CN112402626B - 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法 - Google Patents

一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112402626B
CN112402626B CN202011342798.XA CN202011342798A CN112402626B CN 112402626 B CN112402626 B CN 112402626B CN 202011342798 A CN202011342798 A CN 202011342798A CN 112402626 B CN112402626 B CN 112402626B
Authority
CN
China
Prior art keywords
irgd
camouflage
drug
delivery system
tumor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011342798.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN112402626A (zh
Inventor
黄景彬
张蓉
赖文静
王庆
唐勤
胡长鹏
李国兵
周敏
王凤玲
张倩
刘吴毅
谢丹丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Second Affiliated Hospital Army Medical University
Original Assignee
Second Affiliated Hospital Army Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Second Affiliated Hospital Army Medical University filed Critical Second Affiliated Hospital Army Medical University
Priority to CN202011342798.XA priority Critical patent/CN112402626B/zh
Publication of CN112402626A publication Critical patent/CN112402626A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112402626B publication Critical patent/CN112402626B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/14—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for lactation disorders, e.g. galactorrhoea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法，该系统包含内核载体和包裹于内核表面的生物伪装外壳，所述内核载体为包载药物的介孔硅，所述外壳为iRGD修饰的红细胞膜。该递药系统具有其他载体无法比拟的生物相容性，用其作为药物载体既可以提高靶向性、又能更好的避免免疫系统的清除，提高纳米制剂在体内的长循环效果，增强药物抗肿瘤效果。

Description

一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法。
背景技术
乳腺癌在女性所有癌症发病率中居于首位，且逐年递增和趋于年轻化。其中，三阴性乳腺癌(TNBC)恶性程度高、侵袭性强、转移早、易复发和预后差等特点，是目前乳腺癌治疗的重点和难点，由于TNBC缺乏雌激素受体，孕激素受体以及Her2受体等多种表面受体，临床尚无TNBC的靶向治疗药物，当前药物治疗的主要手段是化疗，但副作用极大，因此，实现其高效靶向治疗，对TNBC临床治疗具有重大意义。
肿瘤部位的增强阻滞渗透效应(permeation and petention effect,EPR)是肿瘤纳米靶向递药的基石，要实现肿瘤的高效靶向治疗，首先要最大限度地利用EPR效应，使纳米载药尽可能多的蓄积在病灶部位实现肿瘤组织靶向，然后通过主动靶向实现细胞特异性靶向。然而，由于TNBC缺乏多种表面受体，加之纳米粒的体内免疫消除，常规的纳米递药系统难以达到理想的靶向效果。
iRGD是一种环状的肿瘤穿透肽，由RGD模体和一个重叠的C-end R模体通过二硫键连接而成，其肿瘤特异性靶向和穿透能力要明显优于RGD肽。iRGD序列中的RGD模体介导iRGD与肿瘤血管内皮细胞特异性表达的αvβ3整合蛋白(正常血管内皮细胞中低表达)结合，进而介导载体跨肿瘤血管向肿瘤组织间隙穿透。当iRGD与其受体结合后，经酶体降解暴露出C-end R模体，进一步与肿瘤细胞表面高表达的Neuropilin-1(NRP 1)特异性结合，从而介导载体向肿瘤内部转运。近期文献报道，iRGD修饰的药物或递药系统可实现肿瘤的深部渗透，明显的增强肿瘤治疗效果。进一步文献调研发现，三阴性乳腺癌血管内皮高表达αvβ3整合蛋白，并且其肿瘤细胞表面高表达NRP 1受体。因此，在TNBC缺乏多种表面受体的情况下，iRGD有望成为TNBC细胞特异性靶向的有效配体。
无论是被动还是主动靶向递药系统，肝、脾等免疫器官蓄积了相当量的纳米粒。因此，纳米粒的免疫识别和消除是影响纳米粒实现肿瘤组织靶向的主要屏障。为克服纳米粒的免疫识别，其中一种策略是将亲水的聚合物修饰于纳米粒的表面，最常用的是聚乙二醇(PEG)。尽管PEG修饰可显著提高纳米粒的血液循环时间，且在一定程度上降低免疫系统对纳米粒的吞噬。但多次给药后PEG修饰的纳米粒也会激发免疫系统，造成后续给药的纳米粒被免疫系统识别并吞噬，尽管PEG修饰可能降低纳米粒与血浆内源性物质的非特异性结合，延长纳米粒的循环时间，但未能实现真正的免疫逃逸。近年来研究表明，红细胞膜包被纳米粒可实现生物伪装，且红细胞膜伪装的纳米粒能够有效降低体内巨噬细胞的吞噬及延长体内循环时间。因此，红细胞膜伪装的纳米粒可通过降低免疫消除和延长循环时间，提高纳米载体的肿瘤组织靶向性。
介孔硅纳米粒是惰性的多孔纳米材料，对机体无毒，孔容量大，可将药物分子吸附于孔洞中，孔径2nm、粒径150-180nm的介孔硅纳米粒，对不同药物的载药量均在8％以上，且具有可控的药物释放行为，载药能力高，能实现对药物的高载药量。
综上所述，本专利以介孔硅为载药内核、红细胞膜表面修饰的iRGD为仿生外壳，构建一种新型靶向治疗乳腺癌的纳米粒，该生物伪装靶向纳米递药系统可解决的问题：(1)采用iRGD作为靶头，提高了对乳腺癌细胞的靶向作用，使得更多的纳米粒能进入肿瘤细胞；(2)采用红细胞膜包裹的介孔硅作为药物载体，具有其他载体无法比拟的生物相容性、长循环能力以及降低免疫消除的能力，用其作为药物载体既可以提高靶向性、又能更好的避免免疫系统的清除，提高纳米制剂在体内的长循环效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法。该纳米递药系统通过生物相容性良好的红细胞膜包被载药介孔硅纳米粒，实现长效血液循环及避免免疫系统清除的纳米递药系统，再于红细胞膜上修饰iRGD，实现纳米系统对肿瘤的靶向作用，从而构建出具有高效靶向肿瘤如乳腺癌的仿生纳米粒，不仅能够显著提高治疗效果，且安全性良好。
本文所述的“生物伪装纳米递药系统”也可称为“生物伪装靶向载药纳米粒”，二者视为具有相同的含义。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
在一实施方案中，本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，包含内核载体和包裹于内核表面的生物伪装外壳，所述内核载体为包载药物的介孔硅，所述外壳为iRGD修饰的红细胞膜。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，所述介孔硅由十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、正硅酸乙酯(TEOS)和乙酸乙酯制备而成。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，所述肿瘤为乳腺癌，优选为三阴性乳腺癌。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，所述内核载体，药物包载于介孔硅的孔隙中。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，所述红细胞膜为通过健康的SD大鼠的全血，采用低渗溶血的方法提取得到。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，所述iRGD是由RGD模体和一个重叠的C-end R模体通过二硫键链接而成。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，进一步包括将iRGD与聚乙二醇(PEG)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)通过共价键链接。连接而成的化合物在本文中统一表示为DSPE-PEG-iRGD。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，所述药物为抗肿瘤细胞毒药物，优选的，选自阿素霉、柔红霉素、表阿霉素、吡喃阿霉素、阿克拉霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、卡铂和奥沙利铂。
上述本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，所述iRGD的氨基酸序列为
Figure BDA0002799009610000031
在一具体实施方案中，本发明的一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，包括药物、内核药物载体以及具有靶向功能的生物伪装外壳，所述的药物为细胞毒药物，内核载体为介孔硅，通过物理包埋方式将药物包载与介孔硅内部，形成载药内核，外壳为iRGD修饰过的红细胞膜，将iRGD修饰过的红细胞膜通过被动结合的方式包裹于载药介孔硅表面，形成具有靶向性的生物伪装纳米递药系统。
进一步地，介孔硅由十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、正硅酸乙酯(TEOS)和乙酸乙酯制备而成。
进一步地，红细胞膜为健康的SD大鼠通过心脏穿刺方法获得的全血，采用低渗溶血的方法提取得到红细胞膜。
进一步地，iRGD是由RGD模体和一个重叠的C-end R模体通过二硫键链接而成，其氨基酸序列为
Figure BDA0002799009610000041
再与聚乙二醇(PEG)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)通过共价键链接而成的化合物，记为DSPE-PEG-iRGD。
本发明的另一目的提供了一种上述本发明的生物伪装纳米递药系统的制备方法，包括：
A包载药物的介孔硅纳米粒的制备：
(1)将溴化十六烷基三甲铵与碱溶液混匀，加热搅拌，加入正硅酸乙酯和乙酸乙酯，反应完后，用滤膜过滤，获得的纳米粒用乙醇和纯化水交替清洗，加入乙醇/盐酸混合液中回流后得到介孔硅纳米粒；
(2)将介孔硅纳米粒与抗肿瘤细胞毒药物混合，搅拌，获得包载药物的介孔硅纳米粒；
B iRGD修饰的红细胞膜的制备：
(1)采用低渗溶血法提取红细胞膜，其过程包括：将取得的大鼠全血离心，弃上清，用PBS洗2-3次后，得下层沉淀红细胞，加入PBS还原成原体积，用PBS进行溶血，离心，弃上清，用PBS洗至上清透明后，重悬保存备用；
(2)将DSPE-PEG-NHS与iRGD肽在DMSO溶剂中室温避光搅拌，反应完置于MWCO＝3400Da透析袋中透析，去除溶剂及过量iRGD肽，得到DSPE-PEG-iRGD；
(3)将DSPE-PEG-iRGD与红细胞膜融合，获得iRGD修饰的红细胞膜；
C将上述A得到的包载药物的介孔硅纳米粒与B获得的iRGD修饰的红细胞膜混和均匀，来回通过含400nm微孔滤膜的脂质体挤出器即得生物伪装纳米递药系统。
上述本发明的制备方法，过程A(1)中，溴化十六烷基三甲铵与正硅酸乙酯的重量比为1：5-6，所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾；或过程B(2)中，DSPE-PEG-NHS与iRGD肽的摩尔比为1：1-3，优选为1:1.5。
上述本发明的制备方法，过程C中，100μl-200μl的红细胞膜对应全血的体积与介孔硅纳的体积质量比为100μl-200μl：1mg，优选为100：1(μl/mg)。
在一具体实施方案中，本发明提供了一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统的制备方法，包括以下步骤：
载药内核的制备：
(1)将CTAB(溴化十六烷基三甲铵)与碱溶液混匀后，磁力搅拌加热后加入TEOS(正硅酸乙酯)和乙酸乙酯，加热搅拌后，通过滤膜去除粒径较大的纳米粒，用乙醇和纯化水交替清洗后，将得到的纳米粒在乙醇/盐酸(V/V＝9:1)中回流后得到粒径及孔径均一的介孔硅纳米粒。
(2)在上述介孔硅纳米粒中包载抗肿瘤药物，将抗肿瘤药物与介孔硅纳米粒充分搅拌，获得包载抗肿瘤药物的介孔硅纳米粒，为生物伪装载药体系的内核。
生物伪装外壳的制备：
(1)所述低渗溶血法提取红细胞膜的步骤如下：将取得的大鼠全血4000rpm离心5min，弃上清，用1X PBS洗3次后，保留下层沉淀(红细胞)，加入1X PBS还原成原体积，用0.25x PBS进行溶血，涡旋30秒后放入4℃溶血20min，8g离心5min，弃上清，用0.25X PBS洗至上清透明后，重悬保存于4℃备用。
(2)进一步地，合成DSPE-PEG-iRGD，DSPE-PEG-NHS与iRGD肽在DMSO溶剂中室温避光搅拌，其后置于MWCO＝3400Da透析袋中透析，去除有机溶剂及过量iRGD肽。
(3)进一步地，利用DSPE的疏水键与红细胞膜的脂质双分子的融合，将DSPE-PEG-iRGD与红细胞膜融合，获得iRGD修饰后的红细胞膜，为生物伪装的外壳。
最后，将上述得到的iRGD修饰后的红细胞膜与载抗肿瘤药物的介孔硅混匀后，来回通过含400nm微孔滤膜的脂质体挤出器即得生物伪装靶向载药纳米粒(iRGD-RM-(DOX/MSN))。
上述本发明的制备方法，所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾，溴化十六烷基三甲铵与正硅酸乙酯的重量比为1：5-6，所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾；或过程B(2)中，DSPE-PEG-NHS与iRGD肽的比为1：1-3,优选为1:1.5。过程C中，100μl-200μl的红细胞膜对应全血的体积与介孔硅纳的体积质量比为100μl-200μl：1mg。
本发明的方法，所述抗肿瘤药物为抗肿瘤细胞毒药物，优选的，选自阿素霉、柔红霉素、表阿霉素、吡喃阿霉素、阿克拉霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、卡铂和奥沙利铂。优选为阿霉素。
本发明的技术效果：
(1)介孔硅能够将抗肿瘤药物如阿霉素等高效包载其中，此外，通过共挤出技术，实现iRGD修饰后的红细胞膜包被在介孔硅表面(iRGD-RM-DOX/MSN)，具有典型的“核-壳”结构，且粒径均一、具有良好的分散性。
(2)本发明的递药系统没有溶血作用，可用于静脉注射，连续给药体内后无明显的系统毒性。
(3)本发明将红细胞膜与iRGD融合，不仅避免了体内免疫细胞的吞噬，进而更多到达靶部位，同时iRGD靶头与乳腺癌血管内皮αvβ3整合蛋白以及肿瘤细胞表面NRP 1受体结合，进入肿瘤细胞内部，纳米粒进入肿瘤细胞后进行释放药物，从而实现纳米递药系统对乳腺癌治疗的高效靶向。
附图说明
图1为本发明的生物伪装纳米递药系统(iRGD-RM-(DOX/MSN))构建的示意图，其中，A图为介孔硅纳米粒(MSN)的合成以及载阿霉素介孔硅(DOX/MSN)的合成，B图为红细胞膜的提取、DSPE-PEG-iRGD的合成以及将iRGD插入红细胞膜融合为iRGD修饰后的红细胞膜(iRGD-RM)的合成，C图为将iRGD-RM包裹于DOX/MSN外表的示意图。
图2为介孔硅纳米粒的表征，其中，A图、B图分别为介孔硅纳米粒粒径及电位，C图、D图为介孔硅纳米粒孔径，E图、F图为透射电镜图。
图3为红细胞膜包被介孔硅纳米粒的表征，其中，A图、B图分别为红细胞膜及iRGD修饰后的红细胞膜在超声波降解、过400nm和200nm膜后的粒径及电位，C图、D图分别为不同比例的介孔硅与红细胞膜挤出后的粒径及电位，E图、F图为红细胞膜包被介孔硅纳米粒的透射电镜图。
图4为载药后生物伪装纳米系统的表征，其中，A图、B图分别为载阿霉素后粒径及电位，C图为纳米粒及载阿霉素后纳米粒的形态，D图为在不同PH条件下，载阿霉素纳米系统的药物释放。
图5为MSN、RM-MSN、iRGD-RM-MSN的溶血情况。
图6为生物伪装载药纳米系统对机体血常规和机体炎症水平的影响。
图7为RAW264.7细胞对生物伪装载药纳米粒的摄取情况，其中，A图为激光共聚焦，B图、C图为流式检测其摄取情况。
图8为MDA-MB-231细胞对生物伪装载药纳米粒的摄取情况，其中，A图为激光共聚焦，B图、C图为流式检测其摄取情况。
图9为生物伪装载药纳米粒对MDA-MB-231细胞的细胞毒性及凋亡作用，A为非载药纳米系统对MDA-MB-231细胞的细胞毒性，B图为载药纳米系统对MDA-MB-231细胞的细胞毒性，C图为载药纳米系统对MDA-MB-231细胞的凋亡作用。
图10为生物伪装纳米系统对乳腺癌小鼠的治疗效果，其中，A图为生物伪装纳米系统治疗乳腺癌后肿瘤体积大小，B图为治疗后肿瘤图，C图为肿瘤重量，D图为肿瘤抑制率，E图为治疗中体重变化情况。
具体实施方式
以下实施例用于进一步理解和说明本发明的精神实质，但不以任何形式限制本发明的范围。
本发明的生物伪装纳米递药系统的制备方法的工艺示意图见图1的A图、B图、C图。任何在本发明的精神实质的范围内进行简单的修饰或变通都属于本发明的范围。
实施例1：介孔硅纳米粒及载药介孔硅纳米粒的构建及表征
1.介孔硅纳米粒(MSN)的合成：精密称取十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)0.1g于250ml圆底烧瓶中，加入0.35ml 2M的NaOH(精密称取NaOH 1.2g，溶解入15ml的纯化水中，超声5min充分溶解，混匀待用)，再加入50ml的纯化水，超声混匀，放入磁力加热搅拌器中，加热至80℃后保持10-15min，使圆底烧瓶内溶液的温度也趋近80℃，其后，加入0.55ml正硅酸乙酯(0.93g/cm3)，待溶液开始变白加入0.5ml的乙酸乙酯，80℃搅拌2h，得到的纳米粒先在5000rpm/min离心5min去除粒径较大的纳米粒，收集上清。上清过0.45um的滤膜，收集滤液，8000rpm离心30min，得到的沉淀在乙醇和纯化水中交替清洗3遍，其后，将得到的纳米粒在乙醇/盐酸溶液(V/V＝9:1)中回流12小时(80℃)分装于2ml离心管中，13000rpm离心10min，再反复用乙醇和水交替洗3遍(调节PH至7)，冻干备用。
2.载药介孔硅纳米粒(DOX/MSN)的构建：精密称取100mg MSN纳米粒，再精密称取盐酸阿霉素(DOX)10.0mg加入至平底瓶中，加入纯化水2ml，超声20min，使纳米粒充分分散，室温避光搅拌24h，其后，纳米粒在13000rpm/min离心5min。采用纯化水清洗至上清无色，收集沉淀，冻干后则为DOX/MSN纳米粒。收集上清液，于50ml的容量瓶定容，HPLC测上清DOX浓度，计算载药量。
3.HPLC测DOX/MSN载药量，HPLC色谱条件如下：
实验仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪
色谱柱：Phenomenex Luna C18(2)，5μm，250×4.6mm
流动相条件：MeOH:0.15％H3PO4＝52:48,等度洗脱，Flow＝1.0ml/mim，进样量10μL，柱温T＝40℃，波长λ＝233nm。
线性浓度范围：精确称量标准品阿霉素5.00mg于5mL容量瓶中，用50％MeOH溶解并定容(即浓度为1.000mg/mL)，取200μL标准品液用50％MeOH稀释成浓度200μg/mL，再逐级稀释即线性浓度范围为：2.5μg/mL～200μg/mL。得到阿霉素的标准曲线y＝35.495x-21.981(R2＝0.9998)
4.MSN的表征
(1)粒径及电位测定：将制备好的MSN纳米粒用马尔文粒径仪测量其粒径和Zeta电位，测得MSN的粒径为138.6±2.8nm，PDI＝0.083，Zeta电位为-24.6±1.4mV(见图2的A图、B图)。
(2)孔径的测量：通过氮气等温吸附实验，测得MSN的孔径为3.9nm(见图2的C、D。
(3)透射电镜表征：通过透射电镜可清晰的看出MSN形态圆整，大小均一，分布均匀，见图2的E和F。
实施例2：红细胞膜的提取及iRGD修饰后的红细胞膜(RM)的制备
1.红细胞膜的提取：通过心脏穿刺法获得大鼠全血，转移至15mlEP，4000rpm离心5min，弃上清，加入1X PBS洗3次，保留下层细胞，加入1X PBS还原至原体积，然后分装到1.5mlEP管中，每管0.1ml，加入0.3ml纯水，再加入1ml 0.25X PBS，涡旋30s，置于4℃放置20min溶血。8g离心5min，弃上清，用0.25X PBS洗至上清无色，用0.25X PBS 0.5ml保存至4℃。
2.iRGD修饰的红细胞膜(iRGD-RM)的制备及条件优化
(1)DSPE-PEG-iRGD的合成：精密称取50mg DSPE-PEG-NHS和20.4mg iRGD肽，加入25ml圆底烧瓶中，加入10ml DMSO、5-10μl三乙胺，超声5min。室温避光搅拌过夜，最后在去离子水中透析(MWCO＝3400Da)24小时出去有机溶剂及过量iRGD。
(2)将上述提取得到的红细胞膜(源于100ul全血)重悬到200ul的浓度为50ug/ml的DSPE-PEG-iRGD的0.25X PBS溶液中，枪头轻轻吹打混悬均匀，置于振荡器中振摇30min(37℃，100rpm/min)。取出样品，离心(800g，5min)除去上清，加入0.5ml的0.25x PBS重悬，再次离心(800g，5min)，将得到的红细胞重悬于0.5ml的0.25xPBS，即得到iRGD-RM。
(3)RM及iRGD-RM的粒径大小优化：上述获得的RM及iRGD-RM其粒径均在3500nm±500nm，Zeta电位在-25mV左右。为了使RM及iRGD-RM更充分地包裹于MSN纳米粒外，应减小RM及iRGD-RM的粒径大小。设计了如下几个条件进行优化：①超声5min，频率53Hz，功率100w；②通过脂质体挤出器过400nm的微孔滤膜；③通过脂质体挤出器过200nm的微孔滤膜。分别获得RM及iRGD-RM粒径在1200nm、400nm、200nm左右，DSPE-PEG-iRGD掺入到红细胞膜后，并不影响红细胞膜的粒径及Zeta电位(见图3A、3B)。由于MSN粒径在140nm左右，最终获得的RM及iRGD-RM选择条件②脂质体挤出器过400nm微孔滤膜。
实施例3：生物伪装纳米递药系统的制备及表征
1、生物伪装纳米递药系统的制备及纳米粒表征
为了考察多少体积的全血细胞膜才能将1mg的MSN全部包被，考察了不同体积全血红细胞膜与MSN质量比制备的RM-MSN粒径和Zeta电位情况，结果见图3的C和D。由此得知：100μl-200μl的全血红细胞膜可将1mg的MSN全部包载(。在实际操作中，考虑到过量红细胞膜囊的清除问题，采用100μl的全血红细胞膜包载1mg的MSN。
按上述，将获得的DOX/MSN及RM或iRGD-RM按照100μl的全血红细胞膜包载1mg MSN的比例，混匀后，来回通过脂质体基础器，运用400nm的微孔滤膜，则可获得生物伪装靶向载药纳米粒RM-DOX/MSN及iRGD-RM-(DOX/MSN)，即本发明的生物伪装纳米递药系统。
2、生物伪装靶向载药纳米粒MSN包被情况考察
透射电镜：通过透射电镜可以明显的观察到红细胞膜成功包被于介孔硅表面，形成核-壳结构，外层红细胞膜的厚度约为8-10nm。红细胞膜包被介孔硅纳米粒的透射电镜图见图3的E图、F图。图3所示结果表明：成功将红细胞膜及IRGD修饰后的红细胞膜包被在介孔硅表面。
3、载药阿霉素后生物伪装纳米系统的表征
用马尔文粒径仪分别测量MSN、DOX/MSN、RM-(DOX/MSN)、iRGD-RM-(DOX/MSN)载阿霉素纳米粒的粒径及电位，结果见图4的A及B；MSN、DOX/MSN、RM-(DOX/MSN)、iRGD-RM-(DOX/MSN)载阿霉素(DOX)纳米粒的外观形态，结果见图4的C(分别对应a/b/c/d)。图4的A、B、C的结果表明成功构建IRGD-RM-(DOX/MSN),粒径为153.6±6.8nm，Zeta电位为-25.2±0.9mV。
药物阿霉素的释放：考察DOX/MSN、RM-(DOX/MSN)、iRGD-RM-(DOX/MSN)在PH＝7.4和5.0下的药物释放情况，释放条件为37℃，100rpm，于不同的时间点取出液体后通过HPLC测量其阿霉素的释放情况，结果显示：所有纳米成分在pH 5.0下的释放速率均较pH 7.4要快，这可能是阿霉素本身的性质决定的，RM-(DOX/MSN)、iRGD-RM-(DOX/MSN)的药物释放速度较DOX/MSN更慢，说明红细胞的包被在一定程度上防止了药物的渗漏，RM-(DOX/MSN)和iRGD-RM-(DOX/MSN)的药物释放行为相似，释放速度基本无差异，说明iRGD插入也不影响药物的释放，结果见图4的D。
实施例4：生物伪装靶向载药纳米粒的体内外安全性考察
(1)生物伪装靶向纳米系统的溶血性：将红细胞(获得方法同前)用PBS稀释至1/10浓度，即0.5ml全血的红细胞用1x PBS稀释至5ml，取0.3ml于1.5ml离心管中，离心除去上清液待用。样品的分组如下：
Figure BDA0002799009610000101
阳性对照为去离子水，阴性对照为1x PBS
上述纳米粒的配制用1x PBS，总1x PBS的体积为1ml，按顺序依次加入准备好的红细胞中，用枪头轻轻吹打混匀。混合均匀后，100rpm振摇3h，然后将溶液于5000g离心5min，取各自的上清100ul于96孔板中，541nm处测吸光度值。
定量表征溶血计算公式如下：Hemolysis％＝[(Ae-Ac)/(Ap-Ac)]％(Ae：实验组；Ap:阳性对照组；Ac：阴性对照组)
结果显示红细胞膜的包被的MSN纳米粒可以明显降低MSN的溶血性，且iRGD的插入不影响纳米粒的溶血性(见图5中的A、B、C)。
(2)生物伪装靶向纳米粒的体外细胞毒性：将MDA-MB-231细胞铺于96孔板，MSN、RM-MSN、iRGD-RM-MSN给予48小时后，MTT测细胞毒性，在120ug/ml的范围内三种纳米粒对MDA-MB-231细胞基本无毒(图9A)。
(3)生物伪装靶向载药纳米粒的体内急性毒性实验(对血常规和炎症水平的影响)：将DOX/MSN、RM-(DOX/MSN)和iRGD-RM-(DOX/MSN)按照DOX 10mg/kg通过尾静脉注射正常小鼠，12h和24h后，取外周血检测血常规及ELISA检测炎症因子的表达情况，从而反映生物伪装靶向载药纳米粒的体内急性毒性情况，结果显示：生物伪装后的靶向载药纳米粒对红细胞数目(RBC)、白细胞数目(WBC)、血红蛋白浓度(HGB)、平均血小板体积(MPV)和平均红细胞体积(MCV)无明显变化(见图6中的A、B、C、D、E、F)，说明红细胞膜包载载药纳米粒或iRGD修饰后的红细胞膜包载载药纳米粒尾静脉注射后均对小鼠血常规无影响。另外炎症相关因子IL-1β、IL-6、TNF-α，DOX/MSN组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达升高，而RM-(DOX/MSN)及iRGD-RM(DOX/MSN)组均可以降低介孔硅载药纳米粒导致的机体炎症因子表达的升高，使机体炎症水平不受生物伪装靶向载药纳米粒的影响(见图6中的G、H、I)。
图6所示结果表明红细胞膜包载载药纳米粒或iRGD修饰后的红细胞膜包载载药纳米粒均对小鼠血常规无影响，且RM-(DOX/MSN)及iRGD-RM(DOX/MSN)组机体炎症因子的表达未见升高，说明膜包被后的纳米粒具有更好的生物相容性。
实施例5：生物伪装靶向载药纳米粒的生物伪装效果评价
(1)激光共聚焦定性考察小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)对生物伪装靶向载药纳米粒的摄取情况，操作如下：将RAW264.7细胞铺24孔板，每孔2x104个/ml，用爬片铺孔，每孔2ml。铺板过夜后，DOX按10μg/ml加药，孵育30min和1h，其后弃去液体，加免疫染色固定液400ul固定15min(注意避光)；PBS漂洗3次，5min每次；加入0.1％triton x-100 200ul 5min打孔，以增加细胞通透性；PBS漂洗3次，5min/次；对actin骨架蛋白进行染色。Actin用PBS稀释，稀释的比例为1:40，按照200ul/孔加入孔中，室温孵育30min。PBS漂洗3次，5min/次；接着DAPI染色工作液200ul/孔，室温孵育5min，PBS漂洗3次，5min/次；最后将爬片取出，用抗荧光猝灭剂封片，上机拍照观察。结果如图7中的A所示，RAW264.7细胞对生物伪装载药纳米粒的摄取情况。
(2)流式细胞术定量考察小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)对生物伪装靶向载药纳米粒的摄取情况，操作如下：RAW264.7细胞铺板于六孔板，每孔1x106个，每孔2ml培养液，过夜使细胞贴壁，DOX按10μg/ml加药，孵育30min和1h后弃上清，收集细胞于1.5mlEP管中，用1xPBS洗两遍后上机检测。结果如图7中的B、C所示。
图7所示的结果表明：红细胞膜包被后的纳米粒可降低巨噬细胞的摄取，说明体外具有一定的免疫逃逸的作用。
实施例6：生物伪装靶向载药纳米粒的体外靶向性效果及体外抗瘤效果评价
(1)激光共聚焦定性考察生物伪装靶向纳米粒对乳腺癌细胞(MDA-MB-231细胞)的靶向效果，具体操作同前，DOX按10μg/ml加药。MDA-MB-231细胞对生物伪装载药纳米粒的摄取情况，激光共聚焦定性考察结果如图8中的A所示。
图8A所示的结果表明：iRGD修饰后的红细胞膜对MDA-MB-231细胞具有靶向作用。
(2)流式细胞技术定量考察伪装靶向纳米粒对乳腺癌细胞(MDA-MB-231细胞)的靶向效果，具体操作同前，DOX按10μg/ml加药。流式检测其摄取结果如图8中的B、C所示。
图8B、C所示的结果表明：iRGD-RM-(DOX/MSN)在MDA-MB-231细胞中的摄取量增加且加入游离iRGD后，说明iRGD-RM-(DOX/MSN)可通过具有肿瘤细胞靶向的能力。
(3)MTT实验考察体外抗肿瘤活性，具体操作：将MDA-MB-231细胞铺于96孔板，分组：control(为MSN)、DOX、DOX/MSN、RM-DOX/MSN、iRGD-RM-(DOX/MSN)、iRGD+iRGD-RM-(DOX/MSN)，其中DOX的含量分别为7.8125ng/ml、15.625ng/ml、31.25ng/ml、62.5ng/ml、125ng/ml、250ng/ml、500ng/ml、1ug/ml、2ug/ml，孵育48h后，加入MTT(5mg/ml)20ul，孵育4h后弃去上清，加入DMSO 150ul，100rpm振摇15min，酶标仪570nm测吸光度值。结果如图9B所示。
(4)细胞凋亡实验检测生物伪装靶向纳米粒对MDA-MB-231细胞的体外抗肿瘤效果，具体操作：将MDA-MB-231细胞按1x 105个/孔，铺板过夜使其贴壁，DOX按10μg/ml给药，给药48h后收集上清及细胞，用凋亡染色试剂盒进行凋亡染色，染色完毕后上流式细胞仪进行检测。
图9为生物伪装载药纳米粒对MDA-MB-231细胞的细胞毒性及凋亡作用，A为非载药纳米系统对MDA-MB-231细胞的细胞毒性，B图为载药纳米系统对MDA-MB-231细胞的细胞毒性，C图为载药纳米系统对MDA-MB-231细胞的凋亡作用。
图9所示的结果表明，生物伪装靶向纳米粒组对MDA-MB-231细胞的杀伤最强，说明生物伪装靶向纳米粒组具有最强的体外抗肿瘤效果。
实施例7：生物伪装靶向载药纳米粒的体内抗瘤活性评价
将30只裸鼠随机分成5组，分别为Control组、DOX组、DOX/MSN组、RM-(DOX/MSN)组、iRGD-RM-(DOX/MSN)组，每组6只。在每只裸鼠左侧乳垫下接种MDA-MB-231细胞构建原位乳腺癌异体移植瘤模型，于肿瘤接种后第9天和第12天，尾静脉注射每组载药纳米粒，DOX给药量为10mg/kg，期间每两天用数显游标卡尺测量肿瘤体积大小并记录小鼠体重，通过肿瘤生长曲线，肿瘤抑制率及体重变化曲线反应体内抗肿瘤活性。于肿瘤接种后第18天处理老鼠，称量肿瘤重量，评价生物伪装靶向载药纳米粒对原位乳腺癌异体移植瘤的治疗效果。结果见图10，其中，A图为生物伪装纳米系统治疗乳腺癌后肿瘤体积大小，B图为治疗后肿瘤图，C图为肿瘤重量，D图为肿瘤抑制率，E图为治疗中体重变化情况，F图为治疗前后的体重变化情况。
图10所示的结果表明：生物伪装靶向载药纳米粒组具有最强的体内抗肿瘤活性，成功抑制肿瘤的生长,同时在系统毒性方面较游离药物更低。

Claims (6)

1.一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统，包含内核载体和包裹于内核表面的生物伪装外壳，所述内核载体为包载药物的介孔硅，所述外壳为iRGD修饰的红细胞膜，所述伪装纳米递药系统由以下方法制得，该方法包括：
A、包载药物的介孔硅纳米粒的制备：
(1)将溴化十六烷基三甲铵与碱溶液混匀，加热搅拌，加入正硅酸乙酯和乙酸乙酯，反应完后，用滤膜过滤，获得的纳米粒用乙醇和纯化水交替清洗，加入乙醇/盐酸混合液中回流后得到介孔硅纳米粒；
(2)将介孔硅纳米粒与抗肿瘤细胞毒药物混合，搅拌，获得包载药物的介孔硅纳米粒；
B、iRGD修饰的红细胞膜的制备：
(1)采用低渗溶血法提取红细胞膜，其过程包括：将取得的大鼠全血离心，弃上清，用PBS洗2-3次后，得下层沉淀红细胞，加入PBS还原成原体积，用PBS进行溶血，离心，弃上清，用PBS洗至上清透明后，重悬保存备用；
(2)将DSPE-PEG-NHS与iRGD肽在DMSO溶剂中室温避光搅拌，反应完置于MWCO＝3400Da透析袋中透析，去除溶剂及过量iRGD肽，得到DSPE-PEG-iRGD；
(3)将DSPE-PEG-iRGD与红细胞膜融合，获得iRGD修饰的红细胞膜；
C、将上述A得到的包载药物的介孔硅纳米粒与B获得的iRGD修饰的红细胞膜混和均匀，来回通过含400nm微孔滤膜的脂质体挤出器即得生物伪装纳米递药系统，其中，
B的步骤(2)中，DSPE-PEG-NHS与iRGD肽的摩尔比为1：1.5。
2.如权利要求1所述的方法，过程A(1)中，溴化十六烷基三甲铵与正硅酸乙酯的重量比为1：5-6。
3.如权利要求1所述的生物伪装纳米递药系统，所述的方法，过程A(1)中，所述碱为氢氧化钠或氢氧化钾。
4.如权利要求1所述的生物伪装纳米递药系统，所述的方法，过程C中，100μl-200μl的红细胞膜对应全血的体积与介孔硅纳米粒的体积质量比为100μl-200μl：1mg。
5.如权利要求4所述的生物伪装纳米递药系统，所述的方法，过程C中的体积质量比为100μl：1mg。
6.如权利要求1所述的生物伪装纳米递药系统，所述抗肿瘤细胞毒药物为阿素霉、柔红霉素、表阿霉素、吡喃阿霉素、阿克拉霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、卡铂或奥沙利铂。
CN202011342798.XA 2020-11-26 2020-11-26 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法 Active CN112402626B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011342798.XA CN112402626B (zh) 2020-11-26 2020-11-26 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011342798.XA CN112402626B (zh) 2020-11-26 2020-11-26 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112402626A CN112402626A (zh) 2021-02-26
CN112402626B true CN112402626B (zh) 2023-05-02

Family

ID=74842459

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011342798.XA Active CN112402626B (zh) 2020-11-26 2020-11-26 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112402626B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112791061B (zh) * 2021-01-05 2022-08-05 石河子大学 一种具有靶向长循环的多级仿生纳米药物载体的制备方法
CN114129718B (zh) * 2021-10-19 2024-05-03 华东师范大学 一种用于体内自组装car-t的纳米递送系统及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104398493A (zh) * 2014-12-08 2015-03-11 中国人民解放军第四军医大学 一种可逆转肿瘤耐药的肿瘤主动靶向纳米递药系统
CN107624116A (zh) * 2015-03-31 2018-01-23 汉阳大学校产学协力团 具有抗癌活性的肽以及均含有该肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物
CA3079574A1 (en) * 2017-11-02 2019-05-29 Universidade De Santiago De Compostela Drug delivery systems and methods comprising polysialic acid and/or other polymers

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105854024A (zh) * 2015-01-19 2016-08-17 复旦大学 以rgd为活性中心的多肽在制备抗抑郁靶向递药系统中的用途
WO2017180499A2 (en) * 2016-04-13 2017-10-19 President And Fellows Of Harvard College Methods for capturing, isolation, and targeting of circulating tumor cells and diagnostic and therapeutic applications thereof
CN110152015A (zh) * 2018-02-11 2019-08-23 上海市第六人民医院东院 负载抗肿瘤药物的人多能干细胞外泌体及其制备方法与用途
CN109316604A (zh) * 2018-10-17 2019-02-12 武汉市卉研生物科技有限公司 一种功能性红细胞膜的制备方法及应用
CN109395087A (zh) * 2018-12-17 2019-03-01 上海交通大学医学院 一种共递送no供体和纳米药物的纳米共递送系统
CN110269847A (zh) * 2019-06-21 2019-09-24 温州医科大学 一种用于中和细菌毒素的仿生纳米材料及其制备方法与应用
CN110693851B (zh) * 2019-10-24 2022-03-25 西安医学院 一种介孔二氧化硅载药纳米粒及其制备方法和应用
CN110755613A (zh) * 2019-10-24 2020-02-07 暨南大学 光触发红细胞膜包裹no纳米仿生供体材料的制备及应用
CN111249467A (zh) * 2020-01-09 2020-06-09 华东理工大学 肿瘤自靶向多级响应型介孔硅递药系统及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104398493A (zh) * 2014-12-08 2015-03-11 中国人民解放军第四军医大学 一种可逆转肿瘤耐药的肿瘤主动靶向纳米递药系统
CN107624116A (zh) * 2015-03-31 2018-01-23 汉阳大学校产学协力团 具有抗癌活性的肽以及均含有该肽作为活性成分的用于预防和治疗癌症的药物组合物和膳食补充组合物
CA3079574A1 (en) * 2017-11-02 2019-05-29 Universidade De Santiago De Compostela Drug delivery systems and methods comprising polysialic acid and/or other polymers

Also Published As

Publication number Publication date
CN112402626A (zh) 2021-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Peng et al. Herceptin-conjugated paclitaxel loaded PCL-PEG worm-like nanocrystal micelles for the combinatorial treatment of HER2-positive breast cancer
Zhao et al. Exosome-mediated siRNA delivery to suppress postoperative breast cancer metastasis
CN110859826B (zh) 一种脑肿瘤靶向的仿生载药纳米颗粒及其制备方法和用途
Wang et al. Polylactide-tethered prodrugs in polymeric nanoparticles as reliable nanomedicines for the efficient eradication of patient-derived hepatocellular carcinoma
Shi et al. Doxorubicin‐conjugated immuno‐nanoparticles for intracellular anticancer drug delivery
Bhadra et al. PEGylated peptide dendrimeric carriers for the delivery of antimalarial drug chloroquine phosphate
Wang et al. Strategies for liposome drug delivery systems to improve tumor treatment efficacy
Ying et al. Macrophage membrane-biomimetic adhesive polycaprolactone nanocamptothecin for improving cancer-targeting efficiency and impairing metastasis
JP6049854B2 (ja) 物質内包ベシクル及びその製造方法
Cui et al. Dual-target peptide-modified erythrocyte membrane-enveloped PLGA nanoparticles for the treatment of glioma
CN112402626B (zh) 一种靶向肿瘤的生物伪装纳米递药系统及其制备方法
Gu et al. NGR-modified pH-sensitive liposomes for controlled release and tumor target delivery of docetaxel
Li et al. Stepwise targeting and responsive lipid-coated nanoparticles for enhanced tumor cell sensitivity and hepatocellular carcinoma therapy
CN103381146B (zh) 双层缓控释纳米粒及其制备方法和应用
Fang et al. Sgc8 aptamer targeted glutathione-responsive nanoassemblies containing Ara-C prodrug for the treatment of acute lymphoblastic leukemia
Liang et al. Folate-functionalized assembly of low density lipoprotein/sodium carboxymethyl cellulose nanoparticles for targeted delivery
CN107854431B (zh) 一种靶向至肝星状细胞的透明质酸纳米胶束及其制备方法和应用
Zhang et al. Inducing controlled release and increased tumor-targeted delivery of chlorambucil via albumin/liposome hybrid nanoparticles
Chen et al. Dual-pH sensitive charge-reversal drug delivery system for highly precise and penetrative chemotherapy
CN107007550B (zh) 一种氧化还原响应性两亲性共聚物及其制备方法和应用
Zhang et al. Zwitterionic choline phosphate conjugated folate-poly (ethylene glycol): a general decoration of erythrocyte membrane-coated nanoparticles for enhanced tumor-targeting drug delivery
CN111135314A (zh) 一种用于胃癌早期诊断和治疗的纳米复合物及其制备方法
CN109734921B (zh) 一种聚乙烯亚胺-b-聚乳酸嵌段共聚物、其制备方法及应用
Ghazal et al. Role of nanoparticles in enhancing chemotherapy efficacy for cancer treatment
CN107028882B (zh) 一种物理包裹的肿瘤靶向纳米递药系统及制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant