CN107478738A - 检测乳制品中叶黄素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了检测乳制品中叶黄素的方法。所述方法包括：将乳制品与丙酮进行混合处理，以便得到混合液；将所述混合液进行离心处理，收集上清液；以及将所述上清液进行色谱检测，并基于检测结果确定所述乳制品中叶黄素含量。利用本发明的方法能够准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。

Description

检测乳制品中叶黄素的方法
技术领域
本发明涉及食品领域。具体地，本发明涉及检测乳制品中叶黄素的方法。
背景技术
叶黄素，别名类胡萝卜素、胡萝卜醇、植物黄体素、核黄体、万寿菊花素及植物叶黄素等，英文名为Lutein，分子式为C40H56O2，相对分子量为568.85。橙黄色粉末，浆状或液体，不溶于水，溶于己烷和脂肪性溶剂，易受到光照、加热和空气氧化等作用的影响。
然而，目前检测乳制品中叶黄素的方法仍有待改进。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了检测乳制品中叶黄素的方法。利用本发明的方法能够准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
目前，适用于提取乳制品中叶黄素的溶剂较多，针对不同溶剂，所起到的效果也不尽相同。有些溶剂在提取叶黄素的同时，也会夹带少量蛋白质或脂肪，从而对后续检测造成干扰，例如乙醇。另外，有些溶剂无法充分提取包埋于蛋白质或脂肪中少量叶黄素，导致检测结果偏低，例如石油醚。
有鉴于此，发明人经过大量实验发现，丙酮能够有效地提取出乳制品中的叶黄素，提取率较高，且提取液中不含蛋白质、脂肪等杂质，从而有效地避免其对后续检测的干扰。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法能够准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种检测乳制品中叶黄素的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将乳制品与丙酮进行混合处理，以便得到混合液；将所述混合液进行离心处理，收集上清液；以及将所述上清液进行色谱检测，并基于检测结果确定所述乳制品中叶黄素含量。发明人经过大量实验发现，丙酮能够有效地提取出乳制品中的叶黄素，提取率较高，且提取液中不含蛋白质、脂肪等杂质，从而有效地避免其对后续检测的干扰。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法能够准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
根据本发明的实施例，上述检测乳制品中叶黄素的方法还可以具有下列附加技术特征：
根据本发明的实施例，基于1克所述乳制品，所述混合液的体积为15～20毫升。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法可以进一步准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
根据本发明的实施例，基于1.5克所述乳制品，所述混合液的体积为25毫升。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法可以进一步准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
根据本发明的实施例，所述乳制品为乳粉，所述乳粉预先用水进行溶解。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法可以进一步准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
根据本发明的实施例，基于1.5克所述乳粉，所述水的用量为5～10毫升。根据本发明的优选实施例，基于1.5克所述乳粉，所述水的用量为8毫升。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法可以进一步准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
根据本发明的实施例，所述离心处理是在4℃的温度、10000rpm的转速下进行10分钟。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法可以进一步准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
根据本发明的实施例，进行所述色谱检测之前，预先将所述上清液进行过滤处理，所述过滤处理是采用0.22微米的过滤膜进行的。由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法可以进一步准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
根据本发明的实施例，采用液相色谱法进行所述色谱检测，所述液相色谱法的检测条件如下：色谱柱：YMCTM类胡萝卜素色谱柱，5μm，4.6×250mm；进样量：50μL；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；波长：445nm；梯度洗脱条件：
由此，利用根据本发明实施例的检测乳制品中叶黄素的方法可以进一步准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种检测乳粉中叶黄素的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：准确称取1.5g乳粉于25mL棕色容量瓶或比色管中，加入8mL水(70℃)，混合2min后，再加入10ml 0.1％BHT丙酮溶液，混合1～2min，超声20min，再用0.1％BHT丙酮溶液定容至刻度，以便得到混合液；将所述混合液在4℃下以10000rpm的转速离心10min，上清液用0.22μm有机系微孔滤膜过滤，以便得到待测液；配制不同浓度叶黄素的标准品溶液；分别对所述待测液和所述不同浓度叶黄素的标准品溶液进行液相色谱检测，并基于检测结果确定所述乳粉中叶黄素含量，其中，所述液相色谱法的检测条件如下：色谱柱：YMCTM类胡萝卜素色谱柱，5μm，4.6×250mm；进样量：50μL；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；波长：445nm；梯度洗脱条件：
由此，利用根据本发明实施例的检测乳粉中叶黄素的方法能够准确、有效地对乳粉中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的检测乳制品中叶黄素的方法的流程示意图；以及
图2～4分别显示了根据本发明一个实施例的色谱图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
本发明提出了一种检测乳制品中叶黄素的方法。利用本发明的方法能够准确、有效地对乳制品中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。下面将对该方法进行详细描述。
根据本发明的实施例，参见图1，该方法包括：
S100混合处理
在该步骤中，将乳制品与丙酮进行混合处理，以便得到混合液。
通过将乳制品与丙酮进行混合，以便使得乳制品中的叶黄素溶解于丙酮中，实现叶黄素的提取。发明人发现，针对乳制品的特性(基质成分复杂，例如富含蛋白质、脂肪)，利用丙酮作为提取剂，能够有效地提取出叶黄素，提取率较高，且提取液中不含蛋白质、脂肪等杂质，从而有效地避免其对后续检测的干扰。然而，其他提取剂的效果不佳。例如，有些溶剂在提取叶黄素的同时，也会夹带少量蛋白质或脂肪，从而对后续检测造成干扰，例如乙醇。另外，有些溶剂无法充分提取包埋于蛋白质或脂肪中少量叶黄素，提取不完全，导致检测结果偏低，例如石油醚。
根据本发明的实施例，基于1克乳制品，混合液的体积为15～20毫升。发明人经过大量实验发现，混合液中乳制品含量会影响后续色谱检测结果的准确性。具体地，若乳制品含量过高，得到的峰面积过大，积分结果不准确，从而导致最终检测结果准确性较低；同样地，若乳制品含量过低，得到的峰面积过小，也会导致最终检测结果准确性较低。发明人发现，基于1克乳制品，混合液的体积为15～20毫升时，色谱检测所得到的峰面积大小适宜，最终检测结果的准确性和精密度较高。
根据本发明的优选实施例，基于1.5克乳制品，混合液的体积为25毫升。由此，能够进一步提高检测结果的准确性和精密度。
需要说明的是，本发明对于乳制品的种类不作严格限定，既可以是液态乳制品，例如生牛乳、复原乳、调制乳、酸奶等；也可以是固态乳制品，例如乳粉、奶片、奶酪等；还可以是半固态乳制品，例如炼乳。针对液态乳制品，可以直接将其与丙酮进行混合，以便得到混合液。针对固态乳制品或者半固体，可以预先将其进行溶解，再与丙酮进行混合，对于溶解方式不作严格限定，可以根据实际生产需要进行选择，例如，用水溶解、加热溶解等方式。
根据本发明的具体实施例，乳制品为乳粉，乳粉预先用水进行溶解。在一个实施例中，基于1.5克乳粉，水的用量为5～10毫升，优选8毫升。由此，以便将乳粉充分溶解，防止出现成团现象，便于丙酮提取其中的叶黄素，保证检测结果的准确性。
S200离心处理
在该步骤中，将混合液进行离心处理，收集上清液。将混合液进行离心，使得溶解有叶黄素的丙酮与其他杂质分离，便于提取，用作后续检测。
根据本发明的实施例，离心处理是在4℃的温度、10000rpm的转速下进行10分钟。发明人经过大量实验得到上述较佳的离心处理条件，在此条件下能够有效地使溶解有叶黄素的丙酮(上层液)与其他杂质(下层液)分离。若转速过低或者时间过短，分层效果不明显，容易有少量叶黄素溶解于下层液中，导致检测结果偏低；若转速过高或者时间过长，容易对仪器造成损耗，缩短使用寿命。
需要说明的是，在色谱检测S300之前，可以预先将上清液进行过滤处理，防止过大颗粒造成检测仪器堵塞，影响使用。具体地，可以采用0.22微米的过滤膜过滤处理。
S300色谱检测
在该步骤中，将上清液进行色谱检测，并基于检测结果确定乳制品中叶黄素含量。
根据本发明的实施例，采用液相色谱法进行色谱检测，液相色谱法的检测条件如下：
色谱柱：YMCTM类胡萝卜素色谱柱，5μm，4.6×250mm；
进样量：50μL；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
波长：445nm；
梯度洗脱条件：
发明人发现，色谱检测条件会影响检测结果的准确性。进而，发明人经过大量实验得到上述较佳的检测条件，尤其是梯度洗脱条件。采用本发明的色谱检测条件可以很好的将目标峰和杂质峰分离，同时样品保留时间为7.89min左右。不同批次或者样品与标准品之间的保留时间变化较小(0.2min左右)。由此，有效地实现目标物分离。
另外，本发明提出了另一种检测乳粉中叶黄素的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：准确称取1.5g乳粉于25mL棕色容量瓶或比色管中，加入8mL水(70℃)，混合2min后，再加入10ml 0.1％BHT丙酮溶液，混合1～2min，超声20min，再用0.1％BHT丙酮溶液定容至刻度，以便得到混合液；将混合液在4℃下以10000rpm的转速离心10min，上清液用0.22μm有机系微孔滤膜过滤，以便得到待测液；配制不同浓度叶黄素的标准品溶液；分别对待测液和不同浓度叶黄素的标准品溶液进行液相色谱检测，并基于检测结果确定乳粉中叶黄素含量，其中，液相色谱法的检测条件如下：色谱柱：YMCTM类胡萝卜素色谱柱，5μm，4.6×250mm；进样量：50μL；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；波长：445nm；梯度洗脱条件：
由此，利用根据本发明实施例的检测乳粉中叶黄素的方法能够准确、有效地对乳粉中叶黄素进行检测，且精密度高、操作简便。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
在该实施例中，按照下列方法测定婴幼儿乳粉中叶黄素含量：
1、仪器
高效液相色谱(配有紫外检测器)
漩涡混合仪
超声仪
分析天平：感量0.01mg
高速离心机(不低于5000rpm)
2、试剂
甲醇：HPLC级
丙酮：HPLC级
甲基叔丁基醚：HPLC级
二氯甲烷：HPLC级
1，6二叔丁基对苯酚(BHT)：纯度＞99％
滤膜：0.22μm，有机系
0.1％BHT丙酮溶液：称取0.500gBHT于500mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度
叶黄素标准品：纯度＞96.2％
水：超纯水
3、标准溶液配置
叶黄素标准贮备液(40μg/mL)：精确称取叶黄素标准品10mg于25mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶解并定容，-70℃避光保存。
标准品中间液：吸取叶黄素标准储备液1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。此标准品中间液浓度为4.0μg/mL。
标准品工作液：分别吸取0.050、0.1、0.2、0.5、1.0mL叶黄素标准品中间液于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并定容。此标准品工作液浓度为0.02、0.04、0.08、0.2和0.4μg/mL。
4、样品处理
准确称取1.5g试样(精确到0.01g)于25mL棕色容量瓶或比色管中，加入8mL水(70℃)，旋涡混合仪混匀2min后，再加入10ml 0.1％BHT丙酮溶液，旋涡混合仪混匀1-2min，超声波超声20min，再用0.1％BHT丙酮溶液定容至刻度，摇匀。4℃下以10000rpm的转速离心10min，上清液用0.22μm有机系微孔滤膜过滤，得到待测液。
注意：整个过程需要避光。
5、利用液相色谱分别对待测液以及不同浓度标准品工作液进行检测，检测条件如下：
色谱柱：YMCTMCarotenoid，5μm，4.6×250mm
进样量：50μL
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
波长：445nm
梯度洗脱条件：
检测得到的叶黄素标准品工作液浓度与峰面积关系如图2所示，线性方程：Y＝14.8150X-0.0341，R2＝0.99999，方程符合要求。
将待测液所得到的峰面积代入上述线性方程中，即可计算得到乳粉中叶黄素含量，结果表1所示。其中样品1、2为平行检测结果，平均值为307μg/100g，绝对差值为1μg/100g，绝对差值占平均值的比为0.33％；检测结果精密度符合要求(在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超出算术平均值的10％。)。
表1乳粉中叶黄素含量
序号 质量g 浓度μg/mL 定容体积mL 结果μg/100g
1 1.5068 0.1845 25 306
2 1.5053 0.1850 25 307
实施例2回收率测定
在该实施例中，按照下列方法测定回收率：
选取一个全脂乳粉作为本底进行回收率检测，具体检测方法为：
(1)称取1.5g全脂乳粉(已知不含叶黄素)于25ml棕色容量瓶后，加入标准品溶液，得到加标样品，其中，加入的叶黄素终浓度记作加标浓度；
(2)按照实施例1的方法测定加标样品中叶黄素含量，记作实测浓度；
(3)按照下列公式计算回收率：
回收率(％)＝实测浓度×100/加标浓度。
检测检测结果如表2所示。
表2回收率
根据以上数据可见，检测回收率在80～120％之内，符合要求。从而表明本发明方法准确性高。
对比例1
按照实施例1的方法测定婴幼儿乳粉，区别在于，将丙酮替换为乙醇。
由以上数据可见，采用乙醇提取时，检测结果偏低，且样品的精密度不能达到要求。
对比例2
按照实施例1的方法测定婴幼儿乳粉，区别在于，样品检测量为2g。
序号 质量g 浓度μg/mL 定容体积mL 结果g/100g
1 2.1056 0.25 25 297
2 2.0568 0.2506 25 305
3 2.0645 0.2236 25 271
4 2.0108 0.2488 25 309
根据以上数据可见，称取2g样品进行检测时，平均值为296μg/100g，相对偏差为13.05％，超出检测结果精密度要求(在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超出算术平均值的10％)。
对比例3
按照实施例1的方法测定婴幼儿乳粉，区别在于，样品检测量为1g。
序号 质量g 浓度μg/mL 定容体积mL 结果g/100g
1 1.0526 0.1305 25 310
2 1.0024 0.1205 25 301
3 1.0104 0.1288 25 319
4 1.0589 0.12 25 283
根据以上数据可见，称取1g样品进行检测时，平均值为303μg/100g，相对偏差为11.67％，超出检测结果精密度要求(在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超出算术平均值的10％)。
对比例4
按照实施例1的方法测定婴幼儿乳粉，区别在于，梯度洗脱条件如下：
标准曲线图谱如图3所示，样品图谱如图4所示。可以看出，采用以上梯度进行检测时，标准品叶黄素的保留时间不一致，软件无法进行绘图。同时，进行样品检测时，样品在30min内不能完全出峰，无法进行检测。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (9)

1.一种检测乳粉中叶黄素的方法，其特征在于，包括：
准确称取1.5g乳粉于25mL棕色容量瓶或比色管中，加入8mL水(70℃)，混合2min后，再加入10ml 0.1％BHT丙酮溶液，混合1～2min，超声20min，再用0.1％BHT丙酮溶液定容至刻度，以便得到混合液；
将所述混合液在4℃下以10000rpm的转速离心10min，上清液用0.22μm有机系微孔滤膜过滤，以便得到待测液；
配制不同浓度叶黄素的标准品溶液；
分别对所述待测液和所述不同浓度叶黄素的标准品溶液进行液相色谱检测，并基于检测结果确定所述乳粉中叶黄素含量，
其中，所述液相色谱法的检测条件如下：
色谱柱：YMCTM类胡萝卜素色谱柱，5μm，4.6×250mm；
进样量：50μL；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
波长：445nm；
梯度洗脱条件：
2.一种检测乳制品中叶黄素的方法，其特征在于，包括：
将乳制品与丙酮进行混合处理，以便得到混合液；
将所述混合液进行离心处理，收集上清液；以及
将所述上清液进行色谱检测，并基于检测结果确定所述乳制品中叶黄素含量。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，基于1克所述乳制品，所述混合液的体积为15～20毫升。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，基于1.5克所述乳制品，所述混合液的体积为25毫升。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述乳制品为乳粉，所述乳粉预先用水进行溶解。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，基于1.5克所述乳粉，所述水的用量为5～10毫升，优选8毫升。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述离心处理是在4℃的温度、10000rpm的转速下进行10分钟。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，进行所述色谱检测之前，预先将所述上清液进行过滤处理，
优选地，所述过滤处理是采用0.22微米的过滤膜进行的。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用液相色谱法进行所述色谱检测，所述液相色谱法的检测条件如下：
色谱柱：YMCTM类胡萝卜素色谱柱，5μm，4.6×250mm；
进样量：50μL；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
波长：445nm；
梯度洗脱条件：
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