CN107621496B - 一种中药组合物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种由丁香、肉桂为原料药的中药组合物的气相色谱检测方法，属于药物分析领域。气相色谱条件：选用毛细柱为色谱柱，氢焰离子化检测器，载气为氮气，升温程序为：起始柱温120‑150℃，以8～12℃/min的速度升温至180～200℃，保持10～15min；本发明的检测方法能在同一检测条件下较好的分离和检测所述中药组合物中的α‑石竹烯、β‑丁香烯，所述方法重现性好、准确度高、简捷方便，适于所述中药组合物有关物质含量的检测。

Description

一种中药组合物的检测方法

技术领域

本发明公开了一种中药组合物的检测方法，具体公开了一种由丁香、肉桂为原料药制成的中药组合物的气相色谱检测方法，属于药物分析领域。

背景技术

本发明涉及由丁香、肉桂两味药按照一定比例组合后，提取其挥发油制备而成的中药制剂，其主要成分为丁香酚和桂皮醛。该制剂具有温散寒邪、行气止痛的作用，适用于肠易激综合症出现腹痛，遇寒加重，腹泻，便秘，脘腹胀痛，嗳气，畏寒，排便急迫或胀坠感，便后痛减，舌质淡，舌苔白，脉弦或紧等症状

本发明组合物除主要含有丁香酚、肉桂醛外，还含有α-石竹烯、β-丁香烯、1-萘乙酸、水杨酸甲酯和乙酸丁香酚酯等有关物质。现有技术未能针对有关物质提供重现性好、稳定性高、操作简便的检测方法，更未能提供在同一条件下同时检测多个有关物质的方法。本发明提供了一种能在一个检测条件下同时测定多个有关物质的方法，且该法专属性好，准确度高，简便易行。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药组合物的气相色谱检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种中药组合物的气相色谱检测方法，包括以下步骤：

气相色谱条件：选用毛细柱为色谱柱，氢焰离子化检测器，载气为氮气，升温程序为：起始柱温120-150℃，以3～10℃/min的速度升温至180～220℃，保持5～12min；

制备供试品溶液：取中药组合物，以有机溶剂溶解，得供试品溶液；

制备对照品溶液：取α-石竹烯、β-丁香烯对照品适量，加有机溶剂制成混合对照溶液；

进样检测：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定。

优选的，升温程序为：起始柱温为140℃，以10℃/min速度升温至180℃，保持12min；或起始柱温为140℃，以3℃/min速度升温至220℃，保持5min。

优选的，色谱条件中分流比为5～20：1；柱流量为0.5～1ml/min，检测器温度250℃-270℃，进样口温度230℃-250℃；进一步优选的，分流比为10:1，柱流量为0.85ml/min，检测器温度270℃，进样口温度250℃。

优选的，所述色谱柱以6％氰丙基苯基/94％二甲基聚硅氧烷为固定相。

优选的，制备供试品溶液步骤中所述有机溶剂包括正己烷、石油醚、乙醚、乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇、丙酮中的任意一种或几种；进一步优选为乙酸乙酯；更优选的，所述供试品溶液制备方法为取中药组合物，加入乙酸乙酯制备成16mg/ml的供试品溶液。

优选的，制备对照品溶液步骤中所述有机溶剂包括正己烷、石油醚、乙醚、乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇、丙酮中的任意一种或几种；进一步优选为乙酸乙酯；更优选的，所述对照品溶液制备方法为分别取α-石竹烯、β-丁香烯对照品，加入乙酸乙酯制备成α-石竹烯浓度为3～5mg/ml、β-丁香烯浓度为2～4mg/ml的混合对照品溶液。

优选的，所述中药组合物的原料药包括：丁香1～10重量份、肉桂1～10重量份；进一步优选的，所述中药组合物为原料药丁香1～10重量份、肉桂1～10重量份按常规提取方法制备的挥发油或挥发油进一步按常规制剂工艺制备的常规剂型；所述常规提取方法包括浸泡提取、超声提取、渗漉提取、回流提取或水蒸汽蒸馏提取；所述常规剂型包括片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂、贴剂、膏剂、喷雾剂、注射剂等。

更进一步优选的，所述中药组合物制备方法为：取丁香、肉桂，隔水蒸馏8～12小时，收集挥发油，冷藏24小时，除去水分，即得。

本发明的检测方法能在同一检测条件下较好的分离和检测所述中药组合物中的α-石竹烯、β-丁香烯，所述方法重现性好、准确度高、简捷方便，适于所述中药组合物有关物质含量的检测。

附图说明

图1根据具体实施例1采用升温程序1#测试供试品溶液的色谱图。

图2根据具体实施例1采用升温程序1#测试α-石竹烯对照品溶液的色谱图。

图3根据具体实施例1采用升温程序1#测试β-丁香烯对照品溶液的色谱图。

图4根据具体实施例1采用升温程序1#测试1-萘乙酸对照品溶液的色谱图。

图5根据具体实施例1采用升温程序1#测试水杨酸甲酯对照品溶液的色谱图。

图6根据具体实施例1采用升温程序1#测试乙酸丁香酚酯对照品溶液的色谱图。

图7根据具体实施例1采用升温程序2#测试供试品溶液的色谱图。

图8根据具体实施例1采用升温程序2#测试混合对照品溶液的色谱图。

图9根据具体实施例1的系统适应性试验测试混合对照品溶液的色谱图。

图10根据具体实施例1的系统适应性试验测试供试品溶液的色谱图。

图11根据具体实施例1的专属性试验测试供试品溶液的色谱图。

图12根据具体实施例1的专属性试验测试混合对照品溶液的色谱图。

图13根据具体实施例1的专属性试验测试空白溶剂对照的色谱图。

图14根据具体实施例1线性关系考察所得β-丁香烯标准曲线图。

图15根据具体实施例1线性关系考察所得α-石竹烯标准曲线图。

图16-1根据具体实施例2测试对照品溶液(1-萘乙酸)的色谱图。

图16-2根据具体实施例2测试对照品溶液(1-萘乙酸)的光谱图。

图17-1根据具体实施例2测试供试品溶液的色谱图。

图17-2根据具体实施例2测试供试品溶液的光谱图。

图18根据具体实施例2测试空白溶剂对照的色谱图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1中药组合物软胶囊的制备

取丁香375g、肉桂375g，加8倍量水，隔水蒸馏8小时，收集挥发油，冷藏24小时，除去水分，共制36ml挥发油。

将36ml挥发油与364ml大豆油混匀，备用。取明胶150g、甘油60g、单糖浆10g，加去离子水150g混匀，加热到60-70℃，保温0.5小时，加入对羟基苯甲酸甲酯0.15g、对羟基苯甲酸乙酯0.075g，搅拌，抽真空，70℃保温20分钟，制成囊材。取挥发油与大豆油的混合物，用囊材采用压制法制成软胶囊，检验，分装，即得软胶囊1000粒。

实施例2有关物质含量测定

1仪器与试药

岛津Shimadzu GC-2010Plus气相色谱仪，FID检测器；电子天平；Mili-Q纯水仪；KQ-500DE型超声波清洗仪。

乙酸乙酯为分析纯；α-石竹烯(93％，批号：PS151228-02)、β-丁香烯(90％，批号：PS151228-04)、1-萘乙酸(98％，批号：PS151228-03)、水杨酸甲酯(98％，批号：PS0257-1000)、乙酸丁香酚酯(98％，批号：PS151228-01)均购自成都普思生物科技股份有限公司；中药组合物为按实施例1制备的软胶囊剂。

2色谱条件考察

2.1样品溶液的制备

供试品溶液的制备方法：精密称取软胶囊内容物0.8g，置50mL容量瓶，加乙酸乙酯溶解、稀释至刻度，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

对照品溶液的制备：分别精密称取α-石竹烯、β-丁香烯、1-萘乙酸、水杨酸甲酯、乙酸丁香酚酯对照品适量，分别加乙酸乙酯制成4.0、3.0、0.7、9.0、7.0mg·mL^-1的对照品溶液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

2.2色谱条件考察

色谱条件：色谱柱：6％氰丙基苯基/94％二甲基聚硅氧烷为固定相的

-624毛细柱(30m×0.25mm，1.4um)；SPL1为250℃；FID1为270℃；载气为氮气(99.99％)；分流比为10：1；柱流量为0.85ml·min^-1。对升温程序进行考察。

升温程序1^#初始柱温：140℃，以3℃/min升至220℃，保持5min，依次注入供试品溶液以及α-石竹烯、β-丁香烯、1-萘乙酸、水杨酸甲酯、乙酸丁香酚酯对照品溶液，色谱图见图1至图6。

根据图谱可知，供试品溶液中未检测到水杨酸甲酯、乙酸丁香酚酯，α-石竹烯、β-丁香烯保留时间较晚，可优化色谱条件，缩短分析时间；此外，1-萘乙酸对照品按此法检测不到色谱峰，故此法不适宜检测1-萘乙酸。

升温程序2^#初始柱温：140℃，以10℃·min^-1升至180℃，保持12min，依次注入供试品溶液以及α-石竹烯、β-丁香烯对照品溶液，色谱图见图7至图8。

结果显示，供试品色谱中的目标峰分离度良好，理论塔板数符合要求，分析时间长短适宜。因此，确定最佳升温程序为：初始柱温：140℃，以10℃/min升至180℃，保持12min。

3方法学考察

3.1样品溶液的制备

混合对照品溶液的制备：分别精密称取α-石竹烯、β-丁香烯对照品适量，加乙酸乙酯制成浓度约为4.0，3.0mg·mL^-1的混合对照品储备液，将对照品储备液稀释成浓度为0.04，0.03mg·mL^-1的混合对照品溶液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

供试品溶液的制备方法：精密称取软胶囊内容物约0.8g，置50mL容量瓶，加乙酸乙酯溶解、稀释至刻度，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

空白溶剂对照溶液：为乙酸乙酯试剂，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

3.2色谱条件

色谱条件：色谱柱：

-624(30m×0.25mm，1.4um)；SPL1为250℃；FID1为270℃；升温程序：初始温度140℃，以10℃/min的速度升至180℃，保持12min；载气为氮气(99.99％)；分流比为10：1；柱流量为0.85ml·min^-1；进样量为1μL。

系统适应性试验：在上述色谱条件下，取混合对照品溶液重复进样5次，记录色谱图，见图9，以混合对照品的峰面积计算RSD(％)，结果见表1；取供试品溶液重复进样2次，记录色谱图，色谱图见图10。

表1系统适应性试验结果

峰面积	β-丁香烯	α-石竹烯
			1	42021.9	55245.4
2	44992.8	57088.8
			3	41132.1	55779.7
4	43930.3	58000.9
			5	43323.9	58230.4
RSD	3.5％	2.3％

结果表明：对照品溶液的重复性RSD小于5％，供试品溶液的分离度均大于1.5，系统适应性良好。

专属性试验：在上述色谱图条件下，取上述混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂对照溶液各进一针，记录色谱图，色谱图分别见图11至图13。

结果表明：空白溶剂对照无干扰，方法专属性良好。

线性关系考察：取混合对照品储备溶液，分别稀释制成如表2所示各浓度的混合对照品溶液，依次进样，记录峰面积，以浓度(μg·mL^-1)为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。峰面积记录结果见表3，标准曲线见图14至图15。

表2混合对照品浓度

浓度	β-丁香烯(μg/mL)	α-石竹烯(μg/mL)
			1	5.6552	8.2376
2	28.276	41.188
			3	56.552	82.376
4	84.828	123.564
			5	113.104	164.752

表3峰面积记录结果

峰面积	β-丁香烯	α-石竹烯
			1	9577.4	12293.0
2	43154.5	54861.4
			3	84382.4	110006.6
4	123323.4	162086.6
			5	163417.7	215845.7

结果表明，β-丁香烯(R²＝0.99981)、α-石竹烯(R²＝0.99993)分别在5.6552～113.104μg·mL^-1、8.2376～164.752μg·mL^-1范围内线性良好。

精密度试验：在上述色谱条件下，取混合对照品连续进样6次，记录峰面积，以峰面积计算RSD(％)。结果见表4。

表4精密度试验结果

峰面积	β-丁香烯	α-石竹烯
			1	43140.2	54100.6
2	40536.2	53677.3
			3	41230.0	52947.1
4	43029.5	55099.1
			5	43687.6	55221.6
6	43803.6	56466.2
			RSD	3.2％	2.3％

结果表明，β-丁香烯、α-石竹烯的峰面积DSD(％)均小于5％，仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，室温下放置分别于0、1、2、4、6、30h进样，记录峰面积，以峰面积计算RSD(％)。结果见表5。

表5稳定性试验结果

试验结果表明，供试品溶液在30h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批样品，按供试品溶液制备方法制备6份样品溶液，依次进样，记录峰面积，计算含量。结果见表6。

表6重复性试验结果

试验结果表明，β-丁香烯、α-石竹烯的峰面积DSD(％)均小于5％，重复性良好。

准确度试验：精密移取已知含量的供试品溶液3mL，按1:1含量比例加入β-丁香烯对照品溶液、α-石竹烯对照品溶液，平行制备6份，依次进样测定，计算回收率。结果见表7至表8。

表7β-丁香烯准确度试验结果

表8α-石竹烯准确度试验结果

4样品含量测定

按拟定的方法对实施例1制备的软胶囊进行含量测定，结果见表9。

表9样品含量测定结果

实施例3 1-萘乙酸含量测定

1仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪；DAD检测器；电子天平；Mili-Q纯水仪；KQ-500DE型超声波清洗仪。

乙酸乙酯为分析纯；1-萘乙酸(98％，批号：PS151228-03)购自成都普思生物科技股份有限公司，中药组合物为按实施例1制备的软胶囊剂。

2色谱条件考察

2.1样品溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取1-萘乙酸对照品适量，加乙酸乙酯制成0.7mg·mL^-1的对照品溶液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

供试品溶液的制备：精密称取软胶囊内容物约0.8g，置50mL量瓶，加乙酸乙酯溶解、稀释至刻度，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

空白溶剂对照溶液：为乙酸乙酯试剂，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

2.2色谱条件

色谱柱：XDB-C18(4.6×250mm，5.0um)；柱温：30℃；流动相：甲醇-水-磷酸(60:40:0.35)；检测波长：220nm；流速：1mL/min；进样量：10uL。在上述色谱条件下依次注入对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂对照。色谱图见图16-1、图16-2至图18。

结果表明，1-萘乙酸对照品保留时间为8.1min，而供试品溶液色谱图中在8.1min处未检出色谱峰，且供试品8.6min处色谱峰的光谱图与萘乙酸不一致。据此可知，供试品溶液中不含萘乙酸成分，或含量过低，达不到定量限，无检测意义。

实施例4中药组合物片剂的制备

取实施例1制备的挥发油3ml，加微粉硅胶2.5mg，乳糖5.5mg，微晶纤维素5.3mg，糖粉3.0mg，用10％PVP-k30水溶液制粒，外加低取代羟丙基纤维素0.5mg和硬酯酸镁0.2mg，压片，即得。

实施例5中药组合物颗粒剂的制备

取实施例1制备的挥发油5ml，并溶于少量乙醇中，备用。取40gβ-环糊精，加入300ml蒸馏水，水浴加热溶解，温度降至35℃时加入挥发油乙醇溶液，混合均匀，超声包合30min，冷藏过夜，抽滤，沉淀于38℃低温干燥，得挥发油β-环糊精包合物。将β-环糊精包合物与适量糊精混合，采用90％乙醇为润湿剂制软材，过20目筛进行湿法制粒，65℃干燥，整粒，即得。

实施例6中药组合物气相色谱检测

色谱条件：色谱柱：6％氰丙基苯基/94％二甲基聚硅氧烷为固定相的

-624毛细柱(30m×0.25mm，1.4um)；SPL1为250℃；FID1为270℃；载气为氮气(99.99％)；分流比为10：1；柱流量为0.85ml·min^-1；初始柱温：140℃，以3℃/min升至220℃，保持5min。

制备供试品溶液：取实施例4或5的中药组合物制剂0.8g，置于50ml容量瓶，以乙酸乙酯溶解，并稀释至刻度，摇匀，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，得供试品溶液；

制备对照品溶液：分别精密称取α-石竹烯、β-丁香烯对照品适量，分别加乙酸乙酯制成3.9988、2.7876mg·mL^-1的对照品溶液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

进样检测：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定。实施例7中药组合物气相色谱检测

色谱条件：色谱柱：6％氰丙基苯基/94％二甲基聚硅氧烷为固定相的

-624毛细柱(30m×0.25mm，1.4um)；SPL1为250℃；FID1为270℃；载气为氮气(99.99％)；分流比为10：1；柱流量为0.85ml·min^-1；初始柱温：140℃，以10℃/min升至180℃，保持12min。

制备供试品溶液：取实施例4或5的中药组合物制剂0.8g，置于50ml容量瓶，以乙酸乙酯溶解，并稀释至刻度，摇匀，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，得供试品溶液；

制备对照品溶液：分别精密称取α-石竹烯、β-丁香烯对照品适量，分别加乙酸乙酯制成3.9988、2.7876mg·mL^-1的对照品溶液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，密封备用。

进样检测：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定。

Claims (3)

1.一种中药组合物的气相色谱检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

气相色谱条件：选用毛细柱为色谱柱，所述色谱柱以6％氰丙基苯基/94％二甲基聚硅氧烷为固定相；氢焰离子化检测器，载气为氮气，升温程序为：起始柱温为140℃，以10℃/min速度升温至180℃，保持12min；色谱条件中分流比为10:1，柱流量为0.85ml/min，检测器温度270℃，进样口温度250℃；

制备供试品溶液：取中药组合物，加入乙酸乙酯制备成10～20mg/ml的供试品溶液；

制备对照品溶液：分别取α-石竹烯、β-丁香烯对照品，加入乙酸乙酯制备成α-石竹烯浓度为3～5mg/ml、β-丁香烯浓度为2～4mg/ml的混合对照品溶液；

进样检测：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定；

其中，所述中药组合物的原料药组成为：丁香1～10重量份、肉桂1～10重量份。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述中药组合物为原料药丁香1～10重量份、肉桂1～10重量份按常规提取方法提取的挥发油或挥发油进一步按常规制剂工艺制备的常规剂型；所述常规剂型选自片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂、贴剂、膏剂、喷雾剂或注射剂。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述中药组合物制备方法为：取丁香、肉桂，隔水蒸馏8～12小时，收集挥发油，冷藏24小时，除去水分，即得。

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