CN107593461A

CN107593461A - 一种天花粉的组织培养快繁技术

Info

Publication number: CN107593461A
Application number: CN201711123273.5A
Authority: CN
Inventors: 李正美
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-11-14
Filing date: 2017-11-14
Publication date: 2018-01-19

Abstract

本发明公开了一种天花粉的组织培养快繁技术，天花粉为葫芦科植物，秋、冬两季采挖，以秋季采收者为佳。挖取根部，洗净，除去须根，刮去外皮，晒干。根呈不规则网柱形、纺锤形或瓣块状。表面黄白色或淡黄棕色，有纵皱纹，细根痕及凹陷的横向皮孔。气无，味微苦。以块大、色白、粉性足、质坚、细腻、筋脉少者为佳。含天花粉蛋白，还含有淀粉、皂苷、谷氨酸、精氨酸。以天花粉带腋芽茎段为外植体建立了天花粉离体快繁体系，为解决天花粉规模化生产奠定基础。本发明以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了天花粉的组织培养快速繁殖，为天花粉的产业化发展提供技术支持。

Description

一种天花粉的组织培养快繁技术

技术领域

本发明属于植物组织培养类，具体地说，涉及一种天花粉的组织培养快繁技术。

背景技术

天花粉为葫芦科植物，栝楼、日本栝楼的干燥根。主产河南、湖北、山东、江西。秋、冬两季采挖，以秋季采收者为佳。挖取根部，洗净，除去须根，刮去外皮，纵剖成2~4瓣，粗大者再横切，晒干。天花粉根呈不规则网柱形、纺锤形或瓣块状，长7~16cm，直径1.5~5.5cm。表面黄白色或淡黄棕色，有纵皱纹，细根痕及凹陷的横向皮孔。有的残存黄棕色外皮。质坚实，断面白色或黄白色，富粉性，横切面可见棕黄色导管小孔，略呈放射状排列，纵切面可见黄色筋脉纹。气无，味微苦。以块大、色白、粉性足、质坚、细腻、筋脉少者为佳。含天花粉蛋白，另外还含有淀粉、皂苷、谷氨酸、精氨酸等。具有清热生津，消肿排脓的功用。用于热病烦渴，肺热咳嗽，内热消渴，疮疡肿毒。传统的天花粉获取方法是野外采挖野生植物资源，易造成水土流失和严重土壤沙漠化。此外，天花粉种子主要来自野生，其品种混杂，种子稀缺，发芽极低，野生天花粉资源已不能适应规模化和标准化生产的需要，成为妨碍天花粉产业发展的最大瓶颈。国内外在植物资源、化学成分分析、生药鉴定、药理作用和临床应用、愈伤组织培养及再分化等方面做了大量的工作。但是，生产中仍然存在许多理论和实践急需解决的问题。为了谋求产业的发展，引领天花粉产业走向高技术、高规格、高水准的科技之路，组织培养已经成为目前研究和开发的热点。为促进天花粉产业化的发展。因此，非常有必要建立天花粉离体再生体系，为天花粉的产业化发展提供技术支持和提供优良种苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以天花粉带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了天花粉的组织培养快速繁殖的一种天花粉的组织培养快繁技术。

本发明的一种天花粉的组织培养快繁技术，包括以下的工艺步骤：

（1）外植体的处理：选取健壮天花粉植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成7.0长的带有4个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗4.5h，再用毛轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4.5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒34s后用无菌水洗7次，再用0.1%升汞溶液消毒13min，用无菌水冲洗9次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成4cm小段并接种到诱导培养基上,先在25℃条件下全暗培养7天，然后每天光照14小时，光照强度为3400lx，直至诱导形成丛生芽；

（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约4cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后每天光照19小时，光照强度为5200lx，置于培养温度为25℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽；

（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至5cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照19小时，光照强度为3400lx，培养温度为25℃的条件下培养直至长出根；

（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达5cm左右时，并且长出侧根，苗高7cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中。

步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+ 5mg/L NAA+ 4mg/L 6-BA+ 3mg/L KT+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8。

步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+5.0mg/L 6-BA+2.3mg/L NAA+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8。

步骤（5）所述的生根培养基为：MS+15mg/L KH₂PO₄+4.0%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.8。

本发明的优点是:以天花粉带腋芽茎段为外植体建立了天花粉离体快繁体系，为解决天花粉规模化生产奠定基础。本发明以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了天花粉的组织培养快速繁殖，为天花粉的产业化发展提供技术支持。技术易撑握，操作方便，得到的种苗健壮，生长发芽快，品种纯正，发芽率高，能满足市场需要提供技术支撑，工艺方法容易，操作简单，药效足。。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）外植体的处理：选取健壮天花粉植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成8厘米长的带有5个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗6h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒7s后用无菌水洗7次，再用0.1%升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。

（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3.8cm小段并接种到诱导培养基上,先在38℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3000lx条件下培养24天每个腋芽茎段有9个丛生芽。诱导培养基为：MS+6mg/L NAA+5mg/L 6-BA+0.9mg/LKT+4.8%蔗糖+6.8%琼脂+0.5%活性炭，pH值为5.8。

（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约6cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在32℃条件下全暗培养7天，然后每天光照18小时，光照强度为3500lx，置于培养温度为32℃的条件下培养22天增殖倍数达到11倍。多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为：MS+1.4mg/L 6-BA+0.9mg/L NAA+4.8%蔗糖+0.9%琼脂+0.5%活性炭，pH值为5.8。

（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至3.8cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在32℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2500lx，培养温度为32℃的条件下培养9天即可见根形成，诱导率达99.5%，平均根数达9条，根系为淡棕色、细长、分枝数少，培养24天后根长平均可达到9cm左右。所述的生根培养基为：MS+15.8mg/L KH₂PO₄+24.5%蔗糖+0.9%琼脂+0.5%活性炭，pH值为5.8。

（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达7cm左右时，并且长出侧根，苗高9cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中，成活率达97%以上。

实施例2：

（1）外植体的处理：选取健壮天花粉植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成10厘米长的带有7个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗9h，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗7h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒15s后用无菌水洗10次，再用0.1%升汞溶液消毒11min，用无菌水冲洗10次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。

（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3.8cm小段并接种到诱导培养基上,先在33℃条件下全暗培养9天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2700lx条件下培养28天每个腋芽茎段有10个丛生芽。诱导培养基为：MS+ 4.8mg/L NAA+ 1.8mg/L 6-BA+1.2mg/L KT+4.8%蔗糖+0.9%琼脂+0.15%活性炭，pH值为5.8。

（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约7cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在33℃条件下全暗培养8天，然后每天光照18小时，光照强度为3600lx，置于培养温度为33℃的条件下培养25天增殖倍数达到11倍。多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为：MS+1.9mg/L 6-BA+0.9mg/L NAA+4.8%蔗糖+0.9%琼脂+0.6%活性炭，pH值为5.8。

（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至4.8cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在33℃条件下全暗培养9天，然后每天光照18小时，光照强度为2600lx，培养温度为33℃的条件下培养12天即可见根形成，诱导率达100%，平均根数达6.0条，根系为淡棕色、细长、分枝数少，培养25天后根长平均可达到9cm左右。所述的生根培养基为：MS+18.5mg/L KH₂PO₄+3.0%蔗糖+0.9%琼脂+0.6%活性炭，pH值为5.9。

（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达8cm左右时，并且长出侧根，苗高9cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗11天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中，成活率达94%以上。

Claims

1.一种天花粉的组织培养快繁技术，其特征在于包括以下工艺步骤：

2. 根据权利要求1所述的一种天花粉的组织培养快繁技术，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+ 5mg/L NAA+ 4mg/L 6-BA+ 3mg/L KT+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8。

3. 根据权利要求1所述的一种天花粉的组织培养快繁技术，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+5.0mg/L 6-BA+2.3mg/L NAA+5%蔗糖+0.8%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8。

4. 根据权利要求1所述的一种天花粉的组织培养快繁技术，其特征在于步骤（5）所述的生根培养基为：MS+15mg/L KH₂PO₄+4.0%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.8。