CN107340387B - 一种细胞因子elisa标准品的制备方法 - Google Patents

一种细胞因子elisa标准品的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107340387B
CN107340387B CN201710471584.4A CN201710471584A CN107340387B CN 107340387 B CN107340387 B CN 107340387B CN 201710471584 A CN201710471584 A CN 201710471584A CN 107340387 B CN107340387 B CN 107340387B
Authority
CN
China
Prior art keywords
freeze
preparation
cell factor
standard items
drying
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710471584.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107340387A (zh
Inventor
毕利军
朱国峰
张晓莉
邓丽华
冯欣怡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Yuntian Antibody Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Guangdong Yuntian Antibody Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Yuntian Antibody Biotechnology Co Ltd filed Critical Guangdong Yuntian Antibody Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201710471584.4A priority Critical patent/CN107340387B/zh
Publication of CN107340387A publication Critical patent/CN107340387A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107340387B publication Critical patent/CN107340387B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开一种细胞因子ELISA标准品的制备方法。所述制备方法包括如下步骤:S1.对冷冻干燥的相关设备进行预冷，预冷至4℃；S2.将细胞因子标准蛋白用水溶解后，用冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至已预冷西林瓶中，轻盖上盖子；S4.将S3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到细胞因子标准品；S2.中，所述冻干液由以下按质量百分数计算的组分组成：0.5～5％干酪素钠，1～10％甘露醇，0.05～0.5％聚吡咯烷酮K30，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。本发明的制备方法可以制备出保质期长达两年的细胞因子标准品。采用本发明的冻干液配方进行冻干，能获得很好的成型效果，并且产品外观良好，不出现挂壁等不良现象。

Description

一种细胞因子ELISA标准品的制备方法
技术领域
本发明属于生物体外诊断试剂制备领域。具体涉及一种细胞因子ELISA标准品的制备方法。
背景技术
酶联免疫吸附(ELISA)作为国际公认的蛋白定量金标准，具有灵敏度高，特异性好等特点。其中标准品是ELISA试剂盒构成的一个关键，标准品的保质期直接影响到试剂盒的货架期。目前ELISA标准品的保存方法有甘油-20℃保存法和真空冷冻干燥法，此两种方法对蛋白的稳定性有一定的延长作用，但难以满足试剂盒长时间的保存需求。从实际的经验发现，不同蛋白对于同一配方的冻干液表现出来的保存效果不同。而市面上一般的试剂盒的保存时间为半年，令使用受到限制。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种细胞因子ELISA标准品的制备方法。该方法尤其对猴细胞因子ELISA标准品的制备有优势，其制备的猴细胞因子ELISA标准品具有较长的保质期。
本发明的上述目的通过如下方案予以实现：
一种细胞因子ELISA标准品的制备方法，包括如下步骤:
S1.对冷冻干燥的相关设备进行预冷，预冷至4℃；
S2.将细胞因子标准蛋白用水溶解后，用冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；
S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至已预冷西林瓶中，轻盖上盖子；
S4.将S3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到细胞因子ELISA标准品；
S2.中，所述冻干液由以下按质量百分数计算的组分组成：
0.5～5％干酪素钠，1～10％甘露醇，0.05～0.5％聚吡咯烷酮K30，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。
在标准品的冻干粉剂中，现存通常有两种产品，一种是散的粉剂，一种是结合得相对紧密的粉剂，即冻干粉之间能形成一个良好的型状，通常是饼型。而前者比较容易获得，但在开盖时容易使冻干粉飘出，后者则需要在赋型剂等作用下经过配方的优化获得，并且可能出现塌陷等成型问题。
采用本发明的制备方法进行冻干，能使冻干粉获得很好的成型效果，并且产品外观良好，不出现挂壁等不良现象。主要原因是利用了甘露醇、聚吡咯烷酮K30二者协同作用有助于蛋白的成膜，减少冻干粉在冻干后出现的挂壁现象，并且通过适量的K30显著提高冻干粉的成型率。
磷酸缓冲液的pH值可以参考现有技术。最优选地，所述磷酸缓冲液的pH值为7.4。
最优选地，所述干酪素钠的质量分数最优选为1％。
最优选地，所述甘露醇的质量分数最优选为5％。
现有技术中，为了确保冻干效果良好，通常不会在冻干瓶(西林瓶)中添加过多的蛋白溶液，因为如果溶液体积过多，液面高度过大，会使冻干变得困难，冻干效果变差。优选地，S3.中，所述每瓶容积为3mL的西林瓶，加入1mL的所述标准浓度蛋白溶液。
本发明的制备方法对多种细胞因子都有很好的冻干效果。现有的ELISA试剂盒产品中，细胞因子的产品甚少，所以对其保存方式和保存周期的研究并不多。而本发明的制备方法制备的细胞因子标准品，其保质期可以达到两年。
优选地，所述细胞因子为猴细胞因子。
优选地，所述猴细胞因子为猴细胞因子IL-12或猴细胞因子IL-23。
一种采用所述方法制备的细胞因子ELISA标准品。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的制备方法可以制备出保质期长达两年的细胞因子标准品。通过对冻干液配方的合理搭配，利用甘露醇、聚吡咯烷酮K30二者协同作用有助于蛋白的成膜，减少冻干粉在冻干后出现的挂壁现象，提高冻干粉的成型率。采用本发明的冻干液配方进行冻干，能获得很好的成型效果，并且产品外观良好，不出现挂壁等不良现象。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的解释说明，但具体实施例并不对本发明作任何限定。除非特别说明，实施例中，所涉及的试剂、方法均为本领域常用的试剂和方法。
实施例1
冻干液制备：1％质量分数的干酪素钠，5％质量分数的甘露醇，0.1％质量分数的聚吡咯烷酮K30(PVPK30)溶解于0.01mol/L pH为7.4的磷酸缓冲液(PBS)。
其余实施例和对比例的配方见表1
表1
猴细胞因子IL-12/23ELISA标准品的制备，包括如下步骤：
S1.对冷冻干燥的相关设备，例如西林瓶、架子、托盘进行预冷，预冷至4℃；
S2.将猴细胞因子IL-12/23标准蛋白用水溶解后，配制成母液，母液采用各实施例或对比例的冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；
S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至S1.已预冷的容积为3mL西林瓶中，每瓶内装入1mL蛋白溶液，轻盖上盖子；
S4.将S3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到猴细胞因子IL-12/23ELISA标准品。其中实施例1、4、5为猴细胞因子IL-12，实施例2、3为细胞因子IL-23。对比例1～5均为猴细胞因子IL-12。
本实施例1～5所得猴细胞因子IL-12/23ELISA标准品经过37℃加速老化试验，可以放置14天，采用ELISA实验测试其活性，损失率小于1％，根据阿伦尼乌斯公式结论，采用本发明制备的猴细胞因子IL-12/23ELISA标准品用于ELISA试剂盒4℃可保存2年以上。
冻干前后蛋白活性测试：
采用ELISA法对实施例1制备的猴细胞因子IL-12/23ELISA标准品的蛋白活性进行测试，每一个浓度测试5个样品，对比冻干后，加速老化14天与冻干前活性比值。详细结果见表2
表2
比较实施例与对比例得到的猴细胞因子ELISA标准品的外观、活性损失率和成型率，结果如表3所示：
表3
从实施例与对比例1、2、3、4、5对比可以看出，当不选用本发明所述方法的配方时，制备的冻干粉的产品容易存在挂壁现象，外观不佳，并且成型率出现明显下降，冻干过程的活性损失率升高，保存时间缩短。
人细胞因子IL-12/23ELISA标准品的制备，包括如下步骤：
S1.对冷冻干燥的相关设备，例如西林瓶、架子、托盘进行预冷，预冷至4℃；
S2.将人细胞因子IL-12/23标准蛋白用水溶解后，配制成母液，母液采用各实施例或对比例的冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；
S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至S1.已预冷的容积为3mL西林瓶中，每瓶内装入1mL蛋白溶液，轻盖上盖子；
S4.将S3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到人细胞因子IL-12/23ELISA标准品。其中实施例1、4、5为人细胞因子IL-12，实施例2、3为人细胞因子IL-23。对比例1～5均为人细胞因子IL-12。
比较实施例与对比例得到的人细胞因子ELISA标准品的外观、活性损失率和成型率，结果如表4所示：
表4
可以看出，本制备方法也适用于其它细胞因子标准品的制备。

Claims (7)

1.一种细胞因子ELISA标准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:
S1.对冷冻干燥的相关设备进行预冷，预冷至4℃；
S2.将细胞因子标准蛋白用水溶解后，用冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；
S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至已预冷西林瓶中，轻盖上盖子；
S4.将S3.得到的盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到细胞因子标准品；
S2.中，所述冻干液由以下按质量百分数计算的组分组成：
0.5~5%干酪素钠，1~10%甘露醇，0.05~0.5%聚乙烯吡咯烷酮K30，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液的pH值为7.4。
2.根据权利要求1所述细胞因子ELISA标准品的制备方法，其特征在于，所述干酪素钠的质量分数为1%。
3.根据权利要求1或2所述细胞因子ELISA标准品的制备方法，其特征在于，所述甘露醇的质量分数为5%。
4.根据权利要求1所述细胞因子ELISA标准品的制备方法，其特征在于，S3.中，每瓶容积为3mL的西林瓶，加入1mL的所述标准浓度蛋白溶液。
5.根据权利要求1所述细胞因子ELISA标准品的制备方法，其特征在于，所述细胞因子为猴细胞因子。
6.根据权利要求1所述细胞因子ELISA标准品的制备方法，其特征在于，所述细胞因子为猴细胞因子IL-12或猴细胞因子IL-23。
7.一种采用权利要求1所述方法制备的细胞因子ELISA标准品。
CN201710471584.4A 2017-06-20 2017-06-20 一种细胞因子elisa标准品的制备方法 Active CN107340387B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710471584.4A CN107340387B (zh) 2017-06-20 2017-06-20 一种细胞因子elisa标准品的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710471584.4A CN107340387B (zh) 2017-06-20 2017-06-20 一种细胞因子elisa标准品的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107340387A CN107340387A (zh) 2017-11-10
CN107340387B true CN107340387B (zh) 2019-02-01

Family

ID=60221506

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710471584.4A Active CN107340387B (zh) 2017-06-20 2017-06-20 一种细胞因子elisa标准品的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107340387B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109900541A (zh) * 2018-12-29 2019-06-18 广东云天抗体生物科技有限公司 一种含有海藻糖冻干液及其应用
CN117723763B (zh) * 2023-12-19 2024-08-16 江苏默乐生物科技股份有限公司 一种冻干液、细胞因子蛋白冻干球及其制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104111329A (zh) * 2013-04-17 2014-10-22 广州瑞博奥生物科技有限公司 一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒
CN105801683A (zh) * 2016-03-31 2016-07-27 天津瑞普生物技术股份有限公司 一种犬干扰素冻干制品
CN105974111A (zh) * 2016-07-20 2016-09-28 国家纳米科学中心 一种类风湿因子(IgM型)及其他抗原特异性IgM抗体联合检测的方法
CN106199007A (zh) * 2016-08-03 2016-12-07 烟台普罗吉生物科技发展有限公司 蛋白保护剂

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2945199A (en) * 1998-03-18 1999-10-11 Ronai, Peter Amorphous glasses for stabilising sensitive products

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104111329A (zh) * 2013-04-17 2014-10-22 广州瑞博奥生物科技有限公司 一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒
CN105801683A (zh) * 2016-03-31 2016-07-27 天津瑞普生物技术股份有限公司 一种犬干扰素冻干制品
CN105974111A (zh) * 2016-07-20 2016-09-28 国家纳米科学中心 一种类风湿因子(IgM型)及其他抗原特异性IgM抗体联合检测的方法
CN106199007A (zh) * 2016-08-03 2016-12-07 烟台普罗吉生物科技发展有限公司 蛋白保护剂

Also Published As

Publication number Publication date
CN107340387A (zh) 2017-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107300616B (zh) 一种冻干液配方及其应用
Hsu et al. Frozen dough. I. Factors affecting stability of yeasted doughs
CN107340387B (zh) 一种细胞因子elisa标准品的制备方法
EP3560334A1 (en) Cell freezing medium for clinical use
CN108107210B (zh) 一种髓过氧化物酶冻干校准品的制备方法及冻干保护液
MX350047B (es) Composicion de estabilizacion de almacenamiento en seco para materiales biologicos.
CN110463688B (zh) 一种羊精液的稀释液以及保存方法
CN109512697A (zh) 一种鸡尾酒法双色冻干粉及其制备方法
Lu et al. Physicochemical and fermentation properties of pre-fermented frozen dough: Comparative study of frozen storage and freeze–thaw cycles
CN104490795A (zh) 一种含缩宫素药物组合物的注射剂及其制备方法
CN103478301B (zh) 一种成品绿茶色泽改善方法
CN103520121A (zh) 注射用维库溴铵冻干粉针剂及其制备方法
CN109900541A (zh) 一种含有海藻糖冻干液及其应用
HRP20212007T1 (hr) Soj kvasca saccharomyces bayanus
CN103374530A (zh) 一种半干酵母及其制备方法
Dongdong et al. Effect of sucrose levels on dynamic rheology properties of dough during fermentation process
Vitolo Effect of freezing on invertase activity of Saccharomyces cerevisiae cell
Ferguson et al. Effects of vasopressin on toad bladder membrane proteins: Relationship to transport of sodium and water
JP2003505024A (ja) 微生物、細胞、および組織の貯蔵
CN105055340A (zh) 制备氨甲环酸冻干粉针剂的工艺配方和方法
CN103585633A (zh) 一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法
EP2914755B1 (en) Method for honey wort high-sugar alcohol fermentation
Johnston et al. Cytopathologic diagnosis of fungus infections. I. A method for the preparation of simulated cytopathologic material for the teaching of fungus morphology in cytology specimens. II. The presence of fungus in clinical material
CN115261354B (zh) 一种肌酸激酶同工酶质控品及其制备方法、检测试剂盒
KR102054127B1 (ko) 건식 제분 쌀가루를 이용한 증편 제조법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant