KR101965363B1 - Ｃ１２ｏｒｆ５９ 유래 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Ｃ１２ｏｒｆ５９ 유래 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 C12orf59 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 대장암 세포주에 본 발명의 C12orf59 단백질 아형 1 및 2의 세포외도메인에서 유래한 펩타이드 10종을 처리한 경우, 대장암세포의 침윤 억제능이 우수하고, 세포-미부착 조건 하에서 대장암세포의 생존 비율이 유의적으로 더욱 감소하며, 기존에 알려진 C12orf59 단백질 및 이의 단편과 비교하여 현저한 종양 억제 활성을 나타냄으로써, 본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물에 유용하게 이용할 수 있을 뿐 아니라, 이를 이용한 암 치료제 후보 물질을 스크리닝하는 방법 또는 다양한 암 종의 전이 진단 또는 병기 예측을 위한 임상 마커로 유용하게 이용할 수 있다.

Description

Ｃ１２ｏｒｆ５９ 유래 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물{Pharmacological composition containing C12orf59-derived peptides for the prevention and treatment of cancer}
본 발명은 C12orf59(Chromosome 12 open reading frame 59) 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
암은 인류의 건강을 위협하는 최대의 질병 중의 하나로서, 세포가 일련의 돌연변이 과정을 거쳐 무제한적이고 비조절적인 방식으로 증식하고 불사화되어 발생하는 질병이다. 암과 관련된 다양한 생화학적 기전이 규명되고 그에 따른 치료제가 개발되어 오고 있으나, 아직까지 암에 대한 근본적인 치료방법은 제시되지 않고 있고, 이에 따라, 암과 관련된 다양한 생체 내 분자를 동정하고 이를 표적으로 하는 약물을 개발하는 노력이 경주되고 있으며, 이러한 약물 중 일부를 조합하여 암 치료효과를 증진시키려는 노력 역시 시도되고 있다. 따라서 암과 관련된 표적 분자를 추가적으로 발굴하는 노력은 매우 중요한 일이라고 할 수 있다.
대장암은 전 세계적으로 연간 100만 명의 환자가 발생하고 53만 명이 사망하는 난치성 질환으로, 노령화와 식이패턴의 변화에 따라 우리나라에서도 전체 암 발생의 12.7%로 3위를 차지할 정도로 빠른 속도로 증가하고 있다. 현재 대장암에 효과적인 항암제로는 5-에프유, 유에프티, 카페시타빈(상품명: 젤로다)과 같은 플루오로피리미딘계 약물, 이리노테칸(상품명: 갬푸토) 및 옥살리플라틴과 같은 약물이 널리 이용되고 있으며, 미국, 유럽 등 세계 7대 제약시장에서 대장암 치료제 시장은 현재 9억 달러 규모에서 2017년 78억 달러로 급성장할 전망이다. 이러한 약물의 지속적인 사용은 내성의 증가 및 부작용을 나타낼 수 있다는 문제점을 항상 지니고 있어, 새로운 치료제의 개발 및 진단에 대한 연구가 필요한 시점이다.
암 치료제에는 일반적인 화학약물 이외에도 생명공학에 의한 산물인 펩타이드 및 단백질 약물이 개발되고 있다. 특정한 단백질 중에서도 치료 및 예방에 있어서 유용하고 효율이 높은 펩타이드를 사용하는 펩타이드 제제는 단백질 전체를 사용하는 것에 비하여 비교적 부작용이 적으며 제조를 위한 조작이 용이하여 경비가 절감되고 환자에 대한 투여의 횟수를 줄일 수 있는 장점이 있다. 펩타이드 약물은 강력한 활성 및 약리 작용으로 매우 적은 양으로도 질병을 치료할 수 있고 생체 내 특이성이 높기 때문에 독성을 일으키는 가능성이 상대적으로 낮다. 또한 생체조직 내에 축적되는 양이 적으며 약물 간의 상호작용 가능성이 낮다. 이러한 장점에도 불구하고, 펩타이드가 기본적으로 가지고 있는 특성들 즉, 펩타이드는 거대분자이며 산화, 가수분해, 탈아민화 반응 등에 의하여 화학적으로 분해되기 쉬우며 안정성이 낮고 생체이용률이 낮기 때문에 기존의 전통적인 제형으로는 의약품으로 개발하기가 매우 어렵다. 또한 생산적인 측면에 있어서 일반화학 합성법과는 완전히 다른 기술을 필요로 하기 때문에 약물개발에 있어서 생산시설 확충 및 투자비용이 큰 난관으로 작용하기도 한다.
C12orf59(Chromosome 12 open reading frame 59) 유전자는 인간, 침팬지, 개, 소, 쥐, 랫트, 닭 등에서 보존되어 있고, 염기서열상 2 가지 아형(isoform)이 보고되어 있으며(BC131523, 183 aa 및 NM_153022, 163 aa), 아미노산 서열 분석상 막단백질로 예상되지만, 아직까지 그 기능이 명백히 밝혀지지 않았다.
이에, 본 발명자들은 암의 진단 또는 치료용 물질을 개발하기 위해 노력한 결과, 대장암 세포주에 C12orf59 단백질 아형 1 및 2의 세포외도메인에서 유래한 펩타이드 10종을 처리한 경우, 대장암세포의 침윤 억제능이 우수하고, 세포-미부착 조건 하에서 대장암세포의 생존 비율이 유의적으로 더욱 감소하며, 기존에 알려진 C12orf59 단백질 및 이의 단편과 비교하여 현저한 종양 억제 활성을 나타내므로, 본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드를 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 이용한 암 진단 또는 암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법에 유용하게 이용할 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 C12orf59(chromosome 12 open reading frame 59) 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 단백질의 단편 중 어느 하나 이상을 암호화한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 상기 벡터를 포함하는 세포를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 C12orf59 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 건강식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 피검 화합물 또는 조성물을 상기 C12orf59 단백질의 단편을 발현하는 세포주에 처리한 다음, 처리된 세포주에서 상기 C12orf59 단백질의 단편의 발현 정도를 측정하여, 상기 C12orf59 단백질의 단편의 발현량이 피검 화합물 또는 조성물을 무처리한 대조군 세포주와 비교하여 증가된 피검 화합물 또는 조성물을 선별하는 암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 해결하기 위하여, 본 발명은 C12orf59(chromosome 12 open reading frame 59) 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 단백질의 단편 중 어느 하나 이상을 암호화한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 상기 벡터를 포함하는 세포를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 상기 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 건강식품을 제공한다.
아울러, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법을 제공한다:
1) 피검 화합물 또는 조성물을 상기 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 단백질의 단편 중 어느 하나 이상을 발현하는 세포주에 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 처리된 세포주에서 상기 C12orf59 단백질의 단편의 발현 정도를 측정하는 단계; 및
3) 단계 2)의 C12orf59 단백질의 단편의 발현량이 피검 화합물 또는 조성물을 무처리한 대조군 세포주와 비교하여 증가된 피검 화합물 또는 조성물을 선별하는 단계.
대장암 세포주에 본 발명의 C12orf59 단백질 아형 1 및 2의 세포외도메인에서 유래한 펩타이드 10종을 처리한 경우, 대장암세포의 침윤 억제능이 우수하고, 세포-미부착 조건 하에서 대장암세포의 생존 비율이 유의적으로 더욱 감소하며, 기존에 알려진 C12orf59 단백질 및 이의 단편과 비교하여 현저한 종양 억제 활성을 나타냄으로써, 본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물에 유용하게 이용할 수 있을 뿐 아니라, 이를 이용한 암 치료제 후보 물질을 스크리닝하는 방법 또는 다양한 암 종의 전이 진단 또는 병기 예측을 위한 임상 마커로 유용하게 이용할 수 있다.
도 1은 비이클(DMSO), 펩타이드 A_intact 및 펩타이드 B_intact에 의한 SW480sub 서브파퓰레이션(subpopulation) 대장암세포 침윤 억제를 나타낸 도이다:
A: SW480sub 세포에 각 펩타이드를 처리한 결과; 및
B: 5 반복으로 선택 면적당 침윤된 세포 수로 나타낸 결과(막대 높이=평균, 에러바(error bar)=표준편차).
도 2는 펩타이드 A_intact 및 펩타이드 B_intact의 일부로 구성된 펩타이드 각 4종씩을 추가적으로 각각 50 μM 농도로 처리한 경우 SW480sub 서브파퓰레이션 대장암세포의 침윤 결과를 나타낸 도이다:
A: 펩타이드에 의한 SW480sub 대장암세포의 침윤 억제 효과; 및
B: 5 반복으로 선택 면적당 침윤된 세포 수를 나타낸 결과(막대 높이=평균, 에러바=표준편차, 비이클은 대조군).
도 3은 펩타이드 A_intact 및 펩타이드 B_intact의 일부로 구성된 펩타이드 각 4종씩을 추가적으로 각각 50 mM 농도로 처리한 경우 SW480 대장암세포의 침윤 결과를 나타낸 도이다:
A: 펩타이드 10 종에 의한 SW480 세포의 침윤 억제 효과; 및
B: 5 반복으로 선택 면적당 침윤된 세포 수를 나타낸 결과(막대 높이=평균, 에러바=표준편차, 비이클은 대조군).
도 4는 세포미부착 조건의 SW480sub 세포에서 펩타이드 A_intact 및 펩타이드 B_intact에 의한 세포 생존율 감소를 나타낸 도이다:
A: 펩타이드에 의한 세포 응집(aggregation) 감소; 및
B: 세포생존을 의미하는 흡광도 측정값의 감소(막대 높이=평균, 에러바=표준편차, 비이클은 대조군).
도 5는 세포미부착 조건의 SW480sub 세포에서 펩타이드 A_N_term, A_C_term1, B_N_term 및 펩타이드 B_C_term1에 의한 세포 생존율 감소를 나타낸 도이다:
A: 펩타이드에 의한 세포 응집 감소; 및
B: 세포생존을 의미하는 흡광도 측정값의 감소(막대 높이=평균, 에러바=표준편차, 비이클은 대조군).
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 C12orf59(chromosome 12 open reading frame 59) 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 C12orf59 단백질의 단편은 하기 1) 내지 3)의 아미노산 서열로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열;
2) 서열번호 1 내지 10의 일부분으로 나타내는 아미노산 서열; 및
3) 서열번호 1 내지 10과 80% 이상의 상동성을 나타내는 아미노산 서열.
상기 C12orf59 단백질은 서열번호 11 또는 12로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 암은 대장암, 위암 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 단백질의 단편 중 어느 하나 이상을 암호화한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 또는 상기 벡터를 포함하는 세포를 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 C12orf59 단백질의 단편은 하기 1) 내지 3)의 아미노산 서열로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열;
2) 서열번호 1 내지 10의 일부분으로 나타내는 아미노산 서열; 및
3) 서열번호 1 내지 10과 80% 이상의 상동성을 나타내는 아미노산 서열.
상기 C12orf59 단백질은 서열번호 11 또는 12로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 벡터는 인체 또는 동물세포에서 발현되는 선형 DNA, 플라스미드 벡터, 바이러스성 발현벡터를 포함하는 벡터 또는 재조합 레트로바이러스(retrovirus) 벡터, 재조합 아데노 바이러스(adenovirus) 벡터, 재조합 아데노 부속 바이러스(adeno-associated virus, AAV) 벡터, 재조합 헤르페스 심플렉스 바이러스(herpes simplex virus) 벡터 또는 재조합 렌티바이러스(lentivirus) 벡터를 포함하는 재조합 바이러스 벡터인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 세포는 조혈 줄기세포(hematopoietic stem cells), 수지상 세포(dendritic cells), 자가이식 종양세포(autologous tumor cells) 및 정착 종양세포(established tumor cells)로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 암은 대장암, 위암 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, C12orf59 아형(isoform) 1 및 아형 2의 세포외영역의 아미노산 서열로부터 총 10종의 펩타이드를 디자인한 다음, C12orf59 유래 펩타이드를 합성 및 정제하였다. 암세포주에서 C12orf59 유래 펩타이드의 과발현에 의한 세포 침윤 효과를 확인하기 위하여, 먼저 침윤능이 높은 서브파퓰레이션인 SW480sub 세포에 상기 C12orf59 유래 펩타이드를 처리한 다음 침윤 분석한 결과, 펩타이드 A_intact 및 B_intact를 처리하면 침윤한 세포 수가 감소하였고(도 1A), 침윤억제 비율이 펩타이드의 농도 의존적으로 침윤이 감소됨을 확인하였다(도 1B). 또한, SW480 대장암 세포에서도 C12orf59 유래 펩타이드 10종을 각각 처리한 결과, 세포 침윤이 유의적으로 억제됨을 확인하였다(도 2 및 도 3).
또한, 펩타이드 A 및 B를 각각 처리하였을 경우 현미경 사진을 통해 비이클 대조군과 비교한 결과, 모든 펩타이드 처리군에서 세포생존이 현저히 감소하였고(도 4A), 펩타이드 A_intact 및 B_intact를 처리한 후, 세포 생존비율이 각각 53% 및 85% 만큼 유의적으로 감소하는 것을 확인하였다(도 4B). 상기 펩타이드 A_N_term, A_C_term1, B_N_term 또는 B_C_term1에 의한 대장암세포 생존억제효능을 분석한 결과, 펩타이드 A_C_term1를 처리한 경우 및 B_C_term1를 처리한 경우에 유의적으로 암세포 생존능이 억제됨을 확인하였다(도 5).
따라서, 본 발명의 C12orf59 단백질의 단편을 대장암 세포주에 처리한 경우, 대장암세포의 침윤 억제능이 우수하고, 세포-미부착 조건 하에서 대장암세포의 생존 비율이 유의적으로 더욱 감소하며, 기존에 알려진 C12orf59 단백질 및 이의 단편과 비교하여 본 발명의 C12orf59 단백질의 단편은 짧은 길이(7 내지 20 아미노산)로서 인공합성이 가능하고, 세포감염할 필요없이 세포에 직접 처리함으로써 산업상 이용 가능성이 크며, 이는 현저한 종양 억제 활성을 나타내므로, 본 발명의 C12orf59 단백질의 단편은 암 예방 및 치료용 약학적 조성물로 유용하게 이용할 수 있다.
본 발명의 조성물의 치료상으로 유효한 양은 여러 요소, 예를 들면 투여방법, 목적부위, 환자의 상태 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 인체에 사용 시 투여량은 안전성 및 효율성을 함께 고려하여 적정량으로 결정되어야 한다. 동물실험을 통해 결정한 유효량으로부터 인간에 사용되는 양을 추정하는 것도 가능하다. 유효한 양의 결정시 고려할 이러한 사항은, 예를 들면 Hardman and Limbird, eds., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed.(2001), Pergamon Press; 및 E.W. Martin ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed.(1990), Mack Publishing Co.에 기술되어있다.
본 발명의 조성물은 또한 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 둘 이상의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 조성물을 생체내 전달에 적합한 것이면 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc. 에 기재된 화합물, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 이용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주이용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(Mack Publishing Company, Easton PA, 18th, 1990)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 단백질의 단편을 0.0001 내지 10 중량%로, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량%를 포함한다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명에 따른 조성물의 일일 투여량은 0.0001 ~ 10 ㎎/㎖이며, 바람직하게는 0.0001 ~ 5 ㎎/㎖이며, 하루 일 회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터의 경우 0.05 내지 500 mg을 함유하는 것이 바람직하고, 0.1 내지 300 mg을 함유하는 것이 더욱 바람직하며, C12orf59 유래 펩타이드를 암호화는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 바이러스의 경우, 103 내지 1012 IU(10 내지 1010 PFU)를 함유하는 것이 바람직하고, 105 내지 1010 IU를 함유하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명의 C12orf59 단백질의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포의 경우, 103 내지 108 개를 함유하는 것이 바람직하고, 104 내지 107개를 함유하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명의 C12orf59 단백질의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 또는 세포를 유효성분으로 함유하는 조성물의 유효 용량은 체중 1 ㎏당 벡터의 경우에는 0.05 내지 12.5 ㎎/㎏, 재조합 바이러스의 경우에는 107 내지 1011 바이러스 입자(105 내지 109 IU)/㎏, 세포의 경우에는 103 내지 106 세포/㎏이고, 바람직하게는 벡터의 경우에는 0.1 내지 10 ㎎/㎏, 재조합 바이러스의 경우에는 108 내지 1010 입자(106 내지 108 IU)/㎏, 세포의 경우에는 102 내지 105 세포/㎏이며, 하루 2 내지 3회 투여될 수 있다. 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 신경 질환의 발병 정도에 따라 변할 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 건강식품을 제공한다.
상기 C12orf59 단백질의 단편은 하기 1) 내지 3)의 아미노산 서열로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열;
2) 서열번호 1 내지 10의 일부분으로 나타내는 아미노산 서열; 및
3) 서열번호 1 내지 10과 80% 이상의 상동성을 나타내는 아미노산 서열.
상기 C12orf59 단백질은 서열번호 11 또는 12로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 암은 대장암, 위암 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 C12orf59 단백질의 단편을 대장암 세포주에 처리한 경우, 대장암세포의 침윤 억제능이 우수하고, 세포-미부착 조건 하에서 대장암세포의 생존 비율이 유의적으로 더욱 감소하며, 기존에 알려진 C12orf59 단백질 및 이의 단편과 비교하여 현저한 종양 억제 활성을 나타내므로, 본 발명의 C12orf59 단백질의 단편은 암 예방 및 치료용 건강식품 조성물로 유용하게 이용할 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 C12orf59 단백질의 단편은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 C12orf59 단백질의 단편의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 단당류, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 이당류, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 다당류, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 건강식품 조성물은 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
아울러, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법을 제공한다:
1) 피검 화합물 또는 조성물을 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 단백질의 단편 중 어느 하나 이상을 발현하는 세포주에 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 처리된 세포주에서 상기 C12orf59 단백질의 단편의 발현 정도를 측정하는 단계; 및
3) 단계 2)의 C12orf59 단백질의 단편의 발현량이 피검 화합물 또는 조성물을 무처리한 대조군 세포주와 비교하여 증가된 피검 화합물 또는 조성물을 선별하는 단계.
상기 C12orf59 단백질의 단편은 하기 1) 내지 3)의 아미노산 서열로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열;
2) 서열번호 1 내지 10의 일부분으로 나타내는 아미노산 서열; 및
3) 서열번호 1 내지 10과 80% 이상의 상동성을 나타내는 아미노산 서열.
상기 C12orf59 단백질은 서열번호 11 또는 12로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 암은 대장암, 위암 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 C12orf59 단백질의 단편을 대장암 세포주에 처리한 경우, 대장암세포의 침윤 억제능이 우수하고, 세포-미부착 조건 하에서 대장암세포의 생존 비율이 유의적으로 더욱 감소하며, 기존에 알려진 C12orf59 단백질 및 이의 단편과 비교하여 현저한 종양 억제 활성을 나타내므로, 본 발명의 C12orf59 단백질의 단편은 암 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 건강식품으로 유용하게 이용할 수 있을 뿐 아니라, 이를 이용한 암 치료제 후보 물질을 스크리닝하는 방법 또는 다양한 암 종의 전이 진단 또는 병기 예측을 위한 임상 마커로 유용하게 이용할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 대장암 세포주의 배양
SW480 대장암 세포주는 ATCC에서 제공받았으며, 10% FBS, 페니실린-스트렙토마이신, L-글루타민, 소디움 피루베이트가 포함된 RPMI1640(GIBCO, USA) 배지에서 37℃, 5% CO2 조건으로 배양하였다. SW480sub 세포주는 SW480 세포주로부터 분리한 실험관 내(in vitro) 침윤능이 높은 서브파퓰레이션(subpopulation)이다.
< 실시예 2> C12orf59 유래 펩타이드 서열 및 제작
C12orf59 아형(isoform) 1(서열번호: 11) 및 아형 2(서열번호: 12)의 세포외도메인의 아미노산 서열로부터 펩타이드를 디자인한 다음(도 6), 펩트론 사(대전, 대한민국)에 주문하여 합성 및 정제하였다. 상기 펩타이드의 구체적인 서열 정보는 [표 1]과 같다.
구체적으로, 펩타이드 A_intact, A_N-term, A_C-term1, A_Cen 및 A_C-term2는 183 개의 아미노산으로 이루어진 C12orf59 아형 1의 단편이고, A_N-term, A_C-term1, A_Cen 및 A_C-term2는 A_intact의 일부로 7 또는 12 개의 아미노산으로 구성된다. 더욱 구체적으로, A_N-term은 A_intact의 N-말단 5 개 아미노산을 제거한 것이고, A_C-term1 및 A_C-term2는 각각 A_intact의 C-말단 5 개 및 10 개를 제거한 것이며, A_Cen는 가운데 부분의 7 개 아미노산으로 구성된 펩타이드이다. 또한, 펩타이드 B_intact, B_N-term, B_C-term1, B_Cen 및 B_C-term2는 163 개의 아미노산으로 이루어진 C12orf59 아형 2로부터 유래한 단편이고, B_N-term, B_C-term1, B_Cen 및 B_C-term2는 B_intact의 일부로서 15 또는 10 개의 아미노산으로 구성된다. 유사한 방법으로 제작함으로써, B_N-term은 B_intact의 N-말단 5 개 아미노산을 제거한 것이고, B_C-term1 및 B_C-term2는 각각 B_intact의 C-말단 5 개 및 10 개를 제거한 것이며, B_Cen는 가운데 부분의 10 개 아미노산으로 구성된 펩타이드이다.
C12orf59 유래 펩타이드 서열 정보
명칭 아미노산 서열 정보 아미노산 수 서열 번호
A_intact EENCGNPEHCLTTDWVH 17 1
B_intact SWRPQPCCISSCCLTTDWVH 20 2
A_N-term NPEHCLTTDWVH 12 3
A_C-term1 EENCGNPEHCLT 12 4
A_Cen NPEHCLT 7 5
A_C-term2 EENCGNP 7 6
B_N-term PCCISSCCLTTDWVH 15 7
B_C-term1 SWRPQPCCISSCCLT 15 8
B_Cen PCCISSCCLT 10 9
B_C-term2 SWRPQPCCIS 10 10
< 실시예 3> C12orf59 유래 펩타이드에 의한 대장암세포 침윤 감소 확인
<3-1> SW480sub 세포에서 C12orf59 유래 펩타이드 A 및 B의 침윤 억제 효과 확인
암세포주에서 C12orf59 유래 펩타이드의 과발현에 의한 세포 침윤 효과를 확인하기 위하여, 먼저 SW480로부터 분리한 실험관 내 침윤능이 높은 서브파퓰레이션인 SW480sub 세포에 상기 <실시예 2>에서 준비한 C12orf59 유래 펩타이드를 처리한 다음 침윤 분석(invasion assay)을 실시하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>에 따라 배양한 SW480sub 세포에 대하여 C12orf59 유래 펩타이드에 의한 침윤능을 알아보기 위하여, 먼저 24-웰 트렌스웰 플레이트(8 ㎛ pore size; Costar, 미국)의 다공성 막을 무혈청(serum free) 배지로 희석된 250 ㎍/㎖ 농도의 100 ㎕ 마트리젤(BD Biosciences, 미국)로 코팅하였고, 실온에서 1 시간 동안 방치하여 고형화시켰다. 트렌스웰 플레이트의 하층은 화학유인물(chemoattractant)로서 20 ㎍/㎖ 농도의 콜라겐 타입 I(Sigma) 100 ㎕를 이용하여 코팅하였다. 상기 무혈청 배지에서 재현탁(resuspension)한 1×104 개의 세포를 상층 챔버에 분주하였고, 비이클(DMSO), 펩타이드 A_intact(30 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖) 및 펩타이드 B_intact(30 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖)를 각각 추가하였고 37℃, 5% CO2 조건에서 48 시간 동안 배양하면서 상층 챔버에서 하층 챔버로 이동하도록 하였다. 전이되지 않은 세포는 상층 챔버의 표면에서 제거하였다. 하층 챔버로 전이한 세포는 PBS에 녹인 3.7% 파라포름알데하이드로 고정하였고, 2% 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하였다. 여분의 크리스탈 바이올렛 용액을 증류수로 세척한 다음, 현미경(Leica DM IL LED; Leica, Wetzlar, Germany)을 이용해 관찰하며 선택 면적(×100 배율)의 사진을 찍었고, 침윤하여 전이한 세포 수는 5개의 선택 면적에서 계수한 평균과 표준편차로 나타내었다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 펩타이드 A_intact 및 B_intact를 처리하면 침윤한 세포 수가 감소함을 확인하였고(도 1A), 각각 30 ㎍/㎖씩 처리한 경우보다 100 ㎍/㎖씩 처리한 경우에 침윤억제 비율이 각각 82% 및 90%로 농도 의존적으로 침윤이 감소됨을 확인하였다(도 1B).
<3-2> SW480sub 세포에서 C12orf59 유래 펩타이드의 침윤 억제능 확인
상기 실시예 <3-1>에서 확인한 결과, 세포 침윤에 억제 효과가 있는 펩타이드 A_intact 및 B_intact의 일부로 이루어지고 서열번호 3 내지 10으로 기재되는 총 8종의 세포 침윤 억제 효과를 추가적으로 확인하기 위하여, SW480sub 세포에 C12orf59 유래 펩타이드들을 처리하고 침윤 분석을 실시하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>에 따라 배양한 SW480sub 세포에 대하여 상기 <실시예 2>에서 준비한 C12orf59 유래 펩타이드 10종에 의한 침윤능을 알아보기 위해 상기 실시예 <3-1>에 기재된 방법에 따라 침윤 분석을 수행하였다. 이때 사용한 펩타이드 10종은 43 μM의 펩타이드 B_intact를 제외하고 모두 50 μM 농도로 세포에 처리하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 총 10종의 C12orf59 유래 펩타이드를 처리한 경우 현미경을 통해 세포 침윤이 감소함을 확인하였다(도 2A). 펩타이드 A_intact, A_N-term, A_C-term1, A_Cen 및 A_C-term2에 의해 대장암세포의 침윤이 비이클 대조군과 비교하여 순서대로 40%, 19%, 48%, 32% 및 46% 만큼씩 유의적으로 감소함을 확인하였다(도 2B의 왼쪽 그래프). 또한, 펩타이드 B_intact, B_N-term, B_C-term1, B_Cen 및 B_C-term2에 의해 대장암세포의 침윤율이 대조군과 비교하여 각각 29%, 17%, 73%, 33% 및 50%씩 침윤이 유의적으로 억제됨을 확인하였다(도 2B의 오른쪽 그래프).
< 실시예 4> SW480 세포에서 C12orf59 유래 펩타이드 10종의 침윤 억제 효과 확인
상기 실시예 <3-1> 및 <3-2>에서 확인한 결과, SW480sub 세포에서 세포 침윤 억제 활성이 있는 C12orf59 유래 펩타이드 10종에 대하여, 대장암세포주 SW480에서 세포 침윤 억제 효과를 추가적으로 확인하기 위하여, SW480 세포에 C12orf59 유래 펩타이드들을 처리하고 침윤능을 분석하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>에 따라 배양한 SW480 세포에 대하여 상기 <실시예 2>에서 준비한 C12orf59 유래 펩타이드 10종에 의한 침윤능을 알아보기 위해 상기 실시예 <3-2>와 동일한 방법에 따라 침윤 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 현미경을 통해 확인한 결과 총 10종의 C12orf59 유래 펩타이드들이 세포 침윤능을 감소시킴을 확인하였다(도 3A). 정량적으로, 펩타이드 A_N-term, A_C-term1, A_Cen 및 A_C-term2의 경우 세포 침윤이 각각 39%, 48%, 49% 및 38%씩 유의적으로 감소함을 확인하였다(도 3B의 왼쪽 그래프). 또한, 펩타이드 B_intact, B_N-term, B_C-term1, B_Cen 및 B_C-term2에 대해 세포 침윤율이 각각 47%, 55%, 45%, 16% 및 39%만큼 감소함을 확인하였다(도 3B의 오른쪽 그래프).
< 실시예 5> C12orf59 유래 펩타이드 A 및 B에 의한 대장암세포의 생존율 감소 확인
상기 <실시예 3> 및 <실시예 4>에서 SW480sub 및 SW480 대장암세포에서 침윤 억제 효능을 확인한 펩타이드 10종이 암세포 생존능에 영향을 미치는지 확인하기 위하여, 세포 미부착, 즉 앵커리지(anchorage) 비의존적 조건에서 암세포 생존율 분석을 실시하였다.
구체적으로, 우선 96-웰 플레이트를 코팅하기 위해 12 mg/㎖ 농도의 poly-HEMA(Sigma) 100 ㎕ 을 넣고 클린 벤치(clean bench)에서 1일 동안 방치해 두었다가 건조하고, 그 다음날 1회 더 반복시행하여 96-웰 플레이트 코팅을 하였다. Poly-HEMA가 코팅된 플레이트에 SW480sub 세포를 1×104 개로 희석하여 웰 당 100 ㎕씩 분주하고 펩타이드 A_intact 또는 B_intact를 30 ㎍/㎖ 또는 100 ㎍/㎖씩 혼합하였다. 이때, 무혈청 배지를 사용하였고, 배양 6일 후 각 웰에 CCK-8(Dojindo cat. CK04-13) 시약을 10 ㎕씩 넣고 3 시간 동안 인큐베이션(incubation)하여 발색을 유도하였다. 세포의 생존 비율을 확인하기 위하여, 비색법(colorimetric method)으로 OD450 nm 조건에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 현미경 사진을 통해 비이클 대조군과 비교하여 펩타이드 A 및 B를 각각 처리하였을 경우 모든 펩타이드 처리군에서 세포생존이 현저히 감소하였고(도 4A), 펩타이드 A 및 B(intact 형)를 처리한 후, 세포 생존비율이 각각 53% 및 85% 만큼 유의적으로 감소하는 것을 확인하였다(도 4B).
< 실시예 6> C12orf59 유래 펩타이드에 의한 대장암세포의 생존율 감소 확인
상기 <실시예 5>에서 SW480sub 대장암세포에서 암세포 생존율이 감소한 결과를 바탕으로, 이때 사용한 intact 형 펩타이드 A 및 B의 N-말단 및 C-말단이 제거되어 더욱 짧은 펩타이드에 대하여 세포 생존율 분석을 실시하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 5>와 동일한 방법으로 세포 생존 비율을 흡광도를 이용해 측정하였다. 단, 펩타이드 A_intact 또는 B_intact 대신 펩타이드 A_N_term, A_C_term1, B_N_term 또는 B_C_term1를 이용하였다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 상기 펩타이드 A_N_term, A_C_term1, B_N_term 또는 B_C_term1에 의한 대장암세포 생존억제효능을 분석한 결과, 펩타이드 A_C_term1를 100 ㎍/㎖처리한 경우 및 B_C_term1를 처리한 경우에 유의적으로 암세포 생존능이 억제됨을 확인하였다(도 5).
< 제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드 100
옥수수전분 100
유 당 100
스테아린산 마그네슘 2
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드 100
옥수수전분 100
유 당 100
스테아린산 마그네슘 2
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 주사제의 제조
본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드 10 /
묽은 염산 BP pH 7.6로 될 때까지
주이용 염화나트륨 BP 최대 1
적당한 용적의 주이용 염화나트륨 BP 중에 C12orf59 단백질을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 이용하여 pH 7.6로 조절하고, 주이용 염화나트륨 BP를 이용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.
<1-5> 환의 제조
본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드 1.0 g
유당 1.5 g
글리세린 1.0 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4.0 g이 되도록 제조하였다.
<1-6> 과립의 제조
본 발명의 C12orf59 유래 펩타이드 150
대두 추출물 50
포도당 200
전분 600
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100을 첨가하여 60에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
상기에서 보는 바와 같이, 본 발명의 서열번호 1 내지 10으로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 C12orf59 유래 펩타이드는 암세포의 침윤 및 생존능을 효과적으로 저해시키므로, 상기 C12orf59 유래 펩타이드는 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 유용하게 이용할 수 있을 뿐 아니라, 상기 펩타이드는 암의 진단 및 치료제 후보물질의 스크리닝을 위한 방법에 유용하게 이용될 수 있다.
<110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> Pharmacological composition containing C12orf59-derived peptides for the prevention and treatment of cancer <130> 13p-07-71 <160> 12 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A_intact <400> 1 Glu Glu Asn Cys Gly Asn Pro Glu His Cys Leu Thr Thr Asp Trp Val 1 5 10 15 His <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B_intact <400> 2 Ser Trp Arg Pro Gln Pro Cys Cys Ile Ser Ser Cys Cys Leu Thr Thr 1 5 10 15 Asp Trp Val His 20 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A_N-term <400> 3 Asn Pro Glu His Cys Leu Thr Thr Asp Trp Val His 1 5 10 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A_C-term1 <400> 4 Glu Glu Asn Cys Gly Asn Pro Glu His Cys Leu Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A_Cen <400> 5 Asn Pro Glu His Cys Leu Thr 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A_C-term2 <400> 6 Glu Glu Asn Cys Gly Asn Pro 1 5 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B_N-term <400> 7 Pro Cys Cys Ile Ser Ser Cys Cys Leu Thr Thr Asp Trp Val His 1 5 10 15 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B_C-term1 <400> 8 Ser Trp Arg Pro Gln Pro Cys Cys Ile Ser Ser Cys Cys Leu Thr 1 5 10 15 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B_Cen <400> 9 Pro Cys Cys Ile Ser Ser Cys Cys Leu Thr 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B_C-term2 <400> 10 Ser Trp Arg Pro Gln Pro Cys Cys Ile Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 183 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C12orf59 isoform 1 <400> 11 Met Gly Val Arg Val His Val Val Ala Ala Ser Ala Leu Leu Tyr Phe 1 5 10 15 Ile Leu Leu Ser Gly Thr Arg Cys Glu Glu Asn Cys Gly Asn Pro Glu 20 25 30 His Cys Leu Thr Thr Asp Trp Val His Leu Trp Tyr Ile Trp Leu Leu 35 40 45 Val Val Ile Gly Ala Leu Leu Leu Leu Cys Gly Leu Thr Ser Leu Cys 50 55 60 Phe Arg Cys Cys Cys Leu Ser Arg Gln Gln Asn Gly Glu Asp Gly Gly 65 70 75 80 Pro Pro Pro Cys Glu Val Thr Val Ile Ala Phe Asp His Asp Ser Thr 85 90 95 Leu Gln Ser Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser Val Phe Gly Pro Ala Ala 100 105 110 Arg Arg Ile Leu Ala Val Ala His Ser His Ser Ser Leu Gly Gln Leu 115 120 125 Pro Ser Ser Leu Asp Thr Leu Pro Gly Tyr Glu Glu Ala Leu His Met 130 135 140 Ser Arg Phe Thr Val Ala Met Cys Gly Gln Lys Ala Pro Asp Leu Pro 145 150 155 160 Pro Val Pro Glu Glu Lys Gln Leu Pro Pro Thr Glu Lys Glu Ser Thr 165 170 175 Arg Ile Val Asp Ser Trp Asn 180 <210> 12 <211> 163 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C12orf59 isoform 2 <400> 12 Met Ser Trp Arg Pro Gln Pro Cys Cys Ile Ser Ser Cys Cys Leu Thr 1 5 10 15 Thr Asp Trp Val His Leu Trp Tyr Ile Trp Leu Leu Val Val Ile Gly 20 25 30 Ala Leu Leu Leu Leu Cys Gly Leu Thr Ser Leu Cys Phe Arg Cys Cys 35 40 45 Cys Leu Ser Arg Gln Gln Asn Gly Glu Asp Gly Gly Pro Pro Pro Cys 50 55 60 Glu Val Thr Val Ile Ala Phe Asp His Asp Ser Thr Leu Gln Ser Thr 65 70 75 80 Ile Thr Ser Leu Gln Ser Val Phe Gly Pro Ala Ala Arg Arg Ile Leu 85 90 95 Ala Val Ala His Ser His Ser Ser Leu Gly Gln Leu Pro Ser Ser Leu 100 105 110 Asp Thr Leu Pro Gly Tyr Glu Glu Ala Leu His Met Ser Arg Phe Thr 115 120 125 Val Ala Met Cys Gly Gln Lys Ala Pro Asp Leu Pro Pro Val Pro Glu 130 135 140 Glu Lys Gln Leu Pro Pro Thr Glu Lys Glu Ser Thr Arg Ile Val Asp 145 150 155 160 Ser Trp Asn

Claims (10)

  1. 서열번호 3 내지 10 중 어느 하나로 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 C12orf59(chromosome 12 open reading frame 59) 단백질의 단편; 이를 암호화한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터; 또는 상기 벡터를 포함하는 세포를 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 삭제
  3. 제 1항에 있어서, 상기 암은 대장암, 위암 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 삭제
  5. 제 1항에 있어서, 상기 벡터는 선형 DNA, 플라스미드 DNA 또는 재조합 바이러스성 벡터인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 재조합 바이러스는 레트로 바이러스, 아데노 바이러스, 아데노 부속 바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스, 및 렌티바이러스로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 세포는 조혈 줄기세포, 수지상 세포, 자가이식 종양세포(autologous tumor cells) 및 정착 종양세포(established tumor cells)로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 서열번호 3 내지 10 중 어느 하나로 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 C12orf59 단백질의 단편을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  9. 1) 피검 화합물 또는 조성물을 서열번호 3 내지 10 중 어느 하나로 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 C12orf59 단백질의 단편 중 어느 하나 이상을 발현하는 분리된 세포주에 처리하는 단계;
    2) 단계 1)의 처리된 세포주에서 상기 C12orf59 단백질의 단편의 발현량을 측정하는 단계; 및
    3) 단계 2)의 C12orf59 단백질의 단편의 발현량이 피검 화합물 또는 조성물을 무처리한 대조군 세포주와 비교하여 증가된 피검 화합물 또는 조성물을 선별하는 단계를 포함하는 암 치료제 후보물질의 스크리닝 방법.
  10. 삭제
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