CN107236797A - 一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用 - Google Patents

一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107236797A
CN107236797A CN201710421395.6A CN201710421395A CN107236797A CN 107236797 A CN107236797 A CN 107236797A CN 201710421395 A CN201710421395 A CN 201710421395A CN 107236797 A CN107236797 A CN 107236797A
Authority
CN
China
Prior art keywords
radix codonopsis
primer pair
primer
seq
chinese herbs
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201710421395.6A
Other languages
English (en)
Inventor
李建华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Li Liangji Health Industry Co Ltd
Original Assignee
Suzhou Li Liangji Health Industry Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Li Liangji Health Industry Co Ltd filed Critical Suzhou Li Liangji Health Industry Co Ltd
Priority to CN201710421395.6A priority Critical patent/CN107236797A/zh
Publication of CN107236797A publication Critical patent/CN107236797A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用，所述引物对及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。(1)本发明所述引物对准确性高、通用性好，可数字化，可重复利用；(2)本发明所述引物对的应用中样品处理简单，实用性好。

Description

一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用
技术领域
本发明属于分子生物学领域，涉及一种采用分子生物学手段鉴定中药的方法，具体为一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用。
背景技术
党参为桔梗科植物党参、素花党参或川党参的干燥根，是我国常用的药食两用中药。具有健脾益肺，养血生津的功效。现代药理研究表明党参具有抗肿瘤作用，增强免疫力，延缓衰老的作用，对胃粘膜损伤具有保护作用，能改善记忆障碍，调节血糖的作用等。近年来，由于党参在治疗冠心病、高血脂症、低血压和功能性子宫出血等病症方面取得了新的进展，并将党参用于保健食品的研制与开发，其用量迅速增长。我国是党参的主要产区和分布中心，全世界有党参属植物40余种，我国有39种之多，党参同属近源植物地上部分外观相近，尽管利用传统鉴别方法可将各个种加以区分，但鉴定需要很丰富的经验，同时也存在一定的主观性。
由于受经济利益的驱使和物种鉴别水平的限制，目前党参药材的地方习用品较多，如同属的轮叶党参、脉花党参、管花党参、新疆党参等，还有桔梗科金钱豹属金钱豹(土党参)、伞形科防风属防风等与党参药材性状相似的伪品入药，严重影响了党参药材的质量和临床用药安全，因此党参药材的基原鉴定十分重要，迫切需要快速准确鉴定党参药材的有效方法。
发明内容
本发明的目的是：为了克服现有技术的缺陷，获得一种稳定、准确的鉴别党参及其混伪品，以达到保障党参临床疗效的目的，本发明提供了一种用于鉴定党参的引物对及其应用。
技术方案：一种用于鉴定中药党参的引物对，所述引物对及其序列为：P1，SEQ IDNO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
优选的，所述引物对P1、P2和P3的上游引物的5，端加上特异性的GC发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为SEQ ID NO.7。
表1引物对及发卡结构序列
所述引物对在制备鉴定中药党参试剂盒中的应用。
优选的，所述试剂盒的组分包括：引物对、dNTP、DNA聚合酶、LC Green、反应缓冲液。
优选的，所述试剂盒鉴定中药党参的步骤包括：
(1)提取党参样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释100～1000倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释10～100倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
优选的，所述党参样品的基因组DNA的提取方法是试剂盒法或改良CTAB法。
优选的，所述PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
有益效果：(1)本发明所述引物对准确性高、通用性好，可数字化，可重复利用；(2)本发明所述引物对的应用中样品处理简单，实用性好。
附图说明
图1是实施例1～3PCR鉴定结果电泳图；
其中M为分子量为2000的Maker；B1为实施例1PCR产物鉴定结果；B2为实施例2PCR产物鉴定结果；B3为实施例3PCR产物鉴定结果。
具体实施方式
实施例1
一种用于鉴定中药党参的引物对，所述引物对及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
所述引物对P1、P2和P3的上游引物的5，端加上特异性的GC发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为SEQ ID NO.7。
所述引物对在制备鉴定中药党参试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：引物对、dNTP、DNA聚合酶、LC Green、反应缓冲液。
所述试剂盒鉴定中药党参的步骤包括：
(1)提取党参样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释1000倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释10倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述党参样品的基因组DNA的提取方法是试剂盒法或改良CTAB法。
所述PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
实施例2
一种用于鉴定中药党参的引物对，所述引物对及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
所述引物对P1、P2和P3的上游引物的5，端加上特异性的GC发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为SEQ ID NO.7。
所述引物对在制备鉴定中药党参试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：引物对、dNTP、DNA聚合酶、LC Green、反应缓冲液。
所述试剂盒鉴定中药党参的步骤包括：
(1)提取党参样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释100倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释100倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述党参样品的基因组DNA的提取方法是试剂盒法或改良CTAB法。
所述PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
实施例3
一种用于鉴定中药党参的引物对，所述引物对及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
所述引物对P1、P2和P3的上游引物的5，端加上特异性的GC发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为SEQ ID NO.7。
所述引物对在制备鉴定中药党参试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：引物对、dNTP、DNA聚合酶、LC Green、反应缓冲液。
所述试剂盒鉴定中药党参的步骤包括：
(1)提取党参样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释550倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释55倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述党参样品的基因组DNA的提取方法是试剂盒法或改良CTAB法。
所述PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
如图1所示，将实施例1～3的扩增产物进行电泳检测，条带清晰可见，产物单一。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州市李良济健康产业有限公司
<120> 一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用
<130>
<160> 7
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ggaagtaaaa gtcgtaavaa gg 22
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tcctccgctt attgatatgc 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
tttcattcag ggaaggatcc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gcgtaacgga aaaagaccta 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ttctcaaggg gacccgcatc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
gccaagtcta atgcgttctc 20
<210> 7
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
cgcccgccgc gcgcggcggg cggggcgggg gcacgggggg 40

Claims (7)

1.一种用于鉴定中药党参的引物对，其特征在于，所述引物对及其序列为：P1，SEQ IDNO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
2.根据权利要求1所述的一种用于鉴定中药党参的引物对，其特征在于，所述引物对P1、P2和P3的上游引物的5，端加上特异性的GC发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为SEQ ID NO.7。
3.权利要求1或2所述引物对在制备鉴定中药党参试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒的组分包括：引物对、dNTP、DNA聚合酶、LC Green、反应缓冲液。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒鉴定中药党参的步骤包括：
(1)提取党参样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释100～1000倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释10～100倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述党参样品的基因组DNA的提取方法是试剂盒法或改良CTAB法。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
CN201710421395.6A 2017-06-07 2017-06-07 一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用 Withdrawn CN107236797A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710421395.6A CN107236797A (zh) 2017-06-07 2017-06-07 一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710421395.6A CN107236797A (zh) 2017-06-07 2017-06-07 一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107236797A true CN107236797A (zh) 2017-10-10

Family

ID=59986143

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710421395.6A Withdrawn CN107236797A (zh) 2017-06-07 2017-06-07 一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107236797A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116103431A (zh) * 2022-12-08 2023-05-12 广东一方制药有限公司 药用党参的ssr分子标记及其应用、药用党参药材的鉴别方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101182572A (zh) * 2007-11-15 2008-05-21 江苏省中国科学院植物研究所 不同产地明党参植物的分子鉴别方法
CN101434997A (zh) * 2008-12-23 2009-05-20 华中农业大学 一种油菜菌核病的早期快速分子检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101182572A (zh) * 2007-11-15 2008-05-21 江苏省中国科学院植物研究所 不同产地明党参植物的分子鉴别方法
CN101434997A (zh) * 2008-12-23 2009-05-20 华中农业大学 一种油菜菌核病的早期快速分子检测方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116103431A (zh) * 2022-12-08 2023-05-12 广东一方制药有限公司 药用党参的ssr分子标记及其应用、药用党参药材的鉴别方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103509856B (zh) 用于快速检测猕猴桃软腐病原菌Botryosphaeria dothidea的特异性引物及其检测方法
CN108118096A (zh) 一种牦牛和黄牛肉源性鉴别方法及其鉴别试剂盒
CN107090502B (zh) 一种用于冬虫夏草真伪鉴定的二重pcr检测方法
CN102086471B (zh) 冬虫夏草的鉴别及检测方法和试剂盒
CN102605092B (zh) 柑橘黄龙病的lamp快速检测方法
CN107557434A (zh) 薄壳山核桃品种Van Deman的特征序列、标记引物及鉴定方法
CN104611414B (zh) 利用ssr引物鉴定石榴品种的方法与应用
CN108660246A (zh) 一组马家柚InDel分子标记及其在柑橘品种种苗早期区分粗皮马家柚中的应用
CN105002272B (zh) 一种rapd标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法
CN110564885B (zh) 一组用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的特异性分子标记及鉴别方法和应用
CN107236797A (zh) 一种用于鉴定中药党参的引物对及其应用
CN107164488A (zh) 一种用于鉴定白肉灵芝的引物对及其应用
CN102286621B (zh) 鉴别广东虫草的特征性核苷酸序列、核酸分子探针和方法
CN104342495B (zh) 鉴别分枝虫草的特征性核苷酸序列、核酸分子探针、试剂盒和方法
CN112143827B (zh) 用于鉴别甘草不同产地的ssr分子标记引物及方法与应用
CN103289997B (zh) 纯白色真姬菇Finc-W-62菌种的分子标记及其获得方法与应用
CN105274245B (zh) 一种鉴定多花黄精的方法及其专用引物对
CN107164486A (zh) 一种用于鉴定中药川贝母的引物对及其应用
CN107130039A (zh) 一种用于鉴定凉山虫草的引物对及其应用
CN104894110A (zh) 构建芥菜ssr遗传图谱的引物组及遗传图谱的构建方法
CN102864241B (zh) 一种鉴别奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼及其杂交鱼的方法
CN106868147A (zh) 一种香蕉叶斑病菌分子检测引物及其快速检测方法
CN106434910A (zh) 一种冬虫夏草鉴别用引物、扩增体系及鉴别方法
CN108148913A (zh) 一种快速鉴别日本条鳎和缨鳞条鳎的分子生物学方法
CN107164490A (zh) 一种用于鉴定浙贝母的引物对及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20171010