CN107296806A - 丹酚酸a作为脂蛋白相关磷脂酶a2抑制剂的新用途 - Google Patents

丹酚酸a作为脂蛋白相关磷脂酶a2抑制剂的新用途 Download PDF

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CN107296806A CN201710484473.7A CN201710484473A CN107296806A CN 107296806 A CN107296806 A CN 107296806A CN 201710484473 A CN201710484473 A CN 201710484473A CN 107296806 A CN107296806 A CN 107296806A
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马全鑫
杨钦钦
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Abstract

本发明公开了丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp‑PLA2)抑制剂的新用途。通过高脂饲喂联合VD3注射和球囊损伤术建立大鼠动脉粥样硬化(AS)模型，研究丹酚酸A对AS大鼠血清Lp‑PLA2含量和活性的影响，对AS大鼠主动脉Lp‑PLA2mRNA和蛋白表达的影响。结果显示，丹酚酸A可降低AS大鼠血清Lp‑PLA2含量及活性，下调主动脉Lp‑PLA2蛋白的表达，从而发挥抗AS作用。同时建立人胰腺癌BxPC3裸鼠皮下移植瘤模型，研究两种给药途径SAA对荷瘤裸鼠Lp‑PLA2、cPLA2、sPLA2表达的影响，结果发现，SAA可显著降低荷瘤裸鼠肿瘤组织、瘤旁组织及血清中Lp‑PLA2、cPLA2、sPLA2的含量。本项发明为丹酚酸A开拓了新的用途，预期丹酚酸A可以作为Lp‑PLA2抑制剂用于多种医药用途。

Description

丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂的新用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体是丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂的新用途。
背景技术
脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是一种Ca2+不依赖型的分泌磷脂酶A2，血浆Lp-PLA2与脂蛋白颗粒结合，其中约80％与低密度脂蛋白(LDL)结合，尤其是小颗粒LDL，仅10％与高密度脂蛋白(HDL)结合。Lp-PLA2与分泌型磷脂酶A2(sPLA2)、胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)共同组成磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)家族。研究表明，cPLA2、sPLA2和Lp-PLA2在促进炎症反应和引起动脉粥样硬化(AS)中起着重要的作用，与心血管事件的发生有密切关系。其中，Lp-PLA2作为一种新的炎症标志物，是当前研究的热点。研究显示，Lp-PLA2与AS、肿瘤等严重威胁人类健康的重大疾病密切相关。Lp-PLA2能水解氧化LDL，产生溶血卵磷脂(LPC)和氧化非酯化脂肪酸(oxNEFA)两种前体炎性因子，促进AS发生。大量报道表明Lp-PLA2抑制剂具有抗AS作用，可用于降低冠心病患者的心血管事件，明显延缓AS发展，减少损伤血管巨噬细胞含量和缓解动物模型的斑块炎症。但是已有的Lp-PLA2抑制剂未能降低心脏病发作和中风的整体风险，而且副作用多。这也促使人们寻求新的有效Lp-PLA2抑制剂。
丹酚酸A(SAA)是唇形科植物丹参的干燥根及根茎中所含的一种水溶性酚酸类化合物。近年来研究表明，SAA在心脑血管疾病保护、抗肝损伤、糖尿病及并发症、抗肿瘤等方面有显著活性。但是丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂的研究未见报道。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂的新用途。
本发明的另一个目的是提供了丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备防治动脉粥样硬化药物中的用途。
本发明还提供了丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备防治心脑血管疾病药物中的用途。
本发明还提供了丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备防治糖尿病及并发症药物中的用途。
本发明还提供了丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备抗肿瘤药物中的用途。
所述的用途，其中丹酚酸A与药学上可接受的载体组成临床可以接受的制剂。
所述载体包括药学领域的常规稀释剂，赋形剂，填充剂，粘合剂，湿润剂，崩解剂，吸收促进剂，表面活性剂，吸附载体，润滑剂等，必要时还可以加入香味剂，甜味剂等。本发明药物可以制成片剂，粉剂，粒剂，胶囊，口服液及注射用药等多种形式，上述各剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明通过高脂饲喂联合VD3注射和球囊损伤术建立大鼠AS模型，研究丹酚酸A对AS大鼠血清Lp-PLA2含量和活性的影响，对AS大鼠主动脉Lp-PLA2mRNA和蛋白表达的影响。结果显示，丹酚酸A可降低AS大鼠血清Lp-PLA2含量及活性，下调主动脉Lp-PLA2蛋白的表达，从而发挥抗AS作用。通过建立人胰腺癌BxPC3裸鼠皮下移植瘤模型，通过瘤内注射和静脉注射两种给药途径给予2mg/kg SAA，研究SAA对荷瘤裸鼠Lp-PLA2、cPLA2、sPLA2表达的影响，结果发现，SAA可显著降低荷瘤裸鼠肿瘤组织、瘤旁组织及血清中Lp-PLA2、cPLA2、sPLA2的含量，可显著减小肿瘤体积。通过建立ZDF大鼠模型，结果显示丹酚酸A可显著降低ZDF大鼠血清中Lp-PLA2含量，由此可见，丹酚酸A在作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂以及防治动脉粥样硬化、防治心脑血管疾病、抗肿瘤、防治糖尿病及并发症中具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为丹酚酸A对AS大鼠血清中Lp-PLA2含量的影响。
其中，与正常组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
图2为丹酚酸A对AS大鼠主动脉Lp-PLA2mRNA表达的影响。
图3为丹酚酸A对AS大鼠主动脉Lp-PLA2蛋白表达水平的影响。
其中，与正常组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05。
图4为丹酚酸A对人胰腺癌BxPC3移植瘤裸鼠Lp-PLA2、cPLA2、sPLA2含量的影响。
其中，SAA-1组为瘤内注射2mg/kg SAA，SAA-2组为尾静脉注射给予2mg/kg SAA；与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。
图5为丹酚酸A对人胰腺癌BxPC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。
图6为丹酚酸A对ZDF大鼠组织中Lp-PLA2 mRNA表达的影响。
图7为丹酚酸A对ZDF大鼠组织中Lp-PLA2蛋白表达的影响。
具体实施方式
实施例1：丹酚酸A对AS大鼠血清中Lp-PLA2含量的影响
材料：丹酚酸A、维生素D3注射液、戊巴比妥钠、大鼠Lp-PLA2 ELISA检测试剂盒、血小板活化因子乙酰水解酶分析试剂盒。
实验动物：SPF级雄性SD大鼠，6～8周龄，体重220～250g。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
1.1模型建立
雄性SD大鼠适应性饲养1周后，用于模型制备，高脂饲喂(胆固醇1％、猪油10％、蛋黄粉10％、3号胆盐0.5％、基础饲料78.5％)，同时腹腔注射40万IU/kg的VD3。VD3注射2周后，参照文献行主动脉球囊损伤术。大鼠用3％戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔麻醉，颈部剃毛，背部固定于鼠板。碘酒消毒颈部皮肤，无菌条件下作颈部正中开口，钝性分离大鼠左侧颈总动脉，结扎远心端，动脉夹夹闭近心端，暂时阻断左侧颈总动脉近心及远心端血流。在两端之间的动脉壁上约呈45°显微剪剪开一“V”形开口，向近心端仔细轻柔插入2.0×20mm直径球囊导管，松开动脉夹，使球囊进入近心端动脉，并向颈总动脉起始部推送8～10cm。手推式压力泵注入生理盐水，将球囊充盈，用4～6ATM加压球囊，然后，回抽球囊(以回来时有明显阻力感，又可以拉动球囊为宜)，当球囊回撤至切口处时球囊完全减压，然后再将球囊导管推送入主动脉，再次充盈球囊、回撤减压，使之与动脉内膜摩擦，造成内膜机械损伤。如此来回摩擦5次后，释放球囊气体，退出导管，结扎近心端颈总动脉。生理盐水冲洗伤口，并洒青霉素钠防感染，缝合肌肉和皮肤，碘酒再次消毒皮肤，将动物放入保温箱保暖护理待其苏醒。
1.2分组给药
次日，选择手术成功的大鼠，按体重随机分为2组，即模型组(Model)、SAA组(SAA)、每组6只。另6只作为正常组(Control)，共3组，每笼3只饲养。正常组和模型对照组大鼠均尾静脉注射5ml/kg生理盐水，SAA组每天尾静脉注射SAA 1mg/kg，连续4周。试验期间，除正常组饲喂普通饲料外，其余各组高脂饲喂，并于给药前和给药2周时分别注射10万IU/kg VD3。
1.3血清Lp-PLA2含量及活性测定
1.3.1血清Lp-PLA2含量测定
采用ELISA法测定大鼠血清中Lp-PLA2含量。操作步骤按照试剂盒说明进行。
1.3.2血清Lp-PLA2活性测定
按PAF Acetylhydrolase Assay Kit试剂盒说明书进行测定，根据说明书提供的公式计算各样本的Lp-PLA2活性。结果以每分钟每升血浆水解PAF的微摩尔数表示Lp-PLA2活性(μmol/min/L)。
(2)实验结果：与正常组比，AS模型组大鼠血清Lp-PLA2含量和活性显著升高(P<0.05)。与模型组比，SAA给药组Lp-PLA2含量和活性均明显降低(P<0.05)。结果详见图1。
实施例2：丹酚酸A对AS大鼠主动脉Lp-PLA2 mRNA表达的影响
材料：丹酚酸A、维生素D3注射液、戊巴比妥钠、逆转录试剂盒、荧光定量试剂盒、总RNA提取试剂盒。
实验动物：SPF级雄性SD大鼠，6～8周龄，体重220～250g。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
1.1模型建立
雄性SD大鼠适应性饲养1周后，用于模型制备，高脂饲喂(胆固醇1％、猪油10％、蛋黄粉10％、3号胆盐0.5％、基础饲料78.5％)，同时腹腔注射40万IU/kg的VD3。VD3注射2周后，参照文献行主动脉球囊损伤术。大鼠用3％戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔麻醉，颈部剃毛，背部固定于鼠板。碘酒消毒颈部皮肤，无菌条件下作颈部正中开口，钝性分离大鼠左侧颈总动脉，结扎远心端，动脉夹夹闭近心端，暂时阻断左侧颈总动脉近心及远心端血流。在两端之间的动脉壁上约呈45°显微剪剪开一“V”形开口，向近心端仔细轻柔插入2.0×20mm直径球囊导管，松开动脉夹，使球囊进入近心端动脉，并向颈总动脉起始部推送8～10cm。手推式压力泵注入生理盐水，将球囊充盈，用4～6ATM加压球囊，然后，回抽球囊(以回来时有明显阻力感，又可以拉动球囊为宜)，当球囊回撤至切口处时球囊完全减压，然后再将球囊导管推送入主动脉，再次充盈球囊、回撤减压，使之与动脉内膜摩擦，造成内膜机械损伤。如此来回摩擦5次后，释放球囊气体，退出导管，结扎近心端颈总动脉。生理盐水冲洗伤口，并洒青霉素钠防感染，缝合肌肉和皮肤，碘酒再次消毒皮肤，将动物放入保温箱保暖护理待其苏醒。
1.2分组给药
次日，选择手术成功的大鼠，按体重随机分为2组，即模型组(Model)、SAA组(SAA)、每组6只。另6只作为正常组(Control)，共3组，每笼3只饲养。正常组和模型对照组大鼠均尾静脉注射5ml/kg生理盐水，SAA组每天尾静脉注射SAA 1mg/kg，连续4周。试验期间，除正常组饲喂普通饲料外，其余各组高脂饲喂，并于给药前和给药2周时分别注射10万IU/kg VD3。
1.3荧光定量PCR
用总RNA提取试剂盒提取大鼠血管组织总RNA，按产品说明书进行操作。按逆转录试剂盒说明书操作步骤合成cDNA，选取GAPDH为内参基因，大鼠GAPDH和Lp-PLA2mRNA引物序列如下表。按照荧光定量试剂盒操作步骤，将cDNA用实时荧光定量PCR仪进行扩增，反应操作在冰上进行。
表1实时荧光定量PCR引物序列
(2)实验结果
与正常组比较，AS模型组血管Lp-PLA2 mRNA表达有升高趋势，给予1mg/kg SAA能降低Lp-PLA2 mRNA的表达。结果详见图2。
实施例3：丹酚酸A对AS大鼠主动脉Lp-PLA2蛋白表达的影响。
材料：丹酚酸A，维生素D3注射液、戊巴比妥钠、Lp-PLA2抗体
实验动物：SPF级雄性SD大鼠，6～8周龄，体重220～250g。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
1.1模型建立
雄性SD大鼠适应性饲养1周后，用于模型制备，高脂饲喂(胆固醇1％、猪油10％、蛋黄粉10％、3号胆盐0.5％、基础饲料78.5％)，同时腹腔注射40万IU/kg的VD3。VD3注射2周后，参照文献行主动脉球囊损伤术。大鼠用3％戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔麻醉，颈部剃毛，背部固定于鼠板。碘酒消毒颈部皮肤，无菌条件下作颈部正中开口，钝性分离大鼠左侧颈总动脉，结扎远心端，动脉夹夹闭近心端，暂时阻断左侧颈总动脉近心及远心端血流。在两端之间的动脉壁上约呈45°显微剪剪开一“V”形开口，向近心端仔细轻柔插入2.0×20mm直径球囊导管，松开动脉夹，使球囊进入近心端动脉，并向颈总动脉起始部推送8～10cm。手推式压力泵注入生理盐水，将球囊充盈，用4～6ATM加压球囊，然后，回抽球囊(以回来时有明显阻力感，又可以拉动球囊为宜)，当球囊回撤至切口处时球囊完全减压，然后再将球囊导管推送入主动脉，再次充盈球囊、回撤减压，使之与动脉内膜摩擦，造成内膜机械损伤。如此来回摩擦5次后，释放球囊气体，退出导管，结扎近心端颈总动脉。生理盐水冲洗伤口，并洒青霉素钠防感染，缝合肌肉和皮肤，碘酒再次消毒皮肤，将动物放入保温箱保暖护理待其苏醒。
1.2分组给药
次日，选择手术成功的大鼠，按体重随机分为2组，即模型组(Model)、SAA组(SAA)、每组6只。另6只作为正常组(Control)，共3组，每笼3只饲养。正常组和模型对照组大鼠均尾静脉注射5ml/kg生理盐水，SAA组每天尾静脉注射SAA 1mg/kg，连续4周。试验期间，除正常组饲喂普通饲料外，其余各组高脂饲喂，并于给药前和给药2周时分别注射10万IU/kg VD3。
1.3Western blot
按照蛋白提取试剂盒和定量试剂盒的操作说明提取主动脉总蛋白并进行定量。将已定量的总蛋白样品，电泳、转膜和封闭，NC膜与合适稀释度的一抗在37℃孵育1h后，4℃放置48h，TBS洗后与二抗37℃孵育1h，TBS洗后，将NC膜放至Odyssey红外荧光扫描仪上进行扫描，分析蛋白条带，计算灰度值。
(2)实验结果：与正常组比较，模型组Lp-PLA2蛋白表达量显著升高，有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比，SAA给药组Lp-PLA2蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结果详见图3。
实施例4：丹酚酸A对人胰腺癌BxPC3移植瘤裸鼠Lp-PLA2、cPLA2、sPLA2表达的影响。
材料：丹酚酸A，人胰腺癌BxPC3细胞，小鼠Lp-PLA2 ELISA检测试剂盒，小鼠cPLA2ELISA检测试剂盒，小鼠sPLA2 ELISA检测试剂盒。
实验动物：SPF级BALB/c-nu/nu裸鼠，雄性，4-5周龄。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
1.1细胞培养
BxPC3细胞以RPMI 1640完全培养液(含10％胎牛血清和100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素)于37℃，5％CO2培养箱传代培养。收集对数生长期细胞接种。细胞以PBS清洗2-3次，生理盐水重悬，台盼兰拒染法计数活细胞，调整细胞浓度至2.5×107/ml，细胞悬液放置于冰上，接种过程在细胞悬液制备后1小时内完成。
1.2分组和处理
每只裸鼠颈背皮下接种上述肿瘤细胞悬液，以游标卡尺每天测量裸小鼠的肿瘤直径，待每只小鼠的肿瘤均长至100-150mm3后按体重和瘤体积进行随机分为3组，模型对照组、SAA-1给药组、SAA-2给药组，各5只。SAA-1给药组每天一次瘤内注射给予2mg/kg的SAA，SAA-2给药组每天一次尾静脉注射给予2mg/kg的SAA，连续给药21天。
2.Lp-PLA2、cPLA2、sPLA2含量测定
采用ELISA法测定大鼠瘤组织、瘤旁组织和血清中Lp-PLA2、cPLA2、sPLA2含量。操作步骤按照试剂盒说明进行。
实验结果：与对照组比较，SAA-1组和SAA-2组大鼠瘤组织、瘤旁组织和血清中Lp-PLA2、cPLA2、sPLA2含量均显著下降(P<0.01，P<0.05)。SAA-1和SAA-2组之间无显著性差异(P>0.05)。结果详见图4。
实施例5：丹酚酸A对人胰腺癌BxPC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。
材料：丹酚酸A，人胰腺癌BxPC3细胞。
实验动物：SPF级BALB/c-nu/nu裸鼠，雄性，4-5周龄。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
1.1细胞培养
BxPC3细胞以RPMI 1640完全培养液(含10％胎牛血清和100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素)于37℃，5％CO2培养箱传代培养。收集对数生长期细胞接种。细胞以PBS清洗2-3次，生理盐水重悬，台盼兰拒染法计数活细胞，调整细胞浓度至2.5×107/ml，细胞悬液放置于冰上，接种过程在细胞悬液制备后1小时内完成。
1.2分组和处理
每只裸鼠颈背皮下接种上述肿瘤细胞悬液，以游标卡尺每天测量裸小鼠的肿瘤直径，待每只小鼠的肿瘤均长至100-150mm3后按体重和瘤体积进行随机分为2组，模型对照组和丹酚酸A(SAA)组，各5只。SAA组每天一次瘤内注射给予2mg/kg的SAA，连续给药21天。
2.结果观察
每3天各组裸鼠称重，并用游标卡尺测量每只裸鼠移植瘤的瘤结节最大直径a和最小径b，计算瘤体积(V)，计算公式为：V＝1/2×a×b2。根据瘤体积绘制移植瘤生长曲线。
实验结果：给药3～21d后，SAA组裸鼠移植瘤体积均显著或极显著小于模型对照组(P<0.01，P<0.05)。结果详见图5。
实施例6：丹酚酸A对ZDF大鼠血清中Lp-PLA2含量的影响
材料：丹酚酸A、大鼠血小板活化因子乙酰水解酶分析试剂盒。
实验动物：SPF级ZDF大鼠，7～8周龄，雄性；SPF级瘦型ZL大鼠，7～8周龄，雄性。
饲料：Purina#5008营养组分：蛋白质23.75％、总脂肪7.55％、粗纤维4.00％、消化能14.6兆焦/千克。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
7-8周龄雄性ZDF大鼠32只，饲喂Purina#5008饲料，另取8只同周龄ZL大鼠饲喂基础饲料，作为正常对照组。4周后，将ZDF大鼠根据GLU、TC及体重，分为4组，即模型对照组、丹酚酸A(SAA)低、中、高剂量组，每组8只。ZDF大鼠2只一笼，ZL大鼠4只一笼。SAA低、中、高剂量组ZDF大鼠每天分别尾静脉注射SAA 0.25mg·kg-1、0.5mg·kg-1、1mg·kg-1，模型对照组和正常对照组每天给予5mL·kg-1生理盐水，连续给药12周。
2.血清中Lp-PLA2活性测定
使用ELISA试剂盒检测给药前与给药4、8、12周时血清中Lp-PLA2活性，具体方法按PAF Acetylhydrolase Assay Kit试剂盒说明书进行，根据说明书提供的公式计算各样本的Lp-PLA2活性。结果以每分钟每升血浆水解PAF的微摩尔数表示Lp-PLA2活性(μmol/min/L)。
(2)实验结果：与正常对照组相比，模型对照组Lp-PLA2活性均显著升高(P<0.01)；在给药4、8、12周时SAA高剂量组的Lp-PLA2活性均极显著低于模型对照组(P<0.01)，而给药12周时SAA中剂量组的Lp-PLA2活性也显著低于模型对照组(P<0.05)。结果详见表2。
表2SAA对ZDF大鼠Lp-PLA2活性的影响(n＝8)
注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。
实施例7：丹酚酸A对ZDF大鼠组织中Lp-PLA2 mRNA表达的影响
材料：丹酚酸A、逆转录试剂盒、荧光定量试剂盒、总RNA提取试剂盒。
实验动物：SPF级ZDF大鼠，7～8周龄，雄性；SPF级瘦型ZL大鼠，7～8周龄，雄性。
饲料：Purina#5008营养组分：蛋白质23.75％、总脂肪7.55％、粗纤维4.00％、消化能14.6兆焦/千克。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
7-8周龄雄性ZDF大鼠24只，饲喂Purina#5008饲料，另取8只同周龄ZL大鼠饲喂基础饲料，作为正常对照组。4周后，将ZDF大鼠根据GLU、TC及体重，分为3组，即模型对照组、丹酚酸A(SAA)0.5mg·kg-1、SAA1mg·kg-1给药组，每组8只。ZDF大鼠2只一笼，ZL大鼠4只一笼。SAA给药组ZDF大鼠每天分别尾静脉注射SAA 0.5mg·kg-1、1mg·kg-1，模型对照组和正常对照组每天给予5mL·kg-1生理盐水，连续给药12周。
2.荧光定量PCR
用总RNA提取试剂盒提取大鼠肾、肝组织总RNA，按产品说明书进行操作。按逆转录试剂盒说明书操作步骤合成cDNA，选取GAPDH为内参基因，大鼠GAPDH和Lp-PLA2 mRNA引物序列如下表。按照荧光定量试剂盒操作步骤，将cDNA用实时荧光定量PCR仪进行扩增，反应操作在冰上进行。表3实时荧光定量PCR引物序列
(2)实验结果：与正常对照组相比，模型对照组肾、肝组织Lp-PLA2 mRNA表达量均显著升高(P<0.05)；与模型对照组比，SAA各组的肾组织中Lp-PLA2mRNA的表达显著下降(P<0.05)，肝组织中Lp-PLA2mRNA的表达有下降趋势(P>0.05)。结果详见图6。
实施例8：丹酚酸A对ZDF大鼠组织中Lp-PLA2蛋白表达的影响
材料：丹酚酸A、Lp-PLA2抗体。
实验动物：SPF级ZDF大鼠，7～8周龄，雄性；SPF级瘦型ZL大鼠，7～8周龄，雄性。
饲料：Purina#5008营养组分：蛋白质23.75％、总脂肪7.55％、粗纤维4.00％、消化能14.6兆焦/千克。
(1)实验方法
1.模型建立和分组给药
7-8周龄雄性ZDF大鼠16只，饲喂Purina#5008饲料，另取8只同周龄ZL大鼠饲喂基础饲料，作为正常对照组。4周后，将ZDF大鼠根据GLU、TC及体重，分为2组，即模型对照组、丹酚酸A(SAA)1mg·kg-1给药组，每组8只。ZDF大鼠2只一笼，ZL大鼠4只一笼。SAA给药组ZDF大鼠每天分别尾静脉注射SAA 1mg·kg-1，模型对照组和正常对照组每天给予5mL·kg-1生理盐水，连续给药12周。
2.Western blot
按照蛋白提取试剂盒和定量试剂盒的操作说明提取主动脉总蛋白并进行定量。将已定量的总蛋白样品，电泳、转膜和封闭，NC膜与合适稀释度的一抗在37℃孵育1h后，4℃放置48h，TBS洗后与二抗37℃孵育1h，TBS洗后，将NC膜放至Odyssey红外荧光扫描仪上进行扫描，分析蛋白条带，计算灰度值。
(2)实验结果：与正常对照组相比，模型对照组脑、肾组织Lp-PLA2蛋白表达量均显著升高(P<0.05)；与模型对照组比，SAA给药组脑、肾组织中Lp-PLA2蛋白的表达有下降趋势(P>0.05)。结果详见图7。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂的用途。
2.丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备防治动脉粥样硬化药物中的用途。
3.丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备防治心脑血管疾病药物中的用途。
4.丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备防治糖尿病及并发症药物中的用途。
5.丹酚酸A作为脂蛋白相关磷脂酶A2抑制剂在制备抗肿瘤药物中的用途。
6.如权利要求2至5中任意一项所述的用途，其特征在于丹酚酸A与药学上可接受的载体组成临床可以接受的制剂。
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