CN107281484A - 用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用，其在动物和人体内在保持原有预防性疫苗的乙肝病毒特异性抗体基础上，能够对感染乙肝病毒的细胞进行灭活和清除，具有预防和治疗的双重作用；本发明将免疫激动剂活化酯和原始抗原HBsAg结合形成新的高活性抗原，在铝佐剂协同下达到比原有HBsAg抗原更强的免疫激活效应，其效益表现在加强的免疫细胞因子诱导、更高的抗体产生效果，特别是γ‑干扰素和IgG2a抗体的高水平标志Th1型免疫生成，对于清除乙肝病毒具有显著的创新性和实用性。

Description

用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及乙肝疫苗预防和治疗的技术领域，更具体地说，涉及一种用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
乙肝疫苗是用于预防乙肝的药物。疫苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗体，从而使人体具有了预防乙肝的免疫力，达到预防乙肝感染的目的。但是我国感染乙肝病毒(HBV)的人群有9000万人，其中慢性乙肝患者有2000万人。对于慢性乙肝感染者和患者，预防性乙肝疫苗基本无效。因此非常需要一种既能预防又能清除乙肝病毒慢性感染的“治疗性乙肝疫苗”。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用，解决了现有技术中的乙肝疫苗不能同时预防和清除乙肝病毒慢性感染的问题。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是：一种用于制备乙肝疫苗的组合物，其特征在于，包含免疫激动剂活化酯、HBsAg以及铝佐剂，其中组成比例为：免疫激动剂活化酯：HBsAg：Al＝n：m：q，HBsAg代表重组乙肝表面抗原，Al代表铝佐剂中的铝；n、m、q分别代表免疫激动剂活化酯、HBsAg、Al的摩尔数或重量比，且代表性的摩尔数比为n:m:q＝4:1:18181；其中免疫激动剂活化酯(T7)的结构式如下：
其中，R为OH或SH。
在本发明的组合物中，HBsAg的氨基酸序列包括200-400个氨基酸，HBsAg的分子量为20000Da-44000Da。
在本发明的组合物中，HBsAg的氨基酸序列包括200-250个氨基酸；HBsAg的分子量为20000Da-25000Da。
在本发明的组合物中，HBsAg的氨基酸序列如下：
Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln AlaGly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp TrpThr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln AsnSer Gln SerPro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg TrpMet Gys Leu Arg Arhg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile PheLeu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro GlySer Thr Thr Thr ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly AsnSer Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys IlePro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val ArgPhe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser ProThr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr SerIle Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile。
在本发明的组合物中，所述铝佐剂为氢氧化铝凝胶、磷酸铝、硫酸铝、铵明矾或钾明矾。
在本发明的组合物中，所述免疫激动剂活化酯的制备方法包括：将反应起始物溶于无水DMF中，分批加入EDC和NHS，室温反应，将反应液倒入冰水中，抽滤，水洗，干燥，得白色固体状的免疫激动剂活化酯；所述反应起始物与无水DMF的质量体积比为0.075g/ml-0.1g/ml；所述EDC的加入量与所述反应起始物的质量比为0.45-0.6；所述NHS的加入量与所述反应起始物的质量比为0.25-0.4；
其中，反应起始物的结构式为：
在本发明的组合物中，室温反应的时间为1.5h-4h。
在本发明的组合物中，所述免疫激动剂活化酯在制备治疗性乙肝疫苗中的应用、以及在制备人和动物免疫调节药物中的应用。
本发明还提供了上述的组合物的制备方法，包括：将免疫激动剂活化酯与以DMSO或生理盐水为溶剂的HBsAg母液相混合，于4℃-8℃摇动过夜，再与9倍体积的铝佐剂溶液混合得到用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物。
本发明还提供了上述的组合物在用于制备提高针对乙肝表面抗原HBsAg的抗体效价和效应T细胞的药物中的应用、以及在制备用于预防和治疗乙肝的疫苗和药物中的应用。
实施本发明的用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用，具有以下有益效果：本发明针对慢性乙肝感染者提供一种用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用，其在动物和人体内在保持原有预防性疫苗的乙肝病毒特异性抗体基础上，能够对感染乙肝病毒的细胞进行灭活和清除，具有预防和治疗的双重作用；本发明将免疫激动剂活化酯和原始抗原HBsAg结合形成新的高活性抗原，在铝佐剂协同下达到比原有HBsAg抗原更强的免疫激活效应，其效益表现在加强的免疫细胞因子诱导、更高的抗体产生效果，特别是γ-干扰素和IgG2a抗体的高水平标志Th1型免疫生成，对于清除乙肝病毒具有显著的创新性和实用性。
附图说明
图1为免疫激动剂活化酯(T7)的合成工艺图以及免疫激动剂活化酯(T7)与原始抗原HBsAg结合的原理图；
图2为免疫激动剂活化酯(T7)的质谱图；
图3为不同摩尔比例(1:1、1:4、1:40、1:100)的(HBsAg)-(T7)混合物对IL-6诱导效果；
图4为不同摩尔比例(1:1、1:4、1:40、1:100)的(HBsAg)-(T7)混合物加铝佐剂和不加铝佐剂对INF-γ诱导效果；
图5为1:4倍摩尔比例的(HBsAg)-(T7)混合物加铝佐剂对IL-6诱导效果；
图6A为用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液和对照组分别诱导抗原特异性IgG1体液免疫反应对比图；
图6B为用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液和对照组分别诱导抗原特异性IgG2a体液免疫反应对比图；
图7A为用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液和对照组分别诱导抗原特异性CD4+反应的照片；
图7B为用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液和对照组分别诱导抗原特异性CD4+反应的IFNγ表达率的对比图；
图7C为用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液和对照组分别诱导抗原特异性CD8+反应的照片；
图7D为用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液和对照组分别诱导抗原特异性CD8+反应的IFNγ表达率的对比图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的免疫激动剂活化酯和组合物及其制备方法和应用作进一步说明：
使用小分子免疫激动剂作为疫苗佐剂的优点是其结构稳定，易于人工合成纯化和制造。但是小分子免疫佐剂的缺点是机体吸收快、代谢快，因此不能和抗原蛋白很好的协同分布代谢。本发明中应用的小分子免疫激动剂活化酯和重组乙肝表面抗原HBsAg进行共价偶联形成新的整体抗原，体内分布和作用具有一致性。本发明中的乙肝疫苗佐剂的这些优点大大提高了佐剂和抗原的免疫协同作用，因此从机制上也具有显著的创新性。
该免疫激动剂活化酯(T7)，其结构式如下：
其中，R为OH或SH。
本发明还提供一种用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物，包含上述的免疫激动剂活化酯、HBsAg以及铝佐剂，其中组成比例为：免疫激动剂活化酯：HBsAg：Al＝n：m：q，HBsAg代表重组乙肝表面抗原，Al代表铝佐剂中铝的含量；n、m、q分别代表免疫激动剂活化酯、HBsAg、Al的摩尔数或重量比，且代表性的摩尔数比为n∶m∶q＝4∶1∶18181。
优选地，HBsAg的氨基酸序列包括200-400个氨基酸，HBsAg的分子量为20000Da-44000Da。更优选地，HBsAg的氨基酸序列包括200-250个氨基酸；HBsAg的分子量为20000Da-25000Da。HBsAg的氨基酸典型代表序列如下(含226个氨基酸)(《中国生物工程杂志》1995，15(2)∶43-45)：
Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln AlaGly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp TrpThr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln SerPro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg TrpMet Gys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile PheLeu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro GlySer Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly AsnSer Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys IlePro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val ArgPhe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser ProThr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr SerIle Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile。
铝佐剂为氢氧化铝凝胶、磷酸铝、硫酸铝、铵明矾或钾明矾。
本发明原理上应用免疫激动剂活化酯和原始抗原HBsAg结合形成新的高活性抗原，在铝佐剂协同下达到比原有HBsAg抗原更强的免疫激活效应，其效益表现在加强的免疫细胞因子诱导、更高的抗体产生效果，特别是γ-干扰素和IgG2a抗体的高水平标志Th1型免疫生成，对于清除乙肝病毒具有显著的创新性和实用性。
下面通过具体实施例进行详细说明。
实施例1：免疫激动剂活化酯(T7)的合成
如图1所示，将1g化合物1(2.25mmol)溶于12ml无水DMF中，分批加入EDC(518mg，2.7mmol)和NHS(337mg，2.93mmol)，室温反应2h，LC-MS检测反应，反应结束后，将反应液倒入100ml冰水中，抽滤，水洗，干燥，得白色固体0.9g。如图2所示，ESI-MS:m/z＝542.10[M+H]+.
需要说明的是，EDC是一种可溶于水的碳二亚胺，其化学式为C8H17N3.HCl，具体为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；NHS为N-羟基琥珀酰亚胺；DMF二甲基甲酰胺。
实施例2：
将1g化合物1(2.25mmol)溶于13.4ml无水DMF中，分批加入EDC600mg和NHS400mg，室温反应4h，LC-MS检测反应，反应结束后，将反应液倒入100ml冰水中，抽滤，水洗，干燥，得白色固体0.98g。ESI-MS:m/z＝542.10[M+H]+.
实施例3：
将1g化合物1(2.25mmol)溶于10ml无水DMF中，分批加入EDC450mg和NHS250mg，室温反应1.5h，LC-MS检测反应，反应结束后，将反应液倒入100ml冰水中，抽滤，水洗，干燥，得白色固体0.86g。ESI-MS:m/z＝542.10[M+H]+.
实施例4：用于制备乙肝疫苗的组合物制备方法
该方法更具体是指用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液的制备方法。
如图1所示，将免疫激动剂活化酯T7(2mg/3.7μM)与100mL浓度为220μg/mL的HBsAg母液(0.92μM；平均分子量24KD；深圳康泰生物制品股份有限公司提供)混合，于4-8℃摇动过夜，再与900mL的铝佐剂溶液(含Al(OH)3浓度为1.44mg/mL；含铝浓度为0.5mg/mL)混合得到代表性的用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液，偶联疫苗溶液。其中重量比(T7)：(HBsAg)：(Al)：＝n:m:q＝1:11:225；摩尔比n:m:q＝4:1:18181。
上述配比中无论使用哪种铝佐剂，其中铝的含量均按照举例中的摩尔比计算。
其中免疫激动剂母液配置溶剂为DMSO或生理盐水；其它铝佐剂替换以铝的有效含量为准(含铝0.5mg/mL)。HBsAg的形式可为单体或者多聚合体，其母液浓度范围为220μg/mL-250μg/mL之间。
下面具体说明生物活性测试。
实施例5：体外细胞因子激发作用
采用Balb/c小鼠来源的脾脏淋巴细胞作为测试体系。(HBsAg)：(T7)以不同摩尔比例的混合物同1×106/mL的脾脏淋巴细胞培养24小时，收集上清后用Elisa方法检测上清中激发IL-6、INF-γ的浓度，无添加作为阴性对照。结果如图3-5，(HBsAg)-(T7)混合物以及加铝佐剂对免疫细胞因子IL-6和IFN-γ的激发效应显著。
实施例6：用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液(偶联乙肝疫苗混合液)诱导抗原特异性体液免疫反应的作用
Balb/c小鼠(每组5只)，将(HBsAg)：(T7)以不同摩尔比例的混合物在加铝佐剂和不加铝佐剂情况下，在0、14和28天进行免疫。在第35天分离获得小鼠血清，运用Elisa法检测血清中HBsAg特异性IgG1和IgG2a抗体滴度。商用乙肝疫苗(HBsAg+Al)和PBS注射作为对照组。结果见图6A和6B，该溶液诱导抗原特异性体液免疫反应的作用明显。
实施例7：用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物的溶液(偶联乙肝疫苗混合液)诱导抗原特异性CD4+和CD8+T细胞反应的作用
Balb/c小鼠(每组5只)，在铝佐剂存在下，将(HBsAg)：(T7)以1:4摩尔比例的混合物情况下在0、14和28天进行免疫。在第35天分离获得小鼠脾脏淋巴细胞，运用胞内IFNγ染色和流式细胞技术鉴定HBsAg特异性CD4+和CD8+T细胞比例。商用乙肝疫苗(HBsAg+Al)作为对照组。见图7A、7B、7C和7D，结果显示该溶液诱导抗原特异性CD4+和CD8+T细胞反应的作用明显。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进或变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于制备乙肝疫苗的组合物，其特征在于，包含免疫激动剂活化酯、HBsAg以及铝佐剂，其中组成比例为：免疫激动剂活化酯∶HBsAg∶Al＝n∶m∶q，HBsAg代表重组乙肝表面抗原，Al代表铝佐剂中的铝；n、m、q分别代表免疫激动剂活化酯、HBsAg、Al的摩尔数或重量比，且代表性的摩尔数比为n∶m∶q＝4∶1∶18181；其中免疫激动剂活化酯(T7)的结构式如下：
其中，R为OH或SH。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，HBsAg的氨基酸序列包括200-400个氨基酸，HBsAg的分子量为20000Da-44000Da。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，HBsAg的氨基酸序列包括200-250个氨基酸；HBsAg的分子量为20000Da-25000Da。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，HBsAg的氨基酸序列如下：
Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala GlyPhe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp ThrSer Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser ProThr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp MetGys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile Phe LeuLeu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly SerThr Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn SerMet Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile ProIle Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg PheSer Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro ThrVal Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser IleVal Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述铝佐剂为氢氧化铝凝胶、磷酸铝、硫酸铝、铵明矾或钾明矾。
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述免疫激动剂活化酯的制备方法包括：将反应起始物溶于无水DMF中，分批加入EDC和NHS，室温反应，将反应液倒入冰水中，抽滤，水洗，干燥，得白色固体状的免疫激动剂活化酯；所述反应起始物与无水DMF的质量体积比为0.075g/ml-0.1g/ml；所述EDC的加入量与所述反应起始物的质量比为0.45-0.6；所述NHS的加入量与所述反应起始物的质量比为0.25-0.4；
其中，反应起始物的结构式为：
7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，室温反应的时间为1.5h-4h。
8.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述免疫激动剂活化酯在制备治疗性乙肝疫苗中的应用、以及在制备人和动物免疫调节药物中的应用。
9.权利要求1-8中任一所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括：将免疫激动剂活化酯与以DMSO或生理盐水为溶剂的HBsAg母液相混合，于4℃-8℃摇动过夜，再与9倍体积的铝佐剂溶液混合得到用于制备预防和治疗乙肝疫苗的组合物。
10.权利要求1-8中任一所述的组合物在用于制备提高针对乙肝表面抗原HBsAg的抗体效价和效应T细胞的药物中的应用、以及在制备用于预防和治疗乙肝的疫苗和药物中的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018219266A1 (zh) * 2017-05-31 2018-12-06 深圳大学 用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用
CN109876140A (zh) * 2019-03-19 2019-06-14 何勇刚 一种治疗慢性乙肝的疫苗及其制备方法和应用
WO2019192454A1 (zh) * 2018-04-03 2019-10-10 深圳大学 新型小分子免疫激动剂和免疫靶向化合物及其应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3875458A4 (en) 2018-11-02 2022-08-24 Shanghai Maxinovel Pharmaceuticals Co., Ltd. DIPHENYLIKE COMPOUNDS, INTERMEDIATE PRODUCTS THEREOF, PREPARATION PROCESS THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION THEREOF AND USES THEREOF
JP2023540612A (ja) 2020-09-09 2023-09-25 グアンジョウ マキシノベル ファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド 芳香族エチレン系化合物、その製造方法、中間体、医薬組成物及びその使用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102993265A (zh) * 2012-10-10 2013-03-27 靳广毅 免疫受体调节剂偶联体及其制备方法和应用、制备其的偶联前体以及合成偶联前体的化合物
CN103566369A (zh) * 2012-08-01 2014-02-12 中国医学科学院肿瘤医院 一种在慢性乙肝病毒感染状态下诱导机体产生特异性免疫的乙肝疫苗
CN106267188A (zh) * 2016-08-15 2017-01-04 深圳大学 小分子免疫激动剂偶联pd‑1抗体的新型抗体及其在抗肿瘤中的应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107281484A (zh) * 2017-05-31 2017-10-24 深圳大学 用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103566369A (zh) * 2012-08-01 2014-02-12 中国医学科学院肿瘤医院 一种在慢性乙肝病毒感染状态下诱导机体产生特异性免疫的乙肝疫苗
CN102993265A (zh) * 2012-10-10 2013-03-27 靳广毅 免疫受体调节剂偶联体及其制备方法和应用、制备其的偶联前体以及合成偶联前体的化合物
CN106267188A (zh) * 2016-08-15 2017-01-04 深圳大学 小分子免疫激动剂偶联pd‑1抗体的新型抗体及其在抗肿瘤中的应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018219266A1 (zh) * 2017-05-31 2018-12-06 深圳大学 用于制备乙肝疫苗的组合物及其制备方法和应用
WO2019192454A1 (zh) * 2018-04-03 2019-10-10 深圳大学 新型小分子免疫激动剂和免疫靶向化合物及其应用
CN109876140A (zh) * 2019-03-19 2019-06-14 何勇刚 一种治疗慢性乙肝的疫苗及其制备方法和应用

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