CN107232468A - 一种复合型椰枣发酵植物饮料及其生产方法 - Google Patents

一种复合型椰枣发酵植物饮料及其生产方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种复合型椰枣发酵植物饮料及其生产方法，属于植物饮料技术领域。一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣30~50份、榧子20~30份、诃子20~30份、金樱子10~20份、菊苣10~20份、黑胡椒1~8份。本发明复合型椰枣发酵植物饮料所用原料椰枣补中益气，为君药，榧子润肺燥、诃子敛肺下气，合为臣药，金樱子固精、菊苣健胃消食、黑胡椒暖肠胃止痛，合为佐使药，诸药合用，补肺固表，益气养阴，扶助人体的正气，增强人体免疫力。

Description

一种复合型椰枣发酵植物饮料及其生产方法
技术领域
本发明属于植物饮料技术领域，具体涉及一种复合型椰枣发酵植物饮料及其生产方法。
背景技术
椰枣（datepalm），又名海枣、伊拉克枣、波斯枣，是椰枣树的果实，含有对人体有用的多种维生素和天然糖分，具有较高的营养价值，且具有补中益气、止咳润肺、化痰平喘的功效。原产西亚和北非。福建、广东、广西、云南等省区有引种栽培，在云南元谋露地栽培能结实。椰枣是干热地区重要果树作物之一，且有大面积栽培，尤以伊拉克为多，占世界的1/3。椰枣一般被誉为最有营养的干果，它被称为沙漠面包，椰枣的三分之二为糖分。古埃及人视椰枣的出产为丰收的象征，而罗马和希腊人则使用椰枣庆祝胜利和迎接凯旋的将士。但是，椰枣加工产业起步晚，现有产品种类单一，且技术含量不高，严重影响了椰枣产业的可持续性发展。
公开号为CN 105420033 A的专利提供了一种椰枣玉竹气泡酒的酿制方法，采用新鲜椰枣和玉竹为原料，通过原料预处理、混合、发酵、装瓶、二次发酵、转瓶、除渣、包装，制备成果酒；添加了白花龙胆、白僵蚕、葶苈子、桃儿七、猫屎瓜、螃蟹甲、黄芪、小檗皮、胡桃仁、山药、红冬蛇菰、阿胶、甘草等中材药成分，充分利用了椰枣和玉竹的营养价值，所用原料与所添加中药成分协同增效，使得本发明的果酒不仅具有原料的既有营养成份，更具有润肺化痰、止咳生津的保健功效，有利于人体健康，而且制备方法科学、易行，可操作性强；成品果酒因通过了瓶中二次发酵，致使酒体含有大量二氧化碳，色泽莹润，并具丰富细腻的泡沫，酒体口感清新、绵甜，口味幽香，酒香果香并存，具有显著的经济价值。该发明存在如下问题：原料种类多；酿制过程采用多种酶制剂，价格贵；具体效果不明确；酿制时间长。
公开号为105462750A的专利提供了一种委陵菜风味椰枣果酒的酿制方法，以委陵菜、椰枣为原料，同时添加葶苈子、猫屎瓜、螃蟹甲、胡桃仁、甘草、桃儿七、白僵蚕、黄芪、白花龙胆、小檗皮、红冬蛇菰、阿胶、山药，制作出一种委陵菜风味椰枣果酒；其充分利用委陵菜、椰枣的营养价值，与中药相互配伍，协同增效，具有化痰止咳、清热解毒的功效。成品果酒呈金棕色或浅棕色，成品口感醇厚、清新、绵甜，口味幽香，酒香果香并存，长期食用可明显改善长年吸烟导致的咳嗽痰多人群的不适；其制作工艺简单，易于实现，具有显著的经济价值，可以进行规模化生产。该发明存在如下问题：原料种类多，价格贵，适应症少。
现代社会竞争激烈，随着人们生活节奏的日益加快，来自生活、工作、学习等方面的压力和应激刺激日益强烈而持久，人们极易出现倦怠、疲惫，肌肉和精神的疲劳，工作欲望减退及工作效率下降等各种各样的疲劳症状，从而导致免疫功能低下，易受外邪入侵而易感染感冒等疾病，它不但使人们的生活质量降低，也制约了经济的发展。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是提供一种复合型椰枣发酵植物饮料，口感纯正，温和不刺激，增强机体免疫力。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣30~50份、榧子20~30份、诃子20~30份、金樱子10~20份、菊苣10~20份、黑胡椒1~8份。
优选地，椰枣40份、榧子25份、诃子25份、金樱子15份、菊苣15份、黑胡椒4份。
优选地，椰枣30份、榧子20份、诃子20份、金樱子10份、菊苣10份、黑胡椒1份。
优选地，椰枣50份、榧子30份、诃子30份、金樱子20份、菊苣20份、黑胡椒8份。
优选地，所述微生物为醋酸杆菌、酵母菌和芽胞杆菌。
一种复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，包括以下步骤：
步骤S1：分别取椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：选择性加入无菌水和/或葡萄糖，保持所述一次原料液的固体物质含量在30%以下，总糖含量在20%以上，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，冷却后，接入芽胞杆菌，恒温振荡发酵24~32小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，恒温发酵18~24小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，冷却，分装，即得。
优选地，步骤S1中所述冷冻的温度为-4℃~-12℃。
优选地，步骤S3中所述一次高温杀菌的温度为105~110℃，时间为18~20分钟。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1）本发明复合型椰枣发酵植物饮料所用原料椰枣补中益气，为君药，榧子润肺燥、诃子敛肺下气，合为臣药，金樱子固精、菊苣健胃消食、黑胡椒暖肠胃止痛，合为佐使药，诸药合用，补肺固表，益气养阴，扶助人体的正气，增强人体免疫力。本发明各原料药材的药理如下：
椰枣：为椰枣树的新鲜果实，即鲜椰枣，性甘、温，无毒。功用：补中益气，止咳润肺，化痰平喘。椰枣含蛋白质、脂肪、多糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、氨基酸，类胡萝卜素，以及少量维生素B1、维生素B2、维生素C等。果实为浆果，长圆形或长圆状椭圆形，似枣子，长3.5-7厘米，成熟时深橙黄色，果肉肥厚；
榧子：为红豆杉科常绿乔木香榧除去外种皮的新鲜成熟种子。野生或栽培。性味甘，平。归肺、胃、大肠经。甘香质润，性平不偏，既杀虫消积，又润肠燥而通便，还润肺燥而止咳；
诃子：为使君子科植物落叶乔木诃子树的新鲜成熟果实，去核取肉用。性味：酸、苦、平。入肺、大肠经。功能：敛肺，涩肠，下气；
金樱子：别名糖罐子、刺头、倒挂金钩、黄茶瓶，为蔷薇科植物金樱子的干燥成熟果实，果实成熟变红时采收，干燥，除去毛刺。性味酸、甘、涩，平。归肾、膀胱、大肠经。功能主治固精缩尿，涩肠止泻；
菊苣：为菊科植物菊苣的地上部分。秋季采割，除去杂质，鲜用。性味微苦、咸，凉。功能主治清肝利胆，健胃消食，利尿消肿；
黑胡椒：为胡椒科植物胡椒的新鲜成熟果实，除去外面黑皮食用。性味：辛、热。入胃、大肠经。功能：除阴寒、暖肠胃止痛，下气消痰。
2)本发明通过反复试验发现采用醋酸杆菌、酵母菌和芽胞杆菌为发酵微生物，并且以芽胞杆菌为一阶段发酵微生物，以醋酸杆菌、酵母菌为二阶段发酵微生物，通过工艺配合和参数优化，制得饮料产品口感纯正，温和不刺激，在室温及冷藏条件下稳定性好，对原料的功效起到明显的强化和辅助作用。经过动物实验发现，本发明复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠具有免疫增强作用。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步清楚阐述本发明的内容，但本发明的保护内容不仅仅局限于下面的实施例。在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员来说显而易见的是，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。
本发明提供了一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣30~50份、榧子20~30份、诃子20~30份、金樱子10~20份、菊苣10~20份、黑胡椒1~8份。
其中，椰枣：为椰枣树的新鲜果实。榧子：为红豆杉科常绿乔木香榧除去外种皮的新鲜成熟种子。诃子：为使君子科植物落叶乔木诃子树的新鲜成熟果实，去核取肉用。金樱子：为蔷薇科植物金樱子的干燥成熟果实，除去毛刺用。菊苣：为菊科植物菊苣的地上部分，除去杂质，鲜用。黑胡椒：为胡椒科植物胡椒的新鲜成熟果实，除去外面黑皮用。
本发明还提供了上述复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，包括以下步骤：
步骤S1：分别取椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：选择性加入无菌水和/或葡萄糖，保持所述一次原料液的固体物质含量在20%以下，总糖含量在15%以上，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，冷却后，接入芽胞杆菌，恒温振荡发酵24~32小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，恒温发酵18~24小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，冷却，分装，即得。
其中，步骤S1中所述冷冻的温度为-4℃~-12℃，优选为-4℃~-8℃；将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎具体是将冷冻结束的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒立即置于粉碎机中充分粉碎，优选在真空条件下或惰性气体保护中进行粉碎。
步骤S2中所述一次原料液的固体物质含量采用固液分离的方法进行测定，等于固液分离收集的固体物质质量/一次原料液的质量×100%；采用无菌水调整使得所述一次原料液的固体物质含量在20%以下，以免固体物质含量过大，影响微生物发酵品质。一次原料液的总糖含量采用菲林试剂滴定法进行测定；采用葡萄糖调整总糖含量（质量百分含量）在15%以上，若一次原料液的总糖含量经测定在15%以上，则无需添加葡萄糖。一次原料液采用柠檬酸或柠檬酸钠进行pH调节。
步骤S3中所述一次高温杀菌的温度为105~110℃，时间为18~20分钟；优选为105℃，20分钟；在一次高温杀菌过程中不仅杀灭了二次原料液中的有害微生物，而且在此高温过程中部分原料可能发生熟化和其他反应。一次高温杀菌结束后，置于无菌环境中冷却，冷却至温度不高于微生物发酵温度。所述芽孢杆菌可选择枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌中的一种或两种以上的组合物，优选为复合芽孢杆菌。本发明下述实施例中所用芽孢杆菌均由上海阳农生物科技有限公司提供，主要成分为枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌等，有效活菌数≥100亿/ml。所述芽胞杆菌的接种量为2.0~2.5%，优选为2.3%。所述恒温振荡发酵具体可在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为30~35℃，摇床转速为150~200rpm，发酵时间为24~32小时。本发明接种量是指移入种子液的体积与接种后培养液体积的比值。
步骤S4中一次发酵液无需处理，在无菌环境下接种酵母菌和醋酸杆菌。酵母菌和醋酸杆菌均可通过市场购买获得，本领域技术人员根据常规技术知识可进行扩大培养以提高发酵效率。所述酵母菌的浓度为0.5×106～1×106CFU/ml，所述醋酸杆菌(Acetobacter aceti)的浓度为1×106～3×106CFU/ml，所述酵母菌的接种量为1.0~1.5%，所述醋酸杆菌的接种量0.3~0.5%。恒温发酵的温度为28~32℃，时间为18~24小时。
步骤S5中所述固液分离可采用过滤或抽滤实现；澄清剂选择ZTC天然澄清剂和101系列澄清剂，优选为ZTC-Ⅲ型澄清剂，可通过市场购买获得。本发明中澄清剂的加入质量是二次发酵液进行固液分离后所收集液体体积的0.1~0.3%。
步骤S6中二次高温杀菌的温度为105~110℃，时间为10~20s；冷却后进行分装。
本发明可选择在步骤S5与步骤S6之间增加调配步骤，具体是：在所述澄清液中加入调配剂进行调配，主要是调节产品的口感和营养，调配剂可以是糖、酸、营养剂等，糖可选择白砂糖、麦芽糖、蔗糖等，酸可选择柠檬酸等，营养剂可选择维生素、微量元素等。经过调配后，本发明复合型椰枣发酵植物饮料可适用于某种或某些营养元素缺乏的人群。
实施例1
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣40份、榧子25份、诃子25份、金樱子15份、菊苣15份、黑胡椒4份。
一种复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，包括以下步骤：
步骤S1：分别取上述重量份的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，所述冷冻的温度为-4℃，时间为24小时，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：测定一次原料液的固体物质含量和总糖含量，加入无菌水和葡萄糖，调节所述一次原料液的固体物质含量为30.0%，总糖含量为20.0%，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，所述一次高温杀菌的温度为105℃，时间为20分钟，冷却后，接入芽胞杆菌，所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌，有效活菌数为100亿/ml，接种量为2.3%，在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为32℃，摇床转速为180rpm，发酵时间为28小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，所述酵母菌的浓度为0.8×106CFU/ml，接种量为1.3%，所述醋酸杆菌的浓度为2×106CFU/ml，接种量0.4%，恒温发酵的温度为30℃，时间为20小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入0.2%的ZTC-Ⅲ型澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，所述二次高温杀菌的温度为105℃，时间为15s，冷却，分装，即得。
实施例2
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣30份、榧子20份、诃子20份、金樱子10份、菊苣10份、黑胡椒1份。
一种复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，包括以下步骤：
步骤S1：分别取椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，温度为-8℃，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：测定一次原料液的固体物质含量和总糖含量，加入无菌水和葡萄糖，调节所述一次原料液的固体物质含量为32.5%，总糖含量为24.3%，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，所述一次高温杀菌的温度为110℃，时间为18分钟，冷却后，接入芽胞杆菌，所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌，有效活菌数为105亿/ml，接种量为2.0%，在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为30℃，摇床转速为150rpm，发酵时间为24小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，所述酵母菌的浓度为0.5×106CFU/ml，接种量为1.5%，所述醋酸杆菌的浓度为1×106CFU/ml，接种量0.5%，恒温发酵的温度为28℃，时间为24小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入0.1%的ZTC-Ⅲ型澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，所述二次高温杀菌的温度为110℃，时间为10s，冷却，分装，即得。
实施例3
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣50份、榧子30份、诃子30份、金樱子20份、菊苣20份、黑胡椒8份。
一种复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，包括以下步骤：
步骤S1：分别取椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，温度为-12℃，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：测定一次原料液的固体物质含量和总糖含量，加入无菌水和葡萄糖，调节所述一次原料液的固体物质含量为35.2%，总糖含量为21.2%，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，所述一次高温杀菌的温度为108℃，时间为20分钟，冷却后，接入芽胞杆菌，所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌，有效活菌数为100亿/ml，接种量为2.5%，在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为32℃，摇床转速为200rpm，发酵时间为32小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，所述酵母菌的浓度为1×106CFU/ml，接种量为1.0%，所述醋酸杆菌的浓度为3×106CFU/ml，接种量0.3%，恒温发酵的温度为32℃，时间为18小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入0.28%的ZTC-Ⅲ型澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，所述二次高温杀菌的温度为108℃，时间为20s，冷却，分装，即得。
实施例4
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣35份、榧子23份、诃子23份、金樱子12份、菊苣12份、黑胡椒3份。
一种复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，包括以下步骤：
步骤S1：分别取椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，温度为-6℃，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：测定一次原料液的固体物质含量和总糖含量，加入无菌水和葡萄糖，调节所述一次原料液的固体物质含量为33.1%，总糖含量为25.3%，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，所述一次高温杀菌的温度为105℃，时间为20分钟，冷却后，接入芽胞杆菌，所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌，有效活菌数为110亿/ml，接种量为2.1%，在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为34℃，摇床转速为180rpm，发酵时间为30小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，所述酵母菌的浓度为0.6×106CFU/ml，接种量为1.2%，所述醋酸杆菌的浓度为1.5×106CFU/ml，接种量0.4%，恒温发酵的温度为30℃，时间为20小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入0.30%的101系列澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，所述二次高温杀菌的温度为110℃，时间为10s，冷却，分装，即得。
实施例5
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣45份、榧子28份、诃子28份、金樱子18份、菊苣18份、黑胡椒6份。
一种复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，包括以下步骤：
步骤S1：分别取椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，温度为-5℃，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：测定一次原料液的固体物质含量和总糖含量，加入无菌水和葡萄糖，调节所述一次原料液的固体物质含量为37.3%，总糖含量为28.4%，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，所述一次高温杀菌的温度为105℃，时间为20分钟，冷却后，接入芽胞杆菌，所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌，有效活菌数为100亿/ml，接种量为2.5%，在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为32℃，摇床转速为200rpm，发酵时间为28小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，所述酵母菌的浓度为0.9×106CFU/ml，接种量为1.2%，所述醋酸杆菌的浓度为2.5×106CFU/ml，接种量0.4%，恒温发酵的温度为32℃，时间为20小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入0.21%的101系列澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，所述二次高温杀菌的温度为105℃，时间为15s，冷却，分装，即得。
实施例6
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣32份、榧子21份、诃子21份、金樱子13份、菊苣13份、黑胡椒2份。
本实施例复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1，不再赘述。
实施例7
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣48份、榧子27份、诃子27份、金樱子17份、菊苣17份、黑胡椒7份。
本实施例复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1，不再赘述。
实施例8
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣42份、榧子26份、诃子26份、金樱子16份、菊苣16份、黑胡椒6份。
本实施例复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1，不再赘述。
对比例1
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：榧子28份、诃子28份、金樱子18份、菊苣18份、黑胡椒6份。复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1。
对比例2
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣45份、诃子28份、金樱子18份、菊苣18份、黑胡椒6份。复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1。
对比例3
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣45份、榧子28份、金樱子18份、菊苣18份、黑胡椒6份。复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1。
对比例4
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣45份、榧子28份、诃子28份、菊苣18份、黑胡椒6份。复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1。
对比例5
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣45份、榧子28份、诃子28份、金樱子18份、黑胡椒6份。复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1。
对比例6
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣45份、榧子28份、诃子28份、金樱子18份、菊苣18份。复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1。
对比例7
一种复合型椰枣发酵植物饮料，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣45份。复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法参阅实施例1。
对比例8
一种复合型椰枣发酵植物饮料，原料组成与实施例1相同。
复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，与实施例1不同的是：省略步骤S2。
对比例9
一种复合型椰枣发酵植物饮料，原料组成与实施例1相同。
复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，与实施例1不同的是：一次性接入芽胞杆菌、酵母菌和醋酸杆菌，采用下述步骤替代实施例1中的步骤S3和步骤S4，具体为：
将所述二次原料液进行一次高温杀菌，所述一次高温杀菌的温度为105℃，时间为20分钟，冷却后，接入芽胞杆菌、酵母菌和醋酸杆菌，所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌，有效活菌数为100亿/ml，接种量为2.3%，所述酵母菌的浓度为0.8×106CFU/ml，接种量为1.3%，所述醋酸杆菌的浓度为2×106CFU/ml，接种量为0.4%，在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为30℃，摇床转速为180rpm，发酵时间为48小时，得发酵液。
对比例10
一种复合型椰枣发酵植物饮料，原料组成与实施例1相同。
复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，与实施例1不同的是：改变芽胞杆菌、酵母菌和醋酸杆菌的接入顺序，采用下述步骤替代实施例1中的步骤S3和步骤S4，具体为：
步骤S3’：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，所述一次高温杀菌的温度为105℃，时间为20分钟，冷却后接入酵母菌和醋酸杆菌，所述酵母菌的浓度为0.8×106CFU/ml，接种量为1.3%，所述醋酸杆菌的浓度为2×106CFU/ml，接种量0.4%，恒温发酵的温度为30℃，时间为20小时，得一次发酵液；
步骤S4’：在所述一次发酵液中接入芽胞杆菌，所述芽胞杆菌为复合芽孢杆菌，有效活菌数为100亿/ml，接种量为2.3%，在恒温摇床中进行发酵，发酵温度为32℃，摇床转速为180rpm，发酵时间为28小时，得二次发酵液。
对比例11
一种复合型椰枣发酵植物饮料，原料组成与实施例1相同。
复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，与实施例1不同的是：采用硅藻土作为澄清剂，用下述步骤替代实施例1中的步骤S5，具体为：
将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入0.15%的硅藻土进行静置澄清，过滤得到澄清液。
对比例12
一种复合型椰枣发酵植物饮料，原料组成与实施例1相同。
复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，与实施例1不同的是：不使用澄清剂，用下述步骤替代实施例1中的步骤S5，具体为：
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体。
效果评价
1、本发明感官要求和理化要求符合GBT10789-2015和GB/T 31326-2014 植物饮料的相关规定。
2、取本发明实施例1及对比例1~10制得产品检测增强免疫功能，实验设对照组，实验方法为：
实验动物：BALB/c小鼠，体重18~22g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，SPF级。实验动物房许可证号：SYXK（豫）2012-0005，屏障环境。
将小鼠分为四批，每批140只，每批按体重随机分为14组，每组10只。大、中、小剂量实验组、对比1~10组及空白组，分别灌服实验组植物饮料（0.5g/kg、1.0g/kg、3.0g/kg，0.2mL/10g），对比1~10组（均为3.0g/kg，0.2mL/10g）及同体积蒸馏水。免疫一批进行小鼠碳廓清试验；免疫二批进行迟发型变态反应、抗体生成细胞检测、HC50测定；免疫三批进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验；免疫四批进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞活性测定。
经口给予每日一次，灌胃量为20mL/kg，连续灌胃30天后测定相应的免疫指标。
实验结果：
1）复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠体重的影响
上述实验方法连续喂养30天，每周称一次，记录各批小鼠分别在试验初始、中期和末期的体重。
结果发现， 各组小鼠的初始体重是均衡的；各剂量组小鼠的中期体重及末期体重与空白组比较差异均无显著意义（P＞0.05），说明本试验条件下复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠体重无明显影响。
2) 复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠脏器/体重比值的影响
将小鼠连续灌胃30天，称重后脱臼处死，取脾脏与胸腺，滤纸吸干表面血污称重，计算脾脏/体重比值和胸腺体重比值。
结果发现，各组小鼠的脏器/体重比重比值与空白组比较差异均无显著意义（P＞0.05），说明本试验条件下复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠脏器/体重比值无明显作用。
3）复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠碳廓清试验的影响
小鼠尾静脉注射1：3稀释的印度墨汁，按每10g体重0.1mL计算，待墨汁注入，立即计时；注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并立即将其加到2mL 0.1%碳酸钠溶液中；用半自动生化分析仪在600nm波长处测光密度值，以碳酸钠溶液作空白对照；将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重；计算吞噬指数，结果用方差分析统计。
表1复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠碳廓清能力（吞噬指数a）的作用
组别 吞噬指数a
空白组 5.97±0.53
小剂量实验组 6.35±0.41
中剂量实验组 6.54±0.40
大剂量实验组 7.13±0.42*
对比1组 6.34±0.37
对比2组 6.42±0.43
对比3组 6.31±0.47
对比4组 6.32±0.39
对比5组 6.40±0.50
对比6组 6.35±0.48
对比7组 6.12±0.43
对比8组 6.45±0.51
对比9组 6.43±0.49
对比10组 6.39±0.45
注：*表示P＜0.05。
由表1可知，中剂量实验组和大剂量实验组小鼠碳廓清能力（吞噬指数a）高于空白组，差异有统计学意义（P＜0.05），说明复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠碳廓清能力有增强作用，该项实验结果为阳性。
4）复合型椰枣发酵植物饮料对绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠DTH（足跖增厚法）的影响
取羊血，用生理盐水洗涤3次（2000r/min，10分钟），每只小鼠经腹腔注射2%（v/v，用生理盐水配制）压积SRBC 0.2mL，致敏后4天，测量左右足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值；然后在测量部位皮下注射20%（v/v，用生理盐水配制）压积SRBC 20μL，于注射后24小时测量左右足跖部厚度，以统计前后足跖部厚度的差值来表示DTH的程度。
表2 复合型椰枣发酵植物饮料对绵羊红细胞诱导小鼠DTH的作用
组别 24h足跖肿胀度（mm）
空白组 0.45±0.13
小剂量实验组 0.51±0.12
中剂量实验组 0.62±0.12*
大剂量实验组 0.71±0.15**
对比1组 0.56±0.13
对比2组 0.53±0.12
对比3组 0.51±0.12
对比4组 0.52±0.15
对比5组 0.54±0.10
对比6组 0.63±0.14*
对比7组 0.48±0.12
对比8组 0.58±0.17
对比9组 0.52±0.12
对比10组 0.56±0.13
注：*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。
由表2可知，中剂量实验组和大剂量实验组小鼠的足跖肿胀度均高于空白组，差异有统计学意义（P＜0.05），说明复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠的迟发型变态反应能力有增强作用，该项实验结果为阳性。
5）复合型椰枣发酵植物饮料对抗体生成细胞的影响
将压积SRBC用生理盐水配成2%的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫，5天后，将小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，放在盛有Hank’s液的研磨器内，轻轻磨碎脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，离心（1000r/min）10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮在8mLRPMI1640培养液中；将表层培养基（1g琼脂糖加双蒸水至100mL）加热溶解后，放45℃水浴保温，与等量pH7.2~7.4、2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加50μL10%SRBC（v/v，用SA液配制），25μL脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体（1：6）加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。
表3复合型椰枣发酵植物饮料对抗体生成细胞数的影响
组别 溶血空斑数（个）
空白组 89±9
小剂量实验组 96±8
中剂量实验组 101±9
大剂量实验组 107±11*
对比1组 99±10
对比2组 100±13
对比3组 101±8
对比4组 98±11
对比5组 100±12
对比6组 97±13
对比7组 92±10
对比8组 101±13
对比9组 99±12
对比10组 100±9
注：*表示P＜0.05。
由表3可知，大剂量实验组小鼠溶血空斑数高于空白组，差异有显著意义（P＜0.05），说明复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠抗体生成细胞的生成有促进作用，该项实验结果为阳性。
6）复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠血清溶血素（半数溶血值HC50）的影响
将压积SRBC用生理盐水配成2%的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫，5天后，摘眼球取血，分离血清；血清用SA缓冲液稀释600倍，去稀释后的血清1mL，依次加入10% SRBC0.5mL，补体1mL（用SA缓冲液按1：6稀释），另设不加血清对照管（用SA缓冲液代替）。置37℃恒温水浴25min，冰浴终止反应。2000r/min离心10分钟，取上清液1mL，都氏剂3mL于试管内，同时取10% SRBC（v/v）0.25mL，加都氏剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处测定各管的光密度值。
样品HC50=样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数
表4复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠半数溶血值（HC50）的作用
组别 HC50
空白组 321.5±19.2
小剂量实验组 330.5±20.3
中剂量实验组 341.3±30.5
大剂量实验组 358.2±35.9*
对比1组 340.1±21.5
对比2组 339.2±16.7
对比3组 339.7±20.3
对比4组 338.5±19.7
对比5组 338.3±22.5
对比6组 339.1±21.4
对比7组 329.1±20.7
对比8组 341.2±18.3
对比9组 339.5±23.8
对比10组 340.1±21.6
注：*表示P＜0.05。
由表4可知，大剂量实验组小鼠HC50高于空白组，差异有显著意义（P＜0.05），说明复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠半数溶血值有明显增高作用，该项实验结果为阳性。
7）复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（体外法）的影响
实验前4天给每只小鼠腹腔注射20%压积绵羊红细胞0.2mL，用颈椎脱臼法处死小鼠，经腹腔注射给予小鼠韩勇5%小牛血清的Hank’s液5mL/只，轻揉腹部20次后抽取腹腔清洗液2mL，取0.5mL腹腔清洗液加入盛有Hank’s液配制成的1%SRBC悬液0.5mL的试管内，混匀，取混悬液0.5mL涂片，放入垫有湿纱布的瓷盘内，置37℃温箱内15分钟，取出后用生理盐水从玻片背面冲洗，固定，染色，阅片；计算吞噬率和吞噬指数。
表5复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响
注：*表示P＜0.05。
由表5可知，大剂量实验组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率及吞噬指数与空白组相比，差异有显著意义（P＜0.05），说明复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力有升高作用，该项实验结果为阳性。
8）复合型椰枣发酵植物饮料对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验的影响
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的研磨器中，轻轻将脾脏磨碎，制成细胞悬液；经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min（1000r/min）；然后将细胞悬浮于2mL的完全培养液中，计数活细胞数，调整细胞浓度为3×106个/mL；再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，在其中一孔加75μL ConA液（相当于7.5μg/mL），另一孔作为对照，置5% CO2，37℃ CO2培养箱中培养72h，培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT（5mg/mL）50μL/孔，继续培养4h，培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。用半自动生化分析仪以570nm处测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。
表6复合型椰枣发酵植物饮料对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验的影响
组别 淋巴细胞的增殖能力
空白组 0.310±0.060
小剂量实验组 0.354±0.062
中剂量实验组 0.395±0.059*
大剂量实验组 0.452±0.063**
对比1组 0.394±0.052*
对比2组 0.387±0.061
对比3组 0.396±0.051*
对比4组 0.389±0.057
对比5组 0.390±0.052
对比6组 0.383±0.051
对比7组 0.345±0.053
对比8组 0.395±0.050*
对比9组 0.374±0.052
对比10组 0.382±0.053
注：*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。
由6可知，中剂量实验组和大剂量实验组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力高于空白组，差异有显著意义（P＜0.01），说明复合型椰枣发酵植物饮料对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化有增强作用，该项实验结果为阳性。
9)复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠NK细胞活性的影响
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的研磨器中，轻轻将脾脏磨碎，制成细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hank’s液洗2次，每次离心10min（1000r/min），最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL；取靶细胞和效应细胞各100μL（效靶比50：1），加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μL；上述各项均设三个复孔，于37℃、5%CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应3min，每孔加入1moL/L的HCL 30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值（OD）。
NK细胞活性（%）=（反应孔OD-自然释放孔OD）/（最大释放孔OD-自然释放孔OD）×100%
表7复合型椰枣发酵植物饮料对小鼠NK细胞活性的影响
组别 NK细胞活性（%）
空白组 24.9±4.5
小剂量实验组 26.4±6.3
中剂量实验组 29.2±6.1
大剂量实验组 35.1±7.2*
对比1组 30.1±5.8
对比2组 30.2±6.7
对比3组 29.3±7.3
对比4组 29.5±8.2
对比5组 29.1±8.1
对比6组 29.5±6.2
对比7组 28.3±7.6
对比8组 30.3±6.5
对比9组 29.2±7.1
对比10组 29.7±7.3
注：*表示P＜0.05。
由表7可知，大剂量实验组小鼠NK细胞活性与空白组相比，差异有显著意义（P＜0.05），说明本发明复合型椰枣发酵植物饮料对NK细胞活性有增强作用，该项实验结果为阳性。
结论：根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中增强免疫力功能评价标准判定，复合型椰枣发酵植物饮料在细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面结果为阳性，该受试物对小鼠有增强免疫力的作用。对比1~10组均未在细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能和NK细胞活性这四个测定项目中任两项实验结果为阳性，故对小鼠无增强免疫力的作用。
3、取本发明实施例1和对比例11~12制得产品分别分成两组，一组在温度25℃±2℃下直接进行浊度测定，浊度值如表8所示；另一组在2℃的冰箱中放置1天，浊度值如表9所示。
表8 温度25℃±2℃下不同澄清方法对浊度的影响
组别 浊度值（NTU）
实施例1 12.6
对比例11 102.5
对比例12 462.3
表9 2℃的冰箱中放置1天后不同澄清方法对浊度的影响
组别 浊度值（NTU）
实施例1 15.4
对比例11 305.6
对比例12 613.4
上述结果显示，温度25℃±2℃下采用本发明实施例1澄清方法对植物饮料澄清，浊度值是最低的，澄清效果最好；2℃的冰箱中放置1天后，实施例1的浊度有稍许升高，但是与对比例11和对比例12相比，浊度变化最小，澄清效果较稳定。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (8)

1.一种复合型椰枣发酵植物饮料，其特征在于，由以下重量份的原料经微生物发酵制备而成：椰枣30~50份、榧子20~30份、诃子20~30份、金樱子10~20份、菊苣10~20份、黑胡椒1~8份。
2.根据权利要求1所述的复合型椰枣发酵植物饮料，其特征在于：椰枣40份、榧子25份、诃子25份、金樱子15份、菊苣15份、黑胡椒4份。
3.根据权利要求1所述的复合型椰枣发酵植物饮料，其特征在于：椰枣30份、榧子20份、诃子20份、金樱子10份、菊苣10份、黑胡椒1份。
4.根据权利要求1所述的复合型椰枣发酵植物饮料，其特征在于：椰枣50份、榧子30份、诃子30份、金樱子20份、菊苣20份、黑胡椒8份。
5.根据权利要求1~4任一项所述的复合型椰枣发酵植物饮料，其特征在于：所述微生物为醋酸杆菌、酵母菌和芽胞杆菌。
6.根据权利要求5所述的复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1：分别取椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒，清洗后，将表皮水分晾干，冷冻，将冷冻后的椰枣、榧子、诃子、金樱子、菊苣和黑胡椒置于粉碎机中充分粉碎，得到一次原料液；
步骤S2：选择性加入无菌水和/或葡萄糖，保持所述一次原料液的固体物质含量在30%以下，总糖含量在20%以上，得到二次原料液；
步骤S3：将所述二次原料液进行一次高温杀菌，冷却后，接入芽胞杆菌，恒温振荡发酵24~32小时，得一次发酵液；
步骤S4：在所述一次发酵液中接入酵母菌和醋酸杆菌，恒温发酵18~24小时，得二次发酵液；
步骤S5：将所述二次发酵液进行固液分离，收集液体，加入澄清剂进行静置澄清，过滤得到澄清液；
步骤S6：将所述澄清液进行二次高温杀菌，冷却，分装，即得。
7.根据权利要求6所述的复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，其特征在于：步骤S1中所述冷冻的温度为-4℃~-12℃。
8.根据权利要求6所述的复合型椰枣发酵植物饮料的生产方法，其特征在于：步骤S3中所述一次高温杀菌的温度为105~110℃，时间为18~20分钟。
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