CN111796048B - 一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯准确含量的方法，是通过对中药材或中成药粉末中的藁本内酯进行提取和/或转化，使中药材或中成药中化学结构不稳定的藁本内酯转化为结构稳定的环丙藁本，再通过HPLC外标法直接测定环丙藁本的含量，然后通过等摩尔量间接计算得到中药材或中成药中藁本内酯的含量。本发明方法用于定量检测药物中藁本内酯的含量，其结果可靠，准确度高，方法稳定性、重现性良好，通过该方法的应用达到有效控制药物质量的直接目标。

Description

一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含 量的方法
技术领域
本发明涉及一种中药材或中成药中藁本内酯的含量测定方法，尤其涉及一种通过化学转化测定环丙藁本的含量而间接计算药材或药物中藁本内酯准确含量的方法，属于药物分析领域。
背景技术
伞形科植物中，当归属和藁本属的植物均含有苯酞类化合物，如当归和川芎等药用植物，该类化合物为植物挥发油的主要成分，大都具有浓烈的芳香气味，在植物中具有丰富的含量。该类化合物结构类型较多，且普遍具有化学不稳定性，单独存在遇环境中的光、热以及酶等容易氧化或降解。但该类化合物普遍具有较好的药理活性，如抗氧化、抗血小板聚集、促进微循环、镇痛消炎、中枢神经保护以及抗肿瘤等显著的药理活性。
藁本内酯（ligustilide）是传统中药当归、川芎等伞形科植物挥发油中的主要药理活性成分，其含量高达1-2%左右。具有显著的心脑血管药理活性。国内外学者对藁本内酯的药理活性曾经和正在进行大量的研究工作，发表了相关的药理活性研究成果，如藁本内酯对脑神经保护，改善微循环，舒张血管，抑制血管平滑肌细胞增殖，抗抑郁，抗阿尔茨海默症，镇痛消炎等重要药理作用，同时研究人员对于藁本内酯的药理研究成果进行了大量的综述（A. Douglas Kinghorn, Heinz Falk, Simon Gibbons, and Jun’ichi Kobayashiedited, Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, 2017, P127,Springer International Published.; 左爱华, 王莉, 肖红斌, 藁本内酯药理学和药代动力学研究进展, 中国中药杂志, 2012, 37(22): 3350-3353.）。
中药成分复杂，功能主治多样，中药质量标志物可以用于药材质量的准确控制。藁本内酯作为当归和川芎药材挥发油的主要成分，在改善血液流变性等重要药理活性中发挥关键和主要作用，通常被作为当归和川芎的药效标志物。但《中国药典》2015年版中当归和川芎药材的定量控制指标为阿魏酸，其专属性不强，不能充分反映药材的质量属性和药材活血化瘀的主要功效（闫孟琳，丁国钰，丛龙飞，李超雯，牛瑞雪，姜民，侯媛媛，张铁军，白钢，刘昌孝。基于质量标志物的当归血管舒张功效的近红外快速评价，中草药， 2020，50(19): 4538-4546.）。
藁本内酯由于具有3个烯键和1个羰基双键的高度不饱和共轭体系，但未形成芳香环的稳定共轭体系，反应位点较多，反应活性较强，相对自由能较低，故容易发生1,2、1,4和1,6的Diels-Alder反应，形成复杂的二聚或三聚化合物。由于该化合物天然的化学结构不稳定性，藁本内酯的国家药典标准品质量一直未得到较好的解决，致使采用藁本内酯为定量检测指标的技术问题一直没有被应用。
大量的研究显示，当归和川芎药材中藁本内酯的含量随着药材种植地域（产地）、药材储存时间以及药材初加工方式的不同而产生非常显著的变化。由于含有藁本内酯的药物（饮片、中成药、中药注射剂等）的临床治疗效果会随着中成药和药材饮片的质量发生显著的变化，因此有必要定量控制有关当归、川芎等含有藁本内酯活性成分的药物的准确含量来满足药物的有效、安全和可控的基本特征。
虽然当归的国际标准（ISO-22584，2019年12月发布）中未对藁本内酯的含量做出限定，但英国药典（2017版）和香港药典对藁本内酯的含量已经做出明确规定（英国：大于等于0.1%；香港：大于等于0.6%），尤其香港药典只对藁本内酯做出限定，不再控制挥发油总量和阿魏酸的含量要求，随着国际范围内当归药材标准的逐步提高，藁本内酯的含量限定要求成为必然局势。
CN201810730744.7公开了采用藁本内酯的化学结构衍生和活性筛选得到化合物环丙藁本，成功解决了藁本内酯的稳定化问题。因此，可以利用环丙藁本为标准品，通过化学转化法间接测定当归、川芎等含有藁本内酯中药材中活性成分藁本内酯的准确含量，也可以应用于含有藁本内酯活性成分的中成药的质量控制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过化学转化测定环丙藁本的含量而间接计算中药材或中成药中藁本内酯准确含量的方法。
一、中药材或中成药中藁本内酯含量的测定
本发明通过测定环丙藁本含量间接计算中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，是通过对中药材或中成药中的藁本内酯进行提取、转化，使中药材或中成药中化学结构不稳定的藁本内酯转化为结构稳定的环丙藁本，再通过HPLC外标法直接测定环丙藁本的含量，然后通过等摩尔量间接计算得到中药材或中成药中藁本内酯的含量。
中药材或中成药中的藁本内酯转化成环丙藁本的路线如下式所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
本发明利用藁本内酯化学结构中内酯环羰基官能团的强亲电活性与环丙胺的氨基孤对电子发生分子间亲核取代反应，生成酰胺过渡态，同时环戊烯基侧链的烯醇结构发生异构化形成酮羰基，比较巧合的酰胺键的孤对电子同时又与异构化的酮羰基发生二次分子内亲核取代反应，产生游离的羟基官能团，同时环丙藁本的内酯环通过两次亲核反应最终形成五元环状的内酰胺稳定结构。因此，该检测方法通过化学转化将不稳定的藁本内酯转化为等摩尔的稳定产物环丙藁本，通过测定反应产物中生成的环丙藁本的量，可间接计算药材或药物中的藁本内酯含量。
图1为藁本内酯和环丙藁本的HPLC典型色谱图。其中，A为330 nm波长下HPLC检测的当归甲醇提取物液相色谱图，tR = 20 min处为藁本内酯色谱峰。tR = 12 min未有色谱峰出现。B为232 nm波长下HPLC检测的当归甲醇提取物液相色谱图，tR = 20 min处为藁本内酯色谱峰，表示藁本内酯在该波长下也有紫外吸收，但在tR = 12 min未有色谱峰出现，表明该波长作为环丙藁本的定量检测波长不受当归甲醇提取物中其它杂质的干扰。C为330nm波长下HPLC检测的当归甲醇/环丙胺反应液液相色谱图，tR = 20 min处未出现藁本内酯色谱峰，显示该化合物已反应完全。tR = 12 min未有色谱峰出现，表明生成的环丙藁本在该波长下没有紫外吸收，也没有其它藁本内酯的类似物在该位置出现而影响环丙藁本的准确测定。D、为232 nm波长下HPLC检测的当归甲醇/环丙胺反应液液相色谱图，tR = 20 min处未有藁本内酯色谱峰出现，表明反应完全。tR = 12 min为环丙藁本的色谱峰，其余临近的色谱峰分离度良好，可以用于定量检测。
图2为环丙藁本和藁本内酯在DAD检测器中记录的紫外吸收光谱图。其中A为藁本内酯的UV图，分别在205 nm，280 nm和330 nm处有最大吸收波长。B、为环丙藁本的UV图，分别在232 nm和292 nm处有最大吸收波长。
本发明检测中药材或中成药中的藁本内酯含量的具体方法如下：
方法
Figure 297554DEST_PATH_IMAGE002
：先采用有机溶剂和环丙胺对于中药材或中成药中的藁本内酯进行提取和/或反应同步进行，防止藁本内酯在提取和反应过程中的降解，再通过超声辅助处理加速藁本内酯固定化，同时促进固定化的环丙藁本在植物细胞中的溶出；然后通过一段时间的藁本内酯和环丙胺的充分反应促使该反应完全转化，最后反应体系用溶剂充分洗脱、转移、稀释、定量后直接进行HPLC外标法测定环丙藁本的含量，并通过等摩尔的量计算，间接得到药物中藁本内酯的含量。具体工艺如下：
（1）供试品溶液的制备：将中药材粉碎并过四号药典筛；将中药材粉末与环丙胺加入到有机溶剂中，在0~60℃（优选31℃）水浴中电磁搅拌提取/反应5~20 min（优选15 min）；再超声提取2~10 min（优选5 min），然后继续在0~60℃（优选31℃）水浴中电磁搅拌提取/反应30~90 min（优选60 min），反应物抽滤后有机溶剂洗脱三次，合并洗脱溶液；稀释至环丙藁本的浓度为80 µg/mL ~ 400 µg/mL，作为供试品溶液；药材粉末按0.05 g/mL ~ 0.5 g/mL（优选0.1 g/mL）加入到有机溶剂中；中药材粉末与环丙胺的质量体积比为0.1 g/mL ~0.77 g/mL（优选0.208 g/mL）；
（2）HPLC外标法测定供试品溶液中环丙藁本含量： HPLC外标法测定环丙藁本含量的色谱条件：流动相由甲醇和水组成，且甲醇和水的体积比为35:65，进样量：20μL。流速：1mL/min；测定波长：200~400 nm（优选232 nm）；
（3）通过等摩尔量计算，间接得到药物中藁本内酯的含量。
方法
Figure DEST_PATH_IMAGE003
：首先采用有机溶剂将药物粉末中的藁本内酯进行完全提取，然后在藁本内酯提取物中加入环丙胺进行藁本内酯化学转化反应，反应结束后将转化反应体系稀释、定量后直接HPLC外标法测定环丙藁本的含量；通过等摩尔的量和/或校正系数间接计算药物中藁本内酯的含量。具体工艺如下：
（1）供试品溶液的制备：将中药材或中成药粉碎并过四号药典筛，将药材粉末加入有机溶剂中进行超声提取得到藁本内酯提取液；然后取藁本内酯提取液加入环丙胺，在室温下搅拌反应使藁本内酯完全转化；反应溶液直接作为供试品溶液。其中有机溶剂为可以为甲醇、乙醇、乙腈、石油醚、乙醚、丙酮、乙酸乙酯等溶剂中的一种或几种，优选甲醇），药材粉末按0.012~0.02 g/mL（优选0.016 g/mL）加入到有机溶剂中；供化学转化的藁本内酯提取液的体积为0.5 mL，环丙胺的加入量为0.1 mL ~ 0.5 mL（优选0.3 mL）；超声提取的功率为100 W ~ 500 W，50 Hz（优选500 W），超声温度为10℃~55℃（优选40℃），提取时间为15~60 min（优选30 min），反应温度为0℃~40℃（优选25℃），反应时间为0.5~2 h（优选1.5 h）；
（2）HPLC外标法测定供试品溶液中环丙藁本含量：HPLC外标法测定环丙藁本含量的色谱条件：流动相由甲醇和水组成，且甲醇和水的体积比为35:65，进样量：20μL。流速：1mL/min；测定波长：200~400nm（优选232 nm）；
（3）通过等摩尔量和/或校正系数计算，间接得到药物中藁本内酯的含量，校正因子的范围为1.017~1.065，优选1.041。
方法
Figure 733083DEST_PATH_IMAGE003
中，采用先提取后转化的程序，在此过程中不可避免的要造成藁本内酯的降解和化学转化反应的不完全，通过反复考察引入校正因子消除藁本内酯提取过程中的降解和对准确测量带来的系统误差。实验表明，根据环丙藁本的含量（摩尔数乘以校正因子）间接计算确定藁本内酯的含量，其中校正因子为1.041。
上述中药材为当归、川芎、藁本等含有大量藁本内酯活性成分的中药材；中成药为当归丸、当归腹痛宁、浓缩当归丸、川芎茶调丸、舒脑欣滴丸，速效救心丸、冠心宁等以藁本内酯为活性成分的中成药。
二、当归药材中藁本内酯含量的高效液相色谱（HPLC-DAD）方法学研究
下面以当归中药材为例，对本发明通过测定环丙藁本含量间接计算中药材或中成药中藁本内酯含量的方法进行方法学研究。
1.对照品贮备液制备
准确称取环丙藁本对照品0.05001 g，色谱甲醇定容于50 mL容量瓶中，5 ℃冰箱冷藏放置，用时取出，放置至室温正常使用。
2. 供试品溶液的制备
取当归药材适量，粉碎机粉碎并过四号药典筛，精密称取药材粉末0.5000 g，置于50 mL带塞单口圆底烧瓶中，加入2.4 mL环丙胺和2.6 mL甲醇，电磁搅拌（转速2400 r/min）提取/反应15 min，将以上圆底烧瓶置于超声提取器中超声处理5 min，提取/反应产物再继续电磁搅拌提取/反应60 min后停止搅拌，反应物抽滤，10 mL/10 mL/10 mL甲醇洗脱药材粉末三次合并甲醇溶液，定容至50 mL容量瓶中作为供试品溶液。
3. 环丙藁本定量检测标准曲线的绘制
环丙藁本对照品储备液，色谱甲醇配制1000 µg/mL的溶液，并依次倍比稀释配成500 µg/mL、250 µg/mL、125 µg/mL、62.5 µg/mL、31.25 µg/mL、15.625 µg/mL、7.813 µg/mL、3.906 µg/mL的系列溶液，各浓度溶液精密吸取20 µL，进样，安捷伦色谱工作站自动积分，记录环丙藁本色谱峰峰面积（y）。以环丙藁本对照品溶液浓度（x）为自变量，色谱峰峰面积（y）为因变量进行线性回归和拟合，得线性回归方程为Y = 31.807X + 74.987，复相关系数R² = 0.9999。环丙藁本浓度在15.313 ~ 980 µg/mL范围内其浓度与峰面积具有良好的线性关系。
4. 环丙藁本的最低检测限和最低定量限的确定
按照液相色谱的环丙藁本色谱检测信号和噪音比（S/N）为3，确定该化合物的最低检测限为：0.244 µg/mL，以信噪比（S/N）大于10确定其定量限为0.976 µg/mL。
5. 方法精密度
精密吸取环丙藁本对照品溶液20 µL，连续进样6次，环丙藁本峰面积的RSD为0.803%，表明环丙藁本测定方法和仪器精密度良好。
6. 方法稳定性
将反应完毕的供试品溶液，每间隔2 h进样测定至8 h，测定环丙藁本的色谱图，计算藁本内酯的含量，结果见表1，结果表明，供试品溶液在8 h内含量维持稳定。
Figure 862713DEST_PATH_IMAGE004
7. 方法重现性
针对方法的可靠性，准确称取6份当归药材粉末进行平行实验，结果表明，该测定方法下当归药材中藁本内酯的含量为1.556 ± 0.080（%）其相对标准偏差RSD（%）为0.549%，测定方法可靠性高，重现性良好。
8.方法加样回收率
依据《中国药典》第四版第四部中质量标准分析方法验证指导原则，设计环丙藁本80%、100%和120%加样回收率实验，结果见表2。回收率在95~105%之间，且相对标准偏差小于3%，表明方法准确度较好。
Figure DEST_PATH_IMAGE005
综上所述，本发明通过化学转化将不稳定的藁本内酯转化为等摩尔的稳定产物环丙藁本，通过测定反应产物中生成的环丙藁本的量间接计算药材或药物中的藁本内酯含量，有效提高了检测藁本内酯含量的可靠性和准确性，而且该方法稳定性、重现性良好。通过该方法的应用达到有效控制药物质量的直接目标。
附图说明
图1为藁本内酯和环丙藁本的HPLC典型色谱图。
图2为环丙藁本和藁本内酯在DAD检测器中记录的紫外吸收光谱图。
图3为不同原产地的当归样本的藁本内酯含量测定结果。
图4 为文献报道的甘肃省不同种植区当归原产地样本通过UPLC技术，外标法采用藁本内酯的对照品定量测定结果。
图5 为当归原产地样本（2019年11-12月采集，2020年5-6月测定）中藁本内酯含量的统计分析。
图6化学转化法测定商品化当归药材（2020年6月采购并测定）的藁本内酯含量。
图7 化学转化法测定的储存1.5年的商品化当归药材（2019年6月采购，2020年6月测定）的藁本内酯含量。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明通过测定环丙藁本含量间接计算中药材或中成药中藁本内酯含量的方法作进一步说明。
实施例1：测定不同栽培产地当归药材中藁本内酯的含量
（1）当归原产地药材标本的采集：本发明专利中测定的当归原产地药材标本于2019年11月-12月期间（当归的采挖季节），采集于甘肃省和青海省的不同地区，主要包括甘肃的岷县、漳县、渭源、宕昌、卓尼、临潭、民乐、天祝、永登县，青海省的民和、乐都、和平、互助、门源、大通等县。采集时随机抽样6株大小不同的当归药材，准确记录产地地名和样本捐献者联系方式，原产地样本信息见表3。样本采集后洗尽泥沙，自然阴干，2个月后收集整理样本，干燥通风处保存，测定时间为2020年5月 ~ 6月，药材储存期为6 ~ 7个月。
Figure 324089DEST_PATH_IMAGE006
（2）对照品储备液制备：准确称取0.0050 g环丙藁本对照品，甲醇定容于50 mL容量瓶中作为对照品贮备液；
（3）供试品溶液制备：分别取原产地当归药材样本适量，粉碎机粉碎并过四号药典筛，精密称取药材粉末0.5 g，置于25 mL带塞单口圆底烧瓶中，加入2.4 mL环丙胺和2.6 mL甲醇，31 ℃水浴中电磁搅拌（转速2400 r/min）提取/反应15 min，将以上圆底烧瓶置于超声提取器中超声5 min，提取/反应产物继续31℃水浴中电磁搅拌提取/反应60 min后停止搅拌，反应物砂芯漏斗真空抽滤，10 mL/10 mL/10 mL甲醇洗脱药材粉末三次，合并甲醇溶液，定容至50 mL容量瓶中作为供试品溶液；
（4）测定方法：分别定量取对照品溶液和供试品溶液20 µL注入液相色谱仪，按外标法测定环丙藁本的含量，通过化学转化得到的环丙藁本的量间接计算药材中藁本内酯的含量；
（5）测定结果：见表4。对于不同原产地的当归样本的藁本内酯含量测定结果采用散点图统计分析。如附图3所示，其含量为1.407±0.385（%）。该结果与文献报道的甘肃省不同种植区当归原产地样本通过UPLC技术，外标法采用藁本内酯的对照品定量测定结果（见附图4）相比（徐小琼，陈博, 张小波, 陈娟, 晋玲. 甘肃各主产区当归UPLC多成分含量测定及评析，天然产物研究与开发, http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1335.q.20200521. 1106.004.html），采用本发明的化学转化间接测定藁本内酯的含量，要比直接法测得的结果1.032±0.471（%）高出0.375个百分点，说明藁本内酯的标准品和该化合物本身的不稳定性直接影响到不同实验室对于当归药材藁本内酯含量评价的准确性。通过观察不同产地当归药材中藁本内酯含量测定结果的正态统计分析图（见附图5），可以发现当归药材的含量基本符合植物化学成分的正态分布规律，藁本内酯含量在1.40-1.61（%）的当归样本数较多，达20份（总计64份）。含量在1.407%左右的药材分布范围最广泛，当归药材中藁本内酯的含量最高可达2.584%。
Figure DEST_PATH_IMAGE007
实施例2：中成药中藁本内酯的含量
精密称取过4号药筛后的当归（药店商品）、川芎（药店商品）、浓缩当归丸、当归片、川芎茶调丸和速效救心丸粉末0.5 g，置于50 mL具塞锥形瓶，加入30 mL甲醇，称定重量，在功率为100 Hz，40℃下超声处理30 min，待冷却后，再次称重，补足因超声过程中溶剂挥发减失的重量，将具塞锥形瓶摇匀，用漏斗过滤，得藁本内酯提取液。精密吸取藁本内酯提取液1 mL，加入0.6 mL环丙胺，在室温下搅拌1.5h后，停止反应，反应溶液直接作为供试品溶液。吸取供试品溶液和环丙藁本储备液各20 μL进样，按外标法测定供试品溶液中的环丙藁本的含量，根据环丙藁本的含量间接计算确定藁本内酯的含量。测定结果见表5。
Figure 412130DEST_PATH_IMAGE008
通过化学转化法和直接法测定中药材和中成药中的藁本内酯的含量测定结果的比较，表明化学转化法可以用于药材和成药的质量标准控制，同时该方法可以解决藁本内酯的不稳定直接造成标准品的质量确定性带来的系统误差。
实施例3：测定商品化当归药材中藁本内酯的含量
（1）当归药材标本的采集：商品化当归药材标本于2020年6月随机抽样购买于甘肃省岷县当归城和渭源县会川药材市场（原产地不明），药材提供人员口述为当年药材（储存期6 ~ 7个月），总计36份当归药材样本；
（2）对照品储备液制备：准确称取0.0050 g环丙藁本对照品，甲醇定容于50 mL容量瓶中作为对照品贮备液；
（3）供试品溶液制备：分别取商品化当归药材样本适量，粉碎机粉碎并过四号药典筛，精密称取药材粉末0.5 g，置于25 mL带塞单口圆底烧瓶中，加入2.4 mL环丙胺和2.6 mL甲醇，31℃水浴中电磁搅拌（转速2400 r/min）提取/反应15 min，将以上圆底烧瓶置于超声提取器中超声5 min，提取/反应产物继续31℃水浴中电磁搅拌提取/反应60 min后停止搅拌，反应物砂芯漏斗真空抽滤，10 mL/10 mL/10 mL甲醇洗脱药材粉末三次，合并甲醇溶液，定容至50 mL容量瓶中作为供试品溶液；
（4）测定方法：分别定量取对照品溶液和供试品溶液20 µL注入液相色谱仪，按外标法测定环丙藁本的含量，通过化学转化得到的环丙藁本的量间接计算药材中藁本内酯的含量；
（5）测定结果：商品化当归样本的藁本内酯含量测定结果采用散点图统计分析如附图6所示，其含量为1.496±0.471（%）。同时从图6可以看出：采自岷县当归城和渭源药材市场的自由交易商品当归药材（主诉当年当归药材）的藁本内酯含量与原产地当归药材的藁本内酯含量（1.407±0.385（%））基本相当。由此可以确定本方法适用于当归药材中藁本内酯含量的准确测定。
实施例4 化学转化法测定商品化当归药材（储存期1.5年）中藁本内酯的含量：
（1）当归药材标本的采集：本发明专利中测定的商品化当归药材标本于2019年6月随机抽样购买于甘肃省岷县当归城和渭源县会川药材市场（原产地不明），总计12份当归药材样本；
（2）对照品储备液制备：准确称取0.0050 g环丙藁本对照品，甲醇定容于50 mL容量瓶中作为对照品贮备液；
（3）供试品溶液制备：分别取商品化当归药材样本适量，粉碎机粉碎并过四号药典筛，精密称取药材粉末0.5 g，置于25 mL带塞单口圆底烧瓶中，加入2.4 mL环丙胺和2.6 mL甲醇，31 ℃水浴中电磁搅拌（转速2400 r/min）提取/反应15 min，将以上圆底烧瓶置于超声提取器中超声5 min，提取/反应产物继续31 ℃水浴中电磁搅拌提取/反应60 min后停止搅拌，反应物砂芯漏斗真空抽滤，10 mL/10 mL/10 mL甲醇洗脱药材粉末三次，合并甲醇溶液，定容至50 mL容量瓶中作为供试品溶液；
（4）测定方法：分别定量取对照品溶液和供试品溶液20 µL注入液相色谱仪，按外标法测定环丙藁本的含量，通过化学转化得到的环丙藁本的量间接计算药材中藁本内酯的含量；
（5）测定结果：商品化当归样本的藁本内酯含量测定结果采用散点图统计分析如附图7所示，其含量为1.209±0.394（%）。同时从图7可以看出：经过1.5年的储存，当归药材中藁本内酯的含量相较于原产地当归药材（储存6个月）的藁本内酯含量（1.407±0.385（%））和当年的商品化当归药材（储存6个月）的藁本内酯含量（1.496±0.471（%））发生非常显著的下降（p < 0.01），商品化当归药材储存1.5年后的藁本内酯含量测定结果区间分布比较分散，说明药材质量具有较大差异，也可以说明通过藁本内酯的含量检测可以有效评价当归药材的质量优劣。
上述各实施例中，高效液相色谱测定仪器：安捷伦1200高效液相色谱仪，配置G1315D二极管阵列检测器（DAD），G1311A四元泵。大连依利特公司生产的SinoChrom ODS-BP（5 μm，4.6 mm × 250 mm）色谱柱。色谱条件：流动相由甲醇和水组成，其体积比为：水（A）：甲醇（B）= 35:65（v/v），流速：1 mL/min；测定波长：环丙藁本在232 nm定量检测，藁本内酯在330 nm下进行定量检测。

Claims (6)

1.一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：具体工艺如下：
（1）供试品溶液的制备：将中药材或中成药粉碎并过四号药典筛；将中药材或中成药粉末与环丙胺加入到甲醇中，在0~60℃水浴中电磁搅拌提取/反应5~20 min；再超声提取2~10min，然后继续在0~60℃水浴中电磁搅拌提取/反应30~90 min，反应物抽滤后甲醇洗脱三次，合并洗脱溶液；稀释至环丙藁本的浓度为80 µg/mL ~ 400 µg/mL，作为供试品溶液；药材粉末按0.05 g/mL~0.5 g/mL加入到甲醇中；中药材或中成药粉末与环丙胺的质量体积比为0.1 g/mL ~0.77 g/mL；
（2）HPLC外标法测定供试品溶液中环丙藁本含量：HPLC外标法测定环丙藁本含量的色谱条件：流动相由甲醇和水组成，且甲醇和水的体积比为35:65，进样量：20μL，流速：1 mL/min；测定波长：200~400 nm；
（3）通过等摩尔量计算，间接得到中药材或中成药中藁本内酯的含量。
2.如权利要求1所述一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：中药材为当归、川芎、藁本。
3.如权利要求1所述一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：中成药为当归丸、当归腹痛宁、浓缩当归丸、川芎茶调丸、舒脑欣滴丸、速效救心丸、冠心宁。
4.一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：具体工艺如下：
（1）供试品溶液的制备：将中药材或中成药粉碎并过四号药典筛，将中药材或中成药粉末加入甲醇中进行超声提取得到藁本内酯提取液；然后取藁本内酯提取液加入环丙胺，在室温下搅拌反应使藁本内酯完全转化；反应溶液直接作为供试品溶液；中药材或中成药粉末按0.012~0.02 g/mL加入到甲醇中；供化学转化的藁本内酯提取液的体积为0.5 mL，环丙胺的加入量为0.1 mL ~ 0.5 mL；超声提取的功率为100 W~500 W，50 Hz，超声温度为10℃~55℃，提取时间为15 ~ 60 min，反应温度为0℃~ 40℃，反应时间为0.5~2 h；
（2）HPLC外标法测定供试品溶液中环丙藁本含量：HPLC外标法测定环丙藁本含量的色谱条件：流动相由甲醇和水组成，且甲醇和水的体积比为35:65，进样量：20μL；流速：1 mL/min；测定波长：200~400 nm；
（3）通过等摩尔量和/或校正系数法计算，间接得到中药材或中成药中藁本内酯的含量，校正因子的范围为1.017 ~ 1.065。
5.如权利要求4所述一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：中药材为当归、川芎、藁本。
6.如权利要求4所述一种通过化学转化法间接测定中药材或中成药中藁本内酯含量的方法，其特征在于：中成药为当归丸、当归腹痛宁、浓缩当归丸、川芎茶调丸、舒脑欣滴丸、速效救心丸、冠心宁。
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