CN107354219B - 一种鉴定企鹅性别的方法及试剂盒 - Google Patents

一种鉴定企鹅性别的方法及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明属于分子生物学检测领域，具体涉及一种鉴定企鹅性别的方法及试剂盒。一种鉴定企鹅性别的方法，包含如下步骤：(1)采用
Figure DDA0001387133380000011
Blood DNA Mini Kit提取待测企鹅的血液DNA；(2)以DNA为模板，使用引物Sex F和Sex R进行PCR扩增；(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断企鹅性别。本发明还提供了一种实施上述鉴定企鹅性别的方法的试剂盒。本发明具有操作简单，时间短，通用性高，结果准确、可靠，对企鹅的应激小等优点。

Description

一种鉴定企鹅性别的方法及试剂盒
技术领域
本发明属于分子生物学检测领域，具体涉及一种鉴定企鹅性别的方法及试剂盒。
背景技术
有“海洋之舟”美称的企鹅(Spheniscidae)是一种最古老的游禽，属于企鹅目，企鹅科。
企鹅是一种单态性鸟，即雌雄同型，它们的性别鉴定很难通过外观以及其他行为进行判断区别，这给配对造成了很大的困难。在动物园中，如果可以通过鉴定雏鸟的性别，就能淘汰非目的的性别个体，也能降低饲养成本，提高经济效益，并且在人工饲养管理、有效的繁殖、遗传研究与疾病防治等方面有重要的意义，尤其是对如今一些濒危的珍稀鸟类的保护与管理具有重要的意义。企鹅是世界濒临灭绝且少有研究的珍惜物种之一，随着其个体数量的急剧减少，为了保存该物种，建立企鹅性别技术迫在眉睫。
目前，可用于鉴定单态性鸟或双态性幼鸟性别的传统方法有：目测性器官；通过组织培养进行染色体分析；测定粪便中雌激素与睾酮比例；对性腺进行直接造影的内窥镜及超声波检查；体尺测量法；用录音机录下鸣叫声比较声波频率等；这些方法的性别鉴定，耗体力、可靠性差、且鉴定结果误差大。鸟类的性染色体为ZW型，ZZ为雄性，ZW为雌性。随着近年来，分子生物学的高速发展，分子鉴定鸟类的性别的措施也趋于盛行。其实验过程较于传统方法更简便、其实验结果比传统方法也更准确、实验材料的采集也更简单方便。尤其是对于濒危野生动物，非损伤采样法的运用更主流化。分子性别鉴定是目前比较广泛使用的方法。对于非平胸鸟类，应用最多的是CHD基因，染色体螺旋蛋白基因(chromobox-helicase-DNA binding gene)。
CHD基因十分保守，并且有两个同源拷贝CHD-W和CHD-Z。其中CHD-W是关于W连锁，CHD-Z是关于Z连锁。雌性个体中具有两个同源拷贝CHD-W和CHD-Z，而雄性个体中只有CHD-Z。故雄性个体(ZZ)只有一个拷贝CHD-Z，只有一个条带；雌性个体(ZW)有两个拷贝CHD-Z、CHD-W，可显示出两个条带，而另一种方法是将PCR产物进一步测序，并用Blast软件进行序列同源性比对分析。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种鉴定企鹅性别的方法。
本发明的另一目的在于提供一种实施上述鉴定企鹅性别的方法的试剂盒。
本发明的再一目的在于提供上述鉴定企鹅性别的试剂盒的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种鉴定企鹅性别的方法，包含如下步骤：
(1)采用E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000022
Blood DNA Mini Kit提取待测企鹅的血液的DNA；
(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，使用引物Sex F和引物Sex R进行PCR扩增，得到扩增产物；
(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断企鹅性别，其中，电泳条带为660bp一条带为雄性企鹅，电泳条带为660bp和750bp两条带为雌性企鹅；
步骤(1)中所述的企鹅的血液的用量优选为10μL；
步骤(2)中所述的引物Sex F和引物Sex R的核苷酸序列如下所示：
Sex F：5′-GTTACTGATTCGTCTACGAGA-3′；
Sex R：5′-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3′；
步骤(2)中所述的PCR扩增的体系优选为25μL体系，具体如下：
Figure BDA0001387133360000021
步骤(2)中所述的PCR扩增的反应程序为：95℃4min；94℃30s，45℃30s，72℃50s，35个循环；72℃，10min；
所述的鉴定企鹅性别的方法，优选还包含如下步骤：
(4)如果步骤(3)电泳检测无条带，以步骤(1)提取的DNA为模板，使用引物P2和引物P8进行PCR扩增，得到扩增产物；
(5)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断企鹅性别，其中，电泳条带为380bp一条带为雄性企鹅，电泳条带为370bp和380bp两条带为雌性企鹅；或直接将扩增产物进行测序，根据测序结果，鉴定企鹅的性别；
步骤(4)中所述的引物P2和引物P8的核苷酸序列分别如下所示：
引物P2：5′-TCTGCATCGCTAAATCCTTT-3′；
引物P8：5′-CTCCCAAGGATGCAACTG-3′；
步骤(4)中所述的PCR扩增的体系优选为25μL体系，具体如下：
Figure BDA0001387133360000031
步骤(4)中所述的PCR扩增的反应程序为：95℃4min；94℃30s，56℃30s，72℃25s，35个循环；72℃，10min；
一种实施上述鉴定企鹅性别的方法的试剂盒，优选包含如下组分：2×Trans Taq-T PCR SuperMix、鉴定企鹅性别的引物Sex F/Sex R和引物P2/P8、ddH2O；
所述的实施上述鉴定企鹅性别的方法的试剂盒在鉴定企鹅性别领域中的应用；
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)非伤害性的取样，对企鹅的应激小，如抽取1mL的血液、拔取有毛囊组织的羽毛等。
(2)不受年龄的限制，即使是刚出生的雏鸟，也可以做性别鉴定。
(3)本发明是通过扩增在非平胸鸟类中都非常保守的CHD基因特异性区段序列，进行性别鉴定，结果准确、可靠等。
(4)操作简单，时间短，通用性高。
附图说明
图1是实施例2部分企鹅CHD基因的PCR检测结果图；其中，M：2000bp DNA Maker；1～11：企鹅CHD基因PCR产物；12：阴性对照。
图2是实施例3部分企鹅CHD基因的PCR电泳检测结果图，其中，M：2000bp DNAMaker；1：阴性对照；2～13：企鹅CHD基因PCR产物。
图3是帝企鹅72Blast比对结果分析图。
图4是白眉企鹅56Blast比对结果分析图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中，Blood Genome DNA Extraction Kit(Lot#AK4401)购自TaKaRa；E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000041
SQ NRBC Blood DNA Kit、E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000042
Forensic DNA Kit、E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000043
Blood DNA MiniKit、Mix均购自于OMEGA公司，核酸染料GoodView、DNA Marker DL2000、琼脂糖、50X TAE电泳缓冲液购自Invitrogen公司、无水乙醇购自深圳市东茂化学试剂有限公司；
实施例1企鹅血液DNA的提取
(1)14只企鹅的血液由珠海长隆海洋王国提供，性别未知，编号分别为G56、G58、G61、G62、G63、G64、G65、G66、G67、A122、H29、E36、E72与C1；
(2)分别采用四种不同的DNA抽提试剂盒Blood Genome DNA Extraction Kit(Lot#AK4401)(TaKaRa)、E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000044
SQ NRBC Blood DNA Kit(OMEGA，D0713)、E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000045
Forensic DNA Kit(OMEGA，货号：D3591)和E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000046
Blood DNA Mini Kit(OMEGA，货号：D3392)按照对应试剂盒说明书对步骤(1)编号后的企鹅血液(10μL)进行DNA抽提，并检测DNA含量；
结果分析：
不同的试剂盒提取企鹅血液DNA效果不同，具体表现为：Blood Genome DNAExtraction Kit(Lot#AK4401)和E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000047
SQ NRBC Blood DNA Kit提取企鹅血液的DNA操作过程复杂，时间长等，且有少数企鹅(E72和G65)血液的DNA提取不到；E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000048
Forensic DNA Kit提取企鹅血液的DNA，有部分企鹅(E72、G65和G66)血液的DNA提取不到；E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000049
Blood DNA Mini Kit提取企鹅血液的DNA操作过程简单，血液的DNA全部可以提取到。
实施例2
(1)材料
实施例1中E.Z.N.
Figure BDA00013871333600000410
Blood DNA Mini Kit提取的的企鹅血液DNA(G56、G58、G61、G62、G63、G64、G65、G66、G67、A122、H29、E36、E72与C1)，保存在-20℃备用；
(2)引物的设计与合成
根据Genbank已公布的CHD的基因组序列，利用分子生物学软件设计了一对CHD基因的引物：Sex F/Sex R，Sex F/Sex R目的片段大小为750bp与660bp，引物由北京睿博兴科生物技术有限公司合成。具体引物序列如下：
Sex F：5′-GTTACTGATTCGTCTACGAG-3′；
Sex R：5′-ATTGAAATGATCCAGGCTTG-3′；
(3)PCR扩增与PCR扩增体系
PCR反应体系：以血液中提取的DNA为模板，以Sex F/Sex R为引物进行PCR反应，反应体系为25μL：2×Trans Taq-T PCR SuperMix 12.5μL、DNA模板1.0μL、Sex F 1.0μL、SexR 1.0μL、ddH2O 9.5μL；反应程序为：95℃4min；94℃30s，44℃30s、45℃30s、55℃45s或56℃30s，72℃50s，35个循环；72℃，10min；
(4)琼脂糖凝胶电泳
取8μL的PCR扩增产物，用质量分数为1％的琼脂糖凝胶电泳检测，120V，20min结束后，用Hema紫外透射分析仪凝胶成像系统检测扩增结果，拍照记录，使用DNA MarkerDL2000进行标记；
结果分析：
退火温度为44℃30s时，只能鉴定出极少数企鹅的性别(G58、G64和G65)；
退火条件为55℃45s时，只能鉴定出极少数企鹅的性别(G58、G61、G63、G64和G65)；
退火条件为56℃30s时，只能鉴定出极少数企鹅的性别(G58、G61、G63、G66和G67)；
退火条件为45℃30s时，14份企鹅血液的样品中，雄性个体显示为一条带CHD-Z(660bp)，雌性个体显示为两条带CHD-Z(660bp)、CHD-W(750bp)，与预期的目的条带相符(图1)，其中，13份样品出现条带，样品E72电泳后无条带，可能是由于与采集样本的时间，抽取基因组的过程中，DNA有降解有关，进一步再次鉴定，可成功鉴定。
实施例3
(1)材料
实施例1中E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000051
Blood DNA Mini Kit提取的的企鹅血液DNA(G56、G58、G61、G62、G63、G64、G65、G66、G67、A122、H29、E36、E72与C1)，保存在-20℃备用；
(2)引物的设计与合成
根据Genbank已公布的CHD的基因组序列，利用分子生物学软件设计了一对CHD基因的引物：P2/P8，P2/P8目的片段大小为370bp与380bp，引物由北京睿博兴科生物技术有限公司合成。具体引物序列如下：
P2：5′-TCTGCATCGCTAAATCCTTT-3′；
P8：5′-CTCCCAAGGATGCAACTG-3′；
(4)PCR扩增与PCR扩增体系
PCR反应体系：以血液中提取的DNA为模板，以P2/P8为引物进行PCR反应，反应体系为25μL：2×Trans Taq-T PCR SuperMix 12.5μL、DNA模板1.0μL、P2 1.0μL、P8 1.0μL、ddH2O 9.5μL；反应程序为：95℃4min；94℃30s，56℃30s，72℃25s，35个循环；72℃，10min；PCR反应结束后，将PCR产物放入4℃保存。
(5)琼脂糖凝胶电泳
取8μL的PCR扩增产物，用质量分数为1％的琼脂糖凝胶电泳检测，120V，20min结束后，用Hema紫外透射分析仪凝胶成像系统检测扩增结果，拍照记录，使用DNA MarkerDL2000进行标记，将PCR阳性产物送北京睿博兴科生物技术有限公司测序。
(6)序列分析
用DNAStar 6.0、MEGA 6.0等生物软件对鉴定企鹅的性别14只企鹅CHD基因组测序结果进行处理，然后进行Blast分析序列，鉴定企鹅的性别。
实验结果
P2/P8引物经过PCR扩增之后，再经过电泳结果显示，雄性个体显示为一条带CHD-Z(380bp)，雌性个体显示为两条带CHD-Z(380bp)、CHD-W(370bp)，与预期的目的条带相符(图2)。
将14只企鹅CHD基因测序结果进行Blast，对Blast结果进行分析。E72与G56Blast比对结果见图3、图4。
Sex F/Sex R引物对跑出13个企鹅的结果，P2/P8引物对跑出14个企鹅的结果，将P2/P8引物扩增的PCR产物送去测序，将序列与GenBank中的CHD基因进行同源性比较分析，判断企鹅的性别，结果见表1，G56、G58、G64、G66、G67与H29为雄性，G61、G62、G63、G65、E36、E72、A122与C1为雌性，Sex F/Sex R引物对的鉴定结果与测序结果一致。
表1 14只企鹅性别鉴定结果
Figure BDA0001387133360000071
鸟类的基因型为ZW型(ZZ为雄性，ZW为雌性)，随着城市化与工业化的快速发展，以及不法分析的非法捕杀的影响，我们赖以生存的生态环境正在遭受到污染与破坏，导致许多珍稀鸟类正在濒临种族灭绝的危险。因此很多动物园模拟鸟类的野外生活环境，让它们有更好的栖息与繁殖的环境，提高它们的存活率与繁殖率。动物的繁殖与育种，都离不开动物的个体性别的鉴定。世界上60％鸟类是单态性鸟，即雌性同型，很难在外形上、生理上以及行为上进行性别鉴定，即使对于一些雌雄异性的鸟类进行性别鉴定也很难，只有在性成熟后，雌雄在形态上才有区别，特别是对雏鸟进行性别鉴定就更难了。因此，分子生物学方法便成为鸟类性别鉴定的简便与有效的方法，早期主要是使用RAPD、荧光标记性染色体基因探针、Southern杂交几乎可以鉴定所有的鸟类。
后来发展到用PCR方法扩增性染色连锁基因的特异性区段序列，CHD基因被Griffiths等发现，其进化速率慢，在所有的非平胸鸟类中都非常保守，根据在Z/W染色体上的分布以及序列差异，从而快速简便对鸟的性别进行鉴定。Griffiths等利用P2/P8引物对鸡形目等28个种的鸟进行性别鉴定，其中只有对平胸鸟类中的鸵鸟不能做出正确的鉴定，因此该方法在非平胸目非常适用。江杉等利用引物P2/P8扩增出CHD基因片段，成功鉴别鹳形目5种鹭科鸟类与1种鹮科鸟类，袁梦利用2550F/2718R引物扩增出CHD基因片段，对鹈鹕的性别进行鉴定，并进行了常见鸟类的相应同源性序列进行聚类分析。胡锐颖等同样以2550F/2718R引物，成功的鉴定出了绿孔雀、白鹤、黑颈鹤、白头鹤、白枕鹤、东方白鹤等国家一级保护鸟类进行性别鉴定。
本发明采用E.Z.N.
Figure BDA0001387133360000081
Blood DNA Mini Kit可有效提取企鹅血液DNA，利用引物对Sex F/Sex R结合45℃30s退火条件，对未知性别的企鹅进行鉴定，性别鉴定结果与测序鉴定结果完全一致。
P2/P8引物经PCR扩增后，雄性个体显示为一条带CHD-Z(380bp)，雌性个体显示为两条带CHD-Z(380bp)、CHD-W(370bp)。雌雄性的两条带之间的距离相隔很近，因此琼脂糖凝胶不易区分开来，故将PCR阳性产物送去测序，将序列与GenBank中的CHD基因进行同源性比较分析，进行性别鉴定。
将Sex F/Sex R引物对和P2/P8引物对结合，具有以下优点：①非伤害性的取样，对企鹅的应激小，如抽取1mL的血液、拔取有毛囊组织的羽毛等。②不受年龄的限制，即使是刚出生的雏鸟，也可以做性别鉴定。③PCR是通过扩增在非平胸鸟类中都非常保守的CHD基因特异性区段序列，进行性别鉴定，结果准确、可靠等。④操作简单，时间短，通用性高。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州长隆集团有限公司香江野生动物世界分公司
<120> 一种鉴定企鹅性别的方法及试剂盒
<130> 1
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物Sex F
<400> 1
gttactgatt cgtctacgag a 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物Sex R
<400> 2
attgaaatga tccagtgctt g 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物P2
<400> 3
tctgcatcgc taaatccttt 20
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 引物P8
<400> 4
ctcccaagga tgcaactg 18

Claims (6)

1.一种鉴定企鹅性别的方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)采用
Figure FDA0002715487980000011
Blood DNA Mini Kit提取待测企鹅的血液的DNA；
(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，使用引物Sex F和引物Sex R进行PCR扩增，得到扩增产物；
(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断企鹅性别，其中，电泳条带为660bp一条带为雄性企鹅，电泳条带为660bp和750bp两条带为雌性企鹅；
步骤(2)中所述的引物Sex F和引物Sex R的核苷酸序列如下所示：
Sex F：5′-GTTACTGATTCGTCTACGAGA-3′；
Sex R：5′-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3′；
步骤(2)中所述的PCR扩增的反应程序为：95℃4min；94℃30s，45℃30s，72℃50s，35个循环；72℃，10min。
2.根据权利要求1所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的企鹅的血液的用量为10μL。
3.根据权利要求1所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的PCR扩增的体系为25μL体系，具体如下：
Figure FDA0002715487980000012
4.权利要求1～3任一项所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于还包含如下步骤：
(4)如果步骤(3)电泳检测无条带，以步骤(1)提取的DNA为模板，使用引物P2和引物P8进行PCR扩增，得到扩增产物；
(5)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断企鹅性别，其中，电泳条带为380bp一条带为雄性企鹅，电泳条带为370bp和380bp两条带为雌性企鹅；或直接将扩增产物进行测序，根据测序结果，鉴定企鹅的性别；
步骤(4)中所述的引物P2和引物P8的核苷酸序列分别如下所示：
引物P2：5′-TCTGCATCGCTAAATCCTTT-3′；
引物P8：5′-CTCCCAAGGATGCAACTG-3′。
5.根据权利要求4所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的PCR扩增的体系为25μL体系，具体如下：
Figure FDA0002715487980000021
6.根据权利要求4所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的PCR扩增的反应程序为：95℃4min；94℃30s，56℃30s，72℃25s，35个循环；72℃，10min。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108315443A (zh) * 2018-04-03 2018-07-24 辽宁大学 一种准确简便鉴定沼泽山雀性别的引物及鉴定方法
CN108707654A (zh) * 2018-06-07 2018-10-26 浙江大学 鹧鸪早期性别pcr鉴定试剂盒、应用及方法
CN108835049B (zh) * 2018-08-11 2021-04-06 辽宁省农业科学院 一种自别雌雄鹅的培育方法
CN109897890B (zh) * 2019-03-22 2022-06-03 辽宁省海洋水产科学研究院 一种无损伤巴布亚企鹅性别鉴定方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102134600A (zh) * 2010-12-29 2011-07-27 北京林业大学 一种朱鹮性别鉴定的pcr方法
TW201319567A (zh) * 2011-11-08 2013-05-16 Univ Kaohsiung Medical 鑑定企鵝科鳥類性別的方法、鑑別企鵝科鳥類性別之核苷酸序列與鑑別企鵝科鳥類性別之核苷酸引子對

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI326712B (en) * 2007-09-26 2010-07-01 Univ Kaohsiung Medical Method for eagles gender identification and sequence for eagles gender identification

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102134600A (zh) * 2010-12-29 2011-07-27 北京林业大学 一种朱鹮性别鉴定的pcr方法
TW201319567A (zh) * 2011-11-08 2013-05-16 Univ Kaohsiung Medical 鑑定企鵝科鳥類性別的方法、鑑別企鵝科鳥類性別之核苷酸序列與鑑別企鵝科鳥類性別之核苷酸引子對

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHD基因与非平胸鸟类性别鉴定;刘铸等;《生物技术通报》;20061231(第S1期);第147-150页 *
Sex Identifi cation of Four Penguin Species Using Locus-Specific PCR;Peijun Zhang，et al.;《Zoo Biology》;20130630;第32卷(第3期);摘要，第258页左栏全部，第259页左栏第2-3段、图1以及第260页图1-4 *

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