CN107149072A - 牡蛎寡糖饮料 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种牡蛎寡糖饮料，采用牡蛎多糖与多种辅料同时发酵的方法进行制备，利用苹果、梨、木瓜、胡萝卜、山药、冬瓜、辣椒、大白菜、萝卜、桔梗、人参、大枣、蓝莓、山葡萄、木耳、枸杞子及沙棘在烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌发酵作用下产生的酶，将牡蛎多糖水解成牡蛎寡糖，无需废水处理及价格昂贵的成品糖苷酶，成本低；牡蛎寡糖与上述发酵水果共同作用，降血糖效果好且能有效增强成年男性性功能。
Description
技术领域
本发明涉及一种饮料，尤其是一种成本低、降血糖效果好且能有效增强成年男性性功能的牡蛎寡糖饮料。
背景技术
发酵饮料是近年流行的保健饮料，大多以苹果、梨、柠檬、柑橘、橙、草莓、猕猴桃及葡萄等水果为原料，经过发酵制备而成，已在营养保健、临床医学、美容护理、减肥瘦身、亚健康调理等领域有广泛的应用。
牡蛎具有较高的营养价值和保健作用，其中所含有的牡蛎多糖是重要的活性物质，研究表明牡蛎多糖具有降血压、降血糖、保护肝损伤等的作用。中国发明专利号ZL200710010460.2的发明专利公开了“牡蛎多糖和制备方法及其在制备化妆品中的应用”，其牡蛎多糖为α-1，4；1，6-葡聚多糖和β-1，6-葡聚多糖，相对分子量为4000-6500 Da。糖类物质的生物活性往往与其分子量大小有关，寡糖（由2-10个单糖组成）的生物活性往往好于多糖的生物活性。目前，已有许多由多糖制备成寡糖的方法，如酸水解方法、碱水解方法以及酶解方法。其中酸水解方法、碱水解方法分别使用酸、碱，从而产生需要处理的酸碱废水；酶解的方法需要使用糖苷酶，价格昂贵。总之，获得牡蛎寡糖的方法较为复杂。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种成本低、降血糖效果好且能有效增强成年男性性功能的牡蛎寡糖饮料。
本发明的技术解决方案是：一种牡蛎寡糖饮料，其特征在于依次按照如下步骤制备：
a. 将苹果、梨、木瓜、胡萝卜、山药、冬瓜、辣椒、大白菜、萝卜、桔梗、人参洗净并沥干，切成1~3cm块状；将大枣、蓝莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗净并沥干；各取相同质量进行混合，得混合物A；
b. 将混合物A与食醋、红糖、牡蛎多糖按质量比15：1：0.5：0.5进行混合，得混合物B，再将烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物B中，10~25℃于发酵罐中发酵50~60天，得一次发酵液；所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量为混合物B质量的0.5~1%、1~2.5%、1~1.5%、1~1.5%，所述所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的菌数为15~26×106个/ml；
c. 一次发酵液体积为发酵罐容积的2/3，将发酵罐保持36~38℃恒温发酵至少60天，发酵的同时于发酵罐底向发酵罐内通入空气，每立方米发酵罐空气通入量为0.5-1L/min，即得牡蛎寡糖发酵液；
d. 将所得牡蛎寡糖发酵液过滤，滤液放入罐中浸泡竹炭贮藏30~60天，即得牡蛎寡糖发酵饮料。
本发明采用牡蛎多糖与多种辅料同时发酵的方法进行制备，利用苹果、梨、木瓜、胡萝卜、山药、冬瓜、辣椒、大白菜、萝卜、桔梗、人参、大枣、蓝莓、山葡萄、木耳、枸杞子及沙棘在烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌发酵作用下产生的酶，将牡蛎多糖水解成牡蛎寡糖，无需废水处理及价格昂贵的成品糖苷酶，成本低；牡蛎寡糖与上述发酵水果共同作用，降血糖效果好且能有效增强成年男性性功能。
附图说明
图1是本发明实施例质谱检测结果示意图。
具体实施方式
实施例1：
本发明的牡蛎寡糖饮料，依次按照如下步骤制备：
a. 将苹果、梨、木瓜、胡萝卜、山药、冬瓜、辣椒、大白菜、萝卜、桔梗、人参洗净并沥干，切成2cm块状；将大枣、蓝莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗净并沥干；各取相同质量进行混合，得混合物A；
b. 将混合物A与食醋、红糖、牡蛎多糖按质量比15：1：0.5：0.5进行混合，得混合物B，再将烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物B中，20℃于发酵罐中发酵55天，得一次发酵液；所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量为混合物B质量的0.75 %、1.5%、1.25%、1.25%，所述乳酸菌及醋酸菌的菌数为15×106个/ml；
c. 将一次发酵液置于另一发酵罐，一次发酵液体积为发酵罐容积的2/3，将发酵罐保持37℃恒温发酵60天，发酵的同时于发酵罐底向发酵罐内通入空气，每立方米发酵罐空气通入量为0.75L/min，即得牡蛎寡糖发酵液；
d. 将所得牡蛎寡糖发酵液过滤，滤液放入罐中浸泡竹炭贮藏50天，即得牡蛎寡糖发酵饮料。
所有原料均外购所得，牡蛎多糖按中国专利号ZL200710010460.2的发明专利所述方法制备。
实施例2：
本发明的牡蛎寡糖饮料，依次按照如下步骤制备：
a. 将苹果、梨、木瓜、胡萝卜、山药、冬瓜、辣椒、大白菜、萝卜、桔梗、人参洗净并沥干，切成1cm块状；将大枣、蓝莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗净并沥干；各取相同质量进行混合，得混合物A；
b. 将混合物A与食醋、红糖、牡蛎多糖按质量比15：1：0.5：0.5进行混合，得混合物B，再将烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物B中，10℃于发酵罐中发酵60天，得一次发酵液；所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量为混合物B质量的0.5%、2.5%、1%、1.5%，所述所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的菌数为20×106个/ml；
c. 将一次发酵液置于另一发酵罐，一次发酵液体积为发酵罐容积的2/3，将发酵罐保持36℃恒温发酵60天，发酵的同时于发酵罐底向发酵罐内通入空气，每立方米发酵罐空气通入量为0.5L/min，即得牡蛎寡糖发酵液；
d. 将所得牡蛎寡糖发酵液过滤，滤液放入罐中浸泡竹炭贮藏30天，即得牡蛎寡糖发酵饮料。
原料来源同实施例1。
实施例3：
本发明的牡蛎寡糖饮料，依次按照如下步骤制备：
a. 将苹果、梨、木瓜、胡萝卜、山药、冬瓜、辣椒、大白菜、萝卜、桔梗、人参洗净并沥干，切成3cm块状；将大枣、蓝莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗净并沥干；各取相同质量进行混合，得混合物A；
b. 将混合物A与食醋、红糖、牡蛎多糖按质量比15：1：0.5：0.5进行混合，得混合物B，再将烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物B中，25℃于发酵罐中发酵50天，得一次发酵液；所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量为混合物B质量的1%、1%、1.5%、1%，所述所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的菌数为26×106个/ml；
c. 将一次发酵液置于另一发酵罐，一次发酵液体积为发酵罐容积的2/3，将发酵罐保持38℃恒温发酵60天，发酵的同时于发酵罐底向发酵罐内通入空气，每立方米发酵罐空气通入量为1L/min，即得牡蛎寡糖发酵液；
d. 将所得牡蛎寡糖发酵液过滤，滤液放入罐中浸泡竹炭贮藏60天，即得牡蛎寡糖发酵饮料。
实验：
将实施例1所得牡蛎寡糖发酵饮料经过醇沉，HPLC分离纯化，得到牡蛎寡糖，经质谱检测，结果如图1所示，由小于10个单糖组成。
应用例1
以实施例1获得的牡蛎寡糖饮料饲喂小鼠进行降血糖实验。
实验材料：
四氧嘧啶、乙酸铵购于Sigma公司。盐酸二甲双胍购于北京京丰制药集团。尿肌酐测定试剂盒、尿素氮测定试剂盒、糖化血清蛋白测定试剂盒、胆固醇测定试剂盒、甘油三酯测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。
实验仪器：
三诺安稳血糖仪（三诺生物传感股份有限公司）；HH-2型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；UV-1750紫外分光光度计（苏州岛津仪器有限公司）；IEC MicroCL 17R微量台式小型高速离心机（德国Thermo公司）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
实验分组及用药：
SPF级ICR雄性小鼠，体质量18～22 g，购自大连医科大学实验动物中心。取SPF级ICR雄性小鼠90只，适应性饲养3 d，随机挑选10只作为正常对照组，其余动物禁食15 h（不禁水），由尾静脉快速注射新鲜配制的四氧嘧啶生理盐水溶液（80mg/kg），建立糖尿病动物模型（血糖值≥11.1 mmol/L的小鼠，且连续出现多饮、多食、多尿、体质量减轻症状者为糖尿病小鼠），正常对照组注射等体积的生理盐水。96 h后（禁食12 h）尾静脉取血测定小鼠空腹血糖水平。
将成模的ICR雄性小鼠按体质量和血糖水平随机分高血糖组、盐酸二甲双胍组和给药组（200、400、800 mg/kg/day）8个剂量组。盐酸二甲双胍组给予200 mg/kg/day盐酸二甲双胍，给药组（本发明实施例1及牡蛎多糖）按不同剂量灌胃给药。给药组每天给药2次，正常对照组、高血糖组每天灌胃蒸馏水2次，间隔6 h，连续21 d。第7、14、21 d测小鼠空腹血糖，测试前禁食12 h。第7 d测小鼠体重、饮水量、饮食量。
生化指标检测：
第21 d收集尿液，用检测试剂盒测定尿肌酐、尿素氮。
第21 d测定空腹血糖后，摘眼球取血，分离血清，果糖胺法测定其中糖化血清蛋白含量（GSP），酶偶联比色法测定甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量。
实验结果：
一、对四氧嘧啶致ICR小鼠糖尿病模型降血糖的影响如表1。
表1 牡蛎寡糖饮料对四氧嘧啶致ICR小鼠糖尿病模型降血糖的影响
注：（1）同一行数据中上标字母不同代表存在显著差异（P<0.05）；
（2）与高血糖组相比，*代表差异显著（P<0.05）；**代表差异极显著（P<0.01）
表1结果表明：给药7 d与给药0 d相比，盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、本发明实施例1组（200、400、800 mg/kg/day）、牡蛎多糖组（400、800 mg/kg/day）的空腹血糖值下降显著（P<0.05），牡蛎多糖组（200 mg/kg/day）的空腹血糖值下降不显著（P>0.05）。与高血糖组相比，盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、本发明实施例1组（200、400、800 mg/kg/day）、牡蛎多糖组（400、800 mg/kg/day）的空腹血糖值下降极显著（P<0.01），牡蛎多糖组（200 mg/kg/day）的空腹血糖值下降显著（P<0.05）。与给药7d相比，给药14d、21d的盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、本发明实施例1组（200、400、800 mg/kg/day）、牡蛎多糖组（200、400、800mg/kg/day）的空腹血糖值变化不显著（P>0.05），表明给药后血糖值维持稳定。
二．对四氧嘧啶致ICR小鼠糖尿病TG、TC、GSP的影响见表2。
表2 对四氧嘧啶致ICR小鼠糖尿病TG、TC、GSP的影响
注：（1）与正常组相比，*代表差异显著（P<0.05）；**代表差异极显著（P<0.01）
（2）与高血糖组相比，#代表差异显著（P<0.05）；##代表差异极显著（P<0.01）
表2结果表明，与高血糖组相比，盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、本发明实施例1组（200、400、800 mg/kg/day）、牡蛎多糖组（200、400 mg/kg/day）的TG含量均显著下降（P<0.05）；盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、发明实施例1组（200、400 mg/kg/day）、牡蛎多糖组（200、400 mg/kg/day）TC含量下降极显著（P<0.01）；盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、发明实施例1组（200、400、800 mg/kg/day）、牡蛎多糖组（200、400、800 mg/kg/day）的GSP含量下降极显著（P<0.01）。
三．对四氧嘧啶致ICR小鼠糖尿病的综合药效评价
按照综合药效评价公式进行评价：
综合药效评价（%）=体质量增加率（%）×0.2+饮水降低率（%）×0.15+摄食降低率（%）×0.15+血糖降低率（%）×0.5
实验结果如表3：
表3 对糖尿病小鼠的综合药效评价
表3结果表明：给药后小鼠表现出体重增加，饮水量和摄食量下降。本发明实施例1组（200、400、800 mg/kg/day）的综合药效评价高于牡蛎多糖组（200、400、800 mg/kg/day），并且本发明实施例1（800 mg/kg/day）的综合药效评价值最高。
四．各组小鼠尿肌酐和尿素氮水平
表4 各组小鼠尿肌酐和尿素氮水平
注：（1）与正常组相比，*代表差异显著（P<0.05）；**代表差异极显著（P<0.01）
（2）与模型组相比，#代表差异显著（P<0.05）；##代表差异极显著（P<0.01）
表4结果表明：与高血糖组相比，盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、本发明实施例1组（400、800 mg/kg/day）及牡蛎多糖组（400、800 mg/kg/day）的尿素氮下降极显著（P<0.01），本发明实施例1组（200 mg/kg/day）和牡蛎多糖组（200 mg/kg/day）组的尿素氮下降显著（P<0.05）。盐酸二甲双胍组（200 mg/kg/day）、本发明实施例1组（200、400、800 mg/kg/day）及牡蛎多糖组（200、400、800 mg/kg/day）的尿肌酐下降极显著（P<0.01）。本发明实施例1组肾功能指标参数显著降低。
结论：将本发明的牡蛎寡糖饮料对四氧嘧啶导致的糖尿病ICR小鼠的降血糖作用实验，结果显示本发明的牡蛎寡糖饮料对四氧嘧啶导致的糖尿病ICR小鼠的降血糖及综合药效显著好于牡蛎多糖，表现出显著的增效作用，同时本发明的牡蛎寡糖饮料明显改善ICR小鼠的肾功能。
应用例2：
以20人30~60岁成年男人为研究对象，受试者均了解研究内容，并签署知情同意书。受试者每日餐前饮用30ml牡蛎寡糖饮料，每日3次，连续30d。研究开始日时与研究结束日早晨7:30-8:30取静脉血2ml，分离血清测试睾酮和皮质醇。
结论：饮用牡蛎寡糖饮料30 d后，成年男性血睾酮升高，差异具有统计学意义（p<0.05）。皮质醇降低，差异具有统计学意义（p<0.05）。睾酮水平是维持性功能的基础，而皮质醇抑制性功能。因此，本发明的牡蛎寡糖饮料具有增强成年男性性功能的作用。
Claims (1)
1.一种牡蛎寡糖饮料，其特征在于依次按照如下步骤制备：
a. 将苹果、梨、木瓜、胡萝卜、山药、冬瓜、辣椒、大白菜、萝卜、桔梗、人参洗净并沥干，切成1~3cm块状；将大枣、蓝莓、山葡萄、木耳、枸杞子、沙棘洗净并沥干；各取相同质量进行混合，得混合物A；
b. 将混合物A与食醋、红糖、牡蛎多糖按质量比15：1：0.5：0.5进行混合，得混合物B，再将烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌加入混合物B中，10~25℃于发酵罐中发酵50~60天，得一次发酵液；所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的加入量为混合物B质量的0.5~1%、1~2.5%、1~1.5%、1~1.5%，所述烧酒曲、酵母、乳酸菌及醋酸菌的菌数为15~26×106个/ml；
c. 一次发酵液体积为发酵罐容积的2/3，发酵罐保持36~38℃恒温发酵至少60天，发酵的同时于发酵罐底向发酵罐内通入空气，每立方米发酵罐空气通入量为0.5-1L/min，即得牡蛎寡糖发酵液；
d. 将所得牡蛎寡糖发酵液过滤，滤液放入罐中浸泡竹炭贮藏30~60天，即得牡蛎寡糖发酵饮料。
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