CN107253872B - 一种用于栽培牛樟芝子实体的培养基及其培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种栽培牛樟芝子实体的方法，所述方法包括获取原种，制备液体菌种，制备栽培培养基，接种，发菌，子实体发育管理等步骤，在制备栽培培养基时，将柞木树制成直径20cm，长20cm的木桩后，放在水中完全浸没浸泡30天，浸泡过程中加入木质素、葡萄糖、玉米粉%、磷酸二氢钾等营养物质，在浸泡过程中增加木桩表层的营养物质和微量元素，改良PH，利于菌丝在初期营养生长阶段快速生长，减少杂菌的感染。
Description
技术领域
本发明涉及食药用菌技术领域，尤其涉及一种用于栽培牛樟芝子实体的培养基及其培养方法。
背景技术
牛樟芝属于非褶菌目、多孔菌科、薄孔菌属、多年生蕈菌类，拉丁名为Antrodiacamphorata，是1990年才被生化界发表的新种。因生长在台湾地区特有保护类植物牛樟树上而得名，是珍贵稀有药用真菌。牛樟芝子实体在早期是台湾地区原住民族用来治疗因饮酒过度所引致的肝损伤、解宿醉的珍宝，现在大量应用于保肝护肝以及抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。天然牛樟芝因仅生长于台湾地区特有树种牛樟老树的中空树洞与其段木上，而目前牛樟树仅台湾地区地区较多，且属于世界一级保护树种，野生资源非常稀少价格及其昂贵，用牛樟木生产牛樟芝不是未来发展方向。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种用于栽培牛樟芝子实体的培养基及其培养方法，提高牛樟芝子实体的生产量。
本发明是通过如下技术方案实现的，提供一种栽培牛樟芝子实体的方法，所述方法包括如下步骤：
S01：获取菌种：购买牛樟芝菌种，并保存于PDA斜面培养基上。
S02：制备液体菌种：将150ml液体种子培养基加入至500ml的三角瓶中，然后接入所述步骤S01中获得的菌种，旋转式摇床，转速160r/min，在温度23～27℃的黑暗条件下培养10～15天，获得液体牛樟芝菌种。
S02：制备栽培培养基：将柞木树制成直径20cm，长20cm的木桩，放在水中完全浸没浸泡30天，浸泡过程中加入木质素2%、葡萄糖1%、玉米粉0.5%、磷酸二氢钾1%；浸泡完成后将树皮清理干净装入聚丙烯500*500菌袋中，将菌袋口用直径10cm的塑料管套紧，再用7层无纺布将塑料管管口包紧后封口扎紧，放置于105℃条件下进行灭菌消毒12h，然后在净化车间内冷却。
木桩在水中浸泡时，虽然充分湿润，但木桩中的营养物质会有一定的流失，本发明在浸泡过程中添加木质素等营养物质，增加木桩表层的营养物质和微量元素，改良PH，利于菌丝在初期营养生长阶段快速生长，减少杂菌的侵染。相对于不添加营养物质，菌丝生长时间缩短半个月左右。塑料套管可根据菌袋中牛樟芝生长所需的空气环境做成不同规格的直径，7层无纺布又足以阻隔空气中杂菌进入菌袋造成污染，这种封口方法使菌袋内与外界空气保持畅通，保证了菌丝生长过程中充足的氧气供应和适宜菌丝生长的湿度；有利于菌丝发育。
S03：接种：在净化车间的超净工作台上，将发酵好的液体菌种摇匀，将冷却好的菌袋打开，用液体接种枪接入160～220ml液体牛樟芝菌种，使牛樟芝液体菌种可从柞木木桩的各个段面流下，再将菌袋扎紧。
S04：发菌：将接种好的菌袋放置在控温于20～28℃的净化车间内进行培养，菌丝在柞木木桩表面覆盖长满并深入木质内部生长。
S05：子实体发育管理：将发菌良好的装好木桩的聚丙烯500*500菌袋脱袋，把发好菌的柞木木桩放置于湿度70～90%、温度15～25℃的净化车间进行培养，培养过程中无需光照。
本法提供的方法在净化车间进行，可以实现牛樟芝子实体的规模化栽培。
作为优选，所述步骤S03中，发酵好的液体菌种是将所述步骤S02中获得的液体牛樟芝菌种接入灭菌并冷却后的发酵罐一次发酵培养基上，在发酵罐内保持恒温24～28℃，通入无菌空气培养7～10天获得。
作为优选，所述发酵罐一次发酵培养基包括如下质量分数的组分：麸皮：5%，玉米粉：5%，麦粒粉：5%，葡萄糖：1%，KH2P04：0.1%，MgS04：0.1%，蛋白胨：0.1%，余量为水。
玉米粉既是氮源，又是碳源，为培养基提供较为全面的营养。硫酸镁能激发酶活性，提高菌丝活力。蛋白胨作为速效氮源，满足菌种快速萌发的需要。磷酸二氢钾提供微量元素，并且起到缓冲PH值的作用。
作为优选，所述步骤S02中，所述液体种子培养基包括：胡萝卜200g，葡萄糖20g，水1000ml。
本发明实施例提供的技术方案可以包含以下有益效果：
（1）野生牛樟芝原有宿主牛樟树是保护品种、资源匮乏、价格极其昂贵，本发明采用柞木培育出的牛樟芝，在形态外观上和三萜类含量上，基本与牛樟木培育的牛樟芝相近。同时相比于其他木材，柞木又具备不易受杂菌感染、不招虫害的特性，更关键的是柞木不含农药残留，有效的降低了污染率，提高产品的成品率及优质率。
（2）以柞木栽培牛樟芝子实体的培养周期较牛樟木的培养周期大大缩短，台湾地区野生的牛樟木牛樟芝生长期大致为2～3年，而本发明以柞木栽培牛樟芝子实体的生长期为1～1.5年。相较于野生牛樟芝的生长周期能够如此大幅度的提高，得益于净化车间的环境控制适合于牛樟芝的生长。在牛樟芝菌种发菌阶段净化车间控温于20～28℃之间，在子实体发育生长阶段净化车间控温于15～25℃之间。充分了解牛樟芝的生理特性，科学合理的调整牛樟芝生长发育不同阶段所需的最适生长环境。
（3）以柞木栽培牛樟芝子实体的栽培基制备过程中，本发明采用将菌袋口用直径10cm的塑料管套紧，再用7层无纺布将塑料管管口包紧后封口扎紧。本发明采用的直径10cm塑料管可根据菌袋中牛樟芝生长所需的空气环境做成不同规格的直径，7层无纺布又足以阻隔空气中杂菌进入菌袋造成污染，这种封口方法使菌袋内与外界空气保持畅通，保证了菌丝生长过程中充足的氧气供应和适宜菌丝生长的湿度。以前采用套环塞将装好柞木装的聚丙烯500*500菌袋口封口，套环塞封口使得菌袋内的空气与外界完全隔离，菌丝发育后期会由于袋内氧气不足，二氧化碳浓度过高而停止生长。
（4）目前内地对于牛樟芝的研究开发和利用尚处于起步阶段，除了少数液态发酵工艺成功的研究报告之外，至今尚未见子实体的规模化栽培成功的报道。本发明直接将接种、发菌、子实体管理等关键操作均在净化车间的环境中进行，摆脱了实验室恒温恒湿的环境，在净化车间已取得大批量的试验相关成果，为牛樟芝子实体规模化栽培奠定了基础。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例提供一种栽培牛樟芝子实体的方法，所述方案按照如下步骤进行：
S01：获取菌种：购买牛樟芝菌种，并保存于PDA斜面培养基上；
S02：制备液体菌种：将150ml液体种子培养基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌种，旋转式摇床，转速160r/min，在温度23℃的黑暗条件下培养10天，获得液体牛樟芝菌种；
S03：制备栽培培养基：将柞木树制成直径20cm，长度20cm的木桩，放在水中完全浸没浸泡30天，浸泡过程中加入木质素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氢钾，浸泡完成后将树皮清理干净装入聚丙烯500*500菌袋中，将菌袋口用直径10cm的塑料管套紧，再用7层无纺布将塑料管管口包紧后封口扎紧，放置于105℃的高温高压灭菌罐中进行12h灭菌消毒后在净化车间内冷却；
S04：接种：在净化车间的超净工作台上，将发酵好的液体菌种摇匀，将冷却好的菌袋打开，用液体接种枪接入200ml左右的牛樟芝液体菌种，使牛樟芝液体菌种可从柞木木桩的各个段面流下，再将菌袋扎紧；
S05：发菌：将接种好的菌袋放置在控温于20℃的净化车间内进行培养，菌丝在柞木木桩表面覆盖长满并深入木质内部生长；
S06：子实体发育管理：将发菌良好的装好木桩的聚丙烯500*500菌袋脱袋，把发好菌的柞木木桩放置于湿度70%、温度15℃的净化车间进行培养，至牛樟芝子实体长至1.5～3cm即可采摘，培养过程中无需光照。
实施例2
本实施例提供一种栽培牛樟芝子实体的方法，所述方案按照如下步骤进行：
S01：获取菌种：购买牛樟芝菌种，并保存于PDA斜面培养基上；
S02：制备液体菌种：将150ml液体种子培养基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌种，旋转式摇床，转速160r/min，在温度27℃的黑暗条件下培养15天，获得液体牛樟芝菌种；
S03：制备栽培培养基：将柞木树制成直径20cm，长度20cm的木桩，放在水中完全浸没浸泡30天，浸泡过程中加入木质素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氢钾，浸泡完成后将树皮清理干净装入聚丙烯500*500菌袋中，将菌袋口用直径10cm的塑料管套紧，再用7层无纺布将塑料管管口包紧后封口扎紧，放置于105℃的高温高压灭菌罐中进行12h灭菌消毒后在净化车间内冷却；
S04：接种：在净化车间的超净工作台上，将发酵好的液体菌种摇匀，将冷却好的菌袋打开，用液体接种枪接入200ml左右的牛樟芝液体菌种，使牛樟芝液体菌种可从柞木木桩的各个段面流下，再将菌袋扎紧；
S05：发菌：将接种好的菌袋放置在控温于28℃的净化车间内进行培养，菌丝在柞木木桩表面覆盖长满并深入木质内部生长；
S06子实体发育管理：将发菌良好的装好木桩的聚丙烯500*500菌袋脱袋，把发好菌的柞木木桩放置于湿度90%、温度25℃的净化车间进行培养，至牛樟芝子实体长至1.5～3cm即可采摘，培养过程中无需光照。
实施例3
本实施例提供一种栽培牛樟芝子实体的方法，所述方案按照如下步骤进行：
S01：获取菌种：购买牛樟芝菌种，并保存于PDA斜面培养基上；
S02：制备液体菌种：将150ml液体种子培养基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌种，旋转式摇床，转速160r/min，在温度26℃的黑暗条件下培养12天，获得液体牛樟芝菌种；
S03：制备栽培培养基：将柞木树制成直径20cm，长度20cm的木桩，放在水中完全浸没浸泡30天，浸泡过程中加入木质素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氢钾，浸泡完成后将树皮清理干净装入聚丙烯500*500菌袋中，将菌袋口用直径10cm的塑料管套紧，再用7层无纺布将塑料管管口包紧后封口扎紧，放置于105℃的高温高压灭菌罐中进行12h灭菌消毒后在净化车间内冷却；
S04：接种：在净化车间的超净工作台上，将发酵好的液体菌种摇匀，将冷却好的菌袋打开，用液体接种枪接入200ml左右的牛樟芝液体菌种，使牛樟芝液体菌种可从柞木木桩的各个段面流下，再将菌袋扎紧；
S05：发菌：将接种好的菌袋放置在控温于24℃的净化车间内进行培养，菌丝在柞木木桩表面覆盖长满并深入木质内部生长；
S06：子实体发育管理：将发菌良好的装好木桩的聚丙烯500*500菌袋脱袋，把发好菌的柞木木桩放置于湿度80%、温度20℃的净化车间进行培养至牛樟芝子实体长至1.5～3cm即可采摘，培养过程中无需光照。
实施例4
本实施例提供一种栽培牛樟芝子实体的方法，所述方案按照如下步骤进行：
S01：获取菌种：购买牛樟芝菌种，并保存于PDA斜面培养基上；
S02：制备液体菌种：将150ml液体种子培养基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌种，旋转式摇床，转速160r/min，在温度26℃的黑暗条件下培养13天，获得液体牛樟芝菌种；
S03：制备栽培培养基：将柞木树制成直径20cm，长度20cm的木桩，放在水中完全浸没浸泡30天，浸泡过程中加入木质素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氢钾，浸泡完成后将树皮清理干净装入聚丙烯500*500菌袋中，将菌袋口用直径10cm的塑料管套紧，再用7层无纺布将塑料管管口包紧后封口扎紧，放置于105℃的高温高压灭菌罐中进行12h灭菌消毒后在净化车间内冷却；
S04：接种：在净化车间的超净工作台上，将发酵好的液体菌种摇匀，将冷却好的菌袋打开，用液体接种枪接入200ml左右的牛樟芝液体菌种，使牛樟芝液体菌种可从柞木木桩的各个段面流下，再将菌袋扎紧；
S05：发菌：将接种好的菌袋放置在控温于25℃的净化车间内进行培养，菌丝在柞木木桩表面覆盖长满并深入木质内部生长；
S06：子实体发育管理：将发菌良好的装好木桩的聚丙烯500*500菌袋脱袋，把发好菌的柞木木桩放置于湿度75%、温度22℃的净化车间进行培养至牛樟芝子实体长至1.5～3cm即可采摘，培养过程中无需光照。
将上述实施例中栽培得到的牛樟芝子实体与台湾地区野生的牛樟木上生长的牛樟芝相比，其外观形态基本相同，三萜类含量和生长期对比如下表1所示：
表1：各实施例生长的牛樟芝子实体对比
上述表1中，对比例1是指台湾地区野生的牛樟木上生长的牛樟芝，由表1可知，本发明实施例1至实施例4制备得到的牛樟芝三萜类含量在15～40%之间，相比于台湾地区野生的牛樟芝相差无几，从原种到长成1.5～3cm的牛樟芝子实体的生长期在1.0～1.5年之间，相比于台湾地区野生的牛樟芝生长期缩短了约一半。
当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例仅用于说明本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。
Claims (2)
1.一种栽培牛樟芝子实体的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
S01：获取菌种：购买牛樟芝菌种，并保存于PDA斜面培养基上；
S02：制备液体菌种：将150ml液体种子培养基加入至500ml的三角瓶中，然后接入活化的牛樟芝菌种，旋转式摇床，转速160r/min，在温度26℃的黑暗条件下培养13天，获得液体牛樟芝菌种；
S03：制备栽培培养基：将柞木树制成直径20cm，长度20cm的木桩，放在水中完全浸没浸泡30天，浸泡过程中加入木质素、葡萄糖、玉米粉和磷酸二氢钾，浸泡完成后将树皮清理干净装入聚丙烯500*500菌袋中，将菌袋口用直径10cm的塑料管套紧，再用7层无纺布将塑料管管口包紧后封口扎紧，放置于105℃的高温高压灭菌罐中进行12h灭菌消毒后在净化车间内冷却；
S04：接种：在净化车间的超净工作台上，将所述步骤S02中获得的液体牛樟芝菌种接入灭菌并冷却后的发酵罐一次发酵培养基上，在发酵罐内保持恒温24～28℃，通入无菌空气培养7～10天获得发酵液体菌种；将发酵好的液体菌种摇匀，将冷却好的菌袋打开，用液体接种枪接入200ml左右的牛樟芝液体菌种，使牛樟芝液体菌种可从柞木木桩的各个段面流下，再将菌袋扎紧；所述发酵罐一次发酵培养基包括如下质量分数的组分：麸皮：5％，玉米粉：5％.麦粒粉：5％.葡萄糖：1％，KH2P04：0.1％，MgS04：0.1％，蛋白胨：0.1％，余量为水；
S05：发菌：将接种好的菌袋放置在控温于25℃的净化车间内进行培养，菌丝在柞木木桩表面覆盖长满并深入木质内部生长；
S06：子实体发育管理：将发菌良好的装好木桩的聚丙烯500*500菌袋脱袋，把发好菌的柞木木桩放置于湿度75％、温度22℃的净化车间进行培养至牛樟芝子实体长至1.5～3cm即可采摘，培养过程中无需光照。
2.根据权利要求1所述的栽培牛樟芝子实体的方法，其特征在于，所述步骤S02中，所述液体种子培养基包括：胡萝卜200g，葡萄糖20g，水1000ml。
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Denomination of invention: A kind of culture medium and method for cultivating fruiting body of Antrodia camphorata Effective date of registration: 20210628 Granted publication date: 20201229 Pledgee: Shandong Rushan rural commercial bank Limited by Share Ltd. Pledgor: WEIHAI XINBAO FOOD Co.,Ltd. Registration number: Y2021980005333 |
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