CN107501378B - 一种甘胆酸聚乙二醇衍生物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种甘胆酸聚乙二醇衍生物及制备方法，该方法主要包括以下步骤：1)端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N‑甲氧基羰基马来酰亚胺在碱的作用下反应制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺中间体，其中端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N‑甲氧基羰基马来酰亚胺的摩尔比为1.1‑1.3:1；2)脱去氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺中间体的甲酸叔丁酯，得到端氨基聚乙二醇马来酰亚胺中间体；3)在缩合剂及碱的作用下，甘胆酸与端氨基聚乙二醇马来酰亚胺中间体反应得到甘胆酸聚乙二醇马来酰亚胺。该制备方法工艺流程短，反应操作简便，副反应少，成本低廉，该反应的选择性高，具有较高的产率。

Description

一种甘胆酸聚乙二醇衍生物及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种甘胆酸聚乙二醇衍生物及其制备方法。
背景技术
血清甘胆酸(cholyglycine，CG)是胆酸与甘氨酸结合而成的结合型胆酸之一。在肝细胞内，胆固醇经过极其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸(cholicacid，CA)和鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid，CD-CA)。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7和C12)，侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合，分子量为462U。胆酸由肝细胞合成，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物消化。95％的胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。肝细胞能高效地从门静脉摄取大量的甘胆酸，以致血液中的甘胆酸量小于1.9g/mL。重吸收的甘胆酸又进入肝肠循环。通过这种机制，机体能充分利用甘胆酸。在血清中胆酸主要以蛋白结合形式存在。正常情况下，外周血中胆酸含量甚微，正常成人无论空腹或餐后，其血清甘胆酸浓度稳定在低水平。一旦肝细胞病变，肝细胞摄取甘胆酸能力下降，血中的甘胆酸浓度升高，其中急性肝炎、慢性肝炎轻度升高，肝硬变，肝癌病人显著升高。胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流入血液循环的甘胆酸增加，也使血甘胆酸含量增高。因此，测定血清甘胆酸是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。
甘胆酸，外观为白色或类白色结晶性粉末，微溶于水，遇酸碱分解成甘氨酸和胆酸。可从胆汁或胆酸制取。用途：生化研究；脂酶加速剂；阴离子去除剂，用于蛋白质的溶解；制备细菌培养基(肠道细菌培养与分离)。肝胆酸的结构式如下所示：
在鼻腔给药系统中，由于鼻腔黏膜中小动脉、小静脉和毛细淋巴管分布丰富，鼻腔粘膜穿透性较高而酶相对较少，对蛋白质类药物分解作用低于肠胃粘膜，有利于药物吸收并直接进入体内循环，现有技术中已采用甘胆酸盐作为吸收促进剂来提高生物利用度。
聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)是由环氧乙烷与水或乙二醇逐步发生加成聚合而得到的一类分子量较低的水溶性聚醚。小分子量的低聚聚乙二醇为无色、无臭有吸湿性的粘稠液体，分子中既有醚链，又有羟基,故具有独特的溶解性能,能与水、醇混溶，微溶于醚。聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)近年来已广泛用于修饰生物大分子及小分子药物的结构。PEG修饰生物大分子或小分子药物后，能显著改善其水溶性和稳定性，减少肾脏滤过效应，从而延长药物在生物体内的循环时间。
现有技术中还未看到甘胆酸与PEG偶联的衍生物或其制备方法。
发明内容
鉴于甘胆酸微溶于水的特性，我们将甘胆酸通过短链亲水性PEG桥接起来，一方面使获得的偶联物易溶于水，便于生物体内的代谢研究；另外一方面是连接了另一活化基团，提供了另一个结合位点，提升了作用效率。
本发明的目的在于提供一种甘胆酸聚乙二醇衍生物及其制备方法，本发明是通过如下方式实现的：
一方面，提供一种甘胆酸聚乙二醇衍生物，其结构式为：
其n为1-12的整数。
另一方面，提供一种甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，主要包括以下步骤：1)端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺在第一碱的作用下反应制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺；2)脱去氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺上的甲酸叔丁酯，得到端氨基聚乙二醇马来酰亚胺；3)在缩合剂及第二碱的作用下，甘胆酸与端氨基聚乙二醇马来酰亚胺反应得到甘胆酸聚乙二醇马来酰亚胺。
进一步地，所述第一碱为碳酸氢钠、磷酸氢钾、磷酸氢钠、碳酸氢钾中的一种，所述第二碱为三乙胺、吡啶、二甲基氨基吡啶(DMAP)、三乙烯二胺中的一种。
更进一步地，所述第一碱为碳酸氢钠，所述第二碱为DMAP。
进一步地，所述步骤1)中端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺的摩尔比为1.1-1.3:1，所述制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺的反应温度为0-20℃，反应时间为1-4h。
更进一步地，所述步骤1)中端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺的摩尔比为1.1:1，所述制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺的反应温度为0℃，反应时间为2h。
进一步地，所述步骤2)是在有机溶剂和有机酸存在的条件下，于温度为18～26℃的温度下搅拌1～5h的条件下脱去氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺上的甲酸叔丁酯得到端氨基聚乙二醇马来酰亚胺。
更进一步地，所述有机溶剂为为氯仿、二氯甲烷或DMF中的一种；所述有机酸为甲酸、三氟乙酸、琥珀酸中的一种。
再进一步的，所述有机溶剂为为二氯甲烷，所述有机酸为三氟乙酸。
进一步地，所述步骤3)中的甘胆酸、端氨基聚乙二醇马来酰亚胺及缩合剂的摩尔比为1:1:1-2。
更进一步地，所述甘胆酸与端氨基聚乙二醇马来酰亚胺、缩合剂的摩尔比为1:1:1.5。
再进一步地，所述步骤3)中缩合剂为EDCI、HATU、DCC或TBTU中的至少一种。
还进一步地，所述缩合剂为HATU。
其反应式如下：
其中n为1-13的整数。
本发明具有以下有益效果：
1.该方法工艺流程短，反应操作简便，副反应少，产率高。
2.本发明一方面改善了甘胆酸的水溶性，另一方面引入马来酰亚胺的活化基团，增加了作用位点，提升了作用效率。
下面结合实施例描述本发明的结合物及其制备方法，它不限制本发明，本发明的范围由权利要求限定。
说明书附图
图1为实施例1-4得到甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺的核磁氢谱图；
图2为实施例6得到甘胆酸五缩六聚乙二醇马来酰亚胺的核磁氢谱图。
具体实施例
提供一种甘胆酸聚乙二醇衍生物，其结构式为：
其n为1-12的整数。
其甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，主要包括以下步骤：1)端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺在碳酸氢钠的作用下于反应温度为0-20℃，反应时间为1-4h反应制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺；其中端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺的摩尔比为1.1-1.3:1；2)在二氯甲烷和三氟乙酸存在的条件下，于温度为18～26℃的温度下搅拌1～5h的条件下脱去氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺上的甲酸叔丁酯得到端氨基聚乙二醇马来酰亚胺；3)在缩合剂及DMAP的作用下，且甘胆酸与端氨基聚乙二醇马来酰亚胺、缩合剂的摩尔比为1:1:1～2得条件下，甘胆酸与端氨基聚乙二醇马来酰亚胺反应得到甘胆酸聚乙二醇马来酰亚胺，其中缩合剂为EDCI、HATU、DCC或TBTU中的至少一种。
实施例1
(1)将20g端氨基一缩二聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取13.8gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在0℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌2h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到22g产物，产率：90％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.726(s，2H)；5.501(s，1H)；3.652～3.635(m，6H)；3.130(t，J＝4.8Hz，2H)；1.412(s，9H)；
(2)将步骤(1)22g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到13g产物，产率：91％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.721(s，1H)；6.701(s，2H)；5.530(s，1H)；3.650～3.635(m，6H)；3.132(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的13g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入32.8g甘胆酸，12.9gDMAP，40.7gHATU。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到37.9g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：89％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.806(s，2H)；4.010(t，J＝4.8Hz，2H)；3.652～3.615(m，6H)；3.330(t，J＝4.8Hz，2H)；3.160～3.172(m，3H)；2.181(t，J＝6.4Hz，2H)；1.551～1.530(m，10H)；1.480～1.475(m，8H)；1.412(s，2H)；1.362(t，J＝5.2Hz，2H)；1.100～1.015(m，3H)。
实施例2
(1)将20g端氨基一缩二聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取13.8gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在10℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌1h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到20.7g产物，产率：85％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.726(s，2H)；5.501(s，1H)；3.652～3.635(m，6H)；3.130(t，J＝4.8Hz，2H)；1.412(s，9H)；
(2)将步骤(1)20.7g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到13g产物，产率：93％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.712(s，1H)；6.711(s，2H)；5.520(s，1H)；3.650～3.633(m，6H)；3.132(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的13g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入32.8g甘胆酸，10.7g三乙胺，20.5gEDCI。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到35.6g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：80％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.806(s，2H)；4.010(t，J＝4.8Hz，2H)；3.652～3.611(m，6H)；3.320(t，J＝4.8Hz，2H)；3.160～3.172(m，3H)；2.181(t，J＝6.4Hz，2H)；1.541～1.530(m，10H)；1.480～1.475(m，8H)；1.412(s，2H)；1.352(t，J＝5.2Hz，2H)；1.102～1.015(m，3H)。
实施例3
(1)将20g端氨基一缩二聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取13.8gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在20℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌3h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到19.8g产物，产率：81％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.726(s，2H)；5.501(s，1H)；3.652～3.635(m，6H)；3.130(t，J＝4.8Hz，2H)；1.412(s，9H)；
(2)将步骤(1)19.8g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到11.7g产物，产率：91％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.721(s，1H)；6.706(s，2H)；5.532(s，1H)；3.653～3.635(m，6H)；3.122(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的11.7g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入29.5g甘胆酸，7.5g吡啶，30.9gTBTU。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到34.1g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：85％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.806(s，2H)；4.010(t，J＝4.8Hz，2H)；3.652～3.625(m，6H)；3.360(t，J＝4.8Hz，2H)；3.169～3.172(m，3H)；2.188(t，J＝6.4Hz，2H)；1.551～1.537(m，10H)；1.480～1.475(m，8H)；1.412(s，2H)；1.366(t，J＝5.2Hz，2H)；1.160～1.015(m，3H)。
实施例4
(1)将20g端氨基一缩二聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取13.8gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在0℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌4h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到21.5g产物，产率：88％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.726(s，2H)；5.501(s，1H)；3.658～3.633(m，6H)；3.170(t，J＝4.8Hz，2H)；1.422(s，9H)；
(2)将步骤(1)21.5g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到13g产物，产率：92％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.721(s，1H)；6.721(s，2H)；5.560(s，1H)；3.640～3.685(m，6H)；3.162(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的13g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入32.8g甘胆酸，11.8g三乙烯二胺，22.1gDCC。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到32g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：72％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.806(s，2H)；4.020(t，J＝4.8Hz，2H)；3.652～3.615(m，6H)；3.333(t，J＝4.8Hz，2H)；3.158～3.172(m，3H)；2.175(t，J＝6.4Hz，2H)；1.551～1.530(m，10H)；1.480～1.475(m，8H)；1.410(s，2H)；1.367(t，J＝5.2Hz，2H)；1.132～1.012(m，3H)。
实施例5
(1)将20g端氨基三缩四聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取9.6gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在0℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌2h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到23g产物，产率：90％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.726(s，2H)；5.541(s，1H)；3.663～3.630(m，14H)；3.110(t，J＝4.8Hz，2H)；1.402(s，9H)；
(2)将步骤(1)23g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到15.8g产物，产率：94％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.841(s，1H)；6.711(s，2H)；5.530(s，1H)；3.660～3.635(m，14H)；3.130(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的15.8g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入25.6g甘胆酸，9.2gDMAP，33.1gHATU。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到36.7g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：88％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.806(s，2H)；4.010(t，J＝4.8Hz，2H)；3.650～3.619(m，14H)；3.312(t，J＝4.8Hz，2H)；3.153～3.172(m，3H)；2.180(t，J＝6.4Hz，2H)；1.551～1.525(m，10H)；1.480～1.472(m，8H)；1.411(s，2H)；1.352(t，J＝5.2Hz，2H)；1.100～1.010(m，3H)。
实施例6
(1)将20g端氨基五缩六聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取6.3gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在0℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌2h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到16.8g产物，产率：90％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.693(s，2H)；5.534(s，1H)；3.658～3.630(m，22H)；3.110(t，J＝4.8Hz，2H)；1.415(s，9H)；
(2)将步骤(1)16.8g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到12.3g产物，产率：94％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.842(s，1H)；6.730(s，2H)；5.512(s，1H)；3.640～3.605(m，22H)；3.131(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的12.3g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入15.96g甘胆酸，5.4gDMAP，19.47gHATU。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到23.4g甘胆酸六缩七聚乙二醇马来酰亚胺，产率：85％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.710(s，2H)；4.021(t，J＝4.8Hz，2H)；3.650～3.619(m，22H)；3.315(t，J＝4.8Hz，2H)；3.150～3.172(m，3H)；2.177(t，J＝6.4Hz，2H)；1.549～1.523(m，10H)；1.480～1.470(m，8H)；1.421(s，2H)；1.353(t，J＝5.2Hz，2H)；1.101～1.015(m，3H)。
实施例7
(1)将20g端氨基六缩七聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取6.6gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在0℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌2h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到19.4g产物，产率：90％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.703(s，2H)；5.523(s，1H)；3.665～3.630(m，26H)；3.100(t，J＝4.8Hz，2H)；1.405(s，9H)；
(2)将步骤(1)19.4g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到14.6g产物，产率：94％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.841(s，1H)；6.710(s，2H)；5.532(s，1H)；3.660～3.635(m，26H)；3.130(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的14.6g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入16.8g甘胆酸，5.7gDMAP，20.6gHATU。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到26.1g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：85％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.704(s，2H)；4.011(t，J＝4.8Hz，2H)；3.650～3.614(m，26H)；3.310(t，J＝4.8Hz，2H)；3.150～3.172(m，3H)；2.181(t，J＝6.4Hz，2H)；1.551～1.523(m，10H)；1.480～1.470(m，8H)；1.411(s，2H)；1.355(t，J＝5.2Hz，2H)；1.100～1.012(m，3H)。
实施例8
(1)将20g端氨基九缩十聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取5.0gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在0℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌2h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到19.5g产物，产率：95％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.700(s，2H)；5.502(s，1H)；3.660～3.630(m，38H)；3.101(t，J＝4.8Hz，2H)；1.410(s，9H)；
(2)将步骤(1)19.5g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到15.6g产物，产率：95％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.871(s，1H)；6.702(s，2H)；5.530(s，1H)；3.658～3.635(m，38H)；3.125(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的15.6g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入14.9g甘胆酸，5.3gDMAP，16.6gHATU。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到24.4g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：87％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.704(s，2H)；4.005(t，J＝4.8Hz，2H)；3.647～3.614(m，50H)；3.310(t，J＝4.8Hz，2H)；3.148～3.172(m，3H)；2.181(t，J＝6.4Hz，2H)；1.546～1.523(m，10H)；1.480～1.471(m，8H)；1.410(s，2H)；1.351(t，J＝5.2Hz，2H)；1.101～1.012(m，3H)。
实施例9
(1)将20g端氨基十二缩十三聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯加入至100ml饱和碳酸氢钠中，称取4.1gN-甲氧基羰基马来酰亚胺，在0℃下，缓慢加入上述溶液中，并搅拌2h。TLC显示反应结束，乙酸乙酯萃取3次。无水硫酸钠干燥乙酸乙酯相，旋干，柱纯化，得到18.3g产物，产率：90％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.700(s，2H)；5.502(s，1H)；3.660～3.630(m，50H)；3.101(t，J＝4.8Hz，2H)；1.410(s，9H)；
(2)将步骤(1)18.3g产物溶于250ml二氯甲烷中，加入30ml三氟乙酸，20℃反应5h。TLC显示反应结束，旋干，硅胶柱纯化，得到15.4g产物，产率：97％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：8.871(s，1H)；6.702(s，2H)；5.530(s，1H)；3.658～3.635(m，38H)；3.125(t，J＝4.8Hz，2H)；
(3)将步骤(2)得到的15.7g产物加入到200ml四氢呋喃中，再加入10.9g甘胆酸，4.3gDMAP，13.4gHATU。室温搅拌24h。反应结束，饱和食盐水洗，二氯甲烷萃取3次，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱纯化，得到23.5g甘胆酸一缩二聚乙二醇马来酰亚胺，产率：90％。核磁数据如下：1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ：6.704(s，2H)；4.005(t，J＝4.8Hz，2H)；3.647～3.614(m，50H)；3.310(t，J＝4.8Hz，2H)；3.148～3.172(m，3H)；2.181(t，J＝6.4Hz，2H)；1.546～1.523(m，10H)；1.480～1.471(m，8H)；1.410(s，2H)；1.351(t，J＝5.2Hz，2H)；1.101～1.012(m，3H)。

Claims (12)

1.一种甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：1）端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺在第一碱的作用下反应制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺；2）脱去氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺上的甲酸叔丁酯，得到端氨基聚乙二醇马来酰亚胺；3）在缩合剂及第二碱的作用下，甘胆酸与端氨基聚乙二醇马来酰亚胺反应得到甘胆酸聚乙二醇马来酰亚胺，所述甘胆酸聚乙二醇马来酰亚胺的结构式为：，
n为1~12的整数。
2.根据权利要求1所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述第一碱选自碳酸氢钠、磷酸氢钾、磷酸氢钠及碳酸氢钾中的一种，所述第二碱选自三乙胺、吡啶、二甲基氨基吡啶及三乙烯二胺中的一种。
3.根据权利要求2所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述第一碱为碳酸氢钠，所述第二碱为二甲基氨基吡啶。
4.根据权利要求1~3任一项所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺的摩尔比为(1.1-1.3):1，所述制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺的反应温度为0℃-20℃，反应时间为1h-4h。
5.根据权利要求4所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤1）中端氨基聚乙二醇氨基甲酸叔丁酯与N-甲氧基羰基马来酰亚胺的摩尔比为1.1:1，所述制得氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺的反应温度为0℃，反应时间为2h。
6.根据权利要求1~3任一项所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤2）是在有机溶剂和有机酸存在的条件下，于温度为18℃~26℃的温度下搅拌1h~5h的条件下脱去氨基甲酸叔丁酯聚乙二醇马来酰亚胺上的甲酸叔丁酯得到端氨基聚乙二醇马来酰亚胺。
7.根据权利要求6所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为氯仿、二氯甲烷及DMF中的一种；所述有机酸为甲酸、三氟乙酸、琥珀酸中的一种。
8.根据权利要求7所述的一种甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为为二氯甲烷，所述有机酸为三氟乙酸。
9.根据权利要求1~3任一项所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中的甘胆酸、端氨基聚乙二醇马来酰亚胺及缩合剂的摩尔比为1:1:(1-2)。
10.根据权利要求9所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述甘胆酸与端氨基聚乙二醇马来酰亚胺、缩合剂的摩尔比为1:1:1.5。
11.根据权利要求10所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中缩合剂选自EDCI、HATU、DCC及TBTU中的至少一种。
12.根据权利要求11所述的甘胆酸聚乙二醇衍生物的制备方法，其特征在于，所述缩合剂为HATU。
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Denomination of invention: Cholyglycine polyethylene glycol derivative and preparation method of cholyglycine polyethylene glycol derivative

Effective date of registration: 20200318

Granted publication date: 20190514

Pledgee: Bank of Changsha Limited by Share Ltd science and Technology Branch

Pledgor: HUNAN HUATENG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: Y2020980000827