CN107267508A - 一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1及其应用。本发明还提供了含有该启动子的表达盒和植物表达载体。本发明的启动子PosMeJ1能够在植物茉莉酸甲酯的诱导下提高目标基因的表达量。此外，本发明将上述启动子应用在植物转基因工程中。本发明提供的启动子可以启动外源基因在植物中表达，适用于任何植物，尤其能够驱动外源基因在植物植株中诱导表达，因此可以用于提高和改善植物的生长特性，从而培育出理想的转基因品种。

Description

一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术和植物基因工程技术领域。具体而言，本发明涉及一种水稻茉莉酸甲酯诱导表达启动子及其应用，该启动子能够在水稻转基因调控体系中驱动目标基因在植株中表达。

背景技术

茉莉酸(jasmonic acid,JA)及其甲酯为主的茉莉酸类是一类新型植物物质，是通过硬脂酸途径产生的脂肪酸衍生物。它广泛存在于高等植物以及某些真菌之中，植物种子的萌发、生根和开花、果实成熟、胚胎发育、气孔关闭、色素合成，衰老等各种生长发育过程均与的作用密切相关。有研究表明，茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)可以抑制根的生长。茉莉酸甲酯还可以诱导颖花的开放，这在水稻、高粱、苏丹草、小麦等作物中都得到了证实。曾晓春和周燮首次报道用0.04～4mmol/L的MeJA的对籼稻穗浸2min，即可在6～20min内诱导浆片膨大而导致大量开颖。诱导开放的颖花数和的浓度相关，浓度越大，诱导开放的颖花数越多。张旺等在杂交粳稻制种中进行了应用研究，结果发现，4mmol/L的MeJA的所处理的小区制种产量比对照小区增产幅度在182.3％-357.1％之间。此外，MeJA在对病、虫、机械伤害等的反应中可调节植物防卫基因的表达，提高植物的抗逆性，并在植物的形态建成中起重要作用。

茉莉酸甲酯作为逆境信号物质可以诱导植物抗逆响应，当植物受到创伤、昆虫咬食或病原菌感染后引发的局部及系统性的伤害信号，产生茉莉酸甲酯。在此诱导过程中，茉莉酸甲酯一方面是在外部起作用，诱导植株间的防御反应；另一方面经气孔进入植物细胞，在细胞质中被酯酶水解为茉莉酸(jasmonic acid,JA)。当植物受到逆境胁迫时，体内的茉莉酸能快速响应胁迫信号，与植物体内天然受体结合，受体蛋白激活再作用于相应启动子序列以驱动下游基因的表达，并将逆境信号传递到未受伤部位进一步启动抗逆基因表达，以抵御逆境胁迫伤害。

转基因技术在农作物和观赏植物中的发展应用是现代农业的一个发展趋势，实现外源基因在转基因植株中的精确调控表达是必要的。诱导型启动子虽然对外源基因的调控表达具有很强的时空控制性，但目前的研究多数停留在启动子功能分析及表达调控上，且真正能在生产实践上大规模使用的更是屈指可数。另外，很多诱导型启动子都存在有背景表达，即在没有诱导处理时出现较高的背景表达，影响了诱导调控的准确性。目前，研究的受茉莉酸甲酯诱导的启动子很少，利用该启动子可以驱动一些功能基因在植物植株中的表达，从而提高植株的抗逆性，培育理想的转基因植物品种。

但是，大部分研究人员并没有意识到受茉莉酸甲酯诱导的启动子的重要性，即便有人意识到了受茉莉酸甲酯诱导的启动子，想要从数以亿计的基因中找到受茉莉酸甲酯诱导的启动子，也如同大海捞针。

发明内容

本发明的目的是提供一种驱动外源基因在茉莉酸甲酯诱导条件下特异性表达的启动子、获得含有该启动子序列的转化子以及该启动子的应用。其中，本文中所涉及的“植物”是指单子叶植物，例如水稻、小麦、玉米、大麦、高粱或燕麦，优选为水稻。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子，所述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子包含序列表中SEQ ID No:1所示的DNA序列。序列表中SEQ ID No:1所示的DNA序列为来源于日本晴水稻(Oryza sativa L cv.Nipponbare)的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子，本文中称为PosMeJ1或启动子PosMeJ1。

另一方面，本发明提供一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子，其DNA序列与SEQ IDNo:1所示的DNA序列有至少80％同源性；或者，所述植物冷诱导表达启动子为在SEQ ID No:1所示的DNA序列中添加、取代、插入或缺失一个或一个以上核苷酸生成的突变体或等位基因或衍生物；或者所述植物冷诱导表达启动子具有与SEQ ID No:1所示的DNA序列杂交的产物。这些植物冷诱导表达启动子序列与SEQ ID No:1所示的DNA序列具有相同功能，即驱动目标基因在植物中特异性表达。

另一方面，本发明还提供一种包含上述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子的表达盒和重组表达载体。

再一方面，本发明提供上述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子在培育转基因植物中的应用。所述应用包括将本发明提供的上述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子连接于载体的待表达的基因序列上游，从而构建重组表达载体，将所述重组表达载体转化到植物细胞、组织或器官中进行培育。

并且优选地，所述应用可以用于改良植物生长特性，提高植物抗逆性。所述植物为单子叶植物，例如水稻、小麦、玉米、大麦、高粱或燕麦，优选为水稻。

本发明中所提供的启动子的DNA序列为(与序列表中SEQ ID No：1中相同)：

ACGTCTACCCCTACTTCGCCTACGTGGGCAACCAGGCCCAGATCGACATCAACTACGCGCTCTTCACGTCGCCGGGCACGGTGGTGCAGGACGGCGGCAACGCGTACCAGAACCTGTTCGACGCCATCGTCGACACGTTCTACTCCGCGCTGGAGAGCGCCGGCGCCGGGAGCGTCCCGATCGTGGTGTCGGAGAGCGGGTGGCCGTCGGCCGGCGGCACGGCGGCGAGCGCCGGCAACGCGCAGACGTACAACCAGAACCTGATCAACCACGTCGGGCAGGGGACGCCCAAGAGGCCCGGGAGCATCGAGACCTACATTTTCGCCATGTTCAACGAGAACCAGAAGGGAGGCGACGAGACGGAGAGGCACTTCGGCCTCTTCAACCCGGACCAGTCGCCGGCATACTCCATCAATTTCTAAGAAGATTGTTCTGAGAAGAGATCGATCGATGATGAATTAAACGTCGATCGATATAGATATATACATACACGCGTTCCATATATAGTTTGGGTTTGAATAAGCTTTCTGCCTGCATATTGCAAAGCTCAATGCATGCATGTAACGGTGCAGAGACAAATAATATGAACTTGAATAAAGTTTACCAGACCTATTTTCGCGTAGTATGATTAATGTCTCATACAGAGCAGACCATGTAGCATGTTATATTTCTCTCACTCAACGATGCGCGTTAATTTGATTCAGTCGTAACGTACGTGATGATCTTAGTAGTACAAACAGTACCGTACGTGTTGCACTTGCTAGCTAGAGTGCCGTGCACTTTGGCCTATGTTACGGTGTGGCGCACACTCTGACGCGTTTGTCTCACCGTGCAAAACGGCGGATGGGAGCTAGTGTGCACGTACACCGGCCTGTCCAGCACCAAGCACGTATACGTACAAGTAAAAAGTCGAACCAAGCAAGACAGCAACAAAACCGTTGCTGTTTGAGGCCGCCACGACCAAACAACGTCAAAAACACCGGAATTCCACGAGCCGGACAAGCAACTGCTCGATTTTATCCCGTCGTGCACGAACGCATGCTCGCGCGCGGCTAACGGTGCATGATGCGTGCGCGCGTCGTCCGGTTTTCCAAGCGAGCACGACTGGTCGACGACTGGCCAGTGGTGGCCATCGCTAGCTAGCGATTGAGTCGTCGTCGTCGTATGTGCAAATTGTGCATGCGTGGTTGCGAATTAGGCTTGACCAGACTGTGACACCGTCCCGCGCACGTTCATCCAGTTGGCTTATTTAAAGCATGTACAATATTAGACTATAAACCAGCTATAAACATATTTTAAGAAGATAAAAGAAAAAAATAAGAGCAGCGGGCTACAGATTTGTAACCACCTACAGCAAAGACTTTAAGATGCATGTGTGTATAAATCTATGACAGGTGGGACCAGACGTTAATAATATAATACTCCCTCCGTTTCAGCTTATAAGACGTTTTGACTTTGATAGAAGTCAAATTATTTCAAGTTTAACTAAGTTTATAATATTTATAATACTAAATTAGTTTCATCAAATCAAATTGAATATATTTTTATAATAAATTTGTCTTGGTTAAAAATGGTACTACTTTTTTTTTACAAACTTAATTAAATTTAAAGCAGTTTGATTTTGACTAAAGTCAAAACGTCTTATAACTTGAAACGGAGGAAGTAAATGTTTATAGATAACTATTAATATTATATGAATTGGCTATTAAATTGACTATAAATGATTTAGAGCCAATAGTGGGCTAAACTTGCTCTTAGCGTTAATTTAGTTGGGTTGGCTGCGTAGTGCGGTGGCGGACACTTGGTCCATCGGTAGTGGAGTACTACTGGTGGTGTGGAAATTGGAAATCGATCAGCAAGCTGCTGGAGCTAGTGTCATGGATGTGAGAAGAACGTGTGATGTACCGAACTGGATAATGCTACGGACTTGTTGCATGCCTAAATCTCTCCATATAAATAGAGAGTGATCGTGACTAGAGATACTTGCAGCAGCTGCAAAATAAGCGAAGATGACTACGCAAGGATT

需要说明的是：上述启动子的DNA序列中，序列开头以下划线标识的序列“ACGTCTACCCCTACTTCGCCTA”为获得启动子过程中使用的正向引物的留存序列，共计22bp；序列末尾以下划线标识的序列“CGAAGATGACTACGCAAGGATT”为获得启动子过程中使用的反向引物的留存序列(该留存序列与反向引物的相应序列互补)，共计22bp；该DNA序列中剩余的部分则为获自日本晴水稻中的DNA序列。需要强调的是，本文中所提到的启动子既可以指上述整个DNA序列，也可以指去除上述引物留存序列后的DNA序列。

综上所述，本发明的发明人从日本晴水稻(Oryza sativa L cv.Nipponbare)中分离克隆得到结构包括转录起始位点在内的2026bp的DNA序列，并将其命名为PosMeJ1(序列表中的SEQ ID No:1)。将该序列经酶切后连接到植物双元表达载体pCAMBIA1381上，获得相应的重组质粒(即重组表达载体)，利用该重组质粒转化根癌农杆菌菌株EHA105，然后用农杆菌介导的方法进行水稻的转化，得到转基因水稻植株。对获得的转基因水稻进行组织化学检测发现，转基因植株在MeJA诱导处理前，各组织没有蓝色，而在MeJA诱导处理后，整体上的GUS基因表达水平相对较高，各个组织显现蓝色，从而证明该2026bp的序列具有MeJA诱导表达活性。

技术效果

本发明所克隆的水稻启动子PosMeJ1是一个MeJA诱导表达启动子。该启动子可与植物双元表达载体连接，用于取代组成型启动子。该启动子序列可以用于驱动靶标基因如一些逆境响应基因，构建重组植物表达载体，经转化后，在MeJA诱导处理后可驱动靶标基因在植株中特异性表达，从而提高外源靶标基因在植物中的表达量，增加转基因的效果，而在没有MeJA诱导条件下，不影响植株的生长和发育，从而培育出理想的生物安全性高的转基因植物品种。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为pCAMBIA1381-PosMeJ1表达载体示意图，利用PosMeJ1启动子驱动位于其下游的GUS基因表达；

图2对本发明构建pCAMBIA1381-PosMeJ1表达载体进行酶切验证的结果示意图，其中箭头所指PosMeJ1启动子片段。

图3为GUS染色分析PosMeJ1的活性。其中，A、B、C分别代表MeJA处理前的10天转基因植株的根、叶和茎的染色结果；D、E和F代表MeJA处理后的根、叶和茎的染色结果。

图4为定量PCR分析PosMeJ1启动子受MeJA诱导后的活性变化。10天的转基因植株在用2mmol/L MeJA后，分别在4h、8h、12h和24h下PosMeJ1启动子驱动的GUS基因表达量。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。

下面所涉及的实验材料均为市售。

1、含有酶切位点的PosMeJ1启动子的获得

(1)、引物的设计

根据NCBI中提供的水稻品种日本晴(Oryza sativa L cv.Nipponbare)全基因组序列，依据水稻PosMeJ1基因的序列设计扩增引物，并根据选用的载体及靶标基因的特点，设计引物的酶切位点。本实施例中以水稻双元表达载体pCAMBIA1381(图1A，来自于pCAMBIA，公开使用载体，安徽省农业科学院农业部转基因生物产品成分监督检验测试中心水稻组保存)为例，靶标基因为GUS基因，具体设计的引物为：正向引物(SEQ ID No:2)5’端带PstI，酶切位点(CTGCAG)，反向引物(SEQ ID No:3)5’端带BamHI，酶切位点(GGATCC)，引物序列如下：

正向引物：CTGCAGACGTCTACCCCTACTTCGCCTA PstI

反向引物：GGATCCAATCCTTGCGTAGTCATCTTCG BamHI(2)、启动子的克隆

以水稻基因组DNA为模板，采用KOD高保真聚合酶进行PCR扩增。反应体系(50μL)如下。扩增产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳。

(3)、加ployA及连接T载体

回收PCR产物，为其加上polyA尾并连接T载体，获得克隆载体。

加A体系：3.175μL回收产物和1.825μL的加A混合物(5×Taq buffer 2μL，25mMMgCl2 0.5μL，100mM dATP 0.5μL，Taq polymerase 0.25μL)置于72℃，反应30min。

连接T载体：4μL的加A产物和1μL的T载体，置于25℃反应30min，即得到目的产物，后将产物转入大肠杆菌感受态。

(4)、转化大肠杆菌感受态细胞

①将加A连接T载体的连接液转入含100μL感受态细胞的1.5mLEppendorf管中，冰上放置30min；

②42℃热激90s后，立即冰浴2min；

③加入LB液体培养基500μL，置于37℃摇床振荡培养1h(120r/min)，使细菌恢复正常生长状态；

④取上述菌液100μL涂布于含氨苄青霉素的LB筛选平板上，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿进行培养，37℃培养16～24h。

⑤挑选菌落PCR及酶切验证正确的克隆送北京六合华大基因科技股份有限公司进行测序分析，获得候选基因的启动子。

(5)、启动子表达载体的构建

分别用相应的双酶切后回收启动子片段片段和线性化处理pCAMBIA1381质粒。用T4连接酶连接回收的目的片段及线性化载体(1μL10×T4ligase buffer，1μL T4ligase，2μL线性化载体，6μL目的片段)，PCR和双酶切验证菌落，获得相应启动子的表达载体。

(6)、表达载体转化根癌农杆菌EHA105

①取10μL表达载体质粒DNA加入从超低温冰箱取出的农杆菌感受态细胞，混匀后冰浴30min；

②用液氮速冻1min；

③加入1mL LB培养基，28℃120r/min培养4h；

④4000r/min离心1min，弃上清；加150μL LB培养基重悬，将菌液涂布与含50μg/mLKan和10μg/mL Rif的LB固体平板；

⑤28℃培养2～3d至单菌落长出，进行菌落PCR鉴定。

⑥挑取阳性克隆，用50％甘油(1：1)保存。

2、转基因植株的获得

(1)水稻遗传转化

①愈伤组织诱导：消毒后的水稻种子用无菌水在30℃黑暗条件下浸泡过夜，用解剖刀将胚剥下置于诱导培养基上。每皿(规格为100×25mm的一次性塑料培养皿，内含50mL诱导培养基)均匀放置12个胚，在30℃黑暗条件下放置2～3周诱导愈伤组织，至长出淡黄色颗粒状愈伤。

②预培养：从诱导培养基上挑选颗粒状的愈伤组织置于新的诱导培养基上，于30℃黑暗条件下培养3～5d。

③侵染及共培养：将预培养的愈伤组织转移至50mL无菌管中，加入农杆菌菌液(OD600＝0.2)浸泡20min，倒出菌液，并用无菌滤纸将愈伤上的残余菌液吸干。将愈伤均匀撒在共培养培养基上，于23℃黑暗下培养2～3d。

④恢复：将共培养的愈伤转移至恢复培养基上，30℃黑暗培养3～5d。

⑤筛选：从筛选培养基上挑选不带菌斑颜色鲜亮呈淡黄色颗粒状的胚性愈伤组织，接种于筛选培养基上，每皿30粒。30℃黑暗培养2～3周，至长出新的抗性颗粒状愈伤。

⑥分化：每一转化事件挑选三个独立的胚性愈伤到分化培养基某一区域，30℃光照培养室(16h光照/8h黑暗)条件下培养3～4周，待幼苗长出。

⑦生根：每一区域挑选两棵健壮的幼苗移栽至生根培养基，30℃组织培养室光周期(16h光照/8h黑暗)培养三周左右，进行鉴定并移栽至田间。

(2)转基因植株鉴定

共获得37株pCAMBIA1381-PosMeJ1植株(PosMeJ1：：GUS转基因水稻植株)。采用常规方法提取转基因植株的DNA，用PCR扩增潮霉素基因对转化植株进行检测，获得阳性植株30株。

3、启动子活性鉴定

(1)GUS组织化学染色

参照Jefferson等的方法，对PCR检测呈阳性的植株进行MeJA处理前后的GUS染色分析。将待测样品浸到GUS染液中，37℃保温箱中放置24h。然后用100％乙醇浸泡直至完全脱色。然后进行拍照。所需试剂及配方如下表所列。

染色结果如图3所示。在MeJA未处理的转基因植株的根(A)、叶(B)和茎(C)组织中，没有明显的着色；而当用2mmol/L MeJA处理后，转基因植株的根(D)、叶(E)和茎(F)组织中有很深的蓝色，这说明当用MeJA处理后，PosMeJ1启动子能够驱动GUS基因的表达，证明该启动子是一个MeJA诱导表达启动子，且没有背景表达。

(2)定量PCR分析启动子活性

GUS染色结果定性说明，PosMeJ1是一个MeJA诱导表达启动子。为进一步定量检测PosMeJ1的诱导活性大小，我们采取提取MeJA诱导前后的10天的转基因幼苗的RNA，然后反转录成cDNA，定量PCR(RT-qPCR)法检测MeJA诱导前后PosMeJ1驱动GUS基因的表达变化。

采用天根公司(北京)植物总RNA提取试剂盒(TIANGEN，离心柱型，DP432)。所获RNA按如下程序进行cDNA反转录：在RNase-free离心管中加入5μL RNase-Free ddH₂O，2μL 5×gDNA buffer，3μL RNA，置于42℃孵育3min，然后置于冰上放置；在上述反应液中，依次加入5μL RNase-Free ddH₂O，2μL FQ-RT Primer Mix，2μL 10×Fast RT Buffer，1μL RTEnzyme Mix充分混匀，置于42℃孵育15min；95℃孵育3min，之后放于冰上，即为cDNA。

RT-qPCR采用天根公司(北京)的SuperReal荧光定量预混液试剂盒(TIANGEN，SYBRGreen，FP205)。以水稻ACTIN基因作为内参基因对所用RNA模板量进行定量。采用2–ΔΔCT(ΔCT＝CT目标基因–CT内参基因；ΔΔCT＝ΔCT处理后–ΔCT对照)对获得的信号和数据进行处理。每个基因做3次重复。本实验中用到的基因的定量引物为：Actin-FP5’-CCTGACGGAGCGTGGTTAC-3’；和

Actin-RP，5’-CCAGGGCGATGTAGGAAAGC-3’用于ACTIN的扩增；Gus-FP，5’-TACGGCAAAGTGTGGGTCAATAATCA-3’

和Gus-RP，5’-CAGGTGTTCGGCGTGGTGTAGAG-3’用于GUS的扩增。

定量PCR结果如图4所示，以MeJA未处理的10天转基因幼苗中的GUS基因表达量作为1，分别检测了MeJA处理4h、8h、12h和24h的转基因植株中的GUS基因表达量变化。当MeJA处理时间由4h延长至8h时，相比于未处理时，启动子驱动的GUS基因表达量由22.7倍提高至91.5倍，随后，当处理时间达到12小时时，活性降低至17.3倍，当处理24h时，启动子活性又提高至78.7倍。由此说明，该启动子是一个MeJA诱导表达启动子，活性是诱导前的几十倍，且该启动子的活性可能与节律有关。

基于此，申请人发明了一种可以利用本发明所获得的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1来调控目标植株的局部生长的方法。

具体而言，若希望增强或抑制目标植株的某一部位的生长，比如，在水稻生长到一定程度之后，希望抑制水稻茎部的生长，则将植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1连接至茎部生长抑制基因并整体转入水稻植株，当希望抑制茎部生长时，则对水稻茎部进行植物茉莉酸甲酯处理，处理时间为8小时，这样，将极大地提高茎部生长抑制基因的表达，进而抑制植物茎部的生长。

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

序列表

<110> 安徽省农业科学院水稻研究所

<120> 一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1及其应用

<130> HCI20170106

<160> 3

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 2026

<212> DNA

<213> 一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1及其应用

<400> 1:

acgtctaccc ctacttcgcc tacgtgggca accaggccca gatcgacatc aactacgcgc 60

tcttcacgtc gccgggcacg gtggtgcagg acggcggcaa cgcgtaccag aacctgttcg 120

acgccatcgt cgacacgttc tactccgcgc tggagagcgc cggcgccggg agcgtcccga 180

tcgtggtgtc ggagagcggg tggccgtcgg ccggcggcac ggcggcgagc gccggcaacg 240

cgcagacgta caaccagaac ctgatcaacc acgtcgggca ggggacgccc aagaggcccg 300

ggagcatcga gacctacatt ttcgccatgt tcaacgagaa ccagaaggga ggcgacgaga 360

cggagaggca cttcggcctc ttcaacccgg accagtcgcc ggcatactcc atcaatttct 420

aagaagattg ttctgagaag agatcgatcg atgatgaatt aaacgtcgat cgatatagat 480

atatacatac acgcgttcca tatatagttt gggtttgaat aagctttctg cctgcatatt 540

gcaaagctca atgcatgcat gtaacggtgc agagacaaat aatatgaact tgaataaagt 600

ttaccagacc tattttcgcg tagtatgatt aatgtctcat acagagcaga ccatgtagca 660

tgttatattt ctctcactca acgatgcgcg ttaatttgat tcagtcgtaa cgtacgtgat 720

gatcttagta gtacaaacag taccgtacgt gttgcacttg ctagctagag tgccgtgcac 780

tttggcctat gttacggtgt ggcgcacact ctgacgcgtt tgtctcaccg tgcaaaacgg 840

cggatgggag ctagtgtgca cgtacaccgg cctgtccagc accaagcacg tatacgtaca 900

agtaaaaagt cgaaccaagc aagacagcaa caaaaccgtt gctgtttgag gccgccacga 960

ccaaacaacg tcaaaaacac cggaattcca cgagccggac aagcaactgc tcgattttat 1020

cccgtcgtgc acgaacgcat gctcgcgcgc ggctaacggt gcatgatgcg tgcgcgcgtc 1080

gtccggtttt ccaagcgagc acgactggtc gacgactggc cagtggtggc catcgctagc 1140

tagcgattga gtcgtcgtcg tcgtatgtgc aaattgtgca tgcgtggttg cgaattaggc 1200

ttgaccagac tgtgacaccg tcccgcgcac gttcatccag ttggcttatt taaagcatgt 1260

acaatattag actataaacc agctataaac atattttaag aagataaaag aaaaaaataa 1320

gagcagcggg ctacagattt gtaaccacct acagcaaaga ctttaagatg catgtgtgta 1380

taaatctatg acaggtggga ccagacgtta ataatataat actccctccg tttcagctta 1440

taagacgttt tgactttgat agaagtcaaa ttatttcaag tttaactaag tttataatat 1500

ttataatact aaattagttt catcaaatca aattgaatat atttttataa taaatttgtc 1560

ttggttaaaa atggtactac ttttttttta caaacttaat taaatttaaa gcagtttgat 1620

tttgactaaa gtcaaaacgt cttataactt gaaacggagg aagtaaatgt ttatagataa 1680

ctattaatat tatatgaatt ggctattaaa ttgactataa atgatttaga gccaatagtg 1740

ggctaaactt gctcttagcg ttaatttagt tgggttggct gcgtagtgcg gtggcggaca 1800

cttggtccat cggtagtgga gtactactgg tggtgtggaa attggaaatc gatcagcaag 1860

ctgctggagc tagtgtcatg gatgtgagaa gaacgtgtga tgtaccgaac tggataatgc 1920

tacggacttg ttgcatgcct aaatctctcc atataaatag agagtgatcg tgactagaga 1980

tacttgcagc agctgcaaaa taagcgaaga tgactacgca aggatt 2026

<210> 2

<211> 28

<212> DNA

<213> 正向引物

<400> 2:

ctgcagacgt ctacccctac ttcgccta 28

<210> 3

<211> 28

<212> DNA

<213> 反向引物

<400> 3:

ggatccaatc cttgcgtagt catcttcg 28

Claims (9)

1.一种植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1，其特征在于，所述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子包含SEQ ID No:1所示的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1，其特征在于，所述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子的DNA序列与SEQ ID No:1所示的DNA序列有至少80％同源性；

或者，所述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1为在SEQ ID No:1所示的DNA序列中添加、取代、插入或缺失一个或一个以上核苷酸生成的突变体或等位基因或衍生物；

或者，所述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1具有与SEQ ID No:1所示的DNA序列杂交的产物。

3.根据权利要求1所述的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1，其特征在于，所述启动子来自日本晴水稻，分离所采用的扩增引物包括第一引物和第二引物。

4.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒包含权利要求1-2中任意一项所述的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1。

5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求1-2中任意一项所述的植物冷诱导表达启动子PosMeJ1，在所述重组表达载体中，所述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1连接于载体中待表达的基因序列的上游。

6.一种根据权利要求1-2中任意一项所述的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1在培育转基因植物中的应用，其特征在于，所述应用包括：将根据权利要求1-2中任意一项所述的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1连接于载体中待表达的基因序列上游，从而构建重组表达载体；将所述重组表达载体转化到植物细胞、组织或器官中进行培育。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用用于改良植物生长特性，所述植物为单子叶植物：水稻、小麦、玉米、大麦、高粱或燕麦。

8.一种获取权利要求1中所述的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1的方法，其特征在于，所述方法包括：

获取日本晴水稻的DNA作为模板；

构建第一引物和第二引物；

利用所述第一引物和第二引物以所述日本晴水稻的DNA作为模板，进行PCR扩增，所采用反应体系为：

。

9.一种增强植物根部生长能力的方法，其特征在于，所述方法包括：将权利要求1中所述的植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1连接至根部生长增强基因，构成重组载体，将所述重组载体导入到目标植株中，当所述目标植株中或其所处环境中植物茉莉酸甲酯成分增高时，所述植物茉莉酸甲酯诱导表达启动子PosMeJ1诱导所述根部生长增强基因大量表达，以促进根部生长。