CN107211897A - 一种藤三七离体再生体系建立的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种藤三七离体再生体系建立的方法，包括：1）无菌体系建立，距离顶端10cm以下的藤三七茎段用HgCl2消毒8min效果最好；2）初代培养，以MS为基本培养基在白光条件下有利于藤三七茎段伸长生长；3）继代增殖培养，藤三七试管苗在MS+6‑BA 1.6mg/L+NAA 0.6mg/L培养基上增殖效果最好，增殖系数可达15.31±0.28；4）生根培养：在白光条件下，MS+1.5mg/LIBA培养基对诱导藤三七试管苗生根效果较好，试管苗生根率达到94.44%。5）移栽，炼苗4天后，移栽到菜园土栽培基质上，成活率可达95%。

Description

一种藤三七离体再生体系建立的方法

技术领域

本发明涉及一种藤三七离体再生体系建立的方法，属于植物组织培养技术领域，主要应用于藤三七种苗繁殖。

背景技术

藤三七(Boussingaultia gracilis Miers var．baselloides Bail．)，为落葵科(Basellaceae)落葵薯属(Boussingaultia H．B．K．)植物，原名心形落葵薯，别称落葵薯、洋落葵、川七、土川七、藤子三七、小年药、土三七、马德拉藤、金钱珠、中枝莲、田三七等，原产巴西，我国江苏、浙江、福建、四川、贵州、云南等地均有栽培。藤三七为多年生缠绕草质藤本植物，茎蔓肉质，呈圆形至椭圆形，初期为浅紫红色，缠绕性强，节间易发生不定根。

由于藤三七中具有各新黄烷醇和抗HIV活性成分等，所以具有相当高的药用保健价值，并且富含各种维生素，作为一种新兴蔬菜,市场对其需求量增加。迄今为止，在国外和国内的某些省份已经有了比较完整的栽培管理理论和技术，其繁殖方式主要是以扦插为主，不能满足市场的要求，而无性繁殖会导致病毒累积，品质退化。前人对藤三七的离体培养已有部分研究，其中包括蒋向辉和肖树林分别以藤三七嫩叶和带芽茎段为外植体，通过愈伤组织手段建立组培快繁体系，为藤三七在这一领域的研究奠定基础，但是愈伤组织分化成苗需要一定时间，而且也容易发生变异，作为商业化推广，有一定限制。而本发明以带芽茎段作外植体直接诱导不定芽，避免了愈伤组织这个过程，可以缩短周期，减少变异，更具有商业推广前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种藤三七离体再生体系建立的方法，避免了愈伤组织这个过程，可以缩短周期，减少变异，更具有商业推广前景。

为实现上述目的，采用以下技术方案：

一种藤三七离体再生体系建立的方法，包括以下步骤：

(1)藤三七外植体的获得；

(2)初代培养；

(3)继代增殖培养；

(4)生根培养；

(5)炼苗移栽。

步骤(1)所述的藤三七外植体的获得方法为：取2~3cm带叶芽的野生藤三七茎段，用自来水冲洗30min；首先用75%的酒精消毒30秒；用无菌水冲洗1~2次；再将茎段放入0.1%的升汞中消毒4-12min；然后将外植体捞出放入无菌水中浸泡2min，再用无菌水分别冲洗4-5次；最后将藤三七茎段播种入MS培养基中培养获得不定芽。放置在白光条件下，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养15d获得不定芽。

步骤(2)所述的初代培养为：从长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体，接种在MS培养基中，放置在白光条件下培养。光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养25d。

步骤(3) 继代增殖培养方法为：以MS为基本培养基，添加6-BA 1.6 mg/L和NAA0.6 mg/L；从步骤（2）中接种25d的无菌苗切取带叶芽茎段2-3cm接入以上培养基中；置于培养室中培养。放置在白光条件下，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养3周。

步骤(4)所述的生根培养方法为：从步骤（3）中长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体，接种MS培养基加 IBA 1.5 mg/L进行生根培养，放置在白光条件下培养。光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养15d。

步骤(5)所述的炼苗移栽方法为：将经过生根培养后长势较一致的生根幼苗从培养室中取出，放置在室温下进行炼苗处理，一天后打开瓶盖，再放置三天，然后取出洗去根上的培养基，栽种于菜园土栽培基质中。

本发明的优点在于：传统方法中以藤三七嫩叶和带芽茎段为外植体，愈伤组织分化成苗需要一定时间，而且也容易发生变异，作为商业化推广，有一定限制。而本发明以带芽茎段作外植体直接诱导不定芽，避免了愈伤组织这个过程，且增殖系数高达15.31±0.28，还没有报道超过此系数，可以缩短育苗周期，减少变异，种苗商品性高，更具有商业推广前景。

附图说明

图1无菌体系的建立。

图2初代培养的过程。

图3继代增殖的过程。

图4移栽的结果图。

具体实施方式

实施例1

1.藤三七外植体的获得

取藤三七根部以上10cm左右至离茎顶端10cm左右部位，剪成2~3cm带叶芽茎段为外植体，用自来水冲洗30min。首先用75%的酒精消毒30秒；用无菌水冲洗2次；再将茎段放入0.1%的升汞中消毒8min；然后将外植体捞出放入无菌水中浸泡2min，再用无菌水分别冲洗5次。最后将藤三七茎段播种入MS培养基中培养获得不定芽，放置在白光条件下，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养15d。

2.初代培养

从长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体，接种在MS培养基中，然后放置在白光条件下培养，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养25d。获得藤三七试管苗初代材料。

3.继代增殖培养

将步骤2中的藤三七初代培养苗接种在附加6-BA 1.6 mg/L和NAA 0.6 mg/L的MS培养基上，放置在白光条件下进行培养，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养3周。藤三七不定芽的诱导效果较好，增殖系数可达15.31±0.28。

4.生根培养

从步骤3中的藤三七试管苗接种在MS+1.5mg/L IBA培养基中，放置在白光条件下，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养15d。生根效果好，试管苗生根率达到94.44%。

5.驯化移栽

藤三七试管苗放置在室温下进行炼苗处理，一天后打开瓶盖，再放置三天，从培养瓶中取出，洗去根部培养基，移入菜园土栽培基质中，保湿遮阴，成活率达95%以上。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (6)

1.一种藤三七离体再生体系建立的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)藤三七外植体的获得；

(2)初代培养；

(3)继代增殖培养；

(4)生根培养；

(5)炼苗移栽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的藤三七外植体的获得方法为：取2~3cm带叶芽的野生藤三七茎段，用自来水冲洗30min；首先用75%的酒精消毒30秒；用无菌水冲洗1~2次；再将茎段放入0.1%的升汞中消毒4-12min；然后将外植体捞出放入无菌水中浸泡2min，再用无菌水分别冲洗4-5次；最后将藤三七茎段接种到MS培养基中培养放置在白光条件下，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养15d获得不定芽，。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的初代培养为：从长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体，接种在MS培养基中，放置在白光条件下培养，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养25d。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3) 继代增殖培养方法为：以MS为基本培养基，添加6-BA 1.6 mg/L和NAA 0.6 mg/L；从步骤（2）中接种25d的无菌苗切取带叶芽茎段2-3cm接入以上培养基中；置于培养室中培养，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养3周。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述的生根培养方法为：从步骤（3）中长势一致的试管材料中取大小相同的不定芽作为外植体，接种MS培养基加 IBA 1.5mg/L进行生根培养，放置在白光条件下培养，光照强度1500Lx，光照时间14h/d，培养温度为25±2℃，培养15d。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述的炼苗移栽方法为：将经过生根培养后长势较一致的生根幼苗从培养室中取出，放置在室温下进行炼苗处理，一天后打开瓶盖，再放置三天，然后取出洗去根上的培养基，栽种于菜园土栽培基质中。