免疫反応を増加させるための方法 | |
| KR20200130826A (ko) | 개선된 면역요법을 위한 유전자-조절 조성물 및 방법 | |
| RU2761653C2 (ru) | Пептиды и способы для лечения диабета | |
| JP2003518507A (ja) | 免疫系の活性化および阻害 | |
| WO2018206577A1 (en) | Interferon primed plasmacytoid dendritic cells | |
| JP2022513021A (ja) | 向上した酸化還元酵素モチーフを有する免疫原性ペプチド | |
| JP2022521738A (ja) | 負荷可能な抗原提示ポリペプチドを含む操作された赤血球系細胞および使用方法 | |
| CN115916961A (zh) | T细胞 | |
| Tan et al. | MFG-E8 is critical for embryonic stem cell-mediated T cell immunomodulation | |
| KR102025417B1 (ko) | 조절 t 세포 매개성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| US20130337001A1 (en) | Immunogenic composition for treatment of hepatitis C, a method for preparing the composition and use thereof for treating hepatitis C | |
| CN105585637B (zh) | 基于il-12稳定膜表达的肿瘤治疗剂及其制法和用途 | |
| 양수빈 | A Hepatitis B Virus-derived Peptide Exerts an Anticancer Effect via TNF/iNOS-producing Dendritic Cells in Tumor-bearing Mouse Model | |
| Lapteva et al. | Preclinical Evaluation of Novel Dendritic Cell-Based Prostate Cancer Vaccines |