CN107418947A - 一种高活性固定化退浆酶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高活性固定化退浆酶的制备方法,涉及生物酶制剂制备领域,具体步骤为:首先制备海藻酸钠‑明胶复合水凝胶;然后制备纳米氧化钛溶胶,最后配制质量浓度为5‑10%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶。本发明制得的固定化酶热稳定性好,重复使用性能优异。
Description
技术领域:
本发明涉及生物酶制剂制备领域,具体的涉及一种高活性固定化退浆酶的制备方法。
背景技术:
织物在织造过程中,纤维需要上浆,增加牢度。织坯进行染色、漂白、印花时需要将浆料去掉,印花后也需要把印花的浆料去掉。退浆的好坏,直接影响成品的质量,如手感、白度、光洁度、给色量、白芯及强度等。目前大多采用淀粉浆料上浆,而退浆的方法很多,可以用烧碱、硫酸、双氧水等,但这些化工产品不仅有损织物,操作麻烦,而且会污染环境。利用酶制剂α-淀粉酶在一定条件下,可将淀粉浆迅速变为糊精,液化后的可溶性糊精随水洗而洗净,达到退浆的目的。酶法退浆可用于棉布、丝绸、维纶、粘胶纤维、混纺织物、色织府绸和化纤混纺等织物。
酶法退浆其优越性很多,被愈来愈多工厂所采纳,特别是一些高级织物非用酶退浆不可。在国外,酶法退浆工艺占很大比例。其特点是:高效高速,适合高温退浆,时间短,退浆率可达90%一95%;织物不受损伤,退浆后织物手感柔软、丰满,光洁度强,染色鲜艳;退浆和固色可以同浴处理,缩短工艺流程,提高劳动生产率;用于炼白,能提高毛细管效应,并能改善劳动生产条件、节约燃料、降低成本,能用于连续化大生产,酶工艺中常用的就是退浆酶。
退浆酶利用微生物发酵而成的淀粉酶与其他有效物质组成的复合物,目前退浆所用淀粉酶有两种:耐高温α-淀粉酶和中温淀粉酶;但是将退浆酶直接用于织物退浆时,其应用条件较为苛刻,稳定性差,重复使用性能不好。
发明内容:
本发明的目的是针对现有技术的不足,提供一种高活性固定化退浆酶的制备方法,该方法制得的固定化退浆酶稳定性好,重复使用性能优异,其酶活性大。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种高活性固定化退浆酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理,并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解,制得改性海藻酸钠水溶液;
(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液,并向明胶溶液中加入四水硝酸钙,搅拌至固体溶解,得到混合溶液;
(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中,边加入边搅拌,加入完毕后,继续搅拌2-6h,得到复合水凝胶;
(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀,缓慢加入四氯化钛,搅拌制得的混合液转移至反应釜中,滴加三乙胺,150℃下反应10-15h,反应结束后,冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶;
(5)配制质量浓度为5-10%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶。
作为上述技术方案的优选,步骤(1)中,双氧水和海藻酸钠的质量比为(0.005-0.01):1。
作为上述技术方案的优选,步骤(1)中,所述改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为1-5%。
作为上述技术方案的优选,步骤(2)中,所述明胶溶液的质量浓度为4%。
作为上述技术方案的优选,步骤(2)中,所述四水硝酸钙与明胶的质量比为1:(1.5-4)。
作为上述技术方案的优选,步骤(3)中,所述改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为(1-4):(6-8)。
作为上述技术方案的优选,步骤(3)中,改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为2-6mL/min。
作为上述技术方案的优选,步骤(4)中,所述四氯化钛的滴加速度为1.5-3.5mL/min。
作为上述技术方案的优选,步骤(4)中,所述无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30:(0.7-1.5):1。
作为上述技术方案的优选,步骤(5)中,所述退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:(1-3)。
本发明具有以下有益效果:
本发明采用包覆法制备固定化酶,以纳米氧化钛为核,海藻酸钠明胶交联水凝胶包覆,制得的固定化酶生物相容性好,耐高温性能优异,而且本发明合理调节海藻酸钠、明胶复合水凝胶的制备条件,以及纳米氧化钛的制备条件,制得的纳米氧化钛分散性好,包埋效果好,制得的固定化酶重复使用性好。
具体实施方式:
为了更好的理解本发明,下面通过实施例对本发明进一步说明,实施例只用于解释本发明,不会对本发明构成任何的限定。
实施例1
一种高活性固定化退浆酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理,并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解,制得改性海藻酸钠水溶液;其中,双氧水和海藻酸钠的质量比为0.005:1;改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为1%;
(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液,并向明胶溶液中加入四水硝酸钙,搅拌至固体溶解,得到混合溶液;其中,明胶溶液的质量浓度为4%;四水硝酸钙与明胶的质量比为1:1.5;
(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中,边加入边搅拌,加入完毕后,继续搅拌2h,得到复合水凝胶;其中,改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为1:6;改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为2mL/min;
(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀,缓慢加入四氯化钛,搅拌制得的混合液转移至反应釜中,滴加三乙胺,150℃下反应10h,反应结束后,冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶;其中,四氯化钛的滴加速度为1.5mL/min;无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30:0.7:1;
(5)配制质量浓度为5%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶;其中,退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:1。
实施例2
一种高活性固定化退浆酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理,并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解,制得改性海藻酸钠水溶液;其中,双氧水和海藻酸钠的质量比为0.01:1;改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为5%;
(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液,并向明胶溶液中加入四水硝酸钙,搅拌至固体溶解,得到混合溶液;其中,明胶溶液的质量浓度为4%;四水硝酸钙与明胶的质量比为1:4;
(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中,边加入边搅拌,加入完毕后,继续搅拌6h,得到复合水凝胶;其中,改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为4:8;改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为6mL/min;
(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀,缓慢加入四氯化钛,搅拌制得的混合液转移至反应釜中,滴加三乙胺,150℃下反应15h,反应结束后,冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶;其中,四氯化钛的滴加速度为3.5mL/min;无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30:1.5:1;
(5)配制质量浓度为10%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶;其中,退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:3。
实施例3
一种高活性固定化退浆酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理,并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解,制得改性海藻酸钠水溶液;其中,双氧水和海藻酸钠的质量比为0.006:1;改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为1-5%;
(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液,并向明胶溶液中加入四水硝酸钙,搅拌至固体溶解,得到混合溶液;其中,明胶溶液的质量浓度为4%;四水硝酸钙与明胶的质量比为1:2;
(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中,边加入边搅拌,加入完毕后,继续搅拌3h,得到复合水凝胶;其中,改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为2:6.5;改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为3mL/min;
(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀,缓慢加入四氯化钛,搅拌制得的混合液转移至反应釜中,滴加三乙胺,150℃下反应11h,反应结束后,冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶;其中,四氯化钛的滴加速度为2mL/min;无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30:1.0:1;
(5)配制质量浓度为6%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶;其中,退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:1.5。
实施例4
一种高活性固定化退浆酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理,并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解,制得改性海藻酸钠水溶液;其中,双氧水和海藻酸钠的质量比为0.007:1;改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为3%;
(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液,并向明胶溶液中加入四水硝酸钙,搅拌至固体溶解,得到混合溶液;其中,明胶溶液的质量浓度为4%;四水硝酸钙与明胶的质量比为1:2.5;
(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中,边加入边搅拌,加入完毕后,继续搅拌4h,得到复合水凝胶;其中,改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为3:7;改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为4mL/min;
(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀,缓慢加入四氯化钛,搅拌制得的混合液转移至反应釜中,滴加三乙胺,150℃下反应12h,反应结束后,冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶;其中,四氯化钛的滴加速度为2.5mL/min;无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30:1.2:1;
(5)配制质量浓度为7%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶;其中,退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:2。
实施例5
一种高活性固定化退浆酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理,并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解,制得改性海藻酸钠水溶液;其中,双氧水和海藻酸钠的质量比为0.008:1;改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为4%;
(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液,并向明胶溶液中加入四水硝酸钙,搅拌至固体溶解,得到混合溶液;其中,明胶溶液的质量浓度为4%;四水硝酸钙与明胶的质量比为1:3.5;
(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中,边加入边搅拌,加入完毕后,继续搅拌5h,得到复合水凝胶;其中,改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为3.5:7.5;改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为5mL/min;
(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀,缓慢加入四氯化钛,搅拌制得的混合液转移至反应釜中,滴加三乙胺,150℃下反应14h,反应结束后,冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶;其中,四氯化钛的滴加速度为3mL/min;无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30:1.3:1;
(5)配制质量浓度为5-10%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶;其中,退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:2.5。
下面对本发明制得的固定化退浆酶进行性能测试。
1、热稳定性研究
取试管若干支,分别加入游离退浆酶和固定化退浆酶,放置在70℃下,每隔一段时间取出后反应一定时间,分别测定各管中酶的活力。
测试结果显示,游离退浆酶的热稳定性优于固定化酶;固定化酶在6h以内能保持较高的活性,而游离酶活性仅为原有酶活性的三分之一。
2、固定化酶重复使用稳定性研究
取试管两支,分别加入固定化退浆酶,然后加入底物进行反应,反应后分离出反应液,然后将固定化酶再进行反应,反复多次,监测酶的活力变化。
测试结果显示:游离酶在重复使用7次之后,活性仅为原来的40%,而对于固定化酶,活性为原料的93.5%。
Claims (10)
1.一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)用双氧水对海藻酸钠进行处理,并将处理后的海藻酸钠和去离子水混合搅拌至固体溶解,制得改性海藻酸钠水溶液;
(2)明胶和去离子水混合制得明胶溶液,并向明胶溶液中加入四水硝酸钙,搅拌至固体溶解,得到混合溶液;
(3)将步骤(1)制得的改性海藻酸钠水溶液缓慢加入到步骤(2)制得的混合溶液中,边加入边搅拌,加入完毕后,继续搅拌2-6h,得到复合水凝胶;
(4)将无水乙醇和冰醋酸混合搅拌均匀,缓慢加入四氯化钛,搅拌制得的混合液转移至反应釜中,滴加三乙胺,150℃下反应10-15h,反应结束后,冷却至室温制得纳米氧化钛溶胶;
(5)配制质量浓度为5-10%的退浆酶溶液,并将其加入到纳米氧化钛溶胶中,调节其pH至中性,然后滴加上述制得的复合水凝胶,滴加完毕后,30℃下搅拌5h,放入三辊研磨机中研磨,过滤,固体用去离子水洗涤,干燥,研磨,得到固定化退浆酶。
2.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,双氧水和海藻酸钠的质量比为(0.005-0.01):1。
3.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述改性海藻酸钠水溶液的质量浓度为1-5%。
4.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述明胶溶液的质量浓度为4%。
5.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述四水硝酸钙与明胶的质量比为1:(1.5-4)。
6.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,所述改性海藻酸钠水溶液、混合溶液的质量比为(1-4):(6-8)。
7.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,改性海藻酸钠水溶液的滴加速度为2-6mL/min。
8.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(4)中,所述四氯化钛的滴加速度为1.5-3.5mL/min。
9.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(4)中,所述无水乙醇、冰醋酸、四氯化钛、三乙胺的体积比为30:30:(0.7-1.5):1。
10.如权利要求1所述的一种高活性固定化退浆酶的制备方法,其特征在于,步骤(5)中,所述退浆酶溶液、纳米氧化钛溶胶、复合水凝胶的质量比为1:3:(1-3)。
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Citations (8)
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2017
- 2017-07-19 CN CN201710589609.0A patent/CN107418947A/zh active Pending
Patent Citations (8)
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