CN113502334B - 一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c27449及其应用 - Google Patents

一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c27449及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113502334B
CN113502334B CN202110765290.9A CN202110765290A CN113502334B CN 113502334 B CN113502334 B CN 113502334B CN 202110765290 A CN202110765290 A CN 202110765290A CN 113502334 B CN113502334 B CN 113502334B
Authority
CN
China
Prior art keywords
molecular marker
penaeus japonicus
female
penaeus
japonicus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110765290.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113502334A (zh
Inventor
兰伟康
吕建建
金玲
刘萍
李健
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Original Assignee
Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences filed Critical Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Priority to CN202110765290.9A priority Critical patent/CN113502334B/zh
Publication of CN113502334A publication Critical patent/CN113502334A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113502334B publication Critical patent/CN113502334B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686Polymerase chain reaction [PCR]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6879Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for sex determination
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81Aquaculture, e.g. of fish

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449及其应用。所述分子标记C27449的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,用于检测所述分子标记C27449的引物对的核苷酸序列分别为:C27449F:TCATCCAAGTTCCAGCCT和C27449R:GGTCCCCCACAACATACA。所述分子标记C27449可以不受日本对虾组织特异性及环境的影响,使用步骤简单,结果明显,将日本对虾的基因组DNA与引物对进行PCR反应后电泳检测,若在120bp出现条带,则为雌性日本对虾,若无条带,则为雄性日本对虾,该分子标记还可以促进日本对虾全雌或高雌苗种培育技术的建立,具有广阔的应用前景。

Description

一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449及其应用
技术领域
本发明属于DNA分子标记技术领域,具体涉及一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449及其应用。
背景技术
日本对虾( Penaeus japonicus)属甲壳纲、十足目、对虾科、对虾属动物,又称车虾、花虾、花尾虾等,在我国主要分布在江苏以南沿海地区。日本对虾具有生长迅速、抗病力强、干露存活时间长、长途运输成活率高的特点,再因其具有的较高经济价值,且市场价格高,所以是我国沿海地区一种重要的经济对虾种类。在养殖过程中,日本对虾的成熟雌虾要大于雄虾,因此如果能够实现高效的单性养殖,将显著提高日本对虾的养殖经济效益。然而,目前尚没有高效的日本对虾性别控制技术。
分子标记是以个体间遗传物质核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接反映。分子标记具有显著的优越性:大多数分子标记为共显性,对隐性性状的选择十分便利;基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;生物发育不同阶段、不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记检测简单、迅速。开发与日本对虾性别鉴定相关的分子标记,可以实现日本对虾的单性育种,提高养殖户的经济收益,对日本对虾的养殖和育种具有重要的意义。
发明内容
本发明提供了一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449及其应用。本发明通过比较组学和生物信息学分析方法筛选到性别特异区段,并进而筛选得到一个新的鉴定日本对虾遗传性别分子标记C27449,该分子标记鉴定效率及准确率高,还能够用于全雌或高雌性比日本对虾的苗种培育,有助于日本对虾的养殖发展。
为实现上述发明目的,本发明采用以下技术方案予以实现:
本发明提供了一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449,所述分子标记C27449的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明还提供了用于检测所述的分子标记C27449的引物对,所述引物对的核苷酸序列为:
C27449F:TCATCCAAGTTCCAGCCT,
C27449R:GGTCCCCCACAACATACA。
本发明还提供了所述的分子标记C27449在用于快速鉴定日本对虾遗传性别中的应用。
进一步:利用所述分子标记C27449快速鉴定日本对虾遗传性别中的步骤如下:
(1)合成核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的引物对C27449F和C27449R;
(2)提取日本对虾样本中的基因组DNA;
(3)以步骤(2)中提取的基因组DNA作为模板,利用引物对C27449F和C27449R进行PCR扩增反应,得到PCR扩增产物;
(4)对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察电泳结果;若电泳结果在120bp出现扩增目的条带,则日本对虾为雌性,若电泳结果无扩增目的条带出现,则日本对虾为雄性。
进一步:所述步骤(3)中PCR扩增反应的条件为94℃,3min;94℃,30s,55℃,30s,72℃,30s,重复32个循环;72℃,10min。
进一步:所述步骤(3)中PCR扩增反应的体系为:基因组DNA 1μL,Mix1 5.0μL,上下游引物各0.2μL,灭菌水补至10μL。
本发明还提供了所述的分子标记C27449在用于全雌或高雌性比日本对虾苗的育种中的应用。
本发明与现有技术相比,具有以下优点和有益效果:
本发明提供的快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449可以不受日本对虾组织特异性及环境的影响,性别鉴定简便快捷,对样品的要求低,并且鉴定结果准确性高,不仅能够用于鉴定日本对虾遗传性别,还可以促进全雌或高雌性比日本对虾苗种培育技术的建立,进而有利于日本对虾养殖的发展和提高养殖经济收益,因此具有广阔的应用前景。
附图说明
图1:日本对虾雌性特异性标记图;其中,M:标准分子量;1-10和21-29为雌虾;11-20和30-38为雄虾。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明,均为常规方法;所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
1、DNA抽提
由诺禾致源公司提取日本对虾的DNA,雌雄各30个个体。
2、DNA混合池构建
将个体DNA等量混合,制备雌雄DNA混合池,浓度为292.8ng/μl~363.3ng/μl,每个混合池中包含30个个体,用于后续实验。
3、引物设计
通过比较组学和生物信息学分析方法筛选到性别特异区段,然后从性别特异区段中筛选并验证性别标记。利用Primer Premier 5.0软件,对性别候选Contig设计引物,筛选到标记DNA序列(如SEQ ID No.1所示,编号为C27449),并设计该序列的检测引物。
引物的设计标准为:
1)引物退火温度50-60℃,
2)尽量避免引物本身、引物之间形成稳定的二聚体和发夹结构。
本实施例所用引物信息见表1:
表1:引物信息
4、混合模板PCR扩增及电泳
用混合DNA为模板,利用北京全式金公司的HiFi酶进行PCR扩增,设置反应程序为:94℃,3min;94℃,30s,55℃,30s,72℃,30s,32个循环;72℃,10min。PCR体系如下:
试剂 用量
DNA模板 1μL
 Mix1 5.0μL
引物(上下游) 各0.2μL
灭菌水 补至10μL
将混合模板PCR产物进行1%的琼脂糖凝胶电泳,电泳结果显示,在雄性混合DNA池中未扩增出目的条带,而在雌性混合池中均扩增出目的条带。
5、雌雄个体PCR扩增及电泳
提取38个日本对虾个体的组织DNA作为模板进行PCR,PCR引物为C27449F:TCATCCAAGTTCCAGCCT(SEQ ID No.2);C27449R:GGTCCCCCACAACATACA(SEQ ID No.3);PCR体系和PCR扩增反应程序均与上述相同。扩增后,将得到的个体模板PCR产物进行1%的琼脂糖凝胶电泳,电泳结果显示(图1):在检测的所有雄性个体中均未扩增出目的条带,而在检测的所有雌性个体中均在120bp处扩增出目的条带。
研究结果表明,本发明获得的分子标记C27449能够准确辨别日本对虾遗传性别,应用步骤简单来说为:提取日本对虾样本中的基因组DNA,以提取的基因组DNA为模板,使用分子标记的扩增引物C27449F和C27449R进行PCR扩增反应;对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,如果电泳结果显示在120bp处出现目的条带,日本对虾则为雌性,若无条带出现则为雄性。分子标记C27449还能够用于全雌或高雌性比日本对虾的苗种培育,有助于日本对虾的养殖发展。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其进行限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的普通技术人员来说,依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
                         序列表
<110>  中国水产科学研究院黄海水产研究所
<120>  一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449及其应用
<160>  3
<170>  SIPOSequenceListing 1.0
<210>  1
<211>  392
<212>  DNA
<213>  人工序列(Artificial Sequence)
<400>  1
ataagaggtt aggacttagc agagtttgca caaattttag ggcacagatg tgtgagagat  60
caaatgtttc taactaaggc aggagtccca gtgtttcctt gctacagcta gagacatctt 120
aagttgacta gctcagtgga atataccccg ctaacaggaa ggataggtgg agatcatcca 180
agttccagcc taggttccta tggcctgatt agtgggactt ggggtcagaa cattttaatg 240
gtctaccttt tgagcagtct ctgagggtga tttttgtatg ttgtggggga ccaaattctc 300
aggaaggact gcaacgtatt ttctctgatt cctgtgtgat atgtgaaacc cagttgttaa 360
gatcatgtct gtgtattgta tgtatatgtt ta                               392
<210>  2
<211>  18
<212>  DNA
<213>  人工序列(Artificial Sequence)
<400>  2
tcatccaagt tccagcct                                                18
<210>  3
<211>  18
<212>  DNA
<213>  人工序列(Artificial Sequence)
<400>  3
ggtcccccac aacataca                                                18

Claims (7)

1.一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记C27449,其特征在于,所述分子标记C27449的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.用于检测权利要求1所述的分子标记C27449的引物对,其特征在于,所述引物对的核苷酸序列为:
C27449F:TCATCCAAGTTCCAGCCT;
C27449R:GGTCCCCCACAACATACA。
3.权利要求1所述的分子标记C27449在用于快速鉴定日本对虾遗传性别中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,利用所述分子标记C27449快速鉴定日本对虾遗传性别的步骤如下:
(1)合成核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的引物对C27449F和C27449R;
(2)提取日本对虾样本中的基因组DNA;
(3)以步骤(2)中提取的基因组DNA作为模板,利用引物对C27449F和C27449R进行PCR扩增反应,得到PCR扩增产物;
(4)对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察电泳结果;若电泳结果在120bp处出现扩增目的条带,则日本对虾为雌性,若电泳结果在120bp处无扩增目的条带出现,则日本对虾为雄性。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述步骤(3)中PCR扩增反应的条件为94℃,3min;94℃,30s,55℃,30s,72℃,30s,重复32个循环;72℃,10min。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述步骤(3)中PCR扩增反应的体系为:基因组DNA 1μL,Mix1 5.0μL,上下游引物各0.2μL,灭菌水补至10μL。
7.权利要求1所述的分子标记C27449在用于全雌或高雌性比日本对虾苗的育种中的应用。
CN202110765290.9A 2021-07-07 2021-07-07 一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c27449及其应用 Active CN113502334B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110765290.9A CN113502334B (zh) 2021-07-07 2021-07-07 一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c27449及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110765290.9A CN113502334B (zh) 2021-07-07 2021-07-07 一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c27449及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113502334A CN113502334A (zh) 2021-10-15
CN113502334B true CN113502334B (zh) 2023-05-02

Family

ID=78011818

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110765290.9A Active CN113502334B (zh) 2021-07-07 2021-07-07 一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c27449及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113502334B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114645083B (zh) * 2022-02-15 2023-06-13 浙江省农业科学院 一种快速鉴定红螯螯虾遗传性别的pcr扩增引物、试剂盒及鉴定方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007122247A1 (en) * 2006-04-25 2007-11-01 Vib Vzw A sex-specific marker for shrimps and prawns
CN102719531A (zh) * 2012-05-09 2012-10-10 上海海洋大学 罗氏沼虾性别特异分子标记、及其筛选方法和应用
WO2016180009A1 (zh) * 2015-05-14 2016-11-17 中国科学院海洋研究所 一种用于凡纳滨对虾遗传性别鉴定的dna探针序列及获取方法
CN112226518A (zh) * 2020-09-30 2021-01-15 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种快速鉴定红螯螯虾遗传性别的分子标记c69483及其应用
CN112746116A (zh) * 2021-02-24 2021-05-04 中国科学院海洋研究所 凡纳滨对虾雌性dna标签序列和引物及其在性别鉴定中应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007122247A1 (en) * 2006-04-25 2007-11-01 Vib Vzw A sex-specific marker for shrimps and prawns
CN102719531A (zh) * 2012-05-09 2012-10-10 上海海洋大学 罗氏沼虾性别特异分子标记、及其筛选方法和应用
WO2016180009A1 (zh) * 2015-05-14 2016-11-17 中国科学院海洋研究所 一种用于凡纳滨对虾遗传性别鉴定的dna探针序列及获取方法
CN112226518A (zh) * 2020-09-30 2021-01-15 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种快速鉴定红螯螯虾遗传性别的分子标记c69483及其应用
CN112746116A (zh) * 2021-02-24 2021-05-04 中国科学院海洋研究所 凡纳滨对虾雌性dna标签序列和引物及其在性别鉴定中应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Melony J. Sellars 等.Transcriptome Profiles of Penaeus (Marsupenaeus) japonicus Animal and Vegetal Half-Embryos: Identification of Sex Determination, Germ Line, Mesoderm, and Other Developmental Genes.《Mar Biotechnol》.2015,第1-14页. *
王兵 等.中国对虾性别相关片段的初步研究.《高技术通讯》.2003,第82-86页. *
黄智康 等.基于InDel 标记的斑节对虾早期性别鉴定方法的建立.《南方水产科学》.2020,第16卷(第3期),第113-118页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113502334A (zh) 2021-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113502333B (zh) 一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c42257及其应用
CN105969845B (zh) 眼肌面积性状相关基因svep1的分子标记及其应用
CN105506162B (zh) 长牡蛎快速生长相关的snp标记及其鉴定方法和应用
CN108179200B (zh) 一种与克氏原螯虾高繁殖力性状连锁的微卫星标记及应用
CN112226518B (zh) 一种快速鉴定红螯螯虾遗传性别的分子标记c69483及其应用
CN114657264B (zh) 一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其应用
CN108611405B (zh) 一种翘嘴鲌亲子鉴定微卫星荧光多重pcr的方法
CN113502334B (zh) 一种快速鉴定日本对虾遗传性别的分子标记c27449及其应用
CN107400715A (zh) 十倍体长穗偃麦草专化分子标记与探针的开发及其应用
CN113151430A (zh) 一种中国对虾雌性特异性引物及其应用
CN113462787A (zh) 光倒刺鲃的雄性分子标记及其应用
CN111073983B (zh) 与大口黑鲈北方亚种和佛罗里达亚种鉴定相关的snp标记及其应用
CN111057771B (zh) 一种用于区分“中洋1号”和普通暗纹东方鲀的snp分子标记及其应用
CN110607376B (zh) 一种基于dna分子标记的虾夷扇贝活体性别鉴定方法
CN112921101A (zh) 一种与绵羊剩余采食量相关的分子标记及其应用
CN109536624B (zh) 用于甄别半滑舌鳎真伪雄鱼性的荧光分子标记和检测方法
CN114395635B (zh) 罗氏沼虾生长性状相关的snp分子标记及其应用
CN114959056B (zh) 一种鉴定雌性克氏原螯虾的ssr标记及其应用
CN112430675B (zh) 利用snp标记kz288474.1_322717鉴别蜂群抗囊状幼虫病性状的方法
CN112725427B (zh) 一种基于荧光pcr鉴定鲟鱼性别的引物、荧光探针及试剂盒
CN111154891B (zh) 绵羊igf2bp1基因插入/缺失多态性的检测引物对、试剂盒、方法和应用
CN112410441A (zh) 利用snp标记kz288479.1_95621鉴别蜂群抗囊状幼虫病性状的方法
CN106282379B (zh) 杂交黄颡鱼的ch4酶切鉴定方法
CN116516045B (zh) 一种杂草稻Os12g0622850基因甲基化鉴定的特异性分子标记引物及其应用
CN113373244B (zh) 一种基于snp位点特异性引物延伸反应快速检测斑点叉尾鮰遗传性别的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant