CN107541532A - 一种5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物工程技术领域，特别涉及5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的微生物发酵制备及纯化的方法。本发明技术方案是以2,5‑二甲基吡嗪为原料，以发酵培养具有二甲苯单加氧酶活力的Arthrobacter woluwensis HW‑1菌株为催化剂，通过压缩空气带入二甲苯蒸汽的方式作为诱导剂，并适时分批补加原料，发酵转化一段时间获得含有5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的发酵液。本发明弥补了化学合成5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸工艺的不足，克服了摇瓶发酵转化率低的缺陷，首次提供发酵液中纯化5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的方法。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，特别涉及5-甲基吡嗪-2-羧酸的微生物发酵制备及纯化的方法。
背景技术
5-甲基吡嗪-2-羧酸（5-Methylpyrazine-2-carboxylic acid）是一种米白色固体结晶，CAS号为5521-55-1，分子式为C6H6N2O2，分子量138.12，熔点166～169℃，具有刺激性气味，暴露在空气中会缓慢氧化，由棕色油状物变为棕黑色粘稠状固体，需真空密封保存。
5-甲基吡嗪-2-羧酸结构式
5-甲基吡嗪-2-羧酸在医药工业主要用于合成降血糖药物格列吡嗪，目前格列吡嗪这一降血糖药物的市场需求量巨大，因此寻找一种制备5-甲基吡嗪-2-羧酸绿色环保的方法具有非常重要的现实意义，而对于生物发酵制备5-甲基吡嗪-2-羧酸及其纯化的研究就具有重要的实际应用价值。
目前5-甲基吡嗪-2-羧酸的工业生产是以化学法为主（陈炳和等, 化学试剂,2008, 30(11)：869-870; 董阳阳等, 化学试剂, 2013, 35(6):505～509)。但化学合成一般需要高温高压、惰性气体保护、大量使用氧化剂，合成过程中产生大量废弃物，污染环境。并且化学合成法的总收率低，成本高。
生物法制备5-甲基吡嗪-2-羧酸，底物选择性好，催化效率较高，杂质少，并且污染小，代表着绿色化学的发展方向。我公司成功利用Arthrobacter woluwensis（HW-1）生物发酵转化2,5-二甲基吡嗪制备获得格列吡嗪中间体5-甲基吡嗪-2-羧酸，并已申请专利（专利名称：一株产二甲苯单加氧酶的Arthrobacter woluwensis及其应用，申请号201610814722.X）。该专利公开了摇瓶技术生产菌体，直接添加二甲苯作为诱导剂，试验发现该技术菌体生长不好，发酵液比较澄清，影响生产效率。
发明内容
发明目的
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种适合工业化生产的生物法制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法。
本发明采用的技术方案是：
试验发现，申请号为201610814722.X的专利公开的技术中，以对二甲苯作为诱导剂，能获得高的生产效率。
一种5-甲基吡嗪-2-羧酸的制备方法，其特征在于：
以2,5-二甲基吡嗪为原料，以发酵培养具有二甲苯单加氧酶活力的Arthrobacter woluwensis HW-1菌株为催化剂，通过压缩空气带入二甲苯蒸汽的方式作为诱导剂（如图2所示），并适时分批补加原料，发酵转化一段时间获得含有5-甲基吡嗪-2-羧酸的发酵液。
发酵液经过处理，制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的纯化过程详见附图1.
具体步骤如下：
第一步 菌体种子液的制备
与已申请专利《一株产二甲苯单加氧酶的Arthrobacter woluwensis及其应用》中种子液制备方法一致。
第二步 二级种子液制备
与已申请专利《一株产二甲苯单加氧酶的Arthrobacter woluwensis及其应用》中菌体发酵过程一致。
第三步：上罐发酵及生物转化
将Arthrobacter woluwensis二级种子液以1~8%的接种量接到10 L发酵罐，通过压缩空气带入二甲苯蒸汽的方式，于200~650 rpm、20~40℃、pH 6.0~8.0培养4~10 h后，菌浓达到0.2~2.0时，向发酵罐内加入5~15 g原料2,5-二甲基吡嗪。
根据高效液相检测（柱子：C18柱，乙腈∶水：三氟乙酸＝12∶88∶0.5，流速 1 mL·min-1，检测波长270 nm，柱温25℃）发酵液中产物浓度和底物浓度，每间隔一定时间向发酵液中补加5~25 g原料2,5-二甲基吡嗪。
进行发酵转化过程中，间隔一定时间检测，当产物含量高于底物剩余量时，进行补加底物。
为使菌体具有持续的增殖和转化的活力，分批向发酵液中补加酵母粉营养液20~200 mL。
第四步：产物纯化
发酵液经4000~10000 rpm离心除去菌体，上清液于40~80℃、减压浓缩3~10倍后，向浓缩液中加入1~5倍体积的无水乙醇搅拌0~1 h后，静置3~18 h，使浓缩液中的蛋白类物质沉淀析出。通过4000~10000 rpm离心除去沉淀，并于40~80℃减压浓缩除去乙醇，得到产物浓度100~300 mg/mL的产物溶液作为析晶母液。析晶母液降温至0~30℃、开启搅拌50~300rpm，向析晶母液中缓慢滴加浓盐酸，调节pH至0.5~3.0，析晶0~6 h，抽滤得到产物晶体加入1~3倍体积蒸馏水室温打浆1~4 h后，抽滤晶体于40~90℃，烘干2~10 h，得到5-甲基吡嗪-2-羧酸。
本发明所述的一株产二甲苯单加氧酶的菌株为Arthrobacter woluwensis HW-1，该菌株的保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，菌种保藏编号为CGMCC 12833（专利名称：一株产二甲苯单加氧酶的Arthrobacter woluwensis及其应用，申请号201610814722.X）。
进行发酵转化过程中，间隔一定时间检测，当产物含量高于底物剩余量时，进行补加底物。
为使菌体具有持续的增殖和转化的活力，分批向发酵液中补加酵母粉营养液20~200 mL。
第四步：产物纯化
发酵液经4000~10000 rpm离心除去菌体，上清液于40~80℃、减压浓缩3~10倍后，向浓缩液中加入1~5倍体积的无水乙醇搅拌0~1 h后，静置3~18 h，使浓缩液中的蛋白类物质沉淀析出。通过4000~10000 rpm离心除去沉淀，并于40~80℃减压浓缩除去乙醇，得到产物浓度100~300 mg/mL的产物溶液作为析晶母液。析晶母液降温至0~30℃、开启搅拌50~300rpm，向析晶母液中缓慢滴加浓盐酸，调节pH至0.5~3.0，析晶0~6 h，抽滤得到产物晶体加入1~3倍体积蒸馏水室温打浆1~4 h后，抽滤晶体于40~90℃，烘干2~10 h，得到5-甲基吡嗪-2-羧酸。
本发明所述的一株产二甲苯单加氧酶的菌株为Arthrobacter woluwensis HW-1，该菌株的保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，菌种保藏编号为CGMCC 12833（专利名称：一株产二甲苯单加氧酶的Arthrobacter woluwensis及其应用，申请号201610814722.X）。
有益效果：
本发明的主要成果在于：利用我公司筛选获得的产二甲苯单加氧酶新菌株Arthrobacter woluwensis HW-1（菌种保藏编号为CGMCC 12833），通过生物发酵转化2,5-二甲基吡嗪制备获得格列吡嗪中间体5-甲基吡嗪-2-羧酸，在发酵罐内发酵转化并适时进行补料、补加营养，产物积累浓度可达30.1 g/L，摩尔转化率87.2%，比摇瓶发酵时摩尔转化率（81.4%）有较大提升，降低了生产成本。并且本发明创新气体补料（诱导剂）的方式，使得诱导剂的加入可控，利于上罐放大发酵顺利进行。使用本发明进行5-甲基吡嗪-2-羧酸的制备及纯化，反应条件温和、可控，环保节能，且反应综合收率较高；纯化步骤简便，可操作性强，不造成环保压力，具有良好的工业应用价值。
本发明在发酵罐水平通过更改对二甲苯给料方式，适时补充原料、补加营养，摩尔转化率达到87.2%，克服了摇瓶发酵无法放大的缺点，有更好地工业化应用前景。本发明对生物发酵制备格列吡嗪中间体5-甲基吡嗪-2-羧酸的罐上发酵工艺进行研究，创新了具有毒性的诱导剂添加的方式，克服了直接添加诱导剂发酵效果不好的缺点，并首次报道一种从发酵液中分离纯化5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法，完善生物法制备5-甲基吡嗪-2-羧酸工艺，为生物法制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的工业化打下坚实基础。
本发明弥补了化学合成5-甲基吡嗪-2-羧酸工艺的不足，克服了摇瓶发酵转化率低的缺陷，首次提供发酵液中纯化5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法。
（四）附图说明
图1 5-甲基吡嗪-2-羧酸的纯化工艺路线
图2为发酵过程中对二甲苯通入方式示意图
图3乙醇添加量对蛋白去除效果的影响
图4为静置时间对蛋白去除效果的影响
图5为析晶温度对产物含量和产物收率的影响（◆代表产物收率，▲代表产物含量）
图6为析晶pH对产物含量和产物收率的影响（◆代表产物收率，▲代表产物含量）
图7为析晶时间对产物含量和产物收率的影响（◆代表产物收率，▲代表产物含量）
图8为产物HPLC图谱
（五）具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施实例1：一级种子液制备
将Arthrobacter woluwensis种子接种到LB培养基中，在150 r·min-1、30℃下培养19h，获得种子液。其中此处所用LB种子培养基成分为蛋白胨10 g/L，酵母膏5 g/L，NaCl 10g/L，溶剂为水。
实施实例2：二级种子液制备
将Arthrobacter woluwensis种子液以2%的接种量接到100 mL发酵培养基中，在对二甲苯的诱导下，摇床转速150 r·min-1 、pH 7.0，30℃培养20 h，制备获得二级种子液。
所述的发酵培养基以对二甲苯为诱导剂，并且添加其他营养成分和微量元素。本发明中二级发酵培养基组成为：酵母粉0.6 g/L；蛋白胨1.2 g/L；硫酸铵 1.5 g/L；碳酸氢钠 1.3 g/L；磷酸二氢钾 1.2 g/L；氯化钠0.8 g/L；氯化镁 0.1 g/L；氯化钙 0.2 g/L；硫酸锌0.02 g/L；氯化锰 0.05 g/L；氯化铜 0.03 g/L；氯化镍0.01 g/L；EDTA·Na2·2H2O0.8 g/L；对二甲苯 0.3 mL/L，溶剂为水。
实施实例3：上罐发酵及生物转化
将Arthrobacter woluwensis二级种子液以6%的接种量接到10 L发酵罐，对二甲苯以压缩空气带入蒸汽的形式打入发酵罐，在对二甲苯诱导下，于400 rpm、30℃、pH 7.0培养6h后，菌浓达到1.0时，向发酵罐内加入20 g原料2,5-二甲基吡嗪。并根据液相检测（柱子：C18柱，乙腈∶水：三氟乙酸＝12∶88∶0.5，流速 1 mL·min-1，检测波长270 nm，柱温25℃）发酵液中产物浓度和底物浓度，当产物浓度占比超过50%时，适时向发酵液中补加20 g原料2,5-二甲基吡嗪。转化过程耗时360 h，15天，共计补加原料14次，摩尔转化率87.2%。
实施实例4：加入乙醇量对蛋白去除效果影响
发酵液经5000 rpm离心除去菌体，收集上清液于60℃、减压浓缩一定倍数后，分别向浓缩液中加入1、2、3、4、5倍体积的无水乙醇搅拌10 min后，静置12 h，使浓缩液中的蛋白类物质沉淀析出。通过5000 rpm离心除去沉淀，收集上清液。测定溶液中蛋白浓度，如图3所示，加入 4倍体积无水乙醇能够较好的达到除去乙醇的目的。
实施实例5：静置时间对蛋白去除效果影响
发酵液经5000 rpm离心除去菌体，收集上清液于60℃、减压浓缩一定倍数后，分别向浓缩液中加入4、倍体积的无水乙醇搅拌10 min后，静置3、6、9、12、15、18 h，使浓缩液中的蛋白类物质沉淀析出。通过5000 rpm离心除去沉淀，收集上清液。测定溶液中蛋白浓度，如图4所示，静置8 h能够较好的达到除去乙醇的目的。
实施实例6：产物浓缩
上清液于50℃减压浓缩除去乙醇，并使得产物浓度进一步增加，达到200 mg/mL的产物溶液作为析晶母液。
实施实例7：析晶温度对产物收率和含量影响
析晶母液在100 rpm搅拌下，向析晶母液中缓慢滴加浓盐酸，调节pH至1.75，析晶温度分别设定为0、5、10、15、20、25、30℃，析晶处理2 h，得到产物晶体于70℃，烘干6 h，得到5-甲基吡嗪-2-羧酸。如图5所示，析晶温度为0~10℃对产物含量影响不大，设定析晶温度为5±5℃。
实施实例7：析晶pH对产物收率和含量影响
析晶母液在100 rpm搅拌下，向析晶母液中缓慢滴加浓盐酸，调节pH至1.25、1.5、1.75、2.0、2.25、2.5，析晶温度设定为5±5℃，析晶处理2 h，得到产物晶体于70℃，烘干6 h，得到5-甲基吡嗪-2-羧酸。如图6所示，析晶pH为1.75~2.0对结晶产率影响不大，产物含量也没有太大变化，可在此pH范围内析晶。
实施实例8：析晶时间对产物收率和含量影响
析晶母液在100 rpm搅拌下，向析晶母液中缓慢滴加浓盐酸，调节pH至1.9，析晶温度设定为5±5℃，析晶处理0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0 h，得到产物晶体于70℃，烘干6 h，得到5-甲基吡嗪-2-羧酸。如图7所示，析晶pH为2~6 h对结晶产率影响差异不大，设定析晶时间为2 h。
实施实例9：打浆纯化
取析晶产物加入1倍体积的蒸馏水，室温（25±5℃）打浆处理2 h，经抽滤获得精制产品。
实施实例10：产物烘干条件
析晶产物在70±5℃进行鼓风干燥或真空干燥6 h，得到符合质量要求的产物5-甲基吡嗪-2-羧酸。滴定法测定其产物含量在99%；如图8所示，液相检测其杂质情况符合质量标准，产物5-甲基吡嗪-2-羧酸的纯度为99.7%。
Claims (3)
1.一种5-甲基吡嗪-2-羧酸的制备方法，以2,5-二甲基吡嗪为原料，以发酵培养具有二甲苯单加氧酶活力的Arthrobacter woluwensis HW-1菌株为催化剂，其特征在于，通过压缩空气带入二甲苯蒸汽的方式作为诱导剂，并适时分批补加原料，发酵转化一段时间获得含有5-甲基吡嗪-2-羧酸的发酵液，进一步提纯得5-甲基吡嗪-2-羧酸。
2.根据权利要求1所述5-甲基吡嗪-2-羧酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步 菌体种子液的制备
与已申请专利《一株产二甲苯单加氧酶的Arthrobacter woluwensis及其应用》中种子液制备方法一致；
第二步 二级种子液制备
与已申请专利《一株产二甲苯单加氧酶的Arthrobacter woluwensis及其应用》中菌体发酵过程一致；
第三步：上罐发酵及生物转化
将Arthrobacter woluwensis二级种子液以1~8%的接种量接到10 L发酵罐，通过压缩空气带入二甲苯蒸汽的方式，于200~650 rpm、20~40℃、pH 6.0~8.0培养4~10 h后，菌浓达到0.2~2.0时，向发酵罐内加入5~15 g原料2,5-二甲基吡嗪；
第四步：产物纯化
发酵液经4000~10000 rpm离心除去菌体，上清液于40~80℃、减压浓缩3~10倍后，向浓缩液中加入1~5倍体积的无水乙醇搅拌0~1 h后，静置3~18 h，使浓缩液中的蛋白类物质沉淀析出；通过4000~10000 rpm离心除去沉淀，并于40~80℃减压浓缩除去乙醇，得到产物浓度100~300 mg/mL的产物溶液作为析晶母液；析晶母液降温至0~30℃、开启搅拌50~300rpm，向析晶母液中缓慢滴加浓盐酸，调节pH至0.5~3.0，析晶0~6 h，抽滤得到产物晶体加入1~3倍体积蒸馏水室温打浆1~4 h后，抽滤晶体于40~90℃，烘干2~10 h，得到5-甲基吡嗪-2-羧酸。
3.根据权利要求2所述5-甲基吡嗪-2-羧酸的制备方法，其特征在于，第三步在进行发酵转化过程中，间隔一定时间进行检测，当产物含量高于底物剩余量时，进行补加底物。
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|---|---|
| CN (1) | CN107541532A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108753862A (zh) * | 2018-06-27 | 2018-11-06 | 泰州市惠利生物科技有限公司 | 一种利用重组大肠杆菌连续发酵制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法 |
| CN109821268A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-05-31 | 泰州市惠利生物科技有限公司 | 一种5-甲基吡嗪-2-羧酸粗品的纯化方法 |
| CN110527656A (zh) * | 2019-09-04 | 2019-12-03 | 江南大学 | 高效合成5-甲基吡嗪-2-羧酸的工程菌及其构建方法及应用 |
| CN110684705A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-01-14 | 迪嘉药业集团有限公司 | 一种产5-甲基吡嗪-2羧酸的重组大肠杆菌 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102533599A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-04 | 浙江工业大学 | 一株产二甲苯单加氧酶的恶臭假单胞菌及其应用 |
| CN106399084A (zh) * | 2016-09-14 | 2017-02-15 | 冯艳忠 | 益生菌培养系统 |
| CN106434434A (zh) * | 2016-09-12 | 2017-02-22 | 迪沙药业集团有限公司 | 一株产二甲苯单加氧酶的菌株Arthrobacter woluwensis及其应用 |
-
2017
- 2017-09-29 CN CN201710903442.0A patent/CN107541532A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102533599A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-04 | 浙江工业大学 | 一株产二甲苯单加氧酶的恶臭假单胞菌及其应用 |
| CN106434434A (zh) * | 2016-09-12 | 2017-02-22 | 迪沙药业集团有限公司 | 一株产二甲苯单加氧酶的菌株Arthrobacter woluwensis及其应用 |
| CN106399084A (zh) * | 2016-09-14 | 2017-02-15 | 冯艳忠 | 益生菌培养系统 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 刘丽娟 等: "产二甲苯单加氧酶菌株的筛选、鉴定及转化2,5-二甲基吡嗪条件的优化", 《化学与生物工程》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108753862A (zh) * | 2018-06-27 | 2018-11-06 | 泰州市惠利生物科技有限公司 | 一种利用重组大肠杆菌连续发酵制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法 |
| CN109821268A (zh) * | 2019-03-06 | 2019-05-31 | 泰州市惠利生物科技有限公司 | 一种5-甲基吡嗪-2-羧酸粗品的纯化方法 |
| CN109821268B (zh) * | 2019-03-06 | 2021-06-22 | 江苏惠利生物科技有限公司 | 一种5-甲基吡嗪-2-羧酸粗品的纯化方法 |
| CN110527656A (zh) * | 2019-09-04 | 2019-12-03 | 江南大学 | 高效合成5-甲基吡嗪-2-羧酸的工程菌及其构建方法及应用 |
| CN110527656B (zh) * | 2019-09-04 | 2021-07-20 | 江南大学 | 高效合成5-甲基吡嗪-2-羧酸的工程菌及其构建方法及应用 |
| CN110684705A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-01-14 | 迪嘉药业集团有限公司 | 一种产5-甲基吡嗪-2羧酸的重组大肠杆菌 |
| CN110684705B (zh) * | 2019-10-31 | 2022-02-08 | 迪嘉药业集团有限公司 | 一种产5-甲基吡嗪-2羧酸的重组大肠杆菌 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20180105 |