CN107384931A - Fhl3基因在促进动物生长中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于动物转基因技术领域，公开了FHL3基因在促进动物生长中的应用，将FHL3基因在动物体内过表达，能显著提高动物的生长速度和肌肉量。本发明首次揭示了超表达FHL3基因能够促进个体的生长和肌肉量的提高，首次发现了FHL3基因在此方面的功能。表明FHL3基因能够作为制备生长速度快、肌肉产量高的转基因家畜的候选基因。

Description

FHL3基因在促进动物生长中的应用

技术领域

本发明属于动物转基因技术领域，具体涉及FHL3基因在促进动物生长中的应用，将FHL3基因在动物体内过表达，能显著提高动物的生长速度和肌肉量。

背景技术

畜牧业是农业的组成部分和农业经济的重要支柱，在国民经济中有着重要的地位和作用。对于养殖者来说，用较少的投入，获得更多的产出，能显著提高经济效益。此外，人民生活水平的提高，也需要消费更多的肉、蛋、奶等动物性食品。传统的选育技术对家畜品种的改良，需要耗费大量的人力物力，周期长见效慢。开发利用新的遗传改良技术，提高单位家畜的生产力，则能够克服以上弊端。

研究表明，FHL(four and a half LIM domain)家族共有5个成员，即FHL1、FHL2、FHL3、FHL4、FHL5/ACT(activator of CREM in testis)，FHL3基因则是其中之一，该家族蛋白结构的特点是含有四个半LIM结构域，归属于LIM超家族。LIM结构域具有高度保守的序列，由两个串联的富含半胱氨酸和组氨酸的锌指结构，构成具有Zn2+结合的稳定的三级蛋白质结构。LIM结构域是介导转录因子、信号通路蛋白以及细胞骨架相关蛋白质之间的相互作用的主要区域。FHL3基因参与血管瘤的发生，能够降低血管内皮生长因子(VEGF)的启动子活性和VEGF的表达，而血管内皮生长因子(VEGF)是癌症生长和进展中血管生成的关键调节因子。Ding L等研究发现FHL3能结合Samd蛋白，超表达FHL3基因后，显著抑制肝癌细胞增殖以及肿瘤的生成。Hubbi ME等发现超表达FHL3基因，能够抑制癌症发生相关的转录因子：低氧诱导因子HIF1和HIF2的转录活性，从而抑制了肿瘤的继续生长。这些研究表明，FHL3基因在肿瘤和癌症的发生与生长中发挥重要作用。

李文涛等，通过构建pEGFP-N1L-MCK-FHL3肌肉组织特异性表达的转基因载体，使用显微注射的方法制备了转FHL3基因小鼠，在活体水平上开展了FHL3基因对不同肌纤维类型形成的研究。其研究发现，转基因小鼠中FHL3基因在不同组织中的mRNA表达水平不一，相对于非转基因小鼠，转基因鼠的心脏、肌肉、睾丸等组织中FHL3基因mRNA的表达量升高，达到显著水平(P<0.05)；肝脏中的表达量升高，但未达到显著水平；脾脏、肺、肾脏、脑、小肠、胃、脂肪等组织中的表达量与非转基因小鼠基本一致。

2012年Jinliang Huang等制备的过表达猪源PPARγ2的转基因小鼠，发现其在心肌与骨骼肌中表达量最高，连续检测转基因与非转基因鼠10周的体重变化，显示各周龄体重无明显差异。2013年Ting Li等构建真核表达载体sMCK-sDGAT1，显微注射法获得了转基因小鼠，发现DGATI基因在小鼠骨骼肌和肾脏中高表达，心肌里中度表达，引起转基因小鼠的骨骼肌中的脂肪沉积增多，但并未引起小鼠的其他组织中脂肪增多，与非转基因小鼠相比，生长速度也是相同的。2016年Xinyi Liu等制备了成纤维生长因子FGF21基因的转基因小鼠，在转基因鼠的心脏、腓肠肌、胰腺和肝脏中FGF21高表达，发现超表达FGF21基因的转基因鼠的个体明显要比非转基因的个体小，分离腿部的肌肉，同样要比非转基因的小，同时引发肌纤维类型的转变，转基因鼠的氧化型纤维(即I型肌纤维)的增多。Fei Ying等利用转基因猪过表达PGC-1α基因，转基因猪的心脏、肾脏、肝脏和肌肉组织中PGC-1α基因的表达均明显升高，同时PGC-1α基因引起肌纤维类型的转变，I型肌纤维显著增多，而II型肌纤维显著减少，肌纤维的横截面积也显著减小；但是对比肌肉形态大小，仅颜色发生了明显的变化。

1982年Palmiter等首次把大鼠的生长激素(rGH)基因通过原核显微注射的方法导入小鼠的基因组中并成功表达，获得了转基因巨型小鼠。1988年Vizge等将猪源生长激素基因导入猪受精卵中，培育出了日增重增加的转基因猪。Pursel VG等培育的带有牛源IGF-1的转基因猪，与非转基因的对照组相比，生长速度提高11％～14％的同时瘦肉率也增加了6％～8％(Hammer et al 1985)。潘登科等培育的转ω-3脂肪酸和酶基因克隆猪，产出的猪肉具有更高的营养价值。Se-Jin Lee等培育的在肌肉组织中高表达卵泡抑素(Fst)的小鼠与野生型(非转基因)小鼠相比,得到了肌肉细胞增殖和细胞个体增大所导致的骨骼肌总量明显增长的结果。外源基因在生物体内高度有效的表达，可以充分发挥导入的外源基因的功能优势，使转基因动物能够较快速的生长。这些研究表明外源基因的过表达可以大大促进转基因动物的繁育及生长速度和产肉量。

迄今为止，尚未见到有关转FHL3基因提高动物生长速度和肌肉量方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供FHL3基因在促进动物生长中的应用，将FHL3基因在动物体内过表达，能显著提高动物的生长速度和肌肉量，并使肌纤维增粗、横截面积增大。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

FHL3基因在促进动物生长中的应用，包括用于提高动物的生长速度，或提高动物的肌肉量，或提高肌纤维的横截面积中的应用。所述的动物包括小鼠、猪、牛、羊、兔、鸡，鸭等；所述的基因为上述动物对应的FHL3基因。

以上所述的方案中，优选的，所述的动物为小鼠，所述的FHL3基因为鼠源FHL3基因。

具体的执行步骤为：提取小鼠C2C12成肌细胞系的总RNA，反转录后获得cDNA，利用引物：

FHL3-F1 GTCGACGCCACCATGAGCGAGGCATTTGAC

FHL3-R1 GCGGCCGCTCAGGGGCCTGCTTGGCTG

(此对引物的设计含有Sal I和Not I限制性内切酶的位点)普通PCR扩增后获得FHL3基因的CDS序列，本实验室已构建的pEGFP-N1L-MCK载体和获得的FHL3基因的CDS序列采用Sal I和Not I限制性内切酶双酶切，最后将酶切后的FHL3基因的CDS序列连接到pEGFP-N1L-MCK的载体上，最终获得肌肉特异表达FHL3基因的转基因载体。将此转基因载体线性化后利用显微注射的方法制备转基因鼠，即可获得生长速度和肌肉量均增长的转基因小鼠。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

申请人在小鼠中超表达FHL3基因制备成转基因小鼠，首次揭示了超表达FHL3基因能够促进个体的生长和肌肉量的提高，首次发现了FHL3基因在此方面的功能。表明FHL3基因能够作为制备生长速度快、肌肉产量高的转基因家畜的候选基因。

附图说明

图1为本发明的技术流程图。

图2为pEGFP-N1L-MCK-FHL3转基因载体线性化图谱。

图3为F1代用于扩繁的转基因鼠的鉴定结果

琼脂糖凝胶浓度为1.2﹪，图中泳道：M为DL2000Maker；泳道质粒：pEGFP-N1L-MCK-FHL3质粒作为转基因阳性对照，880bp；泳道空：水作为空白对照；泳道WT：野生型(非转基因)鼠作为阴性对照；泳道1、2、3、5、6、7、8、10、11、12、13为转FHL3基因阳性小鼠，880bp；泳道4、9为转FHL3基因阴性小鼠。

图4为F2代群体中的2窝新生鼠的转FHL3基因鉴定结果。

琼脂糖凝胶浓度为1.2﹪，图中泳道：M为DL2000Maker；泳道质粒：pEGFP-N1L-MCK-FHL3质粒作为转基因阳性对照，880bp；泳道空：水作为空白对照；泳道WT：野生型(非转基因)鼠作为阴性对照；泳道1、2、3、4、5、7、9、11、13为转FHL3基因阳性小鼠，880bp；泳道6、8、12、14为转FHL3基因阴性小鼠。

图5为转FHL3基因阳性小鼠与非转基因小鼠的生长曲线示意图；

上图为转FHL3基因阳性公鼠与野生型(非转基因)公鼠的生长曲线，下图为转FHL3基因阳性母鼠与野生型(非转基因)母鼠的生长曲线。

体重单位：克。转基因公鼠；野生型公鼠。TG♀：转基因母鼠；WT♀：野生型母鼠，***代表数据的统计学差异的显著性达到P<0.001。

图6为转基因公鼠、母鼠与野生型公鼠、母鼠的肌肉形态对比示意图；

左图为转基因公鼠、母鼠与野生型公鼠、母鼠个体大小与全身肌肉量的对比；右图为转基因公鼠与野生型公鼠的整个后肢肌肉、腿部的股四头肌、腓肠肌与比目鱼肌、胫骨前肌的肌肉块大小的对比示意图。

图7为转基因公鼠、母鼠与野生型公鼠、母鼠腿部分离的不同肌肉的重量对比示意图。

*代表组间数据的统计学差异的显著性达到P<0.05，***代表数据的统计学差异的显著性达到P<0.001。

图8为转基因公鼠与野生型公鼠的股四头肌、腓肠肌、比目鱼肌和胫骨前肌的组织切片免疫荧光图；

肌纤维的肌膜着色为绿色，用于肌纤维横截面积的展示。

图9为转基因公鼠与野生型公鼠的股四头肌、腓肠肌、比目鱼肌和胫骨前肌的肌纤维的横截面积大小分布图；

肌纤维横截面积大小的单位，μm²：平方微米。*代表组间数据的统计学差异的显著性达到P<0.05，**代表组间数据的统计学差异的显著性达到P<0.01。

图10为转基因公鼠与野生型公鼠的股四头肌、腓肠肌、比目鱼肌和胫骨前肌的肌纤维的密度对比示意图。***代表数据的统计学差异的显著性达到P<0.001。

具体实施方式

本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。本发明实施例，以将鼠源FHL3基因在小鼠中过表达为例，对FHL3基因的功能进行说明。其他动物，猪、牛、羊、兔、鸡，鸭等，将其对应的FHL3基因在其体内过表达，也能达到促进个体的生长和肌肉量的提高的效果，鉴于篇幅问题，不再赘述。

实施例1：

过表达FHL3基因的转基因小鼠的制备：

1.1pEGFP-N1L-MCK-FHL3转基因载体构建与线性化：

提取小鼠C2C12成肌细胞系的总RNA，反转录后获得cDNA。利用NCBI数据库中公布的鼠的FHL3基因的CDS序列(Genebank登录号：NM-010213.3)，设计含有Sal I和Not I两个酶切位点的引物：

FHL3-F1 GTCGACGCCACCATGAGCGAGGCATTTGAC

FHL3-R1 GCGGCCGCTCAGGGGCCTGCTTGGCTG

普通PCR扩增获得FHL3基因的CDS序列，大小为890bp，CDS序列具体为：

GTCGACGCCACCATGAGCGAGGCATTTGACTGTGCAAAATGCAACGAGTCCTTGTACGGCCGCAAATACATCCAGACAGACAGTGGCCCCTACTGCGTTCCGTGCTATGACAACACCTTCGCCAACACCTGTGCTGAGTGCCAGCAGCTCATTGGGCATGATTCAAGGGAACTGTTCTATGAGGACCGCCACTTCCACGAGGGCTGCTTCCGCTGCTGCCGATGCCAGCGCTCCCTTGCCGATGAGCCCTTCACCTGTCAGGACAGTGAGCTTCTGTGTAATGAGTGTTACTGCACAGCCTTCTCGTCCCAGTGTTCTGCCTGCGGGGAGACTGTCATGCCTGGGTCCCGGAAGCTGGAGTATGGAGGCCAGACGTGGCATGAACACTGCTTTCTGTGCAGTGGCTGTGAGCAGCCGCTGGGCTCCCGCTCCTTCGTGCCTGACAAGGGTGCCCACTACTGCGTGCCTTGCTATGAGAACAAATTTGCTCCTCGGTGTGCCCGCTGCAGCAAGACGCTGACCCAGGGTGGAGTGACATATCGTGATCAGCCCTGGCACCGAGAGTGCCTGGTCTGCACTGGGTGCAAGACGCCCCTTGCAGGGCAGCAGTTCACATCTCGGGATGATGATCCTTACTGTGTGGCCTGCTTTGGAGAACTCTTTGCACCCAAGTGCAGCAGCTGCAAGCGCCCCATCACAGGTGGGAGCGGCGGCGGCGAGGGCGCAGGACTCGGTGGAGGCAAGTATGTGTCCTTCGAAGACCGACATTGGCACCACAGCTGCTTTTCCTGTGCCCGCTGCTCCACCTCCCTGGTGGGCCAAGGCTTTGTACCAGACGGAGATCAAGTTCTATGCCAGGGCTGCAGCCAAGCAGGCCCCTGAGCGGCCGC

pEGFP-N1L-MCK质粒DNA和获得的FHL3基因的CDS序列采用Sal I和Not I限制性内切酶双酶切，最后将酶切后的FHL3基因的CDS序列连接到pEGFP-N1L-MCK的载体上，最终获得肌肉特异表达FHL3基因的转基因载体。将此转基因载体线性化后利用显微注射的方法制备转基因鼠(李文涛,2016，利用转基因小鼠模型研究FHL3基因对不同肌纤维类型形成的影响)。

1.2转基因鼠的分子生物学鉴定：制备出的转基因鼠，取其尾组织，提取组织基因组DNA(或称总DNA)，利用PCR方法鉴定转基因小鼠是否为阳性转基因鼠(即目的基因成功插入转基因鼠基因组中)。扩繁获得的后代小鼠的鉴定方法与此相同。

1.3转FHL3基因鼠的扩繁：经PCR技术鉴定为转基因阳性的小鼠与野生小鼠交配，获得F1代，F1代全同胞阳性鼠交配产生F2代，同时扩大F2代的群体数量。

本发明的小鼠，全部饲养在SPF级鼠房中。获得的转FHL3基因的F1代鼠，剪取0.5cm鼠尾放入EP管中，使用通用型柱式基因组提取试剂盒(货号CW2298M，购自康为世纪生物科技有限公司)，按照该试剂盒的说明书进行全基因组DNA的提取操作。以基因组DNA为模板，野生(即非转基因)鼠基因组DNA为阴性对照，水作为空白对照，

pEGFP-N1L-MCK-FHL3质粒为阳性对照，依据pEGFP-N1L-MCK-FHL3载体序列设计的特异性引物如下：

FHL3-JF1 AGGAGACAGCGAGTAGCGAGCTCT

FHL3-JR1 TGTCATAGCACGGAACGCAGT

对小鼠进行PCR鉴定，扩增长度为880bp，如下：

AGGAGACAGCGAGTAGCGAGCTCTAAAAATAAACTCCCTTTTCTGCAAGCCTGCAGGCCCTGTCCCCTCCAGCGTGGAATCACCCAGTGTCACTGGGCCCTGCGCCGCTTCTGGCCTGGCTTTGAGTCTGAATGGCCCCCCTGGGCCCGGCCTCGTGTCCCCCCCACTGCCATCAAGGAGGGAAAACCCGCTAAGCACAGGCATCAGGGATCAGGCTGCCCAGCTCCCACCTCTGCCCGGGTCACAGGCTCCCTGTAGCCGGGTGACAGTAGGCAAATCACGCAGCCTCTCTGGGCCACTATTTCCTCCTCTGGAGAACCAGACACTTGGTCCTTCTGGGATGATGGCAGGGTTTCCCCAGAAGCAGGGCTCAGGACTTTGCTGGGGTCAAGGCCACCCTGGGGGCCAAGGAGAGACTGGCGGCCTAGCGGAGGGCCAGGGGAGGGTGGTTTCTACGTGCCTGGGACAGCCTCTGACACAGTCCCGTGGCCCCGGCGGGGGGCCAGCTGTCCCCGCCAGCCCGACTCAGCACTTGGTCTGGGGACCAGCTTGGTTTGGGGGTGGGGGGTGGGCCCAGCCCCTGGGGCGGCCCATACAAGGCCATGGGGCTGGGCGCAAGGCACGCCTGGGTTCAGGGTGGGCACGGTGCCCAGGCAGCGAAGCGAGAGCGCAGCTGCCCTCCACCCCCCTCCTGGCCAGCGGCCCCTCCTGACCAATAGCACAACCTGGGCCCCCCCTATAAAAGGCCAGGGCTGCAGTCCTGTCCTTTGTCGACGCCACATGAGCGAGGCATTTGACTGTGCAAAATGCAACGAGTCCTTGTACGGCCGCAAATACATCCAGACAGACAGTGGCCCCTACTGCGTTCCGTGCTATGACA

经过琼脂糖凝胶电泳对比，证实转基因鼠的FHL3基因已经成功整合到基因组中。图3为F1代用于扩繁的转基因鼠的PCR检测结果。结果显示转基因阳性小鼠的基因组DNA和pEGFP-N1L-MCK-FHL3质粒能被上述特异性引物扩增出特异性片段，而水、野生(非转基因)鼠以及转基因阴性鼠(即目的基因未能成功插入小鼠基因组中的情况，等同于野生鼠)均不能扩增出片段。对PCR检测鉴定为转基因阳性的F1代小鼠，进行全同胞配对，大量扩繁获得F2代群体。F2代群体的转基因鉴定方法同上，鉴定结果见图4。

实施例2：

FHL3基因在促进动物生长中的应用：

1)过表达FHL3基因的转基因小鼠的生长速度明显快于野生型

转FHL3基因的F1代鼠全同胞配对后，定期观察小鼠怀孕情况，待母鼠要生产时，增加查看频率，在第一时间发现新生小鼠时，用分析天平精确称取小鼠的初生重，并做好标记。同时鼠粮、饮水的供应充足，定期更换垫料，保证小鼠的良好生活环境。此后每周再称取每一只小鼠的体重，直至第8周，完成小鼠体重增长的记录。期间所有新生鼠均在2周龄时剪取鼠尾用于DNA提取和PCR鉴定，在3周龄时断奶，与母鼠分笼饲养，且公母鼠分开每个鼠笼饲养3只，保证有足够活动空间。最大限度保证小鼠有同等的生长条件。野生鼠的饲养、扩繁、称重记录，在相同的时间和条件下完成。对记录的转基因阳性的以及野生的公鼠、母鼠的体重数据，进行分组分析，绘制成生长曲线(图5)，比较生长速度的差异。由图5结果可知，转FHL3基因后，并不影响小鼠的初生重，但从第一周开始，可见转基因小鼠的生长速度明显快于野生型(即非转基因)小鼠，转基因鼠的体重增速相较于野生鼠提高了15％左右，促进生长速度的加快效果显著。

2)过表达FHL3基因的转基因小鼠的肌肉重量明显高于野生型

转基因阳性鼠与野生鼠成长至2月龄时，处死，首先暴露出全身肌肉，拍照做整体比较(图6)。可见转基因鼠个体增大，分离小鼠的后肢，可见整个腿部肌肉增多，分离腿部的股四头肌、腓肠肌和胫骨前肌，肌肉块均明显增大。然后对分离的股四头肌、腓肠肌、胫骨前肌、趾伸长肌和比目鱼肌用分析天平称取重量。图7的统计结果表明转基因阳性的公鼠与母鼠和野生型鼠的比目鱼肌相比均无明显变化，但转基因公鼠的股四头肌、腓肠肌、胫骨前肌和趾伸长肌均比野生鼠的肌肉重量高，且都达到极显著水平(P<0.001)。转基因母鼠的股四头肌、腓肠肌相对于比野生鼠的肌肉重量的增加，也都达到极显著水平(P<0.001)，胫骨前肌的增高差异达到显著水平(P<0.05)。经量化分析，转基因公鼠的股四头肌、胫骨前肌与趾伸长肌的重量相对野生公鼠提高20％～23％，腓肠肌的重量提高11.8％；转基因母鼠的股四头肌与腓肠肌的重量相对野生母鼠提高8.7％～8.9％，胫骨前肌的重量提高5.6％，过表达FHL3基因，促进肌肉产量的提高效果显著。

3)过表达FHL3基因的转基因小鼠的股四头肌、腓肠肌和胫骨前肌，肌纤维的横截面积高于野生型且肌纤维的密度显著低于野生型

肌肉组织的石蜡切片的制作

转基因阳性鼠与野生鼠成长至2月龄时，分离采取公鼠腿部的股四头肌、腓肠肌、胫骨前肌和比目鱼肌。组织固定：采集的肌肉组织立即浸泡在4％多聚甲醛溶液中24h，并做好标记。石蜡切片制作：(1)组织冲洗：从固定液中取出组织进行修块，之后肌肉组织放于脱水框内，流水冲洗24h。(2)组织脱水：将脱水狂依次放在不同浓度的酒精溶液中梯度脱水：70％(2h)，75％(1h)，85％(1h)，95％(1h)，100％I(1h)，100％II(1h)。(3)组织透明：梯度酒精脱水后的组织放在无水乙醇和二甲苯1：1体积的混合液中30min，二甲苯I溶液10min,二甲苯II溶液10min。(4)组织浸蜡与包埋：蜡油的处理，白蜡和蜂蜡8：1体积在60℃融化混合，滤纸过滤两次。二甲苯与蜡油1：1体积混合液中浸泡30min，蜡油I浸泡2h，蜡油II浸泡2h。然后不锈钢包埋框中倒入蜡油，把组织块修理平整的横截面朝下放置，贴上标签。(5)切片：使用莱卡旋转式切片机(型号RM2245/RM2235，德国徕卡公司)，设置切片厚度4μm，获得连续切片。在40℃水浴锅中展片，防脱片载玻片捞片。晾干水分，放置在60℃烘箱中烘烤30min，最后切片放在4℃冰箱中保存。

肌肉组织石蜡切片免疫荧光实验

组织切片放在切片架上在烘箱中60℃烘烤1h，脱蜡至水：二甲苯I溶液20min，二甲苯II溶液20min，100％乙醇10min，95％乙醇5min，85％乙醇5min，70％乙醇5min，去离子水中5min。抗原修复：组织切片放入加满0.01mol/L枸橼酸钠缓冲液(PH＝7.0)的修复槽中，用微波炉加热，中火加热至沸腾，盖上盖子静止10min，再用中低火加热至沸腾，去除自然冷却至室温。然后用PBS溶液(PH＝7.4)在摇床上晃动洗涤三次，每次5min。BSA封闭：甩干PBS溶液，免疫组化专用笔围绕切片上的组织画圆圈，在圆圈中滴加5％BSA溶液完全覆盖组织。37℃温箱中封闭1h。一抗孵育：甩干封闭液，在切片的组织上滴加用PBS稀释的dystrophin(肌营养不良蛋白)的抗体(种属为兔)，稀释比例1：200，把滴加抗体后的切片放在湿盒内，4℃冰箱中孵育14h。二抗孵育：取出切片在PBS溶液(PH＝7.4)在摇床上晃动洗涤三次，每次5min。甩干后，滴加与一抗相应种属的二抗(绿色荧光的驴抗兔抗体)，稀释比例1：200，避光室温下孵育1h。封片：取出切片在PBS溶液(PH＝7.4)在摇床上晃动洗涤三次，每次5min。滴加抗荧光猝灭专用封片剂，盖上盖玻片。镜检拍照：切片用尼康倒置荧光显微镜观察并采集保存图像(FITC绿色荧光激发波长465-495nm，发射波长515-555nm)。

图像分析：采集的图片用Image J软件，统计肌纤维的横截面积和密度的数据。采集的数据经过统计学分析后，比较转基因鼠与野生型鼠的股四头肌、腓肠肌、胫骨前肌和比目鱼肌的肌纤维特征的差异。图8、图9和图10的结果表明，转FHL3基因鼠相对于野生鼠的股四头肌、腓肠肌和胫骨前肌，肌纤维增粗，肌纤维的横截面积均显著增大，同时肌纤维的密度显著降低。而比目鱼肌的特征没有明显变化。

尽管本发明的内容是结合本实施例进行说明，但是不能认为是对本发明保护范围的限制，本发明的范围由所附权利要求限定。另外，本领域的技术人员在所附权利要求书限定的范围内对本发明进行各种改动或修饰，这些改动或修饰形式同样落在本发明范围内。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> FHL3基因在促进动物生长中的应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 890

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gtcgacgcca ccatgagcga ggcatttgac tgtgcaaaat gcaacgagtc cttgtacggc 60

cgcaaataca tccagacaga cagtggcccc tactgcgttc cgtgctatga caacaccttc 120

gccaacacct gtgctgagtg ccagcagctc attgggcatg attcaaggga actgttctat 180

gaggaccgcc acttccacga gggctgcttc cgctgctgcc gatgccagcg ctcccttgcc 240

gatgagccct tcacctgtca ggacagtgag cttctgtgta atgagtgtta ctgcacagcc 300

ttctcgtccc agtgttctgc ctgcggggag actgtcatgc ctgggtcccg gaagctggag 360

tatggaggcc agacgtggca tgaacactgc tttctgtgca gtggctgtga gcagccgctg 420

ggctcccgct ccttcgtgcc tgacaagggt gcccactact gcgtgccttg ctatgagaac 480

aaatttgctc ctcggtgtgc ccgctgcagc aagacgctga cccagggtgg agtgacatat 540

cgtgatcagc cctggcaccg agagtgcctg gtctgcactg ggtgcaagac gccccttgca 600

gggcagcagt tcacatctcg ggatgatgat ccttactgtg tggcctgctt tggagaactc 660

tttgcaccca agtgcagcag ctgcaagcgc cccatcacag gtgggagcgg cggcggcgag 720

ggcgcaggac tcggtggagg caagtatgtg tccttcgaag accgacattg gcaccacagc 780

tgcttttcct gtgcccgctg ctccacctcc ctggtgggcc aaggctttgt accagacgga 840

gatcaagttc tatgccaggg ctgcagccaa gcaggcccct gagcggccgc 890

<210> 2

<211> 880

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

aggagacagc gagtagcgag ctctaaaaat aaactccctt ttctgcaagc ctgcaggccc 60

tgtcccctcc agcgtggaat cacccagtgt cactgggccc tgcgccgctt ctggcctggc 120

tttgagtctg aatggccccc ctgggcccgg cctcgtgtcc cccccactgc catcaaggag 180

ggaaaacccg ctaagcacag gcatcaggga tcaggctgcc cagctcccac ctctgcccgg 240

gtcacaggct ccctgtagcc gggtgacagt aggcaaatca cgcagcctct ctgggccact 300

atttcctcct ctggagaacc agacacttgg tccttctggg atgatggcag ggtttcccca 360

gaagcagggc tcaggacttt gctggggtca aggccaccct gggggccaag gagagactgg 420

cggcctagcg gagggccagg ggagggtggt ttctacgtgc ctgggacagc ctctgacaca 480

gtcccgtggc cccggcgggg ggccagctgt ccccgccagc ccgactcagc acttggtctg 540

gggaccagct tggtttgggg gtggggggtg ggcccagccc ctggggcggc ccatacaagg 600

ccatggggct gggcgcaagg cacgcctggg ttcagggtgg gcacggtgcc caggcagcga 660

agcgagagcg cagctgccct ccacccccct cctggccagc ggcccctcct gaccaatagc 720

acaacctggg ccccccctat aaaaggccag ggctgcagtc ctgtcctttg tcgacgccac 780

atgagcgagg catttgactg tgcaaaatgc aacgagtcct tgtacggccg caaatacatc 840

cagacagaca gtggccccta ctgcgttccg tgctatgaca 880

Claims (5)

1.FHL3基因在促进动物生长中的应用。

2.FHL3基因在提高动物的肌肉量中的应用。

3.FHL3基因在提高动物肌纤维的横截面积中的应用。

4.FHL3基因在同时促进动物生长、提高动物的肌肉量和提高动物肌纤维的横截面积中的应用。

5.根据权利要求1或2或3或4所述的应用，所述的动物包括小鼠、猪、牛、羊、兔、鸡，鸭；所述的基因为上述动物对应的FHL3基因。