CN107494553B - 一种没食子酸衍生的农用杀菌剂及用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种没食子酸衍生的农用杀菌剂，涉及农用医药领域，其主要成分是没食子酸衍生物，其中，所述没食子酸衍生物是由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物。本发明的由没食子酸衍生物制成的农用杀菌剂可以抑制多种作物有害菌，尤其对苹果斑点落叶、苹果轮纹、立枯丝核菌、草莓炭疽、马铃薯晚疫等有较好的抑菌效果，而且水溶性好，解决了现有技术制备的没食子酸衍生物水溶性不佳的问题。

Description

一种没食子酸衍生的农用杀菌剂及用途
技术领域
本发明涉及农用医药领域，尤其涉及一种利用没食子酸制备农用杀菌剂。
背景技术
近年来，植物源农药由于其低毒、易分解、少残留，是生产无公害农产品优先选用的农药品种。以植物源农药中活性较高的天然产物为先导化合物进行结构改造和优化，以保持其低毒、高效是农业领域研究低毒新型农药的重要方向。因此，利用植物源天然产物为先导化合物开发高效、低毒的新型农药前景十分广阔。
据国内外文献报道，利用没食子酸为骨架结构修饰的研究很多，但主要集中在人用抗菌、抗肿瘤、消炎等药物的研发。本领域技术人员很少将其结构修饰后用于农药领域。目前，国内除了广西大学的袁高庆报道了3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯的抑菌特性及其对番茄青枯病的田间防治作用外，主要集中在贵州大学宋宝安课题组将没食子酸的酚羟基和羧基同时进行了修饰，以没食子酸为先导合成 1,2,4-三唑硫酮席夫碱、1,2,4-三唑硫醚席夫碱、氨基1,2,4-三唑硫醚(参见文献 [1]-[5])并将之用于各种农作物的抑菌活性研究、抗黄瓜花叶病毒和抗烟草花叶病毒研究，取得了较好的研究结果。然而上述获得的没食子酸改性化合物中的酚羟基均用甲醛保护，导致其水溶性差，存在使用不便的技术问题。
[1]陆真慧，广西医科大学，没食子酸衍生物ZXHA--TC对兔骨关节炎软骨退变的体内外作用研究，2015，硕士学位论文；
[2]专利-2015107459906，专利-2014103916429，专利-2014103916433；
[3]李悦，范腕腕，袁高庆，黎起秦，林纬，3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯的抑菌特性及其对番茄青枯病的田间防治作用，农药，2014，53(11): 845-848；
[4]陈江，贵州大学，以没食子酸为先导合成1,2,4-三唑衍生物及抗菌和抗病毒活性研究，2007，硕士学位论文；
[5]李黔柱，贵州大学，以没食子酸为先导合成具有生物活性的酰腙衍生物和1，3，4-噁二唑衍生物，2009，博士学位论文。
发明内容
为解决现有技术中存在的制备的用于农药没食子酸衍生物水溶性差，使用不便的技术问题，本发明提供一种制备水溶性好的没食子酸衍生物的中间体，利用该中间体可以制得水溶性较好的没食子酸衍生物，本发明制备的没食子酸衍生物具有亲水性的官能团酚羟基，而且抑菌效果显著，可以用于农业杀菌剂，使用方便。
为实现本发明的技术目的，本发明提供一种农用杀菌剂，其主要成分是没食子酸衍生物。
其中，所述没食子酸衍生物是由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物。
Figure BDA0001403898140000021
其中，所述式(1)所示结构是通过以下步骤制备得到：
其是在氮气保护下，利用硫酸二甲酯和氢氧化钠与没食子酸反应获得的无色针状晶体。
其中，所述制备中间体的方法包括：
将没食子酸和水混合后，在氮气保护下，加入氢氧化钠及硫酸二甲酯发生醚化反应，得到第一反应液；
在常温下向第一酯化产物中再次加入硫酸二甲酯，进行搅拌后，再加入氢氧化钠进行回流，得到第二反应液；
冷却所述第二反应液室温后，进行酸化、抽滤，重结晶后，得到中间产物。
其中，按重量份计，所述没食子酸的用量为8.0-9.0份，每次加入所述氢氧化钠用量为4.3-5.3份:每次加入所述硫酸二甲酯的用量为1.0-2.0份。
优选地，按重量份计，所述没食子酸的用量为8.5份，每次加入所述氢氧化钠用量为4.8份，每次加入所述硫酸二甲酯的用量为1.5份。
其中，所述反应时间为10-15min，优选为10min。
其中，所述常温下是指低于35℃的温度条件下。
其中，所述搅拌时间为0.5h。
其中，所述回流时间为3h。
其中，所述酸化是使用浓盐酸使第二反应液酸化至pH值为2。
其中，所述中间产物为无色针状晶体。
特别是，所述由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物具有式(2)所示的N-(3-氯苯基)-3,4,5-三羟基-苯甲酰胺结构：
Figure BDA0001403898140000031
其中，所述式(2)所示的N-(3-氯苯基)-3,4,5-三羟基-苯甲酰胺是通过以下步骤制备得到：
将中间体与三苯基膦混合后，使用乙腈作反应溶剂使其溶解，冷却至0℃后，缓慢滴加四氯化碳，滴加完毕后在该温度下搅拌反应2小时，获得反应液，同时将间氯苯胺和三乙胺用2mL乙腈溶解后，缓慢滴加到所述反应液，滴加完毕继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至室温直至反应完全，减压浓缩后柱层析得第一白色固体产物；
使用二氯甲烷溶解所述第一白色固体产物于一干燥的梨形瓶中，0℃下，缓慢滴加三溴化硼溶液，滴加完毕，继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至30℃反应3小时，待反应完全后，0℃下用预冷的甲醇淬灭反应，减压浓缩后柱层析得式(2)所示的没食子酸衍生物N-(3-氯苯基)-3,4,5-三羟基- 苯甲酰胺。
特别是，所述由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物具有式(3)所示的2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-肼甲酰胺结构或式(4)所示的2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-氨基硫脲的结构：
Figure BDA0001403898140000041
其中，所述式(3)或式(4)所示的没食子酸衍生物是通过以下步骤制备得到：
使用二氯甲烷作反应溶剂使中间体溶解，并在0℃下缓慢滴加二氯亚砜，室温下搅拌反应后，减压除去二氯甲烷，再加入乙腈再次进行溶解，0并在℃下缓慢滴加至盐酸氨基脲和吡啶的乙腈溶液中，滴加完毕升温至室温反应1小时， TLC检测反应情况，待反应完全后，减压浓缩后柱层析得第二白色固体产物；
在0℃下将二甲硫醚滴加到三氯化铝的悬浮液中，并将利用二氯甲烷溶解的所述第二白色固体产物滴加到二甲硫醚中，0℃下搅拌反应10分钟，缓慢升温至室温直至反应完全。TLC检测反应情况，待反应完全后，用冰盐酸淬灭反应，减压除去溶剂，乙酸乙酯萃取，收集有机层，无水硫酸镁干燥，减压浓缩后柱层析得到式(2)或所示的没食子酸衍生物。
特别是，所述由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物具有式(5)所示的4-((3-氟苄基)氨基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-1,2,4-三唑-5(4H)-硫酮结构：
Figure BDA0001403898140000051
其中，所述式(5)所示的没食子酸衍生物是通过以下步骤制备得到：
将中间体与二氨基硫脲混合，加热升温使其充分熔融并发生反应，待反应完全后，冷却反应混合物至室温，加入少量热水洗涤，有白色絮状物析出，过滤收集该絮状物，干燥后无水乙醇重结晶得第三白色固体产物；
将得到第三白色固体产物与间氟苯甲醛、三氟乙酸混合，并使用二氯甲烷溶解，于40℃温度下回流反应过夜，待反应完全，减压浓缩后进行柱层析得第四白色固体产物；
使用无水甲醇溶解所述第四白色固体产物于，在0℃温度下分批加入硼氢化钠粉末，然后继续在该温度下搅拌反应2小时，待反应完全候，0℃下滴加2mL 丙酮淬灭反应，减压浓缩后柱层析得第五白色固体产物；
使用二氯甲烷溶解所述第五白色固体，并在0℃温度下，缓慢滴加三溴化硼溶液，滴加完毕，继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至30℃反应3小时，待反应完全后，0℃下用预冷的甲醇(5mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析得到式(5)所示的没食子酸衍生物。
特别是，所述由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物具有式(6)所示的3,4,5-三甲氧基苄基丙烯酸酯结构。
Figure BDA0001403898140000052
其中，所述式(6)所示的没食子酸衍生物是通过以下步骤制备得到：
利用甲醇作反应溶剂溶解中间体，并冷却至0℃下，然后缓慢滴加二氯亚砜，滴加完毕后继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至室温直至反应完全，然后减压浓缩后柱层析得第六白色固体；
在氩气保护下，先将LiAlH4与四氢呋喃在0℃下搅拌，然后加入第六白色固体，继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至室温直至反应完全，减压浓缩后柱层析得淡黄色油状液体产物；
二氯甲烷作反应溶剂溶解所述淡黄色油状液体产物，在0℃下加入DIEA发生反应，然后加入丙烯酰氯在室温下搅拌反应，待反应完全后，减压浓缩后柱层析得到式(6)所示的没食子酸衍生物。
其中，所述杀菌剂中还包括还包括助剂。
其中，所述助剂为常规制备农用杀菌剂所用的助剂。
为实现本发明的技术目的，本发明再提供一种将上述农用杀菌剂用于抑制苹果纶纹病毒的用途。
为实现本发明的技术目的，本发明还提供一种将上述农用杀菌剂用于抑制苹果斑点落叶病毒的用途。
为实现本发明的技术目的，本发明还提供一种将上述农用杀菌剂用于立枯丝核菌、草莓炭疽和马铃薯晚疫的用途。
为实现本发明的技术目的，本发明提供的农用杀菌剂防治苹果纶纹病毒、苹果斑点落叶病毒、立枯丝核菌、草莓炭疽或马铃薯晚疫的方法是：直接施用于发病部位，也可以用水等稀释后施用于发病部位。
有益效果：
1、本发明的由没食子酸衍生物制成的农用杀菌剂可以抑制多种作物有害菌，尤其对苹果斑点落叶、苹果轮纹、立枯丝核菌、草莓炭疽、马铃薯晚疫等有较好的抑菌效果。
2、由于本发明的没食子酸衍生物保留了极性基团-OH，因而水溶性好，解决了现有技术制备的没食子酸衍生物水溶性不佳的问题。
3、本发明的没食子酸衍生物水溶性好，使用方便，抑菌效果更佳。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。
实施例1 3.4.5-三甲氧基苯甲酸的制备
将8.5g，50mmol的原料没食子酸和100mL水加入带有冷凝回流管的250 mL四口瓶中，在氮气保护进行搅拌，然后加入4.8g、120mmol的氢氧化钠及 15.0g、120mmol的硫酸二甲酯，10分钟后再次加入15.0g、120mmol硫酸二甲酯，投料过程温度低于35℃，硫酸二甲酯加完后搅拌0.5小时。再加入4.8g， 120mmol氢氧化钠，回流3小时。反应液冷却至室温后，用浓盐酸酸化至pH＝2，抽滤得白色固体，用水重结晶，干燥，得8.7g无色的针状晶体，即3.4.5-三甲氧基苯甲酸(即实施例2-6的反应式中所示的M-1-1)，其化学结构如下所示：
Figure BDA0001403898140000071
实施例2没食子酸衍生物N-(3-氯苯基)-3,4,5-三羟基-苯甲酰胺的合成
准确称取实施例1制备的中间体3.4.5-三甲氧基苯甲酸0.64g、3mmol(即反应式中所示的M-1-1)，三苯基膦1.89g、7.2mmol，加入到干燥的100mL梨形瓶，以15mL乙腈作反应溶剂使其溶解，冷却至0℃下，缓慢滴加四氯化碳，其中四氯化碳的用量为4.62g、30mmol，滴加完毕在该温度下搅拌反应2小时。将0.255g、2mmol的间氯苯胺和0.61g、6mmol的三乙胺用2mL乙腈溶解，缓慢滴加到反应液，滴加完毕继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至室温直至反应完全。TLC检测反应情况，待反应完全后，减压浓缩后柱层析得0.77g白色固体M-1-2(即反应式中所示的M-1-2)。
以20mL二氯甲烷溶解M-1-2(0.64g，2mmol)于一干燥的50mL梨形瓶中，0℃下，缓慢滴加三溴化硼溶液(2.51g，10mmol)，滴加完毕，继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至30℃反应3小时，TLC检测反应情况，待反应完全后，0℃下用预冷的甲醇(5mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析得0.50g白色固体1。
上述化学过程的反应式为：
Figure BDA0001403898140000081
将制得的白色固体1进行分析，得到的数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.07(s,1H),9.10(br s,3H),7.96(s,1H),7.69 (d,J＝7.84Hz,1H),7.35(t,J＝8.04Hz,1H),7.11(dd,J＝7.92,1.68Hz,1H),6.97 (s,2H)。
13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.26,145.99,141.58,137.54,133.31,130.63,124.99,123.22,119.90,118.84,107.74.HRMS(AP-ESI)Calcd.for C13H10ClNO4: 280.0377(M+H)+.Found:280.0374。
根据分析数据可以看出，本发明制得的白色固体1即是本发明所要制备的没食子酸衍生物N-(3-氯苯基)-3,4,5-三羟基-苯甲酰胺。
而且，根据所得化合物(即反应式中所标记的1)的结构中可以看出，该化合物中含有多个极性基团-OH和极性基团-NHR，因而其水溶性较好，经检测，每毫升水可以溶解0.1mg产品。
实施例3没食子酸衍生物2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-肼甲酰胺的合成
准确称取实施例1制备的中间体M-1-1(1.06g，5mmol)取一干燥的100mL 梨形瓶，以50mL二氯甲烷作反应溶剂使其溶解，0℃下缓慢滴加二氯亚砜(0.72 g，6mmol)，加毕，室温下搅拌反应12小时。减压除去二氯甲烷，加入20mL 乙腈使其溶解，0℃下缓慢滴加至盐酸氨基脲(0.67g，6mmol)和吡啶(1.96g， 25mmol)的乙腈溶液中(40mL)，滴加完毕升温至室温反应1小时，TLC检测反应情况，待反应完全后，减压浓缩后柱层析得0.942g白色固体M-2-1。
取一干燥的50mL梨形瓶，0℃下将二甲硫醚(5.05g，82mmol)滴加到三氯化铝(1.96g，6mmol)的悬浮液中，准确称取M-2-1(0.81g，3.0mmol)，用二氯甲烷将其溶解，将M-2-1的二氯甲烷溶液滴加到二甲硫醚中，0℃下搅拌反应10分钟，缓慢升温至室温直至反应完全。TLC检测反应情况，待反应完全后，用冰盐酸淬灭反应，减压除去溶剂，乙酸乙酯萃取(25mL×3)，收集有机层，无水硫酸镁干燥，减压浓缩后柱层析得0.52g黄白色固体2。
上述化学过程的反应式为：
Figure BDA0001403898140000091
将制得的黄白色固体2进行分析，得到的数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.70(s,1H),9.06(br s,3H),7.70(s,1H),6.87(s, 2H),5.89(br s,2H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.93,159.75,145.85,137.12,123.35,107.53. HRMS(AP-ESI)Calcd.for C8H9N3O5:250.0440(M+Na)+.Found:250.0432.
根据分析数据可以看出，本发明制得的黄白色固体2即是本发明所要制备的没食子酸衍生物2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-肼甲酰胺。
而且，根据所得化合物(即反应式中所标记的2)的结构中可以看出，该化合物中含有多个极性基团-OH和极性基团-NHR，因而其水溶性较好，经检测，每毫升水可以溶解1mg产品。
实施例4没食子酸衍生物2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-氨基硫脲的合成
上述反应还可以获得没食子酸衍生物2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-氨基硫脲，其化学过程的反应式如下所示：
Figure BDA0001403898140000101
将制得的产物3进行分析，得到的数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.98(s,1H),9.18(s,1H),9.07(s,2H),8.81(s, 1H),7.76(s,1H),7.41(s,1H),6.90(s,2H).
13C NMR(101MHz,DMSO)δ182.42,166.44,145.81,137.35,122.95,107.89. HRMS(AP-ESI)Calcd.for C8H9N3O4S:266.0211(M+Na)+.Found:266.0209.
根据分析数据可以看出，本发明制得的产物3即是本发明所要制备的没食子酸衍生物2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-氨基硫脲。
而且，根据所得化合物(即反应式中所标记的3)的结构中可以看出，该化合物中含有多个极性基团-OH和极性基团-NHR，因而其水溶性较好，经检测，每毫升水可以溶解1mg产品。
实施例5没食子酸衍生物4-((3-氟苄基)氨基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基) -1H-1,2,4-三唑-5(4H)-硫酮的合成
取一干净25mL梨形瓶，准确称取M-1-1(2.12g，10mmol)，二氨基硫脲 (1.06g，10mmol)加入反应瓶中，升温至160～170℃，待反应混合物熔融，在该温度下继续反应3小时，TLC检测反应情况，待反应完全后，反应混合物冷却至室温，加入少量热水洗涤，有白色絮状物析出，过滤收集该絮状物，干燥后无水乙醇重结晶得白色固体M-4-1，经称量和计算，所得白色固体重量为0.31 g，收率为11％。
取一干净50mL梨形瓶，准确称取M-4-1(0.236g，0.84mmol)，间氟苯甲醛(0.114g，0.92mmol)，三氟乙酸(0.096g，0.84mmol)加入其中，20mL二氯甲烷溶解，于40℃温度下回流反应过夜，TLC检测反应情况，待反应完全，减压浓缩后柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30：1)得白色固体M-4-2，经称量和计算，所得白色固体重量为0.31g，收率为94％。
准确称取M-4-2(0.280g，0.72mmol)于一干净50mL梨形瓶，以10mL 无水甲醇作为反应溶剂使之溶解，0℃下分批加入硼氢化钠粉末(0.40g，10.8 mmol)，加毕，继续在该温度下搅拌反应2小时，TLC检测反应情况，待反应完全，0℃下滴加2mL丙酮淬灭反应，减压浓缩后柱层析得中间体白色固体M-4-3，经称量和计算，所得白色固体重量为0.26g，收率为93％。
以10mL二氯甲烷溶解M-4-3(0.25g，0.64mmol)于一干燥的50mL梨形瓶，0℃下，缓慢滴加三溴化硼溶液(0.88g，8.32mmol)，滴加完毕，继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至30℃反应3小时，TLC检测反应情况，待反应完全后，0℃下用预冷的甲醇(5mL)淬灭反应，减压浓缩后柱层析得白色固体最终化合物4，经称量和计算，所得白色固体重量为0.18g，收率为83％。
上述化学过程的反应式如下所示：
Figure BDA0001403898140000111
将制得的化合物4进行1H NMR和13C NMR测定，得到的数据如下：1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.77(br s,1H),9.20(s,2H),8.67(s,1H),7.34- 7.28(m,1H),7.13–7.06(m,2H),7.00(s,2H),6.51(t,J＝5.80Hz,1H),4.24(d,J＝ 5.68Hz,2H). 13C NMR(100MHz,DMSO)δ166.36,163.66,161.24,149.85,146.25,139.06, 136.24,130.58,125.60,116.37,116.16,115.68,115.02,114.81,107.40,52.49. HRMS(AP-ESI)Calcd.for C15H13FN4O3S:349.0771(M+H)+.Found:349.0767.
根据测定结果数据可以看出，本发明制得的产物4即是本发明所要制备的没食子酸衍生物4-((3-氟苄基)氨基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-1,2,4-三唑 -5(4H)-硫酮(4)。
而且，根据所得化合物(即反应式中所标记的4)的结构中可以看出，该化合物中含有多个极性基团-OH和极性基团-NHR，因而其水溶性较好，经检测，每毫升水可以溶解0.1mg产品。
实施例6没食子酸衍生物3,4,5-三甲氧基苄基丙烯酸酯的合成
取一干燥的50mL梨形瓶，准确称取3.4.5-三甲氧基苯甲酸M-1-1(1.06g， 5mmol)加入，以15mL甲醇作反应溶剂使其溶解，冷却至0℃下，缓慢滴加二氯亚砜(2.08g，17.5mmol)，滴加完毕继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至室温直至反应完全。TLC检测反应情况，待反应完全后，减压浓缩后柱层析(二氯甲烷)得白色固体M-5-1，经称量和计算，所得白色固体重量为1.06g，收率为94％。
取一干燥的50mL三口瓶，准确称取LiAlH4(0.15g，4mmol)加入，氩气保护，加入干燥四氢呋喃0℃下搅拌，然后加入M-5-1(0.45g，2mmol)。加毕继续在该温度下搅拌反应10分钟，然后缓慢升温至室温直至反应完全。TLC 检测反应情况，待反应完全后，减压浓缩后柱层析(二氯甲烷)得淡黄色油状液体M-5-2，经称量和计算，所得白色固体重量为0.38g，收率为95％。
准确称取M-5-2(0.20g，1mmol)于一干燥的25mL梨形瓶，以5mL二氯甲烷作反应溶剂使其溶解，0℃下加入DIEA(0.25g，2mmol)，10min后加入丙烯酰氯(0.18g，2mmol)，室温下搅拌反应5小时。TLC检测反应情况，待反应完全后，减压浓缩后柱层析得最终产品液体5，经称量和计算，所得产品液体的重量为0.23g，收率为92％。
上述化学过程的反应式如下：
Figure BDA0001403898140000131
将制得的化合物5进行1H NMR和13C NMR测定，得到的数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.74(s,2H),6.39(dd,J＝17.28,1.60Hz,1H), 6.25(dd,J＝17.28,10.28Hz,1H),5.99(dd,J＝10.28,1.60Hz,1H),5.11(s,2H), 3.78(s,6H),3.66(s,3H).
13C NMR(101MHz,DMSO)δ165.84,153.36,137.81,132.35,131.90,128.70,106.21,66.45,60.46,56.35.HRMS(AP-ESI)Calcd.for C13H17O5:253.1987(M+ H)+.Found:253.1989.
根据测定结果数据可以看出，本发明制得的化合物5即是本发明所要制备的没食子酸衍生物3,4,5-三甲氧基苄基丙烯酸酯。
将上述制备的没食子酸衍生物直接用于抑菌试验，如以下试验例所示：
试验例1
采用生长速率法测定实施例2制得的食子酸衍生物对苹果斑点落叶、苹果轮纹的抑菌活性。
1、制作PDA培养基
马铃薯先洗净去皮,再称取200g切成薄片，加水煮烂(煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破即可)，用四层纱布过滤，加热，再需要加18g琼脂(边加边搅拌，直到完全溶解)，加入20g葡萄糖，搅拌均匀，补足水分至1000ml，分装锥形瓶，封口，高压灭菌锅(121℃)灭菌30分钟后备用。
2、抑菌实验
本实验每个浓度设置三个重复，以加入等量的溶剂为空白对照。实验药剂物质的量100ppm。分别取药剂1ml于培养皿中，加入9ml PDA培养基，轻轻摇匀，做好标记，水平放置到冷却。用打孔器在扩繁成功的培养基内，按同心圆周打孔。再接种到培养基的中心，倒置于培养箱内。空白对照菌圈直径为培养皿直径的 2/3左右测各个处理的菌圈直径。在空白菌丝长至扑满2/3平板时，采用十字交叉法测定菌落直径，计算平均直径大小，计算药剂抑菌率。
抑菌率计算公式：I＝【(D0-Dt)/(D0-4)】*100％
I：菌丝生长抑制率；D0：空白菌落直径；Dt：药剂处理菌落直径
通过以上实验方法，测试了本发明中的化合物及没食子酸针对几种病菌的抑制活性。具体化合物在100ppm浓度下的抑制活性见表。
其中A表示抑制率大于75％；B表示抑制率为50-75％；C表示抑制率为 25-49％；D表示抑制率小于25％。
表1.没食子酸衍生物抑菌活性
Figure BDA0001403898140000141
试验例2
采用生长速率法测定实施例3制得的食子酸衍生物对苹果斑点落叶、苹果轮纹的抑菌活性，试验方法与试验例1相同，测定结果如表2所示。
表2.没食子酸衍生物抑菌活性
Figure BDA0001403898140000142
试验例3
采用生长速率法测定实施例4制得的食子酸衍生物对苹果斑点落叶、苹果轮纹、立枯丝核菌的抑菌活性，试验方法与试验例1相同，测定结果如表3所示。
表3.没食子酸衍生物抑菌活性
Figure BDA0001403898140000151
试验例4
采用生长速率法测定实施例5制得的食子酸衍生物对苹果斑点落叶、苹果轮纹、立枯丝核菌的抑菌活性，试验方法与试验例1相同，测定结果如表4所示。
表4.没食子酸衍生物抑菌活性
Figure BDA0001403898140000152
试验例5
采用生长速率法测定实施例6制得的食子酸衍生物对苹果斑点落叶、苹果轮纹、立枯丝核菌、草莓炭疽、马铃薯晚疫的抑菌活性，试验方法与试验例1相同，测定结果如表5所示。
表5.没食子酸衍生物抑菌活性
Figure BDA0001403898140000161
对比例1
采用生长速率法测定没食子酸对苹果斑点落叶、苹果轮纹、立枯丝核菌、草莓炭疽、马铃薯晚疫的抑菌活性，试验方法与试验例1相同，测定结果如表6 所示。
表6.没食子酸的抑菌活性
Figure BDA0001403898140000162
根据试验例1-5及对比例1的抑菌结果可以看出，本发明提供的没食子酸衍生物的抑菌效果比没食子酸的抑菌效果好。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之类。

Claims (8)

1.一种没食子酸衍生的农用杀菌剂，其特征在于，其主要成分是没食子酸衍生物，其中，所述没食子酸衍生物是由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物；
Figure FDA0002540542860000011
其中，所述具有亲水性官能团酚羟基的没食子酸衍生物如式(3)所示：
Figure FDA0002540542860000012
2.一种没食子酸衍生的农用杀菌剂，其特征在于，其主要成分是没食子酸衍生物，所述没食子酸衍生物是由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的具有式(4)所示的结构的没食子酸衍生物；
Figure FDA0002540542860000013
3.一种没食子酸衍生的农用杀菌剂，其特征在于，其主要成分是没食子酸衍生物，所述没食子酸衍生物是由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的具有式(5)所示的结构的没食子酸衍生物：
Figure FDA0002540542860000021
4.一种没食子酸衍生的农用杀菌剂，其特征在于，其主要成分是没食子酸衍生物，所述没食子酸衍生物是由式(1)所示结构的化合物制备而成的具有亲水性官能团酚羟基的具有式(6)所示的结构的没食子酸衍生物：
Figure FDA0002540542860000022
5.一种将权利要求1-4任一所述的农用杀菌剂用于抑制苹果纶纹病毒的用途。
6.一种将权利要求1-4任一所述的农用杀菌剂用于抑制苹果斑点落叶病毒的用途。
7.一种将权利要求4所述的农用杀菌剂用于抑制立枯丝核菌、草莓炭疽和马铃薯晚疫其中一种或多种菌的用途。
8.将没食子酸衍生物用于抑制苹果纶纹病毒及苹果斑点落叶病毒的用途，其结构如式(2)所示，其由式(1)所示结构的化合物制备而成：
Figure FDA0002540542860000031
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