CN102735785A - 一种中药组合物的气相色谱指纹图谱检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药分析领域，具体涉及对桂枝茯苓药物组合物进行气相色谱指纹图谱检测的方法。色谱条件与系统适应性试验为：毛细管柱；进样口温度为220～240℃；氢火焰离子化检测器，温度为230～250℃；柱温为70～90℃，保持2～4min，以15～25℃/min速度升温至150～170℃，保持5～7min，以25～35℃/min速度升温至240～260℃，保持13～15min；分流比为20～30∶1；N2流速为0.5～2.0mL/min；理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000；该方法可以更为全面检测药物的质量，可以更加有利于对药物质量的控制，且该方法精密度高、稳定性好、重复性好。
Description
技术领域：
本发明属于中药分析领域，涉及一种中药组合物的气相色谱指纹图谱检测方法，具体涉及对一种由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物进行气相色谱指纹图谱检测的方法。
背景技术：
桂枝茯苓药物组合物由中药桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁五味原料药材制成，具有活血化瘀、缓消癥块的功效，临床主要用于治疗慢性盆腔炎、痛经、子宫肌瘤等疾病。该中药组合物的胶囊制剂已获得中国国家食品药品监督管理局批准上市销售，药品的通用名称为桂枝茯苓胶囊，药品批准文号为国药准字Z10950005。
本发明的申请人对桂枝茯苓药物组合物的制备工艺进行了研究，并申请中国发明专利，申请号为200310116836.X，公开号为CN1546129。之后申请人对该桂枝茯苓药物组合物的质量检测方法进行了研究，并也申请了中国发明专利，申请号为200410000136.9，公开号为CN1556404。
2010版《中国药典》一部在984页至986页中提供了桂枝茯苓丸和桂枝茯苓胶囊制备方法，还提供了采用高效液相色谱法对桂枝茯苓胶囊(丸)中肉桂酸、丹皮酚、芍药苷、苦杏仁苷进行含量测定的方法，此外，还提供了采用高效液相色谱法对桂枝茯苓胶囊进行指纹图谱检测的方法。
冯燕芹等人于1994年在《中国药科大学学报》上发表论文《气相色谱法测定桂枝茯苓胶囊中丹皮酚的含量》，该论文提供了采用一种气相色谱法，以正十五烷为内标物对桂枝茯苓胶囊中的丹皮酚进行含量测定的方法。赖文豪于2007年在《海峡药学》杂志社发表论文《毛细管气相色谱法测定桂枝茯苓胶囊中丹皮酚含量》，该论文提供了一种采用毛细管气相色谱法测定桂枝茯苓胶囊中丹皮酚含量的方法。郭晓玲于1999年在《中药材》杂志社发表论文《桂枝茯苓胶囊中桂皮醛和丹皮酚的含量》，该论文提供了一种采用毛细管气相色谱法，以正十八烷为内标物，对桂枝茯苓胶囊中桂皮醛和丹皮酚的含量同时进行测定的方法。
综上，现有技术中已有对桂枝茯苓药物组合物进行高效液相色谱指纹图谱的检测方法，在该方法中尽管可以对药物组合物中挥发性成分进行检测，但并不全面。对于挥发性成分的检测，比较好的方法是采用气相色谱法。同时，现有技术中，虽也有对该药物进行气相色谱法检测的方法，但是所检测的成分都比较单一，一般是一种或两种成分，如桂皮醛或丹皮酚，仅仅依靠这两种成分不能全面反映桂枝茯苓药物组合物的实际质量。
为了更全面地反应桂枝茯苓药物组合物实际质量，本发明将指纹图谱技术和气相色谱检测方法相结合，建立了一种采用气相色谱法对桂枝茯苓药物组合物进行指纹图谱检测的方法，该方法可以更为全面检测药物的质量，提高产品的质量控制水平。
发明内容：
本发明的目的是提供一种对由中药桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物进行气相色谱指纹图谱检测的方法。
本发明是通过以下技术方案来实现本发明目的的：
一种由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物的气相色谱指纹图谱检测的方法，该方法的色谱条件与系统适应性试验为：选用毛细管柱；进样口温度为220～240℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为230～250℃；柱温为70～90℃，保持2～4min，以15～25℃/min速度升温至150～170℃，保持5～7min，以25～35℃/min速度升温至240～260℃，保持13～15min；分流比为20～30∶1；N2流速为0.5～2.0mL/min；理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000；
参照物溶液的制备方法为：取丹皮酚对照品加乙醚配制成参照物溶液；
供试品溶液的制备方法为：取供试品加入水和乙醚，水浴回流，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取，萃取液与之前得到的乙醚层溶液合并，制成供试品溶液；
进样检测的方法为：分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入气相色谱仪，测定。
该检测方法中参照物溶液的制备方法优选为：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含0.2～2.0mg的溶液。
更为优选的参照物溶液的制备方法为：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含1mg的溶液。
该检测方法中供试品溶液的制备方法优选为：取供试品2.0～5.0g，加入40～60mL水和20～40mL乙醚，65～85℃水浴回流0.5～2.0h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取1～3次，每次加入乙醚20～40mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，25～45℃挥发至3～7mL，即为供试品溶液。
更为优选的供试品溶液的制备方法为：取供试品3.5g，加入50mL水和30mL乙醚，75℃水浴回流1.5h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取两次，每次加入乙醚30mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，35℃挥发至5mL，得到供试品溶液。
该检测方法中进样口温度优选230℃，检测器温度优选240℃，柱温优选为：80℃，保持3min，以20℃/min速度升温至160℃，保持6min，以30℃/min速度升温至250℃，保持14min；分流比优选为25∶1；N2流速优选为1.0mL/min。
该检测方法中进样检测的方法优选为：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5～20μL，注入气相色谱仪，测定。
更为优选的进样检测方法的为：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μL，注入气相色谱仪，测定。
本发明提供的气相色谱指纹图谱检测的方法用于在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物检测之中，其检测结果为指纹图谱中有11个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：1号峰为0.500～0.850、2号峰为0.550～0.900、3号峰为0.600～0.950、4号峰为0.630～0.970、5号峰为0.750～0.995、S为号峰1、6号峰为1.010～1.400、7号峰为1.050～1.450、8号峰为1.110～1.600、9号峰为1.250～2.000、10号峰为1.350～2.100，S号峰是参照物的色谱峰。
本发明提供的气相色谱指纹图谱检测的方法用于在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物检测之中，其检测结果为指纹图谱中有11个共有峰，其中主要的1号峰、3号峰、5号峰、S号峰、9号峰、10号峰的相对峰面积分别为：1号峰为0.050～0.180、3号峰为0.070～0.450、5号峰为0.040～0.150、S为号峰1、9号峰为0.010～0.060、10号峰为0.040～0.250，S号峰是参照物的色谱峰。
对本发明的提供的桂枝茯苓中药组合物气相指纹图谱的研究与说明：
以桂枝茯苓胶囊为例，发明人对本发明的提供的技术方案进行了实验研究，用来证明本发明的技术效果，下述实验用于进一步说明本发明的技术效果，但不限制本发明。
1仪器与试药
Agilent6890气相色谱仪
丹皮酚(中国药品生物制品检定所，批号：110708-200506)
乙醚、无水乙醇：分析纯(AR)，南京化学试剂有限公司
桂枝茯苓胶囊(090601、090701、090901、091001、091204、100201、100301、100401-1、100401-2、100501)
2色谱条件
主要是考察桂枝茯苓胶囊在不同的程序升温过程中分离的情况。
取桂枝茯苓胶囊约3.5g，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，75℃水浴回流1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并乙醚液，35℃水浴挥至适量，乙醚定容至5mL，即得。
程序升温I：80℃，保持5min，以30℃/min速度，升至250℃，保持10min。色谱图见附图1。
程序升温II：80℃，保持3min，以20℃/min速度，升至160℃，保持6min，以50℃/min速度，升至250℃，保持25min。色谱图见附图2。
程序升温III：90℃，保持3min，以14℃/min速度，升至160℃，保持6min，以50℃/min速度，升至250℃，保持28min。色谱图见附图3。
程序升温IV：80℃，保持3min，以20℃/min速度，升至160℃，保持6min，以30℃/min速度，升至250℃，保持24min。色谱图见附图4。
通过上述四个程序升温对比试验，可以看出四个程序升温系统均可行，其中程序升温IV系统，色谱峰数比较多，峰形较好。
3参照物制备 丹皮酚是桂枝茯苓胶囊中最主要的特征性成分之一，在气相指纹图谱中所占的比例较大且较稳定，峰型较好，保留时间适当。因此选择丹皮酚作为参照物。参照物丹皮酚购自中国药品生物制品检定所。取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含1mg的溶液。参照物(对照品)色谱图见附图5。
4供试品溶液的制备：
4.1提取方法的选择
(1)取本品胶囊约3.5g，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，75℃水浴回流1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并萃取液，并与前乙醚层合并，35℃挥至5mL，即得。色谱图见附图6。
(2)取本品胶囊约1.0g，精密称定，加无水乙醇50mL，75℃水浴回流1h，过滤，取续滤液，即得。色谱图见附图7。
结果表明：用乙醚和无水乙醇提取均可，其中用乙醚提取，出峰较多，峰形较好。
4.2提取时间的选择
取本品胶囊约3.5g，3份，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，分别75℃水浴回流0.5h、1.0h、1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并萃取液，并与前乙醚层合并，35℃挥至5mL，即得。
提取0.5h所得供试品的色谱图见附图8，提取1.0h所得供试品的色谱图见附图9，提取1.5h所得供试品的色谱图见附图10。
由图谱可以看出，提取0.5h～1.5h均能达到较好的效果，其中提取时间为1.5h时，信息表达较为完整。
经过优选确定供试品的制备方法为：本品胶囊约3.5g，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，75℃水浴回流1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并萃取液，并与前乙醚层合并，35℃挥至5mL，即得。
桂枝茯苓胶囊气相指纹色谱图见附图11。
5精密度试验
取本品胶囊内容物约3.5g，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，75℃水浴回流1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并萃取液，并与前乙醚层合并，35℃挥至适量，乙醚定容至5mL，即得。精密吸取供试品2μL，重复进样6次，测得峰面积积分值，计算RSD分别为1.24％、0.87％、0.93％、7.54％、1.04％、0.98％、1.43％、2.15％、2.20％、3.88％、2.45％。
表2 精密度试验
6稳定性试验
本品胶囊约3.5g，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，75℃水浴回流1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并萃取液，并与前乙醚层合并，35℃挥至适量，乙醚定容至5mL，即得。精密吸取供试品2μL，分别第0、2、4、6、8、10小时进样一次，共进样6次，测得峰面积积分值，测得峰面积积分值，计算RSD分别为4.46％、3.23％、4.12％、2.20％、4.35％、3.95％、4.15％、4.00％、3.50％、4.78％、4.52％。
表3 稳定性试验
表4 稳定性试验结果(相对峰面积、相对保留时间)
7重复性试验
本品胶囊约3.5g，6份，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，75℃水浴回流1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并萃取液，并与前乙醚层合并，35℃挥至适量，乙醚定容至5mL，即得。精密吸取供试品2μL，测定。
表5 重复性试验结果
8十批成品的气相指纹图谱
取桂枝茯苓胶囊(090601、090701、090901、091001、091204、100201、100301、100401-1、100401-2、100501)各约3.5g，精密称定，加水50mL，乙醚30mL，75℃水浴回流1.5h，分出乙醚层，水层用乙醚萃取两次(30mL/次)，合并萃取液，并与前乙醚层合并，35℃挥至适量，乙醚定容至5mL，即得。精密吸取供试品2μL，测定。10批成品的气相指纹图谱见附图12、13。
8.1相对保留值指纹图谱的建立
采用相对保留时间和相对峰面积标定指纹峰，以图谱中丹皮酚为参照物(S)，将各指纹峰保留时间及峰面积与同一图谱中参照物的保留时间和峰面积(设定为1)比较，其比值为各指纹峰的相对保留时间和相对峰面积。计算10批成品指纹图谱中各指纹峰的技术参数。
表6 十批成品共有峰的相对保留时间、相对峰面积比较
由上表可以看出不同批次的成品各峰相对保留时间一致性较好，其相对标准偏差均不大于0.86％。
8.2指纹图谱相似度分析
利用用中国药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，使中位数法计算，对所得的气相指纹图谱全谱进行相似度计算，结果见下表。从中可以看出，色谱图的整体相似度介于0.964～1.000之间。10批桂枝茯苓胶囊成品具有很高的相似度。
表7 十批桂枝茯苓胶囊成品相似度
本发明的有益效果：
1.现有技术中已有对桂枝茯苓药物组合物进行高效液相色谱指纹图谱的检测方法，在该方法中尽管可以对药物组合物中挥发性成分进行检测，但并不全面。对于挥发性成分的检测，比较好的方法是采用气相色谱法。同时，现有技术中，虽也有对该药物进行气相色谱法检测的方法，但是所检测的成分都比较单一，一般是一种或两种成分，如桂皮醛或丹皮酚，仅仅依靠这两种成分不能全面反映桂枝茯苓药物组合物的实际质量。
为了更全面地反应桂枝茯苓药物组合物实际质量，本发明将指纹图谱技术和气相色谱检测方法相结合，建立了一种采用气相色谱法对桂枝茯苓药物组合物进行指纹图谱检测的方法，该方法可以更为全面检测药物的质量，提高产品的质量控制水平。
2.本发明提供的气相指纹图谱检测方法，操作简便，用时少，效率高，而且该检测方法精密度高、稳定性好、重复性好，能够达到全面、有效地检测桂枝茯苓药物组合物质量的目的，提高了对药物的质量检测的水平。
附图说明：
附图1：采用程序升温I过程进行检测所得到的色谱图
附图2：采用程序升温II过程进行检测所得到的色谱图
附图3：采用程序升温III过程进行检测所得到的色谱图
附图4：采用程序升温IV过程进行检测所得到的色谱图
附图5：参照物(对照品)色谱图
附图6：供试品采用乙醚提取后进行检查所得到的色谱图
附图7：供试品采用无水乙醇提取后进行检查所得到的色谱图
附图8：供试品提取0.5h后进行检测所得到的色谱图
附图9：供试品提取1.0h后进行检测所得到的色谱图
附图10：供试品提取1.5h后进行检测所得到的色谱图
附图11：桂枝茯苓胶囊气相指纹色谱图
附图12：10批成品的气相指纹图谱(二维)
附图13：10批成品的气相指纹图谱(三维)
附图14：实施例1药物经本发明检测方法检测所得的指纹图谱
附图15：实施例2药物经本发明检测方法检测所得的指纹图谱
附图16：实施例3药物经本发明检测方法检测所得的指纹图谱
附图17：实施例4药物经本发明检测方法检测所得的指纹图谱
附图18：实施例5药物经本发明检测方法检测所得的指纹图谱
具体实施方式：
实施例1：
(1)色谱条件与系统适应性试验：选用毛细管柱；进样口温度为220℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为230℃；柱温为70℃，保持2min，以15℃/min速度升温至150℃，保持5min，以25℃/min速度升温至240℃，保持13min；分流比为20∶1；N2流速为0.5mL/min；理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000。
(2)参照物溶液的制备方法：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含0.2mg的溶液，以丹皮酚为参照物。
(3)供试品溶液的制备方法：取桂枝茯苓丸2.0g，加入40mL水和20mL乙醚，65℃水浴回流1.0h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取1次，每次加入乙醚20mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，25℃挥发至3mL，即为供试品溶液。
(4)进样检测的方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5μL，注入气相色谱仪，测定。
(5)检测结果：结果如下表，色谱图见附图14。
实施例2：
(1)色谱条件与系统适应性试验：选用毛细管柱；进样口温度为225℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为235℃；柱温为75℃，保持2.5min，以18℃/min速度升温至155℃，保持5.5min，以28℃/min速度升温至245℃，保持13.5min；分流比为23∶1；N2流速为0.8mL/min理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000。
(2)参照物溶液的制备方法：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含0.6mg的溶液，以丹皮酚为参照物。
(3)供试品溶液的制备方法：取本发明所述桂枝茯苓药物组合物约3.0g，加入45mL水和25mL乙醚，70℃水浴回流0.5h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取2次，每次加入乙醚25mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，30℃挥发至4mL，即为供试品溶液。
(4)进样检测的方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定。
(5)检测结果：结果如下表，色谱图见附图15。
实施例3：
(1)色谱条件与系统适应性试验：选用毛细管柱；进样口温度为230℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为240℃；柱温为80℃，保持3min，以20℃/min速度升温至160℃，保持6min，以30℃/min速度升温至250℃，保持14min；分流比为25∶1；N2流速为1.0mL/min；理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000。
(2)参照物溶液的制备方法：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含1mg的溶液，以丹皮酚为参照物。
(3)供试品溶液的制备方法：取桂枝茯苓胶囊3.5g，加入50mL水和30mL乙醚，75℃水浴回流1.0h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取两次，每次加入乙醚30mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，35℃挥发至5mL，即为供试品溶液。
(4)进样检测的方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μL，注入气相色谱仪，测定。
(5)检测结果：结果如下表，色谱图见附图16。
实施例4：
(1)色谱条件与系统适应性试验：选用毛细管柱；进样口温度为235℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为245℃；柱温为85℃，保持3.5min，以23℃/min速度升温至165℃，保持6.5min，以33℃/min速度升温至255℃，保持14.5min；分流比为28∶1；N2流速为1.5mL/min；理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000。
(2)参照物溶液的制备方法：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含1.5mg的溶液，以丹皮酚为参照物。
(3)供试品溶液的制备方法：取桂枝茯苓片约4.0g，加入55mL水和35mL乙醚，80℃水浴回流1.5h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取2次，每次加入乙醚35mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，40℃挥发至6mL，即为供试品溶液。
(4)进样检测的方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入气相色谱仪，测定。
(5)检测结果：结果如下表，色谱图见附图17。
实施例5：
(1)色谱条件与系统适应性试验：选用毛细管柱；进样口温度为240℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃；柱温为90℃，保持4min，以25℃/min速度升温至170℃，保持7min，以35℃/min速度升温至260℃，保持15min；分流比为30∶1；N2流速为2.0mL/min；理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000。
(2)参照物溶液的制备方法：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含2.0mg的溶液，以丹皮酚为参照物。
(3)供试品溶液的制备方法：取本发明所述桂枝茯苓药物组合物约5.0g，加入60mL水和40mL乙醚，85℃水浴回流2.0h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取3次，每次加入乙醚40mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，45℃挥发至7mL，即为供试品溶液。
(4)进样检测的方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入气相色谱仪，测定。
(5)检测结果：结果如下表，色谱图见附图18。
Claims (11)
1.一种由中药桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物的气相色谱指纹图谱检测的方法，其特征在于：
色谱条件与系统适应性试验为：选用毛细管柱；进样口温度为220～240℃；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为230～250℃；柱温为70～90℃，保持2～4min，以15～25℃/min速度升温至150～170℃，保持5～7min，以25～35℃/min速度升温至240～260℃，保持13～15min；分流比为20～30∶1；N2流速为0.5～2.0mL/min；理论塔板数按参照物丹皮酚计算不得低于3000；
参照物溶液的制备方法为：取丹皮酚对照品加乙醚配制成参照物溶液；
供试品溶液的制备方法为：取供试品加入水和乙醚，水浴回流，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取，萃取液与之前得到的乙醚层溶液合并，制成供试品溶液；
进样检测的方法为：分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入气相色谱仪，测定。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，参照物溶液的制备方法为：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加乙醚配制成每1mL含0.2～2.0mg的溶液。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法为：取供试品2.0～5.0g，加入40～60mL水和20～40mL乙醚，65～85℃水浴回流0.5～2.0h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取1～3次，每次加入乙醚20～40mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，25～45℃挥发至3～7mL，即为供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，进样检测的方法为：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5～20μL，注入气相色谱仪，测定。
5.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于：进样口温度为230℃，检测器温度为240℃。
6.根据权利要求1所述检测方法中的柱温，其特征在于，柱温为：80℃，保持3min，以20℃/min速度升温至160℃，保持6min，以30℃/min速度升温至250℃，保持14min。
7.根据权利要求1所述检测方法中的分流比，其特征在于：分流比为25∶1。
8.根据权利要求1所述检测方法中的N2流速，其特征在于：N2流速为1.0mL/min。
9.根据权利要求3所述检测方法中供试品溶液的制备方法，其特征在于：取供试品3.5g，加入50mL水和30mL乙醚，75℃水浴回流1.5h，分离出乙醚层溶液和水层溶液，乙醚层溶液备用；水层溶液用乙醚萃取两次，每次加入乙醚30mL，合并萃取液，并与之前得到的乙醚层溶液合并，35℃挥发至5mL，得到供试品溶液。
10.根据权利要求1所述的气相色谱指纹图谱检测的方法，其特征在于：该方法在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物检测中的应用，其检测结果为指纹图谱中有11个共有峰，各共有峰的相对保留时间分别为：1号峰为0.500～0.850、2号峰为0.550～0.900、3号峰为0.600～0.950、4号峰为0.630～0.970、5号峰为0.750～0.995、S为号峰1、6号峰为1.010～1.400、7号峰为1.050～1.450、8号峰为1.110～1.600、9号峰为1.250～2.000、10号峰为1.350～2.100，S号峰是参照物的色谱峰。
11.根据权利要求1所述的气相色谱指纹图谱检测的方法，其特征在于：该方法在由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、桃仁为原料药制成的中药组合物检测中的应用，其检测结果为指纹图谱中有11个共有峰，其中1号峰、3号峰、5号峰、S号峰、9号峰、10号峰的相对峰面积分别为：1号峰为0.050～0.180、3号峰为0.070～0.450、5号峰为0.040～0.150、S为号峰1、9号峰为0.010～0.060、10号峰为0.040～0.250，S号峰是参照物的色谱峰。
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