CN107328622A - 一种制备棒状荧光标记微塑料的方法 - Google Patents
一种制备棒状荧光标记微塑料的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107328622A CN107328622A CN201710545638.7A CN201710545638A CN107328622A CN 107328622 A CN107328622 A CN 107328622A CN 201710545638 A CN201710545638 A CN 201710545638A CN 107328622 A CN107328622 A CN 107328622A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- plastics
- micro
- fluorescence labeling
- bar
- optical fibre
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000004033 plastic Substances 0.000 title claims abstract description 84
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 title claims abstract description 84
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 239000013308 plastic optical fiber Substances 0.000 claims abstract description 24
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 39
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 11
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 6
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 6
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N Terephthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 229920001617 Vinyon Polymers 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000001879 gelation Methods 0.000 claims description 2
- 238000004804 winding Methods 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 1
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 7
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract description 2
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 10
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical class O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000392970 Prunus serrulata Species 0.000 description 1
- 235000014001 Prunus serrulata Nutrition 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 231100000693 bioaccumulation Toxicity 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000005447 environmental material Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/34—Purifying; Cleaning
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/36—Embedding or analogous mounting of samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/42—Low-temperature sample treatment, e.g. cryofixation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
- G01N2001/2873—Cutting or cleaving
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
本发明公开一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，将塑料纤维加入染料储备液与正己烷混合液中进行荧光标记，然后缠绕在卷轴上来对齐塑料纤维，覆冷冻包埋剂，冷冻后切割成小块并排列成立方块，将立方块固定到组织切片机上连续切片，最后切片用超纯水洗涤、烘干、称重既得。通过本发明可以方便快捷地得到环境中普遍存在的不同形状的荧光微塑料，便于定性、定量分析不同形状的微塑料在环境介质中和生物体内的分布和富集规律，并可广泛用于各类微塑料的生态环境风险研究。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，制备的微塑料用于定性、定量分析不同形状的微塑料在环境介质和生物体内的分布和富集规律，可广泛用于各类微塑料的生态环境风险研究，属于高分子材料制备领域。
背景技术
微塑料是指直径小于5mm的塑料颗粒。由于塑料产量逐年增加且其本身难以降解，导致塑料污染已经成为海洋中的一大难题。紫外辐射和机械磨损可以将塑料降解成小尺寸的微塑料，微塑料的潜在环境健康风险越来越受到重视。文献研究发现，在实际环境和生物体检测中发现，微塑料的形状多种多样，主要有纤维(棒状)，颗粒，片状，球形。来自渔网，绳索或衣服的塑料微纤维是水体中微塑料的普遍类型，其次是不规则形状的塑料碎片，颗粒和薄膜。受限于材料的获取，现阶段对微塑料的毒性研究主要针对球形，但是球形作为一个规则且非主要存在的微塑料不具代表性，因而有必要考察不同形状对微塑料在生物组织内富集分布和毒效应的影响。
材料的制备是不同形状微塑料研究的一项重要内容。目前普遍存在的制备材料的方法是，研磨，剪切，环境采样和从日常护理品中提取。这些方法所得的微塑料(1)粒径不均一，大小千差万别；(2)荧光强度弱，无法使用分子荧光光谱仪定量；(3)由于尺寸较大而不能被生物富集。且现有的方法费时费力，效率不高。
为了更好地研究微塑料在环境和生物体内的富集分布，评价微塑料的生态环境风险。本发明提供了一种快速制备不同形状的微塑料的方法，该方法所得到的微塑料相对均一，荧光强度较强，尺寸适合生物富集实验的需要，而且该方法可操作性强，效率高。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，现阶段关于微塑料毒性研究中使用形状均一的塑料微球不能很好地模拟环境中不同形状的微塑料的现状，提供一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，通过溶胀吸附法和冷冻切片法制备。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种棒状荧光标记微塑料的制备方法，包括如下步骤：
(1)荧光标记：采用常规的溶胀吸附法，将染料储备液与正己烷混合制备混合液，把塑料纤维加入混合液中使用涡旋仪快速涡旋后静置1～2d，使用移液枪小心吸去混合液，并用超纯水反复洗涤塑料纤维3～5次。
(2)对齐固定：将荧光标记后的塑料纤维缠绕在定制的卷轴上来对齐纤维，纤维末端用胶带固定。
(3)冷冻包埋：将对齐的塑料纤维涂覆冷冻包埋剂，在-80～-40℃冰箱中冷冻成冻块，将冻块用刀片切割成平行的小块，并将小块排列成标准的立方块，用锡纸包好。
(4)冷冻切片：将立方块固定到组织切片机上，并使立方块对齐并垂直于刀片，手摇切片机手轮以1～25μm的预设长度进行连续切片，将切片收集在玻璃烧杯中。
(5)洗涤离心：将切片用超纯水洗涤3～5遍后离心，使用移液枪小心吸出水分后，在40～100℃下烘干1～2d后称重既得。
步骤(1)所述染料储备液为染料以质量体积比2～5g/L溶于丙酮中制备的混合液，染料选自脂溶性染料，优选尼罗红；所述染料储备液与正己烷的混合体积比为1:2～1:4。
步骤(1)所述塑料纤维为聚苯乙烯塑料纤维、聚乙烯塑料纤维、聚酰胺塑料纤维、聚对苯二甲酸塑料纤维和聚丙烯塑料纤维中的一种或多种，塑料纤维横断面直径为8～12微米。
步骤(2)所述定制的卷轴底台长220mm，宽80mm，高12mm，底台上部设有相距120～150mm，高50mm，直径为15mm的两根圆柱状轴；塑料纤维缠绕卷轴的匝数为10～15匝。
步骤(3)所述冷冻包埋剂为OCT包埋剂。
步骤(3)中切割的方向为垂直于塑料纤维长度方向，所述小块的切割尺寸为长2～3cm的小块；所述立方块由8～10片小块排列而成，使得包埋好的塑料纤维对齐平行。
步骤(4)中切片方向垂直于塑料纤维长度方向，从而将长纤维切割成数段短纤维。
采用以上制备方法所制备得到的棒状荧光标记微塑料也在本发明的保护范围中。
采用以上制备方法所制备得到的棒状荧光标记微塑料在研究微塑料在环境中和生物体内的富集分布的应用。
有益效果：
1、本申请所得到的微塑料荧光强度较强，且大小，形状相对均一，便于使用荧光显微镜和分子荧光光谱仪定性、定量分析不同形状的微塑料在环境介质和生物体内的分布和富集规律，可广泛用于各类微塑料的生态环境风险研究。
2、本申请采用的方法操作简单、方便、快捷，尤其与用剪刀手工剪切塑料纤维的繁重工作量相比更高效。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
图1为本发明技术路线图。
图2为塑料荧光纤维对齐的定制卷轴。
图3为棒状荧光微塑料制备过程实物图。
图4为荧光显微镜下棒状荧光微塑料效果图。
图5为棒状荧光微塑料的粒径分布图。
图6为棒状荧光微塑料溶液在520nm下的激发光谱图。
图7为棒状荧光微塑料溶液的标准曲线图
图8为棒状荧光微塑料在斑马鱼组织内的含量图。
具体实施方式
下面结合具体实施事例对本发明作进一步详细描述，但不作为对本发明的限定。以下实施例中，定制的卷轴底台长220mm，宽80mm，高12mm，底台上部设有相距130mm，高50mm，直径为15mm的两根圆柱状轴；组织切片机型号为YD-202，产自金华市益迪医疗设备有限公司。尼罗红染料购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，货号为N121291-250mg。冷冻包埋剂购自：美国樱花公司。
图1是本发明技术路线图。
实施例1
棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料制备：
(1)将尼罗红染料溶于丙酮，配置成2.5g/L的尼罗红染料储备液。用5mL的离心管将尼罗红染料储备液与正己烷以1:4的体积比混合。将未标记的聚苯乙烯纤维加入混合液中，涡旋后静置24h，使用移液枪小心吸去混合液，并用超纯水洗涤3次，得到荧光标记的聚苯乙烯纤维。
(2)将荧光标记的聚苯乙烯纤维缠绕在定制的卷轴(如图2所示)上来对齐纤维，末端用胶带固定，如图3。
(3)将对准的纤维涂覆冷冻包埋剂，在-80℃冰箱中冷冻26h，使纤维固定并变脆。用小刀将冻块切成2cm长的平行小块，并将其中8片小块整齐排列，制成标准的3.5cm×1cm×2cm的立方体，用锡纸包好，确保所有纤维保持对准。
(4)将排列的纤维立方块固定到组织切片机上，使得纤维对齐并垂直于刀片，设定25微米长度连续切片，并将切片收集在玻璃烧杯中；
(5)用超纯水洗涤5遍后离心，用移液枪吸出水分后，55℃烘干称重，得到棒状荧光聚苯乙烯微塑料。如图4为荧光显微镜下棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料效果图。
实施例2
棒状聚丙烯荧光标记微塑料制备：
(1)将尼罗红染料溶于丙酮，配置成3g/L的尼罗红染料储备液。用5mL的离心管将尼罗红染料储备液与正己烷以1:3的体积比混合。将未标记的聚丙烯纤维加入混合液中，涡旋后静置36h，使用移液枪小心吸去混合液，并用超纯水洗涤4次，得到荧光标记的聚丙烯纤维。
(2)将荧光标记的聚丙烯纤维缠绕在定制的卷轴(如图2所示)上来对齐纤维，末端用胶带固定。
(3)将对准的纤维涂覆冷冻包埋剂，在-60℃冰箱中冷冻26h，使纤维固定并变脆。用小刀将冻块切成2cm长的平行小块，并将其中9片小块整齐排列，制成标准的3.5cm×1cm×2cm的立方体，用锡纸包好，确保所有纤维保持对准。
(4)将排列的纤维立方块固定到组织切片机上，使得纤维对齐并垂直于刀片，设定15微米长度连续切片，并将切片收集在玻璃烧杯中；
(5)用超纯水洗涤5遍后离心，用移液枪吸出水分后，60℃烘干称重，得到棒状聚丙烯荧光标记微塑料。
实施例3
棒状聚乙烯荧光标记微塑料制备：
(1)将尼罗红染料溶于丙酮，配置成5g/L的尼罗红染料储备液。用5mL的离心管将尼罗红染料储备液与正己烷以1:2的体积比混合。将未标记的聚乙烯纤维加入混合液中，涡旋后静置48h，使用移液枪小心吸去混合液，并用超纯水洗涤5次，得到荧光标记的聚乙烯纤维。
(2)将荧光标记的聚乙烯纤维缠绕在定制的卷轴(如图2所示)上来对齐纤维，末端用胶带固定。
(3)将对准的纤维涂覆冷冻包埋剂，在-40℃冰箱中冷冻26h，使纤维固定并变脆。用小刀将冻块切成2cm长的平行小块，并将其中10片小块整齐排列，制成标准的3.5cm×1cm×2cm的立方体，用锡纸包好，确保所有纤维保持对准。
(4)将排列的纤维立方块固定到组织切片机上，使得纤维对齐并垂直于刀片，设定1微米长度连续切片，并将切片收集在玻璃烧杯中；
(5)用超纯水洗涤5遍后离心，用移液枪吸出水分后，100℃烘干称重，得到棒状聚乙烯荧光标记微塑料。
实施例4
棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料在生物体内的富集规律实验：
确定粒径分布：在荧光显微镜下测量得实施例1制备得到的棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料的横截面直径为10微米左右，统计得到棒状荧光标记微塑料纵向尺寸在10～20μm约占11％，20～30μm约占43％，30～40μm约占20％，40～50μm约占11％，50～60μm约占7％，如图5所示。
确定激发波长与发射波长：利用荧光光谱仪测得棒状荧光标记微塑料悬浮液的发射波长和激发波长分别为520nm和596nm，如图6所示。
染毒实验：以制备好的棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料做为受试物，受试动物为成熟健康的斑马鱼(Danio rerio，5月龄，0.29±0.022g)，随机分为染毒组和对照组，每组包含3个平行，每个平行使用5条鱼，染毒周期为：3天吸收阶段+3天清除阶段。对照组使用紫外消毒的曝气自来水，染毒组使用已经制备好的棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料，用与对照组一致的紫外消毒曝气自来水配置20mg/L微塑料悬浮液体系先暴露3天(吸收阶段)，后转移至与对照组一致的紫外消毒曝气自来水再暴露3天(清除阶段)。其他实验条件如下：温度：24±1℃，pH：7.2±0.5，溶解氧：6.6±0.3mg/L，
电导率：0.256±0.005mS/cm，硬度：185±9mg/L CaCO3。
样品采集：6天后，解剖染毒组和对照组斑马鱼，采集目标组织器官(肝、肠)，每个平行中5条鱼的组织混合作为一个样，冷冻干燥72h称干重，并做好记录。
组织消解：将干燥组织置于1mL浓硝酸中，70℃消解2h后用超纯水定容至5mL，得到待测样品溶液。
标准曲线：配置不同浓度梯度的荧光微塑料溶液，采用荧光光谱仪，设置激发波长和发射波长为520nm和596nm，测定各溶液的荧光强度，绘制标准曲线，如图7所示。
样品测定：在520nm和596nm的激发和发射波长下，测定待测样品溶液的荧光强度，根据标准曲线计算相应浓度，浓度乘上定容后体积得到微塑料量。
含量换算：将得到的微塑料量与对应的组织干重作比，换算得到单位质量组织中微塑料的含量；其中染毒组样品的结果要扣除空白对照组背景值，结果得到最终结果，即棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料在斑马鱼组织中的富集量。绘制棒状聚苯乙烯荧光标记微塑料在斑马鱼组织中随时间的吸收与清除曲线，如图8所示。
本发明提供了一种制备棒状荧光标记微塑料的方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
Claims (10)
1.一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)荧光标记：将染料储备液与正己烷混合制备混合液，把塑料纤维加入混合液中涡旋后静置1～2d，吸去混合液，用超纯水洗涤塑料纤维；
(2)对齐固定：将荧光标记后的塑料纤维缠绕在卷轴上来对齐纤维，纤维末端用胶带固定；
(3)冷冻包埋：将对齐的塑料纤维涂覆冷冻包埋剂，在-80～-40℃下冷冻成冻块，将冻块切割成平行的小块，并将小块排列成立方块，用锡纸包好；
(4)冷冻切片：将立方块固定到组织切片机上，以1～25μm的预设长度进行连续切片；
(5)洗涤离心：将切片用超纯水洗涤后离心，吸出水分后，烘干后称重即得。
2.根据权利要求1所述的一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，步骤(1)所述染料储备液为染料以质量体积比2～5g/L溶于丙酮中制备的混合液，染料选自脂溶性染料；所述染料储备液与正己烷的混合体积比为1:2～1:4。
3.根据权利要求1所述的一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，步骤(1)所述塑料纤维为聚苯乙烯塑料纤维、聚乙烯塑料纤维、聚酰胺塑料纤维、聚对苯二甲酸塑料纤维和聚丙烯塑料纤维中的一种或多种；塑料纤维的横断面直径为8～12微米。
4.根据权利要求1所述的一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，步骤(2)中所述卷轴的轴距为120～150mm；塑料纤维缠绕的匝数为10～15匝。
5.根据权利要求1所述的一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，步骤(3)所述冷冻包埋剂为OCT包埋剂。
6.根据权利要求1所述的一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，步骤(3)中切割的方向为垂直于塑料纤维长度方向，所述小块的切割尺寸为2～3cm；所述立方块由8～10片小块排列而成，使得包埋好的塑料纤维对齐平行。
7.根据权利要求1所述的一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，步骤(4)中切片方向垂直于塑料纤维长度方向。
8.根据权利要求1所述的一种制备棒状荧光标记微塑料的方法，其特征在于，步骤(5)所述烘干的温度为40～100℃。
9.权利要求1～8任意一项所述的制备方法制备得到的棒状荧光标记微塑料。
10.权利要求1～8任意一项所述的制备方法制备得到的棒状荧光标记微塑料在研究微塑料在环境中或生物体内的富集分布的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710545638.7A CN107328622A (zh) | 2017-07-06 | 2017-07-06 | 一种制备棒状荧光标记微塑料的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710545638.7A CN107328622A (zh) | 2017-07-06 | 2017-07-06 | 一种制备棒状荧光标记微塑料的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107328622A true CN107328622A (zh) | 2017-11-07 |
Family
ID=60195959
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710545638.7A Pending CN107328622A (zh) | 2017-07-06 | 2017-07-06 | 一种制备棒状荧光标记微塑料的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107328622A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108485097A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-04 | 暨南大学 | 一种长余辉发光纳米粒子标记的微塑料及制备方法与应用 |
| CN108587102A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-28 | 暨南大学 | 一种金属有机荧光配合物标记的环境微塑料及制备方法与应用 |
| CN108613957A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-02 | 中国人民解放军火箭军疾病预防控制中心 | 一种用于水产食品中微塑料的检测方法 |
| CN108654811A (zh) * | 2018-03-16 | 2018-10-16 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 一种实验室快速制备微米级微塑料的方法 |
| CN110715835A (zh) * | 2019-09-30 | 2020-01-21 | 河南大学 | 一种基于浮选和离心相结合的分离环境土壤或沉积物中微塑料的方法 |
| WO2023087230A1 (zh) * | 2021-11-19 | 2023-05-25 | 深圳先进技术研究院 | 一种织物中塑料微粒的提取方法及切取装置 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10332552A (ja) * | 1997-05-28 | 1998-12-18 | Samsung Electron Co Ltd | 半導体装置製造用清浄室の大気中の水溶性汚染物質分析方法及び分析装置 |
| CN1352211A (zh) * | 2001-12-04 | 2002-06-05 | 上海交通大学 | 可发黄橙光的聚丙烯荧光复合材料制备方法 |
| CN1884998A (zh) * | 2006-05-30 | 2006-12-27 | 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 | 用于检测纤维形态的树脂包埋纤维的方法 |
| CN103694491A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-04-02 | 武汉工程大学 | 一种废旧abs复合塑料回收改性再生方法 |
| CN103776657A (zh) * | 2014-01-26 | 2014-05-07 | 中国热带农业科学院椰子研究所 | 一种椰子叶片冷冻切片的制作方法 |
| CN105651748A (zh) * | 2016-01-18 | 2016-06-08 | 南京大学 | 一种定量分析微塑料在水生生物体内富集分布的方法 |
| CN105675566A (zh) * | 2016-01-25 | 2016-06-15 | 南京大学 | 定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法 |
| US20170049518A1 (en) * | 2015-08-17 | 2017-02-23 | Albert J. Sinusas | Real-time molecular imaging and minimally-invasive detection in interventional cardiology |
| CN107160585A (zh) * | 2017-07-06 | 2017-09-15 | 南京大学 | 一种制备颗粒状和薄片状荧光标记微塑料的方法 |
-
2017
- 2017-07-06 CN CN201710545638.7A patent/CN107328622A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10332552A (ja) * | 1997-05-28 | 1998-12-18 | Samsung Electron Co Ltd | 半導体装置製造用清浄室の大気中の水溶性汚染物質分析方法及び分析装置 |
| CN1352211A (zh) * | 2001-12-04 | 2002-06-05 | 上海交通大学 | 可发黄橙光的聚丙烯荧光复合材料制备方法 |
| CN1884998A (zh) * | 2006-05-30 | 2006-12-27 | 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 | 用于检测纤维形态的树脂包埋纤维的方法 |
| CN103694491A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-04-02 | 武汉工程大学 | 一种废旧abs复合塑料回收改性再生方法 |
| CN103776657A (zh) * | 2014-01-26 | 2014-05-07 | 中国热带农业科学院椰子研究所 | 一种椰子叶片冷冻切片的制作方法 |
| US20170049518A1 (en) * | 2015-08-17 | 2017-02-23 | Albert J. Sinusas | Real-time molecular imaging and minimally-invasive detection in interventional cardiology |
| CN105651748A (zh) * | 2016-01-18 | 2016-06-08 | 南京大学 | 一种定量分析微塑料在水生生物体内富集分布的方法 |
| CN105675566A (zh) * | 2016-01-25 | 2016-06-15 | 南京大学 | 定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法 |
| CN107160585A (zh) * | 2017-07-06 | 2017-09-15 | 南京大学 | 一种制备颗粒状和薄片状荧光标记微塑料的方法 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108654811A (zh) * | 2018-03-16 | 2018-10-16 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 一种实验室快速制备微米级微塑料的方法 |
| CN108485097A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-04 | 暨南大学 | 一种长余辉发光纳米粒子标记的微塑料及制备方法与应用 |
| CN108587102A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-28 | 暨南大学 | 一种金属有机荧光配合物标记的环境微塑料及制备方法与应用 |
| CN108613957A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-02 | 中国人民解放军火箭军疾病预防控制中心 | 一种用于水产食品中微塑料的检测方法 |
| CN110715835A (zh) * | 2019-09-30 | 2020-01-21 | 河南大学 | 一种基于浮选和离心相结合的分离环境土壤或沉积物中微塑料的方法 |
| WO2023087230A1 (zh) * | 2021-11-19 | 2023-05-25 | 深圳先进技术研究院 | 一种织物中塑料微粒的提取方法及切取装置 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107328622A (zh) | 一种制备棒状荧光标记微塑料的方法 | |
| CN107160585B (zh) | 一种制备颗粒状和薄片状荧光标记微塑料的方法 | |
| CN105651748B (zh) | 一种定量分析微塑料在水生生物体内富集分布的方法 | |
| CN105675566B (zh) | 定量分析微塑料在哺乳动物体内富集和分布的方法 | |
| Pathak et al. | Detection of reactive oxygen species (ROS) in cyanobacteria using the oxidant-sensing probe 2’, 7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) | |
| ES2279405T3 (es) | Metodo para la preparacion de muestras histologicas. | |
| CN106075598A (zh) | 一种光交联丝胶蛋白水凝胶及其制备方法和应用 | |
| Bonarska-Kujawa et al. | Changes caused by fruit extracts in the lipid phase of biological and model membranes | |
| WO2000020846A9 (en) | Method for imaging tissue | |
| CN106334192B (zh) | 一种丝胶蛋白水凝胶及其制备方法和应用 | |
| WO2011124945A1 (en) | Detector for detecting contaminants in water or aqueous solutions | |
| Pavlov et al. | Conformation zoning of large molecules using the analytical ultracentrifuge | |
| CN103852368B (zh) | 黄瓜花粉半薄切片mtg-dapi双染色观察线粒体dna | |
| Yuan et al. | Morphological and microscopic identification of three major medicinal Dendrobium species in Ta‐pieh Mountains area | |
| CN107955603A (zh) | 一种水溶性荧光碳量子点及其制备方法以及一种检测果糖的方法 | |
| Koller et al. | Cellular fine structures and histochemical reactions in the tissue of a cypress twig preserved in Baltic amber | |
| Wake et al. | Improved Kupffer's gold chloride method for demonstrating the stellate cells storing retinol (vitamin A) in the liver and extrahepatic organs of vertebrates | |
| CN105131947B (zh) | 一种用于荧光纳米温度计的复合壳层碳点及其制备方法和应用 | |
| CN109827814A (zh) | 一种新型大气颗粒物琼脂采样膜制备及免溶剂提取细胞暴露方法 | |
| Huang et al. | The components of an inorganic physiological buffer for Penaeus chinensis | |
| CN105675375A (zh) | 马尾松病死木中失活线虫的分离液及其分离方法和试剂盒 | |
| Jiang et al. | A rapid sample processing method to observe diatoms via scanning electron microscopy | |
| Dianursanti et al. | Comparison of maceration and soxhletation method for flavonoid production from Spirulina platensis as a sunscreen’s raw material | |
| Roshchina | Fluorescence of Living Plant Cells for Phytomedicine Preparations | |
| CN106018688A (zh) | 一种金属纳米颗粒离子和纳米效应毒性贡献率的估算方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20171107 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |