CN107494863B - 多功能固体饮料的制备方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多功能固体饮料的制备方法，该固体饮料以黄秋葵籽、麦芽、决明子为原料制备而成；所述黄秋葵籽：麦芽：决明子＝1～3:1～3:1～3的重量比。采用该方法制备而得的固体饮料具有类似咖啡的色泽、口感和芳香。本发明还同时提供了上述固体饮料的用途：抗氧化、清除亚硝酸盐、抑制乙酰胆碱酯酶。

Description

多功能固体饮料的制备方法及其用途

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及含有黄秋葵籽的多固体饮料及其制备方法。

背景技术

咖啡作为一种世界范围内极流行的饮品，具有独特的馥郁芳香，咖啡中的咖啡因、咖啡酸、绿原酸等各种活性物质也会对人体会产生很多影响。适量引用咖啡具有利尿、解酒、提神醒脑、缓解大脑和肌肉疲劳、缓解运动酸痛，保护肝脏、防胆结石以及延缓衰老等功效。但是由于不同人群的体质有着较大差异，咖啡会引起人精神亢奋，影响睡眠；咖啡成瘾，习惯大量饮用咖啡的人停止饮用咖啡后，会出现头痛、易怒、肌肉紧绷和神经过敏等症状；部分病患长期或大量饮用咖啡，可能会引发严重的心血管疾病、胃病；过量摄入咖啡因甚至有致癌的风险。因此咖啡由于其含咖啡因不宜于怀孕、哺乳期的妇女、儿童、老人及咖啡因敏感人群饮用。人们期待既享受咖啡的独特的风味，又无咖啡因的副作用，因此低咖啡因咖啡、代咖啡饮品应运而生。国内外也开展了利用麦芽、大豆蛋白、籼米基脂肪等原料通过美拉德反应制作而成各式各样咖啡替代品的研究。

随着生活水平的提高，人们对自身健康也越来越关注。对饮料的要求除了美味可口、营养丰富之外，还希望它们具有特定的功效，以有利于人体健康和提高生活质量。功能性饮料有着广泛的市场需求和巨大的消费空间。据统计，2003年全球功能性饮料销售额为260亿美元，2006年超过280亿美元。饮料根据其产品的形态分为软饮料(用食品原辅料、食品添加剂等加工成为液体制品)和固体饮料(用食品原辅料、食品添加剂等加工成为颗粒状、粉末状或块状等，供冲调或冲泡饮用的固态制品)。全球功能饮料基本上是由运动饮料(如“佳得乐”)、能量饮料(如“红牛”)，抗氧化饮料(如茶饮料)、人体免疫功能饮料(如氨基酸多肽类饮料)和其他类型功能饮料(主要为改善肠道菌群作用，如“养乐多”)组成，具有抑制乙酰胆碱脂酶、清除亚硝酸盐、抑制亚硝胺产生的功能饮料尚未见报道。

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今未明。据估计，我国2011年AD患者近600万，随着老年人口的急速增长，AD发病人数也逐年增多，到本世纪中叶将达到2000万。而在65岁人群中AD发病率为10％，75～84岁人群AD发病率为19％，而85岁人群中AD发病率比65～70岁人群的发病率高出14倍。AD已成为继心脑血管疾病和恶性肿瘤之后，是威胁人类健康的“第三大杀手”，极大影响患者及家人的生活品质。

乙酰胆碱(ACh)是一种重要的神经递质，ACh的含量会随着年龄的增加而下降，正常老人比青年时下降30％，而老年痴呆患者下降更为严重，可达70％～80％。所以，目前世界上较为接受的AD发病机制之一为“胆碱能学说”。该学说认为老年性痴呆症患者大脑内神经递质-乙酰胆碱的缺失是导致AD疾病的关键原因，乙酰胆碱的缺失会导致AD患者认知功能下降，记忆能力丧失。而乙酰胆碱酯酶(AChE)被认为是ACh分解的关键酶，它会催化乙酰胆碱的裂解反应，导致乙酰胆碱的缺失、神经信号传递失败。大量研究表明，乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)可通过减少ACh的水解而增加大脑海马和皮层ACh的含量，从而改善认知功能。因此，目前市场上老年痴呆的治疗药物主要是通过抑制AChE来提高患者体内的乙酰胆碱水平，从而减轻老年痴呆的症状，如用于治疗老年痴呆症的处方药盐酸多奈哌齐片(思博海)，其作用机制为抑制乙酰胆碱酯酶活性。但合成药物具有一定的毒副作用，而食物原料来源的天然产物，如生姜提取物(姜黄素)等，不仅在改善学习记忆能力和防治AD方面具有良好的作用，且具有结构多样性、毒性低。因此研究天然食物原料对乙酰胆碱酯酶的抑制作用，从而筛选出起到预防AD作用的天然食物原料，并进行产品开发亦愈来愈受关注。

亚硝酸盐、亚硝胺是公认的致癌物质，流行病调查显示长期亚硝酸盐及亚硝胺的摄入是诱发食道癌、胃癌、肝癌及鼻咽癌的主要因素。食物是人体摄入(亚)硝酸盐的主要来源，(亚)硝酸盐在食物中的存在，一方面来源于原料本身，一方面是加工过程中作为食品添加剂加入。近年来，由于化肥的不合理施用及环境等因素导致农产品中(亚)硝酸盐含量日趋上升。硝酸盐对人体的直接毒害虽然不大，但经细菌或酶作用易转化为亚硝酸盐。食物中硝酸盐摄入人体后大约有5％硝酸盐会在口腔中转换为具有毒性的亚硝酸盐。亚硝酸盐急性中毒会导致高铁血红蛋白症，使血液而失去携氧能力，因而引起组织缺氧中毒、呼吸中枢麻痹，严重时可窒息甚至死亡，婴儿尤为突出。亚硝酸盐在酸性环境中(如胃中)有仲胺、叔胺、酰胺及氨基酸存在时，即可形成具有强烈致癌作用的N-亚硝胺类化合物。GB2762－2005对粮食、蔬菜、酱腌菜、肉类中亚硝酸的含量都有严格的限定。因此控制食物中亚硝酸胺的前体化合物亚硝酸盐和硝酸盐成为世界各国普遍关注的重要课题。抑制亚硝化反应的关键步骤是及时清除亚硝酸盐，越来越多的研究表明，天然植物提取物对活性氮因子有较强的清除作用，例如苹果、猕猴桃、韭菜、大蒜、山楂等。因此研究天然食物原料清除亚硝酸盐作用，降低食源性(亚)硝酸盐对人体的危害，并进行产品开发亦逐步成为人们关注的热点。

黄秋葵(Okra，Hibiscus esculentus L.)，别名秋葵，属锦葵科秋葵属一年生草本植物，广泛栽培于我国湖南、湖北、广东等省，具有抗疲劳、健胃保肝、减少肺损伤、提高机体免疫力、利尿、增强血管扩张力、保护心脏等保健功能。即，秋葵含有丰富的营养物质，其中可溶性膳食纤维可以促进消化和胃肠道蠕动，改善便秘；锌、硒等微量元素，有抗氧化抗衰老的功效，也有益于抗肿瘤。其籽即黄秋葵籽中蛋白质和微量元素含量较高，且富含多种人体必需氨基酸，同时含有多种芳香物质极具风味，其感官性能和咖啡十分相似。

决明子(Cassiae Torae Semen)是豆科植物决明(Cassia obtusifolia L.)或小决明(Cassia tora L.)的干燥成熟籽，因其有明目之功效而命名，作为传统中药材，主治目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结。

麦芽(Malt，Fructus hordei germinatus)是大麦(Barley，Hordeum vulgare L.)成熟果实经发芽干燥的加工品，含有丰富的蛋白酶、糖化酶，具有行气消食，健脾开胃的功效。

2013105191246的发明《一种养颜抗疲劳果酱及其制作方法》告知：果酱原料按重量份组成如下：新鲜黄秋葵10-15份、番茄3-5份、维生素C1-2份、花生8-10份、决明子1-3份、梨汁50-60份、干银耳0.5-0.8份、红枣汁20-30份、白砂糖15-25份、葡萄糖粉7-10份、速溶绿茶粉4-6份、B-环状糊精2-3份、木糖醇20-30份、麦芽糖醇10-20份、食品添加剂1-2份、枣花蜜40-50份、果胶粉4-6份、稳定剂1-2份、水200-300份。本发明在补充营养的同时，起到美容养颜、抗疲劳的功效。选料高效、配方科学、品质优良、功效显著，是一款特别适合爱美人士的果酱。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种类似咖啡的色泽、口感和芳香的固体饮料的制备方法，该固体饮料具有抗氧化、清除亚硝酸盐、抑制乙酰胆碱酯酶等功能。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种多功能固体饮料的制备方法，该固体饮料以黄秋葵籽、麦芽、决明子为原料制备而成；

所述黄秋葵籽：麦芽：决明子＝1～3:1～3:1～3的重量比。

作为本发明的多功能固体饮料的制备方法的改进：黄秋葵籽、麦芽、决明子均为洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子。

作为本发明的多功能固体饮料的制备方法的进一步改进，洗净焙香为：将黄秋葵籽/麦芽/决明子分别进行如下步骤：先清水淋洗，去除表面灰尘，沥干后放入150～200℃的烤箱中烘焙21～28min，从而分别得洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子。

作为本发明的多功能固体饮料的制备方法的进一步改进：所述洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子的重量比为2：0.9～1.1：1.8～2.2(较佳为2:1:2)。

作为本发明的多功能固体饮料的制备方法的进一步改进：该固体饮料为速溶固体饮料，其制备方法为包括以下步骤：

1)、将洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子分别用粉碎机粉碎；

2)、将粉碎所得的黄秋葵籽干粉、麦芽干粉、决明子干粉按照2：0.9～1.1：1.8～2.2(较佳为2:1:2)混合均匀，得混合粉末；

3)、恒温浸提：

按1g/10～20ml的料液比，在混合粉末中加入蒸馏水，于70～100℃超声浸提20～40min；

4)、将浸提所得物过滤(从而去除固体颗粒杂质)，所得滤液经冷冻干燥后粉碎成干粉；得速溶固体饮料。

作为本发明的多功能固体饮料的制备方法的进一步改进：

所述步骤1)中：粉碎为至少能过80目的筛；

所述步骤4)中：采用180目滤布过滤；所得滤液在真空度0.1Pa，-40℃条件下进行真空冷冻干燥至含水率≤8％，然后粉碎成过100目的干粉。

作为本发明的多功能固体饮料的制备方法的进一步改进该固体饮料为现磨固体饮料，其制备方法为将洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子直接按2：0.9～1.1：1.8～2.2(较佳为2:1:2)重量比混合均匀，得现磨固体饮料。

本发明还同时提供了上述方法制备而得的多功能固体饮料的用途，其特征在于：抑制乙酰胆碱脂酶。

作为本发明的多功能固体饮料的用途的改进：用于抗氧化、清除亚硝酸盐、抑制乙酰胆碱酯酶。

在本发明中，速溶固体饮料的制备方法：原料→焙香→粉碎(80目)→按比例称重混合→恒温浸提→冷冻干燥→粉碎→包装；现磨固体饮料的方法：原料→焙香→按比例称重混合，饮用时用加入咖啡机中研磨冲泡。

本发明所得的现磨固体饮料饮用时加入咖啡机中研磨冲泡后饮用。

本发明所得的速溶固体饮料可直接冲泡饮用，也可以在冲泡时加入适量的糖、奶及其他食品配料调和口感。

本发明所得的固体饮料(包括现磨固体饮料、速溶固体饮料)具有类似咖啡的色泽、口感和芳香。其不含咖啡因及添加剂，具有健脾开胃、明目、抗氧化、清除亚硝酸盐、抑制亚硝胺生成、抑制乙酰胆碱酯酶活性等功效。

本发明采用黄秋葵籽、麦芽、决明子，通过焙烤工艺赋予三者类似咖啡的焦香气味，使用冷冻干燥工艺，将产品制成粉剂，最大限度保证原料中活性成分的活性。此固体饮料营养丰富、芳香浓郁，不含咖啡因。本发明所得产品，具有抗氧化、助消化、清除亚硝酸盐、抑制亚硝胺的生成等功能，是一种风味独特且有益健康，适合大众的的保健饮品。

综上所述，本发明以黄秋葵籽、决明子和麦芽为原料通过合理配伍，加工得到的固体饮料，具有类似咖啡的风味和口感，同时又具有抑制乙酰胆碱脂酶、清除亚硝酸盐、抑制亚硝胺生成等多种功能，该产品具有广泛的市场前景。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1为黄秋葵籽、麦芽、决明子及其混合物(实施例1)的水提物在不同稀释倍数下对超氧阴离子的清除作用比较；

横坐标为不同稀释倍数，纵坐标为对超氧阴离子的清除率(％)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1、一种速溶固体饮料的制备方法，依次进行以下步骤：

1)原料预处理：

精选黄秋葵籽、麦芽和决明子分别进行以下内容：先清水淋洗，去除表面灰尘，沥干，放入180℃的烤箱中烘焙26min，接着用粉碎机粉碎至≥80目干粉，备用；

2)称重混合：

将步骤1)粉碎所得的黄秋葵籽干粉、麦芽干粉、决明子干粉按照2:1:2混合均匀，得混合粉末；

3)恒温浸提：

按1g/10mL的料液比，在混合粉末中加入蒸馏水，于80～85℃超声浸提30min；

4)过滤、冷冻干燥、包装：

将浸提所得物采用180目滤布过滤(从而去除固体颗粒杂质)，所得滤液在真空度0.1Pa，-40℃条件下进行真空冷冻干燥，干燥至含水率≤8％，然后粉碎成过100目的干粉；包装即得作为成品的速溶固体饮料。

实施例2、将实施例1步骤2)改成：黄秋葵籽干粉、麦芽干粉、决明子干粉按照2:2:3混合均匀；其余等同于实施例1。

实施例3、将实施例1步骤2)改成：黄秋葵籽干粉、麦芽干粉、决明子干粉按照3:2:1混合均匀；其余等同于实施例1。

实施例4、将实施例1步骤2)改成：黄秋葵籽干粉、麦芽干粉、决明子干粉按照1:3:3混合均匀；其余等同于实施例1。

实验一、最佳风味配方的优化

1)、材料与方法

材料：黄秋葵籽、麦芽、决明子均为市售可得；

方法：按照本发明所述制备方法制作得到类咖啡固体饮料，设计3因素(黄秋葵籽、麦芽、决明子)3水平(1/2/3份)正交试验。精选黄秋葵籽、麦芽和决明子清水淋洗去除表面灰尘，沥干，分别放入180℃的烤箱中烘焙26min，焙香后粉碎机粉碎至≥80目干粉。按照表1因素—水平表的配比混合均匀，其余等同于实施例1，得到的固体饮料，以市售速溶雀巢咖啡为对照，取10克各配比固体饮料，加入100毫升热水，混匀，参照表3进行感官评价，感官评价结果为衡量指针，优化得到最佳配方。

表1、因素—水平表

表2、L₉(3⁴)正交试验表

依据表3所示的感官品质评价方法，将正交试验所得产品分别编号，由15位经验丰富的品评人员按感官鉴定标准评分，统计色泽、香气、滋味和体形的总分，即得产品感官指标得分。

表3、感官评定标准

2)结果分析如下：

表4、试样感官评分表

注：1、市售咖啡的得分为95±4分；2、.结果表示为平均值±绝对偏差。K1、K2、K3分别表示各因素各水平下不同比例的混合物感官评价得分的平均值(结果保留整数)。R表示同一因素各水平下平均值的极差(极差＝平均值最大值-平均值最小值)。极差越大，说明该因素对试验结果影响越大。

各组得分均值如上表4所示。其中试验组4的得分最高，为90±3分，对照市售速溶咖啡的得分为95±4分，两者得分最为接近，没有显著差异(p>0.05)说明两者感官风味相近。通过SAS软件对数据进行分析，得到各因素的最优选择为黄秋葵籽2份，麦芽1份，决明子2份。因此，确定配方最佳配比为黄秋葵籽：麦芽：决明子＝2:1:2。

实验二、黄秋葵籽、麦芽、决明子及其不同配比混合物对超氧阴离子自由基的清除作用

1)、样品设置

以实施例1～实施例4步骤4)所得的过滤得到的滤液(即，浸提液)进行下述实验：

还设置了如下的对比例：取消步骤2)，即，以单独的黄秋葵籽干粉、麦芽干粉、决明子干粉替代混合粉末进行后续步骤，其余等同于实施例1，且，也以步骤4)所得的过滤得到的滤液(即，浸提液)进行下述实验。

2)、实验方法

用化学发光法测定样品对碱性邻苯三酚体系产生的超氧阴离子自由基的清除作用。反应在不透光的96孔板中进行，精密吸取20μL不同稀释倍数(0,10,20,30,40,50倍)的黄秋葵籽、麦芽、决明子和混合物的浸提液，依次加入50μL Na₂CO₃-NaHCO₃缓冲液(0.1mol/L,pH＝10.5)，50μL 1mmol/L邻苯三酚溶液，振荡5s，加入20μLl mmol/L鲁米诺溶液(用0.1mol/L pH 10.5)碳酸缓冲液配制启动反应，记录反应前10s的发光强度。本底发光强度为未加邻苯三酚溶液时的发光值。以清除率(％)为纵坐标，不同稀释倍数为横坐标绘制曲线。

清除率(％)＝[(C_空白-C_本底)-(C_样品-C_本底)]/(C_空白-C_本底)×100

式中：C_空白为空白溶液发光强度集合；C_样品为样品溶液发光强度集合；

C_本底为本底发光强度集合。

3)、实验结果

表5、各水提物在不同稀释倍数下对超氧阴离子的清除作用比较

注：每组做3个平行，结果表示为平均值±标准差。每一列不同样品与相同稀释倍数的实施例1进行比较，*代表p<0.05，差异显著；**代表p<0.01，差异极显著。同一列若存在相同字母，则差异不显著(p>0.05)。

由表5可知，麦芽、黄秋葵籽、决明子及其混合物水提取未稀释的浸提液都表现出了对超氧阴离子具有很好的清除作用。而且随着稀释倍数的增加，混合物(四个实施例)对超氧阴离子的清除效果显著高于黄秋葵籽、麦芽、决明子三个试样(p<0.05)，说明黄秋葵籽、麦芽、决明子三种物质的配伍对超氧阴离子的清除具有协同增效的作用。四个实施例试样对超氧阴离子的清除作用相当(p>0.05)，但实施例1的感官风味更佳。试样的制备采用1:10料液比(w/v＝1:10)进行提取，本发明固体饮料饮用时的浓度与提取液原液(稀释倍数为0)浓度基本一致，说明本发明固体饮料具有很强的超氧阴离子的清除作用。

实验三、模拟人体胃液条件下黄秋葵籽、麦芽、决明子不同配比混合物对亚硝酸盐清除作用：

1)、样品设置：

将实施例1～实施例4步骤3)中的浸提时间由30min改成60min，将浸提所得物4000r/min离心，取上清液作为待测样液进行实验(上清液置于带盖试管中，于4℃冰箱中进行保存)；

2)、实验方法

精密量取0.5mL样液于50mL容量瓶中，然后加入2.0mL pH3.0柠檬酸钠盐缓冲液和2.0mL 5μg/mL NaNO₂溶液，振荡摇匀后37℃水浴20min取出后立即加入2.0mL 0.4％对氨基苯磺酸，摇匀静置5min后，再加入0.2％盐酸萘乙二胺1.0mL，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀避光静置15min。以相应的试剂空白调零，在538nm处测定吸光度值，根据以下公式计算样品提取液对亚硝酸盐清除率：

亚硝酸盐清除率/％＝[A₁-(A₂-A₀)]/A₁×100％；

式中：A₁为不加样液的亚硝酸盐反应液吸光度值；A₂为加入样液后的亚硝酸盐反应液吸光度值；A₀为不加亚硝酸盐的提取液本底吸光度。

3)、结果分析

模拟人体胃液条件下黄秋葵籽、麦芽、决明子不同配比混合物对亚硝酸盐清除率的测定结果见表6。

表6、模拟胃液条件下各样品对亚硝酸盐的清除率

注：每组样品做3次平行，结果表示为平均值±标准差。*表示不同样品与实施例1进行比较，无显著差异(p>0.05)；

从上表可知，四个实施例混合物样品的水提物对于亚硝酸盐的清除作用相当，结果无差异(p>0.05)，清除率皆大于80％。但与空白组(水对亚硝酸盐的清除率为0)相比，清除作用极显著(p<0.01)。实施例1～4对亚硝酸盐的清除作用相近(p>0.05)，但实施例1的风味更佳。

实验四、模拟人体胃液条件下黄秋葵籽、麦芽、决明子不同配比混合物对亚硝胺生成的抑制作用：

1)、样品设置：

同实验三。

2)、实验方法：

采用紫外法测定，量取一定量上述样液(1mL)于10mL具塞试管中，加5.0mL pH3.0柠檬酸钠盐缓冲液，然后加入1.0mL 10mmol/L NaNO₂溶液混合均匀后加入1.0mL 10mmol/L二甲胺溶液，用蒸馏水定容至刻度，在37℃下水浴1h。精密吸取1.0mL上述N-二甲基亚硝胺反应液到7cm²培养皿中，加入1.0mL 0.5％Na₂CO₃溶液，放置于紫外分析仪上照15min，紫外灯离液面15cm，取出后加入1.5mL 1％对氨基苯磺酸，再加入1.5mL 0.1％α-萘胺，摇匀后37℃水浴30min后以相应试剂空白调零，在525nm波长处测定吸光值，按照公式(1)计算对亚硝酸钠清除率，进而得出对亚硝胺反应的抑制作用。

亚硝胺抑制率/％＝[A₁-(A₂-A₀)]/A₁×100％

式中：A₁为不加样液的亚硝酸盐反应液吸光度值；A₂为加入样液后的亚硝酸盐反应液吸光度值；A₀为不加亚硝酸盐的提取液本底吸光度。

3)、结果分析：

模拟人体胃液条件下黄秋葵籽、麦芽、决明子不同配比混合物对亚硝胺生成的抑制率见表7。

表7、模拟胃液条件下各样品对亚硝胺的抑制率

注：每组样品做3次平行，结果表示为平均值±标准差。*表示不同样品与实施例1进行比较，无显著差异(p>0.05)。

从上表可知，四个实施例混合物的水提物对于亚硝胺生成均具有一定的抑制作用，抑制率皆大于38％，且这四个实施例混合物的水提物对亚硝胺的抑制作用相当，结果无差异(p>0.05)。但与空白组(水对亚硝胺的抑制率为0)相比，抑制作用极显著(p<0.01)。

实验五、黄秋葵籽、麦芽、决明子不同配比混合物对乙酰胆碱酯酶的抑制作用(缓解老年痴呆)

1)、样品设置：

以实施例1～实施例4所得的混合粉末分别进行醇提(70％乙醇提取)和水提：

所述醇提为：称取混合粉末25g，于250mL烧杯中，按1:10料液比(w/v)加入70％乙醇，60℃超声提取2次，1h/次，过滤，合并2次滤液。滤液减压浓缩成膏状物，真空冷冻干燥后，得到70％乙醇粗提物。

所述水提为：称取混合粉末10g于蒸馏水中，按1:10料液比(w/v＝1:10)进行提取，提取条件为：80℃，超声提取30min。将提取物在4000r/min离心10min，取上清液，进行冷冻干燥，得到水提物。

还设置了如下的对比例：直接以步骤1)所得的单独的黄秋葵籽干粉进行上述醇提和水提。

2)、实验方法

试剂：PBS：0.01mol/L pH 7.2±0.2；乙酰胆碱酯酶AChE(200U/mL)：称取8mg到4mLPBS(0.4U/mL)；DTNB：39.6mg到20mL(0.005moL/L)；ATCI：0.21675g到10mL PBS(0.075moL/L)。

改良Ellman的经典方法，建立反应体系如下：将1mL PBS，100μL样品溶液及50μLAChE依次加入试管中，先在37℃水浴中，孵育20min，让样品与酶液充分反应。接着加入100μL DTNB和50μL ATCI，混匀，于37℃水浴中孵育20min，进行显色反应。最后，立即吸取200μL反应液加到96孔板中，每个样品设置3个复孔，用酶标仪在412nm测量吸光度，计算抑制率：

注：对照本底：用100μL PBS代替100μL样品溶液，以50μL PBS代替50μL AChE；对照：用100μL PBS代替100μL样品溶液；实验本底：用50μL PBS代替50μL AChE；实验中以盐酸多奈哌齐片(思博海)(用于治疗老年痴呆症的处方药，作用机制为抑制乙酰胆碱酯酶活性)作为阳性对照

3)、结果分析：

表8、黄秋葵籽等提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制率

注：与空白对照组比较，*代表p<0.05，差异显著；**代表p<0.01差异极显著。

由表8中可以看出，基于高浓度5mg/mL时，四个实施例混合物的醇提物和水提物，对乙酰胆碱酯酶都表现出了一定的抑制效果，其中醇提物优于水提物。四个实施例混合物对乙酰胆碱酯酶作用相当(p>0.05)。

对比例1、取消决明子的使用，即，将实施例1中的“黄秋葵籽干粉：麦芽干粉：决明子干粉＝2:1:2”改成“黄秋葵籽干粉：麦芽干粉＝2:3”；其余等同于实施例1。

对比例2、取消麦芽的使用，即，将实施例1中的“黄秋葵籽干粉：麦芽干粉：决明子干粉＝2:1:2”改成“黄秋葵籽干粉：决明子干粉＝2:3”；其余等同于实施例1。

对比例3、将实施例1中的“黄秋葵籽干粉：麦芽干粉：决明子干粉＝2:1:2”改成“黄秋葵籽干粉：麦芽干粉：决明子干粉＝2:5:2”；其余等同于实施例1。

对比例4、将实施例1中的“黄秋葵籽干粉：麦芽干粉：决明子干粉＝2:1:2”改成“黄秋葵籽干粉：麦芽干粉：决明子干粉＝2:1:5”；其余等同于实施例1。

将上述对比例1～对比例4，按照上述实验一～实验六所述方法进行实验，所得结果如下表9：

表9

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (2)

1.多功能固体饮料的制备方法，其特征在于：该固体饮料以洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子为原料制备而成；

洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子的重量比为2：0.9~1.1：1.8~2.2；

将黄秋葵籽/麦芽/决明子分别进行如下步骤：先清水淋洗，去除表面灰尘，沥干后放入150~200℃的烤箱中烘焙21~28min，从而分别得洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子；

制备方法为包括以下步骤：

1）、将洗净焙香后的黄秋葵籽、麦芽、决明子分别用粉碎机粉碎；

2）、将粉碎所得的黄秋葵籽干粉、麦芽干粉、决明子干粉按照2：0.9~1.1：1.8~2.2混合均匀，得混合粉末；

3）、恒温浸提：

按1g/10~20ml的料液比，在混合粉末中加入蒸馏水，于70~100℃超声浸提20~40min；

4）、将浸提所得物过滤，所得滤液经冷冻干燥后粉碎成干粉；得速溶固体饮料。

2.根据权利要求1所述的多功能固体饮料的制备方法，其特征在于：

所述步骤1）中： 粉碎为至少能过80目的筛；

所述步骤4）中：采用180目滤布过滤；所得滤液在真空度0.1Pa，-40℃条件下进行真空冷冻干燥至含水率≤8%，然后粉碎成过100目的干粉。

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