KR102148703B1 - 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물 - Google Patents

전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR102148703B1
KR102148703B1 KR1020190019872A KR20190019872A KR102148703B1 KR 102148703 B1 KR102148703 B1 KR 102148703B1 KR 1020190019872 A KR1020190019872 A KR 1020190019872A KR 20190019872 A KR20190019872 A KR 20190019872A KR 102148703 B1 KR102148703 B1 KR 102148703B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
peptide
cosmetic composition
extract
improving skin
present
Prior art date
Application number
KR1020190019872A
Other languages
English (en)
Inventor
이인아
서정길
이기영
최수철
Original Assignee
군산대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 군산대학교 산학협력단 filed Critical 군산대학교 산학협력단
Priority to KR1020190019872A priority Critical patent/KR102148703B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102148703B1 publication Critical patent/KR102148703B1/ko

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18Peptides; Protein hydrolysates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56Materials from animals other than mammals
    • A61K35/618Molluscs, e.g. fresh-water molluscs, oysters, clams, squids, octopus, cuttlefish, snails or slugs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08Peptides having 5 to 11 amino acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783Angiosperms [Magnoliophyta]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/987Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of species other than mammals or birds
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08Anti-ageing preparations
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00Function of food ingredients
    • A23V2200/30Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/48Thickener, Thickening system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A61K2800/782Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

본 발명은 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물에 관한 것이다. 구체적으로는, 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함함으로써 피부주름을 예방 또는 개선하는 효능이 있는 화장료 조성물, 피부 외용제 조성물, 건강기능식품 조성물, 식품 첨가제 및 약학 조성물에 대한 것이다.
본 발명에 따른 전복 유래 펩타이드는 크기가 작으므로 피부 침투율이 우수하고, 엘라스타아제 저해 활성 및 MMP-1 생성 억제 활성을 통해 주름을 개선하고 피부탄력을 증진하여 주름을 예방 또는 개선 효과가 뛰어나 기존의 항주름제를 대체할 수 있다. 상기 펩타이드는 주름 개선 및 항노화를 위한 화장료 조성물뿐만 아니라, 의약외품 조성물, 건강기능식품 조성물, 약학 조성물 등의 제품에도 활용될 수 있다.

Description

전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물{Composition for improving skin wrinkle comprising peptides derived From Haliotis Discus as effective component}
본 발명은 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물에 관한 것이다. 구체적으로는, 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함함으로써 피부주름을 예방 또는 개선하는 효능이 있는 화장료 조성물, 피부 외용제 조성물, 건강기능식품 조성물, 식품 첨가제 및 약학 조성물에 대한 것이다.
피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 기관들을 온도 및 습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항 상성 유지에 중요한 역할을 한다. 피부는 인체의 다른 장기와 마찬가지로 나이가 들어감에 따라 노화가 진행되고, 피부 탄력손실, 각질화, 주름 생성, 피부 위축 등의 변화가 수반된다.
피부 노화 현상의 원인은 크게 두 가지로 세포의 유전자 변이, 조직 변화 등 내적 요인과 자외선, 습도 등 외적 요인으로 분류될 수 있다. 특히 자외선에 의한 노화 현상을 광노화라고 한다. 자외선에 의해 세포 내부에 활성 산소 라디칼이 생성되고, 활성 산소는 염증성 반응을 일으키는 신호전달 체계를 통하여 진피층의 탄력 섬유인 콜라겐, 엘라스틴 등을 분해하는 단백질 분해 효소(MMP-1, MMP-3, MMP-9, etc.)의 합성을 촉진하며(Fisher G.J. etal., Nature, Vol. 379, 335~339), 진피층의 탄력을 감소시킴으로써 피부 주름이 유발한다.
특히, 인체의 중성구 과립구 내에 존재하는 엘라스타아제는 진피 내 피부탄력을 유지하는데 중요한 기질 단백질인 엘라스틴을 분해하며, 콜라겐 분해활성도 가지는 효소이다. 엘라스타아제가 적절하게 발현되고 활성화되면 상처회복 등에 관여하지만, 과다하게 발현되거나 활성화된 경우 피부 내의 엘라스틴을 분해하여 피부의 탄력을 잃게 된다. 따라서 엘라스타아제 저해제는 피부주름을 개선하는 작용을 나타내며, 우르솔산 등이 엘라스타아제 저해제로 이용되고 있다.
최근, 피부에 대한 소비자들의 관심도가 높아지면서 엘라스타아제 저해 활성 등 피부주름 개선 효능이 있으면서도 피부에 대하여 독성을 나타내지 않는 천연물 유래의 생리활성물질에 대한 다양한 연구가 이루어지고 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 본 발명자들에 의해 특허 등록된 전복 유래의 항균용 펩타이드(한국 특허등록공보 제10-1899552호 참조)가 엘라스타아제 저해 활성 및 MMP-1 생성 억제 활성 등의 피부주름 개선 효과를 나타낸다는 사실을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.
KR 10-1899552 B
본 발명의 해결하고자 하는 과제는 전복(Haliotis discus)으로부터 유래하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 상기한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 과제는 상기한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물 또는 식품 첨가제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 과제는 상기한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 펩타이드는 α-헬릭스(α-helix) 구조를 형성하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 펩타이드는 C-말단이 아미드화(amidation) 또는 메틸화(methylation) 된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 펩타이드는 N-말단이 아세틸화(acetylation) 또는 팔미토일화(palmitoylation) 된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 펩타이드는 조성물에 대해 1 내지 1,000 ppm의 농도로 포함될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 화장료 조성물은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장 연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 펩타이드는 엘라스타아제 저해 활성 및 MMP-1 생성 억제 활성을 통해 주름을 개선하고 피부탄력을 증진하는 효과를 가지는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 화장료 조성물은 상기 펩타이드 이외에 화장료 조성물 총 중량에 대하여 하기의 성분을 추가적으로 포함하는 것일 수 있다:
(a) 펩타이드 용해부 : 30 내지 99 중량%;
(b) 점증부 : 0.1 내지 20 중량%;
(c) 가용화부 : 0.1 내지 35 중량%;
(d) 생리 활성부 : 0.01 내지 35 중량%; 및
(e) 보습 성분부 : 0.1 내지 40 중량%.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 점증부는 소듐실리케이트(Sodium Silicate), 마그네슘알루미늄실리케이트(Magnesium AluminumSilicate),아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머(Acrylates/C10-30AlkylAcrylateCrosspolymer),암모늄아크릴로일디메칠타우레이트/브이피코폴리머(Ammonium Acryloyldimethyltaurate/VP Copolymer), 소듐마그네슘실리케이트(Sodium MagnesiumSilicate), 잔탄검(Xanthan Gum), 하이드록시프로필스타치포스페이트 (Hydroxypropyl Starch Phosphate), 폴리우레탄-2(Polyurethane-2), 폴리메칠메타크릴레이트 (Polymethyl Methacrylate) 및 PVP 폴리머 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 가용화부는 에탄올, 시트릭애씨드, 페녹시 에탄올, 에칠 헥실 글리세린, 모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄, 소르비탄세스퀴올레이트, 폴리솔베이트60, 방부제 및 향료 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 생리 활성부는 황금추출물, 황련추출물, 황백추출물, 황기추출물, 둥굴레추출물, 행인추출물, 차전초추출물, 시호추출물, 의이인추출물, 모로헤이야잎추출물, 적색산화철, 황색산화철, 아데노신, 카퍼트리펩타이드-1, r-알-거미폴리펩타이드-1, 하이드롤라이즈드콜라겐, 나이아신아마이드, 진주추출물, 금, 알에이치-올리고펩타이드-1, 하이알루로닉애씨드, 엘라스틴, 글리세린, 말로우추출물, 페퍼민트잎추출물, 유창목 오일, 알부틴, 비타민B3, 비타민B5, 비타민B9, 비타민C, 비타민H, 토코페닐아세테이크, 아세틸글루타민, 아세틸글루코사민, 마데카소사이드 및 카르노신 중에서 선택된 1종 이상을 함유할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 보습 성분부는 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 솔비톨, 헥실렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 디글리세린, 1,2-헥산디올, 판테놀, 베타인, 스쿠알란, 바셀린, 유동파라핀 및 하이드롤라이즈드 밀 글루텐 중 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 외용제는 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제의 제형일 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 식품 첨가제를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 예방 또는 개선용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 약학 조성물은 상기 유효성분을 조성물에 대해 1 내지 1,000 ppm의 농도로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 전복 유래 펩타이드는 크기가 작으므로 피부 침투율이 우수하고, 엘라스타아제 저해 활성 및 MMP-1 생성 억제 활성을 통해 주름을 개선하고 피부탄력을 증진하여 주름을 예방 또는 개선 효과가 뛰어나 기존의 항주름제를 대체할 수 있다. 상기 펩타이드는 주름 개선 및 항노화를 위한 화장료 조성물뿐만 아니라, 의약외품 조성물, 건강기능식품 조성물, 약학 조성물 등의 제품에도 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 펩타이드(Ab2-5, Ab4-3 및 Ab4-7)의 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 mRNA 발현 억제 효과를 나타내는 결과이다.
도 2는 LPS를 처리한 세포에 본 발명의 펩타이드(Ab2-5, Ab4-3 및 Ab4-7)를 처리한 후의 엘라스타아제 함량을 나타냄으로써 상기 펩타이드의 엘라스타아제 저해 활성을 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 상기 펩타이드는 전복(haliotis discus)의 아가미로부터 추출 및 정제한 펩타이드(hdMolluscidin)로부터 유래한 것이며, 이 hdMolluscidin는 항균력이 매우 우수한 펩타이드이다. 하지만, 상기 hdMolluscidin는 총 46개의 아미노산으로 이루어져 있기 때문에 상용화가 어렵다는 문제점이 있었다. 이에 본 발명자들은 상기 전복으로부터 유래한 펩타이드인 hdMolluscidin에서 유래한 것으로서 항균 활성이 우수하게 유지되면서 상용화가 가능한 항균 펩타이드를 개발하게 되었다(한국 특허등록공보 제10-1899552호 참조). 또한, 본 발명자들은 상기 항균 펩타이드 중에서 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드의 경우 항균 효과뿐만 아니라 피부주름 개선 효과가 우수하다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명에 따른 상기 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드는 알라닌(Alanine, A), 류신(Leucine, L) 및 트립토판(Tryptophan, W) 중에서 선택되는 1 내지 3개의 아미노산 잔기로 이루어진 소수성 그룹; 및 라이신(Lysine, K) 잔기 1개 또는 2개로 이루어진 친수성 그룹;을 포함하고, 3개 또는 4개의 상기 소수성 그룹과 2개 또는 3개의 상기 친수성 그룹이 각각 교대로 결합하여 이루어지며, 상기 라이신 잔기는 총 3개 또는 4개를 포함하고, 라이신 잔기 및 라이신 잔기의 사이, 또는 라이신 잔기의 전 또는 후에 LLW, LLL 및 WLL로 이루어진 군에서 선택되는 3개의 아미노산 잔기로 이루어진 소수성 그룹을 적어도 하나 포함하는 것일 수 있다.
또한, 상기 펩타이드는 α-헬릭스(α-helix) 구조를 형성하는 것일 수 있다. 상기 펩타이드가α-헬릭스(α-helix) 구조를 형성하는 경우에 친수성과 소수성을 동시에 가지는 양친매성(Amphiphilic)이 나타나게 된다. 그리하여 친수성을 띄는 부분에서는 결합력이 우수하게 되고, 소수성을 띄는 부위에서는 침투성이 우수하게 되므로 바람직하다.
또한, 상기 펩타이드는 8 내지 15개의 아미노산 잔기로 이루어진 것으로, 'KLLK'로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명에 따른 펩타이드는 C-말단에 아미노기(-NH2)가 부가되거나, 메틸기(methyl group, -CH3)가 부가되는 것이 바람직하다. 상기 펩타이드의 C-말단이 아미드화(amidation) 된 경우에는 프로테아제(protease)에 대한 저항성을 향상시키는 효과와 positive net-charge를 향상시키는 효과가 보다 증대될 수 있고, 메틸화(methylation)된 경우에는 펩타이드를 말단에서부터 분해하는 엑소펩티다아제에 대한 저항성을 부여하여 생체내 안정성을 증가시킬 수 있으므로 바람직하다.
그리고, 상기 펩타이드는 N-말단이 아세틸화(acetylation) 또는 팔미토일화(palmitoylation)된 것이 바람직하다. 상기 펩타이드의 N-말단이 아세틸화된 경우에는 그렇지 않은 경우보다 훨씬 우수한 피부주름 개선 활성 및 항균 활성을 나타낼 뿐만 아니라 단백질 분해로부터 펩타이드를 보호할 수 있게 되고, 팔미토일화된 경우에는 세포 내로의 투과성을 증가시킬 것이므로 바람직하다.
상기 펩타이드는 본 발명의 목적, 기능 및 안정성을 크게 저하시키지 않는 범위에서 다른 아미노산의 삽입, 치환, 삭제가 가능하며, 이 또한 본 발명의 범주에 속한다.
상기한 본 발명에 따른 펩타이드는 피부주름 개선 활성 및 항균 활성이 모두 우수하면서, 아미노산 서열이 짧아 상용화가 가능한 것이다.
또한 본 발명에 따른 펩타이드는 내막 투과성이 강하다. 상기 펩타이드는 양전하를 띠며 지질다당류(lipopolysaccharide)나 테이코산(teichoic acid)과 같은 세균 세포막의 음전하를 띠는 분자들과 정전기적인 결합을 한다. 이후, 상기 펩타이드가 지질 이중층(lipid bilayer) 속으로 끼어 들어가는데, 처음에는 지질 이중층에 대하여 평행 방향으로 부착해 있다가 점차적으로 지질에 대한 펩타이드의 비율이 높아짐에 따라 세포막에 대하여 수직 방향으로 자리를 잡게 되면서 세포막을 관통하는 구멍을 형성하게 된다. 즉, 본 발명에 따른 펩타이드는 세포의 내막을 직접적으로 투과함으로써 엘라스타아제 저해 활성 및 항균 활성을 나타내는 작용기작일 가능성이 높다. 또한 본 발명에 따른 펩타이드는 용혈활성을 보이지 않아 세포 독성의 문제가 없다.
본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 화장료 조성물로써 피부에 주름개선효능과 관련된 주름개선효능과 관련된 엘라스타아제 저해 활성 또는 MMP-1 생성 억제 활성을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다. 이러한 펩타이드의 농도는 조성물에 대하여 1 내지 1,000 ppm, 바람직하게는 2 내지 100 ppm, 더욱 바람직하게는 5 내지 30 ppm의 범위일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드는 효과적인 피부주름 개선 수준을 제공하기에 바람직한 임의의 함량으로 조성물에 존재할 수 있다. 일 양태에 따르면, 펩타이드는 0.001 내지 1 중량%, 바람직하게는 0.002 내지 0.1 중량%, 더욱 바람직하게는 0.005 내지 0.03 중량%로 포함될 수 있다. 상기 펩타이드의 함량이 상기 범위의 미만인 경우에는 상기 펩타이드에 의한 효과를 기대하기 어려우며, 상기 범위를 초과하는 경우에는 함량의 증가에 따른 효과의 증가가 미미할 뿐만 아니라, 피부에 대하여 독성이 있을 수 있으며, 제형의 안정성이 저하되는 문제가 있다. 즉, 본 발명의 펩타이드가 조성물 내에 상기 범위로 포함됨으로써, 우수한 피부주름 예방 또는 개선 효과를 구현할 수 있고 제형 및 제품 안정성을 가지며 경제성 면에서도 최적의 함량으로 우수한 효과를 발휘할 수 있다.
또한, 상기 펩타이드는 엘라스타아제 저해 활성 및 MMP-1 생성 억제 활성을 통해 주름을 개선하고 피부탄력을 증진하는 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 피부주름 개선용 화장료 조성물의 제형은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장 연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 피부주름 개선용 화장료 조성물은 상기 펩타이드 이외에 화장료 조성물 총 중량에 대하여 하기의 성분을 추가적으로 포함할 수 있다:
(a) 펩타이드 용해부 : 30 내지 99 중량%;
(b) 점증부 : 0.1 내지 20 중량%;
(c) 가용화부 : 0.1 내지 35 중량%;
(d) 생리 활성부 : 0.01 내지 35 중량%; 및
(e) 보습 성분부 : 0.1 내지 40 중량%.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 점증부는 소듐실리케이트(Sodium Silicate), 마그네슘알루미늄실리케이트(Magnesium AluminumSilicate),아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머(Acrylates/C10-30AlkylAcrylateCrosspolymer),암모늄아크릴로일디메칠타우레이트/브이피코폴리머(Ammonium Acryloyldimethyltaurate/VP Copolymer), 소듐마그네슘실리케이트(Sodium MagnesiumSilicate), 잔탄검(Xanthan Gum), 하이드록시프로필스타치포스페이트 (Hydroxypropyl Starch Phosphate), 폴리우레탄-2(Polyurethane-2), 폴리메칠메타크릴레이트 (Polymethyl Methacrylate) 및 PVP 폴리머 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 가용화부는 에탄올, 시트릭애씨드, 페녹시 에탄올, 에칠 헥실 글리세린, 모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄, 소르비탄세스퀴올레이트, 폴리솔베이트60, 방부제 및 향료 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 생리 활성부는 황금추출물, 황련추출물, 황백추출물, 황기추출물, 둥굴레추출물, 행인추출물, 차전초추출물, 시호추출물, 의이인추출물, 모로헤이야잎추출물, 적색산화철, 황색산화철, 아데노신, 카퍼트리펩타이드-1, r-알-거미폴리펩타이드-1, 하이드롤라이즈드콜라겐, 나이아신아마이드, 진주추출물, 금, 알에이치-올리고펩타이드-1, 하이알루로닉애씨드, 엘라스틴, 글리세린, 말로우추출물, 페퍼민트잎추출물, 유창목 오일, 알부틴, 비타민B3, 비타민B5, 비타민B9, 비타민C, 비타민H, 토코페닐아세테이크, 아세틸글루타민, 아세틸글루코사민, 마데카소사이드 및 카르노신 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 보습 성분부는 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 솔비톨, 헥실렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 디글리세린, 1,2-헥산디올, 판테놀, 베타인, 스쿠알란, 바셀린, 유동파라핀 및 하이드롤라이즈드 밀 글루텐 중 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 주름개선 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 외용제는 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제의 제형일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 피부 외용제 조성물은 항노화, 피부주름 개선 및 피부탄력 개선용 중에서 선택되는 1종 이상의 용도일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 피부외용제 조성물은 광노화, 보다 구체적으로 UV에 의한 피부 노화를 억제할 수 있다.
본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료의 형태로 제공될 수 있으며, 상기 건강식품 조성물은 상기 유효성분 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를 들어 예방, 개선 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 조성물에 대하여 1 내지 1,000 ppm, 바람직하게는 2 내지 100 ppm, 더욱 바람직하게는 5 내지 30 ppm의 농도로 포함될 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물에 함유된 상기 유효성분의 유효용량은 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류, 섭취자의 연령, 체중, 일반 건강상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로, 섭취 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 피부주름 예방, 개선 또는 치료적 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 상기 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 식품 첨가제를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 예방 또는 개선용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 펩타이드는 상술한 바와 같다.
본 발명의 약학 조성물을 통해 본 발명의 목적 및 원하는 효과를 달성하기에 약학적으로 유효한 농도로 상기 펩타이드를 제공할 수 있고, 이를 위하여 일례로 성인 체중 기준 대비 펩타이드를 0.001 내지 100 ㎎/kg, 바람직하게는 0.01 내지 10 ㎎/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 5 ㎎/kg의 투여량(또는 도포량)으로 하루에 한번 또는 수회 나누어 제공(투여 또는 도포)할 수도 있다.
본 발명의 약학 조성물에는 상술한 본 발명의 펩타이드가 본 발명의 목적 및 원하는 효과를 달성하기에 유효한 농도로 포함될 수 있고, 일례로, 조성물에 대하여 1 내지 1,000 ppm, 바람직하게는 2 내지 100 ppm, 더욱 바람직하게는 5 내지 30 ppm의 농도로 포함될 수 있다. 예시적인 일 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 약학적 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 1 중량%, 바람직하게는 0.002 내지 0.1 중량%, 더욱 바람직하게는 0.005 내지 0.03 중량%가 포함될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 약학 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 상기 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알긴산, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 정제수, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조산, 프로필히드록시벤조산, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등과 같이 통상적으로 이용되는 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 통상의 약학적 제제, 예를 들면 정제, 과립제, 캅셀제, 분말, 액상제제, 또는 시럽제; 또는 연고제, 경고제, 파스타제, 카타플라스마제, 크림제, 또는 유제 등으로 제제화할 수 있으며, 사용시에 다른 제형으로 변경하여 사용할 수도 있고, 이를 여러 경로로 투여할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 담체는 약제학적 분야에서 통상적인 것으로, 예를 들면 경구투여용 제제의 경우에는 결합제, 활택제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 안정화제 등이 있고, 국소투여용 제제의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등이 있다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하겠으나, 다음 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예>
<재료 및 방법>
피부주름 개선용 펩타이드 유사체의 디자인
hdMolluscidin의 유사체 디자인을 위해서 2차 구조예측 프로그램인 EMBOSS GUI의 Garnier 프로그램과 Expasy tools의 GOR프로그램을 사용하여 2차 구조를 예측하였다. 그 결과, 예측된 hdMolluscidin의 2차 구조를 바탕으로 N-말단 방향의 α-헬릭스(α-helix) 구조를 나타내는 2개의 단편을 선택하여 유사체 디자인에 활용하였다.
디자인된 각 유사체들은 각각 8개 내지 15개의 아미노산으로 구성되도록 하였고, C-말단의 아미드화(amidation) 또는 메틸화(methylation), N-말단의 아세틸화(acetylation) 또는 팔미토일화(palmitoylation), 또는 특정위치에서의 아미노산 첨가, 치환 및 제거 등의 방법을 활용하여 디자인되었다. 각 펩타이드 유사체를 하기 표 1에 나타내었다.
서열번호 Peptide Sequence 개수
서열번호 1 Ab2-5 LLWKLLKKL-NH2 9
서열번호 2 Ab4-3 KLLLKLLKLL-NH2 10
서열번호 3 Ab4-7 KWLLKLLKKL-NH2 10
피부주름 개선용 펩타이드 유사체의 합성 및 정제
디자인된 펩타이드 유사체는 펩트론(주)(대전)으로부터 순도 95 % 이상으로 합성 및 정제되어 공급되었다. 유사체들은 펩타이드 합성기 ASP48S(펩트론, 대전 한국)를 사용한 F-moc 고상합성법에 의해서 합성되었고, Shiseido Capcell-Pak C18 column(250 mm × 4.6 mm, 10 μm)을 이용한 RP-HPLC로 정제되었다. 정제 조건은 0.1%(v/v) trifluoroacetic acid를 포함하는 H2O-CH3CN의 용매시스템으로 3-40 %의 농도구배조건으로 220 nm에서 유속 1 mL/min으로 수행되었다. 정제된 펩타이드 유사체들의 분자량 측정은 liquid chromatography/mass spectrometry(LC/MS; HP1100 series; Agilent, Santa Clara, CA, USA)를 이용하여 수행되었다. 정제된 펩타이드 유사체들은 0.01 % 초산에 1000 ㎍/mL의 농도로 녹여져서 이후의 실험에 사용되었다.
UV-B in vitro 모델 실험
인간 섬유아세포(human fibroblast) 유래 detroit 551 세포를 대상으로 UV-B의 조사 강도 및 시간 조건을 조정함으로써 UV-B에 의한 자극은 주어지지만 극단적인 독성은 유발하지 않는 조건을 확립한 뒤 서열번호 1 내지 3의 전복 유래 펩타이드에 의한 보호 효과를 확인하고자 in vitro 모델을 구축하였다.
세포 배양
인간 섬유아세포(human fibroblast) 세포(한국세포주은행)는 Penicillin Streptomycin 100 unit/mL과 10% Fetal Bovine Serum이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 3일에 한 번씩 계대 배양을 시행하였다.
<실험예>
실험예 1: MMP-1 생성 억제 활성
1-1. 총 RNA 분리
먼저, Detroit 551 세포를 24-well plate에 1.0×105 cells/well의 농도로 접종한 후, 37℃, 5 CO2 환경에서 48시간 동안 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 phosphate buffered saline(PBS)으로 1회 세척한 다음 UV-B lamp를 이용하여 UV-B(20 mJ/cm2)를 1분간 조사하였다. 모든 UV-B 조사는 24-well plat에 부착된 세포에 PBS를 얇게 도포한 후 수행하였다. 본 발명의 서열번호 1 내지 3의 펩타이드를 distilled water로 희석한 후 각각의 펩타이드를 포함하는 시료의 최종 농도가 10 μg/mL이 되도록 하였다. 상기 펩타이드를 포함하는 시료들을 상기 UV-B 조사 후 FBS가 없는 배지에서 세포에 각각 처리한 후 24시간 동안 추가 배양하였다. 배양 종료 후 배지 상등액을 제거한 후 상기 실험군과 대조군으로부터 Trizol reagent(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 이용하여 세포를 lysis 한 후 총 RNA를 추출하였다. 총 RNA 추출 시료에 chloroform 200 μL를 분주하여 2분간 incubate 하였다. 그 후 4℃ 12,000 g에서 15분간 원심 분리하여 상층액을 isopropanol 500 μL이 들어 있는 tube에 옮겨 섞었다. 10분간 incubate 후 다시 4℃ 12,000 g에서 10분간 원심 분리하였고, 그 상층액을 제거 한 후 75% EtOH DEPC water를 각 tube에 1mL씩 분주하여 4℃ 7500 g에서 5분간 원심 분리한 뒤 상층액을 제거한 후 실온에서 건조 시켰다. Tube 바닥에 붙은 RNA pellet을 Diethyl pyrocarbonate (DEPC)를 20~40 μL씩 분주하여 잘 용해시킨 후 흡광도를 측정하여 total RNA양을 측정하였다.
1-2. RNA를 이용한 cDNA 합성
상기 추출한 RNA 1 μg을 대상으로 5x iScript Reaction Mix 및 iScript Reverse Transcriptase 역전사 효소(Bio-Rad, USA)를 사용하여 25℃에서 5분간 priming, 46℃에서 20분간 reverse transcription, 95℃에서 1분간 incubation 진행하여 cDNA를 합성하였다.
1-3. Reverse transcription-polymerase(RT-PCR)을 통한 mRNA발현 측정
MMP-1의 mRNA 발현을 알아보기 위하여 polymerase chain reaction (PCR)을 실시하였다. 실험에 사용한 primer sequences는 하기 표 2와 같다. PCR premix(Bioneer, KOREA)에 primer, 합성한 cDNA를 첨가하여 잘 섞은 후 PCR을 실행하였다. MMP-1은 94℃/30초, 56℃/60초 72℃/1분 (35 cycles)을 수행하였다. PCR band의 경우 NEOgreen(DNA staining reagent)이 첨가된 1% agarose gel을 75V에서 40분간 전기영동 후 Floor box를 이용하여 확인하였다. 증폭된 MMP-1 발현 수준은 GAPDH 발현 수준과 비교하여 표준화하였다.
본 발명에 따른 펩타이드에 의한 UV-B 차단 및 세포 보호 효과를 검증한 결과, UV-B만을 처리한 실험군의 경우 무처리군인 normal군에 비해 높은 MMP-1 발현 수준을 보인 반면 본 발명의 펩타이드(Ab2-5, Ab4-3, Ab4-7)를 처리한 실험군에서는 UV-B 처리 실험군에 비해 유의한 MMP-1 억제 효과를 나타내었다. 특히 Ab4-3 실험군에서 가장 높은 MMP-1 유전자 조절 효과를 나타내는 것으로 확인되었다(도 1). 도 1에서, GAPHD 레벨은 부하 변동에 대한 내부 표시로 사용되었다.
Target gene Sequence
MMP-1 forward 5`-AGC GTG TGA CAG TAA GCT AA-3`
reverse 5`-GTT TTC CTC AGA AAG AGC AGC AT-3`
GAPDH forward 5`-TGA AGG TCG GTG TGA ACG GAT TTC GC-3`
reverse 5`-CAT GTA GGC CAT GAG GTC CAC CAC-3`
실험예 2: 엘라스타아제 저해 활성
Human PMN Elastase Kit를 이용한 elastase 측정
Detroit 551 세포를 24-well plate에 1.0×105 cells/well의 농도로 접종한 후, 37℃, 5 CO2 환경에서 48시간 동안 배양하였다. 그 후 배지를 제거하고 phosphate buffered saline(PBS)으로 1회 세척한 다음 Detroit 551 세포에 LPS(1 μg/mL)을 처리하고 2시간 뒤, FBS가 없는 배지에서 본 발명에 따른 펩타이드(Ab2-5, Ab4-3, Ab4-7)를 희석하여 최종 농도가 10 μg/mL이 되도록 세포에 처리 후 18시간 동안 추가 배양 후 세포배양 상등액을 효소 결합 면역 흡착 분석법(ELISA)에 이용하였다.
본 발명에 따른 펩타이드(Ab2-5, Ab4-3, Ab4-7)의 엘라스타아제 저해 활성은 Abcam에서 human PMN ELISA kit를 구입하여 ELISA 제조자의 지시에 따라 수행 하였다.
먼저 항체가 코팅되어 있는 96 well plate에 1 x wash buffer 400 μL를 넣고 10~15초간 세척해준 후 바닥에 붙어있는 항체가 스크래치가 나지 않게 1 x wash buffer를 조심스럽게 제거해줬다. 이 과정을 4회 반복한다. 그리고 sample diluent reagent를 이용해 1 : 100으로 희석한 세포 배양 상등액을 항체가 코팅되어 있는 96 well plate에 처리한 후 plate의 cover를 닫고 room temperature(18℃ to 25℃)에서 1시간 동안 배양하였다. 1시간 배양하고 난 다음 96 well plate의 세포 배양 상등액을 제거하고 위의 방법과 같이 1 x wash buffer를 이용한 세척 작업을 4회 반복하였다. 96 well plate 세척 후 150 μL의 1 x HRP Conjugated Antibody를 well에 넣어 준 후 room temperature(18℃ to 25℃)에서 1시간동안 배양한다. 그리고 다시 한번 1 x wash buffer를 이용한 세척 작업을 4회 반복 진행하였다. 96 well plate 세척 후 200 μL의 TMB Substrate Solution을 well에 넣어 준 후 room temperature(18℃ to 25℃)에서 20분간 반응 시켜 색 변화를 확인한다. 20분 뒤에 stop solution을 넣고 반응을 종결 시킨 후 450nm에서 흡광도를 측정하고 Standard graph를 이용하여 흡광도에 따른 엘라스타아제 농도를 수치화시켰다(도 2).
도 2는 LPS를 처리한 세포에 펩타이드(Ab2-5, Ab4-3 및 Ab4-7)를 처리한 후의 엘라스타아제 함량을 나타냄으로써 본 발명에 따른 펩타이드의 엘라스타아제 저해 활성을 나타낸 그래프이다.
도 2를 살펴보면, 본 발명의 펩타이드를 처리한 실험군은 대조군(LPS 처리군)에 비해 엘라스타아제 농도가 적어도 40% 이상 저감되었으며, 특히 Ab4-7 실험군의 경우에는 대조군에 비해 엘라스타아제 농도가 약 80% 저감되는 것으로 나타나, 본 발명에 따른 펩타이드의 엘라스타아제 저해 활성이 우수한 것을 확인할 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 펩타이드의 엘라스타아제 저해 효능이 기존에 항노화 효능이 있는 것으로 널리 알려진 EGCG와 동일하거나 더욱 우수한 것을 확인할 수 있다.
<결과>
본 발명자들은 일차구조가 규명된 모체 항균 펩타이드로부터 길이의 단편화와 활성의 개선이 이루어진 주름개선용 펩타이드 유사체를 선발하기 위해서 참전복의 아가미로부터 정제된 항균 펩타이드인 hdMolluscidin을 토대로 펩타이드 유사체들을 디자인하고 고상합성법으로 합성하였다. 본 발명의 펩타이드 유사체들은 hdMolluscidin의 N-말단 방향에 위치하고 있는 부위를 parent region으로 선택하여 아미노산을 치환, 첨가, 제거하고, C-말단을 아미드화 또는 메틸화 및/또는 N-말단을 아세틸화 또는 팔미토일화시키는 방법으로 디자인되었으며, 50 ㎍/mL 이하의 농도에서는 인체에 대하여 독성이 거의 없는 것과 우수한 항균 활성이 있는 것이 입증되었다. 또한, 상기 펩타이드 유사체들의 주름개선 활성을 측정한 결과, 본 발명의 펩타이드 유사체들은 극소량만으로도 MMP-1(matrix metalloproteinase-1)의 mRNA 발현을 현저히 억제하였으며, 우수한 엘라스타아제 저해 활성을 나타내었다. 본 연구의 실험결과는 추가적인 연구가 수행되어야 하겠지만 기존의 항주름제를 대체할 수 있는 대체제로서 개발하기 위한 후보물질로서 활용 가능할 것으로 판단된다.
<제조예>
하기 본 발명의 펩타이드 유사체를 위한 제조예를 예시한다.
<제조예 1> 화장품의 제조
<2-1> 유연화장수(스킨)
본 발명의 펩타이드 유사체를 포함하는 주름개선용 유연화장수를 제조하기 위해 하기 [표 3]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 펩타이드 10 ppm
점증부 소듐실리케이트 2.0
잔탄검 1.0
가용화부 에탄올 8.0
생리활성부 비타민C 0.1
보습성분부 글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 3.0
펩타이드 용해부 베타인 5.0
정제수 To 100
<2-2> 영양화장수(로션)
본 발명의 펩타이드 유사체를 포함하는 주름개선용 영양화장수를 제조하기 위해 하기 [표 4]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 펩타이드 10 ppm
점증부 소듐실리케이트 2.0
잔탄검 1.0
가용화부 에탄올 8.0
모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄 2.0
생리활성부 비타민C 0.08
유창목 오일 0.1~30
보습성분부 글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 3.0
스쿠알란 10.0
펩타이드 용해부 베타인 5.0
정제수 To 100
<2-3> 영양크림
본 발명의 펩타이드 유사체를 포함하는 주름개선용 영양크림을 제조하기 위해 하기 [표 5]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 펩타이드 10 ppm
점증부 소듐실리케이트 2.0
잔탄검 0.5
가용화부 폴리솔베이트60 2.5
소르비탄세스퀴올레이트 1.5
생리활성부 비타민C 0.08
유창목 오일 0.1~30
토코페닐아세테이트 0.1
보습성분부 글리세린 4.0
유동파라핀 10.0
바셀린 7.0
스쿠알란 3.0
프로필렌글리콜 6.0
펩타이드 용해부 베타인 5.0
정제수 To 100
<제조예 2> 약학적 제제의 제조
<2-1> 산제의 제조
본 발명의 펩타이드 20mg
유당 20mg
상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<2-2> 정제의 제조
본 발명의 펩타이드 50mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<2-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 펩타이드 100mg
결정성 셀룰로오스 3mg
락토오스 14.8mg
스테아린산 마그네슘 0.2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<2-4> 액제의 제조
본 발명의 펩타이드 50mg
이성화당 10g
만니톨 5g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 후 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
<2-5> 주사제의 제조
본 발명의 펩타이드 10 ㎍/㎖
묽은 염산 BP pH7.6이 될 때까지
주이용 염화나트륨 BP 최대 1㎖
적당한 용적의 주이용 염화나트륨 BP중에 본 발명의 펩타이드를 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 이용하여 pH7.6으로 조절하고, 주이용 염화나트륨 BP를 이용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5㎖ 타입?? 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120℃에서 15분 이상 오토클레이브 살균하여 주사액제를 제조하였다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.
<110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION, KUNSAN NATIONAL UNIVERSITY <120> Composition for improving skin wrinkle comprising peptides derived From Haliotis Discus as effective component <130> HPC-8496 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide Ab 2-5 derived from Haliotis discus <400> 1 Leu Leu Trp Lys Leu Leu Lys Lys Leu 1 5 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide Ab 4-3 derived from Haliotis discus <400> 2 Lys Leu Leu Leu Lys Leu Leu Lys Leu Leu 1 5 10 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial peptide Ab 4-7 derived from Haliotis discus <400> 3 Lys Trp Leu Leu Lys Leu Leu Lys Lys Leu 1 5 10

Claims (19)

  1. 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 펩타이드는 전복(Haliotis discus)으로부터 유래한 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 펩타이드는 α-헬릭스(α-helix) 구조를 형성하는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 펩타이드는 C-말단이 아미드화(amidation) 또는 메틸화(methylation) 된 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 펩타이드는 N-말단이 아세틸화(acetylation) 또는 팔미토일화(palmitoylation) 된 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 유효성분은 조성물에 대해 1 내지 1,000 ppm의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장 연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 펩타이드는 엘라스타아제 저해 활성 및 MMP-1 생성 억제 활성을 통해 주름을 개선하고 피부탄력을 증진하는 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 상기 펩타이드 이외에 화장료 조성물 총 중량에 대하여 하기의 성분을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물:
    (a) 펩타이드 용해부 : 30 내지 99 중량%;
    (b) 점증부 : 0.1 내지 20 중량%;
    (c) 가용화부 : 0.1 내지 35 중량%;
    (d) 생리 활성부 : 0.01 내지 35 중량%; 및
    (e) 보습 성분부 : 0.1 내지 40 중량%.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 점증부는 소듐실리케이트(Sodium Silicate), 마그네슘알루미늄실리케이트(Magnesium AluminumSilicate),아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머(Acrylates/C10-30AlkylAcrylateCrosspolymer),암모늄아크릴로일디메칠타우레이트/브이피코폴리머(Ammonium Acryloyldimethyltaurate/VP Copolymer), 소듐마그네슘실리케이트(Sodium MagnesiumSilicate), 잔탄검(Xanthan Gum), 하이드록시프로필스타치포스페이트 (Hydroxypropyl Starch Phosphate), 폴리우레탄-2(Polyurethane-2), 폴리메칠메타크릴레이트 (Polymethyl Methacrylate) 및 PVP 폴리머 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 가용화부는 에탄올, 시트릭애씨드, 페녹시 에탄올, 에칠 헥실 글리세린, 모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄, 소르비탄세스퀴올레이트, 폴리솔베이트60, 방부제 및 향료 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  12. 제9항에 있어서,
    상기 생리 활성부는 황금추출물, 황련추출물, 황백추출물, 황기추출물, 둥굴레추출물, 행인추출물, 차전초추출물, 시호추출물, 의이인추출물, 모로헤이야잎추출물, 적색산화철, 황색산화철, 아데노신, 카퍼트리펩타이드-1, r-알-거미폴리펩타이드-1, 하이드롤라이즈드콜라겐, 나이아신아마이드, 진주추출물, 금, 알에이치-올리고펩타이드-1, 하이알루로닉애씨드, 엘라스틴, 글리세린, 말로우추출물, 페퍼민트잎추출물, 유창목 오일, 알부틴, 비타민B3, 비타민B5, 비타민B9, 비타민C, 비타민H, 토코페닐아세테이크, 아세틸글루타민, 아세틸글루코사민, 마데카소사이드 및 카르노신 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  13. 제9항에 있어서,
    상기 보습 성분부는 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 솔비톨, 헥실렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 디글리세린, 1,2-헥산디올, 판테놀, 베타인, 스쿠알란, 바셀린, 유동파라핀 및 하이드롤라이즈드 밀 글루텐 중 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 건강기능식품 조성물.
  17. 서열번호 1 내지 3 중에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 식품 첨가제.
  18. 삭제
  19. 삭제
KR1020190019872A 2019-02-20 2019-02-20 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물 KR102148703B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190019872A KR102148703B1 (ko) 2019-02-20 2019-02-20 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190019872A KR102148703B1 (ko) 2019-02-20 2019-02-20 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102148703B1 true KR102148703B1 (ko) 2020-08-31

Family

ID=72234178

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190019872A KR102148703B1 (ko) 2019-02-20 2019-02-20 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102148703B1 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109916917A (zh) * 2019-04-17 2019-06-21 湖北三环锻造有限公司 一种渗透探伤工艺
KR102376607B1 (ko) * 2021-04-27 2022-03-22 (주)대한뷰티산업진흥원 홍해삼 및 전복 유래 펩타이드, 그리고 인삼 추출물을 포함하는 피부 주름개선 및 보습용 이너뷰티 조성물
KR102533196B1 (ko) * 2022-05-04 2023-05-15 한도숙 주름개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 경피 흡수가 개선된 화장료 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100132245A (ko) * 2009-06-09 2010-12-17 (주) 메디플랜 전복 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물
KR20160058538A (ko) * 2014-11-17 2016-05-25 전라남도 전복을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법
KR20170040461A (ko) * 2015-10-05 2017-04-13 김병건 실리케이트와 폴리머 그리고 펩타이드를 응용해서 단시간에 피부 탄력을 증진시키고 피부 주름을 개선시키는 화장료 조성물 및 그 제조 방법
KR20180056226A (ko) * 2016-11-18 2018-05-28 군산대학교산학협력단 전복에서 유래한 항균 펩타이드 유사체 및 이를 포함하는 항균용 약학 조성물

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100132245A (ko) * 2009-06-09 2010-12-17 (주) 메디플랜 전복 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물
KR20160058538A (ko) * 2014-11-17 2016-05-25 전라남도 전복을 이용한 콜라겐 펩타이드의 제조방법
KR20170040461A (ko) * 2015-10-05 2017-04-13 김병건 실리케이트와 폴리머 그리고 펩타이드를 응용해서 단시간에 피부 탄력을 증진시키고 피부 주름을 개선시키는 화장료 조성물 및 그 제조 방법
KR20180056226A (ko) * 2016-11-18 2018-05-28 군산대학교산학협력단 전복에서 유래한 항균 펩타이드 유사체 및 이를 포함하는 항균용 약학 조성물
KR101899552B1 (ko) 2016-11-18 2018-09-17 군산대학교 산학협력단 전복에서 유래한 항균 펩타이드 유사체 및 이를 포함하는 항균용 약학 조성물

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109916917A (zh) * 2019-04-17 2019-06-21 湖北三环锻造有限公司 一种渗透探伤工艺
KR102376607B1 (ko) * 2021-04-27 2022-03-22 (주)대한뷰티산업진흥원 홍해삼 및 전복 유래 펩타이드, 그리고 인삼 추출물을 포함하는 피부 주름개선 및 보습용 이너뷰티 조성물
KR102533196B1 (ko) * 2022-05-04 2023-05-15 한도숙 주름개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 경피 흡수가 개선된 화장료 조성물

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102385070B1 (ko) 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 염증 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR102148703B1 (ko) 전복에서 유래한 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 조성물
KR101796479B1 (ko) 피부 염증 또는 노화를 개선하는 신규 자가포식작용 활성화 유도 화합물
KR102359692B1 (ko) 박대 껍질 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지 및 주름 개선용 조성물
KR100596316B1 (ko) 피부미용 증진 및 피부노화 방지를 위한 건강기능식품조성물
KR102160566B1 (ko) 미녹시딜과 펩타이드의 결합체
KR102037039B1 (ko) 플록쿨린을 포함하는 피부 미용을 위한 조성물
CN115867321A (zh) 具有抗肥胖活性的脱氧胆酸-肽缀合物及其用途
KR101329223B1 (ko) 생체내 이용효율이 증진되고 세포독성이 감소된 항균펩타이드 및 이를 함유하는 항균용 조성물
KR20210003999A (ko) Agkistrodon piscivorous piscivorous로부터 유래된 뱀독을 포함하는 류마티스 관절염의 예방 또는 치료용 조성물
KR101526435B1 (ko) 머루근 추출물을 포함하는 미백용 조성물
KR20140089848A (ko) 에피프리델라놀을 함유하는 피부주름 개선용 조성물
US20080171076A1 (en) Dermatological and/or Cosmetic Composition Containing Polypeptides
KR102691926B1 (ko) 탈모 방지 또는 발모 촉진 활성을 갖는 펩타이드와 이의 용도
KR102691927B1 (ko) 탈모 방지 또는 발모 촉진 활성을 갖는 펩타이드와 이의 용도
KR102499767B1 (ko) 종양으로의 약물 전달을 위한 뉴로필린 1에 특이적으로 결합하는 종양 조직 침투성 펩타이드 및 이의 용도
KR102718110B1 (ko) 탈모 방지 또는 발모 촉진 활성을 갖는 펩타이드와 이의 용도
KR102695761B1 (ko) 탈모 방지 또는 발모 촉진 활성을 갖는 펩타이드와 이의 용도
RU2773534C1 (ru) Пептид для профилактики повреждений кожи, вызванных атмосферными загрязнениями, и для омолаживающей терапии, а также его использование
KR20230099482A (ko) 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
KR20230099481A (ko) 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
KR20240086794A (ko) 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
WO2023131829A1 (en) A formulation for treatment of pigmentary disorders
KR20230047692A (ko) 탈모 방지 또는 발모 촉진 활성을 갖는 펩타이드와 이의 용도
KR20230099480A (ko) 피부 상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
GRNT Written decision to grant