CN107348497A - 一种禽类胚蛋提取液的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种禽类胚蛋提取液的制备方法，属于保健食品技术领域。其包括以下工艺步骤：选择禽类受精卵，表面常规去污，常规孵化8～12 天；在确定禽类胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；收集胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；加匀浆体积20‑50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，移至冰浴；对匀浆进行破碎处理，破碎处理包括超声波处理、法式高压挤压处理和/或玻璃珠研磨处理；对匀浆进行离心处理；分装离心所得上清于密封容器中，巴斯德消毒；或将离心所得上清通过层析分离的方法分离出不同的特定蛋白，分装；4℃或‑20℃保存。本发明尽大可能地提取保留了最高活性的生长刺激因子、神经生长因子、活性多糖和活性多肽。
Description
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种禽类胚蛋提取液的制备方法。
背景技术
禽类在孵化过程中不能顺利完成生长发育而中止、死亡的胚胎俗称喜蛋。虽然传统的烹煮方式破坏了很多有效成分，但依然显现出令人瞩目的强身健体功效。鸡、鸭受精卵在短短二十天的孵化过程中发生着巨大变化，由此伴随产生大量的生长刺激因子、神经生长因子、活性多糖、活性多肽和丰富的其他营养物质诸如GFB1、IGF2、IGFBP2、IGFBP3、PDGFRB、NGFR、EGFR、IGF1R、CTNNB1、CETP和FOXO4之类生长激素，生长激素结合蛋白，生长激素受体，胆固醇酯转移蛋白以及最新发现的FOXO4抗衰老蛋白是人类弥足珍贵的纯天然资源。我们对经过8到12天孵化的鸡胚进行了非常初步的基因表达检测，上述基因都有极高的表达水平，而鸡蛋中却无法测到（图1和图2）。已往由于制备方式的错误，非常遗憾地使这天然的抗衰老圣品埋没在茫茫历史长河之中。
现有技术中公开的一些利用鸡、鸭喜蛋提取有效成分的方法，如公开号为CN102908365A的发明专利，公开了一种胚胎素的制备方法，公开号为CN1748713A的发明专利，公开了鸡胚胎素的制备方法，这两种方法均涉及了反复冻融、干躁的步骤，容易造成的有效成分破坏；又如公开号为CN1226401A的发明专利，公开了“凤凰胎”保健食品及其制作方法，公开号为CN1324625A的发明专利，公开了鸡胚胎精华素的制作方法，公开号为CN106138101A的发明专利，公开了一种鸡胚胎提取物的制备方法，这三种方法均涉及了高温和酒精提取步骤，容易造成有效成分的灭活。
因此，如何采用特定的技术能够方便有效地保证禽类胚蛋中的有效成分是目前急需解决的问题。常规的生物学蛋白提取法能够提取到具有高活性的特定蛋白。本发明将借用此提取法制备禽类胚蛋提取液，但为了确保食用的绝对安全性，将避免使用蛋白酶抑制剂等等。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种禽类胚蛋提取液的制备方法的技术方案。
所述的一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
1）选择禽类受精卵，表面常规去污，常规孵化8～12 天；
2）在确定禽类胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；
3）收集胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4）加匀浆体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，移至冰浴；
5）对步骤4）得到的匀浆进行破碎处理，所述破碎处理包括超声波处理、法式高压挤压处理和/或玻璃珠研磨处理；
6）对步骤5）得到的匀浆进行离心处理；
7）分装离心所得上清于密封容器中，巴斯德消毒；或将离心所得上清通过层析分离的方法分离出不同的特定蛋白，分装；
8）4℃或-20℃保存。
所述的一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于所述的步骤5）中超声波处理条件为：15振幅微米处理30秒，停顿30秒后继续处理，直至处理20～30分钟。
所述的一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于所述的步骤5）中法式高压挤压处理条件为：将匀浆通过法式挤压器2到3次。
所述的一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于所述的步骤6）中离心条件为：6000g条件下处理5～10分钟。
本发明中的禽类指鸡、鸭、鹅、火鸡、鹌鹑、鸽子、鸟、鸳鸯等等。
本发明通过生物学技术避免了反复冻融、干躁的繁复和由此造成的有效成分破坏；同时也避免了高温和酒精提取所带来的有效成份灭活；操作简单，快捷。在现代科技和生命科学实验室现有的设备和技术的条件下，尽大可能地提取保留有最高活性的生长刺激因子、神经生长因子、活性多糖和活性多肽。由此提取的禽类胚蛋提取液可后续用于开发抗衰老的保健品，食品添加，化妆品添加或个别有效蛋白的提取。
附图说明
图1为鸡胚中Foxo4，Cept，Ngfr,Igfbp3,Pdghrb基因的表达。
图2为鸡胚中Ctnnb1,Gfbp2,Cimp2,Igf1r,Tgfb1基因的表达。
其中：Y轴为该基因在细胞内的转录数。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明。
实施例一：
1. 选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃，孵化湿度65+/-3％，通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上，翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中15振幅微米功率30秒超声波粉碎，30秒停顿的方式继续破碎细胞20～30分钟；
6.6000g，5～10分钟离心此匀浆；
7.分装离心所得上清于密封容器中；
8.56℃，30分钟巴斯德消毒；
9.保存于4℃或-20℃。
实施例二：
1. 选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃,孵化湿度65+/-3％左右,通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上,翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中用法式高压法内压40,000 psi，挤压2-3次继续破碎匀浆中游离出来的细胞；6.6000g，5-10分钟离心此匀浆；
7.分装离心所得上清于密封容器中；
8.56℃，30分钟巴斯德消毒；
9.保存于4℃或-20℃。
实施例三：
1.选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃,孵化湿度65+/-3％左右,通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上, 翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中用玻璃珠研磨20-30分钟继续破碎匀浆中游离出来的细胞；6.6000g，5-10分钟离心此匀浆；
7.分装离心所得上清于密封容器中；
8.56℃，30分钟巴斯德消毒；
9.保存于4℃或-20℃。
实施例四：
1.选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃,孵化湿度65+/-3％左右,通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上, 翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中15振幅微米功率30秒超声波粉碎，30秒停顿的方式继续破碎细胞20-30分钟；
6.6000g，5-10分钟离心此匀浆；
7.过层析柱分离蛋白；
8.分装离心所得上清于密封容器中；
9.56℃，30分钟巴斯德消毒；
10.保存于4℃或-20℃。
实施例五：
1.选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃,孵化湿度65+/-3％左右,通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上, 翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中15振幅微米功率30秒超声波粉碎，30秒停顿的方式继续破碎细胞20-30分钟；
6.6000g，5-10分钟离心此匀浆；
7.分装离心所得上清于密封容器中；
8.保存于4℃或-20℃。
实施例六：
1.选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃,孵化湿度65+/-3％左右,通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上, 翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中用法式高压法，内压40,000 psi，挤压2-3次继续破碎匀浆中游离出来的细胞；6.6000g，5-10分钟离心此匀浆；
7.分装离心所得上清于密封容器中；
8.保存于4℃或-20℃。
实施例七：
1.选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃,孵化湿度65+/-3％左右,通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上, 翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中用玻璃珠研磨20-30分钟继续破碎匀浆中游离出来的细胞；6.6000g，5-10分钟离心此匀浆；
7.分装离心所得上清于密封容器中；
8.保存于4℃或-20℃。
实施例八：
1．选择鸡受精卵，表面常规去污，孵化8～12 天，孵化温度：38℃+/-0.5℃,孵化湿度65+/-3％左右,通风换气：保持孵蛋箱空气中的氧含量在21％以上, 翻蛋：每2小时翻蛋1次；
2.在确定鸡胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；取出孵化蛋后弃去蛋壳；
3.收集鸡胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4.加匀浆液体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，冰浴；
5.在冰浴中15振幅微米功率30秒超声波粉碎，30秒停顿的方式继续破碎细胞20-30分钟；
6.6000g，5-10分钟离心此匀浆；
7.过层析柱分离蛋白；
8.分装离心所得上清于密封容器中；
9.保存于4℃或-20℃。
上述实施例中的禽类不仅限于鸡，还可以为鸭、鹅、火鸡、鹌鹑、鸽子、鸟、鸳鸯等禽类。
Claims (4)
1.一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
1）选择禽类受精卵，表面常规去污，常规孵化8～12 天；
2）在确定禽类胚胎正常发育后，清洗、消毒蛋壳表面；
3）收集胚胎及蛋内所有物质，用粉碎机打碎1～5分钟，得到匀浆；
4）加匀浆体积20-50%的蔗糖于打碎的匀浆中，溶化，移至冰浴；
5）对步骤4）得到的匀浆进行破碎处理，所述破碎处理包括超声波处理、法式高压挤压处理和/或玻璃珠研磨处理；
6）对步骤5）得到的匀浆进行离心处理；
7）分装离心所得上清于密封容器中，巴斯德消毒；或将离心所得上清通过层析分离的方法分离出不同的特定蛋白，分装；
8）4℃或-20℃保存。
2.如权利要求1所述的一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于所述的步骤5）中超声波处理条件为：15振幅微米处理30秒，停顿30秒后继续处理，直至处理20～30分钟。
3.如权利要求1所述的一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于所述的步骤5）中法式高压挤压处理条件为：将匀浆通过法式挤压器2到3次。
4.如权利要求1所述的一种禽类胚蛋提取液的制备方法，其特征在于所述的步骤6）中离心条件为：6000g条件下处理5～10分钟。
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